用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物和試劑盒的製作方法

2023-08-08 03:22:01 6

專利名稱：：用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物和試劑盒的製作方法
技術領域：
：本發明涉及用於檢測支原體的組合物和試劑盒，更具體地，本發明涉及用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物和試劑盒。
背景技術：
：解脲支原體(Ureaplasmaurealyticum,UU)、人型支原體(Mycoplasmahominis,MH)及生殖器支原體(Mycoplasmagenitalium,MG)是引起人群泌尿生殖系統感染的常見寄生菌。人泌尿生殖道支原體感染不僅可引起泌尿生殖器官發生病變，如前列腺炎、附睪炎、陰道炎、宮頸炎等，還可侵犯泌尿生殖器官所屬的淋巴結，並通過血行播散侵犯全身各重要組織和器官，引起新生兒腦膜炎、先天性肺炎、不孕、流產、早產、死胎、低體重兒等各類現象。因此，人泌尿生殖道支原體感染導致的一系列病變，嚴重危害患者的身心健康，已經成為世界性的嚴重社會問題和公共衛生問題，被認為是當今危害人群健康的重要疾病之ο目前對於解脲支原體、人型支原體以及生殖器支原體的檢測方法主要有塗片檢查、細菌和細胞培養、血清學實驗和聚合酶鏈式反應(PCR)法。其中最準確的且可以同時定性定量的方法為實時螢光定量PCR法。所述實時螢光定量PCR法是指在PCR反應體系中加入螢光基團，利用螢光信號的累積實時監測整個PCR過程，最後通過標準曲線對待測模板進行定量分析的方法。此外，由於解脲支原體、人型支原體以及生殖器支原體引起的疾病症狀類似，但是在臨床上需要分別進行針對性治療；然而所述三種支原體存在一定的序列相似性，因此在合併感染的患者中得到的混合樣本進行PCR擴增時會產生相互幹擾，繼而很容易產生錯誤的診斷結果，延誤最佳的針對性治療時機。因此一般對疑似症狀的病人只能通過逐一檢測致病微生物解脲支原體、人型支原體以及生殖器支原體來儘量確診，造成操作過程費時費力、成本高並且準確率低，還不利於實現對混合感染(兩種以上支原體感染)的高效準確的檢測。綜上亟需能夠實現同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物和試齊U盒。
發明內容本發明的目的是克服現有檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物和試劑盒存在所述三種支原體相互幹擾，不能準確同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的缺點，提供一種用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物，使用該組合物可以實現在同一反應體系中同時準確檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體，並且不存在相互幹擾的缺陷，減少操作人員的操作時間，降低檢測成本。本發明的第二個目的是提供包括所述組合物的用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的試劑盒。本發明提供了一種用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物，其中，所述組合物包括以下序列1)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；2)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:2所示的序列，b)SEQIDNo2所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；3)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:3所示的序列，b)SEQIDNo3所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；4)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo4所示的序列，b)SEQIDNo4所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者C)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；5)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:5所示的序列，b)SEQIDNo5所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者C)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；6)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo6所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者C)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；7)長度為15-45個核苷酸的與1)和2)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為20-80%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:7所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多5個核苷酸差異的序列；8)長度為15-45個核苷酸的與3)和4)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為20-80%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo8所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多5個核苷酸差異的序列；9)長度為15-45個核苷酸的與5)和6)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為20-80%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo9所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo9所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或C)具有至多5個核苷酸差異的序列；其中，7)_9)所述的探針在5』端帶有互不相同的螢光報告基團，並且在除5'端外的任意一個位置上帶有淬滅基團。本發明還提供了一種用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的試劑盒，該試劑盒含有聚合酶鏈式反應液、耐熱DNA聚合酶及陰性對照品，其中，所述試劑盒還含有本發明的組合物。本發明的用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物和試劑盒可以在一個反應體系內同時檢測三種不同的支原體，不僅提高了泌尿生殖系統感染性疾病的早期檢出率，而且減少了操作人員的操作時間，降低了檢測成本，還減輕了病人經濟負擔。圖1為本發明實施例1在PCR引物擴增解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體靶核酸序列後所得PCR產物的電泳照片；圖2為本發明實施例1同時檢測尿液樣品中解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的螢光定量PCR圖；圖3為本發明實施例2同時檢測尿液樣品中解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的螢光定量PCR圖；圖4為本發明實施例3同時檢測前列腺液樣品中解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的螢光定量PCR圖；圖5為本發明實施例4同時檢測宮頸分泌物樣品中解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的螢光定量PCR圖；圖6為IO3拷貝/毫升、IO4拷貝/毫升、IO5拷貝/毫升和IO6拷貝/毫升的解脲支原體陽性對照品的螢光定量PCR疊加圖；圖7為IO3拷貝/毫升、IO4拷貝/毫升、IO5拷貝/毫升和IO6拷貝/毫升的人型支原體陽性對照品的螢光定量PCR疊加圖；圖8為IO3拷貝/毫升、IO4拷貝/毫升、IO5拷貝/毫升和IO6拷貝/毫升的生殖器支原體陽性對照品的螢光定量PCR疊加圖。具體實施例方式本發明提供了一種用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物，其中，所述組合物包括以下序列1)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；2)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:2所示的序列，b)SEQIDNo2所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者C)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；3)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:3所示的序列，b)SEQIDNo3所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者C)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；4)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo4所示的序列，b)SEQIDNo4所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者C)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；5)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:5所示的序列，b)SEQIDNo5所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者C)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；6)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為20-80%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo6所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；7)長度為15-45個核苷酸的與1)和2)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為20-80%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:7所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多5個核苷酸差異的序列；8)長度為15-45個核苷酸的與3)和4)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為20-80%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo8所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多5個核苷酸差異的序列；9)長度為15-45個核苷酸的與5)和6)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為20-80%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo9所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo9所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多5個核苷酸差異的序列；其中，7)_9)所述的探針在5』端帶有互不相同的螢光報告基團，並且在除5'端外的任意一個位置上帶有淬滅基團。在本發明中，「引物」可以是天然的、合成的或者是二者嵌合的寡核苷酸。引物可以作為在一定條件下誘發DNA複製的起始點。在上述條件下可以誘發與靶核酸鏈互補的引物擴增產物，即在四種不同的三磷酸脫氧核糖核苷及一種聚合試劑(DNA聚合酶或逆轉錄酶)存在下，在一種合適的緩衝液中，在合適的溫度下進行上述擴增。優選的引物是單鏈寡脫氧核糖核苷酸。引物的合適長度取決於該引物的設計用途，但一般在15-30個核苷酸之間，較短的引物分子通常需要較低的溫度，從而與模板形成充分穩定的雜交複合物。引物不必反映模板的準確序列，但必須充分互補，以與模板雜交並引發DNA合成。在本發明中，術語「探針」是指能識別特異核苷酸序列的帶標記的一段單鏈DNA或RNA分子，它只與被檢測的特定核苷酸序列結合。探針位置儘可能地靠近上遊引物。為保證結合特異性，探針的合適長度一般在15-45個核苷酸之間。此外，本領域技術人員公知，引物和探針上少數核苷酸殘基的變化，尤其是引物和探針在5』端出現的少數核苷酸的改變，只能造成該核苷酸的錯配，但不會造成整個DNA複製合成過程無法進行，進而不會引起PCR產物產量的明顯波動。因此由上述「與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列」以及「與a)或b)或c)具有至多5個核苷酸差異的序列」也可以得到正確的足夠的PCR螢光信號，因此所述序列也應該包括在本發明中。另外，對本發明的引物/探針可以實施本領域常規的修飾以提高其穩定性，例如，硫化(磷酸骨架上的非橋氧原子被硫原子代替)、甲基化、形成肽核酸、以及在核糖的2'位置引入如甲基和/或氟等的取代基等。優選地，本發明所述組合物包括以下序列1)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；2)長度為18-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:2所示的序列，b)SEQIDNo2所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；3)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:3所示的序列，b)SEQIDNo3所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；4)長度為22-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:4所示的序列，b)SEQIDNo4所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；5)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:5所示的序列，b)SEQIDNo5所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；6)長度為18-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo6所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；7)長度為25-45個核苷酸的與1)和2)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為25-75%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:7所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多3個核苷酸差異的序列；8)長度為25-45個核苷酸的與3)和4)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為25-75%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:8所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多3個核苷酸差異的序列；9)長度為25-45個核苷酸的與5)和6)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為25-75%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo9所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:9所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多3個核苷酸差異的序列；其中，7)_9)所述的探針在5』端帶有互不相同的螢光報告基團，並且除5'端外的任意一個位置上帶有淬滅基團。更優選地，本發明所述組合物包括以下序列1)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；2)長度為18-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:2所示的序列，b)SEQIDNo2所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；3)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:3所示的序列，b)SEQIDNo3所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；4)長度為22-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:4所示的序列，b)SEQIDNo4所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；5)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:5所示的序列，b)SEQIDNo5所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；6)長度為18-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo6所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；7)長度為25-45個核苷酸的與1)和2)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為30-70%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo7所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段；或者d)與a)或b)或c)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；8)長度為25-45個核苷酸的與3)和4)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為30-70%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo8所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段；或者d)與a)或b)或c)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；9)長度為25-45個核苷酸的與5)和6)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為30-70%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo9所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo9所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段；或者d)與a)或b)或c)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；其中，7)_9)所述的探針在5』端帶有互不相同的螢光報告基團，並且除5'端外的任意一個的位置上帶有淬滅基團。進一步優選地，本發明所述組合物包括以下序列1)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列第一引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:1所示的序列，或者b)SEQIDNo1所示的序列的至少18個核苷酸連續的片段；2)長度為18-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列第二引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:2所示的序列，或者b)SEQIDNo2所示的序列的至少16個核苷酸連續的片段；3)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列第一引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:3所示的序列，或者b)SEQIDNo3所示的序列的至少18個核苷酸連續的片段；4)長度為22-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列第二引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo4所示的序列，或者b)SEQIDNo4所示的序列的至少18個核苷酸連續的片段；5)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列第一引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:5所示的序列，或者b)SEQIDNo5所示的序列的至少18個核苷酸連續的片段；6)長度為18-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列第二引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，或者b)SEQIDNo6所示的序列的至少16個核苷酸連續的片段；7)長度為25-45個核苷酸的與1)和2)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為30-70%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少18個核苷酸連續的片段，或者c)SEQIDNo7所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段；8)長度為25-45個核苷酸的與3)和4)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為30-70%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少18個核苷酸連續的片段，或者c)SEQIDNo8所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段；9)長度為25-45個核苷酸的與5)和6)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為30-70%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互補序列，或者b)SEQIDNo9所示的序列的至少18個核苷酸連續的片段，或者c)SEQIDNo9所示序列的互補序列的至少18個核苷酸連續的片段；其中，7)_9)所述的探針在5』端帶有互不相同的螢光報告基團，並且除5'端外的任意一個的位置上帶有淬滅基團。進一步優選地，本發明所述組合物由以下序列組成1)用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的序列為如SEQIDNo1所示的序列；2)用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的序列為如SEQIDNo2所示的序列；3)用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的序列為如SEQIDNo3所示的序列；4)用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的序列為如SEQIDNo4所示的序列；5)用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的序列為如SEQIDNo5所示的序列；6)用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的序列為如SEQIDNo6所示的序列；7)與1)和2)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的序列為如SEQIDNo7所示的序列或其互補序列；8)與3)和4)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的序列為如SEQIDNo8所示的序列或其互補序列；9)與5)和6)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的序列為如SEQIDNo9所示的序列或其互補序列；其中，7)_9)所述的探針在5』端帶有互不相同的螢光報告基團，並且在在3』端帶有淬滅基團。引物和探針的GC含量與解鏈溫度密切相關，在保證PCR螢光定量的準確性方面起重要作用，本發明所述引物和探針的GC含量還可以更進一步優選35-65%。本發明的組合物中探針上所帶有的所述螢光報告基團和所述淬滅基團可以為本領域常用的用作螢光報告基團和淬滅基團的物質。只要滿足所述螢光報告基因在所述淬滅基團的上遊，且所述螢光報告基團的發射波長小於所述淬滅基團的吸收波長。所述螢光報告基團和所述淬滅基團按照上述原則可以選自由6-羧基螢光素(6-carboxyfluorescein,FAM)、四氣_6_幾基焚光素(tetrachloro-6-carboxyfluorescein,TET)、六氯-6-甲基螢光素(Hexachloro-6-methylfluorescein，HEX)、6_羧基四甲基羅丹明(6-carboxytetramethylrhodamine，TAMRA)、磺醯羅丹明(Sulforhodamine101，TexasRed)、羧基_X_羅丹明(Carboxy-x-rhodamine，R0X)、花菁3(cyanine3，Cy3)、花菁3.5(cyanine3.5，Cy3.5)、花菁5(cyanine5,Cy5)、花菁5.5(cyanine5.5，Cy5.5)、黑洞淬滅劑1(BlackHoleQuencher1，BHQ1)、黑洞淬滅劑2(BlackHoleQuencher2，BHQ2)、黑洞淬滅劑3(BlackHoleQuencher3，BHQ3)、4_(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸(4-(4，-dimethylaminophenylazo)benzoicacid,DABCYL)、6-羧基-4，，5，-二氯_2，，7，-二甲氧基螢光素琥珀醯亞胺酯(6-CarboXy-4，，5，-dichloro-2，，7，-dimethoxyfluorescein，JOE)和VIC螢光染料(美國應用生物系統公司，AppliedBiosystems.Inc，可商購)所組成的組中。優選地，所述螢光報告基團選自由6_羧基螢光素、六氯-6-甲基螢光素、VIC螢光染料、四氯-6-羧基螢光素、羧基-X-羅丹明、6-羧基四甲基羅丹明、磺醯羅丹明、6-羧基-4』，5』-二氯-2』，7』-二甲氧基螢光素琥珀醯亞胺酯、花菁3、花菁5和花菁5.5所組成的組中；所述淬滅基團選自由6-羧基四甲基羅丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、BHQ1、BHQ2和BHQ3所組成的組中。更優選地，按照下表1所示來選擇螢光報告基團和淬滅基團。黑洞淬滅劑(BHQ)可以從例如生物搜索技術公司(BiosearchTechnologies,Inc)等公司商購。表1常見淬滅基團以及與之相匹配的螢光報告基團tableseeoriginaldocumentpage17可以通過要求完成引物合成的公司在合成引物和探針的同時，添加所述螢光報告基團和淬滅基團作為標記。所述引物合成公司包括但不限於，例如，柏業貿易(上海)有限公司(Bioneer)、上海生工生物工程技術服務有限公司、寶生物工程(大連)有限公司、上海英駿生物技術有限公司(Irwitrogen)等。可以採用本領域常用的螢光定量PCR儀完成本發明的螢光PCR定性和定量過程。所述螢光定量PCR儀包括但不限於，例如，美國應用生物系統公司(AppliedBiosystems)的ABI7000型、7300型、7500型、7700型、7900型和St印One型螢光定量PCR儀等；德國艾本德股份公司(EppendorfAG)的Mastercyclereprealplex等；瑞士羅氏公司(RocheGroup)的=LightCycler2.0、LightCycler480禾口Rotor—Gene3000等；美國Stratagene公司的Mx3005P、Mx3000P、Mx4000等；中山大學達安基因股份有限公司的DA7600等；杭州博日科技有限公司的LineGeneI、LineGeneII、LineGeneK、LineGene3310/3320和LineGene9600等；以及上海宏石醫療科技有限公司的SLAN等。本發明還提供了一種用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的試劑盒，該試劑盒含有聚合酶鏈式反應液、耐熱DNA聚合酶及陰性對照品，其中，所述試劑盒還含有本發明的組合物。本發明的試劑盒除了使用本發明的組合物作為引物和探針外，試劑盒的其他組成成分可以使用本領域常用的檢測支原體PCR檢測法所用到的成分。比如可以使用本領域常用的聚合酶鏈式反應液、耐熱DNA聚合酶及陰性對照品。本發明的試劑盒既可以對待測樣品中的解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體進行同時的定性檢測，也可以對待測樣品中的解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體進行同時的定量檢測。此外，由於本發明試劑盒的特異性和靈敏度高。即使不使用陽性對照品，如果待測生物樣品產生了PCR螢光信號，確診患者患有一種、兩種或三種相應支原體的準確率也可以達到90%以上。因此本發明的試劑盒可以不含有陽性對照品。當然，本發明試劑盒可以包括本領域常用的陽性對照品，比如三種支原體(解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體)的總DNA、三種支原體核糖體16SrRNA完整基因(如SEQIDNo13-15所示，分別來自GenBank:L08642.UGenBank:Μ96660·1和GenBankΧ77334.1)等。所述陽性對照品的濃度達到能產生足夠的螢光信號即可。在進行定性檢測時，每種支原體僅需要使用一個濃度的陽性對照品，並將待測樣品得到的螢光信號與陽性對照品得到的螢光信號比較即可；在進行定量檢測時，每種支原體需要使用一系列梯度濃度的陽性對照品，在得到它們標準曲線後，將待測樣品得到的螢光信號按照同樣的方法和條件量化進行比較即可。優選地，所述陽性對照品為IO3-IO8拷貝/毫升的解脲支原體質粒DNA溶液、IO3-IO8拷貝/毫升的人型支原體質粒DNA溶液和IO3-IO8拷貝/毫升的生殖器支原體質粒DNA溶液。它們可以形成從IO3拷貝/毫升到IO8拷貝/毫升的濃度梯度，每兩個相鄰的梯度之間濃度相差10倍。更優選所述陽性對照品為IO3-IO6拷貝/毫升支原體質粒DNA溶液，每兩個相鄰的梯度之間濃度相差10倍。將DNA片段連接在質粒上，有利於DNA片段的穩定保存。本發明所述支原體質粒DNA由支原體DNA片段和連接該片段的質粒載體組成。優選地，所述支原體質粒DNA由支原體DNA片段和質粒載體組成，所述解脲支原體DNA片段為如SEQIDNo:10所示的解脲支原體核糖體16SrRNA基因擴增產物，由SEQIDNo:1和由SEQIDNo:2從前文所述樣品的核酸提取液中擴增而來，所述人型支原體DNA片段為如SEQIDNo:11所示的人型支原體核糖體16SrRNA基因擴增產物，由SEQIDNo:3和由SEQIDNo:4從前文所述樣品的核酸提取液中擴增而來，所述生殖器支原體DNA片段為如SEQIDNo12所示的生殖器支原體核糖體16SrRNA基因擴增產物由SEQIDNo:5和由SEQIDNo:6從前文所述樣品的核酸提取液中擴增而來(如圖1所示)。所述質粒載體可以為粘末端克隆載體，也可以為鈍末端克隆載體。所述質粒載體非限制性的例子包括PKK質粒(Clonetech)、pUC質粒、pET質粒、pTriex質粒(Novagen,Inc.，Madison,WI)、pRSET、pREP質粒(InVitrogen,SanDiego,CA)，pMAL質粒(NewEnglandBiolabs，Beverly，ΜΑ)，以及pEASY-BluntCloningVector和pEASY_T3CloningVector(以上兩種同屬北京全式金生物技術有限公司的T質粒系列)。可以採用本領域常規的方法來製備質粒DNA溶液，將DNA片段(三種支原體核糖體16SrRNA完整基因、或者SEQIDNo10-12所示的序列等)連接在質粒上。例如將DNA片段(可以在平頭末端加上合成的接頭以產生粘性末端)經兩種核酸內切酶雙酶切後，插入到採用同樣的雙酶處理過的粘末端質粒載體上或者將DNA片段(三種支原體核糖體16SrRNA完整基因、或者SEQIDNo10-12所示的序列等)通過T4噬菌體DNA連接酶直接連接到pEASY-BluntCloningVector質粒(鈍末端克隆載體)上。所述核酸內切酶可以使用本領域常用的核酸內切酶，例如AatII、AccI、Acc11(FnuDII)、AccIII(BspMII)、AfaI(RsaI)、AflII、AluI、Aorl3HI(BspMII，AccIII)、Aor51HI(Eco47III)、ApaI、ApaLI、BalI、BamHI、BanII(HgiJII)、BciT130I(EcoRII)、BcnI(CauII)、BglI、BglII、BinI(AvrII)、BmeTllOI(AvaI)、BmgT120I(Asul，Cfr131)、Bpull02I(EspI)、Bspl286I(SduI)、Bspl407I、BspT104I(AsuII，NspV)、BspT1071(HgiCI),BssHII(BsePI)、Bstll07I(SnaI)、BstPI(BstEII，Eco065I)、BstXI、Cfr101、ClaI、CpoI(RsrII)、DraI(AhaIII)、EaeI(CfrI)、Eamll05I、Eco52I(XmaIII)、Eco81I(SauI)、EcoO1091(DraII)、Eco065I(BstEII，BstPI)、EcoRI、EcoRV、EcoT14I(StyI)、EcoT22I(AvaIII),FbaI(BelI),FokI,HaeII,HaeIII,HapII(HpaII，MspI),HhaI,HinlI(AcyI,BbiII)、HincII(HindII)、HindIII、HinfI、HpaI、KpnI、MboI(Sau3AI)、MboII、MflI(XhoII)、MluI、MspI(HpaII，HapII)、MunI(MfeI)、NaeI、NcoI、NdeI、NheI、NotI、NruI、NsbI(AviII，MstI)、PmaCI、PshAI、PshBI(VspI)、Pspl406I(AclI)、PstI、PvuI、PvuII、SacI、SacII、SalI、Sau3AI(MboI)、ScaI、SfiI、SmaI、SmiI(SwaI)、SnaBI、SpeI、SphI、Sse8387I、SspI、StuI、TaqI(TthHB8I)、Tthllll、Van91I(PflMI)、VpaKllBI(AvaII)、XbaI、XhoI禾口XspI(BfaI，MaeI)。本發明試劑盒的所述陰性對照品可以是本領域常用的各種陰性對照品，只要不產生幹擾性的螢光信號即可。所述陰性對照品通常為水，優選選自由蒸餾水、去離子水、注射用水、重蒸水和超純水所組成的組中。本發明的試劑盒還可以包括試劑盒的使用說明書。所述試劑盒的使用說明書所記載的使用方法可以是本領域常規試劑盒的使用方法。優選地，所述試劑盒的使用說明書記載了配合具有不同長度和GC含量的引物和探針的PCR方法。例如，以下實施例中所記載的不同的PCR條件。本發明的所述試劑盒可以用於檢測的樣品選自由尿液、精液、前列腺液、尿道分泌物、宮頸分泌物和白帶所組成的組中。所述待測樣品可以使用泌尿生殖道常用的獲取樣本的方法取得，例如泌尿生殖道拭子、尿液、前列腺液和精液等。具體地取樣及樣品處理方法操作例如(1)拭子將滅菌白金耳或無菌拭子深入泌尿生殖道(女性為子宮頸管，男性為尿道)1釐米左右，轉動數圈，停留約30秒，取出後置於含生理鹽水的無菌管中，充分擠壓，震蕩後棄去拭子，保留含有標本的洗液即可。(2)尿液收集一次全尿後，2000rpm離心20分鐘，收集沉渣，轉移至含生理鹽水的無菌管中即可。(3)精液、前列腺液直接將標本留取於帶有生理鹽水的無菌管中即可。可以按照本領域常規的方法和條件提取待測樣本中的總DNA，以該總DNA為模板，加入本發明的組合物，完成PCR擴增過程。例如「李金明，實時螢光PCR技術，人民軍醫出版社，2007」中所記載的方法。本發明所涉及的引物/探針通常可以用PCR擴增法、重組法、或人工合成的方法獲得。例如，本領域技術人員根據本發明所涉及的引物/探針的核苷酸序列，可以很容易利用PCR進行擴增獲得有關序列。序列較長時，可以進行兩次或多次PCR擴增，然後將所得片段按正確次序拼接。此外，還可用公知的人工化學合成的方法來合成有關核苷酸序列。例如，引物合成可以採用固相亞磷酸三酯法，被合成引物的純化方法為聚丙烯醯胺凝膠(PAGE)電泳。引物在使用前經稀釋後，使用紫外分光光度計進行檢測，重新定量，確保其A260/A280>1.7。探針的合成可以採用固相亞磷酸三酯法，並將螢光報告基團(Reporter)和淬滅基團(Quencher)連接上去。探針純化方法採用的是聚丙烯醯胺凝膠(PAGE)電泳基礎上的變性高效液相色譜(dHPLC)純化，第一步為在連接淬滅基團之前，用PAGE電泳去除大部分雜質，特別是會與淬滅基團連接的雜質，以提高淬滅基團的連接和純化工作的效率。第二步是在連接了淬滅基團之後再用PAGE電泳在一定條件下將其他雜質去除，以獲得純度較高的產品。第三步將探針通過dHPLC進行純化，並檢驗純化後產品的其出峰位置及純度，再用紫外分光光度計在260nm波長下定量。探針在使用前經稀釋後，使用紫外分光光度計進行檢測，重新定量，確保其A260/A280>1.7。下面結合附圖和實施例對本發明作進一步詳細的說明。以下實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常參照常規條件，例如Sambrook等人，分子克隆實驗室手冊(NewYorkCoIdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。除非特別說明，本發明使用的各種試劑均可以商購，也可以採用本領域常用的方法製備。製備例1男性患者，35歲，發生尿道口痂膜，尿痛，前列腺炎及附睪炎症狀，無其他疾病並發。經患者知情同意，取得以下樣品(1)尿液樣品收集一次全尿10ml，在2000rpm下離心20分鐘，棄去上清，收集沉渣。將沉渣轉移至含500μ1生理鹽水的1.5ml無菌管中備用。(2)前列腺液樣品取前列腺液10μ1留取於已裝有500μ1生理鹽水的1.5ml無菌管中備用。按照「李金明，實時螢光PCR技術，人民軍醫出版社，2007」中第4章第四節第73-74頁所記載的方法分別提取上述兩種樣品的總DNA，得到兩種總DNA溶液每種各20μ1。^M"Yoshida,Τ.，S.Maeda,Τ.Deguchi,andH.Ishiko.2002.Phylogeny-basedrapididentificationofmycoplasmasandureaplasmasfromurethritispatients.J.Clin.Microbiol.40:105_110」記載的方法，通過測序鑑定上述所得樣品中含有解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的病原體。並且所述三種支原體的核糖體16SrRNA基因序列片段分別與Genbank公開相應三種支原體核酸的序列一致。其中解脲支原體與基因庫登錄號(GenbankAccession)L08642.1的序列(SEQIDNo13)一致；人型支原體與基因庫登錄號(GenbankAccession)M96660.1的序列(SEQIDNo14)一致；生殖器支原體與基因庫登錄號(GenbankAccession)X77334.1(SEQIDNo15)的序列一致。製備例2女性患者，27歲，發生陰道炎及宮頸炎症狀，無其他疾病並發。經患者知情同意，取得以下宮頸分泌物樣品將無菌拭子深入子宮頸管1釐米左右，轉動10圈，停留約30秒，取出後拭子置於含500μ1生理鹽水的1.5ml無菌管中，充分擠壓，震蕩後棄去拭子，保留含有標本的洗液500μ1。按照「李金明，實時螢光PCR技術，人民軍醫出版社，2007」中第4章第四節第73-74頁所記載的方法提取上述樣品的總DNA，得到其總DNA溶液20μ1。^M"Yoshida,Τ.，S.Maeda,Τ.Deguchi，andH.Ishiko.2002.Phylogeny-basedrapididentificationofmycoplasmasandureaplasmasfromurethritispatients.J.Clin.Microbiol.40:105_110」記載的方法，通過測序鑑定上述所得樣品中含有解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的病原體。並且所述三種支原體的核糖體16SrRNA基因序列片段分別與Genbank公開相應三種支原體核酸的序列一致。其中解脲支原體與基因庫登錄號(GenbankAccession)L08642.1的序列(SEQIDNo13)一致；人型支原體與基因庫登錄號(GenbankAccession)M96660.1的序列(SEQIDNo14)一致；生殖器支原體與基因庫登錄號(GenbankAccession)X77334.1(SEQIDNo15)的序列一致。製備例3採用固相亞磷酸三酯法分別合成解脲支原體核糖體16SrRNA基因(GenbankAccession:L08642.1)、人型支原體核糖體16SrRNA基因(GenbankAccession:M96660.1)以及生殖器支原體核糖體16SrRNA基因(GenbankAccession:X77334.1)。將所得三種的DNA序列分別通過T4噬菌體DNA連接酶直接連接到pEASY-BluntCloningVector質粒(鈍末端克隆載體)上，轉化大腸桿菌，大量培養，提取質粒，製成IO6拷貝/毫升的三種模擬待測樣品備用。實施例1(1)採用固相亞磷酸三酯法合成表2所列舉的序列表2tableseeoriginaldocumentpage21tableseeoriginaldocumentpage22(2)PCR反應擴增靶序列，製備陽性對照品取3個反應管，分別加入1種DNA模板和對應的兩種PCR引物；DNA模板製備例3製備的模擬待測樣品，每種各3μ1；表2所示的六種引物各0.25μmol/L；北京全式金生物技術有限公司的PCR預混液(2XEasyTaqPCRSuperMix),20μ1以純化水補充至40μ1。94°C，5分鐘，1個循環，94"C，30秒，55°C，30秒，72°C，30秒，35個循環，72°C,10分鐘，1個循環。對得到的DNA擴增產物，在80V，50分鐘的條件下，進行1.5%的瓊脂糖凝膠電泳，電泳結果見圖1。圖1中從左至右四個泳道分別為生殖器支原體、解脲支原體、人型支原體靶核酸序列的PCR產物以及DNA分子量標記(marker)。DNAmarker為寶生物(Takara)公司的DL2000，從上至下的條帶依次為2000bp、IOOObp、750bp、500bp、250bp、IOObp。將PCR產物切膠純化後(使用德國快而精(Qiagen)有限公司的瓊脂糖凝膠回收試劑盒，MinEluteGelExtractionKit)，將三個單一條帶回收後，分別與T質粒(使用北京全式金生物技術有限公司的T質粒試劑盒，pEASY-T3CloningKit)相連，轉化大腸桿菌(使用北京全式金生物技術有限公司的TranS5αChemicallyCompetentCell)，篩選陽性克隆後提取質粒(使用天根生化科技(北京)有限公司的高純度質粒小提試劑盒，TIANpureMiniPlasmidKit)，並以紫外分光光度計進行檢測和定量。對三種質粒的一部分擴增產物進行測序，證明所述擴增得到的DNA片段具有SEQIDNo:10_12所示的序列。對三種質粒的剩餘的部分逐級稀釋，每種分別依次得到ΙΟ6、ΙΟ5、104、、IO3拷貝/毫升的濃度梯度，得到陽性對照品。以上涉及的操作按照《分子克隆實驗指南》(第三版，科學出版社2002[美]J.薩姆布魯克D.W拉塞爾著，黃培堂等譯)中記載的方法完成。(3)多重螢光PCR檢測待測樣本DNA模板製備例1得到的尿液樣品總DNA溶液，3μ1或步驟(2)的陽性對照品，3μ1(濃度梯度溶液)表2所示的六種引物各0.25μmol/L；表2所示的三種探針各0.25μmol/L;美國應用生物系統公司(AppliedBiosystems)的TaqMan基因表達預混液(TaqManGeneExpressionMasterMix),20μ1以純化水補充至40μ1。37°C，2分鐘，94°C，3分鐘，1個循環，95°C，15秒，50°C，35秒，40個循環。採用的PCR儀為ABIPRISM7500PCR螢光檢測儀，選定檢測螢光為FAM、HEX、ROX通道，並在PCR循環50°C(第2-41個循環的第二步)時，開始實時收集螢光信號。檢測結果如圖2所示。將解脲支原體的四個濃度梯度的陽性對照品所得的螢光強度相對循環數的曲線疊加，得到圖6(圖中4條曲線是從FAM—個信號通道的信號，其他兩個信號通道下沒有信號)；將人型支原體的四個濃度梯度的陽性對照品所得的螢光強度相對循環數的曲線疊力口，得到圖7(圖中4條曲線是從HEX—個信號通道的信號，其他兩個信號通道下沒有信號)；將生殖器支原體的四個濃度梯度的陽性對照品所得的螢光強度相對循環數的曲線疊力口，得到圖8(圖中4條曲線是從ROX—個信號通道得到的信號，其他兩個信號通道下沒有信號)。從圖2可以看出，通過與陽性對照品所得的曲線進行比較，待測樣品中三個信號通道的螢光強度曲線均有跳動(圖2中3條曲線分別是三個信號通道的信號)，表明被檢測的標本中3種支原體均有存在。實施例2(1)採用固相亞磷酸三酯法合成表3所列舉的序列表3tableseeoriginaldocumentpage23tableseeoriginaldocumentpage24(2)多重螢光PCR檢測待測樣本DNA模板製備例1得到的尿液樣品總DNA溶液，3μ1或實施例1步驟(2)的陽性對照品，3μ1(濃度梯度溶液)表3所示的六種引物各0.25μmol/L；表3所示的三種探針各0.25μmol/L;美國應用生物系統公司(AppliedBiosystems)的TaqMan基因表達預混液(TaqManGeneExpressionMasterMix),20μ1以純化水補充至40μ1。37°C，2分鐘，94°C，3分鐘，1個循環，95°C，15秒，65°C，35秒，40個循環。採用的PCR儀為ABIPRISM7500PCR螢光檢測儀，選定檢測螢光為FAM、HEX、ROX通道，並在PCR循環65°C(第2-41個循環的第二步)時，開始實時收集螢光信號。檢測結果如圖3所示。從圖3可以看出，待測樣品中三個信號通道的螢光強度曲線均有跳動，表明被檢測的標本中3種支原體均有存在。本實施例的引物/探針與實施例1不同，但在檢測與實施例1相同的待測樣品時，二者的檢測結果一致。實施例3(1)採用固相亞磷酸三酯法合成表4所列舉的序列表4tableseeoriginaldocumentpage25(2)多重螢光PCR檢測待測樣本DNA模板製備例1得到的前列腺液樣品總DNA溶液，3μ1或實施例1步驟(2)的陽性對照品，3μ1(濃度梯度溶液)表4所示的六種引物各0.25ymol/L；表4所示的三種探針各0.25ymol/L；美國應用生物系統公司(AppliedBiosystems)的TaqMan基因表達預混液(TaqManGeneExpressionMasterMix),20μ1以純化水補充至40μ1。37°C，2分鐘，94°C，3分鐘，1個循環，95°C，15秒，55"C，35秒，40個循環。採用的PCR儀為ABIPRISM7500PCR螢光檢測儀，選定檢測螢光為FAM、HEX、ROX通道，並在PCR循環55°C(第2-41個循環的第二步)時，開始實時收集螢光信號。檢測結果如圖4所示。從圖4可以看出，待測樣品中三個信號通道的螢光強度曲線均有跳動，表明被檢測的標本中3種支原體均有存在。本實施例的引物/探針與實施例1不同，待測樣品與實施例1的待測樣品也不相同；但是所述兩種不同的待測樣品來源於同一個體，並且最終二者的檢測結果一致。實施例4(1)採用固相亞磷酸三酯法合成表5所列舉的序列表5tableseeoriginaldocumentpage26(2)多重螢光PCR檢測待測樣本DNA模板製備例2得到的宮頸分泌物樣品總DNA溶液，3μ1或實施例1步驟(2)的陽性對照品，3μ1(濃度梯度溶液)表5所示的六種引物各0.25μmol/L；表5所示的三種探針各0.25μmol/L;美國應用生物系統公司(AppliedBiosystems)的TaqMan基因表達預混液(TaqManGeneExpressionMasterMix),20μ1以純化水補充至40μ1。37°C，2分鐘，94°C，3分鐘，1個循環，95°C，15秒，60°C，35秒，40個循環。採用的PCR儀為ABIPRISM7500PCR螢光檢測儀，選定檢測螢光為FAM、HEX、ROX通道，並在PCR循環60°C(第2-41個循環的第二步)時，開始實時收集螢光信號。檢測結果如圖5所示。從圖5可以看出，待測樣品中三個信號通道的螢光強度曲線均有跳動，表明被檢測的標本中3種支原體均有存在。本實施例證明，本發明的組合物和試劑盒既適用於男性患者，也適用於女性患者。實施例5分別取製備例3的IO5拷貝/毫升的三種模擬待測樣品按照下表6的拷貝數百分比進行混合，模擬從合併感染患者體內可能獲得的各種樣品。表6tableseeoriginaldocumentpage27待測樣品分別取3μ1表6所示的混合樣品1-6，按照實施例4的條件進行檢測所得的結果如下表7所示，證明了本發明的組合物和試劑盒能夠檢測到混合待測樣本中微量的支原體。表7tableseeoriginaldocumentpage27實施例6對57例臨床檢測送檢標本，使用文獻「Yoshida，Τ.，S.Maeda，Τ.Deguchi，andH.Ishiko.2002.Phylogeny-basedrapididentificationofmycoplasmasandureaplasmasfromurethritispatients.J.Clin.Microbiol.40105-110"idiSc^Tj法(方法一)對三種支原體分別進行檢測；使用本發明實施例4所述方法(方法二)同時對三種支原體進行檢測。此處將文獻記載的方法一視為「金標準」。得到以下表8-10所示的結果。表8解脲支原體測定結果tableseeoriginaldocumentpage27靈敏度(真陽性率)=49/(49+0)=100%特異度(真陰性率)=7/(1+7)=87.5%陽性預測率=49/(49+1)=98%陰性預測率=7/(0+7)=100%準確度=(49+7)/(49+1+0+7)=98.2%表9人型支原體測定結果tableseeoriginaldocumentpage28靈敏度(真陽性率)=38/(38+2)=95%特異度(真陰性率)=17/(0+17)=100%陽性預測率=38/(38+0)=100%陰性預測率=17/(2+17)=89.5%準確度=(38+17)/(38+0+2+17)=96.5%表10生殖器支原體測定結果tableseeoriginaldocumentpage28靈敏度(真陽性率)=15/(15+0)=100%特異度(真陰性率)=42/(0+42)=100%陽性預測率=15/(15+0)=100%陰性預測率=42/(0+42)=100%準確度=(15+42)/(15+0+0+42)=100%以上表8-10的結果說明本發明的組合物和試劑盒在臨床上普遍適用，必其現有的方法，使用本發明的組合物和試劑盒的方法準確率高，並且省時省力。SEQUENCELISTING北京鑫諾美迪基因檢測技術有限公司用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物和試劑盒0ICN093112415PatentInversion3.4125DNA人工序列合成的寡核苷酸引物序列1atcagatagttggtgaggtaatggc25218DNA人工序列合成的寡核苷酸引物序列2atcgttcacgcggcattg18325DNA人工序列合成的寡核苷酸引物序列3cattaaatgatccgcctgagtagta25422DNA人工序列合成的寡核苷酸引物序列4ttgcgaaggatgtcaagagtgg22518DNA人工序列合成的寡核苷酸引物序列5aacaccagtggcgaaggc18625DNA人工序列合成的寡核苷酸引物序列6tctatcgtttacggtgtggactact25725DNA人工序列合成的寡核苷酸探針序列7tggctcaccaagtcaatgacgcgta25825DNA人工序列合成的寡核苷酸探針序列8atccgcctgagtagtatgctcgcaa25925DNA人工序列合成的寡核苷酸探針序列9aggccattactgacgcttaggcttg2510170DNA解脲支原體(Ureaplasmaurealyticum)10atcagatagttggtgaggtaatggctcaccaagtcaatgacgcgtagctgtactgagagg60tagaacagccacaatgggactgagacacggcccatactcctacgggaggcagcagtaggg120aatttttcacaatgggcgcaagccttatgaagcaatgccgcgtgaacgat17011135DNA人型支原體(Mycoplasmahominis)misc_feature(61)..(62)nisa,c,g,ortmisc_feature(72)..(72)nisa,c,g,ort11cattaaatgatccgcctgagtagtatgctcgcaagagtgaaacttaaaggaattgacggg60nnacgcacaagnggagcatgtggtttaatttgaagatacacggaaaaccttacccactct120tgacatccttcgcaa13512109DNA生殖器支原體(Mycoplasmagenitalium)12aacaccagtggcgaaggcgaaaacttaggccattactgacgcttaggcttgaaagtgtgg60ggagcaaataggattagataccctagtagtccacaccgtaaacgataga109131585DNA解脲支原體(Ureaplasmaurealyticum)13tagaatccgtcaatttttaaagagtttgatcctggctcaggattaacgctggcggcatgc60ctaatacatgcaaatcgaacgaagccttttaggcttagtggtgaacgggtgagtaacacg120tatccaatctacccttaagttggggataactagtcgaaagattagctaataccgaataat180aacatcaatatcgcatgagaagatgtagaaagtcgctctttgtggcgacgcttttggatg240agggtgcgacgtatcagatagttggtgaggtaatggctcaccaagtcaatgacgcgtagc300tgtactgagaggtagaacagccacaatgggactgagacacggcccatactcctacgggag360gcagcagtagggaatttttcacaatgggcgcaagccttatgaagcaatgccgcgtgaacg420atgaaggtcttatagattgtaaagttcttttatatgggaagaaacgctaagataggaaat480gattttagtttgactgtaccatttgaataagtatcggctaactatgtgccagcagccgcg540gtaatacataggatgcaagcgttatccggatttactgggcgtaaaacgagcgcaggcggg600ccggaattattgggcgtaaagcgttcgtaggctgtttgttaagtctggagttaaatcccg600gggctcaaccccgctcgctttggatactagcaaactagagttagatagaggtaagcggaa660ttccatgtgaagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccaaaggcgaaggcagct720tactgggtctatactgacgctgggacgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccct780ggtagtccacgccgtaaacgatgatcattagtcggtggagaatcactgacgcagctaacg840cattaaatgatccgcctgagtagtatgctcgcaagagtgaaacttaaaggaattgacggg900nnacgcacaagnggagcatgtggtttaatttgaagatacacggaaaaccttacccactct960tgacatccttcgcaaagctatagagatatagtggaggttatcggagtgacagatggtgca1020tggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgtttggtcaagtcctgcaacgagcgcaacccc1080tatctttagttactaacattaagttgaggactctagagatactgcctgggtaactgggag1140gaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgcctcttacgagtggggccacacacgtgctac1200aatggtcggtacaaagagaagcaatatggcgacactgagcaaatctcaaaaagccgatct1260cagttcggattggagtctgcaattcgactccatgaagtcggaatcgctagtaatcgcaga1320tcagctatgctgcggtgaatacgttctcgggtcttgtacacaccgcccgtcacaccatgg1380gagctggtaatacccaaagtcggtttgctaacctcggaggcgaccgcctaaggtaggact1440ggtgactggg1450151490DNA〈213〉生殖器支原體(Mycoplasmagenitalium)15agagtttgatcctggctcaggattaacgctggcggcatgcctaatacatgcaagtcgatc60ggaagtagcaatactttagaggcgaacgggtgagtaacacgtatccaatctaccttataa120tgggggataactagttgaaaaactagctaataccgcataagaactttagttcgcatgaat180taaagttgaaaggacctgcaagggttcgttatttgatgagggtgcgccatatcagctagt240tggtagggtaatggcctaccaaggcaatgacgtgtagctatgctgagaagtagaatagcc300acaatgggactgagacacggcccatactcctacgggaggcagcagtagggaatttttcac360aatgagcgaaagcttgatggagcaatgccgcgtgaacgatgaaggtctttttgattgtaa420agttcttttatttgggaagaatgactctagcaggcaatggctggagtttgactgtaccac480tttgaataagtgacgactaactatgtgccagcagtcgcggtaatacataggtcgcaagcg540ttatccggatttattgggcgtaaagcaagcgcaggcggattgaaaagtctggtgttaaag600gcagctgcttaacagttgtatgcattggaaactatcagtctagagtgtggtagggagttt660tggaatttcatgtggagcggtgaaatgcgtagatatatgaaggaacaccagtggcgaagg720cgaaaacttaggccattactgacgcttaggcttgaaagtgtggggagcaaataggattag780ataccctagtagtccacaccgtaaacgatagatactagctgtcggagcgatcccttcggt840agtgaagttaacacattaagtatctcgcctgggtagtacattcgcaagaatgaaactcaa900acggaattgacggggacccgcacaagtggtggagcatgttgcttaattcgacggtacacg960aaaaaccttacctagacttgacatccttggcaaagttatggaaacataatggaggttaac1020cgagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcc108033cgcaacgagcgcaacccttatcgttagttacattgtttaacgagactgctaatgtaaatt1140ggaggaaggaagggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgtctagggctgcaaacgtg1200ctacaatggccaatacaaacagtagccaacttgtaaaagtgagcaaatctgaaaagttgg1260tctcagttcggattgagggctgcaattcgtcctcatgaagctggaatcactagtaatcgc1320gaatcagctatgtcgcggtgaatacgttctcgggtcttgtacacaccgcccgtcaaacta1380tgaaagctggtaatatttaaaaacgtgttgctaacctttattggaagcgcatgtcaagga1440tagcaccggtgattggagttaagtcgtaacaaggtacccctacgagaacg1490權利要求用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物，其特徵在於，所述組合物包括以下序列1)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為20-80％，該引物的序列包括a)SEQIDNo1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；2)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為20-80％，該引物的序列包括a)SEQIDNo2所示的序列，b)SEQIDNo2所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；3)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為20-80％，該引物的序列包括a)SEQIDNo3所示的序列，b)SEQIDNo3所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；4)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為20-80％，該引物的序列包括a)SEQIDNo4所示的序列，b)SEQIDNo4所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；5)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為20-80％，該引物的序列包括a)SEQIDNo5所示的序列，b)SEQIDNo5所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；6)長度為15-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為20-80％，該引物的序列包括a)SEQIDNo6所示的序列，b)SEQIDNo6所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多5個核苷酸差異的序列；7)長度為15-45個核苷酸的與1)和2)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為20-80％，該探針的序列包括a)SEQIDNo7所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo7所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多5個核苷酸差異的序列；8)長度為15-45個核苷酸的與3)和4)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為20-80％，該探針的序列包括a)SEQIDNo8所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo8所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多5個核苷酸差異的序列；9)長度為15-45個核苷酸的與5)和6)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為20-80％，該探針的序列包括a)SEQIDNo9所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo9所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo9所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多5個核苷酸差異的序列；其中，7)-9)所述的探針在5』端帶有互不相同的螢光報告基團，並且在除5′端外的任意一個位置上帶有淬滅基團。2.根據權利要求1所述的組合物，其特徵在於，所述組合物包括以下序列1)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；2)長度為18-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo2所示的序列，b)SEQIDNo:2所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；3)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo3所示的序列，b)SEQIDNo:3所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；4)長度為22-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:4所示的序列，b)SEQIDNo:4所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；5)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo5所示的序列，b)SEQIDNo:5所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；6)長度為18-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為25-75%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo:6所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有至多3個核苷酸差異的序列；7)長度為25-45個核苷酸的與1)和2)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為25-75%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo:7所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:7所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多3個核苷酸差異的序列；8)長度為25-45個核苷酸的與3)和4)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為25-75%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo:8所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:8所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多3個核苷酸差異的序列；9)長度為25-45個核苷酸的與5)和6)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為25-75%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo:9所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:9所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有至多3個核苷酸差異的序列；其中，7)-9)所述的探針在5』端帶有互不相同的螢光報告基團，並且除5'端外的任意一個位置上帶有淬滅基團。3.根據權利要求1所述的組合物，其特徵在於，所述組合物包括以下序列1)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；2)長度為18-30個核苷酸的用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo2所示的序列，b)SEQIDNo:2所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；3)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo3所示的序列，b)SEQIDNo:3所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；4)長度為22-30個核苷酸的用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:4所示的序列，b)SEQIDNo:4所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；5)長度為25-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo5所示的序列，b)SEQIDNo:5所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；6)長度為18-30個核苷酸的用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的GC含量為30-70%，該引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo:6所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者c)與a)或b)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；7)長度為25-45個核苷酸的與1)和2)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為30-70%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo:7所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:7所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；8)長度為25-45個核苷酸的與3)和4)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為30-70%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互補序列，b)SEQIDNo:8所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:8所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；9)長度為25-45個核苷酸的與5)和6)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的GC含量為30-70%，該探針的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互補序列，或者b)SEQIDNo:9所示的序列的至少15個核苷酸連續的片段，c)SEQIDNo:9所示序列的互補序列的至少15個核苷酸連續的片段，或者d)與a)或b)或c)具有一個或兩個核苷酸差異的序列；其中，7)-9)所述的探針在5』端帶有互不相同的螢光報告基團，並且除5'端外的任意一個的位置上帶有淬滅基團。4.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述組合物由以下序列組成1)用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的序列為如SEQIDNo=I所示的序列；2)用於PCR擴增解脲支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的序列為如SEQIDNo2所示的序列；3)用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的序列為如SEQIDNo3所示的序列；4)用於PCR擴增人型支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的序列為如SEQIDNo4所示的序列；5)用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第一引物，該引物的序列為如SEQIDNo5所示的序列；6)用於PCR擴增生殖器支原體靶核酸序列的第二引物，該引物的序列為如SEQIDNo6所示的序列；7)與1)和2)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的序列為如SEQIDNo7所示的序列或其互補序列；8)與3)和4)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的序列為如SEQIDNo8所示的序列或其互補序列；9)與5)和6)所述引物的PCR擴增產物雜交的寡核苷酸探針，該探針的序列為如SEQIDNo9所示的序列或其互補序列；其中，7)-9)所述的探針在5』端帶有互不相同的螢光報告基團，並且在3』端帶有淬滅基團。5.根據權利要求1-4中任意一項所述的組合物，其中，所述螢光報告基團的發射波長小於所述淬滅基團的吸收波長；並且所述螢光報告基團和所述淬滅基團選自由6-羧基螢光素、四氯-6-羧基螢光素、六氯-6-甲基螢光素、6-羧基四甲基羅丹明、磺醯羅丹明、羧基-X-羅丹明、花菁3、花菁3.5、花菁5、花菁5.5、BHQl、BHQ2、BHQ3、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、6-羧基-4』，5』-二氯_2』，7』-二甲氧基螢光素琥珀醯亞胺酯和VIC螢光染料所組成的組中。6.根據權利要求5所述的組合物，其中，所述螢光報告基團選自由6-羧基螢光素、六氯-6-甲基螢光素、VIC螢光染料、四氯-6-羧基螢光素、羧基-X-羅丹明、6-羧基四甲基羅丹明、磺醯羅丹明、6-羧基_4』，5』-二氯-2』，7』-二甲氧基螢光素琥珀醯亞胺酯、花菁3、花菁5和花菁5.5所組成的組中；所述淬滅基團選自由6-羧基四甲基羅丹明、4-(4_二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、BHQ1、BHQ2和BHQ3所組成的組中。7.用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的試劑盒，該試劑盒含有聚合酶鏈式反應液、耐熱DNA聚合酶及陰性對照品，其特徵在於，所述試劑盒還含有權利要求1-6中任意一項所述的組合物。8.根據權利要求7所述的試劑盒，其中，所述試劑盒還包括陽性對照品，所述陽性對照品為IO3-IO8拷貝/毫升的解脲支原體質粒DNA溶液、IO3-IO8拷貝/毫升的人型支原體質粒DNA溶液和IO3-IO8拷貝/毫升的生殖器支原體質粒DNA溶液，其中，所述支原體質粒DNA由支原體DNA片段和質粒載體組成，所述解脲支原體DNA片段為如SEQIDNo:10所示的解脲支原體核糖體16SrRNA基因擴增產物，所述人型支原體DNA片段為如SEQIDNo:ll所示的人型支原體核糖體16SrRNA基因擴增產物，所述生殖器支原體DNA片段為如SEQIDNo12所示的生殖器支原體核糖體16SrRNA基因擴增產物；所述陰性對照品為水。9.根據權利要求8所述的試劑盒，其中，所述陰性對照品選自由蒸餾水、去離子水、注射用水、重蒸水和超純水所組成的組中。10.根據權利要求7所述的試劑盒，其中，所述試劑盒檢測的樣品選自由尿液、精液、前列腺液、尿道分泌物、宮頸分泌物和白帶所組成的組中。全文摘要本發明公開了用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物和試劑盒，它們均包括有關SEQIDNo1-6所示序列或其至少15個核苷酸連續的片段、或與它們存在具有至多5個核苷酸差異的序列的特異性引物；以及SEQIDNo7-9所示的序列或其互補序列或它們的至少15個核苷酸連續的片段、或與它們存在具有至多5個核苷酸差異的序列的特異性探針。本發明的用於同時檢測解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體的組合物和試劑盒可以在一個反應體系內同時檢測三種不同的支原體，不僅提高了泌尿生殖系統感染性疾病的早期檢出率，而且減少了操作人員的操作時間，降低了檢測成本，還減輕了病人經濟負擔。文檔編號C12Q1/68GK101824471SQ200910253189公開日2010年9月8日申請日期2009年12月14日優先權日2009年12月14日發明者葉鋒,趙洪斌申請人:北京鑫諾美迪基因檢測技術有限公司