青藤鹼衍生物及其製備方法和應用的製作方法

2023-11-30 09:00:11

專利名稱：青藤鹼衍生物及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於高分子化合物技術領域，涉及青藤鹼的衍生物，具體為青藤鹼衍生物及 其製備方法和應用。
背景技術：
青藤鹼(sinomeiiine)是從防己科植物青風藤及毛青藤的根莖中提取的臨床上被應 用於治療風溼和類風溼關節炎，關節腫脹等疾病的最有效的生物鹼類藥物，具有顯著的 抗炎、鎮痛、降壓及抗腦缺血等藥理作用。通過對青藤鹼的結構進行改造，尋找結構新穎的、活性更高效的青藤鹼衍生物是目 前的研究熱點，而對青藤鹼C環的結構改造更是研究重點。姚祝軍(OV.7份707創， CAC/儲7郎54)合成出C環連接有吡嗪環和五元雜環的青藤鹼衍生物。葉仙蓉等(^"學 學叛，W似，WG人7卵—/幼)對青藤鹼C環進行了修飾得到了系列化合物，並採用 小鼠醋酸扭體法進行動物活性試驗，發現化合物7—甲氧基一二氫青藤鹼鎮痛活性優於 青藤鹼。CV.7《^ 7^^同樣對青藤鹼C環結構進行修飾並得到一系列衍生物，該衍生物 具有較強的抗炎鎮痛活性，可用於製備治療風溼性關節炎及心率失常方面的藥物。青藤鹼結構改造同樣發生在D環，專利CAC 77S597fi4、 JZ9朋;T^和CW鄰2^ 別 分別報導了一類N—烴基青藤鹼及其製備方法， 一類17—磺醯基青藤鹼及其製備方法以 及一類具有右旋C環缺失嗎啡喃骨架的青藤鹼化合物及製法。最新的研究出現在對青藤鹼A環l一位碳的修飾，7P^9i^W合成了一類l一取 代胺甲基青藤鹼衍生物，專利/S7MW在A環1位分別引入醛基及羥乙基。縱觀上述文獻，對青藤鹼的結構改造主要集中在C、 D環，新的青藤鹼衍生物還有 待研究發現。發明內容本發明要解決的問題是通過對青藤鹼的結構進行改造，得到結構新穎的、抗炎活 性更高效的青藤鹼衍生物。本發明的技術方案是青藤鹼衍生物，青藤鹼結構式如下-formula see original document page 9在青藤鹼A環、C環和D環通過化學合成後得到青藤鹼衍生物，包括: 1)通過硝化還原在1位得到氨基連接取代基的青藤鹼衍生物Sl-S5:formula see original document page 92)或通過4位羥基或1位氨基形成的兩分子青藤鹼加合物S6-S8:formula see original document page 93)或在3， 4位連接有吡嗪環的青藤鹼衍生物S9-S14:formula see original document page 94)或在6位通過氨基/羥基連接取代基的青藤鹼衍生物S15-S22:formula see original document page 0R1= H, R2= S02R3其中R3= CH3; Ph; 2-OH-3,5《l2C6H2; 2,4"Cl2-5"COOHC6H2等。或者R1= H. R2= COR3其中Ph; 4-C"C6H4; 3,4"ClrC6H3; 4-CH3-C6H4; 4-0<^3-<;61^等。或者R屍H, R2= "COC(R3)NHR4其中R3=CH3, PhCH2, (CH3)2CHCH2; CH3SCH2CH^， R4= H; S02Ph; CONHC6H5等o5)或在6， 7位通過氨基形成吡嗪環的雙青藤鹼分子衍生物S23-S24:S23 S246)或對青藤鹼D環開環後末端氨基進行改造的衍生物S25-S26:H或CH3， R2= S02R3其中R3= CH3; Ph; 2-OH-3,5-CI2C6H2; 2,4-012-5-000^061"12等。或者R產H或CH3， R2= COR3其中R3= Ph; 4-CI-C6H4; 3,4-ClrC6H3; 4-CHrC6H4; 4-00143"0^4等。或者R1= H或CH3, R2= -COC(R3)NHR4其中R3=CH3， PhCH2， (CH3)2CHCH2; CH3SCH2CH2等， R4- H; S02Ph; CONHC6H#。7)或在青藤鹼A環1位以C-C或者C-0方式連接形成的青藤鹼衍生物S32-S34:formula see original document page 11(V CI, Br, OMe, C02Me，CHO, CH2C02CH4, CH2CN, NHCOCF3， CH3， COPh, NH2, CN, CF3， CH(OH)COOH等; R2=R3= OH, NH2， N02,或者R2= OH, R3= OCH3, N02, CI, Br, CH3等，R4-R5= H; R3=R5=N02, R2=R4=H本發明青藤鹼衍生物的製備方法如下通過1位氨基化及其醯基化製備青藤鹼衍生物SI-S5，化學式formula see original document page 11或者R，- H, R2= COR3其中R3= Ph; ^CI-CeHU; 3,4"ClrC6H3; 4-CH3-C6H4: 4-OCHrCeH4等。 或者R1= h, R2=《OC(R3)NHR4其中R3-CH3, PhCH2, (CH3)2CHCH2; ch3sch2ch2等，R4= H; S02Ph; CONHCeHs等。通過4位羥基或1位氨基連接兩分子青藤鹼加合製備青藤鹼衍生物S6-S8，化學式:formula see original document page 11通過3， 4位雙羰基化及六元氮雜環化製備青藤鹼衍生物S9-S14，化學式:Sinomen'me S9 S10 S"Zn/Hg,con HCIR3,R4,R5,Re= H, Cw4的飽和及不飽和垸基'F, CI, Br, I, OH, NH2, OCH3, OC2H5, N02, CN, CF3, COOCH3, COPh， COOH, Ph為苯基。通過6位氨基化及其醯基化製備青藤鹼衍生物S15-S22，通過6， 7位同時氨基化及 六元氮雜環化製備青藤鹼衍生物S23-S24,化學式R1= H, R2= S02R3其中R3=CH3; Ph; 2-OH-3,5-CI2C6H2; 2,4-Cl2"5-COOHC6H2等。或者H, R2= COR3其中R3= Ph; 4-CI-CeH4; 3,4"ClrC6H3; 4-CH3-C6H4; 4"OCH3"CsH4等。或者Ri= H, R2= ^COC(R3)NHR4其中R3=CH3, PhCH2, <CH3)2CHCH2; CH3SCH2CH2等，FU= H; S02Ph; CONHCeH5等。製備青藤鹼衍生物S25-S26的化學式如下，S27—S31為中間化合產物:S29 S30 S31 S26H或CH;j, R2= S02R3其中R3= CH3; Ph; 2"OH-3,5"CI2C6H2; 2.4-Cl2"&COOHC6H2等。或者H或CH3, R2= COR3其中R3= Ph; 4-CI-C6H4; 3,4"Cl2"CeH3; 4"CH3"CeH4; 4"OCH;rC6H4等。或者R1= H或CH3， R2=國COC(R3)NHR4其中R3=CH3, PhCH2, (CH3)2CHCH2; 0133(:^120^12等,1^4- H; S02Ph; CONHCeH5等。 製備青藤鹼衍生物S32-S34的方法包括(1):微生物/酶催化多底物交叉偶聯，(2):Suzuki芳基交叉偶聯；通過微生物/酶催化多底物交叉偶聯製備，其製備步驟如下1) 菌株分離野外採取特定生境，稀釋塗布分離，選擇性篩選，菌種斜面0'C保藏； 轉化粗酶來自上述菌株，粗酶的分離採用蛋白質鹽析分離方法，其餘使用的酶購自Sigma;2) 生物轉化產物的製備活化7天的斜面菌種，轉接到發酵培養基中，在 25。C，150r/rain的搖床上培養4天，加入青藤鹼鹽酸鹽，終濃度《400 n g/ml，同樣條件 下繼續培養1天後加入第二種底物，終濃度《400ug/ml，相同條件下繼續培養4天， 停止培養；將發酵液過濾，濾液用NH40H調節pH值8 9，用二氯甲烷多次萃取，合併 二氯甲垸萃取液，無水NaS(X乾燥，過濾，旋轉蒸乾溶劑，得轉化產物；3) 生物轉化產物的分離採用填充的層析柱為矽膠柱，層析液為100:0 50:50V/V 氯仿一甲醇混合液；通過Suzuki芳基交叉偶聯反應製備，其製備步驟如下將l-溴代青藤鹼(0.5mmol)、芳基硼酸(0.7mmol)、 Pd(OAc)2 (3mol%)、 DABCO (6mol%)和K2C03 U.5mmo1)組成的混合物，懸浮於3ml的DMF中，8(TC下攪拌反 應，TLC檢測反應完畢後，過濾，萃取，乾燥，柱分離得產物。通過微生物/酶催化多底物交叉偶聯的製備步驟1)中的生物轉化菌株或者酶包括 黴菌菌株爿/ tiWie77a se/M'51,./73及其同屬菌株、單色雲芝Corio7〃s i/77icoJor及其 同屬菌株、過氧化物酶、脂肪酶、漆酶、水解酶、纖維素酶、澱粉酶、蛋白酶。本發明針對青藤鹼分子結構對酸鹼熱不穩定的性質，提出創新性的結構改造思路， 通過化學合成製備了新的青藤鹼A環、C環和D環青藤鹼衍生物，方法新穎，具有獨特 性；採用滑膜腫瘤細胞(SW982)評價其抗炎活性，生物活性良好，可應用於抗類風溼 性關節炎(RA)藥物和保健品中。


圖1為本發明青藤鹼衍生物採用滑膜腫瘤細胞(SW982)評價其抗炎活性的測試結果圖。
具體實施方式
下面結合具體實施例來說明本發明。 實施例11,10位氮硫六元雜環的合成H3CO、 H3CO、H3CO1 2如上述化學式，稱取化合物h l—氨基青藤鹼550 mg (1.6mrno1)，加入4.0mlKSCN(632 mg， 2.4mmo1)的冰醋酸溶液中，攪拌溶解後緩慢滴加Br2 (96mg,0.6 mmol) 的冰醋酸溶液1.5 ml。室溫攪拌24h,冰浴下滴加10XNaOH進行淬滅，調節pH值至 8.0，用CHCl3萃取，得到的有機層用飽和食鹽水水洗，再由無水NaS04乾燥，減壓濃 縮，矽膠柱分離(CH3C1:CH30H=9:1)，得相應化合物2，產率59%。 化合物2:NMR (300 MHz， CDC13) 5 ppm 8.45(s， 1H)， 7.35(s, 1H), 6.30(s, 1H), 5.85(s， 1H， OH), 5.50(s, 1H), 4.24(d, 1H, J=15.9 Hz)， 3.82(s, 3H), 3.29(m， 4H), 3.08(s, 1H)， 2.56(m， 1H)，2.44(s, 3H)， 2.40(s， 1H)， 2.07-1.90(m， 4H).13C麗R (300 MHz, CDC13) S 192.50， 178.92, 151.72, 146.90， 141.90, 128.05, 120.68: 114.55, 111.58， 95.68， 59.90, 56.18, 54.99,49.09,46.64， 45.48， 44.69, 42.77， 40.90， 35.80.實施例21位氨基磺醯化反應如上述化學式，稱取化合物l: 1—氨基青藤鹼550mg (1.6mmol)，溶於3mlCH2Cl2 ， 滴加Et3N0.34ml (2.5mmo1)，冰浴下加入對甲基苯磺醯氯381mg (2.0 mmol)，冰浴下 攪拌5h。倒入30mlCH2Cl2中萃取，有機層用用飽和食鹽水水洗，再用無水NaS04幹 燥，減壓濃縮，矽膠柱分離(CH3C1:CH30H=9:1)，得相應化合物3，產率52%。 化合物3:NMR (300 MHz, CDC13) S ppm 7.58(d， 2H, J=6.6 Hz)， 7.25(d， 2H, J=6.6 Hz), 6.39(s, 1H), 5.85(s, 1H， OH)， 5.39(s， IH)， 4.30(d, 1H, J=15.9 Hz), 3.85(s， 1H), 3.62(s, 3H)， 3.47(s， 3H)， 3.20(brd, 1H)， 3.01(brd, IH)， 2.78(m， 1H), 2.59-2.44(brd, 1H), 2.40(s， 3H), 2.36(s, 1H), 2.19(brd， 3H), 2.03-1.82(m， 4H).13C NMR (300 MHz， CDC13) S 193.50, 152.66, 144.80， 143.81， 129.80, 129.71， 127.41, 126.98， 126.90,123.93,114.09,108.15, 63.20, 60.93, 56.18， 55.89， 54.89， 48.92, 46.71， 42.22, 40.46, 35.43.實施例31位氨基醯化反應如上述化學式，稱取化合物l: l一氨基青藤鹼550mg (1.6mmol),溶於3 ml CH2C12 ， 滴加EbN 0.34 ml (2.5 mmol)，冰浴下加入苯甲醯氯313mg (2.0 mmol)，冰浴下攪拌 5h。倒入30mlCH2Cl2中萃取，有機層用飽和食鹽水水洗，再用無水NaS04乾燥，減 壓濃縮，矽膠柱分離(CH3C1:CH30H=9:1)，得相應化合物4，產率73%。 化合物4:NMR (300 MHz, CDC13) 5 ppm 7.95(d, 2H, J=7.2 Hz), 7.54(d, IH, J=9.3 Hz), 7.53(dd, 2H: J=7.2， 9.3 Hz), 6.93(s, IH), 5.49(s， IH)， 4.39(s, 1H， J=15.9 Hz), 3.82(s, 3H)， 3.61(brd, IH), 3.51(s， 3H), 3.40(brd, IH)， 3.10-2.90(m， 4H)， 2.65(s, 3H), 2.55-2.48(m, 2H)， 2.21-2.05(m， 2H).13C NMR (300 MHz, CDC13) 5 193.63， 152.68, 145.79， 143.77， 134.17, 132.14， 128.80, 127.45, 126.03， 123.55, 121.34， 113.03， 108.84， 57.38, 56.20, 55.07， 49.97, 49.70， 49.41， 49.13， 48.01,47.56， 43.15, 41.54， 39.69, 33.83.實施例4通過4一OH形成兩分子青藤鹼加合物稱取青藤鹼(sinomenine) 329mg (lmmol)，溶於25 ml CH2C12 ，滴加Et3N 1.1 ml (8 mmol)，冰浴下加入戊二醯氯169mg (lmmol)，冰浴下攪拌5h。倒入30mlCH2Cl2中 萃取，有機層用飽和食鹽水水洗，無水NaS04乾燥，減壓濃縮,矽膠柱分離(CH3C1:CH30H =15:1),得相應化合物5，產率72%。 化合物5:lH NMR (300 MHz, CDC13) S ppm 6.91(d， IH, J=9 Hz)， 6.76(d， IH, J=9 Hz), 5.44(s, IH)， 5.28(s, 1H， OH)， 3.82(d， 1H， J=15 Hz)， 3.74(s， 3H)， 3.46(s， 3H), 3.27(s， IH)， 3.10-3.01(m， 2H)， 2.89-2.70(m， 3H)， 2.6(d， IH, J=12 Hz), 2.54(s， IH), 2.47(s, 3H)， 2.18(td， IH, J=6, 12 Hz), 2.24-2.13(m， 1H)， 1.95(td, IH, J=6,12 Hz)， 1.6(d， IH, J=12 Hz). 13C NMR (300 MHz, CDC13) S 192.18， 172.14， 152.56, 149.98, 139.59, 129.73, 129.03，125.59, 114.34, 110.98, 56.73, 56.02， 54.97, 49.92, 46.88, 45.36, 42.53， 40.46, 36.80, 33.29: 24.35， 20.18.實施例56位氨基磺醯化反應如上述化學式，稱取化合物6: 6—氨基一7， 8 二氫青藤鹼260 mg (0.78mmo1)，溶於 20mlCH2Cl2 ，滴加Et3N0.16ml (U7mmo1)，冰浴下加入對甲苯磺醯氯179mg (0.94 mmol)，冰浴下攪拌6h。倒入30 ml CH2C12中萃取，有機層用飽和食鹽水水洗，無水 NaS04乾燥，減壓濃縮，矽膠柱分離(CH3C1:CH30H =9:1)，得相應化合物7，產率 98%。NMR (300 MHz， CDC13) S卯m 7.62(d, 2H， J=6.0 Hz), 7.23(d, 2H, J=6.0 Hz)， 6.71(d， 1H， J-9.0 Hz)， 6.60(d, 1H, J=9.0 Hz)， 4.1 l(d， 1H， J-9.0 Hz), 3.86(brd， IH)， 3.84(s, 3H)， 3.77(dd， 1H, J=3.0， 15.0 Hz), 3.27(s, 1H)， 3.20(dd, 1H， J-3.0, 12.0 Hz), 2.92(s, 3H), 2.86(s， 1H), 2.77-2.67(m， IH)， 2.48-2.39(m， IH)， 2.36(s， 3H)， 2.34(s， 3H)， 1.97(dt， 1H， J=6.0， 12.0 Hz)， 1.81(dt， 1H, J=6.0， 12.0 Hz)， 1.59-1.47(m， 2H),1.37(d， 1H， J=12.0 Hz)， 1.28(d， 1H, J=12.0 Hz).13C NMR (300 MHz, CDC13) S 145.21， 144.63， 142.60, 138.86, 129.52， 129.16， 127.03， 126.96， 124.13,119.34， 109.91， 79.13, 57.41, 56.52, 55.85, 51.03, 47.28, 44.12， 42.29, 37.50， 37.32， 35.20， 32.50， 28.79， 23.86, 21.52.實施例66位氨基醯化反應化合物7:如上述化學式，稱取化合物6: 6—氨基一7， 8 二氫青藤鹼150 mg (0.45mmo1)，溶於 10 ml CH2C12 ，滴加Et3N 0.1 ml (0.68 mmol)，冰浴下加入苯甲醯氯62pL (0.54 mmol)， 冰浴下攪拌6h。倒入30mlCH2Cl2中萃取，有機層用飽和食鹽水水洗，無水NaS04幹 燥，減壓濃縮，矽膠柱分離(CH3C1:CH30H=9:1)，得相應化合物8，產率90%。 化合物8:!H NMR (300 MHz， CDC13) 3 ppm 7.62-7.24(m, 5H), 6.76(d， 1H, J:9.0 Hz)， 6.67(d, 1H， 7=9.0 Hz)， 5.92(d, 1H， J-9.0 Hz), 4.94-4.90(m, 1H)， 4.03(dd， 1H, 7=3.0, 15.0 Hz), 3.59陽3.53(m, 1H), 3.51(s, 1H), 3.38(s, 1H)， 3.07-2.85(m， 3H), 2.58-2.53(m, 1H), 2.45(s, 3H), 2.10-1.95(m， 3H)， 1.98(d， 1H， J^2.0 Hz)， 1.67-1.58(m， 2H), 1.43(dd， 1H， 《/=15.0， 3.0 Hz)， 1.31(t， lH,6.0Hz).13CNMR (300 MHz， CDC13) (5166.51， 144.90, 144.87， 134.47, 130.98, 130.31， 127.99(2C), 126.89(2C), 125.07， 119.26， 108.66, 78.86， 57.50, 56.12， 55.57， 47.44, 46.13， 44.50， 42.56， 37.88， 36.82, 35.60， 29.75,24.05.實施例7 6位羥基還原稱取青藤鹼(sinomenine) 3.6g溶於30ml甲醇，冰浴下緩慢分批加入10g NaBH4，反 應24h，冰浴下滴加丙酮終止反應，減壓濃縮成固體，加入稀HC1溶解，濃氨水調節pH 值至9.0，用CH2C12 (50ml)進行3次萃取，有機層用用飽和食鹽水水洗，無水NaS04 乾燥，減壓濃縮，矽膠柱分離(CH3C1:CH30H=15:1)，得化合物9，產率55%，以及化合物IO，產率30%。化合物9:JH NMR (300 MHz, CDC13) S ppm 6.65(s， 1H， J=9.0 Hz), 6.57(s, IH, J=9.0 Hz)， 5.29(s, 1H， OH)， 4.49(s， IH), 4.17(d, 1H， J=6.0 Hz)， 3.80(s, 3H), 3.68(d, 1H， J=15.0 Hz)， 3.48(s, 3H)， 3.03(s, IH)， 2.90(d, 1H， J-18.0 Hz), 2.75(dd， IH, J=6.0,18.0 Hz), 2.50(brd, 2H), 2.40(s, 3H)， 2.01(td, IH, J=3.0, 12.0 Hz)， L89(d, IH, J=12.0 Hz), 1.72(dd， 1H， J=3.0， 15.0 Hz), 1.63(dd: 1H， J=6.0,15.0 Hz).13C NMR (300 MHz, CDC13) S 156.68, 144.87, 144.44, 131.32, 125.28， 119.04, 108.90, 97.23, 66.95， 57.94, 56.19， 54.47, 48.10， 45.36， 42.78， 40.07, 36.68, 34.40， 24.61.化合物10:iHNMR (300 MHz, CDC13) 5 ppm 6.62(d, IH, J=9.0 Hz), 6.53(d， 1H， J=9.0 Hz)， 4.39(s， IH)， 4.20-4.26(m， IH), 3.83(s, 3H), 3.66(dd, IH, J=6.0， 12.0 Hz), 3.44(s, 3H), 3.01(s, IH), 2.89(d, IH, J=12.0 Hz), 2.75-2.67(m， 2H)， 2.53(d， IH, J=3.0 Hz)， 2.41(s， 3H), 2.06(td， IH, J=3.0, 12.0 Hz)， 1.82-1.74(m, 2H), 1.59(t, 1H， J=12.0 Hz).13C NMR (300 MHz， CDC13) S 156.53, 144.63(2C)， 131.47， 124.52, 118.21， 108.21, 96.62: 66.95， 57.46, 56.21, 54.48,47.86,45.36,42.84,41.13, 37.42, 36.05, 24.13,實施例8青藤鹼A環1位以C-C或者C-0方式連接形成青藤鹼衍生物:採用普通微生物分離方法從特定生境中分離得到青藤鹼(sinomenine)轉化菌株黴菌 加加力W/a w附&"/ /"a。活化7天的斜面菌種，轉接到發酵培養基中，在25""C,150r/min 的搖床上培養4天，加入青藤鹼鹽酸鹽，終濃度^400^ig/ml，同樣條件下繼續培養1天 後加入第二種底物愈創木酚，終濃度5400pg/ml，相同條件下繼續培養4天，停止培養； 將發酵液過濾，濾液用NH4OH，調節pH值到8 9，用二氯甲烷多次萃取，合併二氯 甲烷萃取液，無水NaS04乾燥，過濾，旋轉蒸乾溶劑，得轉化產物，採用填充的層析柱 為矽膠柱，層析液為100:0 50:50 V/V氯仿一甲醇混合液。分離得化合物11，產率13 %，以及化合物12，產率5%。化合物11:& NMR (300 MHz, CDC13) S ppm 6.94 (d， 1H， J = 8.4 Hz), 6.68 (brs， IH), 6.67 (dd，lH， J = 8.4， 1.8 Hz), 6.56 (s, IH), 5.46 (d, IH, J = 1.9 Hz), 4.42 (d, 1H， J = 15.6 Hz), 3.89 (s, IH), 3.80 (s, 3H)， 3.52 (s, 3H)， 3.12 (brt, J = 4.0 Hz), 3.01 (dd, 1H， J = 4.0， 1.9 Hz)， 2.75 (brd， 1H， J = 18.6 Hz), 2.75 (dd， 1H， J = 18. 6,4.0 Hz), 2.57 (ddd, IH, J = 12.2， 4.4, 1.5Hz), 2.49 (d， 1H， J = 15.6 Hz)， 2.31 (s, 3H)， 2.10 (td, J = 12.2， 3.2 Hz), 2.02 (dt, IH, J = 12.4, 3.2 Hz), 1.89 (td, 1H， J= 12.4， 4.4 Hz).13C NMR (300 MHz, CDC13) S 194.2, 152.3， 143.8, 146.3， 144.6, 144.5， 134.3, 131.8, 127.7, 122.5， 121.9, 115.2， 114.3, 111.7, 111.0, 56.6, 56.0， 55.9， 54.9, 49.1, 47.4, 45.6， 43.8， 40.8, 35.8， 23.4. 化合物12:& NMR (300 MHz, CDC13) 5 ppm 7.00-6.96 (overlapped, 2H)， 6.75 (m， IH), 6.44 (s, IH)， 6.36 (dd, 1H， J = 8.5， 1.1 Hz)， 5.39 (d, 1H， J = 1.8 Hz), 4.37 (d, IH, J = 15.7 Hz), 3.95 (s， 3H)， 3.73 (s，3H), 3.49 (s， 3H)， 3.19 (brt， 1H， J = 5.8 Hz)， 3.03 (brd, 1H， J = 5.8 Hz), 3.00 (d， 1H， J =18.5Hz)， 2.58 (ddd， 1H, J = 12.0， 4.4， 1.8 Hz)， 2.47 (d， 1H， J = 15.7 Hz)， 2.36 (s， 3H), 2.36 (dd, 1H, J = 18.5, 5.8 Hz)， 2.14 (td, 1H， J = 12.0, 3.4 Hz), 2.00 (dt， 1H, J =12.4， 3.4 Hz)， 1.93 (td, 1H， J = 12.4， 4.4 Hz).13C畫R (300 MHz， CDC13) S 193.7, 152.4, 149.1， 147.5(2C), 141.7， 144.1, 122.3, 120.7, 114.8， 114.6, 123.4， 122.5, 112.2, 103.1， 56.1， 56.0, 55.8, 54.8, 49.0， 47.0, 45.6， 42.7， 40.4， 35.6， 18.5.實施例9青藤鹼A環1位以C-C方式連接形成的青藤鹼衍生物:採用普通微生物分離方法從特定生境中分離得到青藤鹼(sinomenine)轉化菌株黴菌 CoWo/"s wm'co/or。活化7天的斜面菌種，轉接到發酵培養基中，在25°C,150r/min的搖 床上培養4天，加入青藤鹼鹽酸鹽，終濃度^40(Hig/ml，同樣條件下繼續培養1天後加入第二種底物鄰苯二酚，終濃度5400pg/ml，相同條件下繼續培養4天，停止培養；將 發酵液過濾，濾液用NH4OH調節pH值至8 9，用二氯甲垸多次萃取，合併二氯甲烷 萃取液，無水NaS04乾燥，過濾，旋轉蒸乾溶劑，得轉化產物，採用填充的層析柱為矽 膠柱，層析液為100:0 50:50V/V氯仿一甲醇混合液。分離得化合物13，產率15%。 化合物13:NMR (300 MHz, CDC13) S卯m 6.81(d， 1H, J = 9.0 Hz), 6.61(s， 1H), 6.52(s, 1H), 6.48(d, 1H, J = 9.0 Hz), 5.43(s, 1H), 4.37(d， 1H, J = 15.0 Hz), 3.74(s， 3H), 3.47(s， 3H), 3.38(brd， IH)， 2.75-2.53(m, 3H), 2.45(d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.34(s, 3H), 2.21-2.13(m， 1H， )， 2.02-1.89(m, 3H).13C觀R (300 MHz， CDC13) S 194.53， 152.41， 144.97, 144.28, 143.76， 143.58, 133.97， 132.26， 126.06， 121.53, 120.83, 116.11, 115.09, 114.58， 111.53, 56.96, 56.00, 54.96, 47.52, 44.24， 42.05,40.40， 34.64， 29.72， 23.81.實施例10通過4位羥基形成兩分子青藤鹼加合物formula see original document page 21sinomenine 14稱取青藤鹼(sinomenine) 1.5g (4.56 mmol)，溶於20mlEtOH ，加入K2C03 3.15g (22.8 mmol)，滴加1，3-二溴丙烷232^L (2.28mmol)，回流5h。反應完全後，用稀HCl調節 pH值至3，攪拌10min，再用濃NKUOH調節pH值至8 9， 二氯甲垸多次萃取，合併 二氯甲垸萃取液，無水NaS04乾燥，旋轉蒸乾溶劑，矽膠柱分離(CH3C1:CH30H-9:1)， 得相應化合物14，產率53%。 化合物14:*H NMR (300 MHz, CDC13) S ppm 6.99-6.66(m， 2H), 5.46(s， IH)， 4.35-4.14(m, 3H)， 3.78(s, 3H), 3.47(s， 3H)， 3.16-3.14(m, 1H), 2.95-2.76(m, 2H), 2.72(dd， 1H， J = 6.0， 12.0 Hz)， 2.53-2.45(m， 3H), 2.41(s, 3H), 2.07隱1.87(m, 4H).13C NMR (300 MHz, CDC13) 5 193.71, 152.57， 151.53, 148.26， 130.02, 129.98, 122.54,115.28， 111.54， 69.69, 56.68， 55.90, 54.89, 50.01， 47.26, 46.18， 42.83, 40.91， 37.46， 31.55 24.65.實施例11對青藤鹼D環開環後末端氨基進行改造稱取青藤鹼(sinomenine) 1.5g (4.56mmoD，溶於200ml 15%NaOH溶液中，煮沸8min， 流水冷卻，用濃HCl調節pH值至4，再進行過濾，濾液用濃NH4OH，使pH值調節至 8，用二氯甲烷多次萃取，合併二氯甲烷萃取液，用無水NaS04乾燥，旋轉蒸乾溶劑， 矽膠柱分離(CH3C1:CH30H=9:1)，得相應化合物15,產率33%。 化合物15:'H NMR (300 MHz, CDC13) 5 ppm 6.73(d, 1H， J = 9.0 Hz)， 6.66(d, IH, J - 9.0 Hz), 6.0(s, 1H), 5.76(s， 1H), 4.23(dd, 1H, J = 18.0 Hz), 3.86(s, 3H), 3.70(s， 3H), 3.17-3.11(m, 2H)， 2.97(s， IH)， 2.84(dd， 1H, J = 6.0, 18.0 Hz)， 2.66(d， 1H， J = 18.0 Hz), 2.42(dd， 1H, J = 3.0, 12.0 Hz), 2.36(s, 3H)， 2.19(dt， 1H, J = 12.0,12.0, 3.0 Hz)， 2.06(dt， 1H， J = 12.0， 12.0， 3.0 Hz), 1.56(dd, IH,J- 12.0 Hz)13C NMR (300 MHz, CDC13) S 194.84, 151.21， 144.79， 143.85， 130.67， 127.08， 119.80, 118.77， 109.07, 58.10， 56.29, 54.97， 48.37， 47.26, 43.30， 42.09， 38.28， 28.25， 27.59.實施例12通過Suzuki芳基交叉偶聯反應，製備在青藤鹼A環1位以C-C或者C-0方式連接形 成的青藤鹼衍生物S32—S34:formula see original document page 23其製備步驟如下-l-溴代青藤鹼(0.5mmol)、芳基硼酸(0.7mmol)、 Pd(OAc)2 (3mol%)、 DABCO (6mol%)和K2C03 (1.5mmol)組成的混合物，懸浮於3ml的二甲基甲醯胺DMF中， 80'C下攪拌反應，TLC檢測反應完畢後，過濾，萃取，乾燥，柱分離得產物。實施例13青藤鹼衍生物的抗炎作用取滑膜腫瘤細胞SW982於24孔盤培養，培養密度lxl04/ 孔，24h後用L-15的完全培養基CGM (終濃度為10%胎牛血清，100U/ml的青黴素和 鏈黴素，2mM的L-谷胺醯胺，pH=7.40)置換培養液，CGM中以0.2%牛血清白蛋白 (BSA)替換胎牛血清(FBS)，再24h後，以lng/ml 1L-Ip的培養基置換培養液，培養 基含0.2%的BSA和終濃度分別為200nmol/L， 100pmol/L， 50pmol/L的測試藥物，即本 發明的青藤鹼衍生物；繼續培養48h後，取細胞上清液，用Human IL-6試劑盒檢測， 結果見圖1。從圖l可以看出，化合物13， 14在三種濃度下均對細胞炎症因子IL-6表現出強的 抑制作用，化合物11在三種濃度下顯示了一定的抑制作用，化合物5， 7， 8在高濃度 下(200pM)對IL-6有一定的抑制作用，而化合3在低濃度下(5(HiM)有一定抑制作 用，化合物15則在中等濃度下(100pM)對IL-6有抑制作用。其他化合物，如4， 6 對IL-6有強的促進作用，化合物10， 12也有一定的促進作用。化合物9抑制作用基本 上與青藤鹼持平。本發明實施例中使用的有機溶劑包括但不限於甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁 醇、異丁醇、叔丁醇、正戊醇、異戊醇、環己醇、卞醇、二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙 烷、四氯化碳、乙醚、四氫呋喃、苯、甲苯、二甲苯、丙酮、丁酮、乙氰、N，N-二甲基 甲醯胺、乙酸乙酯等。
權利要求
1. top= "37" left = "87" top= "97" left = "34" top= "161" left = "34" top= "196" left = "34" top= "21" left = "29" top= "122" left = "27" top= "175" left = "39" top= "22" left = "29"/>R1＝Cl，Br，OMe，CO2Me，CHO，CH2CO2CH4，CH2CN，NHCOCF3，CH3，COPh，NH2，CN，CF3，CH(OH)COOH等；R2＝R3＝OH，NH2，NO2，或者R2＝OH，R3＝OCH3，NO2，Cl，Br，CH3等，R4＝R5＝H；R3＝R5＝NO2，R2＝R4＝H 。
2.根據權利要求1所述的青藤鹼衍生物的製備方法，其特徵是通過l位氨基化及 其醯基化製備青藤鹼衍生物S1-S5，化學式如下R，= H, R2- S02R3其中R3= CH3: Ph; 2-OH^3.5"CI2C6H2: 2,4-Cl2"5"COOHCeH2等。或者R，= H， R2- COR3其中R3= Ph:傘CI-C6H4; 3.4-Cl2"CeH3:4-CH3~C6H4: 4-OCH3-CsH4等。或者H. r2= "COC(r3)nhr4其中r3=CH3. PhCH2， (CH3)2chch2: CH3SCH2CH2等，R4- H; SO^h; CONHCbH5等。
3、根據權利要求1所述的青藤鹼衍生物的製備方法，其特徵是通過4位羥基或1 位氨基連接兩分子青藤鹼加合製備青藤鹼衍生物S6-S8，化學式如下formula see original document page 4
4、根據權利要求1所述的青藤鹼衍生物的製備方法，其特徵是通過3， 4位雙羰基 化及六元氮雜環化製備青藤鹼衍生物S9-S14，化學式如下formula see original document page 5R3,R4,R5,R6= H, Cw4的飽和及不飽和烷基，F, CI, Br, I, OH, NH2, OCH3, OC2H5, N02, CN, CF3, COOCH3, COPh, COOH, Ph為苯基。
5、根據權利要求1所述的青藤鹼衍生物的製備方法，其特徵是通過6位氨基化及其醯基化製備青藤鹼衍生物S15-S22,通過6， 7位同時氨基化及六元氮雜環化製備青藤 鹼衍生物S23-S24，化學式如下R，= H, R2= S02R3其中R3= CH3; Ph; 2-OH-3,5"CI2C6H2; 2,4"Cl2"5-COOHCeH2等。或者R產H, R2= COR3其中R3- Ph; 4-CI-CeH4; 3,4"Cl2"C6H3; 4-CH3-CsH4; 4-0(^3"061"14等。或者Ri= H, R2= "COC(R3)NHR4其中R3=CH3, PhCH2, (CH3〉2CHCH2; CH3SCH2CH2等，R4= H; S02Ph; CONHCeH5等。
6、根據權利要求1所述的青藤鹼衍生物的製備方法，其特徵是製備青藤鹼衍生物S25-S26的化學式如下，S27—S31為中間化合產物formula see original document page 6R，= H或CH3, R2= S02R3其中R3= CH3; Ph; 2-OH-3,5-CI2C6H2; 2,4-Cl2"5"COOHCeH2等。或者H或CH3, R2- COR3其中R3= Ph; 4-CI-C6H4; 3,4"ClrCeH3; 4-CH3"C6H4; 4"OCH3-CeH4等。或者R1= H或CH3， R2= "COC(R3)NHFU其中R3=CH3, PhCH2, (CH;3)2CHCH2; CH3SCH2CH2^4= H; S02Ph; CONHC6H^。
7、根據權利要求1所述的青藤鹼衍生物的製備方法，其特徵是製備青藤鹼衍生物S32-S34的方法包括(1)微生物/酶催化多底物交叉偶聯，(2) Suzuki芳基交叉偶聯； 通過微生物/酶催化多底物交叉偶聯製備，其製備步驟如下1) 菌株分離野外採取特定生境，稀釋塗布分離，選擇性篩選，菌種斜面0'C保藏； 轉化粗酶來自上述菌株，粗酶的分離採用蛋白質鹽析分離方法，其餘使用的酶購自Sigma;2) 生物轉化產物的製備活化7天的斜面菌種，轉接到發酵培養基中，在 25'C，150r/rain的搖床上培養4天，加入青藤鹼鹽酸鹽，終濃度《400" g/ml，同樣條件 下繼續培養1天後加入第二種底物，終濃度《400ug/ml，相同條件下繼續培養4天， 停止培養；將發酵液過濾，濾液用NH40H調節pH值8 9,用二氯甲烷多次萃取，合併 二氯甲烷萃取液，無水NaS04乾燥，過濾，旋轉蒸乾溶劑，得轉化產物；3) 生物轉化產物的分離採用填充的層析柱為矽膠柱，層析液為100:0 50:50V/V氯仿一甲醇混合液；通過Suzuki芳基交叉偶聯反應製備，其製備步驟如下1-溴代青藤鹼(0.5mmol)、芳基硼酸(0.7mmol)、 Pd(OAc)2 (3mol%)、 DABCO (6mol%)和K2C03 (1.5tmno1)組成的混合物，懸浮於3ml的二甲基甲醯胺DMF中， 80'C下攪拌反應，TLC檢測反應完畢後，過濾，萃取，乾燥，柱分離得產物。
8、根據權利要求7所述的青藤鹼衍生物的製備方法，其特徵是通過微生物/酶催化 多底物交叉偶聯的製備步驟1)中的生物轉化菌株或者酶包括黴菌菌株^7trooVW7a se則's^i朋及其同屬菌株、單色雲芝Cor/W"s "/7ico or及其同屬菌株、過氧化物酶、 脂肪酶、漆酶、水解酶、纖維素酶、澱粉酶、蛋白酶。
9、權利要求1所述的青藤鹼衍生物在製備類風溼性關節炎的抗炎藥物和保健品中 的應用。
全文摘要
本發明針對青藤鹼分子結構對酸鹼熱不穩定的性質，提出創新性的結構改造思路，通過化學合成製備了新的青藤鹼A環、C環和D環青藤鹼衍生物，包括青藤鹼1位氨基化及其醯基化，1位C-C或者C-O方式連接，3，4位雙羰基化及六元氮雜環化，4位羥基和1位氨基連接的兩分子青藤鹼加合，6位氨基化及其醯基化，6，7位同時氨基化及六元N雜環化，D環開環及其末端氨基修飾，方法新穎，具有獨特性；採用滑膜腫瘤細胞(SW982)評價其抗炎活性，生物活性良好，可應用於抗類風溼性關節炎(RA)藥物和保健品中。
文檔編號C12P17/10GK101265266SQ20081002405
公開日2008年9月17日 申請日期2008年4月23日 優先權日2008年4月23日
發明者珺 劉, 李建新, 鄧張雙 申請人:南京大學