調節細胞因子活性的方法；相關藥劑的製作方法

2023-07-20 14:57:36

專利名稱：：調節細胞因子活性的方法；相關藥劑的製作方法
技術領域：
：本發明一般涉及哺乳動物細胞因子的用途。更具體地，本發明公開了IL-27受體的受體亞基。
背景技術：
：免疫系統保護個體免於傳染物，例如細菌、多細胞有機體以及癌症。該系統包括幾種類型的淋巴樣細胞和髓樣細胞，例如單核細胞、巨噬細胞、樹狀突細胞(DCs)、嗜酸性細胞、T細胞、B細胞和嗜中性粒細胞。這些淋巴樣細胞和髓樣細胞通常產生稱為細胞因子的信號蛋白。免疫應答包括炎症，即免疫細胞在身體的全身或尤其局部的積聚。作為對傳染物或異物的反應，免疫細胞分泌細胞因子，其依次調節免疫細胞增殖、發育、分化或遷移。免疫應答有時會導致病理學後果，即炎症病變。這些與免疫細胞和細胞因子有關的炎症病變包括，例如銀屑病、類風溼性關節炎、克隆(氏)病和動脈粥樣硬化(參見，例如Abbas等(eds.)(2000)CellularandMolecularImmunology，W.B.SaundersCo.，Philadelphia，PA；Oppenheim和Feldmann(eds.)(2001)CytokineReference，AcademicPress，SanDiego，CA；Kaufmann等(2001)Immunobiol.204603-613；Saurez和Schultz-Cheery(2000)Dev.Comp.Immunol.24269-283；vanReeth和Nauwynck(2000)Vet.Res.31187-213；Garcia-Sastre(2001)Virology279375-384；Katze等(2002)Nat.Rev.Immunol.2675-687；vanReeth(2000)Vet.Microbiol.74109-116；Tripp(2003)Curr.Pharm.Des.951-59)。IL-27為異二聚體細胞因子，包含兩種不同的亞基，結構類似於IL-12、IL-23和CNTF/sCNTFR異源二聚體那些。IL-27的兩個亞基為p28和EB病毒-誘導的因子3(EBI3)。IL-27由例如抗原呈遞細胞(APCs)，例如單核細胞和樹狀突細胞(DCs)的表達。表達的IL-27依次刺激CD4+未致敏的T細胞的增殖。而且，IL-27與IL-12協同作用刺激CD4+未致敏的T細胞產生幹擾素γ(IFNγ)、TH1型的細胞因子。IL-27也正向調節T-bet，一種特定地用於TH1型免疫應答的轉錄因子，與此一致，IL-27向下調節GATA-3，一種特定地用於TH2-型免疫應答的轉錄因子。脂多糖(LPS)誘導單核細胞和單核細胞衍生的DCs表達IL-27的兩個亞基，表明IL-27在天然免疫中起作用(Takeda等(2003)J.Immunol.1704886-4890；Lucas等(2003)Proc.Natl.Acad.SciUSA.10015047-15052；Pflanz等(2002)Immunity16779-790；Hashimoto等(2000)Blood962206-2214)。IL-27受體包含TCCR(也稱為WSX-1；WSX-1/TCCR)。由於受損的TH1型免疫應答，TCCR/WSX-1基因剔除(knockout)的小鼠的(TCCR/WSX-1KO小鼠)，例如減少了IFNγ生成、增加對細胞內病原體例如利什曼原蟲屬、李斯特菌屬和錐蟲屬的易感性、TH1型T細胞依賴性抗體(IgG2a亞型)生成的較低生成、對桿菌反應的異常肉芽腫生成、TH1型T細胞依賴性抗體(IgG2a亞型)生成的較低生成。結核病、結節病和克隆(氏)病為涉及TH1型應答和肉芽腫生成的病變。肉芽腫生成存在於這些疾病所涉及的位點。來自患有結核病、結節病和克隆(氏)病的患者的肉芽腫表達IL-27的兩個亞基(參見，例如Chen等(2000)Nature407916-920；Yoshida等(2001)Immunity15569-578；Trinchieri等(2003)Immunity19641-644；Larousserie等(2004)J.Pathol.202164-171；Brombacher等(2003)TRENDSImmunol.24207-212)。發現了包括IL-27的免疫途徑的微小變異，其顯然取決於對用於攻擊宿主的病原體的識別，和取決於選擇用於對感染的免疫應答研究的時間點。例如，對WSX-1/TCCR基因剔除小鼠的某些研究證實，小鼠能抗細胞內寄生物(Toxoplasma)的感染，小鼠產生了過量的IFNγ生成，而IFNγ的生成保持了正向調節，導致了致命性炎症(Chen等(2000)Nature407916-920；Villarino等(2003)Immunity19645-655；Hamano等(2003)Immunity19657-667)。根據Trinchieri等，supra，IL-27單獨在起始的TH1型應答中沒有表現出具有主要作用，但是，反而，其刺激了早期IFNγ生成，且不嚴重影響T細胞至TH1型分化。對於治療炎症和免疫病變例如銀屑病、關節炎和癌症，存在不能滿足的需要，這些病症抵抗免疫系統的根除。本發明通過提供使用IL-27或IL-27受體的方法實現了這種需要。發明概述本發明部分基於發現了IL-27或IL-27受體的激動劑或拮抗劑調節了大量免疫和炎性病症的應答。本發明提供了調節免疫病變或病症的方法，包括給藥有效量的p28、EBI3或WSX/TCCR的激動劑或拮抗劑，其中所述病變或病症包含a)皮膚的炎性病症；b)關節炎；c)克隆(氏)病；d)氣道高反應性或炎症；e)動脈粥樣硬化；或f)非由EB病毒引起的癌症或腫瘤。本發明也提供上述的方法，其中拮抗劑抑制或阻止IL-27與受體的結合，所述受體包含WSX-1/TCCR和gpl30的異二聚體結合物。在另一個方面，本發明提供上述的方法，其中皮膚的炎性病症包含銀屑病或特應性皮炎；其中關節炎包含類風溼性關節炎；骨關節炎；或銀屑病關節炎；其中氣道高反應性或炎性病變包含哮喘；變態反應；或慢性阻塞性肺疾患(COPD)。也提供其中癌症或腫瘤包含乳腺癌；結腸癌；或黑素瘤的上述的方法；以及其中激動劑抑制或改善包含癌症或腫瘤的病變的上述的方法；和其中癌症或腫瘤表達與正常、對照組織相比可見增加量的a)p28；b)EBI3；或c)或WSX-1/TCCR的上述方法。在另一方面，本發明提供了其中拮抗劑改善a)皮膚的炎性病症；b)關節炎；c)克隆(氏)病；d)氣道高反應性或氣道炎症；或e)動脈粥樣硬化的上述方法。在另一個實施方案中，本發明提供了調節免疫病變或病症的方法，其包含給藥有效量的p28、EBI3或WSX/TCCR的激動劑或拮抗劑，其中病變或病症包含a)皮膚的炎性病症；b)關節炎；c)克隆(氏)病；d)氣道高反應性或炎症；e)動脈粥樣硬化；或f)非由EB病毒引起的癌症或腫瘤；其中激動劑包含IL-27；IL-27hyperkine；p28；EBI3；或核苷酸；或其中核苷酸編碼IL-27hyperkine；p28；EBI3；p28和EBI3；WSX-1/TCCR；或WSX/1/TCCR和gpl30的上述方法；以及其中拮抗劑包含抗體特異性結合下述物質的結合組合物IL-27；p28；EBI3；WSX-1/TCCR；或gpl30和WSX-1/TCCR的結合物的上述方法；和其中來自抗體的結合組合物包含下述物質多克隆抗體；單克隆抗體；人源化抗體或其片段；Fab、Fv或F(ab′)2片段；抗體的肽模擬物；或可見標記物(detectablelabel)的上述方法。也提供其中拮抗劑包含a)衍生自WSX-1/TCCR的可溶性受體；b)小分子；或c)核苷酸的上述方法；以及其中核苷酸特異性地與編碼如下物質的多核苷酸p28；EBI3；或WSX-1/TCCR雜交的上述方法；或其中核苷酸包含反義核苷酸或小幹擾RNA(siRNA)的上述方法。本發明的另一方面是其中給藥激動劑增加了或給藥拮抗劑降低了RANKL；TNFα；TEASRL；IL-1α或β；OX40；或APRIL的表達的上述方法。也提供診斷上述免疫病症或病變的方法，包括使結合組合物與生物學樣品接觸，其中結合組合物特別地結合a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的結合物；或c)編碼p28、EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸；和測定或確定結合組合物與生物學樣品的特異性結合。而且，本發明也提供診斷上述描述的免疫病症或病變的藥盒，包括隔室和結合組合物，其特異性結合a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的結合物；或c)編碼p28、EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸。優選實施方案的詳細說明如本文(包括附加的權利要求)使用的詞語的單數形式例如″一個″和″該″包括它們相應的複數參考，除非上下文有另外明確的指示。本文引用的所有引用文獻以其與每個出版物或專利申請所特定和獨立地指出引入作為參考的同樣的範圍引入本文作為參考。I.定義當將″激活″、″刺激″和″治療″應用於細胞或受體時，其可具有相同的含義，例如激活、刺激或治療細胞或含有配體的受體，除非上下文或明確地另有指明。″配體″包含天然和合成的配體，例如細胞因子、細胞因子變體、類似物、突變蛋白質和衍生自抗體的結合組合物。″配體″也包含小分子，例如細胞因子的肽模擬物和抗體的肽模擬物。″激活″指可當受到內部機制和外部或環境因素調節時的細胞激活作用。″應答″，例如細胞、組織、器官或有機體的應答包括生物化學或生理學行為的改變，所述生物化學或生理學行為例如生物隔室的濃度、密度、粘著力或遷移、基因表達的速率或分化的狀況，其中所述改變與激活、刺激或治療相關，或者與內部機制例如遺傳表演程序相關。分子的″活性″可以描述為或指分子與配體或與受體結合後的催化活性；或者指刺激基因表達或者細胞信號傳導、分化或成熟的能力；抗原的活性，調節其它分子的活性等等。分子的″活性″也可以指調節或保持細胞與細胞之間相互作用的能力，例如粘連，或指保持細胞結構例如細胞膜或細胞骨架的活性。″活性″也可以指特定的活性，例如[催化活性]/[mg蛋白]或[免疫活性]/[mg蛋白]，生物隔室中的濃度等。″增殖活性″包括促進，必需時用於，或特別相關於，例如，正常細胞分裂，以及癌症、腫瘤、發育異常、細胞轉化、轉移和血管生成。當將″給藥″和″處理″應用於動物、人類、試驗受試者、細胞、組織、器官或體液時，指將外源性藥物、治療劑、診斷劑、化合物或組合物與動物、人類、受試者、細胞、組織、器官或體液接觸。″給藥″和″處理″也可以指，例如治療、安慰劑、藥動學、診斷學、研究和試驗方法。″細胞的處理″包含使試劑與細胞接觸，以及試劑與液體接觸，其中液體與細胞接觸。″給藥″和″處理″也指通過試劑、診斷的、結合組合物或通過其它細胞的體外和體內處理，例如對細胞的處理。當將″處理″應用於人類、牲畜或研究受試者時，指治療學處理、預防或預防性措施，指研究或診斷學應用。當將″處理″應用於人類、牲畜或研究受試者或細胞、組織或器官時，其包括L-27激動劑或IL-27拮抗劑與人類或動物受試者、細胞、組織、生理學隔室或生理學體液接觸。″細胞的處理″也包括其中IL-27激動劑或IL-27拮抗劑與IL-27受體(異源二聚體ofWSX-1/TCCR和gpl30)接觸的情形，例如在液相或膠質相，以及其中激動劑或拮抗劑與液體接觸的情形，例如其中液體與細胞或受體接觸，但是其中還沒有證實激動劑或拮抗劑與細胞或受體接觸。″結合組合物″指能與靶點結合的分子、小分子、大分子、抗體、其片段或其類似物，或可溶性受體。″結合組合物″也可指能結合到靶點的分子的結合物，例如非共價結合物，電離的分子，和共價的或非共價改性的分子，例如通過磷酸化、醯化、交聯、環化或有限的卵裂改性。″結合組合物″也可以指能結合到靶點的與穩定劑、賦形劑、鹽、緩衝液、溶劑或添加劑結合的分子。″結合″可以定義為結合組合物與靶點的關聯，其中關聯的結果是降低了結合組合物的正常布朗(氏)運動，在這種情況下，結合組合物可以溶解或懸浮在溶液中。″保守修飾的變體″應用於胺基酸和核苷酸序列。至於特定的核苷酸序列，保守修飾的變體指其編碼相同的或基本上相同的胺基酸序列的那些核苷酸，或當核苷酸沒有編碼胺基酸序列時，指基本上相同的核苷酸序列。由於遺傳密碼的簡併，大量功能性相同的核苷酸可以編碼任意給定的蛋白。至於胺基酸序列，技術人員應當認識到對核苷酸、肽、多肽或蛋白質序列的單獨取代是″保守修飾的變體″，其中該取代基取代了保守的胺基酸的編碼序列中的胺基酸或小百分比的胺基酸。提供了功能類似的胺基酸的保守置換表是本領域已知的。保守置換的一個實例為在下述組的一個胺基酸與相同組中的另一個胺基酸的互換(授予Lee等的U.S.專利No.5,767,063；Kyte和Doolittle(19S2)J.Mol.Biol.157105-132)(1)疏水性正亮氨酸、Ile、Val、Leu、Phe、Cys或Met；(2)中性親水性Cys、Ser、Thr；(3)酸性Asp、Glu；(4)鹼性Ash、Gln、His、Lys、Arg；(5)影響鏈定位的殘基Gly、Pro；(6)芳族Trp、Tyr、Phe；(7)小胺基酸類Gly、Ala、Ser.″衍生的″可用於描述，例如從母肽、寡肽或多肽例如抗體中衍生肽、寡肽或多肽的結構。在本文中，衍生的包含，例如肽結構，其中肽具有和其母體中發現的序列相同的序列的肽結構，例如其中所述肽與母體相同，但是在母體的N-末端、C-末端或N-和C-末端具有截斷，或具有截斷和融合，或僅僅具有融合。衍生的也指所述肽具有和母體中發現的相同的序列，但是具有保守的胺基酸改變，或具有缺失或插入，其中缺失或插入保持著母體內固有的肽的生物學性質。″衍生的″包含其中肽或多肽為使用母體作為起始原料合成的情形，和其中肽或多肽使用母體的結構作為引導重新合成的情形。″有效量″或″治療有效量″指足夠改善病變或生理學病症的徵兆或跡象的足夠量，或允許或促進病變或生理學病症的診斷的足夠量。對於特定的患者或牲畜對象的有效量可根據因素例如受治療的病症、患者的全面健康狀態、給藥途徑或劑量和副作用的嚴重性來改變(參見，例如授予Netti，etal.的U.S.專利No.5,888,530)。有效量可以是能避免顯著的副作用或毒性作用的最大劑量或服藥規定。該作用將導致診斷措施、參數或可測徵兆改善了至少5％、通常至少10％、更通常至少20％、最通常至少30％、優選至少40％、更優選至少50％、最優選至少60％、理想地至少70％、更理想地至少80％、最理想地至少90％、其中100％定義為正常受試者顯示的診斷參數(參見，例如Maynard等(1996)AHandbookofSOPsforGoodCliriicalPractice，InterpharmPress，BocaRaton，FL；Dent(2001)GoodLaboratoryandGoodClinicalPractice，UrchPubl.，London，UK)。根據上下文，″外源性″指在有機體、細胞或人體外生成的物質。根據上下文，″內源性″指在細胞、有機體或人體內生成的物質。″病變″指病理學狀態，或者與病理學狀態相關或易患病理學狀態的病症。″傳染性病變″指，例如由微生物、細菌、寄生蟲、病毒等引起的病變，以及對病變的不適當的、無效的病理學免疫應答。″致癌的病變″包含癌症、轉化細胞、腫瘤、displasia、血管生成、轉移等，以及對病變的不適當的、無效的病理學免疫應答。″有效量″指，例如足夠改善病變、病症或病理學狀態的徵兆或跡象的IL-27激動劑、IL-27拮抗劑、結合化合物或結合組合物的量。″有效量″也包含足夠允許或促進病變、病症或病理學狀態的徵兆或跡象的診斷的IL-27激動劑、拮抗劑或結合化合物或組合物的量。″抑制劑″和″拮抗劑″或″活化劑″和″激動劑″指抑制或活化分子分別地例如用於激活，例如配體、受體、輔助因子、基因、細胞、組織或器官。例如基因、受體、配體或細胞的調節劑為改變基因、受體、配體或細胞活性的分子，其中活性可以為其調節性質中的活化、抑制或改變。所述調節劑可以單獨起作用，或者其可利用輔助因子，所述輔助因子例如蛋白、金屬離子或小分子。抑制劑為降低、阻斷、預防、延遲活化、失活、脫敏或下調例如基因、蛋白、配體、受體或細胞的化合物。活化劑為增加、活化、促進、增加活化、致敏或上調例如基因、蛋白、配體、受體或細胞的化合物。抑制劑也可以定義為降低、阻斷或鈍化組成性活性(constitutiveactivity)失活的組合物。″激動劑″為與目標作用引起或促進目標活性增加的化合物。″拮抗劑″為與激動劑起對抗作用的化合物。拮抗劑預防、降低、抑制或中和了激動劑的活性。拮抗劑也可預防、抑制或降低靶點的組成的活性，甚至當其中不存在確定的激動劑時。為了檢查抑制作用的程度，例如，用可能的激活劑或抑制劑處理包含給定的蛋白質、基因、細胞或有機體的樣品或分析品，並與不含有抑制劑的對照樣品相比較。對照樣品，即不用拮抗劑處理，指定相對活性值為100％。當與對照品比較，活性值為約90％或更少、典型地為85％或更少、更典型地為80％或更少、最典型地為75％或更少、通常為70％或更少、更通常為65％或更少、最通常為60％或更少、典型地為55％或更少、更一般為45％或更少、最一般為40％或更少、優選為35％或更少、更優選為30％或更少、更優選為25％或更少、最優選為小於25％時，獲得了抑制作用。當與對照相比，活性值為約110％、通常至少120％、更通常至少140％、更通常至少160％、一般至少180％、更一般至少2倍、最一般至少2.5倍、通常至少5倍、更通常至少10倍、優選至少20倍、更優選至少40倍、最優選超過40倍高時，獲得了激活作用。激活作用或抑制作用的終末點可按如下檢測。例如，細胞、生理學體液、組織、器官和動物或人類受試者的激活、抑制和對治療的應答可通過終末點來檢測。該終末點可包含預定量或百分比的，例如炎症、致腫瘤性或細胞脫顆粒或細胞分泌物的標記，例如細胞因子、毒性氧或蛋白酶的釋放。該終末點可包含，例如預定量的離子流或離子轉移；細胞遷移；細胞粘著；細胞增殖；轉移的潛力；細胞分化；表型的改變，例如與炎症、細胞凋亡、轉化、細胞周期或轉移相關的基因表達的改變(參見，例如，Knight(2000)Ann.Clin.Lab.Sci.30145-158；Hood和Cheresh(2002)NatureRev.Cnacer291-100；Timmme等(2003)Curr.DrugTargets4251-261；Robbins和Itzkowitz(2002)Med.Clin.NorthAm.861467-1495；Grady和Markowitz(2002)Annu.Rev.GenomicsHum.Genet.3101-128；Bauer等(2001)Glia36235-243；Stanimirovic和Satoh(2000)BrainPathol.10113-126)。抑制作用的終末點通常為對照的75％或更少，優選為對照的50％或更少，更優選為對照的25％或更少，最優選為對照的10％或更少。通常，激活作用的終末點為對照的至少150％，優選為對照的至少兩倍，更優選為對照的至少四倍，最優選為對照的至少10倍。″表達″指由特定的基因編碼的mRNA或多肽的量度。表達的單位可以是，例如mRNA或多肽/mg蛋白分子的數量的量度，mRNA或多肽/細胞的分子數量的量度，按細胞、組織、細胞提取物或組織提取物的表達測定。表達的單位可以是相對的，例如與來自對照和試驗動物的信號的比較，或特異性地用於mRNA或多肽的試劑對非特異性用於mRNA或多肽的試劑的信號的比較。″雜交″為當在超過至少約30個核苷酸的伸展後存在至少約55％同源性，優選在超過約25個核苷酸的伸展後存在至少約75％的同源性，最優選在超過約20個核苷酸的伸展後存在至少約90％的同源性時，特異性地或選擇性的典型地發生(參見，例如Kanehisa(1984)NucleicAcidsRes.12203-213)。在嚴格條件下的雜交，例如，第一核苷酸與第二核苷酸的雜交的嚴格條件為(1)使用低離子強度和高溫度用於洗滌，例如，在50℃下使用0.015M氯化鈉/0.0015M檸檬酸鈉/0.1％十二烷基硫酸鈉；(2)在雜交期間於42℃使用變性劑，例如甲醯胺，例如，50％(vol/vol)甲醯胺和0.1％牛血清清蛋白/0.1％Ficoll(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/50mMpH6.5的磷酸鈉緩衝液和750mM氯化鈉、75mM檸檬酸鈉；(3)在42℃下，使用50％甲醯胺、5XSSC(0.75MNaCI，0.075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH6.8)、0.1％焦磷酸鈉、5XDenhardt′s溶液、超聲處理的鮭魚精液DNA(50ng/ml)、0.1％SDS和10％葡聚糖磷酸酯，並在42℃下用0.2XSSC和0.1％SDS洗滌；或者(4)在55℃下，使用10％葡聚糖磷酸酯、2XSSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)和50％甲醯胺的緩衝液體，然後在55℃下用包含0.1XSSC的EDTA進行高嚴格地洗滌(授予Botstein等的U.S.專利No.6,387,657)。用於核苷酸雜交的嚴格條件為鹽、溫度、有機溶劑和高液試劑(chaotropicagent)的函數。嚴格的溫度條件通常包括高於約30℃的溫度、更通常高於約37℃的溫度、典型地高於約45℃的溫度、更典型地高於約50℃的溫度、優選高於約65℃的溫度、更優選高於約70℃的溫度。嚴格的鹽條件將一般低於約1M、更一般低於約500mM、通常低於約400mM、更通常低於約300mM、典型地低於約200mM、優選低於約100mM、更優選低於約80mM、甚至低於約20mM。然而，參數的組合比任一單一參數的調節更為重要。(Wetmur和Davidson(1968)J.Mol.Biol.31349-370)。″免疫病症″或″免疫病變″包含，例如病理學炎症、炎性病變和自體免疫病變或疾病。「免疫病症″也指感染、持久感染和增生病症，例如癌症、腫瘤和血管生成，包括抗免疫系統根除(irradication)的感染、腫瘤和癌症。″癌性的病症″包括，例如，癌症、癌細胞、腫瘤、血管生成和癌前期的病症，例如發育異常。″炎性病變″指其中病理學結果全部或部分來自免疫抗原數量改變、遷移速率的改變或免疫系統細胞的活化改變的病變或病理狀態。免疫系統的細胞包括例如，T細胞、B細胞、單核細胞或巨噬細胞、抗原呈遞細胞(APCs)、樹狀突細胞、小神經膠質細胞、NK細胞、NKT細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性細胞、肥大細胞或任意其它與免疫學相關的特異性細胞，例如，生成細胞因子的內皮或上皮細胞。″炎性病變″指其中病理學結果全部或部分來自免疫系統的細胞數量增加和/或活化增加的病變或病理狀態，所述細胞例如T細胞、B細胞、單核細胞或巨噬細胞、肺泡巨噬細胞、樹狀突細胞、NK細胞、NKT細胞、嗜中性粒細胞嗜酸性細胞，或肥大細胞。″基因剔除″(KO)指至少部分由基因編碼的多肽表達的部分或全部降低，所述多肽例如IL-27的亞基p28或EBI3，其中基因為單一細胞、選擇的細胞和所有哺乳動物細胞內。KO也包含其中生物學功能降低，但是其中表達沒有必然地降低的實施方案，例如p28KO多肽包含其包含有嵌入性激活的肽、寡肽或多肽的表達的p28多肽。編碼序列或調整序列的破壞包含在基因剔除技術中。細胞或哺乳動物可以是″雜合的基因別除″，其中內源性基因的一個等位基因被分裂。此外，細胞或哺乳動物可以是″純合的基因剔除″，其中內源性基因的兩個等位基因被分裂。″純合的基因剔除″不意味著將基因組中的兩個等位基因的分裂限定於相同的技術(identicaltechniques)或限定於相同的結果(identicaloutcomes)。其中一個或兩個p28等位基因都被基因剔除的哺乳動物也都包括在本發明的範圍內。″配體″指，例如小分子、肽、多肽和相關的膜或膜結合的分子，或其結合物，其可以作為受體的激動劑或拮抗劑起作用。″配體″也包含非激動劑或拮抗劑的藥劑，但是其可以結合受體而不顯著地影響其生物學性質，例如信號(signaling)或粘合。而且，″配體″包括，例如通過化學或重組方法，已經改變為膜結合的配體的可溶性變體的膜結合的配體。按照常規，當配體膜結合在第一細胞上時，受體通常存在於第二細胞上。第二細胞可以與第一細胞具有相同或不同的特性。配體或受體也可以是完全細胞內的，即，其可存在於細胞溶質、細胞核或某些細胞內隔室中。所述配體或受體可以改變其位置，例如從細胞內隔室轉移到質膜的外表面。配體和受體的結合物稱為″配體受體合成物″。當配體和受體參與信號通路時，配體存在於信號通路的上遊位置，而受體存在於信號通路的下遊位置。″第一多肽鏈″和″第二多肽鏈″指沒有通過典型的肽鍵連接的兩個多肽鏈。典型地，第一多肽鏈包含N-末端和C-末端，第二多肽鏈包含另一個N-末端和另一個C-末端，即，總共有兩個N-末端和兩個C-末端。第一多肽鏈可以由第一載體編碼，同時第二多肽鏈可以由第二載體編碼。第一多肽鏈和第二多肽鏈可以由一個載體編碼，其中第一啟動子可以與第一多肽鏈連接進行，第二啟動子可以與第二多肽鏈連接進行，或者，在另一實施方案中，第一和第二多肽鏈的表達都可以與相同的啟動子操作連接。″靈敏性″，例如，受體對配體的靈敏性指配體與受體結合，在受體中，或者在特別地與受體相關的事件或分子中產生了可見的改變，例如與受體相關的蛋白的構象改變、磷酸化、與受體相關的蛋白質的性質和數量，或者由或與受體相關的基因表達的改變。提供″小分子″用於治療腫瘤和癌症的生理學和病變。″小分子″定義為具有分子量小於10kD，典型地小於2kD，優選小於1kD的分子。小分子包括，但不限於無機分子、有機分子、包含無機組分的有機分子，包含放射性原子的分子、合成的分子、肽模擬物和抗體模擬物。作治療用時，與大分子相比，小分子可以更容易地透過細胞，不易於降解、不易於誘導出免疫應答。小分子例如抗體和細胞因子的肽模擬物，以及小分子毒素已被公開(參見，例如Cassetetal.(2003)Biochem.Biophys.Res.Commun.307198-205；Muyldermans(2001)J.Biotechnol.74277-302；Li(2000)Nat.Biotechnol.181251-1256；Apostolopoulos等(2002)Curr.Med.Chem.9411-420；Monfardini等(2002)Curr.Phare.Des.82185-2199；Domingues等(1999)Nat.Struct.Biol.6652-656；Sato和Sone(2003)Biochem.J.371603-608；授予Stewart，etal的U.S.專利No.6,326,482)。″可溶性受體″為水溶性，且存在於例如細胞外液、細胞內液中，或與細胞膜有點相關的受體。可溶性受體還指改變為水溶性的受體。″結合的特異性″″結合的選擇性″等，指預定的配體和預定的受體之間的結合作用，其有助於人們區別預定的配體和其他的配體，或者有助於區別預定的受體和其他的受體。當「特異性」或「選擇性」結合指配體/受體、抗體/抗原、或其它結合對時，其指決定在蛋白質和其它生物製劑的異質群體中決定蛋白質存在的結合反應。因此，在指定的條件下，特定的配體結合到特定的受體上，而不結合樣品中存在的其它大量的蛋白質。衍生自抗體的抗原結合位點的抗體或結合組合物結合到其抗原上，所述抗原具有與其他任一抗原的親和力相比，至少兩倍大、優選至少十倍大，更優選至少20倍大，最優選至少100倍大的親和力。在一個優選的實施方案中，抗體將具有大於約1091升/mol的親和力(參見，例如Munsen等(1980)Analyt.Biochem.107220-239。II.概述本發明提供用於調節或治療大量免疫病症和病變，例如銀屑病、類風溼性關節炎、克隆(氏)病(CD)和某些癌症的方法。提供用於治療和診斷以p28、EBI3、IL-27和WSX-1/TCCR的異常表達為特徵的病變的方法。先回顧一下IL-27、IL-27受體和其亞基的生理學和免疫學。簡而言之，已經發現IL-27或其一個亞基在幹擾素γ(IFNγ)應答、T細胞分化、EB病毒誘導的病變、妊娠和潰瘍性結膜炎(但不是克隆(氏)病)中起作用。詳細來說，IL-27影響涉及TNFα-刺激的DCs的T細胞分化通路，其中TNFα-刺激的DCs接觸未致敏的T細胞，促進未致敏的T細胞分化為產生的IFNγ-的T細胞。如果在TNFα-刺激的DC與未致敏的T細胞接觸期間存在IL-27，這將促進T細胞產生IFNγ。因此，IL-27有助於未致敏的THl-類T細胞的DC-依賴性分化。IL-27也起幹擾素β(IFNβ)作用。未成熟的樹狀突細胞(DCs)和成熟的DCs表達EBI3受到大量細胞因子的刺激。這些細胞因子包括幹擾素-β(IFNβ)，IFNβ治療是在CD40L和IFNγ組合之後(參見，例如Nagai等(2003)I.Immufzol.1715233-5243；vanSeventer等(2002)J.Neuroimmunol.13360-71)。EBI3看來在EB病毒-誘導的病變中起作用。在感染EB病毒的B細胞中表達EBI3，感染導致單核細胞增多。EBI3，由Hodgki淋巴瘤衍生的細胞系表達，存在於某些鼻咽癌中，已建議對腫瘤或病毒使用EBI3來抑制對抗與EB病毒相關的腫瘤，即，某些Hodgkin淋巴瘤和鼻咽癌的免疫應答。簡而言之，已提出EBI3具有免疫抑制或TH2-促進功能(參見，例如Devergne等(1996)J.Virol.701143-1153；Niedobitek等(2002)J.Pathol.198310-316)。IL-27對妊娠起特定作用。IL-27在子宮中於懷孕開始後表達，其中該細胞因子的表達存在於子宮的NK細胞內。EBI3，IL-27的一個亞基，顯示出胎盤即分化的trophoblasT細胞表達增加，且發現在妊娠期間於血清中其量增加(參見，例如，Croy等(2003)Reproduction126149-160；Zhang等(2003)Biol.Reproduction69404-411；Devergne等(2001)Am.J.Pathol.1591763-1776)。準備一隻EBI3基因剔除小鼠(EBI3KO小鼠；EBI3-/-小鼠)來確定例如，免疫系統的生理學結果。EBI3KO小鼠表明不變的NKT細胞(iNKTcells)和CD4+T細胞中顯示了改變。EBI3KO引起iNKT細胞的數量減少。施用EBI3KO後，隨著細胞活化增加，來自脾臟的CD4+T細胞表明更多的IFNγ生成，但是IL-4減少。這些效應表明EBI3KO促進了THl-類應答，EBI3有助於TH2-型反應。EBI3KO減少了iNKT細胞的數量，按每個細胞計，也降低了iNKT細胞生成IL-4的能力。EBI3KO小鼠也開始抗結腸炎，其由對唑酮誘導的結腸炎的研究證實，唑酮誘導的結腸炎是TH2-型免疫應答介導的結腸炎模型，然而，EBI3KO小鼠不抗TH1型結腸炎模型。類似地，在另一個表明EBI3在TH2型結腸炎中起作用的研究中，EBI3已經提高了活性的潰瘍性結腸炎的表達，該結腸炎為其中TH2-型應答支配的而不是THl型應答支配的的活性克隆(氏)病(Christ等(1998)Gastroentrol.115307-313；Niedobitek等(2002)J.Patlaol.198310-316)。WSX-1/TCCR表達於CD4+T細胞、CD8+T細胞和CD19+B細胞(參見，例如Sprecher等(1998)Biochenn.Biophys.Res.Cofnmun.24682-90)。本發明確認了gpl30為IL-27受體的亞基。gpl30為受體亞基，其為IL-6細胞因子族共享的受體亞基。因此，gpl30為IL-6、白血病抑制因子(LIF)、IL-11、制瘤素M、睫狀神經營養因子CNTF)、心營養素-1(CT-1)、心營養素類細胞因子(CLC)和病毒IL-6同系物的亞基。已經證實了gpl30的可溶性變體(參見，例如Hammacher等(1998)J.Biol.Chem.27322701-22707；Hammacher等(2000)Biochem.J.34525-32；Sanchez-Cuenca等(1999)Immunol.Today2057-59；Gadient和Patterson(1999)StemCells17127-137；Peters等(1996)J.Exp.Med.1831399-1406；Muller-Newen(2003)ScienceSTKE2003，pe40)。本發明提供治療和診斷克隆(氏)病的方法。克隆(氏)病是一種慢性炎性病變，其可影響胃腸道例如小腸或結腸的任意區域。克隆(氏)病包括瘻管病變，而其它的腸道炎性病變，潰瘍性結腸炎包括淺的、潰瘍性病損。克隆(氏)病的病理學包括炎性細胞因子，例如IL-1IL-6和腫瘤壞死因子(TNF)。克隆(氏)病與潰瘍性結膜炎的區別在於克隆(氏)病通常涉及IFN、IL-2和IL-12在早期增加的TH1型反應，而後者增加TNFα和IL-18。與克隆(氏)病相比，潰瘍性結膜炎中存在IL-5、IL-6、IL-10和IL-13表達增加，其中細胞因子模式類似於TH2-型應答的變化。克隆(氏)病和潰瘍性結膜炎進一步的區別在於，在前者中黏膜區域的T細胞抗細胞凋亡，而在後者中，黏膜區域的T細胞更易於受Fas-介導的細胞凋亡。NOD2基因的突變與人類克隆(氏)病有關，然而″白細胞抗原區域基因″和MUC3基因與人類潰瘍性結腸炎有關。THl-類和TH2-型炎性腸病的機制區別由可得到的TH-1類和TH-2類小鼠模型兩者的事實突出顯示。例如，給定CD45RBhighCD4+T細胞的小鼠發展THl-細胞-介導的病變，與人類克隆(氏)病相似。炎性腸病的TH2-推動(driven)模型可使用TCRα基因剔除小鼠(參見，例如Ardizzone和Porro(2002)J.hat.Med.252475-496；Madsen(2002)Gastroentrol.1232140-2144；Bouma和STrober(2003)Nat.Rev.Immunol3521-533；Stallmach等(1998)Immunol.Todayl9438-441；Yamamoto等(2000)J.Immunol.1644878-4882；Targan等(1997)NewEngl.J.Med.3371029-1035；Simpson等(1998)J.Exp.Med.1871225-1234；Beutler(2001)Immunity155-14)。本發明提供治療和診斷銀屑病和其它皮膚炎症病變，例如接觸過敏的方法。銀屑病，一種影響全球人數約2％的常規病變，包括皮膚和膿皰區域的脫皮。在美國的銀屑病患者中，約一百萬人需要紫外療法或免疫抑制療法。約10％的銀屑病患者也發展成為銀屑病關節炎，一種使人虛弱的病症。銀屑病包括皮膚中角質化細胞的過度增殖和白細胞的浸潤。銀屑病的炎症由例如T細胞、單核細胞和巨噬細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞和抗原呈遞細胞(APCs)例如樹狀突細胞和朗氏細胞調節(參見，例如Yu等(2002)Dermatol.20494-99；Jiang等(2001)Int.J.Dermatol.40699-703).角質化細胞過度增殖部分起因於IL-2、IFNγ、TNFβ、IL-5和其它細胞因子的不適當的表達。先天反應，例如包括細菌的脂多糖(LPS；糖脂類)已經涉及銀屑病的病理學部分(參見，例如Bos和DeRie(1999)ImmunologyToday2040-46；Ellis等(2001)NewEngl.J.Med.345248-255；Bhalerao和Bowcock(1998)HumanMol.Genetics71537-1545；vandeKerkhof(2000)Clin.Exp.Dermatol.25165；Tanaka等(2000)Brit.J.Dermatol.143728-732；Nickoloff(1999)J.Clin.Invest.1041161-1164；Curry等(2003)Arch.Pathol.Lab.Med.127178-186；Travers等(1999)J.Clin.Invest.1041181-1189；Greaves和Weinstein(1995)NewEngl.J.Med.332581-588；Robert和Kupper(1999)NewEngl.J.Med.3411817-1828；Bos和DeRie(1999)Immunol.Today2040-46)；Shimizu等(2002)Histochem.CellBiol.118251-257，Gottleib等(1995)NatureMed.1442-447，Abrams等(2000)J.Exp.Med.192681-693；Yu等(2002)Dermatology20494-99)。銀屑病關節炎、特應性皮炎和哮喘都與銀屑病有關(McInnes等(2001)J.Immunol.1764075-4082；Welp等(1989)Hautarzt40496-500)。本發明提供治療和診斷動脈粥樣硬化和其它方面的心血管疾病的方法。免疫細胞，例如肥大細胞、樹狀突細胞、嗜中性粒細胞、單核細胞和巨噬細胞對動脈粥樣硬化的病理學有貢獻。腫瘤壞死因子、白細胞介素-1和其它細胞因子與例如動脈粥樣硬化、心血管疾病和發作的病因學有關(參見，例如，Huang等(2002)Cardiovasc.Res.55150-160；Kelley等(2000)Mol.Med.Today6304-308；Aicher等(2003)Circulation107604-611；Ozmen等(2002)Histol.Histopathol.17223-237；Wanders等(1994)Trahspl.Int.7Suppl.1S371-S375；Hallenbeck(2002)NatureMed.81363-1368；Young等(2002)Thromb.Haemost.88554-567；Loppnow等(2001)Shock13-9)。另外，本發明提供治療和診斷關節炎，例如類風溼性關節炎、銀屑病關節炎、幼年型類風溼性關節炎、骨關節炎和強直性脊柱炎的方法。類風溼性關節炎(RA)為關節的慢性、破壞性疾病，特徵在於炎症和滑液增生。該疾病不能治癒，可導致傷殘。CD4+T細胞浸潤關節，且刺激IL-1、IL-6和TNFα的生成。生成的細胞因子刺激成纖維細胞、破骨細胞和軟骨細胞釋放蛋白水解酶，其依次使關節軟骨降解。肥大細胞是參與RA病理學的主要免疫細胞。肥大細胞生產了腫瘤壞死因子-α(TNFα)，其引起炎症級聯反應，促進了IL-1和IL-6的表達。肥大細胞也活化了蛋白水解酶，使軟骨基質降解。關節炎的小鼠模型可用，例如膠原誘導的關節炎(CIA)、TNF過表達小鼠和IL-lα過表達小鼠(Choy和Panayi(2001)NewEngl.J.Med.344907-916；Woolley(2003)NewEngl.J.Med.3481709-1711；Niki等(2001)J.Clin.Invest.1071127-1135；Feldmann和Maini(2001)Annu.Rev.Immunol.19163-196)。本發明提供了治療和診斷哮喘和變態反應的方法。寄生蟲引起的感染，例如，麴黴或一鉤蟲屬與患有哮喘和變態反應的人類相關。而且，麴黴或一鉤蟲屬引起的感染，或用寄生蟲抗原的治療，已被用於哮喘和變態反應的模型研究。對寄生蟲變應原的免疫應答存在於階段，例如早期階段和晚期階段(參見，例如Hurst等(2001)J.Immunol.1664922-4930；Hurst等(2002)J.Im77tunol.169443-453；Mehrad等(1999)J.Immunol.1621633-1640；Soubani和Chandrasekar(2002)Chest1211988-1999；Schuh等(2002)FASEBJ.161313-1315；Greenberger(2003)FrontBiosci.8sll9-s127；Gibson等(2003)Eur.Respir.J.21582-588；Black等(2001)J.AppLPhysiol.90571-578；Palmer等(2002)Am.J.Respir.Crit.CareMed.1651489-1493；Zou等(2002)GenomeBioL320.1-20.13；Abraham等(1999)Am.J.Respir.Crit.CareMed.1591205-1214；Jones等(1998)Can.J.Physiol.Pharmacol76210-217；Wright等(1999)J.Pharmacol.Exp.Therapeutics2891007-1014；D′Brot等(1989)Am.Rev.Respir.Dis.139915-920)。本發明也涉及治療和診斷肺病，包括那些包含氣道高反應性的方法，例如，用IL-27拮抗劑來治療。氣道高反應性(airwayhyperreactivity)，也稱為氣道高反應性(airwayhyperresponsiveness)，其涉及刺激應答產生的不適當的氣道縮小，特徵在於氣道的多種病變，例如哮喘、變應性鼻炎、支氣管炎、細支氣管炎和可能的慢性阻塞性肺疾患(COPD)。高反應性可以由例如呼吸道感染、吸菸和呼吸道變應原引起。哮喘，一種可致命的慢性病變，影響了約七分之一的美國兒童，是超過15％的兒科急症的原因。該病的症狀包括呼吸急促和粘液分泌過多(參見，例如，Crain等(1995)Arch.Pediatr.Adolesc.Med.149893-901；Grunig等(1998)Science2822261-2263；Crystal等(eds.)(1997)TheLung，Vols.1-2，2nded.，Lippincott-Raven，Phila，PA；Holgate等(2001)Allergy，2nded.，Mosby，NewYork；Marone(1998)Immunol.Today195-9；Barnes和Lemanske(2001)NewEngl.J.Med.344350-362)。氣道高反應性以氣道中T細胞、嗜酸性細胞、肥大細胞、嗜中性粒細胞和抗原呈遞細胞(APC)的浸潤為特徵。肺的APC包括DC、B細胞和肺泡的巨噬細胞，其中每個都可表達細胞因子和導致氣道高反應性(參見，例如Lawrence等(1998)J.Pharm.Exp.Thera.284222-227；Alexis等(2001)Am.J.Physiol.LungCellMol.Physio.280L369-L375；Akabari等(2002)NatureMedicine81024-1032；MacLean等(1999)Am.J.Respir.CellMol.Biol.20379-387；Hamelmann等(1999)Am.J.Respir.CellMol.Biol.21480-489；Gonzales等(2000)AnnalsInternalMedicine133981-991；Li等(2002)PulmoraaryPharmacol.Therapeutics15409-416；Zimmermann，tal.(2003)J.AllergyClin.Immunol.111227-242；Riffo-Vasquez和Spina(2002)Pharmacol.Therapeutics94185-211)。COPD為涉及巨噬細胞、嗜中性粒細胞和T細胞例如CD8+T細胞浸潤細支氣管的病變。COPD，北美洲引起死亡的第四大病因，特徵在於氣道平滑肌的增厚和氣道的炎症。這種反應的出現是由於單核細胞、巨噬細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞和嗜中性粒細胞對肺的浸潤。肺泡的巨噬細胞，在COPD中提高表達細胞因子，依次促進了炎症和增加了免疫細胞的活化。COPD包括慢性支氣管炎和氣腫。氣腫的特徵在於薄壁組織、氣隙末梢的末端細支氣管的永久性破壞(參見，例如Hautamaki等(1997)Science2772002-2004；Barnes(2000)Chest11710S-14S；Barnes(2003)Annu.Rev.Med.54113-129；Jeffery(1998)Thorax53129-136；Barnes(2000)NewEngl.J.Med.343269-280)。本發明也包括癌症治療和診斷方法。注意到IL-27已顯示可治療小鼠腫瘤(Hisada等(2004)CaneerRes.641152-1156)。本發明提供使用IL-27增加TNFα、IL-lα和OX40生成的方法，這些細胞因子與抗腫瘤的適當的免疫應答相關和與腫瘤衰退相關。本發明提供使用IL-27刺激包含免疫因子例如TNFα、IL-lα、IL-lβ和OX4的抗腫瘤免疫應答生成來治療癌症的方法。腫瘤通常由CD4+T細胞和CD8+T細胞浸潤。具有T細胞的腫瘤的較高浸潤有時與患者的良好預後有關，例如在黑素瘤和結腸直腸癌的情況下。對腫瘤的免疫應答的問題是T細胞可以是不完全活化的、免疫缺乏的或滅活的(Dalerba等(2003)Crit.Revs.OncologyHematology4633-57；Ladanyi等(2004)Clin.CancerRes.10521-530；Toomey等(1999)Immunol.Invest.2829-41)。IL-lα、IL-lβ和TNFα具有抗腫瘤功效，其導致抗腫瘤的增強的免疫應答。發現大量腫瘤類型表達IL-lα。TNFα的抗腫瘤，例如，由對腫瘤的直接細胞毒性引起，但是也可以經由活化巨噬細胞、CD8+T細胞和嗜中性粒細胞引起。相反地，在一定的條件下，IL-1和TNFα可具有致腫瘤(pro-tumor)功效。IL-1可誘導能促進腫瘤生長和侵襲力的因子的分泌。IL-1的生成可導致自泌激活、增加傾襲力。TNFα、IL-lα和IL-lβ可刺激某些腫瘤例如卵巢癌的生長(參見，例如Chen等(1998)CancerRes.583668-3676；Woods等(1998)CancerRes.583132-3141；Apte和Voronov(2002)Sem.CancerBiol.12277-290；Woodward等(2002)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.433144-3152；Smith等(1990)CancerRes.503146-3153；Wu等(1993)CancerRes.531939-1944；Noorda等(2003)Cancer981483-1490；Bazzoni等(2001)CancerRes.611050-1057；Kamada等(2000)CancerRes.606416-6420；Kaneda等(1998)CancerRes.58290-295；Gnant等(1999)CancerRes.594668-4674；Suganuma等(1999)CancerRes.594516-4518)。OX40為一種配體，然而OX40R為其相應的受體。OX40/OX40R介導的信號在抗腫瘤應答中起作用。OX40和OX40R在浸潤腫瘤的T細胞中正向調節，但是在外周血T細胞中沒有正向調節。通過施予OX40配體觸發OX40/OX40R信號可導致多種腫瘤的排斥反應。已經發現人類乳腺癌和黑素瘤包含OX40-表達的T細胞，並在抗腫瘤應答中涉及OX40/OX40R(參見，例如，Morris等(2001)BreastCancerRes.Treat.6771-80；Hurwitz等(2000)Curr.Opin.Immunol.12589-596；Ladany等(2004)Clin.CancerRes.10521-530)。至於癌症，用於治療癌症、腫瘤、轉移和血管生成的多種調節免疫應答方法都是有效的。這些方法包括用細胞因子或抗-細胞因子抗體治療，所述細胞因子或抗-細胞因子抗體例如IL-2、IL-12、腫瘤壞死因子-α(TNFα)、IFNγ、粒巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)和轉化生長因子(TGF)。當癌細胞可產生能促進其自身生長和自身存活的細胞因子時，抗細胞因子抗體可以是適宜的治療劑(參見，例如Ramirez-Montagut等(2003)Oncogene223180-3187；Braun等(2000)J.Immunol.1644025-4031；Shaw等(1998)J.Immunol.1612817-2824；Coussens和Werb(2002)Nature420860-867；Baxevanis等(2000)J.Immunol.1643902-3912；Shimizu等(1999)J.Immunol.1635211-5218；Belardelli和Ferrantini(2002)TRENDSImmunol.23201-208；Seki等(2002)J.Immunol.1683484-3492；Casares等(2003)J.Immunol.1715931-5939；Oft等(2002)NatureCellBiol.4487-494)。III.激動劑、拮抗劑和結合組合物本發明提供使用IL-27的激動劑和拮抗劑的方法。IL-27的激動劑包含例如IL-27、IL-27變體、突變蛋白質、hyperkine或其肽模擬物、WSX-1/TCCR或gp130的激動劑抗體和編碼這些激動劑的核苷酸。IL-27的拮抗劑包括，例如，IL-27的抗體、p28或EBI3的抗體、WSX-1/TCCR或gpl30的阻斷抗體、基於WSX-1/TCCR或gpl30的亞基胞外區的可溶性受體、其肽模擬物和編碼這些拮抗劑的核苷酸。也可以使用抗-個體遺傳型(anti-idiotpic)抗體。本發明提供使用p28的激動劑和拮抗荊、p28和EBI3結合物的激動劑和拮抗劑、WSX-1/TCCR的激動劑和拮抗劑、gp130的激動劑和拮抗劑、WSX-1/TCCR和gpl30的激動劑和拮抗劑的方法。I27hyperkine包含，例如，包含p28和EBI3的多肽序列的融合蛋白，其中p28和EBI3存在於一個連續的多肽鏈中。p28和EBI3的序列可以在連續多肽鏈中是任意順序。所述融合蛋白可在一個連續的多肽鏈中包含聯結子序列，其存在於p28和EBI3和序列之間。使用VectorNTISuite用Parker曲線很容易地於發現增加的抗原性區域，該區域可用於抗體增殖(Informax，Inc，Bethesda，MD)。p28、EBI3、WSX-1/TCCR和gpl30的抗體為已知的(參見，例如，Pflanz等(2004)J.Immunol.1722225-2231；Larousserie等(2004)J.Pathol.202164-171；Devergne等(2001)Am.J.Pathol.1591763-1776；Autissier等(1998)Int.Immunol.101881-1889)。也涉及特異性結合p28和EBI3結合物的抗體，和特異性結合WSX-1/TCCR和gpl30結合物的抗體。也提供了對應於WSX-1/TCCR和gpl30的胞外區的可溶性受體。成熟的人類WSX-1/rCCR的胞外域包含GenBankBC028003或NM004843的胺基酸序列的胺基酸33至514。該胞外域包括經典的細胞因子結合域，也包含三個纖連蛋白(FN)域。本發明提供包含細胞因子結合域和無、一個或三個FN域的可溶性受體(參見，例如Hui等(2000)Cytokine12151-155)。基於這些胞外區的受體不限於這些明確的N-末端和C-末端胺基酸，但可以稍長或稍短，例如不限於一個、兩個、三個或更多的胺基酸，只要基本上保留配體的結合性質。也包含基於可溶性受體的融合蛋白，例如，用促進純化和穩定性，或用於提供功能域，例如有毒的多肽。可製備單克隆的、多克隆的和人源化抗體(參見，例如Sheperd和Dean(eds.)(2000)MonoclonalAntibodies，OxfordUniv.Press，NewYork，NY；Kontermann和Dubel(eds.)(2001)AntibodyEngineering，Springer-Verlag，NewYork；Harlow和Lane(1988)AntibodyAlaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY，pp.139-243；Carpenter等(2000)J.Immunol.1656205；He等(1998)J.Immunol.1601029；Tang等(1999)J.Biol.Chem.27427371-27378；Baca等(1997)J.Biol.Chem.27210678-10684；Chothia等(1989)Nature342877-883；Foote和Winter(1992)J.Mol.Biol.224487-499；授予Vasquez等的U.S.專利No.6,329,511)。也包含抗體的突變蛋白質和變體和可溶性受體，例如聚乙二醇化或引起突變形成以除去或替換脫醯氨基天冬醯胺殘基。對抗體的增殖而言，抗原的純化不是必須的。通過DNA運載體免疫接種進行免疫接種，參見，例如Wang，etal.(1997)virology228278-284。另外，動物也可以用承受相關抗原的細胞來免疫。然後，脾細胞可以從免疫的動物中分離，脾細胞可以與骨髓瘤細胞系融合產生雜交瘤(Meyaard等(1997)Immunity7283-290；Wright等(2000)Immunity13233-242；Preston等(1997)Eur.J.Immunol.271911-1918)。通過功能性化試驗或生物試驗，可篩選生成的雜交瘤產生想要的抗體，所述試驗即，不依賴擁有純化的抗原的試驗。用細胞免疫可證實Dekker，NY；Weiner和Kotkoskie(2000)ExcipientToxicityandSafety，MarcelDekker，Inc.，NewYork，NY).選擇用於治療的給藥方式取決於某些因素，包括實體的血清或組織更新率，症侯的水平、實體的免疫原性和在生物基質中對靶細胞的易趨性。優選地，給藥方式使遞送給患者的治療量最大化，其與可接受的副作用水平一致。因此，遞送的生物量部分取決於具體的實體和受治療的病症的嚴重性。選擇適宜劑量的抗體、細胞因子和小分子的指南是已知的(參見，例如Wawrzynczak(1996)AntibodyTherapy，BiosScientificPub.Ltd，Oxfordshire，UK；Kresina(ed.)(1991)MonoclonalCytokinesandArthritis，MarcelDekker，NewYork，NY；Bach(ed.)(1993)MonoclonalAntibodiesandPeptideTherapyinAutoimnauneDiseases，MarcelDekker，NewYork，NY；Baert等(2003)NewEngl.J.Med.348601-608；Milgrom等(1999)NewEngl.J.Med.3411966-1973；Slamon等(2001)NewEngl.J.Med.344783-792；Beniaminovitz等(2000)NewEngl.J.Med.342613-619；Ghosh等(2003)NewEngl.JMed.34824-32；Lipsky等(2000)NewEngl.J.Med.3431594-1602)。抗體、抗體片段和細胞因子可通過連續輸注或通過，例如每天、每周間隔服藥或每周1-7次提供。藥量可以通過靜脈、皮下、局部、口服、鼻腔、直腸、肌內、腦內或吸入提供。優選的劑量方案為包含最大劑量或避免顯著的不想要的副作用的劑量。總共每周劑量通常為至少0.05μg/kg體重、更通常至少0.2μg/kg、最優選通常至少0.5μg/kg、典型地至少1μg/kg、更典型地至少10μg/kg、最典型地至少100μg/kg、優選至少0.2mg/kg、更優選至少1.0mg/kg、最優選至少2.0mg/kg、理想地至少10mg/kg、更理想地至少25mg/kg、最理想地至少50mg/kg(參見，例如，Yang等(2003)NewEngl.J.Med.349427-434；Herold等(2002)NewEngl.J.Med.3461692-1698；Liu，etal.(1999)J.Neurol.Neurosurg.Psych.67451-456；Portielji，etal.(20003)CancerImmunol.Immunother.52133-144)。小分子治療劑例如肽模擬物、天然產物或有機化學品的想要的劑量與用於抗體或多肽的量相同，以moles/kg體重計。小分子治療荊想要的血漿濃度與用於抗體的約相同，以moles/kg體重計。用於具體患者的有效量可根據多種因素而改變，所述因素例如治療的病症、患者的整體健康狀態、給藥的方法、途徑和劑量、和副作用的嚴重性(參見，例如Maynard等(1996)AHandbookofSOPsforGoodClinicalPractice，InterpharmPress，BocaRaton，FL；Dent(2001)GoodLaboratoryandGoodClinicalPractice，UrchPubl.，London，UK)。典型的牲畜、試驗和研究受試者包括猴、狗、貓、大鼠、小鼠、兔、荷蘭豬、馬和人。適宜劑量由臨床醫師例如，利用參數或已知因素或影響治療的本領域可能因素或影響治療的預測因素來確定適宜劑量。通常，劑量開始略微少於最佳劑量，隨後按小劑量不斷增加，直到獲得相對於任意消極地副作用而言想要的最佳劑量。重要的診斷措施包括那些症狀，例如產生的炎症或炎症細胞因子的水平。優選地，將要使用的生物學劑量得自類似於用於治療的目標動物的相同種類，因而，使對試劑的體液應答降低至最低。與第二治療劑共治療或治療的方法是本領域已知的，所述第二治療劑例如細胞因子、類固醇、化學治療劑、抗生素或放射物(參見，例如Hardman等(eds.)(2001)GoodmanandGilman′sThePharmacologicalBasisofTherapeutics，10thed.，McGraw-Hill，NewYork，NY；Poole和Peterson(eds.)(2001)PharmacotherapeuticsforAdvancedPracticeApracticalApproach，Lippincott，WilliamsWilkins，Phila.，PA；Chabner和Longo(eds.)(2001)CancerChemotherapyandBiotherapy，Lippincott，WilliamsWilkins，Phila.，PA)。典型地，治療有效量將減少症狀至少10％；通常至少20％；優選至少約30％；更優選至少40％，最優選至少50％。給藥途徑為，例如，經由局部或皮下施用，通過靜脈內、腹膜內、腦內、肌內、眼內、動脈內、腦脊髓內、患處內或肺部途徑注射或輸注、通過緩釋系統或者移植物(參見，例如Sidmanetal.(1983)Biopolymers22547-556；Langer等(1981)J.Biomed.Mater.Res.15167-277；Langer(1982)Chem.Tech.1298-105；Epstein等(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA823688-3692；Hwang等(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA774030-4034；U.S.專利Nos.6,350466和6,316,024)。本發明提供治療或診斷增殖的方法。上述病症或病變，例如，子宮、宮頸、乳腺、前列腺、睪丸、陰莖、胃腸道例如食道、口咽、胃、小腸或大腸、結腸或直腸、腎、腎細胞、膀胱、骨、骨髓、皮膚、頭或頸、皮膚、肝、膽囊、心臟、肺、胰腺、唾液腺、腎上腺、甲狀腺癌、腦、神經節、中樞神經系統(CNS)和周圍神經系統(PNS)和免疫系統例如，脾臟或胸腺的癌症。本發明提供治療例如免疫原性腫瘤、非免疫原性腫瘤、潛伏性(dormant)腫瘤、病毒誘導的癌症例如上皮細胞癌、內皮細胞癌、鱗狀上皮細胞癌、乳頭瘤病毒、腺癌、淋巴瘤、癌、黑素瘤、白血病、肉瘤、畸胎癌、化學誘導的癌症、轉移和血管生成的方法。本發明也涉及對腫瘤細胞或癌細胞抗原減少的耐受性，例如通過調節調整T細胞(Treg)的活性(參見，例如Ramirez-Montagut等(2003)Oncogle223180-3187；Sawaya等(2003)NewEngl.J.Med.3491501-1509；Farrar等(1999)J.Imrnunol.1622842-2849；Le等(2001)J.Immunol.1676765-6772；Cannistra和Niloff(1996)NewEngl.J.Med.3341030-1038；Osborne(1998)NewEngl.J.Med.3391609-1618；Lynch和Chapelle(2003)NewEngl.J.Med.348919-932；Enzinger和Mayer(2003)NewEngl.J.Med.3492241-2252；Forastiere等(2001)NewEngl.J.Med.3451890-1900；Izbicki等(1997)NewEngl.J.Med.3371188-1194；Holland等(eds.)(1996)CancerMedicineEncyclopediaofCancer，4thed.，AcademicPress，SanDiego，CA)。本發明提供用IL-27的激動劑或拮抗劑和用至少一種另外的治療劑或診斷劑治療增殖疾病、癌症、腫瘤或癌前期的病症例如發育異常的方法。一種或多種另外的治療劑或診斷劑選自例如，細胞因子或細胞因子拮抗劑，例如幹擾素-α或抗表皮生長因子受體、多柔比星、表柔比星、抗葉酸劑例如甲氨蝶呤或氟尿嘧啶、依立替康、環磷醯胺放射療法、激素或抗激素治療(例如雄激素、雌激素、抗雌激素、氟他胺或己烯雌酚)、外科手術、他莫昔芬、異環磷醯胺、二溴衛矛醇、烷化劑(例如，美法侖或順鉑)、依託泊苷、長春瑞濱、長春鹼、長春醯胺、糖皮質激素、組胺受體拮抗劑、血管生成抑制劑、放射線、放射敏化劑、蒽環類抗生素、長春花生物鹼、紫杉烷例如紫杉醇和多西紫杉醇、細胞周期抑制劑例如周期素依賴性蛋白激酶抑制劑、單克隆抗體、單克隆抗體和毒素結合物、T細胞佐劑、骨髓移植或抗原呈遞細胞例如樹突細胞治療。也可提供疫苗，例如作為可溶蛋白或作為編碼蛋白質的核苷酸(參見，例如，Le等(2001)J.Immunol.1676765-6772；Greco和Zellefsky(eds.)(2000)RadiotherapyofProstateCancer，HarwoodAcademic，Amsterdam；Shapiro和Recht(2001)NewEngt.J.Med.3441997-2008；Hortobagyi(1998)NewEngl.J.Med.339974-984；Catalona(1994)NewEngl.JMed.331996-1004；Naylor和Hadden(2003)Int.Immunopharmacol.31205-1215；TheInt.AdjuvantLungCancerTrialCollaborativeGroup(2004)NewEngl.J.Med.350351-360；Slamon等(2001)NewEngl.J.Med.344783-792；Kudelka等(1998)NewEngl.J.Med.338991-992；vanNetten等(1996)NewEngl.J.Med.334920-921)。V.藥盒和診斷劑提供基於抗體、核苷酸雜化和PCR方法而用於炎症病變的診斷方法，所述炎症病變例如銀屑病、克隆(氏)病、類風溼性關節炎、哮喘或變態反應、動脈粥樣硬化和癌症。本發明提供IL-27的多肽、其片段、IL-27的核苷酸和其片段的多肽在例如用於包含流行性感冒A的病毒病變和的診斷和呼吸道和黏膜組織的病變的診斷中的診斷藥盒。也提供用於檢測IL-27和其代謝產物和分解產物的結合組合物，包含抗體或抗體片段。典型地，所述藥盒含有包含IL-27多肽或其抗原片段、其結合組合物的隔室或核苷酸，例如核苷酸探針、引物或分子或分子導引(molecularbeacon)(參見，例如，Rajendran等(2003)NueleicAcidsRes.315700-5713；Cockerill(2003)Arch.Pathol.Lab.Med.1271112-1120；Zammatteo等(2002)Biotech.Aranu.Rev.885-101；Klein(2002)TrendsMol.Med.8257-260)。一種診斷方法可包含來自患者例如測試受試者的樣品與結合組合物接觸，結合組合物特別地結合IL-27的多肽或核苷酸或IL-27受體。該方法還包含使來自對照受試者、正常狀態受試者或來自測試受試者的正常組織或體液的樣品與結合組合物接觸。而且，該方法另外可包含比較特定結合到測試受試者的組合物與特定結合到正常狀態受試者、對照受試者或來自測試受試者的正常組織或體液的結合物。可比較測試樣品或測試受試者的表達或活性與來自對照樣品或對照受試者的表達或活性。對照樣品可包含，例如患有免疫病變的患者中非感染樣品或非發炎組織。可提供來自對照受試者或對照樣品的表達或活性作為預定值，例如從對照受試者的統計學適宜組獲得。該藥盒包含，例如試劑和隔室、試劑和使用說明或含有試劑的隔室和使用說明。所述試劑可以包含IL-27的激動劑或拮抗劑，或其抗原片段、結合組合物、有義方向核苷酸或反義方向的核苷酸。測定測試化合物的藥盒可包含對照化合物、標記化合物，和從聯合的標記化合物中分離游離標記化合物的方法，所述化合物例如從生物學樣品獲得或從化學庫中獲得。對照化合物可包含IL-27或IL-27受體多肽的片段，或編碼IL-27或IL-27受體的核苷酸。所述片段包含零個、一個、兩個或更多的抗原片段。「標記」的組合物直接或間接通過分光鏡法、光化學法、生化法、免疫化學法、同位素法或化學方法檢測。例如，有用的標記物包括32P、33P、35S、14C、3H、125I、穩定的同位素、螢光染料、高電子密度試劑、酶作用物、附加表位或酶，例如用於酶連免疫測定或fluorettes(Rozinov和Nolan(1998)Chem.BioL5713-728)。可使用生物物質進行診斷測定，所述生物物質例如活細胞、細胞提取物、溶胞產物、固定細胞、細胞培養物、體液或法醫樣品。用於診斷或藥盒目的的共軛抗體包含偶合到染料、同位素、酶類和金屬偶合的抗體，參見，例如LeDoussal等(1991)NewEngl.J.Med.146169-175；Gibellini，etaL(1998)J.ImmunoL1603891-3898；Hsing和Bishop(1999)NewEngt.J.Med.1622804-2811；Everts等(2002)NewEngl.J.Med.168883-889。存在各種測試方式，例如放射免疫測定法(RIA)ELISA和切片試驗(labonachip)(U.S.專利Nos.6,176,962和6,517,234)。基因表達數據可用於診斷和治療疾病和病理狀態的的工具(參見，例如LiandWong(2001)GenoineInformatics123-13；Lockhart等(1996)NatureBiotechizol.141675-1680；Homey等(2000)J.Immunol.1643465-3470；Debets等(2000)J.Immunol.1654950-4956)。VI.用途本發明提供使用IL-27和IL-27受體的激動劑和拮抗劑用於診斷、預防和治療免疫和炎症病變的方法，所述免疫和炎症病變包含皮膚病、胃腸道病、關節病、血管系統病例如銀屑病、克隆(氏)病、類風溼性關節炎、哮喘、變態反應、COPD、氣道高反應性、和動脈粥樣硬化。本發明也包含治療或增強癌症例如乳腺癌和黑素瘤期間不適當的或不足的免疫應答的方法。提供給藥IL-27激動劑或拮抗劑來調節例如銀屑病、克隆(氏)病、類風溼性關節炎、哮喘、變態反應、動脈粥樣硬化和癌症中的免疫應答或對細胞應答的方法，其中給藥為給予例如細胞、體液、組織、器官、動物患者或人類患者。許多用於紀錄炎症病變例如銀屑病、克隆(氏)病和類風溼性關節炎的生物標記物的方法是已知的(參見，例如Bresnihan(2003)ArthritisRes.Ther.5271-278；Barnero和Delmas(2003)Curr.Opin.Rheumatol.15641-646；Gionchetti等(2003)Dig.Dis.21157-167；Wiik(2002)AutoilninuneRev.167-72；Sostegni等(2003)AlimentPharmacol.Ther.17(Suppl.2)11-17)。生物標記物和用於紀錄癌症的方法也已已知(參見，例如，Alison(ed.)(2001)TheCancerHandbook，Grove′sDictionaries，Inc.，St.Louis，MO；Oldham(ed.)(1998)PrinciplesofCancerBiotherapy，3rd.ed.，KluwerAcademicPubl.，Hingham，MA；Thompson等(eds.)(2001)TextbookofMelanoma，MartinDunitz，Ltd.，London，UK；Devita等(eds.)(2001)CancerPrinciplesandPfacticeofOncology，6thed.，Lippincott，Phila，PA；Holland等(eds.)(2000)Holland-FreiCancerMedicine，BCDecker，Phila.，PA；Garrett和Sell(eds.)(1995)CellularCancerMarkers，HumanaPress，Totowa，NJ；MacKie(1996)SkinCancer，2nded.，Mosby，St.Louis；Moertel(1994)NewEngl.JMed.3301136-1142；Engleman(2003)Semin.Oncol.30(3Suppl.8)23-29；Mohr等(2003)Onkologie26227-233)。參照下述的實施例可最好地理解本發明的廣闊的範圍，其並不意味著將本發明限制於具體的實施方案.實施例I.通用方法在生物化學和分子生物學中的標準方法已經公開(參見，例如Maniatis等(1982)MolecularCloning，ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY；Sambrook和Russell(2001)MolecularCloning，3rded.，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY；Wu(1993)RecombinantDNA，Vol.217，AcademicPress，SanDiego，CA)。標準方法也描述於Ausbel等(2001)CurrentProtocolsinMolecularBiology，Vols.1-4，JohnWileyandSons，Inc.NewYork，NY，其中描述了在細菌細胞和DNA誘變中的克隆(Vol.1)，在哺乳動物細胞和酵母中的克隆(Vol.2)，配糖體和蛋白表達(Vol.3)，和生物信息學(Vol.4)。用於蛋白純化的包含免疫沉澱作用、層析、電泳、離心分離和結晶作用的方法已經公開(Coligan等(2000)CurrentProtocolsinProteinScience，Vol.1，JohnWileyandSons，Inc.，NewYork).化學分析、化學修飾、翻譯後修飾、融合蛋白的生成、蛋白質的糖基化已經公開(參見，例如Coligan等(2000)CurrentProtocolsinProteinScience，Vol.2，JohnWileyandSons，Inc.，NewYork；Ausubel等(2001)CurrentProtocolsinMolecularBiology，Vol.3，JohnWileyandSons，Inc.，NY，NY，pp.16.0.5-16.22.17；Sigma-Aldrich，Co.(2001)ProductsforLifeScienceResearch，St.Louis，MO；pp.45-89；AmershamPharmaciaBiotech(2001)BioDirectory，Piscataway，N.J.，pp.384-391)。生成、純化和分裂多克隆的和單克隆的抗體的方法已經公開(Coligan等(2001)CurrentProtcolsinImmunology，Vol.1，JohnWileyandSons，Inc.，NewYork；Harlow和Lane(1999)UsingAntibody，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY；HarlowandLane，supra).用於描繪配體/受體相互作用的標準技術是已知的(參見，例如Coligan等(2001)CurrentProtcolsinImmunology，Vol.4，JohnWiley，Inc.，NewYork).用於包含螢光激活細胞分選術(FACS)的流式細胞儀的方法是已知的(參見，例如Owebs等(1994)FlowCytometryPrinciplesForClinicalLaboratoryPractice，JohnWileyandSons，Hoboken，NJ；Givan(2001)FlowCytometry，2nded.；Wiley-Liss，Hoboken，NJ；Shapiro(2003)PracticalFlowCytometry，JohnWileyandSons，Hoboken，NJ).適宜用於修飾核苷酸的螢光試劑是已知的，所述核苷酸包含核苷酸引物和探針、多肽和抗體，其用於作為例如診斷試劑(參見，例如MolecularProbes(2003)Catalogue，MolecularProbes，Inc.，Eugene，OR；Sigma-Aldrich(2003)Catalogue，St.Louis，MO)。免疫系統的組織學標準方法是已知的(參見，例如，Muller-Harmelink(ed.)(1986)HumanThymusHistopathologyandPathology，SpringerVerlag，NewYork，NY；Hiatt等(2000)ColorAtlasofHistology，Lippincott，Williams，andWilkins，Phila，PA；Louis等(2002)BasicHistologyTextandAtlas，McGraw-Hill，NewYork，NY)。使用動物模型，例如基因剔除小鼠的方法，和用於測試、評價和篩選診斷劑、治療劑和藥物試劑的方法是已知的(參見，例如，Car和Eng(2001)Vet.Pathol.3820-30；Kenyon等(2003)Toxicol.Appl.Pharmacol.18690-100；Deurloo等(2001)Am.J.Respir.CellMol.Biol.25751-760；Zuberi等(2000)J.Immunol.1642667-2673；Temelkovski等(1998)Thorax53849-856；Horrocks等(2003)Curr.Opin.DrugDiscov.Devel.6570-575；Johnston等(2002)DrugDiscov.Today7353-363)。用於確定例如抗原片段、前導序列、蛋白質摺疊、功能性領域、糖基化位點和序列對比的軟體包和資料庫是已知的(參見，例如GenBank，VectorNTISuite(Informax，Inc，Bethesda，MD)；GCGWisconsinPackage(Accelrys，Inc.，SanDiego，CA)；DeCypher(TimeLogicCorp.，CrystalBay，Nevada)；Menne等(2000)Bioinformatics16741-742；Menne等(2000)BioinformaticsApplicatiorsNote16741-742；Wren等(2002)Comput.MethodsPrograms.Biomed.68177-181；vonHeijne(1983)Eur.J.Biochem.13317-21；vonHeijne(1986)NucleicAcidsRes.144683-4690)。II.IL-27和IL-27受體的亞基的表達IL-27的亞基，即p28亞基和EBI3亞基，和IL-27受體的亞基，即WSX-1/TCCR亞基和gpl30亞基的表達可通過Taqman實時PCR分析來確定(表1)。結果證實增強的p28、EBI3和WSX-1/TCCR的表達與銀屑病的關係；增強的EBI3、WSX-1/TCCR和gpl30的表達與克隆(氏)病的關係；和增強的EBI3和WSX/TCCR的表達與類風溼性關節炎的關係。也表明了增強的表達與乳腺癌、黑素瘤、結腸癌和動脈粥樣硬化的關係(表1)。表1.IL-27亞基的表達和IL-27亞基，用Taqman實時PCR分析來分析，相對於泛激素(1.0)的表達做比較。續表1用能刺激大量基因表達的IL-27來處理來自臍帶血的原發的人肥大細胞(表2)。IL-27引起大量與免疫病變例如銀屑病、關節炎、克隆(氏)病、哮喘、變態反應和氣道高反應性有關基因的表達(表2)。表2實時PCR確定在人類肥大細胞基因表達中IL-27-介導的改變″1.0″的表達改變指沒有可檢測到改變本發明提供治療銀屑病和其它皮膚病變例如接觸過敏反應和特應性皮炎的方法。銀屑病與TNFα、IL-lβ和TEASRL(配體)、TEASR(受體)的表達增加有關(表3)。抗-TNFα抗體治療用於銀屑病的治療(參見，例如Girolomoni等(2002)Curr.Opin.InvestitDrugs.31590-1595；Zabraniecki和Fournie(2001)JointBoneSpine68106-108；Victor和Gottlieb(2002)J.DrugsDermatol.1264-275；Reich等(2002)JlnvestDermatol.118155-163)。TEASRL(a.k.a.GITRL)是包含TEASRL和TEASR的信號通路的配體，而TEASR(a.k.a.GITR)是其受體。TEASR也稱為例如糖皮質激素-誘導的腫瘤壞死因子受體(GITR)和TNFRSF18。TEASR是腫瘤壞死因子受體超家族的一員。TEASR的激動劑通過直接刺激CD4+T細胞或CD8+T細胞，或通過阻斷由T調節細胞(Treg)介導的基因恢復導致CD4+T細胞和CD8+T細胞的增殖。所述Treg可以是CD4+CD25+調節T細胞(參見，例如，Shimizu等(2002)NatureImmunol3135-142；McHugh等(2002)Immunity16311-323)。鑑於fIL-27刺激TEASRL的表達的能力(表2)，和與銀屑病中增加的TEASRL和TEASR表達相關，本發明提供用於治療銀屑病的IL-27的拮抗劑。表3.Taqman分析TEASRL(配體)和TEASR(受體)的實時PCR表達本發明提供治療關節炎和銀屑病關節炎的方法。TNFα、RANKL和IL-lα，其在IL-27處理中表達增加的水平(表2)，刺激破骨細胞的生成，其為可消化和降解骨細胞。RANKL為核因子κB配體的受體激動劑。RANKL表達在患有銀屑病關節炎的人類關節中增加。IL-lα和IL-lβ都在關節炎的病理學中起作用。本發明提供通過給藥IL-27的拮抗劑來治療關節炎例如類風溼性關節炎、骨關節炎和銀屑病關節炎的方法，其中所述拮抗劑期望減少TNFα和RANKL的表達(參見，例如Reimold(2002)Curr.DrugTargetsInflamm.Allergy1377-392；Girolomoni等(2002)Curr.Opina.Investig.Drugs31590-1595；Ritchlin等(2003)J.Clin.Invest.111821-831；Nakashima等(2003)Curr.Opin.Rheumatol.15280-287；Williams等(2000)J.Immunol.1657240-7245；Arend(2001)Serein.ArthrittsRheum.30(5Suppl.2)1-6；Arend(2002)CytokineGrowthFactorRevs.13323-340)。本發明提供例如通過使用IL-27的拮抗劑來抑制OX40和/或TNFα的生成來治療克隆(氏)病的方法(表2)。OX40的抗體改善了克隆(氏)病的動物模型，同時在患有克隆(氏)病的患者的腸中發現增加了OX40和OX40配體(OX40L)的表達(參見，例如，Totsuka等(2003)Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.284G595-G603；Souza等(1999)Gut45856-863；Stuber等(2000)EuropeanJ.Clin.Invest.30594-599)。T′α有助於克隆(氏)病，其作為一種抗-TNFα抗體用於治療這種病變(參見，例如，Reimold(2002)Curr.DrugTargetsInflamm.Allergy1377-392)。本發明提供治療哮喘、變態反應和其它肺病的方法。TNFα、IL-lα、IL-lβ和OX40已顯示對哮喘、變態反應、氣道高反應性和COPD的病理學起作用。例如，OX40L缺乏的小鼠或用抗OX40L抗體處理的小鼠抵抗對模型變態原的病理反應。IL-1缺乏的小鼠也抵抗誘導氣道高反應性應答的作用。TNFα在患有支氣管高反應性和COPD的患者中增加(參見，例如，Nakae等(2003)Int.Immunol.15483-490；Halasz等(2002)Respir.Med.96262-267；Chung(2001)Eur.Respir.J.Suppl.3450s-59s；Hoshino等(2003)Eur.J.Immunol.333861-869)。本發明提供給藥IL-27的激動劑或拮抗劑來治療癌症的方法。已發現用IL-27治療可刺激細胞因子或其它與抗腫瘤應答相關的信號分子的表達，所述其它信號分子例如TNFα、IL-lα、IL-lβ和OX40。表達增加的p28、EBI3或WSX-1/TCCR的腫瘤實例表明對腫瘤適宜的免疫應答涉及IL-27-介導的信號，並表明自然存在的抗腫瘤應答可通過給藥IL-27激動劑來增強。表達增加的p28、EBI3或WSX-1/TCCR的腫瘤實例包括乳腺癌\黑素瘤和結腸癌(表1)。在表2中的其它基因是已知的。APRIL(一種增殖性誘導配體)和BLAS是腫瘤壞死因子(TNF)配體家族的一員。淋巴細胞毒素-α和β(LTα；LTβ)為在淋巴結發育中使用的細胞因子(參見，例如，Varfolomeev等(2004)Mol.CellularBiol.24997-1006；Novak等(2002)Blood1002973-2979；Nardelli等(2002)Leuk.Lymphoma431367-1373；Shakhov等(2004)Eur.J.Immunol.34494-503；Kather等(2003)Immunology108338-345)。III.經由WSX-1/TCCR和gpl30調節IL-27信號。多種細胞因子受體蛋白與WSX-1/TCCR配對。只有WSX-1/TCCR和gpl30的組合支持的信號轉導對IL-27有響應。受體亞基單獨不足以支持信號轉導。抗-人類gpl30抗體(抗hgpl30抗體)阻斷人類NK細胞系中IL-27-介導的信號，並阻斷自身CD4+T細胞的IL-27-介導的增殖。用於WSX-1/TCCR亞基的候選配偶體在大鼠pre-BBa/F3細胞中表達，並用於評價STAT1和STAT3的磷酸化。母體Ba/F3細胞系表達WSX-1/TCCR(相對於泛激素的表達為約100，000)，但是表達相對少的gpl30(相對於泛激素的表達為約3)。用gpl30轉染的母體Ba/F3細胞和Ba/F3細胞可用IL-3、IL-6/sIL-6Rα或IL-27來刺激，並且其用於評價STAT1磷酸化。作為對IL-27的相應，STAT1僅用gpl30轉導來磷酸化(表4)。STAT3對各種刺激的反應類似於STAT1對各種刺激的反應(沒有標出)。因此，在天然表達WSX-1/TCCR的細胞中，IL-27介導的細胞信號由gpl30支持(表4)。表4.在用gpl30轉染或未轉染的Ba/F3細胞中STAT1的磷酸化。STATI-P用特定的抗體測定。小鼠成纖維細胞系NIH3T3表達gpl30，通過定量PCR分析確定，gpl30的表達遠遠高於WSX-1/TCCR的表達，即高於約1000倍(表5)。NIH3T3細胞用編碼flag-標記的小鼠WSX-1/TCCR(mWSX-1/TCCR)的逆轉錄病毒載體(一種對照載體)轉染，或根本不用轉染。僅用WSX-1/TCCR轉染的細胞響應通過STAT1磷酸化的IL-27的應答(表5)。也檢測STAT3的磷酸化，反應導致其與STATl的磷酸化類似，區別在於用IL-6/sIL-6Rα處理的STAT3磷酸化比用IL-27處理的STAT3磷酸化多一些。因此，在天然表達WSX-1/TCCR的細胞中，IL-27介導的細胞信號由gpl30支持(表5)。表5.在轉染的NIH3T3細胞或沒有用flag-標記mWSX-1轉染的細胞中STAT1的磷酸化。ND表示沒有監測到。STATl-P用特定的抗體測定。發現抗人類gpl30抗體(抗-hgpl30抗體)可阻斷IL-27的短期或長期應答，其再一次證實，IL-27信號穿過gpl30(表6)。短期應答由人類白血病的自然殺傷細胞(NKL細胞)確定，自然殺傷細胞為通過STAT1和STAT3的酪氨酸磷酸化對IL-27應答的細胞系(Hibbert等(2003)J.InterferonCytokineRes.23513-522)。細胞用或不用抗-hgpl30抗體(抗體B-T2)培養後，再用IL-27處理(Wijdenes等(1995)Eur.J.Immunol.253474-3481).用抗-hgpl30抗體或同型對照單克隆抗體預培養NKL細胞，使用的抗體為25,500，和10,000ng/ml(表6)。用飽和量的IL-27刺激細胞，或者無刺激。對IL-27的應答，和對抗-gpl30的抑制，證實IL-27信號調節gpl30，而gpl30-調節的信號引起STAT1和STAT2的磷酸化(表6)。分離短期研究證實IL-27刺激原發人類單核細胞磷酸化STAT1和STAT3(數據沒有標示)，然而，包括在t＝2h、6h和24h的時間點的時程研究表明僅僅在t＝24hIL-lβ、TNFα何IL-18的表達有可測量的增加(數據沒有標示)。作為對IL-27的應答，單核細胞生成IL-27，且表達IL-27的兩個亞基受體表明單核細胞可用於自刺激的自分泌通路。表6.抗gpl30抗體防止由NKL細胞的1L-27介導的細胞信號。ND表示STAT的磷酸化不能被檢測到。用IL-27刺激10-20分鐘。IL-27的長期作用和用這些長期作用的gpl30的依賴由自然人類T細胞的增殖試驗來確定(表7)。在試驗中使用之前，用FACS純化T細胞。加入胸苷來測定增殖。T細胞接受IL-27(飽和水平)、激動(agonistic)抗-CD3受體、激動抗-CD28抗體和中和的抗IL-2抗體，如上所述。用抗-GPl30抗體或用對照抗體滴定細胞。加入[3H]胸苷來測定細胞增殖。氚化了的胸苷的最大加入量為約21,000cpm。發現最大半數抑制量為約1.0ng/ml濃度的抗gpl30抗體，然而發現最大抑制量為(7,000cpm)約30ng/ml抗-gpl30抗體(表7)。當僅僅用培養基補充細胞時，加入的氘為零，即沒有監測到。表7.IL-27-依賴性T細胞增殖。(--)表示沒有加入添加劑IV.材料和方法重組體hIL-6/shIL-6Rα、hIL-2和mIL-3來自RDSystems，Inc.(Minneapolis，MN)。重組體人類和小鼠IL-27融合蛋白是市售的(Pflanz等，supra)。抗-hgpl30單克隆抗體B-T2來自InstituteofBiochemistry，RWTHAachen，Germany。抗-hWSX-1多克隆抗體來自U.S.Biological，Swampscott，MA.STAT1和STAT3的酪氨酸磷酸化形式的抗體來自CellSignaling，Beverly，MA，而可檢測的全部STAT1或STAT3的抗體來自TransductionLabs，Lexington，KY，andSantaCruzBiologicals，SantaCruz，CA.在分別存在mIL-3(5ng/ml)或hIL-2(5ng/ml)的RPMI/10％胎牛血清(FCS)中培養小鼠骨髓前體BaF3細胞和人類白血病NK細胞系(NKL)。在DMEM/10％FCS中培養小鼠成纖維細胞系NIH3T3.製備並培養天然的人類原發的CD4+T細胞，如所述的(Pflanz等，supra)。由Ficoll/Hypaque離心分離從單核粒細胞中新鮮分離的人類臍帶血。在添加了2％人類血清、100ng/ml幹細胞因子和50ng/mlIL-6的Yseel′s培養基中培養臍帶血單核細胞(GeminiBioproducts，Woodland，CA)。保養培養基約7-8周，期間每周更換培養基。在第八周，給培養基中補充1ng/ml的IL-4和10微克/ml的人類IgE。在9-10周，收集培養基，通過磁珠排除CD15、CD14、和CD11lb陽性細胞而除去殘餘的髓樣細胞(MiltenyiBiotec，Inc.，Auburn，CA)。用FACS分析檢驗肥大細胞純度(CD117+，FcepsilonRI+)為大於97％。通過Percoll密度梯度離心分離人類白血球層(buttycoat)得到原發的人單核細胞。STAT酪氨酸磷酸化測定如下。通常，在DMEM/2％FCS中使細胞受餓12小時，然後旋轉和再懸浮於2.5×106細胞/ml。在37℃，用各個細胞因子以飽和濃度(100ng/ml)刺激細胞15分鐘，然後在冰上冷凍5分鐘，旋轉和再懸浮於溶胞的緩衝液中(2xPBS，添加2mMEDTA、0.875％Brij97(Sigma，St.Louis，MO)、0.125％NP40(Sigma)、1mM釩酸鈉、1mM氟化鈉、完全的蛋白酶抑制劑合劑(RocheAppliedScience，Indianapolis，IN)和3mMPefabloc(RocheAppliedScience)。離心溶胞產物，用SDS-PAGE分析上清液，然後對上述描述的抗體進行蛋白質斑跡法分析。再用IL-27刺激之前，用各個抗體培養NKL細胞20分鐘。逆轉錄病毒感染如下。如所公開的方式用編碼各個誘導的受體的逆轉錄病毒重構物對Ba/F3和NIH3T3細胞進行感染(Kitamura(1998)Int.J.Hemato.67351-359)。簡言之，通過標準的PCR技術，使編碼WSX-1的成熟部分和gpl30的全部編碼框的DNA從cDNA庫中擴增(Clontech，MountainView，CA)。gpl30擴增子克隆進入逆轉錄病毒載體pMX，WSX-1擴增子克隆CD8引導肽序列的3-引子和flag-tag序列克隆入載體pMX。用這些重構的轉染效率為大於80％。對原發CD4+T細胞的增殖測定如下。得到FACS分選的CD3+CD45RA細胞，用飽和量的IL-27進行增殖試驗，如所述的(Pflanz等，supra)。將抗體滴入測定中。使用Sybrgreenprotocol分析cDNA庫的mRNA表達(Halfon等(1998)J.Biol.Chem.27316400-16408；Bolin等(1997)J.Neurosci.175493-5502)。使用RNAeasy試劑盒由Ba/F3或NIH3T3細胞製備mRNA(Qiagen，Valencia，CA)。使用下述的正向和反向PCR引發劑。用於人gpl30的引發劑得自GenBankE06613的基質2174-2194(正向)和基質2276-2295(反向)。小鼠gpl30的引發劑來自GenBankX62646的基質1943-1965(正向)和2065-2085(反向)。用於小鼠WSX-1/TCCR的引發劑來自GenBankNM-016671的基質1054-1074(正向)和1101-1121(反向)。用於人類WSX/-/TCCR的引發劑來自GenBankBC028003的基質1665-1684(正向引發劑)和基質1726-1746(反向引發劑)。本文引用的所有引用文獻以其與每個出版物、專利申請或專利所特定和獨立地指出包括所有附圖和圖形引入作為參考的同樣的範圍引入本文作為參考。對本領域技術人員來顯而易見的是可做出本發明的多種修改和改變以適應具體條件、材料、物質的組合物、方法、方法步驟或步驟以保護本發明的目的、精神和範圍。在不背離本發明的精神和範圍內，所有這修改都意味著包括在其附加的權利要求的範圍內。本文描述的具體的實施方案僅僅依靠具體實施例提供，而本發明由附加的權利要求的範圍限定，連同這些權利要求授權的等同物的全部範圍；本發明也並不受限於已經由本文中的實施例列出的具體的實施方案。權利要求1.調節免疫病變或病症的方法，包括給藥有效量的p28、EBI3或WSX/TCCR的激動劑或拮抗劑，其中所述病變或病症包含a)皮膚的炎性病症；b)關節炎；c)克隆(氏)病；d)氣道高反應性或炎症；e)動脈粥樣硬化；或f)非EB病毒引起的癌症或腫瘤。2.權利要求1的方法，其中拮抗劑抑制或阻止IL-27結合到異二聚體受體上，所述受體包括WSX-1/TCCR和gpl30的結合物。3.權利要求1的方法，其中皮膚的炎性病症包含a)銀屑病；或b)特應性皮炎。4.權利要求1的方法，其中關節炎包含a)類風溼性關節炎；b)骨關節炎；或c)銀屑病關節炎。5.權利要求1的方法，其中氣道高反應性或炎性病變包含a)哮喘；b)變態反應；或c)慢性阻塞性肺疾患(COPD)。6.權利要求1的方法，其中癌症或腫瘤包含a)乳腺癌；b)結腸癌；或c)黑素瘤。7.權利要求1的方法，其中激動劑抑制或改善包括癌症或腫瘤的病變。8.權利要求6的方法，其中癌症或腫瘤表達了與正常對照下述組織相比可見的增加量的a)p28；b)EBI3；或c)或WSX-1/TCCR。9.權利要求1的方法，其中拮抗劑改善了a)皮膚的炎性病症；b)關節炎；c)克隆(氏)病；d)氣道高反應性或氣道炎症；或e)動脈粥樣硬化。10.權利要求1的方法，其中激動劑包含a)IL-27；b)IL-27hyperkine；c)p28；d)EBI3；或e)核苷酸。11.權利要求11的方法，其中核苷酸編碼a)IL-27hyperkine；b)p28；c)EBI3；d)第一p28多肽鏈和第二EBI3多肽鏈；e)WSX-1/TCCR；或f)WSX/l/TCCR和gpl30。12.權利要求1的方法，其中拮抗劑包含來自抗體的結合組合物，其特別定地結合a)IL-27；b)p28；c)EBI3；d)WSX-1/TCCR；或e)gpl30和WSX-1/TCCR的結合物。13.權利要求12的方法，其中來自抗體的結合組合物包含a)多克隆抗體；b)單克隆抗體；c)人源化抗體，或其片段；d)Fab、Fv或F(ab′)2片段；e)抗體肽模擬物；或f)可見指示物。14.權利要求1的方法，其中拮抗劑包含a)衍生自WSX-1/TCCR的可溶性受體；b)小分子；或c)核苷酸。15.權利要求14的方法，其中核苷酸特定地與編碼如下物質的多核苷酸雜交a)p28；b)EBI3；或c)WSX-1/TCCR。16.權利要求15的方法，其中核苷酸包含a)反義核苷酸；或b)小幹擾RNA(siRNA)。17.權利要求1的方法，其中給藥激動劑增加了下述物質的表達a)RANKL；b)TNFα；c)TEASRL；d)IL-1α或β；e)OX40；或f)APRIL。18.權利要求1的方法，其中給藥拮抗劑降低了下述物質的表達a)RANKL；b)TNFα；c)TEASRL；d)IL-1α或β；e)OX40；或f)APRIL。19.診斷權利要求1的免疫病變或病症的方法，包含使結合組合物與生物學樣品接觸，其中結合組合物特定地結合a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的結合物；或c)編碼p28、EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸；和檢測或確定結合組合物與生物學樣品的特定結合。20.診斷權利要求1的免疫病症或病變的藥盒，包含隔室和特定結合到下述物質的結合組合物a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的結合物；或c)編碼p28，EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸。全文摘要提供調節細胞因子活性的方法，例如用於治療免疫病變和炎症疾病的目的。也提供給藥IL－27和IL－27受體激動劑或拮抗劑的方法。文檔編號C07K16/24GK1921886SQ200580005143公開日2007年2月28日申請日期2005年2月15日優先權日2004年2月17日發明者R·A·凱斯特林,T·K·麥克拉那漢,S·普夫蘭茨申請人:先靈公司