一種斷奶仔豬複合益生菌飼料添加劑及應用的製作方法

2023-07-22 08:53:31 2

本發明屬於畜牧業動物營養技術研究領域，涉及一種以嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌為添加劑的複合益生菌飼料配方，更具體的說是一種提高斷奶仔豬生長性能和免疫力等方面的應用。

背景技術：

抗生素類生長促進劑是通過幹擾細胞壁的結構物質肽聚糖的生物合成從而抑制細菌的繁殖。目前，養殖業中由於抗生素濫用造成的細菌耐藥性、藥物殘留、動物免疫力下降等問題已嚴重影響了我國的畜產品質量安全，亦給經濟增長帶來了極大損失。近年來，保障仔豬健康、提高其免疫力等方面逐漸成為豬營養與飼料研究領域的熱點和難點，飼料添加劑的研究也正在向著無殘留、無耐藥性和對人類健康和環境無危害的方向發展。飼料添加劑嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌因為其特有的多功能性、益生作用及不易產生耐藥性等優點在動物生產中被廣泛應用。

嗜酸乳桿菌屬於乳酸菌類微生態製劑，主要存在小腸中，釋放乳酸、乙酸和一些對有害菌起作用的抗生素，通過競爭營養物質，抑制腸道不良微生物增殖；具有為動物機體提供營養物質及多種酶類，促進動物消化吸收，增強機體免疫力等功能。枯草芽孢桿菌具有調節腸道微生態平衡、促進消化吸收、提高飼料利用率、增強動物免疫力等功能。嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌作為外源益生菌具有無汙染、無有害殘留、適合在腸道生存等特性，且二者具有相似的生物學特性，因而逐漸作為抗生素替代品之一被越來越廣泛地應用於畜牧業養殖生產中。

查閱近年來資料以及結合實際情況，表明：斷奶仔豬營養不僅是養豬業的熱點，也是難點，仔豬生長性能和免疫力這一領域的創新性有待於提高。通過嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌調節機體的營養物質的消化吸收和增強免疫球蛋白表達等功能，我們研究了一種斷奶仔豬複合益生菌飼料添加劑，以此來改善仔豬生長性能和免疫力，在一定程度上提高養殖業的經濟效益。

技術實現要素：

本發明的一個目的是公開了一種斷奶仔豬複合益生菌飼料添加劑及應用。

本發明的另一個目的是公開了所配製的飼糧在斷奶仔豬生長性能、血液T淋巴細胞亞群和血清豬瘟病毒抗體方面的應用效果。

為實現上述目的，本發明公開了如下的技術內容

一種斷奶仔豬複合益生菌飼料添加劑，其特徵在於在飼料原料中使用嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌飼料添加劑，進行合理配製日糧，由下述重量份數的原料組成：

玉米58-65 豆粕16-24 乳清粉2-5

魚粉4-8 小麥麩1-5 葡萄糖1-3

酸化劑0.1-0.5 磷酸氫鈣0.5-1.5 石粉0.5-1.2

食鹽0.1-0.6 L賴氨酸鹽酸鹽0.1-0.8 DL-蛋氨酸0.1 -0.7

蘇氨酸0.1-0.7 仔豬預混料1-4

嗜酸乳桿菌添加劑0.001-0.01（凍乾粉中活菌含量為1×109CFU/g，飼糧中濃度為1×104~1×105CFU/g）

枯草芽孢桿菌添加劑0.001-0.01（凍乾粉中活菌含量為1×109CFU/g，飼糧中濃度為1×104~1×105CFU/g）。

其中所述的仔豬預混料是指每千克預混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。

本發明所述酸化劑指的是安徽華揚農牧科技有限公司產品，主要成分是乳酸、正磷酸、檸檬酸、富馬酸、甲酸。

本發明所述的斷奶仔豬配合飼料的製備方法：將玉米、豆粕兩種原料粉碎，其他原料均不需要粉碎，按照重量比例分別進行稱量，在小型混合機中混勻即可。

本發明一個優選的配方（重量份數）：

玉米62.698 豆粕18 乳清粉4.5

魚粉4 小麥麩4 葡萄糖3

酸化劑0.4 磷酸氫鈣1.1 石粉0.65

食鹽0.3 L-賴氨酸鹽酸鹽0.15 DL-蛋氨酸0.1

蘇氨酸0.1 仔豬預混料1

嗜酸乳桿菌添加劑0.001（飼糧中嗜酸乳桿菌濃度為1 × 104 CFU/g）

枯草芽孢桿菌添加劑0.001（飼糧中枯草芽孢桿菌濃度為1×104 CFU/g）；

其中所述的仔豬預混料是指每千克預混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。

本發明另一個優選的配方（重量份數）：

玉米62.23 豆粕17 乳清粉4.5

魚粉4 小麥麩5 葡萄糖3.5

酸化劑0.4 磷酸氫鈣1.1 石粉0.65

食鹽0.3 L-賴氨酸鹽酸鹽0.1 DL-蛋氨酸0.1

蘇氨酸0.1 仔豬預混料1

嗜酸乳桿菌添加劑0.01（飼糧中嗜酸乳桿菌濃度為1 × 105 CFU/g）

枯草芽孢桿菌添加劑0.01（飼糧中枯草芽孢桿菌濃度為1×105 CFU/g）；

其中所述的仔豬預混料是指每千克預混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。

本發明進一步公開了斷奶仔豬複合益生菌飼料添加劑在作為提高斷奶仔豬生長性能和免疫力中的應用。試驗指標：斷奶仔豬的平均日增重（ADG）、平均日採食量（ADFI）和料重比（F/G）、全血中T淋巴細胞亞群CD4＋、CD8＋的比例及CD4＋/CD8＋的比值、血清中豬瘟病毒（CSFV）抗體阻斷率，從而說明對仔豬免疫力的影響。

本發明的斷奶仔豬複合益生菌飼料添加劑試驗結果表明：

（1）與對照組相比，試驗6組日糧中添加一定量的嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌，顯著（P＜0.05）提高了仔豬的ADG、ADFI，顯著（P＜0.05）降低了F/G，表明該飼料配方能促進斷奶仔豬營養物質的吸收，有效提高斷奶仔豬的生長性能；

（2）與對照組相比，試驗6組日糧中添加嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌，顯著提高全血中CD4＋/CD8＋比值，極顯著（P＜0.01）提高血清中CSFV抗體阻斷率，表明這種飼料添加劑能有效改善斷奶仔豬健康狀況，提高斷奶仔豬免疫力。

為了更進一步說明本發明的積極效果，提供如下的試驗：

1．試驗動物及分組

採用單因子試驗設計，選取體重7.47 ± 0.62 kg的健康「杜×長×大」三元雜交斷奶仔豬168頭，臨床健康、發育正常，隨機分為7個處理，每個處理分為4個重複，每個重複6頭豬。7個處理組分別飼餵：

1）對照組：基礎飼糧（不含菌）；

2）試驗2組：基礎飼糧＋0.001嗜酸乳桿菌添加劑（濃度為1 × 104 CFU/g）；

3）試驗3組：基礎飼糧＋0.001枯草芽孢桿菌添加劑（濃度為1 × 104 CFU/g）；

4）試驗4組：基礎飼糧＋0.0005嗜酸乳桿菌添加劑（濃度為0.5 × 104 CFU/g）＋0.0005枯草芽孢桿菌添加劑（濃度為0.5 × 104 CFU/g）；

5）試驗5組：基礎飼糧＋0.001嗜酸乳桿菌添加劑（濃度為1 × 104 CFU/g）＋枯草芽孢桿菌添加劑0.001（濃度為1 × 104 CFU/g）；

6）試驗6組：基礎飼糧＋0.01嗜酸乳桿菌添加劑（濃度為1 × 105 CFU/g）＋0.01枯草芽孢桿菌添加劑（濃度為1 × 105 CFU/g）；

7）試驗7組：基礎飼糧＋0.02嗜酸乳桿菌添加劑（濃度為2 × 105 CFU/g）＋0.02枯草芽孢桿菌添加劑（濃度為2 × 105 CFU/g）。試驗期內隨時觀察中毒表現及死亡情況。

嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌為市售產品。

2．基礎飼糧配方及營養水平

根據NRC（1998）配製豬基礎日糧配方及營養水平如表1所示；

表1 基礎飼糧組成及營養水平（飼餵基礎）

a 每千克預混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。

b 根據NRC（1998）飼料成分表計算。

3．試驗規程

試驗在一個大型商品豬場進行，試驗期14天。飼餵、管理、免疫按豬場規定程序進行。飼餵2周後，從生長性能最佳的處理組的每個重複組中隨機選取3頭斷奶仔豬採血，進行血液指標（CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋和Blocking rate）分析。整個試驗過程中觀察仔豬的健康狀況，記錄死、淘仔豬以及腹瀉、用藥情況。

4．測定指標

血液指標測定：試驗結束後，仔豬通過前腔靜脈採兩管血，採血後，一管採用武漢博士得生物工程公司的SABC免疫組織化學染色試劑盒方法，測定全血中T淋巴細胞亞群CD4＋、CD8＋的比例及CD4＋/CD8＋的比值；另一管立刻將血液靜置1h後，3000r/min離心10min，吸取上清液，-20℃保存待檢。使用美國IDEXX豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒測定抗體阻斷率（Blocking rate）。

5．統計分析

採用SAS統計軟體下的Compare Means模塊中的One-Way ANOVA進行方差分析，並採用Duncan’s多重比較進行組間差異顯著性檢驗，P<0.05為差異顯著。

本發明公開的斷奶仔豬複合益生菌飼料添加劑在斷奶仔豬飼料中的應用效果，主要包括：

（1）生長性能：

表2不同劑量的嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌對斷奶仔豬生長性能的影響

註：同行之間肩注，無字母或小寫字母相同表示差異不顯著（P＞0.05），小寫字母不同表示差異顯著（P＜0.05）。下表同。

結果：

①由此可知，試驗2組和試驗3組的ADG顯著（P＜0.05）高於對照組；試驗4組的ADG顯著（P＜0.05）高於試驗2組和試驗3組；試驗2組、試驗3組和試驗4組的ADFI和F/G與對照組相比，差異均不顯著（P＞0.05）。

因此，單獨添加嗜酸乳桿菌或枯草芽孢桿菌均能促進斷奶仔豬的平均日增重，且試驗4組複合添加後，對ADG的影響更明顯；

②試驗6組的ADG顯著（P＜0.05）高於試驗4組、試驗5組和試驗7組；試驗6組的ADFI顯著（P＜0.05）高於試驗5組和試驗7組；試驗6組的F/G顯著（P＜0.05）低於試驗5組和試驗7組；試驗5組和試驗7組的ADG、ADFI和F/G均差異不顯著（P＞0.05）。

與對照組相比，試驗5組即可對仔豬的生長性能有顯著（P＜0.05）改善，綜合考慮飼餵效果和成本因素，試驗6組為最佳添加量。

結論：因此，此益生菌複合添加劑中嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌添加量範圍均為0.001~0.01（飼糧中濃度為1 × 104 CFU/g~1 × 105 CFU/g）。

（2）血液指標：

①對照組：基礎飼糧（不含益生菌添加劑）；

②試驗6組：基礎飼糧＋0.01嗜酸乳桿菌添加劑（濃度為1 × 105 CFU/g）＋0.01枯草芽孢桿菌添加劑（濃度為1 × 105 CFU/g）；

表3 對血液指標的影響

註：同行肩注小寫字母不同表示差異顯著P<0.05，肩注大寫字母不同表示差異極顯著P0.05。**表示P<0.01。

由表3試驗數據結果表明：

（1）T淋巴細胞亞群是反映機體內細胞免疫功能正常與否的重要指標，當CD4＋/CD8＋比值維持在較高水平時，說明機體處於較高的免疫狀態，試驗6組的CD4＋/CD8＋比值顯著高於對照組，因此，該複合益生菌飼料添加劑能提高仔豬免疫力。

（2）與對照組相比，試驗6組日糧中添加嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌，極顯著（P＜0.01）提高了豬瘟病毒的抗體阻斷率。因此，該複合益生菌飼料添加劑有助於斷奶仔豬病毒抗體的產生，從而提高仔豬免疫力。

本發明對以嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌為飼料添加劑的飼料配方進行了安全性試驗，其方法如下：

（1）步驟：

材料和方法：選擇28日齡，7.52±0.47 kg斷奶的「杜×長×大」仔豬6頭，臨床健康、發育正常，飼養於專用代謝籠中，試驗期2周。試驗期內隨時觀察中毒表現及死亡情況。

（2）飼餵的仔豬基礎飼料原料組成：

包括玉米62.66、豆粕19、乳清粉4.7、魚粉4、小麥麩3.45、葡萄糖3、酸化劑0.3、磷酸氫鈣0.6、石粉0.6、食鹽0.3、L-賴氨酸鹽酸鹽0.1、DL-蛋氨酸0.1、蘇氨酸0.15、仔豬預混料1、嗜酸乳桿菌0.02（飼糧中活菌濃度為2 × 105 CFU/g）、枯草芽孢桿菌0.02（飼糧中活菌濃度為2 × 105 CFU/g）。

結果：給斷奶仔豬飼餵上述試驗飼糧，連續飼餵14天，未見明顯中毒現象，觀察期內無死亡，隨機屍檢其中一頭仔豬，各主要臟器未見明顯異常。

（3）結論：

斷奶仔豬日糧中添加0.02%的嗜酸乳桿菌（飼糧中濃度為2 × 105 CFU/g）和0.02%的枯草芽孢桿菌（飼糧中濃度為2× 105 CFU/g）飼餵仔豬，飼餵效果安全。

具體實施方式

通過以下實施例對本發明作一步說明，但不作為本發明的限制。本發明的實施例中所述的重量份數原料指的是克、公斤或噸，可根據生產實際的需要加以調整。本發明所用到的各種原料例如：玉米、豆粕、乳清粉、小麥麩、磷酸氫鈣、石粉、食鹽、L-賴氨酸鹽酸鹽、DL-蛋氨酸、蘇氨酸、酸化劑、預混料、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌等對外均有售；其中下面的產品均有市售：

酸化劑指的是安徽華揚農牧科技有限公司產品；

乳清粉指的是天津市升騰飼料有限公司產品；

仔豬預混料指的是正大預混料（天津）有限公司；

豆粕指的是中糧集團有限公司產品；

嗜酸乳桿菌添加劑指的是武漢遠城科技發展有限公司產品；

枯草芽孢桿菌添加劑指的是滄州市益宏動物保健品有限公司；

玉米指的是天津玉米世紀科技有限公司產品；

魚粉指的是進口秘魯魚粉；

小麥麩和葡萄糖指的是天津市鼎聖飼料有限公司產品。

實施例1

斷奶仔豬複合益生菌添加劑配合飼料原料組成：

包括玉米61.589、豆粕20、乳清粉3.95、魚粉4、小麥麩4、葡萄糖3、酸化劑0.4、磷酸氫鈣0.7、石粉0.7、食鹽0.3、L-賴氨酸鹽酸鹽0.1、DL-蛋氨酸0.1、蘇氨酸0.15、仔豬預混料1、嗜酸乳桿菌0.01（飼糧中濃度為1 × 105 CFU/g）、枯草芽孢桿菌0.001（飼糧中濃度為1 × 104 CFU/g）。其中所述的仔豬預混料是指每千克預混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。

製備方法：將玉米、豆粕兩種原料粉碎，其他原料均不需要粉碎，按照重量比例分別進行稱量，在小型混合機中混勻即可。

實施例2

斷奶仔豬複合益生菌添加劑配合飼料原料組成：

包括玉米62.589、豆粕19、乳清粉3.95、魚粉4.5、小麥麩4、葡萄糖2.5、酸化劑0.4、磷酸氫鈣0.7、石粉0.7、食鹽0.3、L-賴氨酸鹽酸鹽0.1、DL-蛋氨酸0.1、蘇氨酸0.15、仔豬預混料1、嗜酸乳桿菌0.001（飼糧中濃度為1×104CFU/g）、枯草芽孢桿菌0.01（飼糧中濃度為1×105CFU/g）。

其中所述的仔豬預混料是指每千克預混料中含有：14,600 mg鐵，630 mg銅，410 mg 錳，10,400 mg鋅，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg煙酸，8 mg生物素。

製備方法：將玉米、豆粕兩種原料粉碎，其他原料均不需要粉碎，按照重量比例分別進行稱量，在小型混合機中混勻即可。

實施例3

一種斷奶仔豬複合益生菌添加劑配合飼料由下述重量份數的原料組成：

包括玉米63.08、豆粕18.5、乳清粉3.95、魚粉4、小麥麩4.5、葡萄糖2.5、酸化劑0.4、磷酸氫鈣0.7、石粉0.7、食鹽0.3、L-賴氨酸鹽酸鹽0.1、DL-蛋氨酸0.1、蘇氨酸0.15、仔豬預混料1、嗜酸乳桿菌0.01（飼糧中濃度為1×105CFU/g）、枯草芽孢桿菌0.01（飼糧中濃度為1×105CFU/g）。

製備方法：將玉米、豆粕兩種原料粉碎，其他原料均不需要粉碎，按照重量比例分別進行稱量，在小型混合機中混勻即可。

實施例4

採用斷奶仔豬的配合飼料飼餵斷奶仔豬的方法：

此系列配方適用斷奶仔豬，適用期為30~45天，根據情況讓仔豬自由採食即可，必須提供充足的飲水，其他按正常的飼養管理進行。

實施例5

比較試驗

常規的仔豬飼料：

方法：配製玉米-豆粕型仔豬飼糧，不添加嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌。選擇6頭7.28±0.54 kg仔豬，試驗期14天。試驗結束後對6頭仔豬進行採血。

步驟：試驗結束後，仔豬通過前腔靜脈採兩管血，採血後，一管採用武漢博士得生物工程公司的SABC免疫組織化學染色試劑盒方法，測定全血中T淋巴細胞亞群CD4＋、CD8＋的比例及CD4＋/CD8＋的比值；另一管立刻將血液靜置1h後，3000r/min離心10min，吸取上清液，-20℃保存待檢，使用美國IDEXX豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒測定CSFV的抗體阻斷率。

結果：全血中CD4＋、CD8＋和CD4＋/CD8＋分別為28.51%、27.92%和1.02，血清中CSFV的抗體阻斷率為56.34%。

日糧中添加嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌後飼料：

方法：配製玉米-豆粕型仔豬日糧，添加0.01%嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌0.01%。選擇6頭7.31±0.48kg仔豬，試驗期14天。試驗結束後對6頭仔豬進行採血。

步驟：試驗結束後，仔豬通過前腔靜脈採兩管血，採血後，一管採用武漢博士得生物工程公司的SABC免疫組織化學染色試劑盒方法，測定全血中T淋巴細胞亞群CD4＋、CD8＋的比例及CD4＋/CD8＋的比值；另一管立刻將血液靜置1h後，3000r/min離心10min，吸取上清液，-20℃保存待檢，使用美國IDEXX豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒測定CSFV的抗體阻斷率。

結果：全血中CD4＋、CD8＋和CD4＋/CD8＋分別為29.74%、24.83%和1.20，血清中CSFV的抗體阻斷率為78.79%。

結論：日糧中添加嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌能顯著提高全血中CD4＋/CD8＋的比值，顯著提高血清CSFV的抗體阻斷率。通過比較試驗說明：日糧中添加嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌能調節仔豬免疫力。