改進的加環利定製劑的製作方法

2023-12-05 09:52:46 1

專利名稱：：改進的加環利定製劑的製作方法改進的加環利定製劑本申請要求2005年3月4日申請的系列號60/658,207的利益。將系列號60/658,207在此全部S1入作為參考。發明領域本發明涉及用於治療中耳和內耳疾病的加環利定及其它治療劑的改進的製劑。發明背景許多治療劑當系統給藥(即經口服、靜脈或肌內注射)時具有副作用，其阻止了以最佳劑量遞送。這是因為其他身體和神經系統細胞與循環的足量治療劑接觸，而由於在別處的全身性副作用，靶細胞不能接受最佳劑量。當對組織特異性藥物遞送正確製劑時，如此遞送的有效治療劑將具有最小的副作用，且仍然對靶向神經組織有效。如目前理解，耳鳴通常為多種神經障礙的一個症狀，包括牙齒或面神經的損傷，顳下頜關節(TMJ)疾病、對氣味、；朱道和接觸的過敏和聽覺皮層或下丘的損傷。耳鳴還通常伴有這些基礎神經系統疾病障礙的其它表現，如梅尼爾(氏)病、疼痛、焦慮、抑鬱和偏頭痛。因而，期望治療其中基礎神經障礙存在的準確位點，其不限於，但可以包括耳蝸、聽神經、牙齒或面神經及中樞神經系統的聽覺皮層或下丘。當沒有外部聲音時，患者感覺到耳鳴，像是體內的聲音。臨床上，期望的治療為抑制對不適當的聲音的知覺而沒有妨礙工作和日常生活中正常功能的副作用。因此，所需的適宜治療將需要給予有效的CNS活性藥物，以減輕相關神經不適當的簇發，所述神經將聲音知覺報告到聽覺皮層。給予有效的CNS活性藥物用於治療中耳和內耳疾病，如耳鳴，所述CNS活性藥物用於減輕特定神經組織的自發和可能是強直的簇發，而不損傷其它主要功能，如聽覺或平衡。因為這些藥物對整個神經系統的一般活性，當系統給藥時，其具有特定的限制。為了克服這些全身性副作用和得到改善的治療結果，同時使副作用最小化，期望的是將所述藥物給予至耳鳴起源的部位，如中耳或內耳。直接給藥至中耳或內耳使醫療提供者最佳化治療程序，以避免或最小化了組織損傷和副作用。由不當的劑量配藥引起的該器官中的組織損傷的結果對聽覺和平衡很重要，並且所述損傷可包括對有關毛細胞或神經、螺旋神經節或迷路系統有關的聽力的不可逆地損傷。在某些情況下，給藥到內耳或耳蝸的化合物可進入腦脊液(CSF)中，如果有效的CNS活性劑到達CSF,其可能具有不希望的副作用，因為它作用於不是其靶點的神經細胞。因此，對腦和脊髓有非故意的作用。任何對這些細胞和組織的破壞都將導致對重要的感官如聽覺的嚴重後果。而且，除了期望遞送藥物穿過圓窗外，遞送到中耳的化合物也可被部分地吸收到暴露的脈管系統中並進入體循環或通過沿咽鼓管向下4皮口腔、咽喉、胃或胃腸道吸收。因此，為了達到期望的結果而沒有不希望的副作用，給藥方法、部位、裝置和製劑都很重要。因此，本領域一直需要治療劑的改進位劑，所述治療劑是用於遞送至中耳或內耳或其他需要治療的特定部位而特別設計的。本發明滿足了這一需要。附圖簡述圖1.圖像表示在玻璃小瓶中在室溫下加環利定的溶液濃度的降低與pH的函數和通過選擇的輔料使溶液濃度增加。圖2.圖像表示在37。C下加環利定對聚丙烯小瓶的吸附與pH的函數和逸擇的輔料(存在imM的總加環利定；過量)的調節效應。圖3.圖像表示在聚丙烯小瓶中25juM的加環利定的損失與pH的函數，有和沒有SOLUTOI^(沒有過量的加環利定)。圖4.圖像表示在54。C或56。C下，加環利定鹼形式的化學穩定性和其酸形式的化學不穩定性。圖5.圖像表示在較低溫度下加環利定酸形式(pH2)的化學穩定性增加。注意分解速率的出人意外地巨大溫度依賴性。圖6.圖像表示在37。C下，在乳酸化林格溶液中，加環利定的分解在pH7.4比在pH5.5或6.0慢。圖7.圖像表示在55°C，在林格溶液中，加環利定的溶液濃度隨著pH在7.3至8.1之間增加而降低，並且在較高的pH下旅。定的生成減少。.圖8.圖像表示在pH6.7至7.2之間，在55。C和在林格溶液中，0.3%的聚山梨酯80增加加環利定的溶液濃度和加環利定的化學穩定性。圖9.圖像表示在林格溶液中，在55。C下，隨著pH在6.7至7.2之間增加，加入的0.3%的聚山梨酯80降低加環利定分解速率。發明詳述本發明提供加環利定和其它適於給藥至中耳和內耳的藥物的製劑。這些製劑可用於治療疾病比如耳鳴、梅尼爾(氏)病、眩暈、中耳炎和內耳炎症和感染、噪音或某些類型的創傷導致的聽力喪失、及物理(例如外科手術)或化學創傷引起的神經學損傷。定義(a)如本文使用的"載體分子(carriermolecule)"為有助於將活性劑保留在溶液或混懸液中的分子。表面活性劑(其與水不溶性或微溶性分子形成絡合物並使所述絡合物溶於水的兩親性分子)為一類載體分子。(b)"溶解促進劑，，增加加環利定在液體製劑中的溶解度。溶解促進劑包括載體分子，特別是表面活性劑和有機溶劑。(c)如本文使用的"溶解性"為化合物溶解到溶液中或用溶解促進劑將其保留在溶液中的性質。(d)如本文使用的"溶液濃度"為存在於液體製劑中隨機選擇的等分部分的每單位體積加環利定的濃度。(e)如本文使用的"化學穩定性"指基本上不存在加環利定分解，所述分解通過哌。定形成測定。如果加環利定在37。C下在4天內分解成哌啶使其初始加環利定溶液濃度損失10%或更少，那麼加環利定製劑增加了化學穩定性。(f)如本文使用的"輔料(excipient)"為加入製劑的添加劑，其有助於使所述製劑成為藥學可接受的。輔料包括提供適當的粘度的共溶劑(比如醇、二醇、DMSO、二曱基乙醯胺)、礦物、抗菌劑等。也可使用包括表面活性劑的載體分子作為輔料。加環利定(l-(2-曱基-l-噻吩-2-基-環己基)-哌啶鹽酸鹽；GK11)為眾所周知的化合物。加環利定的鹽酸鹽的化學結構顯示如下formulaseeoriginaldocumentpage8如本文使用的"加環利定"包括加環利定的酸加成鹽(addsalt)和鹼形式及光學異構體和幾何異構體。"加環利定衍生物，，具有較小的修飾而沒有改變其母核骨架，如乙酸鹽衍生物或將曱基加到氮上。"加環利定類似物"改變了其母核骨架，如碳取代環上的硫或氮。參見Geneste等人，Eur.J.Med.14，301-08,1979)。在此描述的製劑發明將增加包含噻吩-2-基環的加環利定衍生物和類似物。加環利定的酸和《成形式可以根據美國專利6,107,495製備。加環利定的酸形式的氯化物鹽極易溶於水或無緩沖的生理學可接受的溶液如林格溶液，且將形成包含至多150mg/ml的氯化物鹽，pH約為4.4。游離鹼形式的加環利定微溶於水，並粘附塑料表面。在生理學pH向溶液中加入過量的加環利定游離鹼導致溶解的加環利定終濃度《0.02mg/ml,且pH《7.7，加環利定在林格溶液中的游離鹼形式將與溶解的二氧化碳反應，生成溶解的加環利定的酸形式，且在pH7.6,得到濃度約為0.02mg/ml的加環利定。通過HPLC測定在pH9.5(0.05M的CAPSO緩衝劑；0.1M的NaCl;加入0.3mg/ml加環利定)下，在室溫放置2天後，0.0006mg/ml的加環利定保留在溶液中。用於注射到內耳或中耳的藥物一般在生理學相容的溶液和pH中配製。然而，在生理學pH(例如6.8-7.4)和在生理學pH下的各種緩沖液中，加環利定部分為可溶性鹽形式，且部分為不帶電的游離鹼形式，其微溶於水性溶劑。因此，當在生理學pH的水溶液中配製時，加環利定形成能溶解的微聚集體，其最終吸附到容器中，和/或融合成大的聚集體並從溶液中沉澱出。在製備所述製劑期間，微聚集體可以從溶液中過濾、離心出，或者可粘附到包含該製劑的容器或注射裝置的壁上。在這些條件下，遞送的藥物量將既不是期望的量也不是用於遞送的製劑量。這樣的製劑的製備將是不可靠的，其使在每次製備進行中藥物在製劑中的濃度不同，且將必然導致功效降低。而且，當溫變增加時，所述藥物變得更難溶。當溫度增加時，pKa的改變引起酸鹼平衡向石鹹形式移動。本發明的實施方案提供了解決該問題的幾種溶液。在某些實施方案中，用選擇的溶解促進劑(例如載體分子(包括表面活性劑)和某些有機溶劑)配製加環利定以通過將所述游離4i形式保留在溶液/清澈的混懸液中來增加化學穩定性和表觀溶解度。在其它實施方案中，將加環利定製劑成凍乾粉末，用特定的賦形劑(vehicle)重構以確保快速溶解和正確的溶液濃度、可濾性和化學穩定性。在其它實施方案中，將加環利定製劑成游離鹼固體(具有用於植入的特定形狀，如塊狀、球狀或丸狀顆粒)，其緩慢地溶解進入生理性液體或緩沖液中以提供治療劑量。如本文描述製劑的加環利定可以單獨給藥或與如下所述的一種或多種另外的治療劑組合給藥。使用本發明的製劑，可以在生理學可接受的pH下，將期望劑量的加環利定直接遞送到靶組織(例如耳蝸)。包括溶解促進劑的加環利定酸性和鹼性製劑可以在加入酸(例如鹽酸)或-鹹(例如碳酸氫鈉或氫氧化鈉)來達到期望範圍pH的賦形劑中以其酸或鹼形式(或二者混和物)配製加環利定。然而，酸性加環利定水性製劑的顯著的和意想不到的問題是所述化合物的熱化學不穩定性。在溶液中，加環利定以一比一的比例分解成包括哌啶的多種產物。包含在酸性加環利定製劑(即pH〈7.0)中載體分子的，一般以0.％至10%的濃度，出乎意料地引起溶解度增力口(增加了溶液濃度)和化學穩定性增力口(參見實施例6)。用鹼性製劑的顯著的問題是鹼性形式加環利定的在想要遞送溶液的各種生理學可接受的賦形劑中的不溶性。也在本文中，包含在鹼性加環利定製劑(pP^7)中的載體分子，一般以0.1%至10%的濃度，引起加環利定的溶解度增加，防止了加環利定從溶液中沉澱，減少了加環利定在容器壁上的吸附，且增加了加環利定的化學穩定性。最佳製劑包括一種或多種溶解促進劑。可使用如在實施例3中描述的常規方法，確定任意包括在加環利定製劑中的具體溶解促進劑的量。應該注意到用空氣中的環境二氧化碳平衡溶液pH是一個緩慢的過程，其可能花費幾個小時。當使用碳酸氫鈉、碳酸鈉或氫氧化鈉來調節溶液pH時，這點特別值得注意。溶解促進劑改善了加環利定在賦形劑中的溶解度。在某些實施方案中，所述溶解促進劑被認為降低了製劑混合物的極性，從而促進了藥物與所述溶解促進劑的相互作用且有助於將藥物保留在溶液中。這樣的溶解促進劑的實例包括，但不限於二曱基乙醯胺、生理學可接受的多元醇(例如丙二醇、甘油)、聚乙二醇(PEG)和醇(例如乙醇)。在其它實施方案中，所述溶解^^進劑為可溶性賦形劑載體分子，其將與藥物結合。所述載體分子將結合的藥物保留在均勻的溶液中。然後，所述載體分子代謝或從患者排出，所述藥物發揮其生物效應。在本發明中有用的載體分子包括，但不限於結合疏水性分子的蛋白質(例如人或牛血清白蛋白、胎球蛋白或結合疏水性物質或防止水不溶性物質成核和沉積的任意水溶性蛋白質)；衍生的卟啉或corins;帶負電的環狀有機分子，其具有結合空腔("冠狀化合物")；藥學可接受的相轉移劑；離子交換樹脂；哌溱二酮(DKP),比如丁￡(:麗08徵11￡8@(在二賴氨酸哌。秦二酮的每個賴氨酸側鏈上單衍生的丁二醯基)、二穀氨酸DKP、二門冬氨酸DKP及其它在分子中具有淨負電荷的衍生的DKP;水溶性脂質；微團；脂質體(單層和多層嚢泡)；脂肪酸和水溶性脂質(例如膽酸、鵝脫氧膽酸(chenicacid)、脫氧膽酸、心磷脂、膽醯甘氨酸、chenylglycine、脫氧力旦醯甘氨酸、牛黃膽酸、chenyltaurine、脫氧膽醯牛磺酸)；硫苷脂(在糖的3'位上具有硫酸酯的半乳糖腦苷脂)；神經節苷脂；N-乙醯-D-神經氨酸；磷脂醯肌醇；分子中具有淨負電荷的可溶性碳水化合物(例如羧甲基纖維素)；衍生的碳水化物及這些載體的衍生物和混合物。其它有用的載體分子包括，但不限於(3-環糊精(例如磺基丁基醚環糊精，比如CAPTISOI^)和表面活性劑如12-羥基硬脂酸的聚氧乙烯酯(例如SOLUTOLHS15)和聚山梨酯，比如聚山梨酯20、聚山梨酯60和聚山梨酯80(例如TWEEN)。表面活性劑作為酸性和鹼性加環利定製劑的載體分子特別有用。認為加入表面活性劑以吸附或將加環利定部分從溶劑(例如在微團、脂質體和可溶性包衣的聚集體中)中分離，從而減少了其作為薄膜結合貯藏容器表面、粘附註射裝置元件(注射器、針、導管、抗菌過濾器、輸送泵儲器、泵送機械等)或形成可見的或不可見的微聚集體的利用率，根據尺寸、可以將某些微聚集體從溶液中沉澱出、從溶液中分離或俘獲在過濾裝置(比如抗菌過濾器)中。例如，向包含加環利定的溶液加入2-20%(w/w)CAPTISOL(CyDex,Lenexa,KS)、0.1-20%TWEEN80(聚山梨酯80,ICIAmericas)或0.1-20%SOLUTOLHS15(BASF)改善了溶解性。在室溫下，CAPTISOL、TWEEN80和SOLUTOLHS15，每克載體分子可以分別保存0.004、0.01和0.02克的加環利定^5成在溶液中(見實施例3)。在一個實施方案中，加環利定以1nM至5mM的濃度存在，聚山梨酯80(例如TWEEN80)以0.001%至30%(重量/重量[w/w])的濃度存在。一個優選的實施方案包括50iaM至5mM的加環利定和0.1%至20%(w/w)的聚山梨酯80(例如TWEEN80)。一般所述載體分子的摩爾濃度等於或高於藥物的濃度。可以在適宜的賦形劑如290-300mOsm的林格溶液中製劑加環利定和所述載體分子。在某些實施方案中，將一種或多種溶解促進劑與賦形劑和化學品組合，其可以作為成品含水凝膠或在置於組織部位後凝膠(凝固)的液體施用，所述賦形劑和化學品將形成立體剛性材料。凝膠劑可以通過將包含藥物的賦形劑和溶解促進劑與凝膠基質混合製備，所述凝膠基質比如，但不限於透明質酸、狻曱基纖維素或pleuronicacid。如此製備的凝膠將緩慢地將藥物帶入到圍繞遞送部位的生理溶液中。.本發明的製劑可包括輔料。這些包括，但不限於d-oc生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)、環糊精、單硬脂酸乙二醇酯、硬脂酸甘油酯、甘油單/二辛酸酯/癸酸酯、山嵛酸甘油酯、單油酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、棕櫚硬脂酸甘油酯、卵磷脂、泊洛沙姆188、聚乙二醇、油酸聚甘油酯、聚氧乙烯(40)硬脂酸酯、聚山梨酯20、聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、月桂酸丙二醇酯、十二烷基硫酸鈉、硬脂醯富馬酸鈉、脫水山梨醇酉旨(脫水山梨醇脂肪酸酯)、蔗糖八乙酸酯、硬脂酸及其它用於增溶或乳化水不溶性藥物的藥學可接受的輔料。上述輔料的實例包括載體分子和表面活性劑。其它上述沒有列出的可接受的輔料包括醇、二醇、甘油、礦物、蛋白質和幫助確保製劑藥學可接受的性質的添加劑。參見PharmaceuticalExcipients(DrugsandthePharmaceuticalSciences,v.94)，DavidE.Bugay，MarcelDekkerAG，Basel,1999;HandbookofPharmaceuticalExcipients,RaymondRowe,PaulSheskey，和SianOwen,Eds"APhAPublicationsFifthEdition,Washington,DC,2006。本領域才支術人員備適於在動物或人中使用的製劑。這樣的製劑將包括，但不局限於適於非腸道糹會藥的可;容性製劑。參見MarkGibson,在PharmaceuticalPreformulationandFormulation中APracticalGuidefromCandidateDrugSelectiontoCommercialDosageForm,Interpharm/CRC，BocaRaton,2004。對於治療用途，所述賦形劑可以是藥學可接受的賦形劑，比如林格溶液、乳酸化林格溶液、人造外淋巴(參見Konishi等人，1973)、等滲鹽水等。優選地，所述製劑pH為5至10,優選pH為6.5至8.5;生理學可接受的滲透壓為280至310mOsm,優選為290-300;當所述製劑淨皮製備用於中耳和內耳給藥時，優選類似於外淋巴的離子組合物。遞送至患者的製劑優選的生理學可接受的pH範圍為6.8-7.4±0.5。水性賦形劑用於體內給藥的製劑具有與液體非腸道製劑相似的組分，且其為本領域技術人員眾所周知的。內耳流體(外淋巴)的組成是獨特的，因為聲音的運動通過該流體傳輸，所以所述支載藥物的賦形劑與該流體相容是很重要。下述為藥學可接受的水性賦形劑及其組分的實例。表1tableseeoriginaldocumentpage12人外淋巴[概括的數據來自Wangemann&Schacht,1996]濃度mMoL蛋白質mg/dlNa+rCa++C廠碳酸氫根1484.21.3119211787.3來自文獻的人造外淋巴組分的一個實例為(由Konishi等人改進，ActaOtolaryng76:410-418):145mMNaCl8.4738g/L2.7mMKC10.2013g/L2.0mMMgS040.2408g/L1.2mMCaCl20.1764g/L5.0mMHEPES1.1915g/LpH7.3-7.4滲透壓(Osmolality)對於內耳給藥，所述藥物製劑的滲透壓很重要，因為毛細胞和相關支持細胞對製劑的離子強度很敏感。通過利用凝固點滲透壓力計(AdvancedInstrumentsModel3MOPlus)測定市售獲得的林格溶液(BaxterHealthcare)和乳酸化林格溶液(AbbottLaboratories)的滲透壓。測定的林格溶液和乳酸化林格溶液的滲透壓分別為288±2和255±2mOsm。測定的人外淋巴的滲透壓為300mOsm，參見Morris等人，AmJOtol10，148-9,1989。在使用前，一般通過加入氯化鈉，調節用於中耳或內耳的製劑的最終滲透壓為280至310mOsm(優選290-300)。該滲透壓範圍的安全性已經通過將適宜製備的試液直接注射至豚鼠的耳蝸證實了。液體製劑的貯藏1.加環利定的酸性或游離鹼形式的凍幹製劑加環利定或組合製劑的冷凍乾燥提供了貯藏製劑藥物的方便的方法，其使長期貯藏期的化學分解最小化。可將加環利定的酸性形式從包含填充劑的冷凍水性賦形劑中凍幹使有助於重構。填充劑的實例包括，但不限於乳糖、甘露醇、海藻糖或葡萄糖。當加環利定不與另一種治療劑組合時，用於加環利定冷凍乾燥的優選賦形劑是水。當其與另一種治療劑組合時，其以在水中冷凍乾燥所需的濃度不足以溶解形成均勻的溶液，可選擇另一種適宜的賦形劑或加入輔料以提高混合物的溶解度。這些賦形劑是本領域技術人員已知的。當所述凍千的加環利定製劑不含溶解促進劑時，這些凍幹製劑的重構賦形劑將包含溶解促進劑。然後當需要時，醫師在重構賦形劑中重構所述藥物的凍幹形式，所述賦形劑含有需要的輔料和適宜的載體分子或表面活性劑以幫助所述固體快速溶解，提供化學穩定性和將所述治療劑以特定的濃度保存在溶液中，作為加環利定酸形式的真溶液或作為酸A鹹性形式混合物的支栽混懸液或者完全的游離鹼形式。適當地調節所述重構賦形劑的pH以得到應用所需的最終期望的pH。在其它實施方案中，可以使用加環利定的鹼性形式以改善其在凍幹製劑中的化學穩定性。可以容易地通過在冷凍乾燥前將至少1當量的鹼加入到加環利定鹽酸鹽的水溶液中使其轉化成4i/性形式(例如，適宜的中和^喊包4舌，但不限於氫氧化鈉或碳酸鈉)製備該製劑。該包含藥物的溶液也可以包含通常在凍幹製劑中使用的支撐劑(cakingagents),如乳糖、甘露醇、海藻糖或葡萄糖。在冷凍乾燥前，可以加入固體輔料如環糊精以化學穩定或輔助再溶(重構)所述的凍幹的加環利定^4。使用前，可以即刻向所述凍千製劑中加入液態添加劑，比如聚山梨酯80、SOLUTOLHS15或陽離子脂質作為重構賦形劑的部分。在用於重構所述乾燥粉末的溶液例如林格溶液中可使用足量的酸，例如鹽酸，使得當所述乾燥製劑溶解時獲得期望的pH。所述重構pH將部分取決於加環利定製劑所需溶液的穩定性。如在實施例6中描述的，加環利定分解的速率在較高的pH下較慢。對於重構溶液的長時間貯藏，期望較高的pH。視需要，在遞送至預定部位前，可通過加入酸例如鹽酸來降低所述製劑的pH至生理pH，例如pH6.8至7.4。可以通過兩個腔的裝置(duallumendevice)內部的共溶劑氣流或在裝載遞送裝置前立即原位調節所述重構的凍幹製品或溶液製劑以獲得最終期望的pH和製劑。2.貯藏容器聚合物表面比如聚丙棒、聚氨基曱酸酯、聚醯亞胺和聚氯乙烯對加環利定具有明顯的親合力，其可與用於保存加環利定溶液濃度的製劑輔料和載體分子竟爭。根據本發明製備的加環利定溶液優選保存於酸洗滌的玻璃容器中，所述玻璃容器具有惰性的聚合物襯墊或帽，例如聚四氟乙烯(PTFE)。因為與上述類似的理由，期望避免所述製劑與用選擇的聚合材料製造的容器、導管、過濾器或其它裝置接觸，所述聚合材料例如聚丙烯、聚氨基曱酸酯、聚氯乙烯或矽酮橡膠。當這點是不可能時，作為所述製劑接觸面的襯墊(liners)的含氟聚合物比如PTFE的使用可有助於使加環利定的損失最小化，如可使用製劑比如納米顆粒製劑，其對加環利定具有比對在遞送藥物中使用的其它聚合物或表面活性劑更高的親合力。包括固體加環利定游離鹼的製劑本發明的其它製劑包括固體加環利定游離鹼，其為加環利定的對熱更化學穩定的形式，尤其在體溫，例如37。C。可以以固體游離鹼形式給予固體加環利定，例如，以在水性賦形劑中的混懸液或凝膠製劑(例如源自，但不限於羧甲基纖維素、hayaluronicacid和普盧蘭尼酸(pluronicacid),如上述說明製備，不同在於調節所述藥物製劑的pH以使其包含游離鹼形式的藥物而不是可溶性酸性形式或游離鹼和酸性形式的混合物)。在其它實施方案中，將固體加環利定游離^5威吸附到固體載體比如膠原海綿上或吸附到或包封在顆粒製劑比如納米顆粒製劑(例如可溶蝕的聚乳酸(polylactate)/聚羥乙酸(polyglycolate)聚合物)中，或者與經設計用於緩釋藥物的聚合材料共同製劑，所述聚合材料比如薄膜非可溶蝕性聚合基質(例如矽橡膠)，藥物穿過聚合材料遷移到表面，然後釋放到靶組織(參見下文)。固體栽體如薄膜或包衣的使用導致加環利定的緩釋，如在加環利定遷移到聚合物表面或與生理流體接觸後將其轉化成可溶性酸加成鹽形式。這樣的緩釋聚合物固體載體作為在裝置上的薄膜使用以調節藥物釋放的速率，所述裝置如塗布的植入電極、包衣顆粒或其中存在藥芯與可滲透的薄膜包衣的物質。這樣的包衣的實例包括，但不局限於矽橡膠或矽酮橡膠、聚氨基曱酸酯和聚氯乙烯。可以將固體載體，如包括固體加環利定游離^5威和可溶蝕的聚合物載體的納米顆粒，懸浮在用於治療給藥的藥學可接受的賦形劑中。納米顆粒具有穿過抗菌過濾器和容易攝入到靶細胞的特別的優點。在某些實施方案中，將固體游離^5成形式的加環利定製劑成在水性ji!武形劑中、吸附到膠原海綿，或懸浮在含水凝膠製劑中的混懸液。可以將酸形式的加環利定的水溶液例如氯化物鹽與足量的鹼比如碳酸鈉混合，以將其轉化成鹼性形式。這可在溶液中進行以形成加環利定鹼的含水混懸液，然後，將其製劑成凝膠，或者調節已經製劑成凝膠的pH為酸形式，以在凝膠內原位產生游離^5威。類似地，可在用酸性形式的加環利定浸漬後，在膠原海綿內原位製備游離鹼，然後用適宜的鹼調節pH以產生期望的內在化的、吸附的加環利定鹼負載的海綿。可選地，因為鹼性形式的加環利定可溶於有機溶劑比如乙醇、異丙醇、丙酮、二氯曱烷或二曱亞碸中，可將溶於有機溶劑中的鹼形式的加環利定溶液應用到膠原海綿上以用鹼形式的加環利定浸漬所述海綿，在蒸發溶劑後留下固體藥物。納米顆鬥立作為固體載體，納米顆粒特別有用。在注射到耳蝸前，將納米顆粒製劑穿過抗菌過濾器以確保無菌。參見，例如Prakobvaitayakit等人，AAPSPha麗SciTech4(4),E71,2003;U.S.專利6,139,870。1.材料可使用可生物降解的和不可降解的物質形成納米顆粒。參見Orive等人，CancerTherapy3，131-38，2005;Lu等人AdvDrugDelivRev56，1621-33,2004。用於納米顆粒製劑的可生物蝕解的聚合物可以由乳酸和乙醇酸製備。這衝羊的聚合物為市售獲4尋的(例如'4尋自LakeshoreBiomaterials，Birmingham,AL),並且測定的生物降解率為2-3周至12-16個月的。可以使用這樣的聚合物製備納米顆粒，其將在已知的一段時間內釋放藥物。2.納米顆粒的製造方法可以使用多種方法製備適宜粒徑的納米顆粒(例如10-1000nm)。這些方法包括汽化法，比如自由噴氣膨脹、雷射汽化、電火花腐蝕、電爆炸(electroexplosion)和化學氣相沉澱；物理方法，包括機械性磨碎(例如"pearlmilling"4支術，ElanNanosystems)、超臨界C02和溶劑替4灸後(solventdisplacement)的界面沉澱。所述溶劑替換法(solventdisplacementmethod)具有實施相對簡單的優點。通過該方法製備的納米顆粒的粒徑對聚合物在所述有機溶劑中的濃度；混合速率；和在該方法中應用的表面活性劑敏感。可以使用天然的表面活性劑，如膽酸或牛磺膽酸鹽來製備小的納米顆粒(<100nm),或者使用其作為在製劑中的增溶和穩定輔料。牛磺膽酸，由膽酸和牛磺酸形成的共軛物，為完全可代謝的磺酸表面活性劑。也已知牛磺膽酸的類似物，牛熊去氧膽酸(TUDCA)具有神經保護和抗細胞凋亡性質；參見Rodrigues等人，ProcNatlAcadSciUSA100,6087-92，2003。TUDCA為一種天然存在的膽汁酸，且其為牛磺酸和熊去氧膽鹼(UDCA)的共軛物。也可以在本發明的方法中使用其它天然存在的陰離子(例如半乳糖腦苷脂闢^酸鹽)、中性(例如乳糖基醯基鞘氨醇)或兩性離子表面活性劑(例如鞘磷脂、磷脂醯膽鹼、棕櫚醯肉鹼)來製備納米顆粒或作為增溶和化學穩定的輔料。3.混合技術當通過溶劑替換法製備納米顆粒時，500rpm或更快的攪拌速度被認為是最適宜的。在混合期間減慢溶劑交換速率生成較大的顆粒。連續流動混合器可以提供必要的湍流以確保小的粒徑。在本發明的方法中可使用以製備小的納米顆粒(1lim的小顆粒)。如果不能在直接混合時獲得適宜的納米顆粒均勻性，那麼使用SEC產生高度均勻的包含藥物的顆粒，即除去參與他們的製備的其它成分(例如溶劑和表面活性劑)。可通過旋風分離器、離心、膜濾法和通過使用其它分子篩裝置、交聯的凝膠/材料和膜按粒徑分離顆粒。其它種類固體顆粒包括，但不限於製備的顆粒，比如TECHNOSPHERE,其可在顆粒製成後製劑。可以通過治療劑包衣丁￡(:^0511￡虹@或將其製備成藥物載體均相的顆粒。根據DKP具有酸性或鹼性側鏈，可以選擇這樣的顆粒以得到在酸性條件下不溶和在中性/鹼性條件下可溶或反之亦然的顆粒。根據環境，所述顆粒可以由可溶性的、可溶蝕的或非可溶蝕的材料組成。如一個實施方案，鹼性形式的加環利定可被製劑在均相的矽橡膠或矽聚合物材料內，其在通過所述材料擴散後釋放到與生理溶液接觸的表面。可在標準獨立遞送裝置中使用該包含藥物的聚合材料或將其塗布在另一個裝置上。在另一個實施方案中，可以將固體鹼性形式的藥物製劑成具有延遲或減慢釋放藥物的包衣顆粒。在其它實施方案中，可以有濃縮藥物的藥芯儲庫，使用膜來調節藥物的釋放。加環利定和其它治療劑的薄膜組合物可以將治療劑如鹼性形式的加環利定製劑成在聚合物基質或層內的"俘獲的(entrapped)，，化合物，如可溶性溶液或者"植入物，，如在聚合物基質內的不溶性非均勻的聚集體/晶體。聚合物基質的實例包括，但不局限於矽橡膠或矽酮橡膠、聚氨基曱酸酯和聚氯乙烯。所述治療劑將通過擴散、刺激釋放(經由電荷；電泳)、機械壓(經由孔道表層加壓至擠壓藥物)或侵蝕從聚合包衣釋放，浸蝕是為了露出不能擴散到聚合物表面的治療劑。在其它實施方案中，多層膜包含內層或外層，所述內層包含純藥物或用膜覆蓋的濃縮的藥物/基質層，所述外層將調節來自內層的藥物的釋放。在考慮通過治療的性質確定的各種病症、治療效果所需的時間長度、期望的釋放速率特徵後，建立期望的釋放速率。外層可以是可溶蝕的聚合物，使開始時不釋放治療劑，直到外層被浸蝕。包衣的孔徑將通過所述聚合物包衣的交聯量來確定釋放速率。最適宜的孔徑將符合要遞送的物質的種類及其需要量。在某些實施方案中，當存在不同的環境pH或不同的電荷時，可以改變組合物的pH和聚合物膜以誘導膜孔變化以適應不同的擴散速率，所述電荷為通過裝置例如耳蝸植入物的電極串的膜處理來誘導。在某些實施方案中，通過特定設計的孔再填充最內層，以再充滿下層，並提供更長時間的釋放。使用該種類的聚合物包衣以根據治療劑提供擬零級釋放速率(pseudozeroorderrelease)幾周和幾月，直到所迷藥物被耗盡。如果這些塗層具有再填充的儲庫，則它們可用於慢性病症。不可再填充的包衣一般用於急性病症。在其它實施方案中，所述薄膜包含且同時遞送用於各種目的的多種治療劑。例如，可同時使用多種治療劑抑制耳蝸植入物植入後的感染和炎症以及耳鳴。在其它實施方案中，將薄膜在裝置上成層，其包含帶電荷的治療劑，比如酸形式的加環利定。然後可根據電極的電荷減速或減慢治療劑流出(elution)。其它治療劑本發明製備製劑，並根據施用和遞送方法單獨或與加環利定組合將治療劑給藥至耳蝸、內耳、中耳、聽覺皮層、下丘或其它適宜的部位，所述治療劑在生理學可接受的條件下具有很小的溶解度。例如，可以將其它有效的CNS藥物共同製劑以治療伴有耳鳴前庭障礙。例如，抑制炎症、免疫應答或纖維變性的藥物對與耳鳴治療劑組合可能是有益的。抗生素藥物也可以與所述耳鳴治療劑共同製劑或混合以同時獲得預防或治療感染和治療耳鳴的益處。因為該方法的侵入性，很難將多種藥物分別地遞送至患者的中耳或內耳。組合治療通過同時治療一種或多種疾病向患者提供了益處，同時使醫師更方便。下述為可以與加環利定組合的多種藥劑的實例。這些治療劑包括，但不限於用於聽力恢復的那些(例如，神經營養因子和對"f足進聽力恢復有用的其它生長因子和蛋白質)、DNA、RNA、RNAi、siRNA、成視網膜細胞瘤蛋白及口袋蛋白家族(pocketfamilyofprotein)的其它成員、具有插入有用的基因的基因治療質粒、降低耳蝸中聽覺閾值的抗纖維變性劑、用於誘導毛細胞分裂的細胞周期抑制劑拮抗劑和前列腺素類，例如但不限於迷索前列醇或拉坦前列素等等。其它的治療劑包括抗生素，用於治療癌症的藥物，抗菌藥，抗病毒藥，消炎藥如甾體類，包括但不限於曱基潑尼松龍、地塞米松、曲安奈德，抗氧劑(包括，但不限於中和或防止自由基和超氧化物類的藥劑；超氧化物歧化酶模擬物；過氧化物酶或過氧化物酶模擬物，比如依布硒；還原劑(比如二疏化物類)和抗細胞凋亡劑(比如，但不限於胱冬酶，包括胱冬酶3、9和/或12抑制劑，其被認為預防毛細胞死亡)以預防噪音、創傷和年齡依賴性聽力喪失。這些製劑也尤其適於單獨或在單一製劑中與一種或多種這些種類的藥物組合給藥NMDA受體拮抗劑至耳蝸、內耳或中耳。根據本發明，可用於治療中耳和內耳疾病的治療化合物包括目前市售的那些，如抗焦慮藥、抗抑鬱藥、選擇性5-羥色胺重攝取抑制劑(SSRI)、4丐離子通道阻滯藥、鈉通道阻滯藥、抗偏頭痛藥(例如氟苯桂"秦)、肌松藥、安眠藥和抗驚厥藥，包括抗癲癇劑。下述提供這樣的化合物的實例。抗驚厥藥抗驚厥藥包括巴比妥酸鹽(例如曱苯比妥和戊巴比妥鈉)；苯二氮萆類，比如阿普唑侖(XANAX8、蘿拉西泮、氯硝西泮、二鉀氯氮萆和地西泮(VALIUM);GABA類似物，如。塞加賓、加巴噴丁(cc25拮抗劑，NEURONTR^)和[3-羥基丙酸；乙內醯脲，比如5,5-二苯基-2,4-咪唑啉酮(苯妥英，DILANTIN)和磷苯妥英鈉；苯三。秦類，如拉莫三口秦；琥珀醯亞胺類，比如曱琥胺和乙琥胺；5H-二苯並氮革-5-曱醯胺(卡馬西平)；奧卡西平；a-正丙基戊酸鈉二聚物；非爾氨酯、左乙拉西坦、樸米酮；唑尼沙胺；託吡酯；禾口丙戊酉交4內。NMDA受體拮抗劑有許多已知的NMDA受體抑制劑，一般將其分成五類。如下所述的每個化合物包括其範圍內的活性代謝物、類似物、衍生物，在結構類似物系列(SAR)中製備的化合物及具有類似的治療作用的幾何異構體或光學異構體。NMDA受體穀氨酸結合位點的竟爭劑竟爭NMDA受體的穀氨酸結合位點的拮抗劑包括LY274614(十氬-6-(膦醯基曱基)-3-異奮啉羧酸)、LY235959[(3S，4aR,6S，8aR)-十氬-6-(膦醯基曱基)-3-異p奎啉羧酸]、LY233053((2R，4S)-rel-4-(lH-四唑-5-基-曱基)-2-哌啶羧酸)、NPC12626(a-氨基2-(2-膦醯基乙基)-環己烷丙酸)、還原的和氧化的穀胱甘肽、carbamathione、AP-5(5-膦醯基-正纈氨酸)、CPP(4-(3-膦醯基丙基)-2-哌溱-羧酸)、CGS-19755(seifotel、順-4(膦醯基曱基)-2-哌啶-羧酸)、CGP-37849((3E)-2-氨基-4-曱基-5-膦醯基-3-戊烯酸)、CGP39551((3E)-2-氨基—4-曱基-5-膦醯基-3-戊烯酸-l-乙酯)、SDZ220-581[(aS)畫a-氨基2'-氯-5-(膦醯基曱基)-[l，l'-二苯基]-3-丙酸]和S-亞硝基穀胱甘肽(nitrosoglutathione)。參見Gordon等人，2001;Ginski禾口Witkin,1994;Calabresi等人，2003;Hermann等人，2000;Kopke等人，2002;Ikonomidou和Turski,2002;Danysz和Parsons,1998。作用於NMDA受體連接的離子通道的非竟爭性抑制劑非竟爭性或無竟爭性的且作用於受體連接的離子通道的拮抗劑包括金剛烷胺、阿替加奈(CERESTAT⑧、CNS1102)、卡羅維林、右羥嗎喃、右美沙芬、富洛倫尼斯、伊波加因、氯胺酮、利多卡因、美金剛、地佐環平(MK-801)、neramexane(MRZ2/579，1，3，3，5，5-五甲基-環己烷胺)、NPS1506(delucemine,3-氟-Y-(3-氟苯基)^-曱基-苯丙胺鹽酸鹽)、苯環利定、替來他明和瑞馬西胺。參見Palmer,2001;Hewitt,2000;Parsons等人，1995;Seidman和VanDeWater,2003;Danysz等人，1994;Ikonomidou和Turski，2002;Feldblum等人，2000;Kohl和Dannhardt,2001;Mueller等人，1999;Sugimoto等人，2003;Popik等人，1994;Hesselink等人，1999。作用於NMDA受體的多胺結合位點或其附近的拮抗劑認為作用於NMDA受體的多胺結合位點或其附近的拮抗劑包括阿坎酸、蚶鹼、conantokin-G、依利羅地(SL82-0715)、氟哌啶醇、艾芬地爾、曲索羅地(CP-101,606)和Ro25-6981[(±)-(R,S)-a-(4-羥基苯基)-P-甲基-4-(苯曱基)-l-哌啶丙醇]。參見Mayer等人，2002;Kohl和Dannhardt,2001;Ikonomidou和Turski,2002;Lynch等人，2001;Gallagher等人，1996;Zhou等人，1996;1999;Lynch和Gallagher,1996;Nankai等人，1995。作用於NMDA受體的甘氨酸結合位點或其附近的拮抗劑認為作用於NMDA受體的甘氨酸結合位點或其附近的拮抗劑包括氨基環丙烷羧酸(ACPC)、7-氯犬尿烯酸、D-環絲氨酸，加維斯替奈(GV-150526)、GV-196771A(4,6-二氯-3-[(E)-(2-氧-l-苯基-3-吡咯烷亞基(pyrrolidinylidene))甲基]-lH-吲哚-2-羧酸一鈉鹽)、利可替奈(ACEA1021),MRZ-2/576(8-氯-2,3-二氫噠嗪並[4,5-b]喹啉-l,4-二酮-5-氧化物2-羥基-N,N,N-三甲基-乙銨鹽),L-701,324(7-氯-4-羥基-3-(3-苯氧基苯基)-2(lH)-喹啉酮(quinolinone))、HA-966(3-氨基-l-羥基-2-他咯烷酮)和ZD-9379(7-氯-4-羥基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯基)-1,2，5,10-四-hydropyridanizo[4,5-b]喹啉-l，10-二酮鈉鹽)。Peterson等人，2004;Danysz和Parsons,2002;Ginski和Witkin，1994;Petty等人，2004;Danysz和Parsons,1998。作用於NMDA受體的變構氧化還原調節位點的拮抗劑認為作用於變構氧化還原調節位點起作用的拮抗劑包括氧化的和還原的穀胱甘肽、S-亞硝基穀胱甘肽、硝普鈉、依布站和雙石克侖(通過其代謝物DETC-Meso和carbamathione起作用)。參見Hermann等人，2000;Ogita等人，1998;Herin等人，2001,Ningaraj等人，2001;Kopke等人，2002.某些NMDA受體拮抗劑，尤其是穀胱甘肽及其類似物(S-亞硝基穀胱甘肽和carbamathione),可與受體上的一個以上位點相互作用。CNQX(1，2,3，4-四氫-7-硝基-2，3-二氧代-6-喹噁啉腈)和DNQX(1，4-二氫-6,7-二硝基-2,3-喹噁啉二酮)結合非NMDA穀氨酸受體。可在本發明的方法中使用這些和穀氨酸受體的其它拮抗劑或激動劑。優選的是如本文公開的NMDA受體拮抗劑抑制NMDA受體，而不抑制AMPA受體。其原因是認為對AMPA受體的抑制導致了聽力損傷。相反，希望選擇性抑制NMDA受體以預防神經元的細胞凋亡、細胞程序性死亡的引發。與僅通過穀氨酸活化的AMPA受體不同，除穀氨酸外，NMDA受體需要共激動劑。用於NMDA受體的生理共激動劑為甘氨酸或D-絲氨酸。NMDA受體而非AMPA受體也結合還原的穀胱甘肽、氧化的穀胱甘肽和S-亞竭基穀胱甘肽。穀胱甘肽，y-穀氨醯基-半胱氨醯基-甘氨酸被認為是NMDA受體的穀氨酸和甘氨酸結合位點之間的橋，在兩個部位共價結合。NMDA受體的活化導致鈣離子通過連接的離子通道進入神經元並引發ca2+-秀導的細胞凋亡。細胞內釣活化NMDA受體相關的神經元形式的一氧化氮合酶(nNOS)、鈣蛋白酶、胱冬酶和其它與氧化細胞損傷有關的系統。NMDA受體的抑制將預防神經元死亡。特異性亞型的NMDA受體拮抗劑各種特定亞型的NMDA受體激動劑是已知的，並可用於本發明的方法。例如某些NMDA受體拮抗劑，如蚶鹼、argiotoxin636,Co101244(PD174494、Ro63-1908、l-[2-(4-羥基苯氧基)乙基]-4-[(4-曱基苯基)曱基4-哌啶醇]、despiramine、右美沙芬、右羥嗎喃、依利羅地、氟哌咬醇、艾芬地爾、美金剛、philanthotoxin343、Ro-25-6981([(±)-(R*，S*)-cc-(4-羥基苯基)-(3-甲基—4-(苯基甲基)-l-哌啶丙醇]),曲索羅地(CP-101,606),Ro04-5595(l-[2-(4-氯苯基)乙基]-l,2,3,4-四氫-6-曱氧基-2-曱基-7-異喹啉醇)、CPP[4-(3-膦醯基丙基)-2-哌溱羧酸]、conantokinG、精胺和亞精胺對該受體的NR2B(NR1A/2B)亞型具有中等或高選擇性。NVP-AAMO77[[[[(1S)-l-(^溴苯基)乙基]氨基](1,2,3，4-四氫-2，3-二氧代-5-喹噁啉基)曱基]-膦酸]是一種NR2A亞型的特異性拮抗劑。參見Nankai等人，1995;Gallagher等人，1996;Lynch和Gallagher,1996;Lynch等人，2001;Zhou等人，1996;Zhou等人，1999;Kohl和Damihardt,2001,Danysz和Parsons,2002。特別有用的拮抗劑比如1-[菲-2-羰基)哌。秦-2,3-二羧酸(Feng等人，BrJPharmacol141，508-16，2004)，其對該受體的NR2D和2C亞型具有高選擇性。非NMDA受體拮抗劑的有用的治療劑根據本發明可以配製並給藥的其它有用的治療劑包括去曱替林、amytriptyline、氟西汀(PROZAC②)、鹽酸帕羅西汀(PAXE^)、曲米帕明、奧卡西平(TRILEPTAL②)、乙哌立松、迷索前列醇(一種前列腺素E,類似物)、拉坦前列素(一種前列腺素Fiti類似物)、褪黑激素和甾體(例如孕烯諾龍、曲安奈德、曱潑尼龍、及其它抗炎甾體)。根據本發明，也可以配製並給藥N-型鈣離子通道阻滯藥如Piralt(Takizawa等人，CerebBloodFlowMetab15，611-8,1995)。治療方法如上所述的加環利定對治療哺乳動物(包括家畜和同伴動物)和特別是人有用。它們尤其用於治療耳鳴，包括與神經障礙有關的耳鳴，所述神經障礙比如梅尼爾(氏)病、疼痛、焦慮、抑鬱症和偏頭痛。本發明的製劑可以通過各種方法給藥。例如，可使用蝸窗導管(roundwindowcathether)(例如美國專利6,440,102和6,648,873)。可選地，可將製劑加入紗布條用於外耳和中耳之間(例如美國專利6，120,484)或吸收到膠原海綿或其它的固體載體中(例如美國專利4，164，559)。視需要，可將本發明的製劑加入凝膠製劑中(例如美國專利4,474,752和6,911,211)。也可以通過直接注射進入中耳、內耳或耳蝸給予本發明的製劑(例如美國專利6,377,849和序列號11/337,815)。本發明的製劑也可以經由植入的泵和遞送系統穿過針直接進入中耳或內耳(耳蝸)或穿過耳蝸植入物口針電極通道或其它製備的遞送藥物的通道遞送，比如但不限於用針穿過顳骨進入耳蝸。其它選擇包括經由泵穿過塗布在多通道電極或具有特定的植入藥物遞送通道(途徑)的電極上的薄膜遞送，為此目的所述電極進入到所述薄膜。在其它實施方案中，酸性或鹼性固體加環利定可以從外部或內部植入的泵送系統的儲庫遞送。加環利定的酸性或鹼性製劑通過植入的藥物遞送系統而遞送對於向耳鳴患者的長期遞送，需要方便的遞送方法如植入的藥物遞送系統。對於在這種系統中的使用，可將藥物與適宜的輔料製劑成的均相的酸性或鹼性形式加環利定或酸性或鹼性形式的混合物，以確保化學穩定性和適當的溶液濃度。本發明的製劑也可以從電極表面上的負載藥物的薄膜或儲庫經流出在質內。加環利定可以經由在向電極充電後推動帶電的加環利定運動的電泳法從負載藥物的電極釋放。也可以將加環利定鹼壓成或製成多種固體形式，如但不限於片劑，其可以被植入或經受通過移動液流而緩慢浸蝕。然後，通過從遞送系統的儲庫中溶液或用流體浸蝕這樣的固體形式及賦形劑懸浮的納米顆粒，所述流體為從患者中抽出並用藥物飽和後返回到所述患者。將在本文公開的內容中引用的所有專利、專利申請和參考文獻特別地？1入本文作為參考。上述^Hf的內容大體上地描述了本發明。通過參照下述具體實施例可獲得更完整的理解，提供所述實施例僅僅用於說明的目的，而不意味著限制本發明的範圍。實施例1評價加環利定的化學穩定性和溶解度的方法該實施例描述了可用於測定加環利定在多種製劑中的化學穩定性和溶液濃度的分析方法。方法A(快速；僅〗叉測定加環利定的溶液濃度)使用SurveyorHPLC系統(ThermoElectron)測定加環利定。使用購自TheNestGroup(SoutUboro，MA)的GraceVydacC8MASSSPEC柱(cat#一208MS5210;S/NNE981208-3-7)用於這些分析。色譜柱保存在3(TC。在12mmx32mm自動進樣器的小瓶中(ThermoElectron,A4954-010)製備樣品，並保存在2(TC的自動進樣器中，為了使精確度最大化，使用"滿環(foll-loop)"注射的方法，其中從所述小瓶中取出80.7juL,填滿20iiL注射環。將包含在20yL的注射環中的全部樣品加樣到C8色譜柱。然後，以300jaL/分鐘的流速以梯度洗脫樣品，所述梯度洗脫液由包含0.1%(體積/體積)的三氟乙酸的水(緩衝劑A)和包含0.1%(體積/體積)的三氟乙酸的乙腈(緩衝劑B)組成。所述梯度步驟包括用100%緩沖劑A洗脫0至5分鐘；80%的緩沖劑A—20%的緩沖劑B洗脫5至15分鐘；100%的緩衝劑B洗脫15至20分鐘和100%的緩衝劑A洗脫20至25分鐘。通過使用ThermoElectronPDAUV檢測器在234nm監測柱洗脫液。可容易地檢測到在第10.0分鐘從柱洗脫的加環利定的溶液濃度為lnM。在經過UY檢測器至AQA質語儀(ThermoElectron)後，通過聯合柱洗脫液證實了加環利定的存在。通過使用質譜儀檢測在適當的洗脫位置的加環利定，所述質語儀為正離子模式，具有選擇性離子監控器(SIM),加環利定的質/荷比(m/z)為264。方法B(化學穩定性的測定同時測定加環利定和哌啶)為了監測哌咬形成，將購自AgilentTechnologies的ZorbaxSB-CN柱(25x0.46cm,5|im;PN880975，SNUSSF013866)寸呆存在30°C下，用50%緩衝劑A和50%緩沖劑B組成的混合物以150|aL/分洗脫60分鐘。緩衝劑A由包含O.l三氟乙酸的水組成，緩衝劑B由包含O.l%三氟乙酸的乙腈組成。將來自該柱的流出物與AQA單一四極杆質譜儀(ThermoElectron)和SurveyorPDA檢測器(UV監測器，ThermoElectron)連接。在232nm監測柱流出物，通過利用PDA檢測器收集在200至300nm之間的掃描。在注射在ZorbaxSB-CN柱後28.1分鐘，通過PDA檢測器檢測加環利定。也通過SIM(選擇性離子監控器)監測柱流出物，通過利用AQA質譜儀得到質/荷(m/z)比為264.46(對於加環利定，m+l)和86.16(對於哌，定，m+l)。在注射到ZorbaxSB-CN柱上後28.3分鐘，通過質譜儀檢測加環利定(m/z^264和86)。在注射到ZorbaxSB-CN柱上後16.0分鐘，通過質鐠儀檢測咪咬(僅有m/z=86)。使用PDA(UV監測器)不能檢測到哌啶。實施例2加環利定在溶液中的保存在二曱亞碸(DMSO)或水中製備加環利定(力口環利定鹽酸鹽)的儲備溶液(0.1M)。然後，將這些溶液的等分試樣(10ML)加入到10.0mL的乳酸化林才各溶液(pH6.6)、包含100uM的NaOH的乳酸化林格溶液(pH7.5)或0.1N的HCl(pH1.0)中，得到lOOiuM的最終藥物濃度。將這些藥物溶液的等分試樣轉移到自動取樣小瓶中，保存在20。C直到用HPLC分析。結果概括在表2中。表2.加環利定在多種製劑中隨時間的濃度tableseeoriginaldocumentpage26tableseeoriginaldocumentpage27如表2所示，在生理條件(例如，溶於乳酸化林格溶液溶液中，pH6.6，或者溶於已經將其pH調節至7.5的乳酸化林格溶液中)下的加環利定溶液沒有以使用的最初濃度保存加環利定。相反，在室溫下，在酸性條件(O.l的HC1,其pH為l.O，表2)下溶解的加環利定保存幾天。向小瓶中加入酸，明顯降低了加環利定在溶液中的濃度，增加了加環利定的可檢測量。這顯示出在表2中證實的加環利定的濃度隨著時間的降低主要是由於所述化合物從溶液中沉澱。如表2證實的，0.1%的DMSO延遲了溶液中加環利定的損失。較高濃度的DMSO,比如0.1-100%可進一步改善了加環利定保留在溶液中的能力。實施例3加環利定的溶解度當與水接觸時，加環利定鹽酸鹽幾乎立即生成透明溶液，至多最終濃度為550mM。然而，如果將100mM的鹽酸鹽溶液稀釋到緩衝的水溶液中，使最終濃度為1mM，則在高於pH7觀察加環利定的沉澱。圖1表示在將10juL的100mM的鹽酸鹽加入到0.99mL的緩沖溶液中後，保存在溶液中的加環利定的量。此後，將混合物仍保存在室溫下兩天。所述緩衝溶液包含100mM的氯化鈉和50mM濃度的下述緩衝物質中的一種，在pH等於緩衝液的pKa(即，緩衝液為50%的酸形式和50%的鹼形式)下的MES、Bis-Tris、MOPSO、MOPS、TAPSO、Tris、Tricine、TAPS、CHES、AMPSO或CAPSO(SigmaChemicalCompany,St.Louis，MO)通過使用從VWR獲得的SympHony玻璃甘汞微組合pH電極(Cat.No.14002-776)測定混合物的pH。在pH7.00±0.01(25°C;在20。C為7.02)、4.01±0.01(25°C;在20。C為4.00)和10.00(25°C;在20。C為10.05)下的Oakton標準參比;容液從Cole-Parmer獲得。使用這些標準pH溶液將裝有SympHony電極的Cole-ParmerModel5996-60型pH計校準至在參比溶液的0.01pH單位內。當所述混合物的pH比pH7高時，在24小時內，加環利定從溶液沉澱出並下沉到玻璃自動進樣器小瓶(ThermoElectron,A4954-010)的底部，呈可見的白色加環利定鹼沉澱物。在高於pH7下，在所述混合物中包括0.1%的SOLUPHOF^P(BASF)不會增加加環利定溶解度。在pH9.7,在存在(圖l)或不存在(沒有顯示)SOLUPHORPT，在室溫下保存二天後，保存在溶液中的加環利定的量僅僅為2.6juM,是加入的加環利定的0.26%。相反，在混合物中包括0.1%的CAPTISOL、TWEEN80或SOLUTOLHS15在高pH下保存在溶液中的加環利定的量分別增加至約14、42或96jliM(1.4、4.2或9.6%的加入的加環利定)。在37。c進行前述步驟，將樣品保存在聚丙烯小瓶(VWR弁—20170-710,2mL小瓶)中。結果顯示在圖2中。在pH6觀察到溶液中加環利定的損失，且至pH9.2時，在存在或不存在0.1%的SOLUPHORP下，保存在溶液中的加環利定的濃度僅僅為約1]LiM(加入的總加環利定的0.1%)。如前所述，向所述混合物中加入O.l%的TWEEN80或SOLUTOL⑧HS15使在高pH下保存在溶液中的加環利定的量增加到約20或32iaM的濃度(分別為加入的總加環利定的2.0或3.2%)。在37。C下將0.1%的captisoi^加入到在聚丙烯容器中的混合物中不會導致環利定的鹼性形式的明確的溶解度(沒有達到穩定水平)。因為聚丙烯降低了100mM保存在溶液的加壞利定的量，在不存在過量沉澱的加環利定下測定solutolhs15保存25mM加壞利定的能力。在0.15M氯化鈉中製備包含25iuM的加環利定溶液，通過加入碳酸氬鈉或鹽酸調節這些溶液的pH。某些這些溶液也含有0.1%的SOLUTOLHS15。在37。C下聚丙烯小瓶中培養1或3天後，測定加環利定保存在這些溶液中的濃度。圖3顯示了加環利定從溶液中的損失與pH的函數。在高於pH6下，觀察加環利定的損失，損失量隨pH的增大而增加。儘管在培養三天後的結果與在37。C培養一天後獲得的結果相似，在培養三天的樣品中，在低pH下觀察到的損失增加可能反映了由於分解的損失。儘管根據在圖2中顯示的結果，0.1o/。的SOLUTOLHS15應當能夠將25pM的加環利定保存在溶液中，但包含O.l%的SOLUTOL⑧對在這些條件下觀察到的損失沒有影響。這些結果表明在不存在過量沉澱的加環利定下，0.1%的SOLUTOLHS15不能有效地與聚丙烯小瓶竟爭加環利定。儘管輔料可以增溶加環利定(圖l和2)，但溶液遇到的其它聚合材料，如聚丙烯小瓶對加環利定具有比輔料更高的親合力。實施例4加環利定的化學穩定性通過在玻璃自動進樣器小瓶中混合含0.01mL的100mM加環利定和0.01mL的1.0M鹽酸的0.98mL的水製備一組樣品。在這些樣品中，加環利定為完全可溶的，溶液pH為2.0。通過在玻璃自動進樣器小瓶中混合含0.01mL的100mM加環利定和0.01mL的0.15M氫氧化鈉的0.97mL的水製備第二組樣品。混合後，加環利定從這些樣品中的溶液中沉澱出，加環利定鹼的懸浮液pH為10.4。然後，在54或56'C，在多個時間長度培養這兩組樣品。在54或56。C培養後，將0.01mL的1.0M鹽酸加入到包含加環利定石成的懸浮液(0.5mM過量的氫氧化鈉，pH10.4)的樣品中，將加環利定轉化成可溶性酸形式，並將這些懸浮液轉化成清澈的溶液(pH2.1)。在54或56。C培養後，使用方法B(實施例l)分析兩組樣品剩餘的加環利定和形成的哌啶。如圖4所示，鹼性形式的加環利定比酸形式的化學穩定性高200-400倍。在54°C,懸浮在1.5mM的氫氧化鈉中的1.0mM的加環利定的分解速率為0.0013天"，與之相比，在10mM的鹽酸中為0.52天"。樣品中加環利定的損失完全可以解釋為損失的每分子的加環利定按化學當量分解形成一分子的旅咬。在從5°C至56°C的培養溫度範圍內用酸形式的環利定進行類似的試驗。這些試驗的結果概括在圖5中。所述分解速度有很高的溫度依賴性。在5。C,分解速度非常慢，且很難測定，除非通過測定哌啶形成。在5。C，當通過哌咬形成來確定，分解速度為約0.0001天"，或者當通過根據Airhenius關係在較高溫度下速率的外推法確定，為0.000055天"。由於分解，加環利定(酸形式)損失10。/。的所需時間在5'C為3年，在23。C為53天，在37。C為3.8天，在56。C為3.3小時。這些數據證實了在高於體溫的較低溫度下加環利定的化學穩定性增加。為了測定在接近生理條件下加環利定的分解速率，在pH5.5、6.0或7.4的乳酸化林格溶液中製備100|LlM的加環利定。通過加入鹽酸或碳酸氫鹽鈉(0.13mM)調節這些乳酸化林格溶液溶液的pH。在37。C，在酸洗滌的玻璃自動進樣器中培養這些樣品的0.40mL等分試樣不同的時間段，然後分析剩餘的加環利定和哌啶形成。為了分析這些樣品的加環利定和哌啶，首先用二氯曱烷提取所述樣品，然後反萃取到稀鹽酸中。為了分析0.40ml的樣品，加入50juL的1.0M氫氧化鈉和0.8mL二氯曱烷。在強力混合後，使水層和二氯甲烷層分離。向0.4mL的二氯曱烷相中加入20juL的l.OM鹽酸和0.78mL的水。在強力混合後，使水層和二氯曱烷層分離，分析水層中的加環利定和哌啶。該提取步驟是除去存在於樣品中的鹽以最佳化哌啶的檢測所必需的。如圖6所示，在pH5.5和6.0下的哌啶形成的速率幾乎相等，但實質上比pH7.4的慢。表3概括了通過對在圖6中顯示的數據的一級衰變的擬合方程獲得的速率。在37。C，pH5.5或6.0，加環利定分解的速率與加環利定的酸形式的速率相當，而在pH7.4下，該速率^l為預期的酸形式的速率的62%。這說明在pH7.4和37°C下，僅僅62%的加環利定為酸形式，且說明加環利定的表觀pKA為7.6。這點還證實在較高pH的溶液中佔優勢的加環利定的游離鹼比在較低pH溶液中佔優勢的酸形式更穩定。表3.加環利定在37。C的穩定性tableseeoriginaldocumentpage30實施例5pH對加環利定分解和溶解度的影響在酸洗滌的玻璃小瓶中製備一系列包含100juM在林格溶液中的加環利定的樣品。向10.0mL的林格溶液(BaxterHealthcareCorporation)中加入10juL的0.100M加環利定鹽酸鹽和0.020、0.040、0.080或0.160mL的0.100M碳酸氫鈉。然後，在55。C培養這些樣品24小時。在55。C培養後，從每種樣品中採集0.400mL的等分試樣，且然後分析加環利定和哌。定。用二氯甲烷萃取加環利定和哌啶，然後，如在實施例4中所述反萃取至稀釋的含水酸中。在55°C，通過使用在55。C標準化的pH計測定每個樣品的pH。pH計，電極和標準與在實施例3中描述的相同。圖7表示在多種pH值下於55。C在林格溶液中培養加環利定得到的結果。在圖7中，加環利定濃度以空心圓形表示；哌啶以空心正方形表示；加環利定和哌咬的總量以實心圓表示。明顯地，按哌啶形成與加環利定的損失不等判斷，存在分解和從溶液中沉澱的加環利定的損失。由於隨著pH從7.6至8.1的增加哌。定和加環利定的濃度總量降低表明沉澱。如按哌啶形成來測定，伴隨沉澱，分解速度也隨著pH7.6至8.1降低，再次證實在較高的pH下化學穩定性增加。實施例6pH和聚山梨酯80(TWEEN80)對加環利定穩定性的影響在酸洗滌的玻璃小瓶中製備一系列包含100nM加環利定和0.3%的聚山梨酯80(TWEEN80)的林格溶液的樣品。向10.0mL的林格溶液(BaxterHealthcareCorporation)中加入10pL的100mM加環利定鹽酸鹽、0.030g的聚山梨酯80和0.02、0.04、0.08、0.16或0.32mL的100mM碳酸氬鈉。然後，在55。C培養這些樣品24小時。在55。C培養後，/人每種樣品中採集0.4mL的等分試樣，分析加環利定和哌啶。用二氯曱烷萃取加環利定和哌啶，然後，如在實施例4中所述反萃取至稀釋的含水酸中。在55。C，通過使用在55。C標準化的pH計測定每個樣品的pH。所述pH計，電極和標準與在實施例3中描述的相同。圖8表明在55°C和在多種pH值下在包含0.3%的聚山梨酯80的林格溶液中培養加環利定得到的結果。在圖8中，加環利定濃度以空心圓形表示；哌口定以空心正方形表示；加環利定和哌咬的總量以實心圓表示。不存在由於沉澱的加環利定的損失，因為加環利定的濃度或加環利定與哌啶的總量似乎與pH無關。當通過哌啶形成測定時，在0.3%的聚山梨酯80存在下，加環利定的分解也大量較少。在0.3%的聚山梨酯80存在下，乂人100jaM的加環利定中形成的哌啶的量從在pH6.7下的4.5mM至在pH8.2下的0.92mM變化。在pH值高於7下，聚山梨酯80有助於將加環利定保存在溶液中，並且大大延遲加環利定分解的速率。圖9顯示了在存在和不存在0.3%的聚山梨酯80下，根據形成的哌啶的濃度確定的加環利定分解速率的比較。在55"C,加環利定的酸形式的分解速度(參見實施例4)為0.73天"。在0.3%的聚山梨酯80存在下,加環利定的分解速率降低為在pH6.7下該速率的6.4%和在pH8.2下該速率的1.3%。相反，在不存在加入的輔料下，相對分解速率從在pH7.3下該速率的51%至在pH8.1下該速率的48%變化。聚山梨酯80明顯對抵抗加環利定的熱分解提供了保護，而且提高了在高於7的pH值下加環利定的溶解度。這些結果證實提高加環利定的鹼性形式的溶解度的試劑也增加了其化學穩定性，並且甚至在溶解度不是問題的pH範圍下也是這樣。實施例7加環利定從游離鹼形式的懸浮液中的洗脫該實施例描述了可用於測定加環利定在多種製劑中的穩定性的分析方法。為了測定加環利定游離^5鹹的懸浮液的溶液性質，將2.8mg的游離^5成粉末懸浮在連續攪拌下的玻璃小瓶中的20.0mL的乳酸化林格溶液中，加入或不力口入0.13mM的碳酸氬鈉。如在實施例3中所述，通過利用pH計監測這些溶液的pH。如在實施例1中所述，通過HPLC測定加環利定的濃度。這些溶液的平均溫度為23。C，在21。C至25。C之間變化。將從這些溶液得到的結果概括在表3中。沒有加入加環利定或碳酸氫鈉的乳酸化林格溶液的初始pH為6.7,在加入2.8mg的加環利定後，增加至7.4至7.7之間。在加入固體後，加環利定的濃度在IO天內增加至152至162"M之間的平衡濃度。包含0.13mM的碳酸氫鈉的乳酸化林格溶液的初始pH為7.4，接近生理pH，在加入2.8mg的加環利定後，增加至7.5至7.6之間。加環利定的濃度在10天內增加至73至77^M的平衡濃度。基於這些結果，給予固體加環利定鹼將導致加環利定緩釋進入溶液中，其將花費幾天至接近最終平衡濃度。在開始pH接近生理pH時，在平衡下獲得的最大濃度為約75jaM的加環利定溶液。兩周後，兩個溶液仍然保存加入的大多數初始加環利定游離鹼，呈固體懸浮液。即使在幾個月後，可見加環利定固體的量似乎沒有改變。通過兩種溶液獲得的加環利定的平衡濃度僅僅分別為加入到不加入或加入碳酸氫鈉的乳酸化林格溶液溶液中加環利定鹼總量的30%或14%。這些數據(表4)證實了給予包含加環利定游離鹼的固體製劑的適用性。表4.固體游離鹼混懸液中加環利定的洗脫tableseeoriginaldocumentpage33參考文獻系列號No.11/337,815美國專利4,164,559美國專利4,474,752美國專利6,107,495美國專利6,120,484美國專利6，139，870美國專利6,377,849美國專利6,440,102美國專利6,648,873美國專利6,911,211AgermanK，CanlonB,DuanM,ErnforsP(1999)Neurotrophins,NMDAreceptors,andnitricoxideindevelopmentandprotectionoftheauditorysystem,AnnNYAcadSci884:131-42.BugayDE(1999)PharmaceuticalExcipients(DrugsandthePharmaceuticalSciences,v.94)，MarcelDekkerAG,Basel,BasileAS，HuangJM，XieC,WebsterD，BerlinC,SkolnickP(1996)N-methyl-D-aspartateantagonistslimitaminoglycosideantibiotic-inducedhearingloss,NatureM[beta]dipine2:1338-43.。CalabresiP,CentonzeD,CupiniLM,CostaC,PisaniF,BernardiG(2003)Ionotropicglutamatereceptors:stillatargetforneuroprotectioninbrainischemiaInsightsfrominvitrostudies,NeurobiolDis12:82-8.ChenZ,UlfendahlM,RuanR,TanL，DuanM(2004)Protectionofauditoryfunctionagainstnoisetraumawithlocalcaroverineadministrationinguineapigs，HearRes197:131-136.ChenZ,UlfendahlM，RuanTanL，DuanM(2003)Acutetreatmentofnoisetraumawithlocalcaroverineapplicationintheguineapig,ActaOtolaryngol123:905-909.CostaE(1998)FromGABAAreceptordiversityemergesaunifiedvisionofGABAergicinhibition,AnnRevPharmacolToxicol38:321-350.CzuczwarSJ,PatsalosPN(2001)ThenewgenerationofGABAenhancers.Potentialinthetreatmentofepilepsy,CNSDrugs15:339-350.DanyszW,EssmannU5BresinkI,WilkeR(1994)Glutamateantagonistshavedifferenteffectsonspontaneouslocomotoractivityinrats,PharmacolBiochemBehav48:111-8.DanyszW，Parsons(1998)GlycineandN-曱基-D畫aspartatereceptors:physiologicalsignificanceandpossibletherapeuticapplications,PharmacologicalReviews50:597-664.DanyszW,ParsonsCG(2002)Neuroprotectivepotentialofionotropicglutamatereceptorantagonists,NeurotoxRes4:119-26.DuanM.AgermanK,ErnforsP,CanlonB(2000)Complementaryrolesofneuro加phin3andaN-methyl-D-aspartateantagonistintheprotectionofnoiseandaminoglycoside-inducedototoxicity,ProcNatlAcadSciUSA97:7597-602.FeldblumS,ArnaudS,SimonM，RabinO，D'ArbignyP(2000)Efficacyofanewneuroprotectiveagent,gacyclidine，inamodelofratspinalcordinjury,JNeurotrauma17:1079-93.FengB,TseHW，SkifterDA,MorleyR,JaneDE,MonaghanDT(2004)Structure-activityanalysisofanovelNR2C/NR2D-preferringNMDAreceptorantagonist:l-(phenanthrene-2-carbonyl)piperazine-2，3-dicarboxylicacid,BrJPharmacol141:508-516.GaliciR,Pi謹G,StephensDN,SchneiderHH5TurskiL(1998)TolerancetoanddependenceonAlprazolamareduetochangesinGABAAreceptorfunctionandareindependentofexposuretoexperimentalset-up，RestorNeurolNeurosci12:233-237.GallagherMJ,HuangH,PritchettDB5LynchDR(1996)Interactions-D-aspartatereceptor,JBiolChem271:9603-11.GenesteP,KamenskaJM,UngSN,HerrmannP5GoudalR,TrouillerG(1979)Determinationconformationnelledederiv[epsilon]sdelaphencyclidineenvued'unecorrelationstructure-activite,EurJMedChem14:301-308，GibsonM(2004)inPharmaceuticalPreformulationandFormulation:APracticalGuidefromCandidateDrugSelectiontoCommercialDosageForm,Interpharm/CRC,BocaRatonGinskiMJ,WitkinJM(1994)SensitiveandrapidbehavioraldifferentiationofN-methyl-D-aspartatereceptorantagonists,Psychopharmacology(Beri)114:573-82.GordonRK,NigamSV，WeitzJA，DaveJR，DoctorBP，VedHS(2001)TheNMDAreceptorionchannel:asiteforbindingofHuperzineA,JApplToxicol.21Suppl1:S47-51.GuittonMJ,WangJ,PuelJL(2004)Newpharmacologicalstrategiestorestorehearingandtreattinnitus,ActaOtolaryngol124:411-51.HansenRE,Tonsager'MW(1988)Determinationoftheregimeofrapidreactingsystemsinstopped-andsteady-flowinvestigationsbythevelocityprobemethod,JPhysChem92:2189-2196.HerinGA,DuS,AizenmanE(2001)TheneuroprotectiveagentebselenmodifiesNMDAreceptorfunctionviatheredoxmodulatorysite,J.Neurochem78:1307-14.HermannA,VargaV,JanakyR，DohovicsR,SaransaariP,OjaSS(2000)Interferenceofligandstoionotropicglutamatereceptorsinpigcerebralcorticalsynapticmembranes,NeurochemRes25:1119-24.HesselinkMB,SmoldersH，DeBoerAG,BreimerDD,DanyszW(1999)Modificationsofthebehavioralprofileofnon-competitiveNMDAreceptorantagonists,memantine,amantadineand(+)MK-801afterchronicadministration,BehavPharmacol10:85-98.HewittDJ(2000)TheuseofNMDA-receptorantagonistsinthetreatmentofpain,ClinJPain16:S73-9.IkonomidouC,TurskiL(2002)WhydidNMDAreceptorantagonistsfailclinicaltrialsforstrokeandtraumaticbraininjury,LancetNeurol1:383-6.KohlBK,DannhardtG(2001)TheNMDAreceptorcomplex:apromisingtargetfornovelantiepilepticstrategies,CurrMedChem8:1275-89.KonishiT,KelseyE(1973)Effectofpotassiumdeficiencyoncochlearpotentialsandcationcontentsoftheendolymph,ActaOtolaryngol76:410-8.K叩keRD,ColemanJK,LiuJ，CampbellKC，RiffenburghRH(2002)Candidate'sthesis:enhancingintrinsiccochlearstressdefensestoreducenoise-inducedhearingloss,Laryngoscope112:1515-32.LuY，ChenSC(2004)Microandnano-fabricationofbiodegradablepolymersfordrugdelivery,AdvDrugDelivRev56:1621-1633.MorrisAW，MorrisonGA(1989)CochleardialysisforMeniere'sdisease,Anupdate.AmJ.Otol.10:148-9.LynchDR,GallagherMJ(1996)InhibitionofN-曱methyl-D-aspartatereceptorsbyhaloperidol:developmentalandpharmacologicalcharacterizationinnativeandrecombinantreceptors,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