快速測定原料血漿醇沉過程中免疫球蛋白g含量的方法
2023-08-05 20:25:26
快速測定原料血漿醇沉過程中免疫球蛋白g含量的方法
【專利摘要】本發明公開了一種快速測定原料血漿醇沉過程中免疫球蛋白G含量的方法，操作簡單，分析快速，能準確測定醇沉液中IgG的含量。具體步驟如下：（1）每間隔10～15min從條件一致的不同批次原料血漿醇沉過程中採集樣品並離心處理；（2）採用近紅外光譜分析儀採集樣品的原始近紅外光譜，並按照常規方法測定樣品中IgG的實際含量；（3）將步驟（2）中所得近紅外光譜數據與IgG實際含量數據相關聯，採用數學方法劃分樣品集為校正集與驗證集，利用化學計量學軟體建立校正集樣品IgG含量的定量模型；（4）所有光譜經過一階導數+SG9點平滑處理之後建立模型，並比較不同變量選擇方法對建模結果的影響；（5）採用驗證集樣品對上述建立的數學模型的預測能力進行驗證。
【專利說明】快速測定原料血漿醇沉過程中免疫球蛋白G含量的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種測量方法，具體涉及一種利用近紅外光譜分析技術快速測定原料血漿醇沉過程中免疫球蛋白G含量的方法。
【背景技術】
[0002]免疫球蛋白G (immunoglobulin G, IgG)是靜脈注射人免疫球蛋白(Intravenouslmmunoglobulin G, IVIG)的主要成分,主要用於治療原發性體液免疫缺陷、特發性血小板減少性紫癜、川崎症候群、格林.巴利症候群和新生兒ABO溶血症，此外，IVIG還可用於重症肌無力、系統性紅斑狼瘡等。
[0003]IVIG獨特的藥理活性使得其需求量急劇增加，國內外所生產產品多處於供不應求階段。增加生產量提高IgG收率不僅是解決國內外現狀的有效途徑，也有利於稀缺生物資源原料血漿的綜合開發利用。從原料血漿中以乙醇沉澱得到F I + II + III是生產IVIG的重要環節，其中上清液中殘留的IgG含量是評價醇沉效果的重要指標，對於提高IVIG收率，綜合利用血漿具有重要意義。目前IgG的含量測定方法主要包括免疫比濁法、免疫擴散法、紫外分光光度法等，這些方法耗費試劑、方法複雜，過程繁瑣，測試費用昂貴，操作時間長，耗時耗力，操作複雜，不能滿足實際生產過程中快速分析的需要，因此提出一種快速的分析方法顯得尤為重要。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是為克服上述現有技術的不足，提供一種快速測定原料血漿醇沉過程中免疫球蛋白G含量的方法，操作簡單，分析快速，能準確測定醇沉液中IgG的含量，對於提高血漿綜合利用率、靜注人免疫球蛋白G工藝優化和醇沉過程控制提供數據支持。
[0005]為實現上述目的，本發明採用下述技術方案:
[0006]一種快速測定原料血漿醇沉過程中免疫球蛋白G含量的方法，具體步驟如下:
[0007](I)每間隔10?15min從條件一致的不同批次原料血漿醇沉過程中採集樣品並離心處理；
[0008](2)採用近紅外光譜分析儀採集樣品的原始近紅外光譜，並按照常規方法測定樣品中IgG的實際含量；
[0009](3)將步驟(2)中所得近紅外光譜數據與IgG實際含量數據相關聯，採用數學方法劃分樣品集為校正集與驗證集，利用化學計量學軟體建立校正集樣品IgG含量的定量模型；
[0010](4)所有光譜經過一階導數+SG9點平滑處理之後建立模型，並比較不同變量選擇方法對建模結果的影響；
[0011](5)採用驗證集樣品對上述建立的數學模型的預測能力進行驗證。
[0012]所述步驟(I)中，間隔時間優選為1min。
[0013]所述步驟(I)中，每一批次的醇沉時間為80min，取醇沉條件一致的7個批次，共採集得到63個樣品，每個樣品的量為lmL，4°C離心處理所有樣品。
[0014]所述步驟(1)中，原料血漿為人血漿。
[0015]所述步驟(2 )中，常規方法是指免疫比濁法或免疫擴散法或紫外分光光度法。
[0016]優選的，樣品中IgG實際含量的測定方法參照藥典選擇紫外分光光度法。
[0017]所述步驟(2)中近紅外光譜儀為Antaris II傅立葉變換近紅外光譜儀，掃描範圍為lOOOO100cnT1，解析度為8CHT1，掃描次數32次，每小時採集一次背景。
[0018]所述步驟(3)中，所採用數學方法為K-S分類方法，劃分為42個校正集與21個驗證集，所採用化學計量學軟體為TQ Analyst及MATLAB R2010a化學計量學軟體。
[0019]所述步驟(4)的具體方法為:
[0020]光譜經過一階導數+SG9點平滑後在全光譜範圍區間，即lOOOO100cnT1內考察不同的變量選擇方法對模型性能的影響，採用留一法交互驗證法確定模型的最佳主因子數，以校正集相關係數R。、交互驗證均方根誤差(RMSECV)、驗證集相關係數Rp、預測均方根誤差(RMSEP)為評價指標，以相關係數法、連續投影算法(SPA)、間隔偏最小二乘法(iPLS)選擇最佳光譜區間，最終選擇最佳光譜區間為10000-7600(^1'
[0021]本發明的有益效果是，近紅外光譜分析技術反映了含氫基團的倍頻與合頻吸收，具有準確、快速、不消耗試劑及環境友好等諸多優點，是過程分析技術的有力工具。通過實驗驗證，對於原料血漿醇沉過程中免疫球蛋白G的含量測定，採用近紅外光譜分析的方法準確性高，分析結果可靠，並且，與常規方法相比，具有方法簡單、操作時間短、操作方便等優勢，因此，完全可以利用近紅外光譜法代替常規方法快速測定原料血漿醇沉過程中免疫球蛋白G的含量，這對於提高血漿綜合利用率、IVIG工藝優化和醇沉過程控制也提供了快速的技術數據支持。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0022]圖1為本發明採集的原料血漿醇沉液的原始透過光譜；
[0023]圖2為本發明獲得的經過一階導數+SG9點平滑預處理後的圖譜；
[0024]圖3為本發明獲得的iPLS所選擇的區間圖譜；
[0025]圖4為本發明獲得的校正集樣品真實值和預測值相關係數圖。
【具體實施方式】
[0026]下面結合附圖和實施例對本發明進行進一步的闡述，應該說明的是，下述說明僅是為了解釋本發明，並不對其內容進行限定。
[0027]實施例1
[0028](I)每間隔1min從原料血漿醇沉過程中採集ImL樣品，每一批次醇沉時間為80min。擇取醇沉條件一致的7個批次,共採集得到63個樣品,4°C、5000rpm的條件下離心樣品20min,採用Antarais II傅立葉變換近紅外光譜儀(Thermo Fisher, USA)採集上清液樣品光譜，採集條件為透射模式，掃描範圍為lOOOO^OOOcnT1，解析度為8CHT1，掃描次數32次，每小時掃描一次背景，採集光譜前儀器開機預熱至少30min使儀器穩定，所述上清液樣品的原始光譜如圖1所示。
[0029](2)採用紫外分光光度法測定樣品中IgG的實際含量:取待檢樣品20 μ L於乾淨試管中，按序向試管中加入已預熱至37°C的稀釋後的抗體液(中國生物製品檢定所，凍幹抗人IgG血清，批號20070101，效價1:80，規格ImL/支)2.0mL,混勻，在37°C水浴中保溫lh，輕輕搖勻，按序在340nm波長下測定吸光度值。根據標準曲線計算各樣品的IgG含量值。測定值如表1所示。
[0030]表1IgG含量分布表
[0031]
【權利要求】
1.一種快速測定原料血漿醇沉過程中免疫球蛋白G含量的方法，其特徵在於，具體步驟如下: (1)每間隔10~15min從條件一致的不同批次原料血漿醇沉過程中採集樣品並離心處理； (2)採用近紅外光譜分析儀採集樣品的原始近紅外光譜，並按照常規方法測定樣品中IgG的實際含量； (3)將步驟(2)中所得近紅外光譜數據與IgG實際含量數據相關聯，採用數學方法劃分樣品集為校正集與驗證集，利用化學計量學軟體建立校正集樣品IgG含量的定量模型； (4)所有光譜經過一階導數+SG9點平滑處理之後建立模型，並比較不同變量選擇方法對建模結果的影響； (5)採用驗證集樣品對上述建立的數學模型的預測能力進行驗證。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟(1)中，間隔時間為lOmin。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟(1)中，每一批次的醇沉時間為80min,取醇沉條件一致的7個批次,共採集得到63個樣品,每個樣品的量為ImL, 4°C離心處理所有樣品。
4.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟(1)中，原料血漿為人血漿。
5.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟(2)中，常規方法是指免疫比濁法或免疫擴散法或紫外分光光度法。
6.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟(2)中近紅外光譜儀為Antaris II傅立葉變換近紅外光譜儀，掃描範圍為lOOOO100cnT1，解析度為8CHT1，掃描次數32次，每小時採集一次背景。
7.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟(3)中，所採用數學方法為K-S分類方法，劃分為42個校正集與21個驗證集，所採用化學計量學軟體為TQ Analyst及MATLAB R2010a化學計量學軟體。
8.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟(4)的具體方法為: 光譜經過一階導數+SG9點平滑後在全光譜範圍區間，即lOOOO100cnT1內考察不同的變量選擇方法對模型性能的影響，採用留一法交互驗證法確定模型的最佳主因子數，以校正集相關係數R。、交互驗證均方根誤差、驗證集相關係數Rp、預測均方根誤差為評價指標，以相關係數法、連續投影算法、間隔偏最小二乘法選擇最佳光譜區間，最終選擇最佳光譜區間為 10000-7600(^1。
【文檔編號】G01N21/359GK104048938SQ201310082861
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2013年3月15日 優先權日:2013年3月15日
【發明者】臧恆昌, 龐廣禮, 張惠, 仲立軍, 姜瑋, 李連, 王金鳳 申請人:山東大學