用於口腔黏膜給藥的液體變態反應性疫苗製劑的用途的製作方法

2023-07-27 02:08:46 1

專利名稱：：用於口腔黏膜給藥的液體變態反應性疫苗製劑的用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及用於口腔黏膜給藥的變態反應性疫苗製劑。
背景技術：
：變態反應症在是適應西方生活方式的國家中的嚴重健康問題。此外，變應性疾病的流行率在這些國家中日益增加。儘管通常不認為變態反應症是威脅生命的疾病，但哞喘每年引起大量的死亡。青少年中大約30%的異常流行率引起了生活質量、工作日和金錢的重大損失，從而成為西方國家中的嚴重健康問題中的一類。變態反應症是複雜的疾病。許多因素促成致敏事件。其中一個因素是由至今仍未充分理解的幾個基因之間的相互作用確定的個體的易感性。另一個重要因素是高於某些閾值的變應原的暴露。幾個環境因子在致敏過程中可以是重要的，包括汙染、兒童期感染、寄生蟲感染、腸內微生物等。一旦個體被致敏和變應性免疫反應建立後，僅僅少量變應原的存在就可有效地轉化成症狀。變應性疾病的自然病程通常伴隨著兩個水平上的加重。首先，症狀和疾病嚴重度的進展，以及疾病的進展，例如從花粉症至哞喘。第二，攻擊性變應原(offendingallergen)的傳播最頻繁發生，從而導致變應性多反應性。慢性炎症導致黏膜防禦機制的普遍衰弱，從而導致非特異性刺激和最終破壞黏膜組織。嬰兒可能主要對食物即奶過敏，從而導致溼滲或胃腸道病症；然而，最常見地他們自發地過度生長這些症狀。這些嬰兒在他們後來的生活中處於發生吸入性變態反應症的危險中。在我們呼吸的空氣中的某些最普遍大小的顆粒中發現了最重要的變應原來源。這些來源非常普遍，包括草的花粉和房塵蟎的糞便顆粒，所述物質一起負責形成所有變應原的大約50%。動物毛髮皮屑即貓和狗的毛髮皮屑、其他花粉例如艾屬植物的花粉和小型真菌例如支鏈孢屬(Alternaria)也具有全球重要性。然而以地區為基礎，其他花粉可佔優勢，例如在北歐和中歐樺樹花粉，在美國東部和中部豕草，在日本的日本柳杉花粉佔優勢。昆蟲，即蜜蜂和黃蜂毒液，和食物各自佔所有變應原的大約2%。變態反應症，即I型超敏反應，由對外來非病原物質的不恰當免疫反應引起。變態反應症的重要臨床表現包括哞喘、花粉症、溼滲和胃腸病症。變應性反應是瞬間暴發的且在接觸攻擊性變應原後20分鐘內達到高峰。此外，變應性反應在特定的個體對特定的變性原過敏這個意義上是特異性的，然而個體不一定對已知引起變應性疾病的其他物質顯示變應性反應。變應性表型的特徵在於靶器官的黏膜的顯著炎症和在於循環中和肥大細胞和嗜鹼性粒細胞的表面上存在IgE類型的變應原特異性抗體。當抗體結合肥大細胞和嗜鹼性粒細胞的表面上的高親和力IgE特異性受體時，外來變應原與變應原特異性IgE抗體的反應引發變應性攻擊。肥大細胞和嗜鹼性粒細胞包含現成的介質，即組胺、類胰蛋白酶和其他物質，所述介質在兩種或更多種受體結合的IgE抗體交聯後立即被釋放。IgE抗體通過同時結合一個變應原分子而被交聯。因此推斷只具有一個抗體結合表位的外來變應原不引發變應性反應。肥大細胞表面上的受體結合的IgE的交聯還導致負責將嗜酸粒細胞、變應原特異性T細胞和其他類型細胞吸引至變應性反應的位置的信號轉導分子的釋放。與變應原、IgE和效應細胞相互作用的此類細胞在遭遇變應原後12至24小時導致症狀的重新閃現發生(遲發性反應)。變態反應疾病的治療方案包括診斷和治療(包括預防療法)。變態反應症的診斷涉及變應原特異性IgE的證實和變應源來源的鑑定。在許多情況下既往病歷對於變態反應症的診斷和攻擊性變應原的來源材料的鑑定可以是足夠的。然而，最常見地，診斷由客觀測量例如皮膚單刺試驗、血液測試或激發試驗支持。治療選項落在3個主要範疇內。第一可能性是躲避變應原或減少暴露。雖然在例如食物變應原的情況下，躲避變應原是很顯然的，但對於房塵蟎變應原，其可以是非常困難的或昂貴的，對於花粉變應原，則是不可能的。第二和最廣泛使用的治療選項是開具經典的針對症狀的藥物如抗組胺類和類固醇的處方。針對症狀的藥物是安全的和有效的；然而，它們不能改變疾病的自然原因，它們也不能控制疾病的傳播。第三治療選項是在大多數情況下減少或減輕由所述變應原引起的變應性症狀的特異性變態反應性接種。常規的特異性變態反應性接種是對變應性疾病的病因療法。其千擾基礎免疫機制，從而導致患者的免疫狀態的持續改善。因此，特異性變態反應性接種的保護效應，與對症治療藥物療法相反，延長超過治療期。一些接受治療的患者被治癒，此外，大多數患者經歷體驗到的疾病嚴重度和症狀的減輕，或至少疾病發展的停止。因此，特異性變態反應性接種具有減少花粉症發展成哞喘的危險和減少發生新的敏感性的風險的預防性效果。成功的變態反應性接種背後的免疫學機制的細節不清楚。特異性免疫反應，例如抗特定病原體的抗體的產生，已知為適應性免疫反應。該反應可與先天性免疫反應區別開，先天性免疫反應是針對病原體的非特異性反應。變態反應性疫苗針對適應性免疫反應，其包括具有抗原特異性的細胞和分子例如T細胞和抗體產生性的B細胞。B細胞在沒有相應特異性的T細胞的幫助下不能成熟為抗體產生性細胞。參與變應原免疫反應的刺激的T細胞主要是Th2類型。已提出Thl和Th2細胞之間的新平衡的建立對於特異性變態反應性接種的免疫機制是有益的和至關重要的。這是由於Th2細胞的減少、從Th2至Thl細胞的轉變產生的還是由於Thl細胞的上調產生的仍有爭論。最近，已提出調節性T細胞對於變態反應性接種的機制是非常重要的。根據該模型，調節性T細胞即Th3或Trl細胞，都下調相應於抗原特異性的Thl和Th2細胞。儘管存在這些不明確性，但通常認為活性疫苗必須具有刺激變應原特異性T細胞優選TH1細胞的能力。儘管存在其價值，但主要因為兩個原因，特異性變態反應性接種未得到廣泛使用。一個原因是與包括在數個月內反覆接種例如(i.a.)注射的常規接種程序相關的不方便性。另一個原因(更重要的)是變應性副反應的風險。使用單次或少數幾次高劑量的免疫接種可有效地進行抗傳染劑的普通接種。然而，該策略不能用於變態反應性接種，因為病理免疫反應已在進行中。因而使用在長時間期限內使用的多次皮下免疫接種進行常規的特異性變態反應性接種。該過程分成兩個時期，增加劑量期和維持期。在增加劑量期中，通常在16周的時期內從小劑量開始使用不斷增加的劑量。當達到推薦的維持劑量時，將該劑量用於維持期，通常每6周注射1次。在各次注射後，由於過敏性副反應的風險，患者必須在醫療護理下保持30分鐘，所述過敏性副反應原則上儘管相當罕見，但可威脅生命。此外，應當配備好臨床以支持急救處理。毫無疑問，基於不同給藥途徑的疫苗可清除或減少目前基於皮下的疫苗所固有的變應性副反應的風險和有助於其更廣泛的使用，甚至可能使得能夠在家中自我接種。30多年來一直進行著改善用於特異性變態反應性接種的疫苗的努力，且包括多種方法。幾個方法已通過改變IgE的反應性而針對變應原本身。其他方法針對給藥途徑。通過變應原的口腔和舌下給藥可到達免疫系統是已知的給藥途徑。可通過將疫苗製劑置於舌下，然後使其保持在該處短暫時間例如大約2分鐘來進行給藥。使用口腔黏膜途徑的常規變態反應性疫苗由達到日劑量的變應原溶液組成。通過比較，給定的治療性(累積的)維持劑量比皮下治療的維持劑量高出許多倍。已知口腔黏膜給藥不引起或只引起小的副作用，主要以口中搔癢和有時眼和耳中搔癢的形式存在的副作用。WO04/047794公開了用於變態反應性疫苗的舌下給藥的快速分散劑型。用於以液滴形式舌下給藥的一種商購可獲得的變態反應性疫苗包含溶解在50%甘油和50%水的液體混合物中的變應原。使用給藥方案常規施用商購可獲得的用於舌下給藥的液體變態反應性疫苗，所述給藥方案包括增加劑量期，通常為10至20天的每曰給藥，其中劑量逐漸提高至維持劑量水平，然後是維持期，其中患者接受維持劑量。最近，許多研究已研究了通過在數天內、一天內或甚至數小時內實現的所謂的沖擊增加劑量療法進行增加劑量的可能性，其中施用不斷增加的劑量，每一次給藥之間只通過很短的時間例如1小時或2小時。然而，這樣的沖擊增加劑量療法具有不利方面不能排除嚴重的副作用的發生，從而與皮下給藥一樣，其需要變態反應症專家的監護。本發明的目的是通過口腔黏膜給藥提供預防或治療受試者的變態反應症的改良方法。發明概述通常本發明獲得該目的，該目的涉及變應原用於製備液體疫苗製劑的用途，所述疫苗製劑用於通過給藥方案中的口腔黏膜給藥來預防或治療受試者的變態反應症，所述給藥方案不包括增加劑量，即可通過例如使用維持期的標準給藥方案施用維持劑量來起始治療。本發明基於臨床試驗，所述臨床試驗已令人吃驚地顯示可在不使用增加劑量的情況下進行使用液體製劑的口腔黏膜給藥的變態反應性接種，同時保持可接受水平的副反應。該發現在至今一直認為一些類型的增加劑量期間是避免嚴重的副作用所必需的意義上是令人吃驚的。避免增加劑量期的可能性在使用液體疫苗製劑的口腔黏膜療法的同時還一起提供了具有使得給藥方案簡單得多的有利方面。此外，簡單的給藥方案增加了患者的治療順從性。發明詳述變應原本發明的製劑的變應原可以是已報導在其反覆對個體暴露後誘導變應性反應即IgE介導的反應的任何天然存在的蛋白質。天然存在的變應原的實例包括花粉變應原(樹、草藥、雜草和草的花粉變應原)、昆蟲變應原(吸入劑、唾液和毒液變應原，例如蟎變應原、蟑螂和蠓變應原、膜翅目昆蟲(hymenopthera)毒液變應原)、動物毛髮和皮屑變應原(來處例如狗、貓、馬、大鼠、小鼠等)和食物變應原。來自樹、草和草藥的花粉的重要變應原是來源於殼鬥目、木犀目、松杉目和懸鈴木科(包括例如樺樹(樺屬)，榿木(榿木屬)、榛樹(榛屬)、角樹(鵝耳櫪屬)和橄欖(木犀欖屬)、柳杉(柳杉屬和刺柏屬)、懸鈴(懸鈴木屬))、禾本目(包括例如黑麥草屬、梯牧草屬、早熟禾(Poa)、狗牙根屬、鴨茅屬、絨毛草屬、藤草屬、黑麥和高粱屬的草)、菊目和蕁麻目(包括例如Ambrosia、黃花蒿和牆草屬的草藥)的分類學目的花粉。其他重要的吸入性變應原是來自表皮蟎屬和嗜黴蟎屬、儲藏室塵蟎例如嗜渣蟎屬(Lepidoglyphys)、甜食蟎屬和食酪蟎屬的房塵蟎的變應原、來自蟑螂、蠓和蚤例如小蠊屬、大蠊屬、搖蚊屬和櫛頭蚤屬的變應原和來自哺乳動物例如貓、狗和馬的變應原、毒液變應原(包括來源於針刺或叮咬昆蟲的毒液例如來自膜翅目分類包括蜜蜂(蜜蜂總科)、黃蜂(胡蜂總科)，和螞蟻(蟻總科)的毒液)。重要的來自真菌和黴菌的吸入性變應原是例如來源於支鏈孢屬和分支孢子菌的吸入性變應原。在本發明的特定實施方案中，變應原是Betv1、Alng1、Coral和Carb1、Quea1、Cryj1、Cryj2、Cupa1、Cups1、Juna1、Juna2、Amba1、Amba2、Parj3、Salk1、Avee1、Cynd1、Cynd7、Dacg1、Fesp1、Hoi11、Lolpl和5、Phaa1、Pasn1、Phip1、Phip5、Phip6、Poap1、Poap5、Secc1、Secc5、Sorh1、Derf1、Derf2、Derp1、Derp2、、Derp7、Derm1、Eurm2、Glyd1、Lepd2、Biot1、Tyrp2、Blag1、Blag2、Pera1、Feld1、Canf1、Canf2、Bosd2、Equc1、Equc2、Equc3、Musm1、Ratn1、Apism1、Apim2、Vesv1、Vesv2、Vesv5、Dolm1、Dilm2、Dolm5、Pola1、Pola2、Pola5、Soli1、Soli2、Soli3andSoli4、Alta1、Clah1、Aspf1、Bosd4、Maid1、Glym1、Glym2、Glym3、Arah1、Arah2、Arah3、Arah4、Arah5或來自任何這些變應原的分子育種的改組(shufflant)雜種。在本發明的優選實施方案中，變應原選自樹的花粉變應原、草的花粉變應原、房塵蟎變應原、儲藏室塵蟎變應原、雜草變應原、黴菌變應原、貓變應原和狗變應原。在本發明的另一個實施方案中，製劑包含至少兩種不同種類的來源於相同的變應原來源或來源於不同的變應原來源的變應原，例如分別來自不同的蟎和草品種的第1組草變應原和第5組草變應原或第1組蟎變應原和第2組蟎變應原、雜草抗原如短的和巨大的豕草變應原、不同真菌變應原如支鏈孢屬和分支孢子菌屬變應原、樹變應原如樺樹、榛子、角樹、橡樹和榿木變應原、食物變應原如花生、大豆和奶變應原。整合入製劑中的變應原可以以提取物、純化的變應原、改良的變應原、重組變應原或重組變應原的突變體的形式存在。變應原提取物可天然包含相同變應原的一種或更多種同種型，然而重組變應原通常只代表變異原的一種同種型。在優選實施方案中變應原以提取物的形式存在。在另一個優選實施方案中，變應原是重組變應原。在本發明的進一步優選實施方案中，變應原是天然存在的低IgE結合突變體或重組低IgE結合突變體。此外，變應原可以是許多變應原例如2至10種變應原，特別地3至9種變應原，更特別地4至8種和最特別地5至7種變應原的混合物。變應原可以以等摩爾量存在或存在的變應原的比例可變化，優選等於l:20。在本發明的進一步實施方案中，低IgE結合變應原是WO99/47680、W002/40676或W003/096869A2的變應原。希望用於每日給藥的單一劑量製劑的優選效能是1至2000STU，更優選50至1000STU，更優選100至500STU，更優選130至350STU和最優選150至250STU。希望用於每日給藥的單一劑量製劑的優選效能是100至500000SQ-u，更優選200至300000SQ-u，更優選500至200000SQ-u，更優選IOOO至IOOOOOSQ-u，更優選1500至80000SQ-u和最優選2Q00至50000SQ-u。相應於給定的有效水平的變應原的量強烈地依賴於變應原的種類的變化而變化。在本發明的進一步實施方案中，希望用於每日給藥的單一劑量中的主要變應原的濃度是0.05至50pg，更優選0.05pg至30^g，更優選0.06jig至25jig，更優選0.07pg至20jig，更優選0.08jig至15pg，更優選0.09jig至10jig和更優選0.1pg至7jtg。口腔黏膜給藥法通過口腔和舌下進行變應原給藥可到達免疫系統是已知的給藥途徑。可通過將疫苗製劑置於舌下並讓其保留在該處進行短暫時間例如30至300秒，優選45至240秒，更優選60至180秒，更優選90至150秒和最優選90至120秒來進行給藥。口腔黏膜給藥法包括任何給藥方法，其中製劑部分或完全與患者的口腔和/或喉咽部的黏膜接觸。口腔黏膜給藥方法包括舌下給藥法和口腔含化給藥法。在本發明的一個實施方案中，將受試者經歷包括每天一次疫苗給藥的接種方案。在本發明的另一個實施方案中，接種方案包括每2天一次、每3天一次或每4天一次疫苗給藥。例如，接種方案包括超過4周時間，優選超過8周，更優選超過12周，更優選超過16周，更優選超過20周，更優選超過24周，更優選超過30周和最優選超過36周的疫苗給藥。給藥期可以是連續的時期。可選擇地，給藥期是由一個或更多個非給藥期間斷的不連續時期。優選，(總的)非給短於(總的)給藥期。在本發明的進一步實施方案中，每天一次對患者施用疫苗。可選擇地，每天兩次對患者施用疫苗。疫苗可以是單劑疫苗。液體疫苗製劑本發明的液體疫苗製劑可進一步包含適合於此類製劑的任何佐劑和其他賦形劑。此類賦形劑對於本領域技術人員來說是熟知的，其包括例如溶劑、乳化劑、溼潤劑、增塑劑、著色物質、充填劑、防腐劑、粘性調節劑、緩衝劑、pH調節劑、等滲調節劑、黏膜粘著物質等。配製策略的實例對於本領域技術人員來說是熟知的。佐劑可以是任何常規佐劑，包括含氧金屬鹽，例如氫氧化鋁、不耐熱腸毒素(LT)、霍亂毒素(CT)、霍亂毒素B亞單位(CTB)、聚合的脂質體、突變體毒素例如LTK63和LTR72、微囊、白細胞介素(例如IL-ip、IL-2、IL-7、IL-12、INFy)、GM-CSF、MDF衍生物、CpG寡核苷酸、LPS、MPL、偶磷氮(phosphophazene)、Adju-Phos⑧、葡聚糖、抗原製劑、脂質體、DDE、DHEA、DMPC、DMPG、DOC/明礬複合物、氟氏不完全佐劑、ISCOMs⑧、LTOral佐劑、胞壁醯二肽、單磷醯脂質A、胞壁醯三肽和磷脂醯乙醇胺。含氧金屬鹽的水溶液通常具有凝膠形式。製劑中氫氧化鋁的濃度優選是0.035-1000mg/ml，更優選0.10-100mg/ml，更優選0.25-10mg/ml和最優選0.5-5mg/ml。然而，本發明的製劑還可具有高度濃縮的凝膠形式或凝膠樣製劑。在本發明的特定實施方案中，本發明的製劑還包含增強劑。增強劑是增加藥物活性物質的生物利用度的物質，其通過i)通過打開旁細胞途徑(緊密連接)增加活性物質穿過生物膜，即增加活生物質的吸收和/或ii)通過增加吸收時間的增強劑的生物粘附效應來增加生物利用度。增強劑的實例是醇類例如乙醇、殼聚糖、殼多糖、丙二醇、甘油、二曱基亞碸、二甲基甲醯胺、二甲乙醯胺優選甘油。增強劑優選以20%至80%(v/v)，更優選30%(v/v)至70°/。(v/v),和最優選40%(v/v)至60%(v/v)的量存在。可通過將佐劑和其他賦形劑(如果需要的話)溶解在溶劑優選水中，加入變應原，然後讓變應原和佐劑以及其他賦形劑反應一段時間來製備本發明的製劑。反應時間可以是O.l至48小時，優選12至24小時。優選在4至45C，更優選4至20X:的溫度下進行反應。含氧金屬鹽在本發明的優選實施方案中，本發明的液體疫苗製劑包含含氧金屬鹽佐劑。優選，含氧金屬鹽的金屬陽離子選自Al、K、Ca、Mg、Zn、Ba、Na、Li、B、Be、Fe、Si、Co、Cu、Ni、Ag、Au和Cr。含氧化合物的陰離子可以是任何含氧陰離子，包括有機或無機陰離子或有機或無機陰離子的混合物。合適的含氧金屬鹽的實例是例如其中陰離子選自硫酸根、氫氧根、磷酸根、硝酸根、碘酸根、溴酸根、碳酸根、水合物(hydrate)、醋酸根、檸檬酸根、草酸根和酒石酸根以及其混合形式的含氧金屬鹽。含氧金屬鹽還包括配位絡合物。在例如TheHandbookofChemistryandPhysics第56版，SectionB，Chapter7(197576)中給出了配位絡合物的定義。在本說明書內，表達"混合形式"希望包括不同的陰離子的混合物以及與例如氯化物和硫化物的混合物。本發明的含氧金屬鹽的實例是氫氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁、醋酸鋁、硫酸鋁鉀、磷酸鈣、酒石酸釣、Maalox(氫氧化鋁和氫氧化鎂的混合物)、氳氧化鈹、氬氧化鋅、碳酸鋅、硫酸鋅和硫酸鋇。最優選是氫氧化鋁、磷酸鋁、醋酸鋁、磷酸鈣、酒石酸鈣和硫酸鋅。含氧金屬鹽的pi通常在2-11的範圍內。變應原蛋白的pl通常在4-9的範圍內。優選，這樣選擇變應原和含氧金屬鹽以使變應原的pl低於含氧金屬鹽的pl。當使用例如氫氧化鋁作為含氧金屬鹽時，製劑中氫氧化鋁的濃度優選是0.035-1000mg/ml，更優選0.10-100mg/ml，更優選0.25-10mg/inl和最優選0.5-5mg/ml。對於其他含氧金屬鹽，金屬鹽的濃度優選是0.035-1000mg/ml，更優選0.35-100mg/ml,更優選0.7-50mg/ml和最優選1.0-20mg/ml。製劑中變應原的濃度優選是0.01-100mg/ml,更優選0.1-10mg/ml。含氧金屬鹽對變應原的比例優選是0.1至100，更優選1至20。變應原被吸附至含氧金屬鹽的程度通常為加入量的5至99%，更優選10至99%。變應原至含氧金屬鹽的吸附依賴於緩衝系統和吸附發生所處的反應條件，包括溫度和反應時間。可通過許多物理化學參數如吸附、可溶性和溶散性性質、以等電點pl(對於可離解化合物來說，物質的淨電荷為0時的pH)的形式測量的離子電荷、解離常數、絡合物的配位作用、電子構型、化合價、成鍵軌道和反鍵軌道、貯藏性質、粘著特性、表面特徵、顆粒特徵和佐劑性來表徵含氧金屬鹽。據認為生物學活性物質被吸附(或偶聯)至含氧金屬鹽，該吸附促進疫苗的功效。幾個因素對於活性物質和含氧金屬鹽之間的吸附是重要的或影響該吸附(參見例如P.M.Callahan等人，PharmaceuticalResearch第8巻，No.7，851-858(1991)，和VaccineDesign.TheSubunitandAdjuvantApproach)。此類因素包括pH、吸附反應進行的時間長度、混合條件、疫苗中不同組分的濃度、容器、溫度、貯藏、緩衝劑和賦形劑。已進一步發現活性物質的吸附可受到金屬鹽的淨電荷/總電荷以及活性物質的電荷(兩者都是pH依賴性的)影響。據認為重要的進一步特徵是含氧金屬鹽的可溶性。含氧鹽的另一個特徵是通過為微環境中的活性物質保持理想的pH從而防止酸降解或通過保護活性物質抵抗酶降解從而使物質能夠被遞送而產生的對活性物質的保護作用。此外，一些含氧金屬鹽具有緩衝容量。這可導致產生保護活性物質免受可降解環境降解的疫苗製劑內的體內微環境。含氧金屬鹽的進一步特徵是其附著至黏膜的能力。該能力據認為增加變應原通過黏膜的吸收。對於幾種含氧金屬鹽(例如A1(0H)3、A1P04、Ca3P04)，顆粒大小範圍在0.5和15nm之間。定義術語"口腔黏膜給藥"是指這樣的給藥途徑，在該給藥途徑中，將劑型置於舌下或口腔中的任何其他地方以使活性成分與患者的口腔或喉咽部的黏膜接觸，從而獲得活性成分的局部或全身性效應。口腔黏膜給藥途徑的實例是舌下給藥。術語"舌下給藥"是指其中為了獲得活性成分的局部或全身性效應將劑型置於舌下的給藥途徑。術語"非增加劑量"是指從一開始給藥就使用全量並且以後繼續使用全量，其中術語"全量"是指用於繼續治療的劑量。術語"液體疫苗製劑"是指任何液體或流體製劑，包括溶液、懸浮液和具有低和高粘性的凝膠。術語"SQ-u"是指標準化的質量單位(StandardisedQuality-Unit):按照ALK-Abe116A/Ss"SQbiopotency"-標準化方法定義SQ-u，其中100，000SQ單位等於標準皮下維持劑量。通常lmg提取物包含100，OOO至l,000，000SQ-單位，依賴於它們起源的變應原來源和使用的製備方法。可通過免疫測定法確定精確變應原含量即總的主要變應原和總的變應原活性。術語"治療"是指部分或完全治癒、減輕症狀或抑制症狀的病因。術語"預防"是指任何的類型的預防療法。在變態反應性提取物的領域內，沒有國際接受的標準化方法。存在許多不同的提取物強度單位即生物效能。使用的方法和使用的單位通常測量變應原含量和生物學活性。關於該一點的實例是SQ-單位(標準化質量單位)、BAU(生物學變應源單位)、BU(生物學單位)、UM(質量單位)、IU(國際單位)和IR(反應性指數)。因此，如果使用非此處公開的來源的提取物，那麼需要將它們對此處公開的提取物標準化以確定其以SQ單位或上面提及的任一種單位表示的效能。本發明的主題是關於"變應原提取物"，H.Ipsen等人，chapter20inAllergy,principleandpractise(Ed.S.Manning)1993，Mosby-YearBook,St.Louis和L0wensteinH.(1980)ArbPaulEhrlichInst75:122。給定的提取物的生物效能(即體內變應原活性)依賴於許多因素，最重要的是提取物中主要變應原的含量，所述含量隨生物學來源材料的組成變化而變化，以克表示的用於獲得想要的生物效能的變應原提取物的量隨所述提取物的類型變化而變化，且對於給定類型的提取物，變應原提取物的量在提取物的實際生物效能方面隨批次的不同而變化。對於給定的提取物批次，可使用下列方法確定用於獲得想要的生物效能的以克表示的變應原提取物的量a)通過使用一種或更多種免疫學體內試驗建立參照提取物的生物效能和量之間的關係來確定不同量的參照提取物的生物效能。所述免疫學體內試驗的實例是皮膚單刺試驗(SPT)、結膜激發試驗(CPT)、使用變應原的支氣管激發試驗(BronchialChallengewithAllergen)(BCA)和其中一種或更多種變態反應症狀受到監控的各種臨床試驗，參見例如Haugaard等人，JAllergyClinImmunol,第91巻，No.3，pp709-722，March1993。b)基於建立的生物效能和參照提取物之間的關係，兼顧i)治療或減輕變態反應症的症狀的作用、H)免疫學體內試驗中記錄的副作用和iii)i)和ii)的個體之間的變異性的因素的平衡來選擇用於本發明的劑型的一種或更多種相關劑量的生物效能。進行平衡以獲得最大的足夠的治療效應而不經歷不可接受的副作用水平。平衡所述因素的方法對於本領域技術人員來說是熟知的。可以以任何可獲得的生物效能單位(例如SQ單位、BAU、IR單位、IU，參照上面)來表示發現的一個或更多個相關劑量的生物效能。C)從參照提取物製備一種或更多種生物效能參照標準提取物和，如果使用，基於分配至一個或更多個相關劑量的生物效能單位值計算參照標準提取物的生物效能單位值，例如，這樣的BAU的標準可如下面舉例說明的從FDA獲得。d)對於各提取物類型的參照標準提取物，選擇許多用於評價提取物的生物效能的參數。此類評價參數的實例是總變態反應性活性、確定的主要變應原的量和提取物的總體分子組成。可使用體外竟爭免疫測定法例如ELISA和MagicLite⑧發光免疫測定法(LIA)，使用用通過標準方法獲得的提取物產生的標準化的抗體混合物(例如在小鼠或兔子中產生的抗體)或變應性患者血清的混合物來測量總變應原活性。可以例如通過火箭免疫電泳(RIE)定量主要變應原的含量，然後將該含量與參照標準比較。可使用例如交叉免疫電泳(CIE)和十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢查總的分子組成。e)對於給定批次的生物效能未知的提取物(受試提取物)，可如下確定用於獲得想要的生物效能水平的提取物的量(用於本發明的固體劑型的有效劑量)對於選擇的各評價參數，使用上述的相關測量方法將受試提取物與參照標準提取物比較，然後基於測量結果計算具有想要的生物效能的提取物的量。SQ-單位:按照ALK-Abe116A/Ss，，SQbiopotency"-標準化方法確定SQ-單位，其中100，000個SQ單位等於標準皮下維持劑量。通常lmg的提取物包含100，OOO至l，000，000SQ-單位，依賴於它們衍自的變應原來源和使用的製備方法，可通過免疫測法確定精確的變應原的量，即總的主要變應原含量和總變應原活性。STU代表特異療法單位，且STU是基於用於變應原特異性變態反應性接種的各自變應原提取物的生物學活性的經驗單位。1000STU相應於用於液體劑型(用於SLIT)的最高維持劑量的效能，其中維持劑量是特異性變態反應性接種中推薦的在變應性患者的平均群體中獲得最佳安全性/功效比的劑量。BAU(生物學變應原單位)是按照FDA對於"Quantitativedeterminationofrelativepotencyofallergenicextracts"("MethodsoftheallergenproductstestingLaboratory""EUSAcompetitionassay".Page15，#49N-0012,FDA，October1993)中描述的變應原產物的要求確定的生物學效能單位。包含IOO，OOO個SQ-單位的草提取物的劑量等於按照上述方法獲得的2600-4700BAU的含量。同樣，可按照上述方法評估其他提取物。具體實施例方式實施例1:無需增加劑量的舌下免疫療法(SLIT)(811110116@)-新的治療方案導論在過去的數年中，已進行了幾個研究，使用舌下免疫療法(SLIT)產生了結合有利的安全特徵的功效的證據(1)。為了使患者獲得高水平的自我給藥療法如SLITone⑧的效應，順應性必須很高(2)。假定順應性的基礎是方便性的話，相關地要提高產品的該性質。SLIT的優良耐受性已導致考慮消除增加劑量期的可能性。這將提高患者的方便性，從而可增加順應性和潛在地增加治療效率。本研究設計用於評估31^11>0116@在不進行增加劑量的情況下在具有對蟎或草敏感的患者中的耐受性。材料和方法藥劑SLITone(ALK-Abel16)是包含0.2ml含有200STU的變應原劑量的溶液的單劑液體製劑，其中溶液是50%(v/v)甘油和50X(v/v)水。患者總共包括135位患者(66草和69蟎變應性患者)，年齡在7和55歲之間，由於對蟎或草的敏感性，其全都被診斷患有具有/不具有哞喘症狀的中等嚴重的鼻炎或鼻結合膜炎。通過陽性皮膚單刺試驗(單刺試驗，ALK-Abe116，S.A.，100BU/ml)和/或陽性IgE(CAP>藥學2級品(pharmacyclass2)進行診斷。根據WHO推薦(3)，試驗不包括其中禁忌使用免疫療法進行治療的患者、對除了在本試驗中評估的變應原外的變應原敏感的患者和之前已接受了免疫療法的患者。研究設計研究是隨機、多中心、雙盲、安慰劑作對照的、平行組研究。總持續時間為80天。將患者分成2組。組l(N-69)在整個研究過程中接受活性治療。該研究包括10天的增加劑量(T1)、20天的維持治療(T2)和在維持治療中的兩個30天持續時間的連續階段(T3和T4)。組2(N-66)在T1期間接受安慰劑增加刑量，在T2的安慰劑維持，和在T3開始時開始進行活性治療和繼續進行活性治療直至研究結束(T4)。在基線時和在Tl至T4時收集數據。各患者收到其中記錄了與各治療劑量相關的任何臨床事件的卡。研究者在病例報告表上指出了不利事件。研究是雙盲的，盲性在任何時候都不能被打斷，直至研究完成後。所有患者在他們開始參與試驗前籤署了試服志願書。研究獲得了參與中心的倫理委員會以及衛生當局的批准。治療將SLITone(ALK-Abel16)進行舌下給藥，其由蟎提取物(屋塵蟎或羽刺皮癬蟎(f0/力flgo/t/es/^ei^/^ss/zzws)+美洲塵蟎)或草(鴨茅、草甸羊茅、黑麥草、梯牧草、草地早熟禾、黑麥)的混合物的提取物組成。治療由使用多次劑量瓶的10天增加劑量(始於1滴，增加至10滴)和使用單劑量容器的維持期組成。每天進行一次給藥。各單劑容器中施用的主要變應原的劑量是2ng的主要變應劑5(對於草)和O.8/0.4jig的Der1/Der2(對於蟎)。安慰治療劑的外觀、氣味和味道與活性的治療劑相似。統計使用描述統計學。描述包括報告不利事件(AE)的患者數目(N)，經歷的AE的患者的百分數00和AE的人目(E)。結果加入的135位患者中，123位完成了研究，患者的特徵顯示於表l中。患者的年齡從7至55歲，兩個治療組的平均年齡為22歲。與組2中33位接受草提取物和33位接受蟎提取物相比，在組1中，36位患者接受草提取物，33位接受蟎提取物。總共報告了229例AE;157例AE(組1和組2中分別有68位和89位)由研究者評估為與治療相關，從而包括在分析中。最常報告的與治療相關的AE(在任何組中〉5。/。的患者)是口癢、眼癢、鼻炎和舌下水腫(表2);這些事件總共佔據了所有相關AE的57.3%。口癢是最常報告的與治療相關的AE;與組2中21位患者(31.8%)報告了39例口癢事件相比，組l中16位患者(23.2%)報告了28例口癢事件。口癢是任一組中超過10%的患者報告的唯一的AE，其總共佔據所有事件的42.7%。組1和組2中施用的SLIT劑量的總次數分別為6258和6081次。按時間(Tl-T4)每施用劑量的的口癢比率顯示於表3中。關於14歲(青少年和成人)的患者的最常報告的與治療相關的AE顯示錶4中。總共5位患者由於不利事件退出。在組1中3位受試者分別由於在Tl階段頭痛、在Tl階段哮喘、鼻炎和瘙萍和在T4階段舌下水腫而退出。在組2中2位受試者分別由於在T2階段中呼吸困難和咳嗽和在T4階段舌和口水腫而退出。討論該隨機化的雙盲安慰劑對照的平行組研究的目的是調查在無起始增加劑量期的情況下每日施用的SLIT的耐受性。此處提供的結果表明SLITone(草和蟎)被良好地耐受，且耐受性不受增加劑量期的省略的影響。與組1(接受活性增加劑量)相比，組2(接受安慰劑增加劑量)中報告AE的患者人數稍微多些，對事件的數目情況也是這樣。然而應當指出，在組2中，在安慰劑治療期間(T1和T2),報告了大量事件。最常報告的AE是口癢。口癢是舌下免疫療法的預期的和熟知的副作用，且報告的口癢程度與其他作者(4-7)報導的相同或口癢頻率在其他作者報導的更高。SLIT中增加劑量的使用是經驗性的和基於慣例，且可能根據用於皮下免疫療法所必需的逐步劑量增加改造而來。來自之前的臨床試驗(4;6)和藥物警戒性研究(7)的數據表明SLIT的優良的耐受性，但直到最近才將增加劑量期對耐受性的影響提出討論。SLIT中增加劑量的可能影響是推測的。假設SLIT中增加劑量的作用是針對能夠在增加劑量後安全施用維持劑量的患者的，那麼此處提供的數據證明該假設是錯誤的。在T3階段(當以維持劑量開始活性治療時)組2中報告口癢的患者人數比組1在Tl階段的人多，但與在T2階段組1中報告口癢的患者人數相似，在該T2階段時間上，增加劑量期對患者的耐受性的假定的作用應當保證更少的人數報告口癢。每施用劑量的口癢比率也顯示這些事件報告的頻率在T2階段的組1中和在T3階段的組2中相同。此外，當在兩個組中比較活性治療的前30天(對於組1,Tl+H和對於組2，T3)，每施用劑量的口癢累積率對於組1和組2分別為0.83%和0.74%。該研究的較短持續時間不允許對口癢的報告是否隨時間流逝而減少作出任何確定的結論。然而，觀察到的相對少的退出表明患者並不認為口癢的強度和持續時間令人煩惱。舌下水胂在組2中才艮導的頻率比組1中多。當實施活性治療時(T3和T4)在組2中報告了該類型的事件，且在1小時至3天內得到解決。一位患者在最少30天的活性治療後在T4階段由於該AE而退出研究。組1中在T4階段也報告了舌下水腫。當將兒童和青少年以及成人中的口癢比較時，根據數據，似乎兒童中口癢的報導比青少年和成人中更頻繁。其原因不清楚，但其為進一步研究的課題。然而，兒童中退出的人數與青少年和成人的退出人數沒有差別。此外，兒童中的退出(N-2)與口癢無關。總之，這些研究結果表明SLITone(蟎和草)具有良好的耐受性，和可安全地進行起始治療而無需增加劑量期。參考文獻(1)WilsonDR，TorresLM，DurhamSR.Sublingualimmunotherapyforallergicrhinitis:systematicreviewandmeta-analysis.Allergy2005;60(1):4-12.(2)0sterbergL，BlaschkeT.Adherencetomedication.NEnglJMed2005;353(5):487-497.(3)BousquetJ，LockeyRF，MailingHJ.WHOPositionPaper.Allergenimmunotherapy:Therapeuticvaccinesforallergicdiseases.Allergy1998;53(44):H2.(4)PajnoGB，MorabitoL，BarberioG，ParmianiS.Clinicalandimmunologiceffectsoflong—termsublingualimmunotherapyinasthmaticchildrensensitizedtomites:adouble-blind,placebo-controlledstudy.Allergy2000;55(9):842-849.(5)CanonicaGW，PassalacquaG.Noninjectionroutesforimmunotherapy.JAllergyClinImmunol2003;111(3):437-448.(6)QuirinoT，IemoliE,SicilianiE，ParmianiS，MilazzoF.Sublingualversusinjectiveimmunotherapyingrasspollenallergicpatients:adoubleblind(doubledummy)study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