一種燒傷動物模型的製作方法
2023-11-10 18:38:47 1
專利名稱：一種燒傷動物模型的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種利用石油煉油殘料製作燒傷動物模型的方法，用於人類燒傷的病理機制、藥物的篩選和治療作用的研究。本發明屬於醫學及生命科學試驗研究領域。
背景技術：
燒傷是物理、化學、放射線、雷射等諸多因素作用於機體而造成的一種極其複雜的外傷性疾病，儘管人類努力預防燒傷的發生，但急診室每年接收的燒傷病人數量仍然很大。 據統計，美國每年的燒傷病例可達50萬之多。由於臨床積累經驗的局限性和燒傷發生發展的複雜性使燒傷的病理機理、治療藥物的研究仍然是醫藥學研究的重點方向之一。受道義上和方法學上的種種限制，許多實驗不能也不應該以病人作為試驗對象，導致深入探討疾病的發病機理及藥物等治療效果觀察等極大困難。動物模型可克服上述不足，在生物醫學研究中發揮著獨特的作用。故建立燒傷動物模型是現代燒傷研究領域基礎與應用研究中的一個極為重要的實驗方法和手段。一個理想的燒傷模型將有助於更科學、更準確地認識燒傷後機體各系統及局部創面的發展演變規律，探索針對性的防治措施。55°C以上的溫度作用於動物表面組織一定時間後，即可引起實驗性燒傷。因此，有關燒傷動物模型的製作方式種類較多，主要是火焰燒傷、電光源法、熱燙傷等。實驗性熱燙傷分點狀溫熱燙傷法、直接熱水燙傷法和熱蒸汽燙傷法三類。點狀溫熱燙傷法由kvitt於 1949年創建。模型動物不麻醉，背部固定於燙板下，用點狀燙傷器底端藉助燙傷器自重，緊貼於實驗動物擬燙傷區實施燙傷。該法具有燙傷面積和深度較易控制，重複性高，大小動物均適用等優點，被認為是標準的燙傷模型製作方法；直接熱水燙傷法將實驗動物擬燙傷區直接置於恆溫熱水中致傷，致傷深度易於控制，重複性好，但燙傷面積較難控制；熱蒸汽燙傷法多用於建立動物吸入性損傷模型。總體而言，燙傷的溫度容易控制，作用均勻，面積較易掌握，一般比其它燒傷模型穩定、準確、重複性好。現實生活中或軍事戰爭中由燃料等化學物質導致的火焰燒傷較熱燙傷更為常見，對這些原因引起的燒傷進行相關研究實屬必要。火焰燒傷主要包括凝固汽油複製燒傷模型和混合燃料複製燒傷模型。但目前常用的燒傷模型燃料均難以購買，且大多沒有確切用量及燒傷時間，燒傷程度不易控制。因此穩定、 準確、重複性好的火焰燒傷動物模型的建立十分重要。實驗性燒傷的損害程度取決於致傷溫度的高低、致傷時間的長短、燒傷組織的傷前情況以及實驗動物的機體反應性。為保持致傷條件恆定一致，複製出損害程度一致的模型，以便於進行重複和對比，應針對致傷時間、致傷溫度和致傷後各種可能的影響因素，採取相應的措施，最大限度地減少各種因素的影響。使用本法製造模型時可用軟刷均勻塗布混合燃料於動物皮膚表面，嚴格控制燒傷時間，達到一次同時滅火，即可複製出所需的燒傷面積與深度，模擬人類燒傷的症狀和體徵，並避免燒傷創面深度不一致，能滿足進一步實驗的要求。本模型具有造模簡單，取材方便，且模型穩定，成功率高，重現性好，燒傷程度易於控制等特點。
發明內容
本發明的目的在於提供一種以石油煉油殘料和汽油為混合燃料製作動物燒傷模型的方法，該方法具有造模簡單、取材方便、模型穩定、成功率高、重現性好、燒傷程度易於控制等特點，可用於人類燒傷的病理機制、治療藥物的篩選和評價等研究的動物模型。混合燃料配方按重量百分比計為20 60%石油煉油殘料即常壓渣油，40 80%汽油。模型製作方法將石油煉油殘料溶於汽油中，混勻，-20°C冷凍，取出，攪拌，反覆冷凍攪拌3 7次至均勻膠狀；將此混合燃料塗於動物皮膚表面，點火，持續燃燒15 30秒， 造成不同程度的燒傷。傷後立即補液復甦，分籠飼養，自由飲食；採用創面組織病理切片，光鏡下病理診斷並確定燒傷等級。本模型所用的動物包括大鼠、小鼠、豚鼠、家兔、豬和狗等，可以模擬各種原因如火焰、電光、放射線、熱水等導致的人類燒傷的症狀和體徵，為科研和臨床治療提供必須的動物燒傷疾病模型。
具體實施例方式下面列舉典型實施例，對本發明進一步說明，但不以任何形式構成對本發明的限制。實施例1 混合燃料致大鼠20%體表面積淺II度燒傷混合燃料的配製準確稱量35g石油煉油殘料即常壓渣油，加入93#汽油至100g， 置磨口瓶內，充分攪拌。至冰箱內，每日充分振蕩IOmin，共7天，呈均勻膠狀。實驗動物SD大鼠，雌雄不拘，體重200 250g，由第四軍醫大學實驗動物研究中心提供。皮膚處理(1)祛毛3%戊巴比妥鈉30mg/kg ip麻醉，將大鼠固定在板上，用電推子除去被毛，略大於擬燒傷面積。( 脫毛用硫化鈉糊劑脫毛，待用。體表面積計算準確稱量體重，稱重前禁食16h。按以下公式計算體表面積 B= K* V^Wi ·
9S =體表面積(cm2)，W =晨間體重(g)，K =常數(12. 54)。燒傷面積計算燒傷面積(cm2)=體表面積(cm2) X擬燒面積％。模型製作動物3%戊巴比妥鈉30mg/kg ip麻醉，將預燒皮膚周圍用溼布遮蓋。用毛刷將混合燃料均勻的塗於預燒傷區，塗料面積與預燒傷面積一致，周圍用耐火材料或溼紗布保護，立即點燃並以秒表計時，燒傷時間設定為15秒，到時用溼紗布滅火；燃燒需在氣流穩定的環境進行。傷後立即腹腔注射乳酸林格液5ml，分籠飼養，自由飲食。確定燒傷深度燒傷創面分別於傷後Ih以內和Mh，將大小IcmX Icm的燒傷皮膚取下作組織病理學檢查以確定燒傷深度，切取對照組全層皮膚，標本固定於10%的甲醛溶液中，經脫水、常規石蠟包埋，切片，HE染色。診斷結果創面紅腫，出現水皰或表皮與真皮分離。組織學檢查發現表皮破壞，真皮淺層損傷，診斷為淺II度燒傷。實施例2 混合燃料致大鼠20%體表面積深II度燒傷混合燃料配製、實驗動物、皮膚處理等均同實施例1。
模型製作動物3%戊巴比妥鈉30mg/kg ip麻醉，將預燒皮膚周圍用溼布遮蓋。用毛刷將混合燃料均勻的塗於預燒傷區，塗料面積與預燒傷面積一致，立即點燃並以秒表計時，燒傷時間設定為25秒，到時用溼紗布滅火；燃燒需在氣流穩定的環境進行。傷後立即腹腔注射乳酸林格液5ml，分籠飼養，自由飲食。確定燒傷深度同實施例1。診斷結果燙傷後創面立即變白，輕度腫脹，光澤差，肉眼可明顯區分燒傷部位與正常皮區；24h後創面色澤加深，邊界清晰。組織學檢查表皮全部壞死脫落，真皮層膠元纖維結構不清，深層上部也有上述改變，但可見一些殘存的皮膚附件存在，再下有較多的中性粒細咆浸潤，血管擴張充血，診斷為深II度燒傷。實施例3 混合燃料致大鼠20%體表面積III度燒傷混合燃料配製、實驗動物、皮膚處理等均同實施例1。模型製作動物3%戊巴比妥鈉30mg/kg ip麻醉，將預燒皮膚周圍用溼布遮蓋。用毛刷將混合燃料均勻的塗於預燒傷區，塗料面積與預燒傷面積一致，立即點燃並以秒表計時，燒傷時間設定為30秒，到時用溼紗布滅火。燃燒需在氣流穩定的環境進行。傷後立即腹腔注射乳酸林格液5ml，分籠飼養，自由飲食。確定燒傷深度同實施例1。診斷結果傷後皮膚面積顯著縮小，顏色焦黃並有焦臭味。肉眼見燒傷皮膚凝固變薄。病理切片顯示網狀層下半部分以至全部或大部分被毀，毛囊及皮脂腺全部壞死，未見殘餘毛囊，病變符合III度燒傷創面特徵。
權利要求
1.一種用混合燃料製造動物燒傷模型，其混合燃料配方的特徵在於含有重量百分比的 20% 60%石油煉油殘料即常壓渣油、40 80%汽油。
2.按照權利要求1所述製造燒傷動物模型使用的混合燃料，其配製方法的特徵在於將石油煉油殘料溶於汽油中，混勻，-20°C冷凍，取出，攪拌，反覆冷凍攪拌3 7次至均勻膠狀，備用。
3.根據權利要求1-2所述的製造動物燒傷模型採用的混合燃料配方及其配製方法，其製造動物燒傷模型的方法特徵在於可選用小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、豬和狗等實驗動物，將混合燃料用軟刷均勻塗於動物脫毛預燒皮膚表面，周圍用溼布遮蓋，點火，持續燃燒15 30 秒，造成不同程度的燒傷；傷後立即補液復甦，分籠飼養，自由飲食；採用創面組織病理切片光鏡下形態觀察，診斷並確定燒傷等級。
4.按照權利要求1 3所述的用混合燃料製造的燒傷動物模型，其病理改變和臨床體徵特徵在於該模型與各種原因如火焰、電光、放射線、熱水等導致的人體燒傷病理改變、症狀和體徵等非常相似，為研究燒傷的發病機制和評價燒傷的治療藥物等提供了動物燒傷模型；本模型具有操作簡便，重現性好，成功率高，燒傷程度易於控制等顯著優點。
全文摘要
本發明涉及一種用混合燃料製造燒傷動物模型方法，其特徵在於混合燃料由20％～60％石油煉油殘料，40％～80％汽油組成，配製方法是將石油煉油殘料溶於汽油中，混勻，-20℃冷凍，取出，攪拌，反覆冷凍攪拌3～7次至均勻膠狀；將混合燃料均勻塗於大鼠、小鼠、豚鼠、家兔、豬和狗等動物脫毛預燒皮膚表面，點火，持續燃燒15～30秒；傷後立即補液復甦，分籠飼養，自由飲食；採用創面組織病理切片光鏡下觀測並確定燒傷分級；本模型具有操作簡便，重現性好，成功率高，燒傷程度易於控制等優點，可用於人類燒傷的病理機制、治療藥物的篩選和評價等研究。
文檔編號A61D1/00GK102274084SQ20111012322
公開日2011年12月14日 申請日期2011年5月12日 優先權日2011年5月12日
發明者康榮, 曹蔚, 楊倩, 王四旺, 謝豔華 申請人:中國人民解放軍第四軍醫大學