複合微生物飼料添加劑及其製備方法與流程

2023-12-05 07:02:21

本發明涉及生物發酵技術領域，具體涉及一種複合微生物飼料添加劑及其製備方法。

背景技術：

微生物飼料添加劑是採用農業部認可的有益微生物經發酵製成的生物製劑，是抗生素的最佳替代品。用於提高畜、禽的健康水平的人工培養菌群及其代謝產物，可調整畜、禽體內的微生態失調，保持微生態平衡。是激發動物自身有益菌種繁殖增長，同時抵制有害菌系生長的微生物製品。通過改善動物腸道菌群生態平衡而發揮有益作用，以提高動物健康水平、提高抗病能力、提高消化能力的一類產品。是有效解決，疾病泛濫、病菌耐藥、免疫能力下降、成活率降低、養殖效益下降的有效手段。是畜牧業可持續發展的動力。

微生物飼料添加劑主要包括中藥微生態製劑和益生素類製劑。中藥微生態製劑也稱為第四代益生素，性狀為潮溼粉末或養殖場自行發酵的活菌發酵液，是乳酸菌發酵中藥微生態活菌製劑。優點是活菌含量高，缺點是不耐高溫。益生素類製劑是以枯草芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌等多菌種發酵的一類微生物製劑的總稱。性狀為乾燥粉末，載體多為稻殼粉或鈣粉，產品需要經過加工、烘乾、包裝等工藝，所含活菌數量很小，多為死的菌體或休眠狀態的芽孢類菌體。優點是耐加工，可以供飼料廠使用，缺點是活菌數量少，需長期使用才有效。

技術實現要素：

本發明為了解決上述提供一種活菌數量多，耐高溫，提高飼料吸收率，促生長發育的一種複合微生物飼料添加劑。

為實現上述目的，本發明採用如下技術方案 ：

所述飼料添加劑由以下成份及其重量組分組成：德氏乳桿菌40～60份、枯草芽孢桿菌10～20份、釀酒酵母菌10～20份、酪氨酸甜菜鹼0.1～1份、6-羥基犬尿酸0.01～0.1份和寡糖5～10份。複合微生物飼料添加劑的方法，其包括以下步驟 ：採用固體發酵工藝製備德氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌 ，採用酶解法製備寡糖；德氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌以及酪氨酸甜菜鹼、6-羥基犬尿酸和寡糖進行混合加工，得到成品。

優選地，各菌種活細胞計數為 ：德氏乳桿菌 (1～10)*10 8 cfu/g，枯草芽孢桿菌(1～10)*10 9 cfu/g，釀酒酵母菌 (5～10)*10 9 cfu/g，總菌數≥ 3*10 9 cfu/g。

優選地，德氏乳桿菌的製備方法具體包括以下步驟 ：製備一級菌種 ：

德氏乳桿菌試管菌平板劃線或是稀釋塗平板，30℃恆溫培養 2～3d 得單菌落，挑取單菌落孢子接種到麩皮試管中，30℃恆溫培養 2～3d 至德氏乳桿菌長到試管底部，得到試管菌 ；製備二級菌種 ：接種試管菌到盛有麩皮培養基的錐形瓶，30℃恆溫培養 24h，翻瓶，將結塊打散繼續培養，培養至 48～60h 停止培養，得到錐形瓶菌種 ；擴大培養三級菌種 ：錐形瓶內菌種加入兩倍的滅菌水，混勻備用，接種錐形菌種到盛有麩皮培養基的培養瓶中，30℃恆溫培養 24h，扣瓶，將結塊打散繼續培養，培養至 48～60h 停止培養 ；發酵床固體發酵生產德氏乳桿菌製劑 ：投料、潤料、蒸煮滅菌、降溫、接種、厚層通風培養得到成品。

優選地，枯草芽孢桿菌的製備方法具體如下所述 ：製備一級種子：甘油管保存的菌種LB固體培養基平板劃線，37℃恆溫培養24h，得單菌落。挑單菌落到盛有 LB 液體培養基的錐形瓶中，37℃震蕩培養 12h。製備二級種子：一級種子液按照 1％接種到盛有 300mL LB 液體培養基的 500mL錐形瓶中，37℃震蕩培養 12h，備用。發酵床固體發酵生產枯草芽孢桿菌：投料→潤料→蒸煮滅菌→降溫→接種→厚層通風培養→成品，培養基主要成分為 ：麩皮，豆粕及輔料，培養基定量稱重，嚴格配比，潤料時添加的自來水體積在流量計下嚴格添加。所有設備用自來水嚴格清洗至無雜物。所有原料在蒸煮鍋內混勻，裝料後旋緊進出口蓋，蒸煮鍋以一定的轉速轉動，培養基得以翻動，通入蒸氣，達到一定溫度後保溫滅菌，保證滅菌條件 ：121℃，30min 嚴格滅菌。所有的蒸汽滅菌的控制在電腦系統實時記錄，相應的保證設施為壓力傳感器，溫度傳感器。滅菌完成後，物料傳輸到攤涼機上進行降溫。降溫後傳輸到混料機上進行接種，接種完畢運用輸送機將物料輸送到發酵床上。培養過程的管理 ：物料鋪滿發酵床後即進入培養環節，生長到一定階段物料會結塊，需通過翻曲機來進行翻料 ；在生長過程中，微生物的生長和繁殖需要氧氣及水分，發酵溫度需保持在 35～40℃左右，每個發酵床對應一個空調室來控制發酵室和物料的溫度和溼度。培養過程的結束 ：物料進行培養 24～48h 後，培養過程完成，培養完成後運用在線烘乾，通 60℃以下的熱風將物料乾燥至水分含量為 10％左右。乾燥完成後進行粉碎，檢測，包裝。

釀酒酵母菌採取固體發酵製成，具體工藝如下 ：一級種製備：甘油管保存菌種 MRS 固體平板劃線，37℃恆溫培養 24h，得單菌落。挑取單菌落到盛有 MRS 液體培養基的 PA 瓶中，37℃靜置培養 12h。二級種製備：一級種子液按照1％接種到盛有300mL MRS液體培養基的500mL錐形瓶中，37℃靜置培養 12h，備用。淺盤發酵：按照 1～5％接種量將二級種子液均勻接種於釀酒酵母菌固體發酵培養基中，培養基裝於不鏽鋼淺盤中，厚度 6-8cm。37℃靜止發酵 36～48h，45-50℃烘乾粉碎，100 目過篩得成品。優選地，所述固體發酵工藝採取的培養基包括麩皮培養基以及釀酒酵母菌固體發酵培養基。優選地，所述麩皮培養基包括麩皮、玉米芯、豆粕、酒糟、磷酸二氫鉀以及水，其質量比為 16 ∶ 2 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 0.1 ∶ 25。優選地，所述釀酒酵母菌固體發酵培養基包括麩皮、玉米粉、豆粕、無機鹽、磷酸鹽以及水，其質量比為 60 ∶ 20 ∶ 20 ∶ 1 ∶ 0.5 ∶ 500。優選地，所述複合微生物飼料添加劑應用於畜禽養殖業。

本發明的一種複合微生物飼料添加劑，其包括德氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌以及寡糖，能夠抑制有害菌的繁殖，使腸內菌群保持平衡；產生消化酶，能夠合成維生素可以產生澱粉酶和蛋白酶等消化酶以及維生素B群；能夠增強免疫作用，通過刺激腸道內免疫系細胞，增加局部抗體的形成，從而增加巨噬細胞活性。微生物飼料添加劑可使肝臟內大量蓄集有增強免疫作用的維生素A；還能優化生態環境。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明的原理和特徵進行描述，所舉實例只用於解釋本發明，並非用於限定本發明的範圍。

實施例1：

一種複合微生物飼料添加劑，由以下質量分數的原料組成 ：德氏乳桿菌 60 份，枯草芽孢桿菌 20 份，釀酒酵母菌 15 份，寡糖 5 份。

複合微生物飼料添加劑中各菌種活細胞計數為 ：德氏乳所述飼料添加劑由以下成份及其重量組分組成：德氏乳桿菌40～60份、枯草芽孢桿菌10～20份、釀酒酵母菌10～20份、酪氨酸甜菜鹼0.1～1份、6-羥基犬尿酸0.01～0.1份和寡糖5～10份。複合微生物飼料添加劑的方法，其包括以下步驟 ：採用固體發酵工藝製備德氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌 ，採用酶解法製備寡糖；德氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌以及酪氨酸甜菜鹼、6-羥基犬尿酸和寡糖進行混合加工，得到成品，酪氨酸甜菜鹼、6-羥基犬尿酸通過寡糖具有保活菌種的作用，明顯提高活菌數量，從而提高飼料的利用率，在一定程度上提高了飼料效果，其中寡糖具有增強動物免疫力防傳染病的作用。 優選地，各菌種活細胞計數為 ：德氏乳桿菌 (1～10)*10 8 cfu/g，枯草芽孢桿菌(1～10)*10 9 cfu/g，釀酒酵母菌 (5～10)*10 9 cfu/g，總菌數≥ 3*10 9 cfu/g。

優選地，德氏乳桿菌的製備方法具體包括以下步驟 ：製備一級菌種 ：

德氏乳桿菌試管菌平板劃線或是稀釋塗平板，30℃恆溫培養 2～3d 得單菌落，挑取單菌落孢子接種到麩皮試管中，30℃恆溫培養 2～3d 至德氏乳桿菌長到試管底部，得到試管菌 ；製備二級菌種 ：接種試管菌到盛有麩皮培養基的錐形瓶，30℃恆溫培養 24h，翻瓶，將結塊打散繼續培養，培養至 48～60h 停止培養，得到錐形瓶菌種 ；擴大培養三級菌種 ：錐形瓶內菌種加入兩倍的滅菌水，混勻備用，接種錐形菌種到盛有麩皮培養基的培養瓶中，30℃恆溫培養 24h，扣瓶，將結塊打散繼續培養，培養至 48～60h 停止培養 ；發酵床固體發酵生產德氏乳桿菌製劑 ：投料、潤料、蒸煮滅菌、降溫、接種、厚層通風培養得到成品。

優選地，枯草芽孢桿菌的製備方法具體如下所述 ：製備一級種子：甘油管保存的菌種LB固體培養基平板劃線，37℃恆溫培養24h，得單菌落。挑單菌落到盛有 LB 液體培養基的錐形瓶中，37℃震蕩培養 12h。製備二級種子：一級種子液按照 1％接種到盛有 300mL LB 液體培養基的 500mL錐形瓶中，37℃震蕩培養 12h，備用。發酵床固體發酵生產枯草芽孢桿菌：投料→潤料→蒸煮滅菌→降溫→接種→厚層通風培養→成品，培養基主要成分為 ：麩皮，豆粕及輔料，培養基定量稱重，嚴格配比，潤料時添加的自來水體積在流量計下嚴格添加。所有設備用自來水嚴格清洗至無雜物。所有原料在蒸煮鍋內混勻，裝料後旋緊進出口蓋，蒸煮鍋以一定的轉速轉動，培養基得以翻動，通入蒸氣，達到一定溫度後保溫滅菌，保證滅菌條件 ：121℃，30min 嚴格滅菌。所有的蒸汽滅菌的控制在電腦系統實時記錄，相應的保證設施為壓力傳感器，溫度傳感器。滅菌完成後，物料傳輸到攤涼機上進行降溫。降溫後傳輸到混料機上進行接種，接種完畢運用輸送機將物料輸送到發酵床上。培養過程的管理 ：物料鋪滿發酵床後即進入培養環節，生長到一定階段物料會結塊，需通過翻曲機來進行翻料 ；在生長過程中，微生物的生長和繁殖需要氧氣及水分，發酵溫度需保持在 35～40℃左右，每個發酵床對應一個空調室來控制發酵室和物料的溫度和溼度。培養過程的結束 ：物料進行培養 24～48h 後，培養過程完成，培養完成後運用在線烘乾，通 60℃以下的熱風將物料乾燥至水分含量為 10％左右。乾燥完成後進行粉碎，檢測，包裝。

釀酒酵母菌採取固體發酵製成，具體工藝如下 ：一級種製備：甘油管保存菌種 MRS 固體平板劃線，37℃恆溫培養 24h，得單菌落。挑取單菌落到盛有 MRS 液體培養基的 PA 瓶中，37℃靜置培養 12h。二級種製備：一級種子液按照1％接種到盛有300mL MRS液體培養基的500mL錐形瓶中，37℃靜置培養 12h，備用。淺盤發酵：按照 1～5％接種量將二級種子液均勻接種於釀酒酵母菌固體發酵培養基中，培養基裝於不鏽鋼淺盤中，厚度 6-8cm。37℃靜止發酵 36～48h，45-50℃烘乾粉碎，100 目過篩得成品。優選地，所述固體發酵工藝採取的培養基包括麩皮培養基以及釀酒酵母菌固體發酵培養基。優選地，所述麩皮培養基包括麩皮、玉米芯、豆粕、酒糟、磷酸二氫鉀以及水，其質量比為 16 ∶ 2 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 0.1 ∶ 25。優選地，所述釀酒酵母菌固體發酵培養基包括麩皮、玉米粉、豆粕、無機鹽、磷酸鹽以及水，其質量比為 60 ∶ 20 ∶ 20 ∶ 1 ∶ 0.5 ∶ 500。優選地，所述複合微生物飼料添加劑應用於畜禽養殖業。

實施例2

一種複合微生物飼料添加劑，由以下質量分數的原料組成 ：德氏乳桿菌 50 份，枯草芽孢桿菌 20 份，釀酒酵母菌 20 份，寡糖 10 份。

複合微生物飼料添加劑中各菌種活細胞計數為 ：德氏乳桿菌 4*10 8 cfu/g，枯草芽孢桿菌 10*10 9 cfu/g，釀酒酵母菌 5*10 9 cfu/g，總菌數 3*10 9 cfu/

實施例 3

一種複合微生物飼料添加劑，由以下質量分數的原料組成 ：德氏乳桿菌 55份，枯草芽孢桿菌 15份，釀酒酵母菌 20份，寡糖 10份。

複合微生物飼料添加劑中各菌種活細胞計數為 ：德氏乳桿菌 5*10 8 cfu/g，枯草芽孢桿菌 9*10 9 cfu/g，釀酒酵母菌 10*10 9 cfu/g。

對上述實施例 1-3 所得複合微生物飼料添加劑分別進行效果測試，投料對象是 22

日齡健康斷奶的仔豬，共 100 頭，隨機分為 4 組，每組 25 頭。對照組餵全價配合飼料 ；實驗組 1 餵添加實施例 1 複合微生物飼料添加劑的配合飼料 ；實驗組 2 餵添加實施例 2 複合微生物飼料添加劑的配合飼料 ；實驗組3餵添加實施例3複合微生物飼料添加劑的配合飼料。全都不進行抗生素等藥物的防控，日糧及其他飼養管理方法完全相同，飼餵 30d，結果如表1所示。由表可知，飼餵本發明公布的複合微生物飼料添加劑能顯著提高豬的免疫力及抗病力，同時對豬的日增重效果明顯，這大大節約了養豬業的生產成本。

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注 ：腹瀉率＝ { 總腹瀉次數 /( 試驗豬頭數 * 試驗天數 )}*100％

最後，尚需注意的是，以上列舉的僅是本發明的幾個具體實施例。顯然，本發明不限於以上實施例，還可以有許多變形。本領域的普通技術人員能從本發明公開的內容直接導出或聯想到的所有變形，均應認為是本發明的保護範圍。