從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法

2023-11-02 07:00:17 1

專利名稱：從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法
技術領域：
本發明涉及一種從香菇中提取活性蛋白的方法，屬於天然活性成分提取技術領域。
背景技術：
香菇是一種生長在木材上的真菌，由於其營養豐富，素有「植物皇后」美譽。香菇性味甘、平、涼；入肝、胃經。有補肝腎、健脾胃、益氣血、益智安神、美容顏之功效。還可化痰理氣，益胃和中，解毒，抗腫瘤，託痘疹。主治食欲不振、身體虛弱、小便失禁、大便秘結、形體肥胖、腫瘤瘡瘍等病症。據報導，鮮香菇除含水外，固形物中含粗蛋白，粗脂肪，粗纖維、灰分等。香菇中的化學成分主要有香菇多糖、香菇嘌呤、核酸、胺基酸、多種微量礦質元素和酶類物質、維生素等。可見，香菇蛋白在香菇中佔有十分重要的地位。相對於研究相對深入的香菇多糖，香菇蛋白的研究尚處初級階段，已有的實驗結果表明香菇蛋白對體外培養的癌細胞ul4有直接的細胞毒作用，明顯抑制腫瘤細胞的生長，而且在體外能直接殺傷腫瘤細胞，並可誘導腫瘤細胞凋亡。另外，香菇蛋白能明顯延長荷瘤小鼠的生存期並對實體腫瘤有明顯抑制作用，還能激活機體的免疫系統，提高巨噬細胞、細胞因子的作用效果，來實現其抗腫瘤作用。更多的實驗表明，香菇蛋白能有效抑制蘋果輸紋褐腐病菌、灰黴病菌和落花生褐斑病菌的菌絲的生長，同時能夠抑制HIV-I逆轉錄酶的活性和白血病細胞的增殖。目前通常採用鹼法直接提取的方法進行香菇蛋白的分離提取，但蛋白的得率活性均不十分理想，而且大量工業酒精的應用成為了香菇蛋白在食品領域應用的障礙。

發明內容
本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法。從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法，其特徵是包括如下步驟(1)粉碎香菇；(2)水提取香菇蛋白將經粉碎的1質量份的香菇粉末加入到10質量份 20質量份的去離子水中，在l°c 10°C提取1小時 3小時，減壓過濾，得到香菇水溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(3)鹽溶液提取香菇蛋白將步驟(2)獲得的濾渣加入到0. IM 0. 2M的NaCl水溶液中，所述香菇與所述NaCl水溶液的比例為Ig IOml 20ml，在1°C 10°C提取1小時 3小時，減壓過濾，得到香菇鹽溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(4)鹼溶液提取香菇蛋白將步驟(3)獲得的濾渣加入到0. 05M 0. 15M NaOH水溶液中，所述香菇與所述NaOH水溶液的比例為Ig IOml 20ml，在1°C 10°C提取1小時 3小時，減壓過濾，得到香菇鹼溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(5)醇溶液提取香菇蛋白將步驟(4)獲得的濾渣加入到體積濃度為70% 80% 的乙醇水溶液中，所述香菇與所述乙醇水溶液的比例為Ig IOml 20ml，在1°C 10°C提取1小時 3小時，減壓過濾，得到香菇醇溶性蛋白提取液；(6)真空濃縮在40°C 60°C和0. 06MPa 0. IMPa的壓力下將步驟(2) (5)分別得到的蛋白提取液分別置於旋轉蒸發儀中減壓濃縮至原體積的1/10 1/5 ；(7)鹽析向步驟(6)所獲得的各個蛋白提取液的濃縮液中，加入硫酸銨，使硫酸銨在所述各個濃縮液中的質量分數為45% 55%，1°C 10°C靜置18小時 M小時，在 3000轉/分 4000轉/分的轉速下離心分離15分鐘 30分鐘，分別收集各沉澱物；(8)透析將步驟(7)獲得的各沉澱物分別加水使其完全溶解，分別加入到透析袋中，在蒸餾水中透析M小時 48小時，在透析期間換蒸餾水3次 5次；(9)冷凍乾燥將透析後的溶液分別冷凍乾燥，分別得到香菇水溶性蛋白、香菇鹽溶性蛋白、香菇鹼溶性蛋白和香菇醇溶性蛋白。本發明的與現有提取方法的最大區別在於本發明先用粉碎機對香菇進行粉碎，以使提取過程更加充分；然後通過使用不同極性的溶劑對香菇中的蛋白進行提取，並利用鹽析的方法對其中的蛋白進行分離。與已有的直接使用鹼法進行提取，樣品的蛋白含量有了明顯增加，而且由於不同溶劑的分級作用，使活性較高的蛋白得到富集，表現出的抗氧化和降血糖活性明顯增強。另外，本法所採取的第一步水提後得到的溶液可以繼續利用分離得到香菇多糖，而得到的其他樣品中蛋白含量也相對較高，可以留作他用。本發明的製備過程簡便，無毒，安全，收率高。


圖1為本發明的方法獲得的香菇水溶性蛋白、香菇鹼溶性蛋白和已有技術(鹼法直接提取)的蛋白產品的DPPH自由基清除能力。圖2為本發明的方法獲得的香菇水溶性蛋白、香菇鹼溶性蛋白和已有技術(鹼法直接提取)的蛋白產品的總還原力測定。圖3為本發明的方法獲得的香菇水溶性蛋白、香菇鹼溶性蛋白和已有技術(鹼法直接提取)的蛋白產品的α-澱粉酶抑制活性。圖4為從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法的製備流程示意圖。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。實施例1從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法，其特徵是包括如下步驟(1)粉碎香菇；(2)水提取香菇蛋白將經粉碎的1質量份的香菇粉末加入到15質量份的去離子水中，在4°C下提取2小時，減壓過濾，得到香菇水溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；
(3)鹽溶液提取香菇蛋白將步驟(2)獲得的濾渣加入到0. 2M的NaCl水溶液中， 所述香菇與所述NaCl水溶液的比例為Ig 15ml，在4°C提取2小時，減壓過濾，得到香菇鹽溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(4)鹼溶液提取香菇蛋白將步驟(3)獲得的濾渣加入到0. IOM NaOH水溶液中， 所述香菇與所述NaOH水溶液的比例為Ig 15ml，在4°C提取2小時，減壓過濾，得到香菇鹼溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(5)乙醇提取香菇蛋白將步驟(4)獲得的濾渣加入到體積濃度為75%的乙醇水溶液中，所述香菇與所述乙醇水溶液的比例為Ig 15ml，在4°C提取2小時，減壓過濾，得到香菇醇溶性蛋白提取液；(6)真空濃縮在50°C和0. 09MPa的壓力下將步驟(2) (5)分別得到的蛋白提取液分別置於旋轉蒸發儀中減壓濃縮至原體積的1/8 ；(7)鹽析向步驟(6)所獲得的各個蛋白提取液的濃縮液中，加入硫酸銨，使硫酸銨在所述各個濃縮液中的質量分數為50%，4°C靜置20小時，在3500轉/分的轉速下離心分離20分鐘，分別收集各沉澱物；(8)透析將步驟(7)獲得的各沉澱物分別加水使其完全溶解，分別加入到透析袋中，在蒸餾水中透析36小時，在透析期間換蒸餾水4次；(9)冷凍乾燥將透析後的溶液分別冷凍乾燥分別得到香菇水溶性蛋白、香菇鹽溶性蛋白、香菇鹼溶性蛋白和香菇醇溶性蛋白。實施例2從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法，其特徵是包括如下步驟(1)粉碎香菇；(2)水提取香菇蛋白將經粉碎的1質量份的香菇粉末加入到15質量份的去離子水中，在5°C提取2小時，減壓過濾，得到香菇水溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(3)鹽溶液提取香菇蛋白將步驟(2)獲得的濾渣加入到0. IM的NaCl水溶液中， 所述香菇與所述NaCl水溶液的比例為Ig 15ml，在5°C提取2小時，減壓過濾，得到香菇鹽溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(4)鹼溶液提取香菇蛋白將步驟(3)獲得的濾渣加入到0. IOM NaOH水溶液中， 所述香菇與所述NaOH水溶液的比例為Ig 15ml，在5°C提取2小時，減壓過濾，得到香菇鹼溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(5)乙醇提取香菇蛋白將步驟(4)獲得的濾渣加入到體積濃度為75%的乙醇水溶液中，所述香菇與乙醇水溶液的比例為Ig 15ml，在5°C提取2小時，減壓過濾，得到香菇醇溶性蛋白提取液；(6)真空濃縮在50°C和0. OSMPa的壓力下將步驟(2) (5)分別得到的蛋白提取液分別置於旋轉蒸發儀中減壓濃縮至原體積的1/10 ；(7)鹽析向步驟(6)所獲得的各個蛋白提取液的濃縮液中，加入硫酸銨，使硫酸銨在所述各個濃縮液中的質量分數為50%，5°C靜置20小時，在3500轉/分的轉速下離心分離20分鐘，分別收集各沉澱物；(8)透析將步驟(7)獲得的各沉澱物分別加水使其完全溶解，分別加入到透析袋中，在蒸餾水中透析36小時，在透析期間換蒸餾水4次；(9)冷凍乾燥將透析後的溶液分別冷凍乾燥分別得到香菇水溶性蛋白、香菇鹽溶性蛋白、香菇鹼溶性蛋白和香菇醇溶性蛋白。實施例3從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法，其特徵是包括如下步驟(1)粉碎香菇；(2)水提取香菇蛋白將經粉碎的1質量份的香菇粉末加入到20質量份的去離子水中，在1°C提取3小時，減壓過濾，得到香菇水溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(3)鹽溶液提取香菇蛋白將步驟(2)獲得的濾渣加入到0. 2M的NaCl水溶液中， 所述香菇與所述NaCl水溶液的比例為Ig 20ml，在1°C提取3小時，減壓過濾，得到香菇鹽溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(4)鹼溶液提取香菇蛋白將步驟(3)獲得的濾渣加入到0. 15M NaOH水溶液中， 所述香菇與所述NaOH水溶液的比例為Ig 20ml，在1°C提取3小時，減壓過濾，得到香菇鹼溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(5)乙醇提取香菇蛋白將步驟(4)獲得的濾渣加入到體積濃度為80%的乙醇水溶液中，所述香菇與所述乙醇水溶液的比例為Ig 20ml，在1°C提取3小時，減壓過濾，得到香菇醇溶性蛋白提取液；(6)真空濃縮在55°C和0. 09MPa的壓力下將步驟(2) (5)分別得到的蛋白提取液分別置於旋轉蒸發儀中減壓濃縮至原體積的1/5 ；(7)鹽析向步驟(6)所獲得的各個蛋白提取液的濃縮液中，加入硫酸銨，使硫酸銨在所述各個濃縮液中的質量分數為55%，1°C靜置M小時，在4000轉/分的轉速下離心分離15分鐘，分別收集各沉澱物；(8)透析將步驟(7)獲得的各沉澱物分別加水使其完全溶解，分別加入到透析袋中，在蒸餾水中透析48小時，在透析期間換蒸餾水3次；(9)冷凍乾燥將透析後的溶液分別冷凍乾燥分別得到香菇水溶性蛋白、香菇鹽溶性蛋白、香菇鹼溶性蛋白和香菇醇溶性蛋白。實施例4從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法，其特徵是包括如下步驟(1)粉碎香菇；(2)水提取香菇蛋白將經粉碎的1質量份的香菇粉末加入到10質量份的去離子水中，在10°C提取1小時，減壓過濾，得到香菇水溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(3)鹽溶液提取香菇蛋白將步驟(2)獲得的濾渣加入到0. 15M的NaCl水溶液中， 所述香菇與所述NaCl水溶液的比例為Ig 10ml，在10°C提取1小時，減壓過濾，得到香菇鹽溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(4)鹼溶液提取香菇蛋白將步驟(3)獲得的濾渣加入到0. 05M NaOH水溶液中， 所述香菇與所述NaOH水溶液的比例為Ig 10ml，在10°C提取1小時，減壓過濾，得到香菇鹼溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；
(5)乙醇提取香菇蛋白將步驟(4)獲得的濾渣加入到體積濃度為70%的乙醇水溶液中，所述香菇與所述乙醇水溶液的比例為Ig 10ml，在10°C提取1小時，減壓過濾，得到香菇醇溶性蛋白提取液；(6)真空濃縮在60°C和0. IMPa的壓力下將步驟(2) (5)分別得到的蛋白提取液分別置於旋轉蒸發儀中減壓濃縮至原體積的1/10 ；(7)鹽析向步驟(6)所獲得的各個蛋白提取液的濃縮液中，加入硫酸銨，使硫酸銨在所述各個濃縮液中的質量分數為45%，10°C靜置18小時，在3000轉/分的轉速下離心分離30分鐘，分別收集各沉澱物；(8)透析將步驟(7)獲得的各沉澱物分別加水使其完全溶解，分別加入到透析袋中，在蒸餾水中透析M小時，在透析期間換蒸餾水5次；(9)冷凍乾燥將透析後的溶液分別冷凍乾燥分別得到香菇水溶性蛋白、香菇鹽溶性蛋白、香菇鹼溶性蛋白和香菇醇溶性蛋白。表1與表2顯示的是各實施例的提取結果及與現有方法(鹼法直接提取)的比較。表1本方法各實施例與現有方法得到的香菇蛋白的得率(％ )比較
樣品實施例1 實施例2 實施例3 實施例4 鹼法直接提取
權利要求
1.從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法，其特徵是包括如下步驟(1)粉碎香菇；(2)水提取香菇蛋白將經粉碎的1質量份的香菇粉末加入到10質量份 20質量份的去離子水中，在1°C 10°C提取1小時 3小時，減壓過濾，得到香菇水溶性蛋白提取液； 並乾燥濾渣；(3)鹽溶液提取香菇蛋白將步驟(2)獲得的濾渣加入到0.IM 0. 2M的NaCl水溶液中，所述香菇與所述NaCl水溶液的比例為Ig IOml 20ml，在1°C 10°C提取1小時 3小時，減壓過濾，得到香菇鹽溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(4)鹼溶液提取香菇蛋白將步驟(3)獲得的濾渣加入到0.05M 0. 15M NaOH水溶液中，所述香菇與所述NaOH水溶液的比例為Ig IOml 20ml，在1°C 10°C提取1小時 3小時，減壓過濾，得到香菇鹼溶性蛋白提取液；並乾燥濾渣；(5)醇溶液提取香菇蛋白將步驟(4)獲得的濾渣加入到體積濃度為70% 80%的乙醇水溶液中，所述香菇與所述乙醇水溶液的比例為Ig IOml 20ml，在1°C 10°C提取1 小時 3小時，減壓過濾，得到香菇醇溶性蛋白提取液；(6)真空濃縮在40°C 60°C和0.06MPa 0. IMPa的壓力下將步驟O) (5)分別得到的蛋白提取液分別置於旋轉蒸發儀中減壓濃縮至原體積的1/10 1/5 ；(7)鹽析向步驟(6)所獲得的各個蛋白提取液的濃縮液中，加入硫酸銨，使硫酸銨在所述各個濃縮液中的質量分數為45% 55%，1°C 10°C靜置18小時 M小時，在3000 轉/分 4000轉/分的轉速下離心分離15分鐘 30分鐘，分別收集各沉澱物；(8)透析將步驟(7)獲得的各沉澱物分別加水使其完全溶解，分別加入到透析袋中， 在蒸餾水中透析M小時 48小時，在透析期間換蒸餾水3次 5次；(9)冷凍乾燥將透析後的溶液分別冷凍乾燥，分別得到香菇水溶性蛋白、香菇鹽溶性蛋白、香菇鹼溶性蛋白和香菇醇溶性蛋白。
全文摘要
本發明公開了一種從香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法，包括如下步驟(1)粉碎香菇；(2)水提取香菇蛋白；(3)鹽溶液提取香菇蛋白；(4)鹼溶液提取香菇蛋白；(5)醇溶液提取香菇蛋白；(6)真空濃縮；(7)鹽析；(8)透析；(9)冷凍乾燥將透析後的溶液分別冷凍乾燥，分別得到香菇水溶性蛋白、香菇鹽溶性蛋白、香菇鹼溶性蛋白和香菇醇溶性蛋白。本發明與已有的直接使用鹼法進行提取相比，樣品的蛋白含量有了明顯增加，而且由於不同溶劑的分級作用，使活性較高的蛋白得到富集，表現出的抗氧化和降血糖活性明顯增強。本發明的製備過程簡便，無毒，安全，收率高。
文檔編號C07K14/375GK102382181SQ201110314779
公開日2012年3月21日 申請日期2011年10月17日 優先權日2011年10月17日
發明者張寧, 章鈺, 陳海霞, 馬利帥 申請人:天津大學