誘導針對靶抗原的免疫應答的抗原結合分子的製作方法

2023-08-06 02:24:26 5

誘導針對靶抗原的免疫應答的抗原結合分子的製作方法
【專利摘要】本發明人發現，在給予了含有抗原結合活性隨離子濃度條件而變化的抗原結合結構域和在pH中性範圍條件下具有FcRn結合活性的FcRn結合結構域的抗原結合分子的生物體中，誘導了針對該抗原的免疫應答。此外，本發明人發現，在給予了含有抗原結合活性隨離子濃度條件而變化的抗原結合結構域和在pH中性範圍條件下具有FcRn結合活性的FcRn結合結構域的抗原結合分子的生物體中，誘導了針對該抗原的免疫應答的同時，還兼具針對表達該抗原結合分子所結合的抗原的外源生物物種或癌細胞等的損傷作用或生長抑制作用。
【專利說明】誘導針對靶抗原的免疫應答的抗原結合分子 【技術領域】 本發明提供含有誘導針對靶抗原的免疫應答的抗原結合分子作為有效成分的藥物組 合物或使用該藥物組合物的治療方法。此外，提供含有以下抗原結合分子作為有效成分的 藥物組合物或使用該藥物組合物的治療方法：在誘導上述免疫應答的同時，兼具針對表達 靶抗原的細胞的損傷作用（細胞毒活性）或生長抑制作用（細胞生長抑制活性）的抗原結 合分子。 【背景技術】 迄今嘗試開發面向腫瘤細胞的多種治療疫苗。這是因為，由於存在可被生物體的免疫 系統識別的、據信在腫瘤細胞和正常細胞之間存在的質的或量的差異，所以認為通過利用 這樣的差異（新表位（neoepitope))的疫苗所致的主動的、特異性敏化作用刺激的免疫系 統可識別、排除腫瘤細胞。 為了引起這樣的抗腫瘤應答，認為必須滿足至少2個條件。第一，腫瘤細胞必須表達正 常細胞中不出現的抗原，或者主要在質方面可區別正常細胞和腫瘤細胞的程度的抗原。第 二，必須通過疫苗等活化以便免疫系統與靶抗原反應。據信腫瘤的免疫療法中的重大障礙 是腫瘤的免疫原性特別是在人體中弱。 近年來,發現了可構成免疫系統攻擊對象的含有這樣的新表位的腫瘤相關抗原和腫瘤 特異性抗原。然而，一般認為，免疫系統之所以不能排除表達有這些新表位的腫瘤，不是因 為不存在新表位，而是針對這些新表位的免疫應答不充分。 為了以細胞為基礎的癌的免疫療法，開發了兩種一般策略。一種是將在體外擴繁的腫 瘤反應性T淋巴細胞再次移入患者的過繼免疫療法，另一種是以引起針對腫瘤抗原的新的 或更強的免疫應答、導致系統性腫瘤應答為目的使用腫瘤細胞的主動免疫療法。 以主動免疫療法為基礎的腫瘤疫苗通過多種方法製備。為了誘導針對腫瘤抗原的免疫 應答，製備了與卡介苗（Bacillus Calmette Guerin) (BCG)這樣的免疫刺激佐劑混合的放 射線照射腫瘤細胞（非專利文獻1)，例如被遺傳改變而產生細胞因子的腫瘤細胞（非專利 文獻2)、異質化的自體腫瘤細胞（非專利文獻3)等。然而，腫瘤細胞的免疫原性低，據信其 原因並非腫瘤抗原的質的問題，而是其量的問題。 另一方面，已知抗體通過將所結合的抗原交叉提呈給抗原提呈細胞來誘導針對抗原的 體液免疫應答（產生針對抗原的抗體）和細胞免疫應答（產生針對抗原的CD8陽性T細 胞），有人報告了可通過給予抗體來誘導針對抗原的獲得性免疫（非專利文獻4)。最近，在 小鼠體內模型中，抗HER2抗體所致的抗腫瘤效果顯示，與所給予的抗體的直接的ADCC相 t匕，通過給予抗體誘導的針對HER2抗原的獲得性免疫發揮更為重要的作用（非專利文獻 5)。實際上，在作為針對HER2的IgGl亞類抗體藥物的赫賽汀（Here印tin)的臨床中，通過 給予赫賽汀誘導獲得性免疫，確認了針對HER2的體液免疫應答（非專利文獻6)。在給予赫 賽汀奏效的患者中可見特別是抗HER2抗體效價的上升，所以認為通過給予赫賽汀進行的 獲得性免疫誘導在抗腫瘤效果中發揮重要作用。 抗體因在血液中的穩定性高、副作用也少而作為藥品引人注目（非專利文獻7、非專利 文獻8)。對作為IgG類抗體的效應子功能的抗體依賴性細胞毒活性（以下記為ADCC)、補 體依賴性細胞毒活性（以下記為CDC)的研究迄今多有進行，報告了在人IgG類中，IgGl亞 類抗體具有最高的ADCC活性、CDC活性（非專利文獻9)。此外，啟示了作為IgG類抗體介 導的靶細胞吞噬作用的抗體依賴性細胞介導性吞噬作用（ADCP)也是抗體的效應子功能之 一（非專利文獻10、非專利文獻11)。由於可使IgGl亞類抗體對腫瘤發揮這些效應子功能， IgGl亞類抗體被用作針對癌抗原的大部分抗體藥物。 IgG抗體為了介導ADCC、ADCP活性，IgG抗體的Fc區與殺傷細胞、天然殺傷細胞、活化 的巨噬細胞等效應細胞表面上存在的抗體受體（以下記為FcyR)的結合是必要的。在人 體中，作為 Fc γ R 蛋白家族報告了 Fc γ RIa、Fc γ RIIa、Fc γ RIIb、Fc γ RIIIa、Fc γ Rlllb 的 同種型，也報告了各自的同種異型（非專利文獻12)。 ADCC和ADCP等細胞毒性的效應子功能增強作為有望用於增強抗癌抗體的抗腫瘤效果 的手段而引人注目。對於以抗體的抗腫瘤效果為目的的Fc γ R介導的效應子功能的重要 性，使用小鼠模型進行了報告（非專利文獻13、非專利文獻14)。此外，在人體中的臨床效果 與FcYRIIIa的高親和性多型同種異型（V158)和低親和性多型同種異型（F158)之間觀察 到關聯（非專利文獻15)。這些報告啟示，具有與特定Fc γ R的結合優化了的Fc區的抗體 介導更強的效應子功能，由此發揮更有效的抗腫瘤效果。抗體針對含有Fc γ RIa、Fc γ Rlla、 Fc γ RIIIa、Fc γ Rlllb的活化受體、含有Fc γ Rllb的抑制性受體的各自的親和性的平衡是 優化抗體效應子功能方面重要的要素。由於通過增強針對活化受體的親和性可賦予抗體介 導更強的效應子功能的性質（非專利文獻16)，作為增強或提高針對癌抗原的抗體藥物的 抗腫瘤活性的抗體工程的方法迄今已有種種報告。 業已顯示，對於Fc區和Fc γ R的結合，抗體的鉸鏈區和CH2結構域內的數個胺基酸殘 基以及與CH2結構域結合的EU編號297位Asn上附加的糖鏈是重要的（非專利文獻9、非 專利文獻17、非專利文獻18)。以該結合處為中心，迄今研究了具有各種Fc γ R結合特性的 Fc區變體，得到具有更高的針對活化Fc γ R的親和性的Fc區變體（專利文獻1、專利文獻 2)。例如，Lazar等人通過將人IgGl的EU編號239位Ser、330位Ala、332位lie分別置換 為八811、1^11、6111而成功地使人1861與人？(^1?111 &(￥158)的結合增加至約370倍（非專 利文獻19、專利文獻2)。該改變體與野生型相比，與FcYRIIIa和FcYlIb的結合比（A/I 比）為約9倍。此外，Shinkawa等人通過使EU編號297位Asn上附加的糖鏈的巖藻糖缺 失而成功地使與Fc γ RIIla的結合增加至約100倍（非專利文獻20)。通過這些方法，可大 幅提高人IgGl相較於天然型人IgGl的ADCC活性。 如上所述通過抗體工程增強ADCC的方法多有報告，但是迄今使給予抗體對獲得性免 疫的誘導增強或提高的抗體工程方法沒有報告。作為誘導針對癌抗原的獲得性免疫的方 法，報告了通過使欲誘導獲得性免疫的癌抗原融合於與抗原提呈細胞中表達的DEC-205或 高甘露糖受體結合的抗體來促進癌抗原攝入抗原提呈細胞中和抗原提呈的方法（非專利 文獻21)，但是，對於這些方法，並非上述抗HER2抗體那樣抗體所結合的靶癌抗原。即，因 為是誘導針對融合於抗體自身的癌抗原的獲得性免疫的方法，所以抗體自身不能與癌抗原 結合，具有不能對癌抗原發揮直接作用的缺點。此外，在該方法中，不僅誘導針對融合於抗 體的癌抗原的獲得性免疫，而且還誘導針對用於靶向抗原提呈細胞的抗體自身的獲得性免 疫，因而認為，由於抗藥物抗體的出現與效果的減弱相關，故以治療為目的則該方法是不優 選的。 根據以上內容，雖然期望通過給予具有靶抗原結合活性的抗原結合分子來誘導針對 該靶抗原的獲得性免疫，但是通過這樣的方法來增強或提高獲得性免疫的工程方法未見報 生 1=1 〇 現有技術文獻 專利文獻 專利文獻 1 :W02000/042072 專利文獻 2 :W02006/019447 非專利文獻 非 專 利文獻 1 ：Oettgen,H.F. , and Old,L.J., The history of cancer immunotherapy. , Biological Therapy of Cancer (1991) 87_119DeVita 等編 非專利文獻 2:Zatloukal K，Schmidt W，Cotten M，Wagner E，Stingl G，Birnstiel ML. , Somatic gene therapy for cancer: the utility of transferrinfection in generating' tumor vaccines' ·，Gene (1993) 135, 199-207 非專利文獻 3 :Bronte V，Tsung K，Rao JB，Chen PW，Wang M，Rosenberg SA，Restifo NP.，IL_2enhances the function of recombinant poxvirus-based vaccines in the treatment of established pulmonary metastases. , J. 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【發明內容】
發明要解決的課題 本發明鑑於上述情況而完成，其目的在於提供含有下述抗原結合分子作為有效成分的 藥物組合物或使用該藥物組合物的治療方法：通過給予被外源性生物物種感染的或罹患癌 的對象誘導該對象的免疫應答的抗原結合分子。此外，提供含有以下抗原結合分子作為有 效成分的藥物組合物或使用該藥物組合物的治療方法：在誘導上述免疫應答的同時，兼具 針對感染的外源性生物物種或癌細胞的損傷作用（細胞毒活性）或生長抑制作用（細胞生 長抑制活性）的抗原結合分子。 解決課題的手段 本發明人發現，在給予了含有抗原結合結構域和FcRn結合結構域的抗原結合分子的 生物體中，誘導了針對抗原的免疫應答，所述抗原結合結構域針對該抗原的結合活性隨離 子濃度條件而變化，所述FcRn結合結構域在pH中性範圍條件下具有FcRn結合活性。進一 步地，本發明人發現，給予了含有抗原結合結構域和FcRn結合結構域的抗原結合分子的生 物體中，在誘導針對抗原的免疫應答的同時，可兼具針對表達該抗原結合分子所結合的抗 原的外源性生物物種或癌細胞等的損傷作用或生長抑制作用，所述抗原結合結構域針對該 抗原的結合活性隨離子濃度條件而變化，所述FcRn結合結構域在pH中性範圍條件下具有 FcRn結合活性。本發明人基於上述發現明確了，本發明的抗原結合分子作為通過給予被外 源性生物物種感染的或罹患癌的對象來誘導該對象的免疫應答的藥物組合物有用。此外， 本發明人明確了，本發明的抗原結合分子作為通過給予被外源性生物物種感染的或罹患癌 的對象而誘導該對象的免疫應答的同時，兼具針對該外源性生物物種或癌細胞的損傷作用 或生長抑制作用的藥物組合物有用。此外，發現了這些藥物組合物的製造方法。 艮P，本發明更具體地提供以下的[1]?[47]。
[〇〇〇1] 誘導針對抗原的免疫應答的藥物組合物，其中，該藥物組合物包含含有抗原結合 結構域和FcRn結合結構域的抗原結合分子作為有效成分，所述抗原結合結構域對抗原的 結合活性隨離子濃度條件而變化，所述FcRn結合結構域在pH中性範圍條件下具有FcRn結 合活性。
[0002] [1]的藥物組合物，其中，所述離子濃度為鈣離子濃度。
[0003] [2]的藥物組合物，其中，所述抗原結合結構域為具有下述特徵的抗原結合結構 域：與低鈣離子濃度條件下對該抗原的結合活性相比，高鈣離子濃度條件下的抗原結合活 性高。
[0004] [1]的藥物組合物，其中，所述離子濃度條件為pH條件。
[0005] [4]的藥物組合物，其中，所述抗原結合結構域為具有下述特徵的抗原結合結構 域：與pH酸性範圍條件下對該抗原的結合活性相比，pH中性範圍條件下的抗原結合活性 商。
[0006] [1]?[5]中任一項的藥物組合物，其中，所述抗原結合分子為具有針對所述抗原 的中和活性的抗原結合分子。
[0007] [1]?[6]中任一項的藥物組合物，其中，所述抗原結合分子為具有針對表達所述 抗原的細胞的細胞毒活性的抗原結合分子。
[0008] [1]?[7]中任一項的藥物組合物，其中，所述FcRn結合結構域包含抗體的Fc區。
[0009] [8]的藥物組合物，其中，所述Fc區為下述Fc區：在Fc區的以EU編號表示的位 點中，選自257位、308位、428位和434位的至少一個以上的胺基酸與天然型Fc區對應位 點的胺基酸不同的Fc區。
[〇〇1〇] [8]或[9]的藥物組合物，其中，所述Fc區為含有Fc區的以EU編號表示的選自以 下的至少一個以上的胺基酸的Fc區： 257位胺基酸為Ala， 308位胺基酸為Pro, 428位胺基酸為Leu，和 434位胺基酸為Tyr。
[0011] [8]?[10]中任一項的藥物組合物，其中，所述Fc區的Fc γ受體結合活性具有下 述特徵：與EU編號297位連接的糖鏈為含巖藻糖糖鏈的天然型人IgGFc區的Fc γ受體結 合活性相比高。
[0012] [11]的藥物組合物，其中，所述Fc γ 受體為 Fc YRIa、Fc YRIIa(R)、Fc YRIIa(H)、 Fc YRIIb、Fc YRIIIa(V)或 Fc YRIIIa(F)。
[0013] [11]或[12]的藥物組合物，其中，所述Fc區為下述Fc區：在Fc區中以EU編號 表示的位點中，選自以下的至少一個以上的胺基酸與天然型Fc區對應位點的胺基酸不同 的 Fc 區：221 位、222 位、223 位、224 位、225 位、227 位、228 位、230 位、231 位、232 位、233 位、234 位、235 位、236 位、237 位、238 位、239 位、240 位、241 位、243 位、244 位、245 位、246 位、247 位、249 位、250 位、251 位、254 位、255 位、256 位、258 位、260 位、262 位、263 位、264 位、265 位、266 位、267 位、268 位、269 位、270 位、271 位、272 位、273 位、274 位、275 位、276 位、278 位、279 位、280 位、281 位、282 位、283 位、284 位、285 位、286 位、288 位、290 位、291 位、292 位、293 位、294 位、295 位、296 位、297 位、298 位、299 位、300 位、301 位、302 位、303 位、304 位、305 位、311 位、313 位、315 位、317 位、318 位、320 位、322 位、323 位、324 位、325 位、326 位、327 位、328 位、329 位、330 位、331 位、332 位、333 位、334 位、335 位、336 位、337 位、339 位、376 位、377 位、378 位、379 位、380 位、382 位、385 位、392 位、396 位、421 位、427 位、428位、429位、434位、436位和440位。
[0014] [11]?[13]中任一項的藥物組合物，其中，所述Fc區為在Fc區中以EU編號表示 的位點中含有選自以下的至少一個以上的胺基酸的Fc區： 221位胺基酸為Lys或Tyr中任一個， 222位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個， 223位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Lys中任一個， 224位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個， 225位胺基酸為Glu、Lys或Trp中任一個， 227位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 228位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 230位胺基酸為Ala、Glu、Gly或Tyr中任一個， 231位胺基酸為Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個， 232位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 233 位胺基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 234 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 235 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 236 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 237 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 238 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 239 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 240位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 241位胺基酸為Asp、Glu、Leu、Arg、Trp或Tyr中任一個， 243 位胺基酸為 Leu、Glu、Leu、Gin、Arg、Trp 或 Tyr 中任一個， 244位胺基酸為His， 245位胺基酸為Ala， 246位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 247 位胺基酸為 Ala、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 249位胺基酸為Glu、His、Gin或Tyr中任一個， 250位胺基酸為Glu或Gin中任一個， 251位胺基酸為Phe， 254位胺基酸為Phe、Met或Tyr中任一個， 255位胺基酸為Glu、Leu或Tyr中任一個， 256位胺基酸為Ala、Met或Pro中任一個， 258位胺基酸為Asp、Glu、His、Ser或Tyr中任一個， 260位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 262位胺基酸為Ala、Glu、Phe、lie或Thr中任一個， 263位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 264 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Trp或Tyr中任一個， 265 位胺基酸為 Ala、Leu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 266位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 267 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 268 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val 或 Trp 中任一個， 269 位胺基酸為 Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 270 位胺基酸為 Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個， 271 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 272 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 273位胺基酸為Phe或lie中任一個， 274 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 275位胺基酸為Leu或Trp中任一個， 276 位胺基酸為、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或Tyr中任一個， 278 位胺基酸為 Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val或Trp中任一個， 279位胺基酸為Ala， 280 位胺基酸為 Ala、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gin、Trp 或 Tyr 中任一個， 281位胺基酸為Asp、Lys、Pro或Tyr中任一個， 282位胺基酸為Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個， 283 位胺基酸為 Ala、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Arg 或 Tyr 中任一個， 284位胺基酸為Asp、Glu、Leu、Asn、Thr或Tyr中任一個， 285位胺基酸為Asp、Glu、Lys、Gin、Trp或Tyr中任一個， 286位胺基酸為Glu、Gly、Pro或Tyr中任一個， 288位胺基酸為Asn、Asp、Glu或Tyr中任一個， 290 位胺基酸為 Asp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個， 291 位胺基酸為 Asp、Glu、Gly、His、lie、Gin 或 Thr 中任一個， 292位胺基酸為Ala、Asp、Glu、Pro、Thr或Tyr中任一個， 293 位胺基酸為 Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 294 位胺基酸為 Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 295 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 296 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr 或 Val中任一個， 297 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 298 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Met、Asn、Gin、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 299 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、 Ser、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 300 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val或Trp中任一個， 301位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 302位胺基酸為lie， 303位胺基酸為Asp、Gly或Tyr中任一個， 304位胺基酸為Asp、His、Leu、Asn或Thr中任一個， 305位胺基酸為Glu、lie、Thr或Tyr中任一個， 311位胺基酸為Ala、Asp、Asn、Thr、Val或Tyr中任一個， 313位胺基酸為Phe， 315位胺基酸為Leu， 317位胺基酸為Glu或Gln， 318 位胺基酸為 His、Leu、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 320 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個， 322 位胺基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 323位胺基酸為lie， 324 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個， 325 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 326 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 327 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 328 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 329 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 330 位胺基酸為 Cys、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 331 位胺基酸為 Asp、Phe、His、lie、Leu、Met、Gin、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 332 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 333 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 334 位胺基酸為 Ala、Glu、Phe、lie、Leu、Pro 或 Thr 中任一個， 335 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 336位胺基酸為Glu、Lys或Tyr中任一個， 337位胺基酸為Glu、His或Asn中任一個， 339 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、lie、Lys、Met、Asn、Gin、Arg、Ser 或 Thr 中任一個， 376位胺基酸為Ala或Val中任一個， 377位胺基酸為Gly或Lys中任一個， 378位胺基酸為Asp， 379位胺基酸為Asn， 380位胺基酸為Ala、Asn或Ser中任一個， 382位胺基酸為Ala或lie中任一個， 385位胺基酸為Glu， 392位胺基酸為Thr， 396位胺基酸為Leu， 421位胺基酸為Lys， 427位胺基酸為Asn， 428位胺基酸為Phe或Leu中任一個， 429位胺基酸為Met， 434位胺基酸為Trp， 436位胺基酸為lie，和 440位胺基酸為Gly、His、lie、Leu或Tyr中任一個。
[0015] [11]?[14]的藥物組合物，其中，所述天然型Fc區是：EU編號297位連接的糖鏈 為含巖藻糖糖鏈的人IgGl、人IgG2、人IgG3或人IgG4中任一個的Fc區。
[0016] [11]?[15]中任一項的藥物組合物，其中，所述Fc區是進行了下述修飾的Fc區： 使得Fc區的EU編號297位連接的糖鏈組成為連接巖藻糖缺失糖鏈的Fc區比例變高、或附 加有平分型N-乙醯葡糖胺（bisecting N-acetylglucosamine)的Fc區比例變高。
[0017] 誘導生物體的免疫應答的方法，其中，該方法包括將[1]?[16]的抗原結合分子 給予該生物體內的步驟。
[0018] 誘導免疫應答的抗原結合分子的製造方法，其中，該方法包括：對含有抗原結合活 性隨離子濃度條件而變化的抗原結合結構域的抗原結合分子中所含的FcRn結合結構域賦 予pH中性範圍條件下的FcRn結合活性。
[0019] [18]的方法，其中，所述離子濃度為鈣離子濃度。
[0020] [19]的方法，其中，所述抗原結合結構域為具有下述特徵的抗原結合結構域：與 低鈣離子濃度條件下對該抗原的結合活性相比，高鈣離子濃度條件下的抗原結合活性高。
[0021] [18]的方法，其中，所述離子濃度條件為pH條件。
[0022] [21]的方法，其中，所述抗原結合結構域為具有下述特徵的抗原結合結構域：與 pH酸性範圍條件下對該抗原的結合活性相比，pH中性範圍條件下的抗原結合活性高。
[0023] [18]?[22]中任一項的方法，其中，所述抗原結合分子為具有針對所述抗原的中 和活性的抗原結合分子。
[0024] [18]?[23]中任一項的方法，其中，所述抗原結合分子為具有針對表達所述抗原 的細胞的細胞毒活性的抗原結合分子。
[0025] [18]?[24]中任一項的方法，其中，所述FcRn結合結構域包含抗體的Fc區。
[0026] [25]的方法，其中，該方法包括：置換Fc區的以EU編號表示的位點中選自239位、 252位、257位、286位、307位、308位、428位和434位的至少一個以上的胺基酸的步驟。
[0027] [25]或[26]的方法，其中，該方法包括：進行Fc區的以EU編號表示的位點中選 自以下的至少一個以上的胺基酸置換的步驟： 257位胺基酸向Ala的置換， 308位胺基酸向Pro的置換， 428位胺基酸向Leu的置換，和 434位胺基酸向Tyr的置換。
[0028] [25]?[27]中任一項的方法，其中，該方法包括：使所述Fc區的Fcy受體結合 活性與EU編號297位連接的糖鏈為含巖藻糖糖鏈的天然型人IgGFc區的Fc γ受體結合活 性相比增強的步驟。
[0029] [28]的方法，其中，所述 Fc γ 受體為 Fc YRIa、Fc YRIIa(R)、Fc YRIIaOl)、 Fc YRIIb、Fc YRIIIa(V)或 Fc YRIIIa(F)。
[0030] [28]或[29]的方法，其中，該方法包括置換Fc區中以EU編號表示的位點中選自 以下的至少一個以上的胺基酸的步驟：221位、222位、223位、224位、225位、227位、228位、 230 位、231 位、232 位、233 位、234 位、235 位、236 位、237 位、238 位、239 位、240 位、241 位、 243 位、244 位、245 位、246 位、247 位、249 位、250 位、251 位、254 位、255 位、256 位、258 位、 260 位、262 位、263 位、264 位、265 位、266 位、267 位、268 位、269 位、270 位、271 位、272 位、 273 位、274 位、275 位、276 位、278 位、279 位、280 位、281 位、282 位、283 位、284 位、285 位、 286 位、288 位、290 位、291 位、292 位、293 位、294 位、295 位、296 位、297 位、298 位、299 位、 300 位、301 位、302 位、303 位、304 位、305 位、311 位、313 位、315 位、317 位、318 位、320 位、 322 位、323 位、324 位、325 位、326 位、327 位、328 位、329 位、330 位、331 位、332 位、333 位、 334 位、335 位、336 位、337 位、339 位、376 位、377 位、378 位、379 位、380 位、382 位、385 位、 392 位、396 位、421 位、427 位、428 位、429 位、434 位、436 位和 440 位。
[0031] [28]?[30]中任一項的方法，其中，該方法包括進行Fc區中以EU編號表示的位 點中選自以下的至少一個以上的胺基酸置換的步驟： 221位胺基酸向Lys或Tyr中任一個的置換， 222位胺基酸向Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個的置換， 223位胺基酸向Phe、Trp、Glu或Lys中任一個的置換， 224位胺基酸向Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個的置換， 225位胺基酸向Glu、Lys或Trp中任一個的置換， 227位胺基酸向Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個的置換， 228位胺基酸向Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個的置換， 230位胺基酸向Ala、Glu、Gly或Tyr中任一個的置換， 231位胺基酸向Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個的置換， 232位胺基酸向Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個的置換， 233 位胺基酸向 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 234 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 235 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 236 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 237 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 238 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 239 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 240位胺基酸向Ala、lie、Met或Thr中任一個的置換， 241位胺基酸向Asp、Glu、Leu、Arg、Trp或Tyr中任一個的置換， 243位胺基酸向Leu、Glu、Leu、Gin、Arg、Trp或Tyr中任一個的置換， 244位胺基酸向His的置換， 245位胺基酸向Ala的置換， 246位胺基酸向Asp、Glu、His或Tyr中任一個的置換， 247 位胺基酸向 Ala、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Thr、Val 或 Tyr 中任一個的置換， 249位胺基酸向Glu、His、Gin或Tyr中任一個的置換， 250位胺基酸向Glu或Gin中任一個的置換， 251位胺基酸向Phe的置換， 254位胺基酸向Phe、Met或Tyr中任一個的置換， 255位胺基酸向Glu、Leu或Tyr中任一個的置換， 256位胺基酸向Ala、Met或Pro中任一個的置換， 258位胺基酸向Asp、Glu、His、Ser或Tyr中任一個的置換， 260位胺基酸向Asp、Glu、His或Tyr中任一個的置換， 262位胺基酸向Ala、Glu、Phe、lie或Thr中任一個的置換， 263位胺基酸向Ala、lie、Met或Thr中任一個的置換， 264 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Trp或Tyr中任一個的置換， 265 位胺基酸向 Ala、Leu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 266位胺基酸向Ala、lie、Met或Thr中任一個的置換， 267 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個的置換， 268 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Thr、Val 或 Trp 中任一個的置換， 269 位胺基酸向 Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個的置換， 270 位胺基酸向 Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個的置換， 271 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 272 位胺基酸向 Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個的置換， 273位胺基酸向Phe或lie中任一個的置換， 274 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個的置換， 275位胺基酸向Leu或Trp中任一個的置換， 276 位胺基酸向、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或Tyr中任一個的置換， 278 位胺基酸向 Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val或Trp中任一個的置換， 279位胺基酸向Ala的置換， 280 位胺基酸向 Ala、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gin、Trp 或 Tyr 中任一個的置換， 281位胺基酸向Asp、Lys、Pro或Tyr中任一個的置換， 282位胺基酸向Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個的置換， 283 位胺基酸向 Ala、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Arg 或 Tyr 中任一個的置換， 284位胺基酸向Asp、Glu、Leu、Asn、Thr或Tyr中任一個的置換， 285位胺基酸向Asp、Glu、Lys、Gin、Trp或Tyr中任一個的置換， 286位胺基酸向Glu、Gly、Pro或Tyr中任一個的置換， 288位胺基酸向Asn、Asp、Glu或Tyr中任一個的置換， 290 位胺基酸向 Asp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個的置換， 291位胺基酸向Asp、Glu、Gly、His、lie、Gin或Thr中任一個的置換， 292位胺基酸向Ala、Asp、Glu、Pro、Thr或Tyr中任一個的置換， 293 位胺基酸向 Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個的置換， 294 位胺基酸向 Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個的置換， 295 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個的置換， 296 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr 或 Val中任一個的置換， 297 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 298 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個的置換， 299 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、 Ser、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 300 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 ThiNVal或Trp中任一個的置換， 301位胺基酸向Asp、Glu、His或Tyr中任一個的置換， 302位胺基酸向lie的置換， 303位胺基酸向Asp、Gly或Tyr中任一個的置換， 304位胺基酸向Asp、His、Leu、Asn或Thr中任一個的置換， 305位胺基酸向Glu、lie、Thr或Tyr中任一個的置換， 311位胺基酸向Ala、Asp、Asn、Thr、Val或Tyr中任一個的置換， 313位胺基酸向Phe的置換， 315位胺基酸向Leu的置換， 317位胺基酸向Glu或Gin的置換， 318 位胺基酸向 His、Leu、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val 或 Tyr 中任一個的置換， 320 位胺基酸向 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個的置換， 322 位胺基酸向 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個 的置換， 323位胺基酸向lie的置換， 324 位胺基酸向 Asp、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個的置換， 325 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 326 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個的置換， 327 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 328 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 329 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 330 位胺基酸向 Cys、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 331 位胺基酸向 Asp、Phe、His、lie、Leu、Met、Gin、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個 的置換， 332 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 333 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Val 或 Tyr 中任一個的置換， 334位胺基酸向Ala、Glu、Phe、lie、Leu、Pro或Thr中任一個的置換， 335 位胺基酸向 Asp、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、Trp 或 Tyr 中任一個的置換， 336位胺基酸向Glu、Lys或Tyr中任一個的置換， 337位胺基酸向Glu、His或Asn中任一個的置換， 339 位胺基酸向 Asp、Phe、Gly、lie、Lys、Met、Asn、Gin、Arg、Ser 或 Thr 中任一個的置 換， 376位胺基酸向Ala或Val中任一個的置換， 377位胺基酸向Gly或Lys中任一個的置換， 378位胺基酸向Asp的置換， 379位胺基酸向Asn的置換， 380位胺基酸向Ala、Asn或Ser中任一個的置換， 382位胺基酸向Ala或lie中任一個的置換， 385位胺基酸向Glu的置換， 392位胺基酸向Thr的置換， 396位胺基酸向Leu的置換， 421位胺基酸向Lys的置換， 427位胺基酸向Asn的置換， 428位胺基酸向Phe或Leu中任一個的置換， 429位胺基酸向Met的置換， 434位胺基酸向Trp的置換， 436位胺基酸向lie的置換、和 440位胺基酸向Gly、His、lie、Leu或Tyr中任一個的置換。
[0032] [28]?[31]中任一項的方法，其中，所述天然型Fc區是：EU編號297位連接的糖 鏈為含巖藻糖糖鏈的人IgGl、人IgG2、人IgG3或人IgG4中任一個的Fc區。
[0033] [28]?[32]中任一項的方法，其中，該方法包括修飾所述Fc區的步驟，使得Fc區 的EU編號297位連接的糖鏈組成為連接巖藻糖缺失糖鏈的Fc區比例變高、或附加有平分 型N-乙醯葡糖胺的Fc區比例變高。
[0034] 誘導免疫應答的藥物組合物的製造方法，其中，該方法包括以下（a)?（f)的步 驟： (a) 獲得高鈣離子濃度條件下抗原結合結構域的抗原結合活性的步驟， (b) 獲得低鈣離子濃度條件下抗原結合結構域的抗原結合活性的步驟， (c) 選擇（a)中得到的抗原結合活性高於（b)中得到的抗原結合活性的抗原結合結構 域的步驟， (d) 將編碼（c)中選擇的抗原結合結構域的多核苷酸與編碼在pH中性範圍條件下具有 FcRn結合活性的FcRn結合結構域的多核苷酸連接的步驟， (e) 將導入了有效連接有（d)中得到的多核苷酸的載體的細胞進行培養的步驟，和 (f)由（e)中培養的細胞的培養液回收抗原結合分子的步驟。
[0035] 誘導免疫應答的藥物組合物的製造方法，其中，該方法包括以下（a)?（f)的步 驟： (a) 獲得高鈣離子濃度條件下抗體的抗原結合活性的步驟， (b) 獲得低鈣離子濃度條件下抗體的抗原結合活性的步驟， (c) 選擇（a)中得到的抗原結合活性高於（b)中得到的抗原結合活性的抗體的步驟， (d) 將編碼（c)中選擇的抗體的抗原結合結構域的多核苷酸與編碼在pH中性範圍條件 下具有FcRn結合活性的FcRn結合結構域的多核苷酸連接的步驟， (e) 將導入了有效連接有（d)中得到的多核苷酸的載體的細胞進行培養的步驟，和 (f) 由（e)中培養的細胞的培養液回收抗原結合分子的步驟。
[0036] 抗原結合分子的製造方法，其中，該方法包括以下（a)?（f)的步驟： (a) 獲得pH中性範圍條件下抗原結合結構域的抗原結合活性的步驟， (b) 獲得pH酸性範圍條件下抗原結合結構域的抗原結合活性的步驟， (c) 選擇（a)中得到的抗原結合活性高於（b)中得到的抗原結合活性的抗原結合結構 域的步驟， (d) 將編碼（c)中選擇的抗原結合結構域的多核苷酸與編碼在pH中性範圍條件下具有 FcRn結合活性的FcRn結合結構域的多核苷酸連接的步驟， (e) 將導入了有效連接有（d)中得到的多核苷酸的載體的細胞進行培養的步驟，和 (f) 由（e)中培養的細胞的培養液回收抗原結合分子的步驟。
[0037] 抗原結合分子的製造方法，其中，該方法包括以下（a)?（f)的步驟： (a) 獲得pH中性範圍條件下抗體的抗原結合活性的步驟， (b) 獲得pH酸性範圍條件下抗體的抗原結合活性的步驟， (c) 選擇（a)中得到的抗原結合活性高於（b)中得到的抗原結合活性的抗體的步驟， (d) 將編碼（c)中選擇的抗體的抗原結合結構域的多核苷酸與編碼在pH中性範圍條件 下具有FcRn結合活性的FcRn結合結構域的多核苷酸連接的步驟， (e) 將導入了有效連接有（d)中得到的多核苷酸的載體的細胞進行培養的步驟，和 (f) 由（e)中培養的細胞的培養液回收抗原結合分子的步驟。
[0038] [34]?[37]中任一項的方法，其中，所述抗原結合分子為具有針對所述抗原的中 和活性的抗原結合分子。
[0039] [34]?[38]中任一項的方法，其中，所述抗原結合分子為具有針對表達所述抗原 的細胞的細胞毒活性的抗原結合分子。
[0040] [34]?[39]中任一項的方法，其中，所述FcRn結合結構域包含抗體的Fc區。
[0041] [40]的方法，其中，所述Fc區為下述Fc區：在Fc區的以EU編號表示的位點中， 選自257位、308位、428位和434位的至少一個以上的胺基酸與天然型Fc區對應位點的氨 基酸不同。
[0042] [40]或[41]的方法，其中，所述Fc區為含有Fc區的以EU編號表示的選自以下的 至少一個以上的胺基酸的Fc區： 257位胺基酸為Ala， 308位胺基酸為Pro, 428位胺基酸為Leu，和 434位胺基酸為Tyr。
[0043] [40]?[42]中任一項的方法，其中，所述Fc區的Fcy受體結合活性具有下述特 徵：與EU編號297位連接的糖鏈為含巖藻糖糖鏈的天然型人IgGFc區的Fc γ受體結合活 性相比高。
[0044] [43]的方法，其中，所述 Fcy 受體為 FcYRIa、FcYRIIa(R)、FcYRIIa〇l)、 Fc γ Rllb、Fc γ RIIIa(V)或 Fc γ RIIIa(F)。
[0045] [43]或[44]的方法，其中，所述Fc區為含有Fc區中以EU編號表示的位點中選自 以下的至少一個以上的胺基酸的Fc區： 221位胺基酸為Lys或Tyi*中任一個， 222位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個， 223位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Lys中任一個， 224位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個， 225位胺基酸為Glu、Lys或Trp中任一個， 227位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 228位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 230位胺基酸為Ala、Glu、Gly或Tyr中任一個， 231位胺基酸為Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個， 232位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 233 位胺基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 234 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 235 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 236 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 237 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 238 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 239 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 240位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 241位胺基酸為Asp、Glu、Leu、Arg、Trp或Tyr中任一個， 243 位胺基酸為 Leu、Glu、Leu、Gin、Arg、Trp 或 Tyr 中任一個， 244位胺基酸為His， 245位胺基酸為Ala， 246位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 247 位胺基酸為 Ala、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 249位胺基酸為Glu、His、Gin或Tyr中任一個， 250位胺基酸為Glu或Gin中任一個， 251位胺基酸為Phe， 254位胺基酸為Phe、Met或Tyr中任一個， 255位胺基酸為Glu、Leu或Tyr中任一個， 256位胺基酸為Ala、Met或Pro中任一個， 258位胺基酸為Asp、Glu、His、Ser或Tyr中任一個， 260位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 262位胺基酸為Ala、Glu、Phe、lie或Thr中任一個， 263位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 264 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Trp或Tyr中任一個， 265 位胺基酸為 Ala、Leu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 266位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 267 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 268 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val 或 Trp 中任一個， 269 位胺基酸為 Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 270 位胺基酸為 Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個， 271 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 272 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 273位胺基酸為Phe或lie中任一個， 274 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 275位胺基酸為Leu或Trp中任一個， 276 位胺基酸為、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或Tyr中任一個， 278 位胺基酸為 Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val或Trp中任一個， 279位胺基酸為Ala， 280 位胺基酸為 Ala、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gin、Trp 或 Tyr 中任一個， 281位胺基酸為Asp、Lys、Pro或Tyr中任一個， 282位胺基酸為Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個， 283 位胺基酸為 Ala、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Arg 或 Tyr 中任一個， 284位胺基酸為Asp、Glu、Leu、Asn、Thr或Tyr中任一個， 285位胺基酸為Asp、Glu、Lys、Gin、Trp或Tyr中任一個， 286位胺基酸為Glu、Gly、Pro或Tyr中任一個， 288位胺基酸為Asn、Asp、Glu或Tyr中任一個， 290 位胺基酸為 Asp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個， 291 位胺基酸為 Asp、Glu、Gly、His、lie、Gin 或 Thr 中任一個， 292位胺基酸為Ala、Asp、Glu、Pro、Thr或Tyr中任一個， 293 位胺基酸為 Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 294 位胺基酸為 Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 295 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 296 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr 或 Val中任一個， 297 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 298 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 299 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、 Ser、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 300 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val或Trp中任一個， 301位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 302位胺基酸為lie， 303位胺基酸為Asp、Gly或Tyr中任一個， 304位胺基酸為Asp、His、Leu、Asn或Thr中任一個， 305位胺基酸為Glu、lie、Thr或Tyr中任一個， 311位胺基酸為Ala、Asp、Asn、Thr、Val或Tyr中任一個， 313位胺基酸為Phe， 315位胺基酸為Leu， 317位胺基酸為Glu或Gln， 318 位胺基酸為 His、Leu、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 320 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個， 322 位胺基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 323位胺基酸為lie， 324 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個， 325 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 326 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 327 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 328 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 329 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 330 位胺基酸為 Cys、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 331 位胺基酸為 Asp、Phe、His、Ile、Leu、Met、Gln、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 332 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 333 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 334 位胺基酸為 Ala、Glu、Phe、lie、Leu、Pro 或 Thr 中任一個， 335 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 336位胺基酸為Glu、Lys或Tyr中任一個， 337位胺基酸為Glu、His或Asn中任一個， 339 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、lie、Lys、Met、Asn、Gin、Arg、Ser 或 Thr 中任一個， 376位胺基酸為Ala或Val中任一個， 377位胺基酸為Gly或Lys中任一個， 378位胺基酸為Asp， 379位胺基酸為Asn， 380位胺基酸為Ala、Asn或Ser中任一個， 382位胺基酸為Ala或lie中任一個， 385位胺基酸為Glu， 392位胺基酸為Thr， 396位胺基酸為Leu， 421位胺基酸為Lys， 427位胺基酸為Asn， 428位胺基酸為Phe或Leu中任一個， 429位胺基酸為Met， 434位胺基酸為Trp， 436位胺基酸為lie，和 440位胺基酸為Gly、His、lie、Leu或Tyr中任一個。
[0046] [43]?[45]中任一項的方法，其中，所述天然型Fc區是：EU編號297位連接的糖 鏈為含巖藻糖糖鏈的人IgGl、人IgG2、人IgG3或人IgG4中任一個的Fc區。
[0047] [43]?[46]中任一項的方法，其中，所述Fc區是進行了下述修飾的Fc區：使得 Fc區的EU編號297位連接的糖鏈組成為連接巖藻糖缺失糖鏈的Fc區比例變高、或附加有 平分型N-乙醯葡糖胺的Fc區比例變高。 發明效果 根據本發明，提供通過通常的抗體難以實現的藥物組合物及其製造方法，該藥物組合 物含有通過其向生物體內的給予不僅可以發揮針對靶抗原的藥理作用，而且可以誘導針對 靶抗原的免疫應答的抗原結合分子。由此，通過具有靶抗原結合活性、針對靶細胞的細胞毒 活性和細胞生長抑制活性，同時誘導針對靶抗原的免疫應答，可實現通常的疫苗難以實現 的有效的癌和感染症治療。 【專利附圖】

【附圖說明】 圖1是示出可溶型人IL-6受體穩態模型中抗小鼠 CD4抗體非給予組和給予組中小鼠 血漿中可溶型人IL-6受體濃度變化的圖。橫軸表示自給予抗小鼠 CD4抗體經過的天數，縱 軸表示血漿中可溶型人IL-6受體濃度。 圖2是示出人IL-6受體免疫耐受正常小鼠模型中普通抗IL-6受體抗體和pH依賴性 IL-6受體抗體給予組中小鼠血漿中可溶型人IL-6受體濃度變化的圖。橫軸表示自給予抗 IL-6受體抗體經過的天數，縱軸表示血漿中可溶型人IL-6受體濃度。黑色圓點表示對照小 鼠血漿中可溶型人IL-6受體濃度。空心圓點表示給予了 H54/L28-IgGl的小鼠血漿中可溶 型人IL-6受體濃度，菱形表示給予了 Fv4-IgGl的小鼠血漿中可溶型人IL-6受體濃度。 圖3是示出人IL-6受體免疫耐受正常小鼠模型中增強了 pH7. 4時的FcRn結合的普通 抗IL-6受體抗體和增強了 pH7. 4時的FcRn結合的pH依賴性IL-6受體抗體給予組中小鼠 血漿中可溶型人IL-6受體濃度變化的圖。橫軸表示自給予抗IL-6受體抗體經過的天數， 縱軸表示血漿中可溶型人IL-6受體濃度。黑色圓點表示對照小鼠血漿中可溶型人IL-6受 體濃度。空心圓點、菱形、空心三角形以及X和黑色四角形分別表示給予了 H54/L28-IgGl、 Fv4-IgGl、H54/L28-F157和Fv4-F157的小鼠血漿中可溶型人IL-6受體濃度。 圖4是示出離子濃度依賴性抗原結合分子對可溶型抗原的溶酶體轉移的非限定性作 用模型的圖。在血漿中的離子濃度條件下（pH中性範圍或者高鈣離子濃度條件下），在血 漿中與可溶型抗原結合的抗原結合分子（A)通過非特異性胞吞作用等被攝入細胞內（B)之 後，經由FcRn結合結構域與轉移的酸性內體中表達的FcRn在酸性pH條件下結合，與此同 時，在內體內的離子濃度條件下（pH酸性範圍或者低鈣離子濃度條件下），抗原解離（C)。解 離的抗原轉移到溶酶體後被分解（D)，另一方面，解離了抗原的抗原結合分子在與FcRn結 合的狀態下轉移到細胞表面，在血漿中的中性pH條件下從FcRn上解離，返回血漿中（E)。 圖5是示出具有pH7. 4的FcRn結合活性的抗原結合分子對可溶型抗原的溶酶體轉移 的非限定性作用模型的圖。在血漿中離子濃度條件下（pH中性範圍或者高鈣離子濃度條件 下），在血漿中與可溶型抗原結合的抗原結合分子經由FcRn結合結構域在pH中性性條件下 與FcRn結合（A)後，通過胞吞作用被攝入到細胞內（B)。轉移到酸性內體內的抗原結合分 子在內體內的離子濃度條件下（pH酸性範圍或者低鈣離子濃度條件下）不解離抗原（C)，與 抗原結合的抗原結合分子在與FcRn結合的狀態下再循環到細胞表面上（D)。 圖6是示出增強了 pH7. 4時的FcRn結合的離子濃度依賴性抗原結合分子對可溶型抗 原的溶酶體轉移的非限定性作用模型的圖。在血漿中離子濃度條件下（pH中性範圍或者高 鈣離子濃度條件下），在血漿中與可溶型抗原結合的抗原結合分子經由FcRn結合結構域在 pH中性性條件下與FcRn結合（A)後，通過胞吞作用被攝入到細胞內（B)。轉移到酸性內體 內的抗原結合分子在內體內的離子濃度條件下（pH酸性範圍或者低鈣離子濃度條件下）解 離抗原（C)。解離的抗原轉移到溶酶體後被分解（D)，另一方面，解離了抗原的抗原結合分 子在與FcRn結合的狀態下再循環到細胞表面上（E)。 圖7是示出試驗1的3隻小鼠中Fv4-F157給予個體（#7、8和9)按個體的血漿中可 溶型人IL-6受體濃度變化和小鼠抗人IL-6受體抗體的抗體效價變化的圖。橫軸表示自給 予抗IL-6受體抗體經過的天數，左縱軸表示血漿中可溶型人IL-6受體濃度，右縱軸表示作 為小鼠抗hsIL-6R抗體的抗體效價指標的ECL值。實線表示血漿中可溶型人IL-6受體濃 度，虛線表示ECL值。菱形、空心四角形和三角形分別表示#7、8和9的個體血漿中可溶型 人IL-6受體濃度的變化，X、黑色四角形和黑色圓點分別表示#7、8和9的個體中ECL值的 變化。 圖8是示出試驗2的3隻小鼠中Fv4-F157給予個體（#10、11和12)按個體的血漿中 可溶型人IL-6受體濃度變化和小鼠抗人IL-6受體抗體的抗體效價變化的圖。橫軸表示自 給予抗IL-6受體抗體經過的天數，左縱軸表示血漿中可溶型人IL-6受體濃度，右縱軸表示 作為小鼠抗人IL-6受體抗體的抗體效價指標的ECL值。實線表示血漿中可溶型人IL-6受 體濃度，虛線表示ECL值。菱形、空心四角形和三角形分別表示#10、11和12的個體血漿中 的可溶型人IL-6受體濃度，X、黑色四角形和黑色圓點分別表示#10、11和12的個體中ECL 值的變化。 圖9是示出試驗1的3隻小鼠中Fv4-F157給予個體（#7、8和9)按個體的小鼠抗 hsIL-6R抗體的抗體效價變化和小鼠抗Fv4-F157抗體的抗體效價變化的圖。橫軸表示自給 予抗IL-6受體抗體經過的天數，縱軸表示作為小鼠抗人IL-6受體抗體的抗體效價和小鼠 抗Fv4-F157抗體的抗體效價的指標的ECL值。實線表示作為小鼠抗Fv4-F157抗體的抗體 效價指標的ECL值的變化，虛線表示作為小鼠抗人IL-6受體抗體的抗體效價指標的ECL值 的變化。菱形、空心四角形和黑色三角形分別表示#7、8和9的個體中作為小鼠抗Fv4-F157 抗體的抗體效價指標的ECL值的變化，空心四角形、黑色四角形和空心三角形分別表示#7、 8和9的個體中作為小鼠抗人IL-6受體抗體的抗體效價指標的ECL值的變化。 圖10是示出試驗2的3隻小鼠中Fv4-F157給予個體（#10、11和12)按個體的小鼠 抗人IL-6受體抗體的抗體效價變化和小鼠抗Fv4-F157抗體的抗體效價變化的圖。橫軸表 示自給予抗IL-6受體抗體經過的天數，縱軸表示作為小鼠抗人IL-6受體抗體的抗體效價 和小鼠抗Fv4-F157抗體的抗體效價的指標的ECL值。實線表示作為小鼠抗Fv4-F157抗 體的抗體效價指標的ECL值的變化，虛線表示作為小鼠抗hsIL-6R抗體的抗體效價指標的 ECL值的變化。菱形、空心四角形和黑色三角形分別表示#10、11和12的個體中作為小鼠 抗Fv4-F157抗體的抗體效價指標的ECL值的變化，空心四角形、黑色四角形和空心三角形 分別表示#10、11和12的個體中小鼠抗人IL-6受體抗體的抗體效價指標的ECL值的變化。 圖11是示出融合了靶抗原的抗體對癌細胞和抗原提呈細胞的非限定性作用機制模型 的圖。 圖12是示出具有pH中性範圍的FcRn結合活性、對靶抗原具有離子濃度依賴性結合活 性的抗原結合分子對癌細胞和抗原提呈細胞的非限定性作用機制模型的圖。 圖13是示出鈣依賴性結合抗體的血漿中（Ca2+2mM)和內體內（Ca2+3yM)的與抗原的相 互作用方式（i)以及pH和鈣依賴性結合抗體在血漿中（pH7.4、Ca2+2mM)和內體內（pH6.0、 Ca2+3yM)的與抗原的相互作用方式（ii)的圖。 圖14是示出包含人Vk5-2序列的抗體和包含改變了人Vk5-2序列中的糖鏈附加序列 的hVk5-2_L65序列的抗體的離子交換層析的圖。實線表示包含人Vk5-2序列的抗體（重 鏈：CnLH、SEQIDN0:45，和輕鏈 ：hVk5-2、SEQIDN0:50)的層析圖，虛線表示具有hVk5-2_ L65 序列的抗體（重鏈：CM_H(SEQ ID NO:45)、輕鏈：hVk5-2_L65(SEQ ID NO:53))的層析 圖。 圖15是示出由導入了 Ca依賴性地與抗原結合的抗體基因文庫的大腸桿菌分離的克隆 290的序列信息的胺基酸分布（表示為Library)與設計的胺基酸分布（表示為Design)的 關係的圖。橫軸表示以Kabat編號表示的胺基酸的位點。縱軸表示胺基酸的分布比例。 圖16是示出高鈣離子濃度條件（1.2mM)下抗IL-6R抗體（託珠單抗）、6RClIgG_010 抗體、6RClIgG_012抗體和6RClIgG_019抗體的傳感圖的圖。 圖17是示出低鈣離子濃度條件（3μΜ)下抗IL-6R抗體（託珠單抗）、6RClIgG_010抗 體、6RClIgG_012抗體和6RClIgG_019抗體的傳感圖的圖。 圖18是示出通過X射線晶體結構分析確定的6RL#9抗體的Fab片段的重鏈CDR3結構 的圖。（i)是示出鈣離子存在的結晶條件下得到的晶體結構的重鏈CDR3的圖，（ii)是示出 鈣離子不存在的結晶條件下得到的晶體結構的重鏈CDR3的圖。 圖19是示出H54/L28-IgGl抗體、FH4-IgGl抗體和6RL#9-IgGl抗體的正常小鼠血漿 中的抗體濃度變化的圖。 圖20是示出H54/L28-IgGl抗體、FH4-IgGl抗體和6RL#9-IgGl抗體的正常小鼠血漿 中的可溶型人IL-6受體（hsIL-6R)的濃度變化的圖。 圖21是示出H54/L28-N434W抗體、FH4-N434W抗體和6RL#9-N434W抗體的正常小鼠血 漿中的抗體濃度變化的圖。 圖22是示出H54/L28-N434W抗體、FH4-N434W抗體和6RL#9-N434W抗體的正常小鼠血 漿中的可溶型人IL-6受體（hsIL-6R)的濃度變化的圖。 圖23是示出由導入了 pH依賴性地與抗原結合的抗體基因文庫的大腸桿菌分離的克隆 132的序列信息的胺基酸分布（表示為Library)與設計的胺基酸分布（表示為Design)的 關係的圖。橫軸表示以Kabat編號表示的胺基酸的位點。縱軸表示胺基酸分布的比例。 圖24是示出抗IL-6R抗體（託珠單抗）、6RpH#01抗體、6RpH#02抗體和6RpH#03抗體 的pH7. 4時的傳感圖的圖。橫軸表示時間，縱軸表示RU值。 圖25是示出抗IL-6R抗體（託珠單抗）、6RpH#01抗體、6RpH#02抗體和6RpH#03抗體 的pH6. 0時的傳感圖的圖。橫軸表不時間，縱軸表不RU值。 圖 26 是不出抗體非給予組、Fv4_mIgGl、Fv4_mIgG2a、Fv4_mF3、Fv4_mFa30 和 H54/ L28-mF3給予組的平均血漿中hsIL-6R濃度變化的圖。 圖27是示出Fv4-mIgGl給予組的各個體的小鼠抗人IL-6受體抗體（抗hsIL-6R抗 體）的抗體效價變化的圖。 圖28是示出Fv4-mIgG2a給予組的各個體的小鼠抗人IL-6受體抗體（抗hsIL-6R抗 體）的抗體效價變化的圖。 圖29是示出Fv4-mF3給予組的各個體的小鼠抗人IL-6受體抗體（抗hsIL-6R抗體） 的抗體效價變化的圖。 圖30是示出Fv4-mFa30給予組的各個體的小鼠抗人IL-6受體抗體（抗hsIL-6R抗 體）的抗體效價變化的圖。 圖31是示出H54/L28-mF3給予組的各個體的小鼠抗人IL-6受體抗體（抗hsIL-6R抗 體）的抗體效價變化的圖。 圖32A是示意性示出小鼠白介素-6受體（I16ra)基因的基因組DNA結構（1)與插入 的敲入載體（2)的關係的圖。敲入載體具有全長人白介素-6受體（hIL6R)cDNA、hp7序列、 加多腺苷酸信號和新黴素抗性基因。 圖32B是示意性示出小鼠白介素-6受體基因的基因組DNA(a)與敲入載體（b)發生同 源重組產生敲入的基因組DNA(c)的情況的圖。還示出通過使重組酶Cre作用於（c)除去 新黴素抗性基因盒而完成人白介素-6受體基因敲入等位基因（d)的過程。圖中的箭頭示 出用於檢測人白介素-6受體基因的敲入的引物的設定位置。 圖33示出對通過人白介素-6受體基因敲入小鼠的確立過程得到的各基因型進行分析 的PCR的代表例。 圖34是示出人白介素-6受體基因敲入小鼠和野生型小鼠中白介素-6受體的基因表 達特性的圖。 圖35是示出同型和異型的人白介素-6受體基因敲入小鼠和野生型小鼠的血漿中的可 溶型人白介素-6受體（hsIL-6R)濃度的測定結果的圖。KI/KI，KI/+和+/+分別表示同型 敲入小鼠、異型敲入小鼠和野生型。 圖36是示出野生型小鼠和同型的人白介素-6受體基因敲入小鼠中的對種特異性白介 素-6 (配體）的反應性的圖。 【具體實施方式】 以下的定義和詳細說明是為了易於理解本說明書中說明的本發明而提供。 氨某酸 本說明書中，以單字母碼或三字母碼或者該兩種方式書寫胺基酸，例如表示為Ala/A、 Leu/L、Arg/R、Lys/K、Asn/N、Met/M、Asp/D、Phe/F、Cys/C、Pro/P、Gln/Q、Ser/S、Glu/E、Thr/ T、Gly/G、Trp/W、His/H、Tyr/Y、Ile/I、Val/V。 抗原 本說明書中對抗原無特別限定，只要是可通過誘導生物體的免疫應答而成為該生物體 的免疫系統的攻擊對象的分子，就可以為任何抗原。作為抗原的實例，例如可適宜地列舉腫 瘤細胞特異性地表達而正常細胞不表達的分子（新表位）。此外，還適宜地列舉細菌、病毒 等感染生物體的外源性生物物種表達而生物體不表達的分子。所謂"腫瘤細胞特異性地表 達而正常細胞不表達"或"感染生物體的外源性生物物種表達而生物體不表達"，表示"腫瘤 細胞與正常細胞"或"感染生物體的外源性生物物種與生物體"之間存在分子的質或量的差 異。例如，假設是正常細胞也表達、腫瘤細胞表達的量遠大於該正常細胞表達的量的分子， 那麼在本發明中可以說該分子是在腫瘤細胞與正常細胞之間存在分子的量的差異。此外， 假設由相同的胺基酸序列構成的多肽在腫瘤細胞和正常細胞中的表達量為相同程度，即便 如此，當腫瘤細胞表達的多肽進行了磷酸化等翻譯後修飾等，與之相比，正常細胞表達的多 肽沒有進行這樣的修飾等時，在本發明中可以說該分子是在腫瘤細胞與正常細胞之間存在 分子的質的差異。 作為該分子，可適宜地列舉以下作為腫瘤抗原：ALK受體（多營養因子受體）、多營養因 子；KS1/4胰腺癌抗原；卵巢癌抗原（CA125);前列腺酸磷酸酯；前列腺特異性抗原（PSA); 黑色素瘤相關抗原P97 ;黑色素瘤抗原gp75 ;高分子量黑色素瘤抗原（HMW-MAA);前列腺 特異性膜抗原；癌胚抗原（CEA);多形性上皮粘蛋白抗原；人乳脂肪球抗原；CEA、TAG-72、 C017-1A、GICA19-9、CTA-1和LEA等結腸直腸腫瘤相關抗原；伯基特淋巴瘤抗原-38. 13 ; ⑶19 ;人B淋巴瘤抗原-⑶20 ;⑶33 ;神經節苷酯⑶2、神經節苷酯⑶3、神經節苷酯GM2和 神經節苷酯GM3等黑色素瘤特異性抗原；腫瘤特異性移植型細胞表面抗原（TSTA) ;T抗原、 DNA腫瘤病毒和RNA腫瘤病毒的被膜抗原等由病毒誘導的腫瘤抗原；結腸的CEA、5T4癌胚 滋養層糖蛋白和膀胱腫瘤癌胚抗原等癌胚抗原；甲胎蛋白；人肺癌抗原L6和L20等分化 抗原；纖維肉瘤抗原；人白血病T細胞抗原-Gp37 ;擬糖蛋白；鞘脂；EGFR(上皮生長因子受 體）等乳癌抗原；NY-BR-16、NY-BR-16和HER2抗原（pl85HER2);多形性上皮粘蛋白（PEM); 惡性人淋巴細胞抗原-APO-1 ;胎兒紅細胞中存在的I抗原等分化抗原；成人紅細胞中存在 的原內胚層I抗原；移植前的胚；胃癌中存在的I(Ma);乳腺上皮中存在的M18、M39 ;骨髓細 胞中存在的SSEA-1 ;VEP8 ;VEP9 ;Myl ;VM-D5 ;結腸直腸癌中存在的D156-22 ;TRA-l-85(血 型Η);睪丸和卵巢癌中存在的SCP-1 ;結腸癌中存在的C14 ;肺癌中存在的F3 ;胃癌中存在 的ΑΗ6 ;Υ半抗原；胚性癌細胞中存在的Ley ;TL5(血型A) ;Α431細胞中存在的EGF受體； 胰癌中存在的Ε1系列（血型Β);胚性癌細胞中存在的FC10. 2 ;胃癌抗原；腺癌中存在的 C0-514(血型Lea);腺癌中存在的NS-10;C0-43(血型Leb) ;Α431細胞的EGF受體中存在的 G49 ;結腸癌中存在的ΜΗ2(血型ALeb/Ley);結腸癌中存在的19. 9 ;胃癌粘蛋白；骨髓細胞 中存在的T5A7 ;黑色素瘤中存在的R24 ;胚性癌細胞中存在的4. 2、⑶3、D1. 1、OFA-1、GM2、 OFA-2、⑶2和Ml:22:25:8以及4?8細胞階段的胚中存在的SSEA-3和SSEA-4 ;皮下T細胞 淋巴瘤抗原；MART-1抗原；唾液醯Tn(STn)抗原；結腸癌抗原NY-CO-45 ;肺癌抗原NY-LU-12 變體A ;腺癌抗原ART1 ;副腫瘤性相關腦-睪丸癌抗原（癌神經抗原M2、副腫瘤性神經抗 原）；神經癌腹部抗原2(NOVA2);血液細胞癌抗原基因520 ;腫瘤相關抗原C0-029 ;腫瘤相 關抗原 MAGE-C1 (癌 / 睪丸抗原 CT7)、MAGE-B1 (MAGE-XP 抗原）、MAGE-B2 (DAM6)、MAGE-2、 MAGE-4a、MAGE-4b和MAGE-X2 ;癌-睪丸抗原（NY-EOS-1) ;YKL-40和上述多肽中任一個的 片段或對它們進行了修飾的結構等（前述的修飾磷酸基或糖鏈等）。 作為外源性生物物種的抗原，包括以下生物中表達的分子：炭疽桿菌（Bacillus anthracis)(炭疽桿菌、肉毒桿菌（Clostridium botulinum)、鼠疫耶氏菌（Yersinia pestis)、重型天花（Variola major)(天花）和其他痘病毒、兔熱病桿菌（Francisella tularensis)(兔熱病）和引起病毒性出血熱的病毒、LCM、胡寧病毒（Junin virus)、馬丘 波病毒（Machupo virus)、瓜納瑞託病毒（Guanarito virus)和引起拉沙熱的病毒等的 沙粒病毒（Arenavirus)、引起裂谷熱的病毒等的布尼亞病毒（Bunyavirus)和漢坦病毒 (Hantavirus)、杯狀病毒（Calicivirus)、甲型、乙型和C型肝炎、西尼羅病毒（West Nile Virus)、拉克羅斯（LaCrosse)、加利福尼亞腦炎（California encephalitis)、VEE、EEE、 WEE、日本腦炎病毒（Japanese Encephalitis Virus)等病毒性腦炎、科薩努爾森林病毒 (Kyasanur Forest Virus)、蝶傳出血熱病毒（Tickborne hemorrhagic fever virus)、 克裡米亞剛果出血熱病毒（Crimean-Congo Hemorrhagic fever virus)、蝶傳腦炎病毒 (Tickborne encephalitis viruses)、黃熱病（Yellow fever)、多藥抗性 TB、流感、其它立 克次氏體和狂犬病、黃病毒（Flavirus)、登革熱（Dengue)、纖絲病毒（Filovirus)、伊波拉 (Ebola)、馬爾堡類鼻疽伯克霍爾德氏菌（Marburg Burkholderia pseudomallei)、Q熱病原 體（Coxiella burnetii) (Q熱）、布魯氏菌種（Brucella species)(布魯氏菌病）、鼻疽伯克 霍爾德氏菌（Burkholderia mallei)(鼻疽）、菌麻毒素（菌麻（Ricinus communis)來源）、 產氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens)的ε毒素、葡萄球菌腸毒素 B(Staphylococcus enterotoxin B)、斑疫傷寒（Typhus fever)(普氏立克次氏體（Rickettsia prowazekii))、 食品和水傳播的病原體、腹瀉原性大腸桿菌（Diarrheagenic E. coli)、病原性弧菌 (Pathogenic Vibrios)、志賀氏菌（Shigella species)、沙門氏菌（Salmonella)、單 核細胞增多性李氏菌（Listeria monocytogenes)、穿腸彎曲桿菌（Campylobacter jejuni)、小腸結腸炎耶爾森氏菌（Yersinia enterocolitica)等細菌；和小球隱孢子蟲 (Cryptosporidium parvum)、卡曼環抱子球蟲（Cyclospora cayatanensis)、腸蘭伯鞭毛蟲 (Giardia lamblia)、痢疾變形蟲（Entamoeba histolytica)、弓形體（Toxoplasma)、微抱子 蟲（Microsporidia)等原生動物。 作為抗原，可例示如下所述的分子：17-從、4-188、40(：、6-酮^^^1&、8-異^^^2 &、 8_氧代-dG、A1腺苷受體、A33、ACE、ACE-2、激活素、激活素 A、激活素 AB、激活素 B、激活 素 C、激活素 RIA、激活素 RIAALK-2、激活素 RIBALK-4、激活素 RIIA、激活素 RIIB、ADAM、 ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAM8、ADAM9、ADAMTS、ADAMTS4、ADAMTS5、地址素 (Addressins)、aFGF、ALCAM、ALK、ALK-l、ALK-7、α -1-抗胰蛋白酶、α -V/β -1 拮抗劑、ANG、 Ang、APAF-1、APE、APJ、APP、APRIL、AR、ARC、ART、Artemin、抗 Id、ASPARTIC、心房鈉尿因子、 av/b3 整聯蛋白、Axl、b2M、B7-1、B7-2、B7-H、B-淋巴細胞刺激因子（BlyS)、BACE、BACE-1、 Bad、BAFF、BAFF-R、Bag-1、BAK、Bax、BCA-1、BCAM、Bel、BCMA、BDNF、b-ECGF、bFGF、BID、Bik、 BM、BLC、BL-CAM、BLK、BMP、BMP-2BMP-2a、BMP-3 成骨蛋白（Osteogenin)、BMP-4BMP-2b、 BMP-5、BMP-6Vgr-l、BMP-7 (OP-1)、BMP-8 (BMP-8a、OP-2)、BMPR、BMPR-IA(ALK-3)、 BMPR-IB(ALK-6)、BRK-2、RPK-1、BMPR-II (BRK-3)、BMP、b-NGF、BOK、蛙皮素、骨衍生神經營 養因子、BPDE、BPDE-DNA、BTC、補體因子 3 (C3)、C3a、C4、C5、C5a、CIO、CA125、CAD-8、降鈣 素、cAMP、癌胚抗原（CEA)、癌相關抗原、組織蛋白酶A、組織蛋白酶B、組織蛋白酶C/DPPI、 組織蛋白酶D、組織蛋白酶E、組織蛋白酶Η、組織蛋白酶L、組織蛋白酶0、組織蛋白酶S、組 織蛋白酶 V、組織蛋白酶 X/Z/P、CBL、CCI、CCK2、CCL、CCL1、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、 CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL2、CCL20、CCL21、CCL2 2、CCL2 3、CCL24、CCL2 5、CCL26、 CCL27、CCL28、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9/10、CCR、CCR1、CCR10、CCR10、CCR2、 CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CD1、CD2、CD3、CD3E、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、 CD10、CDlla、CDllb、CDllc、CD13、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、 CD25、CD27L、CD28、CD29、CD30、CD30L、CD32、CD33(p67 蛋白）、CD34、CD38、CD40、CD40L、 CD44、CD45、CD46、CD49a、CD52、CD54、CD55、CD56、CD61、CD64、CD66e、CD74、CD80(B7-1)、 CD89、CD95、CD123、CD137、CD138、CD140a、CD146、CD147、CD148、CD152、CD164、CEACAM5、 CFTR、cGMP、CINC、肉毒桿菌毒素、產氣莢膜梭菌（Clostridium Perfringens)毒素、CKb8-l、 CLC、CMV、CMVUL、CNTF、CNTN-1、COX、C-Ret、CRG-2、CT-1、CTACK、CTGF、CTLA-4、CX3CL1、 CX3CR1、CXCL、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、 CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCR、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、 CXCR5、CXCR6、細胞角蛋白腫瘤相關抗原、DAN、DCC、DcR3、DC-SIGN、補體抑制因子（衰變 促進因子）、脫（1-3)_IGF-I (腦 IGF-1)、Dhh、地高辛、DNAM-1、Dnase、Dpp、DPPIV/CD26、 Dtk、ECAD、EDA、EDA-A1、EDA-A2、EDAR、EGF、EGFR(ErbB-l)、EMA、EMMPRIN、ΕΝΑ、內皮素受 體、腦啡肽酶、eNOS、Eot、Eotaxinl、EpCAM、Ephrin B2/EphB4、EPO、ERCC、E-選擇素、ET-1、 因子Ila、因子VII、因子VIIIc、因子IX、成纖維細胞活化蛋白（FAP)、Fas、FcRl、FEN-lJ^ 蛋白、FGF、FGF-19、FGF-2、FGF3、FGF-8、FGFR、FGFR-3、纖維蛋白、FL、FLIP、Flt-3、Flt-4、 促卵胞激素、斷裂因子、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、FZD10、 G250、Gas6、GCP-2、GCSF、⑶2、⑶3、⑶F、⑶F-1、⑶F-3(Vgr-2)、⑶F-5(BMP-14、CDMP-1)、 ⑶F-6 (BMP-13、CDMP-2)、⑶F-7 (BMP-12、CDMP-3)、⑶F-8 (肌肉生長抑制素）、⑶F-9、 0^-15(]\0(：-1)、0)嚦、0)嚦、6?六？、6?1^-1、6?1?-〇1、6?1?-〇2、6?1?-〇3、6幾1?、胰高血糖素、 Glut4、糖蛋白 IIb/IIIa(GPIIb/IIIa)、GM-CSF、gpl30、gp72、GR0、生長激素釋放因子、半抗 造血生長因子（HGF)、Η印 B gpl20、乙醯肝素酶、Her2、Her2/neu (ErbB-2)、Her3 (ErbB-3)、 Her4 (ErbB-4)、單純皰疹病毒（HSV) gB糖蛋白、HSV gD糖蛋白、HGFA、高分子量黑色素瘤相 關抗原（High molecular weight melanoma-associated antigen) (HMW-MAA)、HIV gpl20、 HIV IIIBgpl20V3 環、HLA、HLA-DR、HM1. 24、HMFGPEM、HRG、Hrk、人心肌球蛋白、人巨細胞病毒 (HCMV)、人生長激素（HGH)、HVEM、1-309、IAP、ICAM、ICAM-1、ICAM-3、ICE、ICOS、IFNg、Ig、 IgA 受體、IgE、IGF、IGF 結合蛋白、IGF-1R、IGFBP、IGF-I、IGF-II、IL、IL-1、IL-1R、IL-2、 IL-2R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-5R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、 IL-18、IL-18R、IL-23、幹擾素（INF) - a、INF-β、INF-γ、抑制素、iNOS、胰島素 A 鏈、胰島 素 B鏈、胰島素樣生長因子1、整聯蛋白a2、整聯蛋白a3、整聯蛋白a4、整聯蛋白a4/ β?、整聯蛋白α4/β7、整聯蛋白a5(aV)、整聯蛋白α5/β1、整聯蛋白α5/β3、整聯蛋 白〇6、整聯蛋白0 1、整聯蛋白0 2、幹擾素^、1?-1〇、11六(：、邛、激肽釋放酶2、激肽釋 放酶5、激肽釋放酶6、激肽釋放酶11、激肽釋放酶12、激肽釋放酶14、激肽釋放酶15、激肽 釋放酶L1、激肽釋放酶L2、激肽釋放酶L3、激肽釋放酶L4、KC、KDR、角質形成細胞生長因 子（KGF)、層連蛋白 5、LAMP、LAP、LAP(TGF-l)、潛伏型 TGF-1、潛伏型 TGF-lbpl、LBP、LDGF、 LECT2、Lefty、Lewis-Y 抗原、Lewis-Y 相關抗原、LFA-1、LFA-3、Lfo、LIF、LIGHT、脂蛋白、 LIX、LKN、Lptn、L-選擇素、LT-a、LT-b、LTB4、LTBP-1、肺表面、促黃體激素、淋巴毒素 β受 體、Mac-1、MAdCAM、MAG、ΜΑΡ2、MARC、MCAM、MCAM、MCK-2、MCP、M-CSF、MDC、Mer、金屬蛋白酶、 MGDF 受體、MGMT、MHC(HLA-DR)、MIF、MIG、MIP、MIP-1-α、MK、MMAC1、MMP、MMP-1、MMP-10、 MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-2、MMP-24、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MPIF、 Mpo、MSK、MSP、粘蛋白（Mucl)、MUC18、繆勒管抑制物質、Mug、MuSK、NAIP、NAP、NCAD、N-C 粘 附因子、NCA90、NCAM、NCAM、腦啡肽酶、神經營養素-3、神經營養素-4或神經營養素-6、 Neurturin、神經生長因子（NGF)、NGFR、NGF-β、nNOS、NO、NOS、Npn、NRG-3、NT、NTN、0B、 OGGI、OPG、OPN、OSM、0X40L、0X40R、pl50、p95、PADPr、甲狀旁腺激素、PARC、PARP、PBR、PBSF、 PCAD、P-鈣黏蛋白、PCNA、PDGF、PDGF、PDK-1、PECAM、PEM、PF4、PGE、PGF、PGI2、PGJ2、PIN、 PLA2、胎盤鹼性磷酸酶（PLAP)、？16?、？1^、？？14、胰島素原、鬆弛素原、蛋白（：、？5、？54、？5〇八、 前列腺特異性膜抗原（PSMA)、PTEN、PTHrp、Ptk、PTN、R51、RANK、RANKL、RANTES、RANTES、松 弛素 A鏈、鬆弛素 B鏈、腎素、呼吸道合胞體病毒〇?￥汗、1?￥?8?、1^丨、類風溼因子、1^1?76、 RPA2、RSK、S100、SCF/KL、SDF-1、SERINE、血清白蛋白、sFRP-3、Shh、SIGIRR、SK-1、SLAM、 SLPI、SMAC、SMDF、SMOH、SOD、SPARC、Stat、STEAP、STEAP-II、TACE、TACI、TAG-72(腫瘤 相關糖蛋白-72)、TARC、TCA-3、T細胞受體（例如，T細胞受體α / β )、TdT、TECK、TEM1、 TEM5、TEM7、TEM8、TERT、睪丸 PLAP 樣鹼性磷酸酶、TfR、TGF、TGF-a、TGF-β、TGF-β 泛 特異性（TGF-β Pan Specific)、TGF-PRI(ALK-5)、TGF-PRII、TGF-PRIIb、TGF-PRIII、 TGF-β 1、TGF-P2、TGF-P3、TGF-P4、TGF-βδ、凝血酶、胸腺 Ck-1、促甲狀腺激素、Tie、 --ΜΡ、TIQ、組織因子、TMEFF2、Tmpo、TMPRSS2、TNF、TNF-α、TNF-α β、TNF-β 2、TNFc、 TNF-RI、TNF-RII、TNFRSF10A(TRAIL RlApo-2、DR4)、TNFRSF10B(TRAIL R2DR5、KILLER、 TRICK-2A、TRICK-B)、TNFRSF10C (TRAIL R3DcRl、LIT、TRID)、TNFRSF10D (TRAIL R4DcR2、 TRUNDD)、TNFRSF11A(RANK ODF R、TRANCE R)、TNFRSF1IB(OPG 0CIF、TR1)、TNFRSF12(TWEAK R FN14)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFRSF14(HVEM ATAR、HveA、LIGHT R、TR2)、 TNFRSF16 (NGFR p75NTR)、TNFRSF17 (BCMA)、TNFRSF18 (GITR AITR)、TNFRSF19 (TROY TAJ、 TRADE)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSF1A(TNF RI CD120a、p55-60)、TNFRSFlB(TNF RII CD120b、 p75-80)、TNFRSF26 (TNFRH3)、TNFRSF3 (LTbR TNF RIII、TNFCR)、TNFRSF4 (0X40ACT35、 TXGP1R)、TNFRSF5 (CD40p50)、TNFRSF6 (Fas Apo-1、ΑΡΤΙ、CD95)、TNFRSF6B (DcR3M68、 TR6)、TNFRSF7 (CD27)、TNFRSF8 (CD30)、TNFRSF9 (4-1BB CD137、ILA)、TNFRSF21 (DR6)、 TNFRSF22(DcTRAIL R2TNFRH2)、TNFRST23(DcTRAIL R1TNFRH1)、TNFRSF25(DR3Ap〇-3、LARD、 TR-3、TRAMP、WSL-1)、TNFSF10 (TRAIL Apo-2 配體、TL2)、TNFSF11 (TRANCE/RANK 配體 ODF、 OPG 配體）、TNFSF12(TWEAK Apo-3 配體、DR3 配體）、TNFSF13(APRIL TALL2)、TNFSF13B(BAFF BLYS、TALL1、THANK、TNFSF20)、TNFSF14 (LIGHT HVEM 配體、LTg)、TNFSF15(TL1A/VEGI)、 TNFSF18 (GITR 配體 AITR 配體、TL6)、TNFSFlA(TNF-a 黏附素（Conectin)、DIF、TNFSF2)、 TNFSFlB(TNF-b LTa、TNFSF1)、TNFSF3(LTb TNFC、p33)、TNFSF4(0X40 配體 gp34、TXGP1)、 TNFSF5(CD40 配體 CD154、gp39、HIGM1、MD3、TRAP)、TNFSF6 (Fas 配體 Apo-1 配體、ΑΡΤΙ 配體）、TNFSF7 (CD27 配體 CD70)、TNFSF8 (CD30 配體 CD153)、TNFSF9 (4-1BB 配體 CD137 配體）、TP-1、t-PA、Tpo、TRAIL、TRAILR、TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRANCE、運鐵蛋白受體、 TRF、Trk、TROP-2、TSG、TSLP、腫瘤相關抗原CA125、腫瘤相關抗原表達病毒Y相關碳水化 物、TWEAK、TXB2、Ung、uPAR、uPAR-Ι、尿激酶、VCAM、VCAM-1、VECAD、VE-鈣黏蛋白、VE-鈣 黏蛋白-2、VEFGR-l(flt-l)、VEGF、VEGFR、VEGFR-3(flt-4)、VEGI、VM、病毒抗原、VLA、 VLA-1、VLA-4、VNR 整聯蛋白、馮維勒布蘭德因子、WIF-1、WNT1、WNT2、WNT2B/13、WNT3、 WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9A、WNT9B、 WNT10A、WNT1 OB、WNT11、WNT16、XCL1、XCL2、XCR1、XCR1、XEDAR、XIAP、XPD、HMGB1、I gA、Α β、 CD81, CD97, CD98, DDR1, DKK1, EREG、Hsp90, IL-17/IL-17R、IL-20/IL-20R、氧化 LDL, PCSK9， 激肽釋放酶原，RON，TMEM16F、S0D1，嗜鉻粒蛋白A，嗜鉻粒蛋白B、tau，VAP1、高分子激肽 原、IL-31、IL-31R、Navi. 1、Navi. 2、Navi. 3、Navi. 4、Navi. 5、Navi. 6、Navi. 7、Navi. 8、 Navi. 9, EPCR, Cl, Clq, Clr, Cls, C2, C2a, C2b, C3, C3a, C3b, C4, C4a, C4b, C5, C5a, C5b, C6, C7, C8,C9,因子B,因子D,因子H,備解素、殼硬蛋白（sclerostin)、血纖蛋白原，血纖蛋白， 凝血酶原，凝血酶，組織因子，因子V，因子Va，因子VII，因子Vila，因子VIII，因子 Villa,因子IX，因子IXa,因子X，因子Xa,因子XI，因子XIa，因子XII，因子Xlla,因 子父111，因子乂1113，了--1，抗凝血酶1113?0?，血栓調節蛋白、了4?13?4，纖溶酶原，纖 溶酶，PAI-1，PAI-2、GPC3、多配體蛋白聚糖-1、多配體蛋白聚糖-2、多配體蛋白聚糖-3、 多配體蛋白聚糖-4、LPA、S1P、乙醯膽鹼受體、AdipoRl、AdipoR2、ADP核糖基環化酶-1、 α -4/ β_7整聯蛋白、α -5/ β_1整聯蛋白、α -ν/ β_6整聯蛋白、ανβ?整聯蛋白、血 管形成素配體-2、Angptl2、炭疽、鈣粘蛋白、碳酸酐酶-IX、CD105、CD155、CD158a、CD37、 CD49b、CD51、CD70、CD72、Claudinl8、艱難梭菌毒素、CS1、δ-樣蛋白配體 4、DHICA 氧化 酶、Dickkopf-Ι配體、二肽基肽酶IV、EPOR、RSV的蛋白F、因子la、FasL、葉酸鹽受體α、 胰高血糖素受體、胰高血糖素-樣肽1受體、穀氨酸羧肽酶II、GMCSFR、C型肝炎病毒Ε2 糖蛋白、鐵調素 Ofepcidin)、IL-17受體、IL-22受體、IL-23受體、IL-3受體、Kit酪氨酸 激酶、富亮氨酸α-2-糖蛋白1(LRG1)、溶鞘脂受體、膜糖蛋白0X2、間皮素（Mesothelin)、 MET、MICA、MUC-16、髓鞘相關糖蛋白、神經氈蛋白-1、神經氈蛋白-2、Nogo受體、PLXNA1、 PLXNA2、PLXNA3、PLXNA4A、PLXNA4B、PLXNB1、PLXNB2、PLXNB3、PLXNC1、PLXND1 編程性細胞 死亡配體1、前蛋白轉化酶PC9、P-選擇素糖蛋白配體-1、RAGE、Reticulon4、RF、R0N-8、 SEMA3A、SEMA3B、SEMA3C、SEMA3D、SEMA3E、SEMA3F、SEMA3G、SEMA4A、SEMA4B、SEMA4C、SEMA4D、 SEMA4F、SEMA4G、SEMA5A、SEMA5B、SEMA6A、SEMA6B、SEMA6C、SEMA6D、SEMA7A、志賀樣毒素 II、 1-磷酸-鞘氨醇受體-1、ST2、葡萄球菌脂膜酸、生腱蛋白、TG2、胸腺基質淋巴細胞生成素 (Thymic stromal lymphoprotein)受體、TNF 超家族受體 12A、跨膜糖蛋白 NMB、TREM-1、 TREM-2、滋養層糖蛋白、TSH受體、TTR、微管蛋白、ULBP2以及用於激素和生長因子的受體。 表位 表示存在於抗原中的抗原決定簇的表位，意指本說明書中公開的抗原結合分子中的抗 原結合結構域所結合的抗原上的位點。所以，例如表位可通過其結構來定義。另外，也可以 通過相對於識別該表位的抗原結合分子中的抗原結合活性來定義該表位。抗原為肽或者多 肽時，還可以通過構成表位胺基酸殘基來規定表位。另外,表位為糖鏈時，也可以通過特定 的糖鏈結構來規定表位。 線性表位是下述表位，其包含胺基酸一級序列得到識別的表位。線性表位在固有序列 中典型地含有至少3個胺基酸，和最普通地含有至少5個、例如約8至約10個、6至20個氨 基酸。 與線性表位相對地，立體結構表位是這樣的表位，其中，含有表位胺基酸的一級序列並 非是被識別表位的單一規定成分（例如，胺基酸的一級序列不需要被規定表位的抗體所識 別的表位）。立體結構表位相對於線性表位可以含有增大數目的胺基酸。關於立體結構表 位的識別，抗體識別肽或蛋白的三維結構。例如，蛋白分子摺疊形成三維結構時，形成立體 結構表位的某胺基酸和/或多肽主鏈變得並排，使得抗體可以識別表位。確定表位的立體 結構的方法包括例如：χ射線結晶學、二維核磁共振分光學以及位點特異性旋轉標記和電 子順磁共振分光學，但並非限定於此。例如，參照Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology(1996)、第 66 卷、Morris(編）。 結合活件 下述例示了通過含有針對IL-6受體的抗原結合結構域的被測抗原結合分子來確認對 表位的結合的方法，但通過含有針對IL-6受體以外的抗原的抗原結合結構域的被測抗原 結合分子來確認對表位的結合的方法也可以基於下述例示而適宜實施。 例如，含有針對IL-6受體的抗原結合結構域的被測抗原結合分子是否識別存在於 IL-6受體分子中的線性表位，可通過如下所示操作來確認。為了上述目的，合成了包含構 成IL-6受體的胞外結構域的胺基酸序列的線性肽。該肽可化學性地合成。或者，可以利 用IL-6受體的cDNA中編碼相當於胞外結構域的胺基酸序列的區域，通過基因工程技術得 至IJ。接著，對包含構成胞外結構域的胺基酸序列的線性肽、和含有針對IL-6受體的抗原結 合結構域的被測抗原結合分子的結合活性進行評價。例如，通過以固定化線性肽作為抗原 的ELISA，可以評價該抗原結合分子對該肽的結合活性。或者，基於該抗原結合分子對IL-6 受體表達細胞的結合中的、線性肽造成的抑制水平，也可以明確對線性肽的結合活性。通過 這些試驗，可以明確該抗原結合分子對線性肽的結合活性。 另外，還可以如下所述來確認含有針對IL-6受體的抗原結合結構域的被測抗原結合 分子是否識別立體結構表位。為了上述目的，製備了表達IL-6受體的細胞。可舉出：含有 針對IL-6受體的抗原結合結構域的被測抗原結合分子在與IL-6受體表達細胞接觸時強烈 地與該細胞結合，但該抗原結合分子與經固定化的包含構成IL-6受體胞外結構域的氨基 酸序列的線性肽實質上不結合的情形等。這裡，實質上不結合是指，對人IL-6受體表達細 胞的結合活性的80%以下、通常50%以下、優選30%以下、特別優選15%以下的結合活性。 作為測定含有針對IL-6受體的抗原結合結構域的被測抗原結合分子對IL-6受體表達 細胞的結合活性的方法，可舉出例如：Antibodies A Laboratory Manual記載的方法（Ed Harlow, David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory (1988) 359-420)。即，可通過以 IL-6 受體表達細胞為抗原的ELISA或FACS(突光活化細胞分選（fluorescence activated cell sorting))的原理來進行評價。 在ELISA形式中，含有針對IL-6受體的抗原結合結構域的被測抗原結合分子對IL-6 受體表達細胞的結合活性，通過比較由酶反應生成的信號水平而定量地進行評價。即，將被 測多肽複合體添加至固定有IL-6受體表達細胞的ELISA板，利用識別被測抗原結合分子的 酶標記抗體，檢測與細胞結合的被測抗原結合分子。或者在FACS中，製作被測抗原結合分 子的稀釋系列，確定相對於IL-6受體表達細胞的抗體結合效價（titer)，由此可以比較被 測抗原結合分子對IL-6受體表達細胞的結合活性。 被測抗原結合分子與懸浮於緩衝液等中的細胞表面上表達的抗原的結合可以通過流 式細胞儀檢測出。作為流式細胞儀，已知例如如下的裝置： FACSCanto?II FACSAria? FACSArray? FACSVantage?SE FACSCalibur?(均為 BD Biosciences 公司的商品名） EPICS ALTRA HyPerSort Cytomics FC500 EPICS XL-MCL ADC EPICS XL ADC Cell Lab Quanta/Cell Lab Quanta SC(均為 Beckman Coulter 公司的商品名）。 例如，作為含有針對IL-6受體的抗原結合結構域的被測抗原結合分子對抗原的結合 活性的優選測定方法的一例，可舉出以下方法。首先，將表達IL-6受體的細胞與被測抗原 結合分子反應，將其用識別被測抗原結合分子的經FITC標記的二次抗體染色。將被測抗原 結合分子用適宜的優選緩衝液稀釋，由此將該抗原結合分子製備為所期望的濃度來使用。 例如，能夠以1〇μ g/ml至10ng/ml之間的任意濃度使用。接著，通過FACSCalibur (BD公司） 測定螢光強度和細胞數。抗體對該細胞的結合量被反映為使用CELL QUEST Software (BD 公司）進行分析而得的螢光強度，即幾何平均值。即，通過得到該幾何平均值，能夠測定由 被測抗原結合分子的結合量表示的被測抗原結合分子的結合活性。 含有針對IL-6受體的抗原結合結構域的被測抗原結合分子是否與某抗原結合分子共 有表位，可通過兩者對相同表位的競爭來確認。抗原結合分子間的競爭通過交叉阻斷試驗 等來檢測。例如競爭ELISA試驗是優選的交叉阻斷試驗。 具體地，在交叉阻斷試驗中，包被於微量滴定板的孔上的IL-6受體蛋白在候選競爭抗 原結合分子的存在下或不存在下經孵育後，添加被測抗原結合分子。與孔中的IL-6受體蛋 白結合的被測抗原結合分子的量與競爭結合相同表位的候選競爭抗原結合分子的結合能 力間接地相關。即，競爭抗原結合分子對相同表位的親和性越大，則被測抗原結合分子對包 被有IL-6受體蛋白的孔的結合活性越降低。 經由IL-6受體蛋白而與孔結合的被測抗原結合分子的量可以通過預先標記抗原結合 分子來容易地測定。例如，經生物素標記的抗原結合分子通過使用親和素過氧化酶結合物 和合適的底物來測定。利用過氧化酶等酶標記的交叉阻斷試驗特別被稱為競爭ELISA試 驗。抗原結合分子能夠用可檢測或可測定的其它標記物質進行標記。具體地，公知的是放 射標記或突光標記等。 與在候選競爭抗原結合分子複合體的不存在下實施的對照試驗中得到的結合活性進 行比較，競爭抗原結合分子只要可以阻斷至少20 %、優選至少20-50 %、進一步優選至少 50%的含有針對IL-6受體的抗原結合結構域的被測抗原結合分子的結合，則該被測抗原 結合分子是與競爭抗原結合分子實質上結合於相同表位、或者競爭結合於相同的表位的抗 原結合分子。 在鑑定含有針對IL-6受體的抗原結合結構域的被測抗原結合分子所結合的表位的結 構時，被測抗原結合分子與對照抗原結合分子是否共有表位，能夠通過比較兩抗原結合分 子對在構成該表位的肽中導入胺基酸突變而得的肽的結合活性來進行評價。 作為這種測定結合活性的方法，例如，在前述ELISA形式中，可通過比較被測抗原結合 分子和對照抗原結合分子對導入了突變的線性肽的結合活性來測定。作為ELISA以外的方 法，通過使被測抗原結合分子與對照抗原結合分子流過該柱後，對洗脫液中洗脫的抗原結 合分子進行定量，也可以測定對結合於柱的該突變肽的結合活性。使突變肽作為例如與GST 的融合肽的形式而吸附於柱的方法是公知的。 另外，鑑定的表位為立體表位時，被測抗原結合分子與對照抗原結合分子是否共有表 位可通過以下方法來評價。首先，製備表達IL-6受體的細胞和表達在表位中導入了突變的 IL-6受體的細胞。將這些細胞懸浮於PBS等適當的緩衝液中，向所得細胞懸浮液添加被測 抗原結合分子和對照抗原結合分子。接著，用合適的緩衝液洗滌，向所得細胞懸浮液添加能 夠識別被測抗原結合分子和對照抗原結合分子的經FITC標記的抗體。被標記抗體染色的 細胞的螢光強度和細胞數通過FACSCalibur (BD公司）來測定。被測抗原結合分子和對照抗 原結合分子的濃度通過合適的緩衝液適當稀釋，由此可以製備為所期望的濃度來使用。例 如，能夠以10 μ g/ml至10ng/ml之間的任意濃度使用。標記抗體對該細胞的結合量被反映 為使用CELL QUEST S〇ftware(BD公司）進行分析而得的螢光強度，即幾何平均值。即，通 過得到該幾何平均值，可以測定由標記抗體的結合量表示的被測抗原結合分子和對照抗原 結合分子的結合活性。 本方法中，例如"實質上不與突變IL-6受體表達細胞結合"可通過以下方法判斷。首 先，用標記抗體染色與表達突變IL-6受體的細胞結合的被測抗原結合分子和對照抗原結 合分子。接著，檢測細胞的螢光強度。螢光檢測中使用作為流式細胞儀的FACSCalibur時， 所得的螢光強度可以使用CELL QUEST Software進行分析。由多肽複合體存在下和不存在 下的幾何平均值，通過下述計算式計算該比較值（Λ Geo-Mean)，由此可以求出抗原結合分 子的結合造成的螢光強度的增加比例。 Δ Geo-Mean = Geo-Mean (多肽複合體存在下）/Geo-Mean (多肽複合體不存在下） 將通過分析得到的、反映被測抗原結合分子對突變IL-6受體表達細胞的結合量的幾 何平均比較值（突變IL-6受體分子Λ Geo-Mean值）、與反映被測抗原結合分子對IL-6受 體表達細胞的結合量的AGeo-Mean比較值進行比較。此時，計算相對於突變IL-6受體表 達細胞和IL-6受體表達細胞的Λ Geo-Mean比較值時使用的被測抗原結合分子的濃度特別 優選製備為相互相同或者實質上相同的濃度。預先確定了識別IL-6受體中的表位的抗原 結合分子被用作對照抗原結合分子。 被測抗原結合分子相對於突變IL-6受體表達細胞的ΔGeo-Mean比較值只要小於被 測抗原結合分子相對於IL-6受體表達細胞的Λ Geo-Mean比較值的至少80%、優選50%、 進一步優選30%、特別優選15%，則認為"實質上不與突變IL-6受體表達細胞結合"。計 算 Geo-Mean 值（幾何平均）的計算式記載於 CELL QUEST Software User' s Guide (BD biosciences公司）。通過對比較值進行比較，只要是能夠將其實質上視為相同的程度，則 能夠評價被測抗原結合分子與對照抗原結合分子的表位相同。 抗原結合結構域 "抗原結合結構域"只要與目標抗原結合，則可以使用任意結構的結構域。作為這 類結構域的實例，可優選舉出例如：抗體的重鏈和輕鏈的可變區、生物體內存在的細胞 膜蛋白Avimer中所含的35個胺基酸左右的被稱為A結構域的組件（W02004/044011、 W02005/040229)、含有與在細胞膜表達的糖蛋白纖連蛋白中的蛋白結合結構域10Fn3 結構域的Adnectin (W02002/032925)、以構成蛋白A的包含58個胺基酸的3個螺旋 束（bundle)的IgG結合結構域為框架的Affibody (W01995/001937)、具有含33個氨 基酸殘基的轉角和2個反向平行螺旋以及環的亞基重複重疊而成的結構的錨蛋白重 復序列（ankyrin repeat :AR)的分子表面露出的區域 DARPins (Designed Ankyrin R印eat proteins) (W02002/020565)、支持嗜中性粒細胞明膠酶結合脂質運載蛋白 (neutrophil gelatinase-associated lipocalin(NGAL))等脂質運載蛋白分子中高 度保守的8個反向平行鏈在中央方向扭曲的桶結構的單側的4個環區域Anticalin等 (W02003/029462)、作為七鰓鰻、八目鰻等無顎類的獲得性免疫系統且不具有免疫球蛋白結 構的可變性淋巴細胞受體（variable lymphocyte receptor(VLR))的富亮氨酸殘基重複 (leucine-rich-repeat (LRR))組件反覆重疊而成的馬蹄鐵形的結構內部的平行型片層結 構的凹陷區域（W02008/016854)。作為本發明的抗原結合結構域的優選實例，可舉出含有抗 體的重鏈和輕鏈的可變區的抗原結合結構域。作為這種抗原結合結構域的實例，優選可舉 出 "scFv (單鏈 Fv) "、"單鏈抗體"、"Fv"、"scFv2 (單鏈 Fv2) "、"Fab" 或 "F(ab'）2" 等。 本發明的抗原結合分子中的抗原結合結構域可以與相同的表位結合。這裡，相同的表 位可以存在於例如包含SEQ ID NO: 1所述的胺基酸序列的蛋白中。或者，本發明的抗原結 合分子中的抗原結合結構域可以與相互不同的表位結合。這裡，不同的表位可以存在於例 如包含SEQ ID NO: 1所述的胺基酸序列的蛋白中。 特異件 特異性是指特異性地結合的分子一方的分子對於其一個或多個結合對象分子以外的 分子不顯示任何顯著性結合的狀態。另外，也可以用於抗原結合結構域對某抗原中所含的 多個表位中特定的表位為特異性的情形。另外，抗原結合結構域所結合的表位含有在多個 不同的抗原中時，具有該抗原結合結構域的抗原結合分子可以與含有該表位的各種抗原結 合。 抗體 本說明書中，抗體是指天然的免疫球蛋白或者通過部分或完全合成製造得到的免疫球 蛋白。抗體可從天然存在其的血楽、血清等天然資源或產生抗體的雜交瘤細胞的培養上清 中分離得到，或者通過使用基因重組等方法而部分或完全地合成。作為抗體的實例，優選可 舉出免疫球蛋白的同種型和這些同種型的亞型。作為人的免疫球蛋白，已知有IgGl、IgG2、 IgG3、IgG4、IgAl、IgA2、IgD、IgE、IgM這9種類型（同種型）。本發明的抗體中可包含這些 同種型中的 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4。 製造具有所期望結合活性的抗體的方法對本領域技術人員來說是公知的。以下例示與 IL-6受體結合的抗體（抗IL-6受體抗體）的製作方法。與IL-6受體以外的抗原結合的抗 體也可以根據下述例示而適宜製作。 抗IL-6受體抗體可以使用公知的方法以多克隆或單克隆抗體的形式獲得。作為抗 IL-6受體抗體，可優選製作來源於哺乳動物的單克隆抗體。來源於哺乳動物的單克隆抗體 包含：由雜交瘤產生的單克隆抗體、和利用基因工程技術通過用含有抗體基因的表達載體 進行了轉化的宿主細胞產生的單克隆抗體等。應予說明，本申請發明的單克隆抗體包含"人 源化抗體"和"嵌合抗體"。 產生單克隆抗體的雜交瘤可以通過使用公知技術,例如如下所示來製作。即，使用IL-6 受體蛋白作為敏化抗原，按照通常的免疫方法來免疫哺乳動物。通過通常的細胞融合法，將 所得免疫細胞與公知的親本細胞融合。接著，通過通常的篩選方法篩選單克隆抗體產生細 胞，由此可以選擇出產生抗IL-6受體抗體的雜交瘤。 具體地，單克隆抗體的製作例如如下所示地進行。首先，表達其核苷酸序列公開在SEQ ID N0:2中的IL-6受體基因，由此可得到由SEQ ID N0:1表示的IL-6受體蛋白，其用作敏 化抗原用於抗體製備。即，將編碼IL-6受體的基因序列插入公知的表達載體，由此轉化適 當的宿主細胞。以公知的方法從該宿主細胞中或培養上清中純化所期望的人IL-6受體蛋 白。為了從培養上清中獲得可溶型的IL-6受體，代替由SEQ ID N0:1表示的IL-6受體蛋 白，表達了例如，如 Mullberg 等（J. Immunol. (1994) 152(10),4958-4968)所記載的可溶型 IL-6受體、S卩，由SEQ ID NO: 1表示的IL-6受體多肽序列中的第1至357個胺基酸構成的 蛋白。另外，純化的天然IL-6受體蛋白也可以同樣地用作敏化抗原。 作為用於免疫哺乳動物的敏化抗原，可使用該純化IL-6受體蛋白。另外，IL-6受體的 部分肽也可以用作敏化抗原。此時，該部分肽也可以根據人IL-6受體的胺基酸序列通過化 學合成獲得。另外，也可以通過將IL-6受體基因的一部分整合至表達載體並進行表達來獲 得。進而，還可以使用蛋白分解酶分解IL-6受體蛋白來獲得，用作部分肽的IL-6受體肽的 區域和大小並不特別限於特定的方案。對於優選的區域，可以從SEQ ID N0:1的胺基酸序 列中相當於第20-357個胺基酸的胺基酸序列中選擇任意的序列。構成作為敏化抗原的肽 的胺基酸的數目優選為至少5個以上、例如6個以上、或7個以上。更具體地，可以將8? 50、優選10?30個殘基的肽用作敏化抗原。 另外，也可以將IL-6受體蛋白的所期望的部分多肽或肽與不同的多肽進行融合而 得的融合蛋白用作敏化抗原。為了製造用作敏化抗原的融合蛋白，例如，可以優選利用抗 體的Fc片段或肽標籤等。表達融合蛋白的載體可如下製作：將編碼所期望的兩種或更 多的多肽片段的基因框內融合，將該融合基因如前所述地插入表達載體。融合蛋白的制 作方法記載於 Molecular Cloning2nd ed. (Sambrook, J et al. , Molecular Cloning2nd ed. ,9.47-9. 58 (1989) Cold Spring Harbor Lab. press)。用作敏化抗原的 IL-6 受體的獲 得方法和使用它的免疫方法也具體記載於W02003/000883、W02004/022754、W02006/006693 等中。 作為用該敏化抗原免疫的哺乳動物，並不限定於特定的動物，優選考慮與細胞融合中 使用的親本細胞的適應性來選擇。通常優選使用嚙齒類的動物，例如，小鼠、大鼠、倉鼠，或 兔、猴等。 按照公知的方法將上述動物用敏化抗原免疫。例如，作為通常的方法，通過注射將 敏化抗原給予至哺乳動物的腹腔內或皮下來實施免疫。具體地，將用PBS(磷酸緩衝鹽水 (Phosphate-Buffered Saline))或生理鹽水等以適當稀釋倍率稀釋的敏化抗原根據需要 與通常的佐劑、例如弗氏完全佐劑混合，在乳化後將該敏化抗原對哺乳動物每4至21日給 予數次。另外，敏化抗原免疫時可以使用適當的載體。特別是將分子量小的部分肽用作敏 化抗原時，有時期望將與白蛋白、匙孔血藍蛋白等載體蛋白結合的該敏化抗原肽進行免疫。 另外，產生所期望抗體的雜交瘤可通過使用DNA免疫，如下所示來製作。DNA免疫是 指下述免疫方法：被給予了以能在免疫動物中表達編碼抗原蛋白的基因的方式構建的載體 DNA的該免疫動物中，敏化抗原在該免疫動物的生物體內表達，由此賦予免疫刺激。與將蛋 白抗原給予免疫動物的通常的免疫方法相比，DNA免疫期待如下優越性： -能夠維持如IL-6受體的膜蛋白的結構而賦予免疫刺激 -無需純化免疫抗原。 為了通過DNA免疫獲得本發明的單克隆抗體，首先，對免疫動物給予表達IL-6受體蛋 白的DNA。編碼IL-6受體的DNA可通過PCR等公知方法合成。將所得DNA插入適當的表達 載體，給予免疫動物。作為表達載體，可優選利用例如PCDNA3.1等市售的表達載體。作為 將載體給予生物體的方法，可採用通常所使用的方法。例如，將吸附有表達載體的金粒子用 基因槍導入免疫動物個體的細胞內，由此進行DNA免疫。進而，識別IL-6受體的抗體的制 作也可以採用國際公開W02003/104453中記載的方法來製作。 如此將哺乳動物免疫，確認血清中與IL-6受體結合的抗體效價的上升後，從哺乳動物 採集免疫細胞用於細胞融合。作為優選的免疫細胞，特別可使用脾細胞。 作為與前述免疫細胞融合的細胞，可使用哺乳動物的骨髓瘤細胞。骨髓瘤細胞優選具 備用於篩選的適當的選擇標記物。選擇標記物指的是賦予細胞能夠在特定培養條件下存活 (或死亡）的性質。選擇標記物中，公知的是次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖基轉移酶缺陷 (以下簡稱為HGPRT缺陷）、或胸苷激酶缺陷（以下簡稱為TK缺陷）等。具有HGPRT或TK 缺陷的細胞具有次黃嘌呤-氨基蝶呤-胸苷敏感性（以下簡稱為HAT敏感性）。HAT敏感 性的細胞不能在HAT選擇培養基中進行DNA合成而會死亡，但若與正常細胞發生融合，則可 利用正常細胞的補救途徑繼續DNA的合成，因此在HAT選擇培養基中也會生長。 HGPRT缺陷或TK缺陷的細胞各自可通過含有6-硫代鳥嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤（以下簡 稱為8AG)、或5' -溴脫氧尿苷的培養基來選擇。DNA中整合有這些嘧啶類似物的正常細胞 會死亡。而無法整合這些嘧啶類似物的缺乏上述酶的細胞則可以在選擇培養基中存活。此 夕卜，被稱為G418抗性的選擇標記物可通過新黴素抗性基因賦予針對2-脫氧鏈黴胺系抗生 素（慶大黴素類似物）的抗性。細胞融合中優選的各種骨髓瘤細胞是公知的。 作為這類骨髓瘤細胞，可優選使用，例如，P3(P3x63Ag8. 653) (J. Immunol. (1979) 123 (4), 1548-1550)> P3x63Ag8U. 1 (Current Topics in Microbiology and Immunology(1978)81，1-7)、NS-1 (C. Eur. J. Immunol. (1976)6 (7)，511-519)、 MPC-11 (Cell (1976) 8 (3)，405-415)、SP2/0 (Nature (1978) 276 (5685)，269-270) ,F0(J. Immunol. Methods (1980) 35 (1-2), 1-21) , S194/5. XXO. BU. 1 (J. Exp. Med. (1978) 148 (1)，313-323)、R210 (Nature (1979) 277 (5692)，131-133)等。 基本上，根據公知方法，例如Kohler和Milstein等的方法（Methods Enzymol. (1981)73, 3-46)等，進行前述免疫細胞和骨髓瘤細胞的細胞融合。 更具體地，例如，可以在細胞融合促進劑的存在下、在通常的營養培養液中實施前述細 胞融合。作為融合促進劑，使用例如聚乙二醇（PEG)、仙臺病毒（HVJ)等，進而為了提高融合 效率，根據期望添加二甲基亞碸等助劑使用。 免疫細胞和骨髓瘤細胞的使用比例可以任意設定。例如，相對於骨髓瘤細胞，優選使免 疫細胞為1至10倍。作為用於前述細胞融合的培養液，使用例如適於前述骨髓瘤細胞株的 生長的RPMI1640培養液、MEM培養液以及用於此種細胞培養的通常的培養液，進而可優選 添加胎牛血清（FCS)等血清補液。 對於細胞融合，將前述免疫細胞和骨髓瘤細胞在前述培養液中以規定量充分混合，將 預先加熱至37°C左右的PEG溶液（例如平均分子量1000至6000左右）通常以30至60% (w/v)的濃度添加。通過緩緩混合混合液，形成所期望的融合細胞（雜交瘤）。接著，依次 添加上述列舉的適當的培養液，通過重複進行離心除去上清的操作，可以除去對雜交瘤的 生長不利的細胞融合劑等。 這樣得到的雜交瘤可通過用通常的選擇培養液、例如HAT培養液（含有次黃嘌呤、氨基 蝶呤和胸苷的培養液）培養來進行選擇。使用上述HAT培養液的培養可持續足夠除所期望 的雜交瘤以外的細胞（非融合細胞）死亡的時間（通常，所述足夠的時間為數天至數周）。 接著，通過通常的有限稀釋方法，實施產生所期望抗體的雜交瘤的篩選和單克隆。 如此得到的雜交瘤可通過使用對應於用於細胞融合的骨髓瘤所具有的選擇標記物的 選擇培養液來進行選擇。例如，具有HGPRT或TK缺陷的細胞可以通過用HAT培養液（含有 次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷的培養液）培養來進行選擇。即，在細胞融合中使用HAT敏感性 的骨髓瘤細胞時，在HAT培養液中，與正常細胞的細胞融合成功了的細胞可選擇性地生長。 使用上述HAT培養液的培養可以持續足夠除所期望的雜交瘤以外的細胞（非融合細胞）死 亡的時間。具體地，通常通過數天至數周的培養，可以選擇所期望的雜交瘤。接著，可通過 通常的有限稀釋方法，實施產生所期望抗體的雜交瘤的篩選和單克隆。 所期望抗體的篩選和單克隆優選可通過公知的基於抗原抗體反應的篩選方法來實施。 例如，與IL-6受體結合的單克隆抗體可以與細胞表面表達的IL-6受體結合。這類單克隆 抗體可通過例如FACS(突光活化細胞分選（fluorescence activated cell sorting))來 篩選。FACS是可以通過用雷射分析與螢光抗體接觸的細胞並測定各細胞發出的螢光來測定 抗體對細胞表面的結合的系統。 為了利用FACS來對產生本發明的單克隆抗體的雜交瘤進行篩選，首先製備表達IL-6 受體的細胞。優選用於篩選的細胞是強制表達IL-6受體的哺乳動物細胞。作為對照，通過 使用用作宿主細胞的未轉化的哺乳動物細胞，可以選擇性地檢測出抗體對細胞表面的IL-6 受體的結合活性。即，通過選擇產生不與宿主細胞結合、而與IL-6受體強制表達細胞結合 的抗體的雜交瘤，可以獲得產生IL-6受體單克隆抗體的雜交瘤。 或者，可以基於ELISA的原理來評價抗體對固定化的IL-6受體表達細胞的結合活性。 例如，將IL-6受體表達細胞固定於ELISA板的孔中。使雜交瘤的培養上清與孔內的固定化 細胞接觸，檢測與固定化細胞結合的抗體。單克隆抗體來源於小鼠時，與細胞結合的抗體可 通過抗小鼠免疫球蛋白抗體檢測。通過這些篩選選擇出的、產生對抗原具有結合能力的所 期望的抗體的雜交瘤可以通過有限稀釋方法等進行克隆。 這樣製作的產生單克隆抗體的雜交瘤可以在通常的培養液中傳代培養。另外，該雜交 瘤可以在液氮中長期保存。 按照通常的方法培養該雜交瘤，可從其培養上清中獲得所期望的單克隆抗體。或者，可 以將雜交瘤給予和其具有相容性的哺乳動物並使其生長，從其腹水中獲得單克隆抗體。前 者的方法適於獲得高純度的抗體。 也可以適宜地使用由從該雜交瘤等抗體產生細胞克隆的抗體基因編碼的抗體。將克 隆的抗體基因整合至適當的載體中，導入宿主，由此表達由該基因所編碼的抗體。用於抗 體基因的分離、向載體中的導入、以及宿主細胞的轉化的方法已經由例如Vandamme等確立 (Eur. J. Biochem. (1990) 192 (3)，767-775)。另外，如下所述的重組抗體的製造方法也是公 知的。 例如，由產生抗IL-6受體抗體的雜交瘤細胞獲得編碼抗IL-6受體抗體的可變區（V 區）的cDNA。為此，通常首先從雜交瘤提取總RNA。作為用於從細胞提取mRNA的方法，例 如，可使用如下所述的方法： -胍超離心法（Biochemistry (1979) 18 (24)，5294-5299) -AGPC 法（Anal. Biochem. (1987) 162 (1)，156-159)。 提取的 mRNA 可使用 mRNA Purification Kit (GE Healthcare Bioscience 制）等進行 純化。或者還市售有 QuickPrep mRNA Purification Kit (GE Healthcare Bioscience 制） 等這樣的用於從細胞直接提取總mRNA的試劑盒。使用這種試劑盒，可從雜交瘤獲得mRNA。 可以由所得mRNA,使用反轉錄酶來合成編碼抗體V區的cDNA。cDNA可通過AMV Reverse Transcriptase First-strand cDNA Synthesis Kit (生化學工業社制）等合成。另外，為 了 cDNA的合成和擴增，可以適宜採用使用了 SMART RACE cDNA擴增試劑盒（Clontech制） 和 PCR 的 5'-RACE 法（Proc.Natl.Acad. Sci.USA(1988)85(23)，8998-9002、Nucleic Acids Res. (1989) 17 (8) ,2919-2932)。進而，可以在這種cDNA的合成過程中向cDNA的兩末端導 入後述適合的限制酶位點。 從所得PCR產物純化出目標cDNA片段，接著與載體DNA連接。如此製作重組載體，並 導入大腸桿菌等中，選擇菌落後，可以由形成該菌落的大腸桿菌製備所期望的重組載體。而 且，對於該重組載體是否具有目標cDNA的鹼基序列，可以通過公知的方法，例如，雙脫氧核 苷酸鏈終止法等來確認。 為了獲得編碼可變區的基因，簡便的是利用5' -RACE法，其中使用了可變區基因擴增 用的引物。首先，將從雜交瘤細胞提取的RNA作為模板來合成cDNA，獲得5'-RACE cDNA文 庫。5' -RACE cDNA文庫的合成中可適宜地使用SMART RACE cDNA擴增試劑盒等市售的試 劑盒。 以所得的5'-RACE cDNA文庫為模板，通過PCR法擴增抗體基因。基於公知的抗體基 因序列，可設計小鼠抗體基因擴增用的引物。這些引物根據免疫球蛋白的亞類而具有不同 的鹼基序列。因此，理想的是使用Iso Strip小鼠單克隆抗體同種型分型試劑盒（Roche Diagnostics)等市售試劑盒來預先確定亞類。 具體地，例如為了獲得編碼小鼠 IgG的基因時，可以使用下述引物，其能夠擴增編碼作 為重鏈的Yl、Y 2a、γ 2b、γ 3、作為輕鏈的κ鏈和λ鏈的基因。為了擴增IgG的可變區 基因，通常，3'側的引物採用會退火到相當於接近可變區的恆定區的部分上的引物。而5' 側的引物則採用5' RACE cDNA文庫製作試劑盒所附帶的引物。 採用這樣擴增得到的PCR產物，可以重構由重鏈和輕鏈的組合構成的免疫球蛋白。將 經重構的免疫球蛋白針對IL-6受體的結合活性作為指標，可篩選所期望的抗體。例如，為 了獲得針對IL-6受體的抗體時，進一步優選抗體對IL-6受體的結合是特異性的。與IL-6 受體結合的抗體可例如如下所述進行篩選； (1) 使包含由雜交瘤獲得的cDNA所編碼的V區的抗體與IL-6受體表達細胞接觸的步 驟， (2) 檢測IL-6受體表達細胞與抗體的結合的步驟，和 (3) 選擇與IL-6受體表達細胞結合的抗體的步驟。 檢測抗體和IL-6受體表達細胞的結合的方法是公知的。具體地，通過如前所述的FACS 等方法，可檢測出抗體與IL-6受體表達細胞的結合。為了評價抗體的結合活性，可適宜利 用IL-6受體表達細胞的固定標本。 作為以結合活性為指標的抗體的篩選方法，還可適宜採用淘選法，其利用了噬菌體載 體。從多克隆抗體表達細胞群以重鏈和輕鏈的亞類的文庫的形式獲得抗體基因時，有利的 是利用噬菌體載體的篩選方法。編碼重鏈和輕鏈的可變區的基因通過用適當的接頭序列連 接，可形成單鏈Fv (scFv)。通過將編碼scFv的基因插入噬菌體載體，可以獲得在表面表達 scFv的噬菌體。該噬菌體與所期望的抗原接觸後，回收與抗原結合的噬菌體，從而可以回收 編碼具有目標結合活性的scFv的DNA。通過根據需要重複該操作，可以濃縮具有所期望結 合活性的scFv。 得到目標的編碼抗IL-6受體抗體的V區的cDNA後，通過識別插入該cDNA的兩末端的 限制酶位點的限制酶，將該cDNA消化。優選的限制酶會識別並消化在構成抗體基因的鹼基 序列中出現頻率低的鹼基序列。進而，為了將1拷貝的消化片段以正確方向插入載體，優選 插入能提供粘性末端的限制酶。將如上所述消化的編碼抗IL-6受體抗體的V區的cDNA插 入適當的表達載體，由此可獲得抗體表達載體。此時，只要將編碼抗體恆定區（C區）的基 因、和編碼前述V區的基因框內融合，則可獲得嵌合抗體。這裡，嵌合抗體是指恆定區和可 變區的來源不同。因此，除了小鼠-人等異種嵌合抗體之外，人-人同種嵌合抗體也包含在 本發明的嵌合抗體中。通過在預先具有恆定區的表達載體中插入前述V區基因，可以構建 嵌合抗體表達載體。具體地，例如，可在保持有編碼所期望抗體恆定區（C區）的DNA的表 達載體的5'側適宜地配置消化前述V區基因的限制酶的限制酶識別序列。對經相同組合 的限制酶消化的兩者進行框內融合，由此構建嵌合抗體表達載體。 為了製造抗IL-6受體單克隆抗體，以在表達調控區的調控下進行表達的方式，將抗體 基因整合至表達載體中。用於表達抗體的表達調控區包含例如增強子和啟動子。另外，可 以在氨基末端添加合適的信號序列，以使表達的抗體分泌到細胞外。在後述實施例中，作為 信號序列使用了具有胺基酸序列MGWSCIILFLVATATGVHS(SEQ ID N0:3)的肽，除此之外也可 以添加合適的信號序列。表達的多肽在上述序列的羧基末端部分被切斷，被切斷的多肽能 夠以成熟多肽的形式分泌到細胞外。接著，用該表達載體轉化適當的宿主細胞，由此可以獲 得表達編碼抗IL-6受體抗體的DNA的重組細胞。 為了表達抗體基因，編碼抗體重鏈（H鏈）和輕鏈（L鏈）的DNA被分別整合於不同的 表達載體中。通過用整合有Η鏈和L鏈的載體共轉化（co-transfect)相同的宿主細胞，可 以表達具備Η鏈和L鏈的抗體分子。或者，也可以將編碼Η鏈和L鏈的DNA整合於單一表 達載體中，並用其轉化宿主細胞（參照國際公開W01994/11523)。 用於將分離的抗體基因導入適當的宿主來製作抗體的宿主細胞和表達載體的多個組 合是公知的。這些表達系統均可用於分離本發明的抗原結合結構域。將真核細胞用作宿主 細胞時，可適宜使用動物細胞、植物細胞或真菌細胞。具體地，動物細胞可例示下述細胞 ： ⑴哺乳類細胞：CHO、COS、骨髓瘤、ΒΗΚ(幼倉鼠腎）、Hela、Vero、ΗΕΚ(人胎兒腎）293 等 (2) 兩棲類細胞：非洲爪蟾卵母細胞等 (3) 昆蟲細胞：sf9、sf21、Tn5 等。 或者，作為植物細胞，公知有基於來源於菸草（Nicotiana tabacum)等菸草 (Nicotiana)屬的細胞的抗體基因表達系統。植物細胞的轉化中，可以適宜使用進行了愈傷 組織培養的細胞。 進而，作為真菌細胞，可以使用如下細胞： -酵母：釀酒酵母（Saccharomyces serevisiae)等酵母（Saccharomyces)屬、巴斯德 畢赤酵母（Pichia pastoris)等畢赤酵母屬 _絲狀真菌：黑麴黴菌（Aspergillus niger)等麴黴（Aspergillus)屬。 另外，利用原核細胞的抗體基因表達系統也是公知的。例如，使用細菌細胞時，可適宜 利用大腸桿菌（E.coli)、枯草桿菌等細菌細胞。通過轉化向這些細胞中導入含有目標抗體 基因的表達載體。通過在體外培養經轉化的細胞，可以從該轉化細胞的培養物中獲得所期 望的抗體。 除了上述宿主細胞之外，重組抗體的產生也可以利用轉基因動物。即，可以從導入有編 碼所期望抗體的基因的動物獲得該抗體。例如，抗體基因可以通過框內插入編碼乳汁中固 有產生的蛋白的基因的內部，而構建為融合基因。作為分泌至乳汁中的蛋白，可利用例如山 羊β酪蛋白等。將含有插入了抗體基因的融合基因的DNA片段注入山羊的胚胎，再將該進 行了注入的胚胎導入母山羊。由接受胚胎的山羊生出的轉基因山羊（或其後代）產生的乳 汁中，能夠以與乳汁蛋白的融合蛋白的形式獲得所期望的抗體。另外，為了使由轉基因山羊 產生的含有所期望抗體的乳汁量增加，可以對轉基因山羊給予激素（Bi 〇/Techn〇l〇gy(1994 )，12(7)，699-702)。 對人給予本說明書中記載的多肽複合體時，作為該複合體中的抗原結合結構域，可以 適宜採用來源於基因重組型抗體的抗原結合結構域，該基因重組型抗體為了降低針對人的 異源抗原性等目的已進行了人工修飾。基因重組型抗體包含例如人源化（Humanized)抗體 等。這些修飾抗體可使用公知方法適宜製造。 為了製作本說明書中記載的多肽複合體的抗原結合結構域而使用的抗體的可變區 通常由被4個框架區域（FR)夾持的3個互補決定區（complementarity-determining region;⑶R)構成。⑶R是實質上決定抗體結合特異性的區域。⑶R的胺基酸序列富有多 樣性。另一方面，構成FR的胺基酸序列即便是在具有不同結合特異性的抗體之間也多顯示 高度的同一性。因此，通常認為可以通過CDR的移植來將某抗體的結合特異性移植到其它 抗體。 人源化抗體也被稱為重構（reshaped)人抗體。具體地，將人以外的動物例如小鼠抗體 的CDR移植到人抗體中的人源化抗體等是公知的。用於獲得人源化抗體的通常的基因重組 方法也是已知的。具體地，作為用於將小鼠抗體的CDR移植到人的FR中的方法，公知的是 例如重疊延伸PCR。重疊延伸PCR中，用於合成人抗體FR的引物中添加有編碼待移植小鼠 抗體CDR的鹼基序列。針對4個FR分別準備引物。通常，對於將小鼠 CDR移植到人FR中， 選擇與小鼠 FR同一性高的人FR，在維持CDR功能方面被認為有利。即，通常優選使用下述 人FR，其包含與待移植小鼠 CDR的相鄰FR胺基酸序列的同一性高的胺基酸序列。 另外，連接的鹼基序列被設計為相互框內連接。通過各引物單獨地合成人FR。結果得 到各FR上添加有編碼小鼠 CDR的DNA的產物。各產物的編碼小鼠 CDR的鹼基序列被設計 為相互重疊。接著，使以人抗體基因為模板合成的產物的重疊 CDR部分相互退火，進行互補 鏈合成反應。通過該反應，人FR通過小鼠⑶R序列而連接。 最終3個⑶R和4個FR連接得到的V區基因，通過會與其5'末端和3'末端發生退火 並添加有適當的限制酶識別序列的引物而擴增出其全長。將如上所述得到的DNA和編碼人 抗體C區的DNA以進行框內融合的方式插入表達載體中，由此可以製作人型抗體表達用載 體。將該整合載體導入宿主建立重組細胞後，培養該重組細胞，通過表達編碼該人源化抗體 的DNA，從而在該培養細胞的培養物中產生該人源化抗體（參照歐州專利公開EP239400、國 際公開 W01996/002576)。 通過定性或者定量地測定並評價如上所述製作的人源化抗體對抗原的結合活性，可以 適宜地選擇人抗體FR，以便通過CDR連接時該CDR形成良好的抗原結合位點。根據需要，也 可以按照重構人抗體CDR形成合適抗原結合位點的方式來置換FR的胺基酸殘基。例如，可 以應用將小鼠 CDR移植到人FR中使用的PCR法，向FR導入胺基酸序列的突變。具體地，可 以向會與FR發生退火的引物中導入部分鹼基序列的突變。通過這類引物合成的FR中導入 了鹼基序列的突變。通過用上述方法測定並評價進行了胺基酸置換的突變型抗體對抗原的 結合活性，可以選擇具有所期望性質的突變FR序列（Cancer Res.，（1993)53,851-856)。 此外，將具有人抗體基因的全部組成成分的轉基因動物（參照國際公開 W01993/012227、W01992/003918、W01994/002602、W01994/025585、W01996/034096、 W01996/033735)作為免疫動物，可以通過DNA免疫獲得所期望的人抗體。 進而，使用人抗體文庫通過淘選法獲得人抗體的技術也是已知的。例如，人抗體的V區 以單鏈抗體（scFv)的形式通過噬菌體展示法表達在噬菌體的表面。可以選擇表達與抗原 結合的scFv的噬菌體。通過對選擇的噬菌體的基因進行分析，可以確定編碼與抗原結合的 人抗體V區的DNA序列。確定與抗原結合的scFv的DNA序列後，將該V區序列與所期望 的人抗體C區序列框內融合後，插入適當的表達載體，由此可以製作表達載體。將該表達 載體導入上述列舉的適宜表達細胞中，通過使編碼該人抗體的基因表達，可以獲得該人抗 體。這些方法已經公知（參照國際公開W01992/001047、W01992/020791、W01993/006213、 W01993/011236、W01993/019172、W01995/001438、W01995/015388)。 另外，作為獲得抗體基因的方法，除了上述之外，還可適宜地使用如Bernasconi等 (Science (2002) 298, 2199-2202)或W02008/081008中記載的B細胞克隆（各抗體的編碼序 列的鑑定和克隆、其分離、以及用於製備各抗體（特別是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的表達 載體構建用的用途等）的方法。 EU編號和Kabat編號 根據本發明中使用的方法，分配給抗體的CDR和FR的胺基酸位置依照Kabat規 定(Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institute of Health, Bethesda, Md.，1987年和1991年）。本說明書中，抗原結合分子為抗體或抗原結合 片段時，可變區的胺基酸按照Kabat編號來表示，恆定區的胺基酸按照基於Kabat胺基酸位 置的EU編號來表不。 離子濃度備件 金屬離子濃度備件 本發明的非限定性的一個方案中，離子濃度是指金屬離子濃度。"金屬離子"是指屬於 除了氫以外的鹼金屬和銅族等第I族、鹼土類金屬和鋅族等第II族、除了硼之外的第III 族、除了碳和矽之外的第IV族、鐵族和鉬族等第VIII族、V、VI和VII族的各A亞族的元素、 以及銻、鉍、針等金屬元素的離子。金屬原子具有釋放出原子價電子而形成陽離子的性質， 稱這為離子化傾向。認為離子化傾向大的金屬富有化學活性。 作為本發明中優選的金屬離子的實例，可舉出鈣離子。鈣離子參與許多生命現象的調 節，鈣離子參與骨骼肌、平滑肌和心肌等肌肉的收縮，白細胞的運動和吞噬等的活化，血小 板的變形和分泌等的活化，淋巴細胞的活化，組胺的分泌等肥大細胞的活化，兒茶酚胺α 受體或乙醯膽鹼受體介導的細胞應答，胞吐作用，遞質從神經元末端的釋放，神經元的軸楽 流等。作為細胞內的鈣離子受體，已知具有多個鈣離子結合位點、且認為在分子進化上來源 於共同起源的肌鈣蛋白C、鈣調蛋白、小白蛋白、肌球蛋白輕鏈等，其結合模體也大多已知。 還熟知例如，鈣黏蛋白結構域、鈣調蛋白所含的EF手、蛋白激酶C所含的C2結構域、凝血蛋 白因子IX所含的Gla結構域、脫唾液酸糖蛋白受體或甘露糖結合受體所含的C型凝集素、 LDL受體所含的A結構域、膜聯蛋白、血小板反應蛋白3型結構域和EGF樣結構域。 本發明中，在金屬離子為鈣離子時，作為鈣離子濃度條件，可舉出低鈣離子濃度條件和 高鈣離子濃度條件。結合活性隨鈣離子濃度條件而變化是指，低鈣離子濃度和高鈣離子濃 度條件的不同導致抗原結合分子對抗原的結合活性發生變化。可舉出例如，高鈣離子濃度 條件下抗原結合分子對抗原的結合活性高於低鈣離子濃度條件下抗原結合分子對抗原的 結合活性的情形。此外還可舉出，低鈣離子濃度條件下抗原結合分子對抗原的結合活性高 於高鈣離子濃度條件下抗原結合分子對抗原的結合活性的情形。 本說明書中，高鈣離子濃度並不特別限於統一的數值，可以是優選選自1〇〇μΜ至10mM 之間的濃度。此外，在其他方案中，可以是選自200μΜ至5mM之間的濃度。此外，在不同的 方案中，可以是選自500μΜ至2. 5mM之間的濃度，在其他的方案中也可以是選自200μΜ至 2mM之間的濃度。進而，還可以是選自400 μ Μ至1. 5mM之間的濃度。特別優選可舉出選自 與生物體內血漿中（血中）的鈣離子濃度接近的500 μ Μ至2. 5mM之間的濃度。 本說明書中，低鈣離子濃度並不特別限於統一的數值，可以是優選選自〇. ΙμΜ至 30μΜ之間的濃度。此外，在其他方案中，可以是選自0. 2μΜ至20μΜ之間的濃度。此外， 在不同的方案中，可以是選自〇. 5 μ Μ至10 μ Μ之間的濃度，在其他的方案中也可以是選自 ΙμΜ至5μΜ之間的濃度。進而，還可以是選自2μΜ至4μΜ之間的濃度。特別優選可舉出 選自與生物體內的早期內體內的離子化鈣濃度接近的1 μ Μ至5 μ Μ之間的濃度。 本發明中，低鈣離子濃度條件的抗原結合活性低於高鈣離子濃度條件的抗原結合活性 意指，抗原結合分子在選自0. 1 μ Μ至30 μ Μ之間的鈣離子濃度下的抗原結合活性弱於選 自ΙΟΟμΜ至10mM之間的鈣離子濃度下的抗原結合活性。優選意指抗原結合分子在選自 0. 5 μ Μ至10 μ Μ之間的鈣離子濃度下的抗原結合活性弱於在選自200 μ Μ至5mM之間的鈣 離子濃度下的抗原結合活性，特別優選意指生物體內的早期內體內的鈣離子濃度下的抗原 結合活性弱於生物體內的血漿中的鈣離子濃度下的抗原結合活性，具體意指抗原結合分子 在選自1 μ Μ至5 μ Μ之間的鈣離子濃度下的抗原結合活性弱於在選自500 μ Μ至2. 5mM之 間的鈣離子濃度下的抗原結合活性。 抗原結合分子對抗原的結合活性是否隨金屬離子濃度條件而變化可以通過使用例如 前述結合活性項目中所記載的公知測定方法來確定。例如，為了確認與低鈣離子濃度條件 下的抗原結合分子的抗原結合活性相比高鈣離子濃度條件下的抗原結合分子的抗原結合 活性變得更高，對低鈣離子濃度和高鈣離子濃度條件下的抗原結合分子的抗原結合活性進 行比較。 進而，本發明中，"低鈣離子濃度條件的抗原結合活性低於高鈣離子濃度條件的抗原結 合活性"的表述也可以表述為抗原結合分子的高鈣離子濃度條件下的抗原結合活性高於低 鈣離子濃度條件下的抗原結合活性。應予說明，本發明中有時也將"低鈣離子濃度條件的抗 原結合活性低於高鈣離子濃度條件的抗原結合活性"記載為"低鈣離子濃度條件下的抗原 結合能力弱於高鈣離子濃度條件下的抗原結合能力"，此外，有時也將"使低鈣離子濃度條 件的抗原結合活性低於高鈣離子濃度條件的抗原結合活性"記載為"使低鈣離子濃度條件 下的抗原結合能力弱於高鈣離子濃度條件下的抗原結合能力"。 本領域技術人員可以適宜選擇測定抗原結合活性時的鈣離子濃度以外的條件，沒有特 別限定。例如，可以在HEPES緩衝液、37°C的條件下進行測定。例如，可以使用Biacore(GE Healthcare)等進行測定。對於抗原結合分子和抗原的結合活性的測定，在抗原為可溶型抗 原時，通過對固定有抗原結合分子的晶片流過作為分析物的抗原，由此可以評價對可溶型 抗原的結合活性，在抗原為膜型抗原時，通過對固定有抗原的晶片流過作為分析物的抗原 結合分子，由此可以評價對膜型抗原的結合活性。 本發明的抗原結合分子中，只要低鈣離子濃度條件的抗原結合活性弱於高鈣離子濃度 條件的抗原結合活性，則低鈣離子濃度條件下的抗原結合活性和高鈣離子濃度條件下的抗 原結合活性之比沒有特別限定，優選相對於抗原的低鈣離子濃度條件的KD(Dissociation constant :解離常數）和高鈣離子濃度條件的KD之比KD (Ca3 μ M) /KD (Ca2mM)的值為2以 上，進一步優選KD (Ca3 μ M) /KD (Ca2mM)的值為 10 以上，進一步優選KD (Ca3 μ M) /KD (Ca2mM) 的值為40以上。Η)(ε&3μΜ)/Η)(ε&2πιΜ)的值的上限沒有特別限定，只要本領域技術人員 的技術可以製作，則可以是400、1000、10000等任意的值。此外，也可規定KD(Ca3 μ Μ)/ KD(Cal.2mM)的值。即，KD(Ca3yM)/KD(Cal.2mM)的值為 2 以上，進一步優選 KD(Ca3yM)/ 1?(0&1.21111)的值為10以上，進一步優選1(0(0&3以]\〇/1(0(0 &1.21111)的值為40以上。對 KD(Ca3yM)/KD(Cal. 2mM)的值上限沒有特別限定，只要本領域技術人員的技術可以製備， 就可以為400、1000、10000等任何值。 作為抗原結合活性的值，在抗原為可溶型抗原時可以使用KD (解離常數），而在抗原為 膜型抗原時可以使用表觀KD(Apparent dissociation constant:表觀解離常數）。KD(解 離常數）和表觀KD(表觀解離常數）可通過本領域技術人員公知的方法進行測定，例如可 使用Biacore(GE healthcare)、斯卡查德圖（Scatchard plot)、流式細胞儀等。 此外，作為示出本發明的抗原結合分子的低鈣濃度條件下的抗原結合活性和 高鈣濃度條件下的抗原結合活性之比的其它指標，還可優選使用例如解離速率常數 kd (Dissociation rate constant:解離速率常數）。代替KD (解離常數）而使用kd (解離 速率常數）來作為示出結合活性之比的指標時，相對於抗原的低鈣濃度條件下的kd(解離 速率常數）和高鈣濃度條件下的kd(解離速率常數）之比kd(低鈣濃度條件）/kd(高鈣濃 度條件）的值優選為2以上，進一步優選為5以上，進一步優選為10以上，更優選為30以 上。Kd(低鈣濃度條件）/kd(高鈣濃度條件）的值的上限沒有特別限定，只要本領域技術人 員的技術常識可以製作，則可以為50、100、200等任意的值。 作為抗原結合活性的值，在抗原為可溶型抗原時可以使用kd (解離速率常數），在抗原 為膜型抗原時可以使用表觀kd (Apparent dissociation rate constant :表觀解離速率常 數）。kd(解離速率常數）和表觀kd(表觀解離速率常數）可通過本領域技術人員公知的 方法測定，例如可使用Biacore (GE healthcare)、流式細胞儀等。應予說明，本發明中，在測 定不同鈣離子濃度下的抗原結合分子的抗原結合活性時，鈣濃度以外的條件優選為相同。 例如，作為本發明提供的一個方案的低鈣離子濃度條件的抗原結合活性低於高鈣離子 濃度條件的抗原結合活性的抗原結合結構域或抗體可通過包含以下步驟（a)?（c)的抗原 結合結構域或抗體的篩選來獲得： (a) 獲得低鈣濃度條件下的抗原結合結構域或抗體的抗原結合活性的步驟， (b) 獲得高鈣濃度條件下的抗原結合結構域或抗體的抗原結合活性的步驟，和 (c) 選擇低鈣濃度條件下的抗原結合活性低於高鈣濃度條件下的抗原結合活性的抗原 結合結構域或抗體的步驟。 進而，作為本發明提供的一個方案的低鈣離子濃度條件的抗原結合活性低於高鈣離子 濃度條件的抗原結合活性的抗原結合結構域或抗體可通過包含以下步驟（a)?（c)的抗原 結合結構域或抗體或其文庫的篩選來獲得： (a) 在高鈣濃度條件下使抗原結合結構域或抗體或其文庫與抗原接觸的步驟， (b) 將在前述步驟（a)中與抗原結合的抗原結合結構域或抗體置於低鈣濃度條件下的 步驟，和 (c) 對在前述步驟（b)中發生解離的抗原結合結構域或抗體進行分離的步驟。 此外，作為本發明提供的一個方案的低鈣離子濃度條件的抗原結合活性低於高鈣離子 濃度條件的抗原結合活性的抗原結合結構域或抗體可通過包含以下步驟（a)?（d)的抗原 結合結構域或抗體或其文庫的篩選來獲得： (a) 在低鈣濃度條件下使抗原結合結構域或抗體的文庫與抗原接觸的步驟， (b) 選擇在前述步驟（a)中與抗原不結合的抗原結合結構域或抗體的步驟， (c) 使在前述步驟（b)中選擇的抗原結合結構域或抗體在高鈣濃度條件下與抗原結合 的步驟，和 (d) 對在前述步驟（c)中與抗原結合的抗原結合結構域或抗體進行分離的步驟。 進而，作為本發明提供的一個方案的低鈣離子濃度條件的抗原結合活性低於高鈣離子 濃度條件的抗原結合活性的抗原結合結構域或抗體可通過包含以下步驟（a)?（c)的篩選 方法來獲得： (a) 在高鈣濃度條件下使抗原結合結構域或抗體的文庫與固定有抗原的柱接觸的步 驟， (b) 將在前述步驟（a)中與柱結合的抗原結合結構域或抗體在低鈣濃度條件下從柱洗 脫的步驟，和 (c) 對在前述步驟（b)中被洗脫的抗原結合結構域或抗體進行分離的步驟。 進而，作為本發明提供的一個方案的低鈣離子濃度條件的抗原結合活性低於高鈣離子 濃度條件的抗原結合活性的抗原結合結構域或抗體可通過包含以下步驟（a)?（d)的篩選 方法來獲得： (a) 在低鈣濃度條件下使抗原結合結構域或抗體的文庫通過固定有抗原的柱的步驟， (b) 對在前述步驟（a)中未與柱結合而洗脫的抗原結合結構域或抗體進行回收的步 驟， (c) 使在前述步驟（b)中回收的抗原結合結構域或抗體在高鈣濃度條件下與抗原結合 的步驟，和 (d) 對在前述步驟（c)中與抗原結合的抗原結合結構域或抗體進行分離的步驟。 進而，作為本發明提供的一個方案的低鈣離子濃度條件的抗原結合活性低於高鈣離子 濃度條件的抗原結合活性的抗原結合結構域或抗體可通過包含以下步驟（a)?（d)的篩選 方法來獲得： (a) 在高鈣濃度條件下使抗原結合結構域或抗體的文庫與抗原接觸的步驟， (b) 獲得在前述步驟（a)中與抗原結合的抗原結合結構域或抗體的步驟， (c) 將在前述步驟（b)中獲得的抗原結合結構域或抗體置於低鈣濃度條件下的步驟， 和 (d) 對前述步驟（c)中抗原結合活性弱於前述步驟（b)中選擇的標準的抗原結合結構 域或抗體進行分離的步驟。 應予說明，前述步驟可以重複2次以上。所以，根據本發明可提供通過上述篩選方法中 進一步包括將（a)?（c)或（a)?（d)的步驟重複2次以上的步驟的篩選方法而獲得的低 鈣離子濃度條件的抗原結合活性低於高鈣離子濃度條件的抗原結合活性的抗原結合結構 域或抗體。（a)?（c)或（a)?（d)的步驟的重複次數沒有特別限定，通常為10次以內。 本發明的篩選方法中，低鈣濃度條件下的抗原結合結構域或抗體的抗原結合活性只要 是離子化鈣濃度為〇. 1 μ Μ?30 μ Μ之間的抗原結合活性則沒有特別限定，作為優選的離 子化鈣濃度，可舉出〇. 5 μ Μ?10 μ Μ之間的抗原結合活性。作為更優選的離子化鈣濃度， 可舉出生物體內的早期內體內的離子化鈣濃度，具體可舉出ΙμΜ?5μΜ下的抗原結合活 性。另外，高鈣濃度條件下的抗原結合結構域或抗體的抗原結合活性只要是離子化鈣濃度 為ΙΟΟμΜ?10mM之間的抗原結合活性則沒有特別限定，作為優選的離子化鈣濃度，可舉出 200μΜ?5mM之間的抗原結合活性。作為更優選的離子化鈣濃度，可舉出生物體內的血漿 中的離子化鈣濃度，具體可舉出〇. 5mM?2. 5mM時的抗原結合活性。 抗原結合結構域或抗體的抗原結合活性可通過本領域技術人員公知的方法測定， 對於離子化鈣濃度以外的條件，本領域技術人員可以適宜決定。抗原結合結構域或抗體 的抗原結合活性可以作為KD(Dissociation constant :解離常數）、表觀KD(Apparent dissociation constant:表觀解離常數）、解離速率kd (Dissociation rate:解離速率常 數）、或表觀kd (Apparent dissociation:表觀解離速率常數）等來進行評價。它們可以通 過本領域技術人員公知的方法來測定，例如可以使用Biacore(GE healthcare)、斯卡查德 圖、FACS等。 本發明中，選自高鈣濃度條件下的抗原結合活性高於低鈣濃度條件下的抗原結合活性 的抗原結合結構域或抗體的步驟、與選擇低鈣濃度條件下的抗原結合活性低於高鈣濃度條 件下的抗原結合活性的抗原結合結構域或抗體的步驟含義相同。 只要高鈣濃度條件下的抗原結合活性高於低鈣濃度條件下的抗原結合活性，則高鈣濃 度條件下的抗原結合活性與低鈣濃度條件下的抗原結合活性之差沒有特別限定，優選高鈣 濃度條件下的抗原結合活性是低鈣濃度條件下的抗原結合活性的2倍以上，進一步優選為 10倍以上，更優選為40倍以上。 通過前述篩選方法篩選得到的本發明的抗原結合結構域或抗體可以是任意的抗原結 合結構域或抗體，例如，可以篩選上述抗原結合結構域或抗體。例如，可以篩選具有天然序 列的抗原結合結構域或抗體，也可以篩選胺基酸序列被置換的抗原結合結構域或抗體。 f庫 根據一個方案，本發明的抗原結合結構域或抗體可以由文庫獲得，該文庫主要由多種 抗原結合分子形成，所述多種抗原結合分子的序列相互不同，並且其抗原結合結構域中含 有至少一個離子濃度條件使抗原結合分子的抗原結合活性隨離子濃度條件而變化的氨基 酸殘基。作為離子濃度的實例，優選可舉出金屬離子濃度或氫離子濃度。 本說明書中，"文庫"是指多種抗原結合分子或含有抗原結合分子的多種融合多肽、或 編碼它們的序列的核酸、多核苷酸。文庫中所含的多種抗原結合分子或含有抗原結合分子 的多種融合多肽的序列並非單一的序列，而是序列相互不同的抗原結合分子或含有抗原結 合分子的融合多肽。 本說明書中，序列相互不同的多種抗原結合分子的記載中的"序列相互不同"這一術語 意指文庫中的各抗原結合分子的序列相互不同。即，文庫中的相互不同的序列的數量反映 文庫中的序列不同的獨立克隆的數量，有時也被視為"文庫大小"。通常的噬菌體展示文庫 為10 6至1012,通過使用核糖體展示法等公知的技術，可將文庫大小放大至1014。然而，噬菌 體文庫的淘選選擇時使用的噬菌體顆粒的實際數目通常比文庫大小大10至10000倍。該過 量倍數也稱為"文庫當量數"，表示具有相同胺基酸序列的各克隆能夠存在10至10000個。 所以，本發明中的"序列相互不同"這一術語意指文庫當量數除外的文庫中的各抗原結合分 子的序列相互不同，更具體意指序列相互不同的抗原結合分子存在1〇 6至1〇14個分子、優選 107至1012個分子、進一步優選10 8至1011個分子、特別優選108至1012。 此外，本發明的主要由多種抗原結合分子形成的文庫這一記載中的術語"多種"，對於 例如本發明的抗原結合分子、融合多肽、多核苷酸分子、載體或病毒來說，通常是指這些物 質的2種以上的集合。例如，只要某2個以上的物質在特定形態方面相互不同，則表示該 物質存在2種以上。作為實例，可舉出胺基酸序列中的特定胺基酸位置觀察到的突變體氨 基酸。例如，當除了柔性殘基以外或除了露出於表面的超變胺基酸位置的特定突變體氨基 酸以外，序列實質上相同，優選為相同序列的本發明的2個以上的抗原結合分子存在時，則 本發明的抗原結合分子存在多個。在其他實施例中，當除了編碼柔性殘基的鹼基以外或除 了編碼露出於表面的超變胺基酸位置的特定突變體胺基酸的鹼基以外實質上相同、優選為 相同的序列的本發明的2個以上的多核苷酸分子存在時，貝U本發明的多核苷酸分子存在多 個。 進而，本發明的主要由多種抗原結合分子形成的文庫的記載中的"主要由...形成"的 表述反映出文庫中的序列不同的獨立克隆的數量中，抗原結合分子對抗原的結合活性隨離 子濃度條件而不同的抗原結合分子的數量。具體地，優選表現出這種結合活性的抗原結合 分子在文庫中至少存在1〇 4個分子。此外，更優選本發明的抗原結合結構域可由表現出這種 結合活性的抗原結合分子至少存在1〇5個分子的文庫中獲得。進一步優選本發明的抗原結 合結構域可由表現出這種結合活性的抗原結合分子至少存在1〇 6個分子的文庫中獲得。特 別優選本發明的抗原結合結構域可由表現出這種結合活性的抗原結合分子至少存在1〇7個 分子的文庫中獲得。還優選本發明的抗原結合結構域可由表現出這種結合活性的抗原結合 分子至少存在1〇 8個分子的文庫中獲得。其它表現中，也可適宜地表現為文庫中的序列不同 的獨立克隆的數量中的抗原結合分子對抗原的結合活性隨離子濃度條件而不同的抗原結 合分子的比例。具體地，本發明的抗原結合結構域可以由表現出這種結合活性的抗原結合 分子佔文庫中序列不同的獨立克隆的數量的0. 1 %至80 %、優選0. 5 %至60 %、更優選1 % 至40%、進一步優選2%至20%、特別優選4%至10%的文庫中獲得。融合多肽、多核苷酸 分子或載體的情形也與上述相同，可以用分子的數量或全部分子中的比例來表現。此外，病 毒的情形也與上述相同，可以用病毒個體的數量或全部個體中的比例來表現。 抗原結合結構域的抗原結合活件隨鈣離子濃度備件而奪化的氨某酸 通過前述篩選方法篩選的本發明的抗原結合結構域或抗體可用任意方法製備，例如， 在金屬離子為鈣離子濃度的情形中，可以使用預先存在的抗體、預先存在的文庫（噬菌體 文庫等）、由對動物進行免疫得到的雜交瘤或來自免疫動物的B細胞製得的抗體或文庫、向 這些抗體或文庫導入能螯合鈣的胺基酸（例如天冬氨酸、穀氨酸）或非天然胺基酸突變而 得的抗體或文庫（能螯合鈣的胺基酸（例如天冬氨酸、穀氨酸）或非天然胺基酸的含有率 提高的文庫、或者在特定位置導入能夠螯合鈣的胺基酸（例如天冬氨酸、穀氨酸）或非天然 胺基酸突變而得的文庫等）等。 如前所述，作為使抗原結合分子的抗原結合活性隨離子濃度條件而變化的氨 基酸的實例，例如，在金屬離子為鈣離子時，只要是形成鈣結合模體的胺基酸即可， 則不論其種類如何。鈣結合模體是本領域技術人員所周知的，並且有詳細記載（例 如 Springer 等（Cell (2000) 102, 275-277)、Kawasaki 和 Kretsinger (Protein Prof. (1995) 2,305-490)、Moncrief等（J. Mol. Evol. (1990)30,522-562)、Chauvaux等（Biochem. J. (1990) 265, 261-265)、Bairoch 和 Cox (FEBS Lett. (1990) 269, 454-456)、Davis (New Biol. (1990) 2, 410-419)、Schaefer 等（Genomics (1995) 25, 638 ?643)、Economou 等 (EMBOJ. (1990) 9, 349-354)、Wurzburg 等（Structure. (2006) 14, 6, 1049-1058))。即，本發 明抗原結合分子中可以含有ASGPR，⑶23、MBR、DC-SIGN等C型凝集素等任意的公知鈣結 合模體。作為這種鈣結合模體的優選實例，除了上述之外，還可舉出SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10所述的抗原結合結構域中所含的鈣結合模體。 此外，作為抗原結合分子的抗原結合活性隨鈣離子濃度條件而變化的胺基酸的實例， 也可優選使用具有金屬螯合作用的胺基酸。作為具有金屬螯合作用的胺基酸的實例，優選 可舉出例如：絲氨酸（Ser(S))、蘇氨酸（Thr(T))、天冬醯胺（Asn(N))、穀氨醯胺（Gln(Q))、 天冬氨酸（Asp(D))和穀氨酸（Glu(E))等。 含有前述胺基酸的抗原結合結構域的位置並不限於特定的位置，只要是使抗原結合分 子的抗原結合活性隨鈣離子濃度條件而變化，則可以是形成抗原結合結構域的重鏈可變區 或輕鏈可變區中的任意位置。即，本發明的抗原結合結構域可以由下述文庫獲得，該文庫主 要由重鏈的抗原結合結構域中含有使抗原結合分子的抗原結合活性隨鈣離子濃度條件而 變化的胺基酸、且序列相互不同的抗原結合分子形成。此外，在其他非限定性方案中，本發 明的抗原結合結構域可以由下述文庫獲得，該文庫主要由重鏈的CDR3中含有該胺基酸、且 序列相互不同的抗原結合分子形成。在其它非限定性方案中，本發明的抗原結合結構域可 以由下述文庫獲得，該文庫主要由重鏈的CDR3的以Kabat編號表示的95位、96位、100a位 和/或101位含有該胺基酸、且序列相互不同的抗原結合分子形成。 此外，在本發明的非限定性的一個方案中，本發明的抗原結合結構域可以由下述文庫 獲得，該文庫主要由輕鏈的抗原結合結構域中含有使抗原結合分子的抗原結合活性隨鈣離 子濃度條件而變化的胺基酸、且序列相互不同的抗原結合分子形成。此外，在其他方案中， 本發明的抗原結合結構域可以由下述文庫獲得，該文庫主要由輕鏈的CDR1中含有該氨基 酸、且序列相互不同的抗原結合分子形成。在其它方案中，本發明的抗原結合結構域可以由 下述文庫獲得，該文庫主要由輕鏈的CDR1的以Kabat編號表示的30位、31位和/或32位 含有該胺基酸、且序列相互不同的抗原結合分子形成。 此外，在其他非限定性方案中，本發明的抗原結合結構域可以由下述文庫獲得，該文庫 主要由輕鏈的CDR2中含有該胺基酸殘基、且序列相互不同的抗原結合分子形成。在其它方 案中，提供下述文庫，該文庫主要由輕鏈的CDR2的以Kabat編號表示的50位含有該胺基酸 殘基、且序列相互不同的抗原結合分子形成。 進而在其他非限定性方案中，本發明的抗原結合結構域可以由下述文庫獲得，該文庫 主要由輕鏈的CDR3中含有該胺基酸殘基、且序列相互不同的抗原結合分子形成。在其它 方案中，本發明的抗原結合結構域可以由下述文庫獲得，該文庫主要由輕鏈的CDR3的以 Kabat編號表示的92位含有該胺基酸殘基、且序列相互不同的抗原結合分子形成。 此外，本發明的抗原結合結構域可以由下述文庫作為本發明的不同方案來獲得，該文 庫主要由選自上述記載的輕鏈的⑶R1、⑶R2和⑶R3中的2個或3個⑶R含有該胺基酸殘 基、且序列相互不同的抗原結合分子形成。進而，本發明的抗原結合結構域可以由下述文庫 獲得，該文庫主要由輕鏈的以Kabat編號表示的30位、31位、32位、50位和/或92位中的 任一者以上含有該胺基酸殘基、且序列相互不同的抗原結合分子形成。 在特別優選的實施方案中，理想的是抗原結合分子的輕鏈和/或重鏈可變區的框架序 列具有人的種系框架序列。因此，在本發明的一個方案中，若框架序列完全為人的序列，則 認為在給予人（例如疾病的治療）時，本發明的抗原結合分子基本或完全不會引起免疫原 性反應。根據上述含義，本發明的"含有種系序列"意指本發明的框架序列的一部分與任意 的人的種系框架序列的一部分相同。例如，在本發明的抗原結合分子的重鏈FR2的序列為 多個不同的人的種系框架序列的重鏈FR2序列組合得到的序列時，該抗原結合分子也是本 發明的"含有種系序列"的抗原結合分子。 作為框架的實例，優選可舉出例如：V-Base (http://vbase. mrc-cpe. cam. ac. uk/) 等網站中所包括的、現在已知的完全人型框架區域的序列。這些框架區域的序列能夠 適宜用作本發明的抗原結合分子中所含的種系序列。種系序列可基於其相似性來分類 (Tomlinson 等（J.Mol.Biol. (1992)227,776_798)Williams 和 Winter(Eur.J. Immunol. (1993)23, 1456-1461)和 Cox 等（Nat. Genetics (1994) 7, 162-168))。可以從分類為 7 個亞 類的V κ、分類為10個亞類的V λ、分類為7個亞類的VH中適宜選擇合適的種系序列。 完全人型VH序列並不僅限於下述，優選可舉出例如：VH1亞類（例如，VH1-2、VH1-3、 VH1-8、VH1-18、VH1-24、VH1-45、VH1-46、VH1-58、VH1_69)、VH2 亞類（例如，VH2-5、VH2-26、 VH2-70)、VH3 亞類（VH3-7、VH3-9、VH3-11、VH3-13、VH3-15、VH3-16、VH3-20、VH3-21、 VH3-23、VH3-30、VH3-33、VH3-35、VH3-38、VH3-43、VH3-48、VH3-49、VH3-53、VH3-64、VH3-66、 VH3-72、VH3-73、VH3-74)、VH4 亞類（VH4-4、VH4-28、VH4-31、VH4-34、VH4-39、VH4-59、 VH4-61)、VH5 亞類（VH5-51)、VH6 亞類（VH6-1)、VH7 亞類（VH7-4、VH7-81)的 VH 序列等。 它們也記載於公知文獻（Matsuda等（J.Exp. Med. (1998) 188,1973-1975))等中，本領域技 術人員可以基於它們的序列信息適宜設計本發明的抗原結合分子。也可優選使用它們以外 的完全人型框架或框架的亞區域（sub-region)。 完全人型VK序列並不僅限於下述，優選可舉出例如：分類為Vkl亞類的A20、 A30、LI、L4、L5、L8、L9、Lll、L12、L14、L15、L18、L19、L22、L23、L24、02、04、08、012、 014、018 ;分類為 Vk2 亞類的 Al、A2、A3、A5、A7、A17、A18、A19、A23、01、Oil ;分類為 Vk3 亞類的 All、A27、L2、L6、L10、L16、L20、L25 ;分類為 Vk4 亞類的 B3 ;分類為 Vk5 亞 類的B2 (本說明書中也稱為Vk5-2);分類為VK6亞類的A10、A14、A26等（Kawasaki 等（Eur.J. Immunol. (2001) 31，1017-1028)、Schable 和 Zachau (Biol. Chem. Hoppe Seyler(1993)374, 1001-1022)和 fcensing-Kuppers 等（Gene(1997)191， 173-181))。 完全人型的VL序列並不僅限於下述，優選可舉出例如：分類為VL1亞類的Vl-2、Vl-3、 Vl-4、Vl-5、Vl-7、Vl-9、Vl-11、Vl-13、Vl-16、Vl-17、Vl-18、Vl-19、Vl-20、V1-22 ;分類為 VL1 亞類的 V2-1、V2-6、V2-7、V2-8、V2-11、V2-13、V2-14、V2-15、V2-17、V2-19 ;分類為 VL3 亞類的 V3-2、V3-3、V3-4 ;分類為 VL4 亞類的 V4-1、V4-2、V4-3、V4-4、V4-6 ;分類為 VL5 亞 類的 V5-l、V5-2、V5-4、V5-6 等（Kawasaki 等（GenomeRes. (1997)7,250-261))。 通常這些框架序列根據一個或更多胺基酸殘基的區別而相互不同。這些框架序列可以 與本發明的"使抗原結合分子的抗原結合活性隨離子濃度條件而變化的至少一個胺基酸殘 基"一起使用。作為與本發明的"使抗原結合分子的抗原結合活性隨離子濃度條件而變化 的至少一個胺基酸殘基" 一起使用的完全人型框架的實例，並不僅限於此，另外還可舉出： K0L、NEWM、REI、EU、TUR、TEI、LAY、P0M等（例如，前述的Kabat等（1991)和Wu等（J·Exp. Med. (1970) 132, 211-250))。 本發明並不受特定理論的束縛，認為種系序列的使用有望排除大多數個體中有害免疫 應答的一個理由如下所述。通常的免疫應答中產生的親和性成熟步驟的結果造成免疫球蛋 白的可變區頻繁地產生體細胞的突變。這些突變主要產生在其序列為超變的⑶R的附近， 對框架區域的殘基也造成影響。這些框架的突變在種系基因中不存在，而成為患者的免疫 原性的可能性也小。另一方面，通常的人群暴露於種系基因所表達的框架序列的大多數，作 為免疫耐受性的結果，預測這些種系框架在患者中的免疫原性低或為非免疫原性。為了使 免疫耐受性的可能性最大，編碼可變區的基因可以從通常存在的功能性種系基因的集合中 選擇。 為了製作本發明的、前述框架序列中含有使抗原結合分子的抗原結合活性隨鈣離子 濃度條件而變化的胺基酸的抗原結合分子，可以適宜地採用位點特異性誘變法（Kunkel等 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 82, 488-492))或重疊延伸 PCR 等公知方法。 例如，通過將被選擇作為預先含有使抗原結合分子的抗原結合活性隨鈣離子濃度條 件而變化的至少一個胺基酸殘基的框架序列的輕鏈可變區、與被製作為隨機可變區序列文 庫的重鏈可變區組合，由此可以製作含有本發明的多種序列相互不同的抗原結合分子的文 庫。作為這樣的非限定性實例，在離子濃度為鈣離子濃度時，可優選舉出例如：將SEQ ID N0:4(Vk5-2)所述的輕鏈可變區序列所代表的屬於Vk5-2家族的輕鏈可變區序列和被製作 作為隨機可變區序列文庫的重鏈可變區組合而成的文庫。 此外，也可以進行設計，以使前述被選擇作為預先含有使抗原結合分子的抗原結合活 性隨鈣離子濃度條件而變化的至少一個胺基酸殘基的框架序列的輕鏈可變區的序列中含 有作為該胺基酸殘基以外的殘基的各種胺基酸。本發明中，這樣的殘基也被稱為柔性殘基。 本發明的抗原結合分子的抗原結合活性只要隨離子濃度條件而變化，則該柔性殘基的數目 和位置並不限於特定的方案。即，重鏈和/或輕鏈的CDR序列和/或FR序列中可以含有一 個或更多的柔性殘基。例如，在離子濃度為鈣離子濃度時，作為導入SEQ ID N0:4(Vk5-2) 所述的輕鏈可變區序列中的柔性殘基的非限定性實例，可舉出表1或表2所述的胺基酸殘 基：
[表1]
【權利要求】
1. 誘導針對抗原的免疫應答的藥物組合物，其中，所述藥物組合物包含含有抗原結合 結構域和FcRn結合結構域的抗原結合分子作為有效成分，所述抗原結合結構域對所述抗 原的結合活性隨離子濃度條件而變化，所述FcRn結合結構域在pH中性範圍條件下具有 FcRn結合活性。
2. 權利要求1的藥物組合物，其中，所述離子濃度為鈣離子濃度。
3. 權利要求2的藥物組合物，其中，所述抗原結合結構域為具有下述特徵的抗原結合 結構域：與低鈣離子濃度條件下對該抗原的結合活性相比，高鈣離子濃度條件下的抗原結 合活性高。
4. 權利要求1的藥物組合物，其中，所述離子濃度條件為pH條件。
5. 權利要求4的藥物組合物，其中，所述抗原結合結構域為具有下述特徵的抗原結合 結構域：與pH酸性範圍條件下對該抗原的結合活性相比，pH中性範圍條件下的抗原結合活 性高。
6. 權利要求1飛中任一項的藥物組合物，其中，所述抗原結合分子為具有針對所述抗 原的中和活性的抗原結合分子。
7. 權利要求1飛中任一項的藥物組合物，其中，所述抗原結合分子為具有針對表達所 述抗原的細胞的細胞毒活性的抗原結合分子。
8. 權利要求1-7中任一項的藥物組合物，其中，所述FcRn結合結構域包含抗體的Fc 區。
9. 權利要求8的藥物組合物，其中，所述Fc區為下述Fc區：在Fc區的以EU編號表示 的位點中，選自257位、308位、428位和434位的至少一個以上的胺基酸與天然型Fc區對 應位點的胺基酸不同的Fc區。
10. 權利要求8或9的藥物組合物，其中，所述Fc區為含有Fc區的以EU編號表示的選 自以下的至少一個以上的胺基酸的Fc區： 257位胺基酸為Ala， 308位胺基酸為Pro, 428位胺基酸為Leu，和 434位胺基酸為Tyr。
11. 權利要求8~10中任一項的藥物組合物，其中，所述Fc區的Fcy受體結合活性具 有下述特徵：與EU編號297位連接的糖鏈為含巖藻糖糖鏈的天然型人IgG的Fc區的Fc γ 受體結合活性相比高。
12. 權利要求11的藥物組合物，其中，所述Fc γ受體為Fc YRIa、Fc YRIIa(R)、 Fc YRIIa(H)、Fc YRIIb、Fc YRIIIa(V)或 Fc YRIIIa(F)。
13. 權利要求11或12的藥物組合物，其中，所述Fc區為下述Fc區：在Fc區中以EU編 號表示的位點中，選自以下的至少一個以上的胺基酸與天然型Fc區對應位點的胺基酸不 同的 Fc 區：221 位、222 位、223 位、224 位、225 位、227 位、228 位、230 位、231 位、232 位、233 位、234 位、235 位、236 位、237 位、238 位、239 位、240 位、241 位、243 位、244 位、245 位、246 位、247 位、249 位、250 位、251 位、254 位、255 位、256 位、258 位、260 位、262 位、263 位、264 位、265 位、266 位、267 位、268 位、269 位、270 位、271 位、272 位、273 位、274 位、275 位、276 位、278 位、279 位、280 位、281 位、282 位、283 位、284 位、285 位、286 位、288 位、290 位、291 位、292 位、293 位、294 位、295 位、296 位、297 位、298 位、299 位、300 位、301 位、302 位、303 位、304 位、305 位、311 位、313 位、315 位、317 位、318 位、320 位、322 位、323 位、324 位、325 位、326 位、327 位、328 位、329 位、330 位、331 位、332 位、333 位、334 位、335 位、336 位、337 位、339 位、376 位、377 位、378 位、379 位、380 位、382 位、385 位、392 位、396 位、421 位、427 位、428位、429位、434位、436位和440位。
14.權利要求1Γ13中任一項的藥物組合物，其中，所述Fc區為在Fc區中以EU編號表 示的位點中含有選自以下的至少一個以上的胺基酸的Fc區： 221位胺基酸為Lys或Tyi*中任一個， 222位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個， 223位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Lys中任一個， 224位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個， 225位胺基酸為Glu、Lys或Trp中任一個， 227位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 228位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 230位胺基酸為Ala、Glu、Gly或Tyr中任一個， 231位胺基酸為Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個， 232位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 233 位胺基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 234 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 235 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 236 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 237 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 238 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 239 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 240位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 241位胺基酸為Asp、Glu、Leu、Arg、Trp或Tyr中任一個， 243 位胺基酸為 Leu、Glu、Leu、Gin、Arg、Trp 或 Tyr 中任一個， 244位胺基酸為His， 245位胺基酸為Ala， 246位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 247 位胺基酸為 Ala、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 249位胺基酸為Glu、His、Gin或Tyr中任一個， 250位胺基酸為Glu或Gin中任一個， 251位胺基酸為Phe， 254位胺基酸為Phe、Met或Tyr中任一個， 255位胺基酸為Glu、Leu或Tyr中任一個， 256位胺基酸為Ala、Met或Pro中任一個， 258位胺基酸為Asp、Glu、His、Ser或Tyr中任一個， 260位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 262位胺基酸為Ala、Glu、Phe、lie或Thr中任一個， 263位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 264 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Trp或Tyr中任一個， 265 位胺基酸為 Ala、Leu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 266位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 267 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 268 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val 或 Trp 中任一個， 269 位胺基酸為 Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 270 位胺基酸為 Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個， 271 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 272 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 273位胺基酸為Phe或lie中任一個， 274 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 275位胺基酸為Leu或Trp中任一個， 276 位胺基酸為、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或Tyr中任一個， 278 位胺基酸為 Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val或Trp中任一個， 279位胺基酸為Ala， 280 位胺基酸為 Ala、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gin、Trp 或 Tyr 中任一個， 281位胺基酸為Asp、Lys、Pro或Tyr中任一個， 282位胺基酸為Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個， 283 位胺基酸為 Ala、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Arg 或 Tyr 中任一個， 284位胺基酸為Asp、Glu、Leu、Asn、Thr或Tyr中任一個， 285位胺基酸為Asp、Glu、Lys、Gin、Trp或Tyr中任一個， 286位胺基酸為Glu、Gly、Pro或Tyr中任一個， 288位胺基酸為Asn、Asp、Glu或Tyr中任一個， 290 位胺基酸為 Asp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個， 291 位胺基酸為 Asp、Glu、Gly、His、lie、Gin 或 Thr 中任一個， 292位胺基酸為Ala、Asp、Glu、Pro、Thr或Tyr中任一個， 293 位胺基酸為 Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 294 位胺基酸為 Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 295 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 296 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr 或 Val中任一個， 297 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 298 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 299 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、 Ser、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 300 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val或Trp中任一個， 301位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 302位胺基酸為lie， 303位胺基酸為Asp、Gly或Tyr中任一個， 304位胺基酸為Asp、His、Leu、Asn或Thr中任一個， 305位胺基酸為Glu、lie、Thr或Tyr中任一個， 311位胺基酸為Ala、Asp、Asn、Thr、Val或Tyr中任一個， 313位胺基酸為Phe， 315位胺基酸為Leu， 317位胺基酸為Glu或Gln， 318 位胺基酸為 His、Leu、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 320 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個， 322 位胺基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 323位胺基酸為lie， 324 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個， 325 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 326 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 327 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 328 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 329 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 330 位胺基酸為 Cys、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 331 位胺基酸為 Asp、Phe、His、Ile、Leu、Met、Gln、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 332 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 333 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 334 位胺基酸為 Ala、Glu、Phe、lie、Leu、Pro 或 Thr 中任一個， 335 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 336位胺基酸為Glu、Lys或Tyr中任一個， 337位胺基酸為Glu、His或Asn中任一個， 339 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、lie、Lys、Met、Asn、Gin、Arg、Ser 或 Thr 中任一個， 376位胺基酸為Ala或Val中任一個， 377位胺基酸為Gly或Lys中任一個， 378位胺基酸為Asp， 379位胺基酸為Asn， 380位胺基酸為Ala、Asn或Ser中任一個， 382位胺基酸為Ala或lie中任一個， 385位胺基酸為Glu， 392位胺基酸為Thr， 396位胺基酸為Leu， 421位胺基酸為Lys， 427位胺基酸為Asn， 428位胺基酸為Phe或Leu中任一個， 429位胺基酸為Met， 434位胺基酸為Trp， 436位胺基酸為lie，和 440位胺基酸為Gly、His、lie、Leu或Tyr中任一個。
15. 權利要求11~14中任一項的藥物組合物，其中，所述天然型Fc區為：EU編號297位 連接的糖鏈為含巖藻糖糖鏈的人IgGl、人IgG2、人IgG3或人IgG4中任一個的Fc區。
16. 權利要求11~15中任一項的藥物組合物，其中，所述Fc區是進行了下述修飾的Fc 區：使得Fc區的EU編號297位連接的糖鏈組成為連接巖藻糖缺失糖鏈的Fc區比例變高、 或附加有平分型N-乙醯葡糖胺的Fc區比例變高。
17. 誘導生物體的免疫應答的方法，其中，該方法包括將權利要求1~16的抗原結合分 子給予該生物體內的步驟。
18. 誘導免疫應答的抗原結合分子的製造方法，其中，該方法包括：對含有抗原結合活 性隨離子濃度條件而變化的抗原結合結構域的抗原結合分子中所含的FcRn結合結構域賦 予pH中性範圍條件下的FcRn結合活性。
19. 權利要求18的方法，其中，所述離子濃度為鈣離子濃度。
20. 權利要求19的方法，其中，所述抗原結合結構域為具有下述特徵的抗原結合結構 域：與低鈣離子濃度條件下對該抗原的結合活性相比，高鈣離子濃度條件下的抗原結合活 性高。
21. 權利要求18的方法，其中，所述離子濃度條件為pH條件。
22. 權利要求21的方法，其中，所述抗原結合結構域為具有下述特徵的抗原結合結構 域：與pH酸性範圍條件下對該抗原的結合活性相比，pH中性範圍條件下的抗原結合活性 商。
23. 權利要求18~22中任一項的方法，其中，所述抗原結合分子為具有針對所述抗原的 中和活性的抗原結合分子。
24. 權利要求18~23中任一項的方法，其中，所述抗原結合分子為具有針對表達所述抗 原的細胞的細胞毒活性的抗原結合分子。
25. 權利要求18~24中任一項的方法，其中，所述FcRn結合結構域包含抗體的Fc區。
26. 權利要求25的方法，其中，該方法包括：置換Fc區的以EU編號表示的位點中選自 239位、252位、257位、286位、307位、308位、428位和434位的至少一個以上的胺基酸的步 驟。
27. 權利要求25或26的方法，其中，該方法包括：進行Fc區的以EU編號表示的位點 中選自以下的至少一個以上的胺基酸置換的步驟： 257位胺基酸向Ala的置換， 308位胺基酸向Pro的置換， 428位胺基酸向Leu的置換，和 434位胺基酸向Tyr的置換。
28. 權利要求25~27中任一項的方法，其中，該方法包括：使所述Fc區的Fc γ受體結 合活性與EU編號297位連接的糖鏈為含巖藻糖糖鏈的天然型人IgG的Fc區的Fc γ受體 結合活性相比增強的步驟。
29. 權利要求28的方法，其中，所述Fc γ受體為Fc γ RIa、Fc γ Rlla(R)、Fc γ Rlla(H)、 Fc YRIIb、Fc YRIIIa(V)或 Fc YRIIIa(F)。
30. 權利要求28或29的方法，其中，該方法包括置換Fc區中以EU編號表示的位點中選 自以下的至少一個以上的胺基酸的步驟：221位、222位、223位、224位、225位、227位、228 位、230 位、231 位、232 位、233 位、234 位、235 位、236 位、237 位、238 位、239 位、240 位、241 位、243 位、244 位、245 位、246 位、247 位、249 位、250 位、251 位、254 位、255 位、256 位、258 位、260 位、262 位、263 位、264 位、265 位、266 位、267 位、268 位、269 位、270 位、271 位、272 位、273 位、274 位、275 位、276 位、278 位、279 位、280 位、281 位、282 位、283 位、284 位、285 位、286 位、288 位、290 位、291 位、292 位、293 位、294 位、295 位、296 位、297 位、298 位、299 位、300 位、301 位、302 位、303 位、304 位、305 位、311 位、313 位、315 位、317 位、318 位、320 位、322 位、323 位、324 位、325 位、326 位、327 位、328 位、329 位、330 位、331 位、332 位、333 位、334 位、335 位、336 位、337 位、339 位、376 位、377 位、378 位、379 位、380 位、382 位、385 位、392 位、396 位、421 位、427 位、428 位、429 位、434 位、436 位和 440 位。
31.權利要求28~30中任一項的方法，其中，該方法包括進行Fc區中以EU編號表示的 位點中選自以下的至少一個以上的胺基酸置換的步驟： 221位胺基酸向Lys或Tyr中任一個的置換， 222位胺基酸向Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個的置換， 223位胺基酸向Phe、Trp、Glu或Lys中任一個的置換， 224位胺基酸向Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個的置換， 225位胺基酸向Glu、Lys或Trp中任一個的置換， 227位胺基酸向Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個的置換， 228位胺基酸向Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個的置換， 230位胺基酸向Ala、Glu、Gly或Tyr中任一個的置換， 231位胺基酸向Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個的置換， 232位胺基酸向Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個的置換， 233 位胺基酸向 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 234 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 235 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 236 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 237 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 238 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 239 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 240位胺基酸向Ala、lie、Met或Thr中任一個的置換， 241位胺基酸向Asp、Glu、Leu、Arg、Trp或Tyr中任一個的置換， 243位胺基酸向Leu、Glu、Leu、Gin、Arg、Trp或Tyr中任一個的置換， 244位胺基酸向His的置換， 245位胺基酸向Ala的置換， 246位胺基酸向Asp、Glu、His或Tyr中任一個的置換， 247 位胺基酸向 Ala、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Thr、Val 或 Tyr 中任一個的置換， 249位胺基酸向Glu、His、Gin或Tyr中任一個的置換， 250位胺基酸向Glu或Gin中任一個的置換， 251位胺基酸向Phe的置換， 254位胺基酸向Phe、Met或Tyr中任一個的置換， 255位胺基酸向Glu、Leu或Tyr中任一個的置換， 256位胺基酸向Ala、Met或Pro中任一個的置換， 258位胺基酸向Asp、Glu、His、Ser或Tyr中任一個的置換， 260位胺基酸向Asp、Glu、His或Tyr中任一個的置換， 262位胺基酸向Ala、Glu、Phe、lie或Thr中任一個的置換， 263位胺基酸向Ala、lie、Met或Thr中任一個的置換， 264 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Trp或Tyr中任一個的置換， 265 位胺基酸向 Ala、Leu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 266位胺基酸向Ala、lie、Met或Thr中任一個的置換， 267 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個的置換， 268 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Thr、Val 或 Trp 中任一個的置換， 269 位胺基酸向 Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個的置換， 270 位胺基酸向 Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個的置換， 271 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 272 位胺基酸向 Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個的置換， 273位胺基酸向Phe或lie中任一個的置換， 274 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個的置換， 275位胺基酸向Leu或Trp中任一個的置換， 276 位胺基酸向、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或Tyr中任一個的置換， 278 位胺基酸向 Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val或Trp中任一個的置換， 279位胺基酸向Ala的置換， 280 位胺基酸向 Ala、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gin、Trp 或 Tyr 中任一個的置換， 281位胺基酸向Asp、Lys、Pro或Tyr中任一個的置換， 282位胺基酸向Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個的置換， 283 位胺基酸向 Ala、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Arg 或 Tyr 中任一個的置換， 284位胺基酸向Asp、Glu、Leu、Asn、Thr或Tyr中任一個的置換， 285位胺基酸向Asp、Glu、Lys、Gin、Trp或Tyr中任一個的置換， 286位胺基酸向Glu、Gly、Pro或Tyr中任一個的置換， 288位胺基酸向Asn、Asp、Glu或Tyr中任一個的置換， 290 位胺基酸向 Asp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個的置換， 291位胺基酸向Asp、Glu、Gly、His、lie、Gin或Thr中任一個的置換， 292位胺基酸向Ala、Asp、Glu、Pro、Thr或Tyr中任一個的置換， 293 位胺基酸向 Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個的置換， 294 位胺基酸向 Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個的置換， 295 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個的置換， 296 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr 或 Val中任一個的置換， 297 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 298 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個的置換， 299 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、 Ser、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 300 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val或Trp中任一個的置換， 301位胺基酸向Asp、Glu、His或Tyr中任一個的置換， 302位胺基酸向lie的置換， 303位胺基酸向Asp、Gly或Tyr中任一個的置換， 304位胺基酸向Asp、His、Leu、Asn或Thr中任一個的置換， 305位胺基酸向Glu、lie、Thr或Tyr中任一個的置換， 311位胺基酸向Ala、Asp、Asn、Thr、Val或Tyr中任一個的置換， 313位胺基酸向Phe的置換， 315位胺基酸向Leu的置換， 317位胺基酸向Glu或Gin的置換， 318 位胺基酸向 His、Leu、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val 或 Tyr 中任一個的置換， 320 位胺基酸向 Asp、Phe、Gly、His、lie、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個的置換， 322 位胺基酸向 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個 的置換， 323位胺基酸向lie的置換， 324 位胺基酸向 Asp、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個的置換， 325 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 326 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Gly、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個的置換， 327 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 328 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 329 位胺基酸向 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 330 位胺基酸向 Cys、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 331 位胺基酸向 Asp、Phe、His、lie、Leu、Met、Gin、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個 的置換， 332 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp或Tyr中任一個的置換， 333 位胺基酸向 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Val 或 Tyr 中任一個的置換， 334位胺基酸向Ala、Glu、Phe、lie、Leu、Pro或Thr中任一個的置換， 335 位胺基酸向 Asp、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、Trp 或 Tyr 中任一個的置換， 336位胺基酸向Glu、Lys或Tyr中任一個的置換， 337位胺基酸向Glu、His或Asn中任一個的置換， 339 位胺基酸向 Asp、Phe、Gly、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Ser 或 Thr 中任一個的置 換， 376位胺基酸向Ala或Val中任一個的置換， 377位胺基酸向Gly或Lys中任一個的置換， 378位胺基酸向Asp的置換， 379位胺基酸向Asn的置換， 380位胺基酸向Ala、Asn或Ser中任一個的置換， 382位胺基酸向Ala或lie中任一個的置換， 385位胺基酸向Glu的置換， 392位胺基酸向Thr的置換， 396位胺基酸向Leu的置換， 421位胺基酸向Lys的置換， 427位胺基酸向Asn的置換， 428位胺基酸向Phe或Leu中任一個的置換， 429位胺基酸向Met的置換， 434位胺基酸向Trp的置換， 436位胺基酸向lie的置換，和 440位胺基酸向Gly、His、lie、Leu或Tyr中任一個的置換。
32. 權利要求28~31中任一項的方法，其中，所述天然型Fc區是：EU編號297位連接的 糖鏈為含巖藻糖糖鏈的人IgGl、人IgG2、人IgG3或人IgG4中任一個的Fc區。
33. 權利要求28~32中任一項的方法，其中，該方法包括修飾Fc區的步驟，使得Fc區 的EU編號297位連接的糖鏈組成為連接巖藻糖缺失糖鏈的Fc區比例變高、或附加有平分 型N-乙醯葡糖胺的Fc區比例變高。
34. 誘導免疫應答的藥物組合物的製造方法，其中，該方法包括以下（ar(f)的步驟： (a) 獲得高鈣離子濃度條件下抗原結合結構域的抗原結合活性的步驟， (b) 獲得低鈣離子濃度條件下抗原結合結構域的抗原結合活性的步驟， (c) 選擇（a)中得到的抗原結合活性高於（b)中得到的抗原結合活性的抗原結合結構 域的步驟， (d) 將編碼（c)中選擇的抗原結合結構域的多核苷酸與編碼在pH中性範圍條件下具有 FcRn結合活性的FcRn結合結構域的多核苷酸連接的步驟， (e) 將導入了有效連接有（d)中得到的多核苷酸的載體的細胞進行培養的步驟，和 (f) 由（e)中培養的細胞的培養液回收抗原結合分子的步驟。
35. 誘導免疫應答的藥物組合物的製造方法，其中，該方法包括以下（ar(f)的步驟： (a) 獲得高鈣離子濃度條件下抗體的抗原結合活性的步驟， (b) 獲得低鈣離子濃度條件下抗體的抗原結合活性的步驟， (c) 選擇（a)中得到的抗原結合活性高於（b)中得到的抗原結合活性的抗體的步驟， (d) 將編碼（c)中選擇的抗體的抗原結合結構域的多核苷酸與編碼在pH中性範圍條件 下具有FcRn結合活性的FcRn結合結構域的多核苷酸連接的步驟， (e) 將導入了有效連接有（d)中得到的多核苷酸的載體的細胞進行培養的步驟，和 (f) 由（e)中培養的細胞的培養液回收抗原結合分子的步驟。
36. 抗原結合分子的製造方法，其中，該方法包括以下（ar(f)的步驟： (a) 獲得pH中性範圍條件下抗原結合結構域的抗原結合活性的步驟， (b) 獲得pH酸性範圍條件下抗原結合結構域的抗原結合活性的步驟， (c) 選擇（a)中得到的抗原結合活性高於（b)中得到的抗原結合活性的抗原結合結構 域的步驟， (d) 將編碼（c)中選擇的抗原結合結構域的多核苷酸與編碼在pH中性範圍條件下具有 FcRn結合活性的FcRn結合結構域的多核苷酸連接的步驟， (e) 將導入了有效連接有（d)中得到的多核苷酸的載體的細胞進行培養的步驟，和 (f) 由（e)中培養的細胞的培養液回收抗原結合分子的步驟。
37. 抗原結合分子的製造方法，其中，該方法包括以下（ar(f)的步驟： (a) 獲得pH中性範圍條件下抗體的抗原結合活性的步驟， (b) 獲得pH酸性範圍條件下抗體的抗原結合活性的步驟， (c) 選擇（a)中得到的抗原結合活性高於（b)中得到的抗原結合活性的抗體的步驟， (d) 將編碼（c)中選擇的抗體的抗原結合結構域的多核苷酸與編碼在pH中性範圍條件 下具有FcRn結合活性的FcRn結合結構域的多核苷酸連接的步驟， (e) 將導入了有效連接有（d)中得到的多核苷酸的載體的細胞進行培養的步驟，和 (f) 由（e)中培養的細胞的培養液回收抗原結合分子的步驟。
38. 權利要求34~37中任一項的方法，其中，所述抗原結合分子為具有針對所述抗原的 中和活性的抗原結合分子。
39. 權利要求34~38中任一項的方法，其中，所述抗原結合分子為具有針對表達所述抗 原的細胞的細胞毒活性的抗原結合分子。
40. 權利要求34~39中任一項的方法，其中，所述FcRn結合結構域包含抗體的Fc區。
41. 權利要求40的方法，其中，所述Fc區為下述Fc區：在Fc區的以EU編號表示的位 點中，選自257位、308位、428位和434位的至少一個以上的胺基酸與天然型Fc區對應位 點的胺基酸不同的Fc區。
42. 權利要求40或41的方法，其中，所述Fc區為含有Fc區的以EU編號表示的選自以 下的至少一個以上的胺基酸的Fc區： 257位胺基酸為Ala， 308位胺基酸為Pro, 428位胺基酸為Leu，和 434位胺基酸為Tyr。
43. 權利要求4(Γ42中任一項的方法，其中，所述Fc區的Fc γ受體結合活性具有下述 特徵：與EU編號297位連接的糖鏈為含巖藻糖糖鏈的天然型人IgG的Fc區的Fc γ受體結 合活性相比高。
44. 權利要求43的方法，其中，所述Fc γ受體為Fc γ RIa、Fc γ Rlla(R)、Fc γ Rlla(H)、 Fc YRIIb、Fc YRIIIa(V)或 Fc YRIIIa(F)。
45. 權利要求43或44的方法，其中，所述Fc區為含有Fc區中以EU編號表示的位點中 選自以下的至少一個以上的胺基酸的Fc區： 221位胺基酸為Lys或Tyr中任一個， 222位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個， 223位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Lys中任一個， 224位胺基酸為Phe、Trp、Glu或Tyr中任一個， 225位胺基酸為Glu、Lys或Trp中任一個， 227位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 228位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 230位胺基酸為Ala、Glu、Gly或Tyr中任一個， 231位胺基酸為Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個， 232位胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr中任一個， 233 位胺基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 234 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 235 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 236 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 237 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 238 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 239 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 240位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 241位胺基酸為Asp、Glu、Leu、Arg、Trp或Tyr中任一個， 243 位胺基酸為 Leu、Glu、Leu、Gin、Arg、Trp 或 Tyr 中任一個， 244位胺基酸為His， 245位胺基酸為Ala， 246位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 247 位胺基酸為 Ala、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 249位胺基酸為Glu、His、Gin或Tyr中任一個， 250位胺基酸為Glu或Gin中任一個， 251位胺基酸為Phe， 254位胺基酸為Phe、Met或Tyr中任一個， 255位胺基酸為Glu、Leu或Tyr中任一個， 256位胺基酸為Ala、Met或Pro中任一個， 258位胺基酸為Asp、Glu、His、Ser或Tyr中任一個， 260位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 262位胺基酸為Ala、Glu、Phe、lie或Thr中任一個， 263位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 264 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Trp或Tyr中任一個， 265 位胺基酸為 Ala、Leu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 266位胺基酸為Ala、lie、Met或Thr中任一個， 267 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 268 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val 或 Trp 中任一個， 269 位胺基酸為 Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 270 位胺基酸為 Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個， 271 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 272 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 273位胺基酸為Phe或lie中任一個， 274 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 275位胺基酸為Leu或Trp中任一個， 276 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 278 位胺基酸為 Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val或Trp中任一個， 279位胺基酸為Ala， 280 位胺基酸為 Ala、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gin、Trp 或 Tyr 中任一個， 281位胺基酸為Asp、Lys、Pro或Tyr中任一個， 282位胺基酸為Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中任一個， 283 位胺基酸為 Ala、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Arg 或 Tyr 中任一個， 284位胺基酸為Asp、Glu、Leu、Asn、Thr或Tyr中任一個， 285位胺基酸為Asp、Glu、Lys、Gin、Trp或Tyr中任一個， 286位胺基酸為Glu、Gly、Pro或Tyr中任一個， 288位胺基酸為Asn、Asp、Glu或Tyr中任一個， 290 位胺基酸為 Asp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、Trp 或 Tyr 中任一個， 291 位胺基酸為 Asp、Glu、Gly、His、lie、Gin 或 Thr 中任一個， 292位胺基酸為Ala、Asp、Glu、Pro、Thr或Tyr中任一個， 293 位胺基酸為 Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 294 位胺基酸為 Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 295 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr中任一個， 296 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr 或 Val中任一個， 297 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 298 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、His、lie、Lys、Met、Asn、Gin、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 299 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、 Ser、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 300 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val或Trp中任一個， 301位胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr中任一個， 302位胺基酸為lie， 303位胺基酸為Asp、Gly或Tyr中任一個， 304位胺基酸為Asp、His、Leu、Asn或Thr中任一個， 305位胺基酸為Glu、lie、Thr或Tyr中任一個， 311位胺基酸為Ala、Asp、Asn、Thr、Val或Tyr中任一個， 313位胺基酸為Phe， 315位胺基酸為Leu， 317位胺基酸為Glu或Gln， 318 位胺基酸為 His、Leu、Asn、Pro、Gin、Arg、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 320 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個， 322 位胺基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Pro、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 323位胺基酸為lie， 324 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任 一個， 325 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 326 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Ser、Thr、Val、Trp 或 Tyr中任一個， 327 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 328 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 329 位胺基酸為 Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Gin、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 330 位胺基酸為 Cys、Glu、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、 Val、Trp或Tyr中任一個， 331 位胺基酸為 Asp、Phe、His、lie、Leu、Met、Gin、Arg、Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 332 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、 Thr、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 333 位胺基酸為 Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、lie、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Val 或 Tyr 中任一個， 334 位胺基酸為 Ala、Glu、Phe、lie、Leu、Pro 或 Thr 中任一個， 335 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、Trp 或 Tyr 中任一個， 336位胺基酸為Glu、Lys或Tyr中任一個， 337位胺基酸為Glu、His或Asn中任一個， 339 位胺基酸為 Asp、Phe、Gly、lie、Lys、Met、Asn、Gin、Arg、Ser 或 Thr 中任一個， 376位胺基酸為Ala或Val中任一個， 377位胺基酸為Gly或Lys中任一個， 378位胺基酸為Asp， 379位胺基酸為Asn， 380位胺基酸為Ala、Asn或Ser中任一個， 382位胺基酸為Ala或lie中任一個， 385位胺基酸為Glu， 392位胺基酸為Thr， 396位胺基酸為Leu， 421位胺基酸為Lys， 427位胺基酸為Asn， 428位胺基酸為Phe或Leu中任一個， 429位胺基酸為Met， 434位胺基酸為Trp， 436位胺基酸為lie、和 440位胺基酸為Gly、His、lie、Leu或Tyr中任一個。
46. 權利要求43?45中任一項的方法，其中，所述天然型Fc區為：EU編號297位連接的 糖鏈為含巖藻糖糖鏈的人IgGl、人IgG2、人IgG3或人IgG4中任一個的Fc區。
47. 權利要求43~46中任一項的方法，其中，所述Fc區是進行了下述修飾的Fc區：使 得Fc區的EU編號297位連接的糖鏈組成為連接巖藻糖缺失糖鏈的Fc區比例變高、或附加 有平分型N-乙醯葡糖胺的Fc區比例變高。
【文檔編號】A61P35/00GK104093424SQ201280058767
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2012年9月28日 優先權日:2011年9月30日
【發明者】井川智之, 前田敦彥, 原谷健太, 橘達彥 申請人:中外製藥株式會社