一種中藥組合物及其製備方法與應用的製作方法

2023-06-14 01:49:41 1

專利名稱：一種中藥組合物及其製備方法與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥組合物及其製備方法與應用，該中藥組合物由西洋參、熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉的原料藥製備得到，所述組合物具有增強免疫力的作用，並對輻射危害有輔助保護功能。

背景技術：
目前，隨著社會的進步，科技的發展，人類的自然生存環境也產生了變化，為人類的健康帶來了隱患。首先是環境的電磁輻射汙染，不久前，美國一個研究氣候變化的專家委員會得出結論認為，到2050年全球氣溫將平均提高2度。全球氣溫變暖和大氣臭氧層破壞而引起的紫外輻射增強，破壞了人體的抗病能力，損害人體的免疫系統而誘發許多疾病，紫外輻射的增加對人類造成的威脅將越來越嚴重。與此同時，隨著各種電器的普遍使用，人工生成的電磁輻射汙染日益嚴重，人們長期處於電視、電腦、手機、空調等等電器的包圍中，如果不加注意，其產生的電磁輻射汙染就可能會破壞你的免疫、循環、生殖和代謝等功能，使得白細胞減少，甚至誘發癌症。其次，自然環境的變化還表現在環境汙染方面。比如，隨著工業化的進程，其產生的廢煙、廢氣、廢水、廢渣和噪音汙染日趨嚴重；交通工具(所有的燃油車輛、輪船、飛機等)的大量使用排出的廢氣和噪音；大量使用化肥、殺蟲劑、除草劑等化學物質的農田流出的水，激素、農藥在食物中的殘留等等均會對人體的健康產生不同程度的危害，使得人們免疫力降低，抵抗能力下降而導致各種疾病的發生。再者，隨著時代的進步，科技的發展，知識的更新周期不斷縮短，各行業的競爭日益激烈，為了能在競爭中生存、發展，無論是體力，還是腦力，人們的付出都在不斷增加，長期處於緊張狀態，天曠日久，均會導致人體免疫力的低下。
經過國內有關方面應用現代醫學及藥理學等方法，對中醫「腎」的藏象學說作了深入的研究，認為腎的實質，除腎臟本身外，與下丘腦—垂體—腎上腺皮質系統和下丘腦—垂體—性腺系統有密切關係，腎虧或者腎氣過早衰退的人，可呈現內分泌系統功能的減退，免疫功能的低下，並且影響其它內臟器官的生理功能。為了增強人體免疫力、防止電磁輻射汙染對人體產生的危害，充分發揮中醫藥在生活保健中的作用，根據傳統的中醫藥理論，結合現代的臨床及藥理學研究結果，選擇了在六味地黃湯基礎上加減化裁而得本發明的中藥組合物。該中藥組合物的配方由西洋參、熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉組成，易滋陰名方為氣陰雙補之劑，具有滋補肝腎，益氣養陰之功，在「滋陰補腎」名方六味地黃湯的基礎上加減而成，更增氣陰雙補之功。西洋參補氣養陰，清火生津，《醫學衷中參西錄》說「西洋參性涼而補，凡欲用人參而不受人參之溫補者，可以此代之」，熟地滋陰補腎，生血填精益髓，以固封藏之本；配西洋參既可增強滋陰生津之力，又能補氣以生陰，補陰以化氣，奏氣陰雙補之效，故並列用為主藥。山茱萸滋養肝腎，酸澀固精，懷山藥補益脾腎，益氣養陰而固精，共為輔藥，主輔四藥互配，滋補肝、脾、腎，益氣養陰，補其不足以治本。配澤瀉洩腎利溼，疏水道之滯，並防熟地之滋膩、山茱萸之酸收；茯苓淡滲脾溼，而通腎交心，以助懷山藥之健運。以上二藥瀉溼濁平其偏勝以治標，均為佐藥。全方配合，四補二瀉，以補為主，肝脾腎三陰並調，氣陰雙補，尤以補腎為要，相輔相成，構成通補開合之劑。故具滋補肝腎，益氣養陰之功。


發明內容
本發明的目的在於提供一種中藥組合物，該組合物具有增強免疫力的作用，並對輻射危害有輔助保護功能。
為實現上述目的，本發明的中藥組合物的活性成分是由下列原料藥製備得到 西洋參20-100重量份 熟地黃120重量份 山茱萸60重量份 山藥60重量份 茯苓45重量份澤瀉45重量份。
本發明的另一目的是提供上述中藥組合物的製備方法，該方法包括如下步驟 (1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，然後60～90℃烘乾粉碎成過100目篩的細粉，在烘乾過程中既可充分去除水分，經驗證也可達到殺滅微生物的效果，粉碎在10萬級潔淨區進行。
(2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製。
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片。
(4)將步驟(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓加水6～12倍量，煎煮二次，每次1～3小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.35～1.40(20℃)的稠膏。經驗證在上述煎煮條件下可達到殺滅各種微生物的效果，過濾在10萬級潔淨區進行。
(5)將步驟(1)的西洋參和山藥細粉與步驟(4)所得山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓的提取濃縮稠膏混合，得到本發明中藥組合物的活性成分。
將上述所得活性成分採用常規方法製成各種所需劑型，例如 (a)採用常規塑製法制丸，乾燥，打光，製得濃縮丸劑；或者 (b)制粒，然後壓製成片，製成片劑；或者 (c)制粒，然後填充膠囊，製成膠囊劑。
上述西洋參、山藥打細粉，熟地黃、山茱萸、澤瀉、茯苓的提取液出口處以及濃縮、烘乾、打光、制粒、壓片、包裝等步驟都在乾燥的潔淨室(10萬級)中進行。
本發明的中藥組合物的口服液劑型可採用如下方法製備 (1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，切片； (2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製。
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片。
(4)將步驟(1)、(2)、(3)所得的西洋參、山藥、山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓合併，加水6～12倍量，煎煮二次，每次1～3小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.20(20℃)的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量達到58～75％，攪勻，靜置24～48小時，吸上清液，回收乙醇，濾過，濃縮至適量，加入蒸餾水至1000(w/v)，攪勻，過濾，灌封，最後高壓蒸汽滅菌，製成口服液。
本發明的中藥組合物的顆粒劑可採用如下方法製備 (1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，切片； (2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製。
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片。
(4)將步驟(1)、(2)、(3)所得的西洋參、山藥、山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓合併，加水6～12倍量，煎煮二次，每次1～3小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.30(20℃)的清膏，加入適量輔料糊精及蔗糖，制粒，包裝，即得顆粒劑。
本發明的中藥組合物可製備成任何一種可藥用劑型，優選製備為口服劑型，如濃縮丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液等。
本發明中藥組合物採用的原料符合《中華人民共和國藥典》2005年版的標準。



圖1為本發明中藥組合物的實施例之一的活性成分以及丸劑的製備工藝流程圖。

具體實施例方式 製備實施例 實施例1本發明中藥組合物的濃縮丸劑製備 丸劑原料藥配方如下 西洋參20g熟地黃120g山茱萸60g 山藥60g 茯苓45g澤瀉45g。
製備方法 (1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，然後60℃烘乾粉碎成過100目篩的細粉，在烘乾過程中既可充分去除水分，經驗證也可達到殺滅微生物的效果，粉碎在10萬級潔淨區進行。
(2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製。
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片。
(4)將步驟(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓加水6倍量，煎煮二次，每次1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.35～1.40(20℃)的稠膏。經驗證在上述煎煮條件下可達到殺滅各種微生物的效果，過濾在10萬級潔淨區進行。
(5)將步驟(1)的西洋參和山藥細粉與步驟4所得山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓的提取濃縮稠膏混合，得到本發明中藥組合物的活性成分。
然後，用上述混合物制丸，乾燥，打光，製得濃縮丸劑。
實施例2本發明中藥組合物的丸劑製備 丸劑原料藥的配方如下 西洋參45g熟地黃120g山茱萸60g 山藥60g 茯苓45g 澤瀉45g。
製備方法 (1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，然後80℃烘乾粉碎成過100目篩的細粉，在烘乾過程中既可充分去除水分，經驗證也可達到殺滅微生物的效果，粉碎在10萬級潔淨區進行。
(2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製。
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片。
(4)將步驟(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓加水8倍量煎煮二次，每次1.5小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.35～1.40(20℃)的稠膏。經驗證在上述煎煮條件下可達到殺滅各種微生物的效果，過濾在10萬級潔淨區進行。
(5)將步驟(1)的西洋參和山藥細粉與步驟4所得山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓的提取濃縮稠膏混合，得到本發明中藥組合物的活性成分。
然後，用上述混合物制丸，乾燥，打光，製得濃縮丸劑。
實施例3本發明中藥組合物的片劑製備 片劑原料藥的配方如下 西洋參65g熟地黃120g山茱萸60g 山藥60g 茯苓45g 澤瀉45g。
製備方法 (1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，然後70℃烘乾粉碎成過100目篩的細粉，在烘乾過程中既可充分去除水分，經驗證也可達到殺滅微生物的效果，粉碎在10萬級潔淨區進行。
(2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製。
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片。
(4)將步驟(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓加水10倍量煎煮二次，每次2小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.35～1.40(20℃)的稠膏。經驗證在上述煎煮條件下可達到殺滅各種微生物的效果，過濾在10萬級潔淨區進行。
(5)將步驟(1)的西洋參和山藥細粉與步驟(4)所得山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓的提取濃縮稠膏混合，得到本發明中藥組合物的活性成分；然後，用上述混合物制粒，乾燥，壓片，製成片劑。
實施例4本發明中藥組合物的口服液製備 口服液原料藥的配方如下 西洋參80g熟地黃120g山茱萸60g 山藥60g 茯苓45g 澤瀉45g。
製備方法 (1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，切片。
(2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製。
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片。
(4)將步驟(1)、(2)、(3)所得的西洋參、山藥、山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓加水11倍量煎煮二次，每次2.5小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.15(20℃)的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量達到70％，攪勻，靜置48小時，吸上清液，回收乙醇，濾過，濃縮至適量，加入蒸餾水至1000(w/v)，攪勻，過濾，灌封，最後高壓蒸汽滅菌，製成口服液。
實施例5本發明中藥組合物的膠囊劑製備 膠囊劑原料藥配方如下 西洋參100g熟地黃120g山茱萸60g 山藥60g 茯苓45g 澤瀉45g。
製備方法 (1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，然後90℃烘乾粉碎成過100目篩的細粉，在烘乾過程中既可充分去除水分，經驗證也可達到殺滅微生物的效果，粉碎在10萬級潔淨區進行。
(2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製。
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片。
(4)將步驟(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓加水12倍量煎煮二次，每次3小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.35～1.40(20℃)的稠膏。經驗證在上述煎煮條件下可達到殺滅各種微生物的效果，過濾在10萬級潔淨區進行。
(5)將步驟(1)的西洋參和山藥細粉與步驟(4)所得山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓的提取濃縮稠膏混合，得到本發明中藥組合物的活性成分；然後，用上述混合物制粒，乾燥，填充膠囊，製成膠囊劑。
實施例6本發明中藥組合物的顆粒劑的製備 顆粒劑原料藥的配方如下 西洋參70g熟地黃120g山茱萸60g 山藥60g 茯苓45g 澤瀉45g。
製備方法 (1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，切片。
(2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製。
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片。
(4)將步驟(1)、(2)、(3)所得的西洋參、山藥、山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓加水9倍量煎煮二次，每次2小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.25(20℃)的清膏，加入適量輔料糊精及蔗糖，制粒，包裝，即得顆粒劑。
生物活性實驗例 一、本發明中藥組合物增強免疫力的實驗 1.材料和方法 1.1樣品實施例2的黑色濃縮丸，人體推薦攝入量為1600mg/人/日。
1.2試驗動物及分組選用上海西普爾-必凱實驗動物有限公司繁殖的F1代健康雄性小鼠120隻，BALB/C健康雄性小鼠80隻，實驗動物生產許可證號為SCXK(滬)2003-0002，合格證號0005718。
其中18.0～23.8gF1代小鼠40隻，按體重隨機分為4組，每組10隻，作為I組，進行二硝基氟苯誘導小鼠DTH試驗；18.2～23.4gF1代小鼠40隻，隨機分為4組，每組10隻，作為II組，進行小鼠碳廓清試驗；18.5～23.8gF1代小鼠40隻，隨機分為4組，每組10隻，作為III組，進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗；17.0～20.4gBALB/C小鼠40隻，隨機分為4組，每組10隻，作為IV組，進行小鼠抗體生成細胞及半數溶血值(HC50)試驗；17.0～20.9gBALB/C小鼠40隻，隨機分為4組，每組10隻，作為V組，進行小鼠ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化、NK細胞活性試驗。
1.3劑量每人(按60kg體重計)每日推薦攝入量為1600mg，相當於26.7mg/d/kg.bw。分別按人體推薦攝入量5倍、10倍、30倍設計三個劑量組即133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw，另設0mg/kg.bw組以無菌水代替受試物。受試物配製濃度低、中、高劑量分別為13.3mg/mL、26.7mg/mL、80mg/mL，經口每日一次給予小鼠相應濃度的受試物，小鼠灌胃量為10mL/kg.bw，連續灌胃30d後測各項增強免疫力功能指標。
1.4飼養條件小鼠在溫度為18～22℃、相對溼度為40％～70％的屏障系統中飼養。實驗動物使用許可證號SYXK(蘇)2002-0014。小鼠輻照滅菌飼料由江蘇省協同醫藥生物工程有限公司提供。
1.5主要試劑DNFB、SRBC、豚鼠血清、印度墨汁、RPMI1640、ConA、MTT、異丙醇、SA緩衝液、都氏試劑、YAC-1細胞、LDH基質液。
1.6主要儀器打孔器、T-1000型電子天平、JA2003型電子天平、722型分光光度計、超淨工作檯、酶標儀、二氧化碳培養箱。
1.7試驗方法按《保健食品檢驗與評價技術規範(2003年版)》之增強免疫力功能檢驗方法進行。
1.7.1ConA誘導小鼠脾淋巴細胞轉化試驗(MTT法) 各劑量組動物連續灌胃1個月，頸椎脫臼處死動物，無菌取脾，置於盛有適量無菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾臟，製成單個細胞懸液，經200目篩網過濾，用Hank’s液洗2次，每次離心10min(1000r/min)，然後將細胞懸浮於1mL RPMI1640完全培養液中，臺酚藍染色計數活細胞數(均在95％以上)，用RPMI1640完全培養液將細胞濃度調整為3×106個/mL。將細胞懸液分兩孔加入24孔培養板中，每孔1mL，一孔加75μL ConA液，另一孔作為對照，置5％CO2、37℃孵箱中培養72h。培養結束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培養液，同時加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，繼續培養4h。培養結束後，每孔加入1mL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結晶完全溶解。將溶解液移入96孔培養板中，波長570nm，酶標儀測定光密度值。
1.7.2二硝基氟苯(DNFB)誘導小鼠遲髮型變態反應(DTH)(耳腫脹法) 各劑量組動物連續灌胃1個月，每鼠用剃毛機將腹部毛剃去，範圍約3cm×3cm，用濃度為10mg/mL DNFB丙酮麻油溶液(丙酮∶麻油＝1∶1)50μL均勻塗抹致敏。5日後用濃度為10mg/mL DNFB丙酮麻油溶液(丙酮∶麻油＝1∶1)10μL均勻塗抹於小鼠右耳(兩面)進行攻擊，攻擊後24h頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑8mm耳片，稱重。同時取小鼠脾臟、胸腺並稱重，計算髒/體比值。
1.7.3血清溶血素測定 各劑量組動物連續灌胃1個月，製備2％(v/v)的綿羊紅細胞(SRBC)懸液，每隻鼠腹腔注射0.2mL進行免疫，4d後摘除眼球取血於離心管內，放置1h，2000r/min離心10min，分離並收集血清。血清200倍稀釋後，按檢驗方法測定樣品管及SRBC半數溶血時的光密度值。溶血素的量以半數溶血值(HC50)表示。
1.7.4抗體生成細胞檢測(Jerne改良玻片法) 各劑量組動物連續灌胃1個月，每隻鼠腹腔注射2％(v/v)的SRBC懸液0.2mL進行免疫，4d後小鼠頸椎脫臼處死，取出脾臟，放在盛有適量無菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾臟，製成細胞懸液，經200目篩網過濾，離心(1000r/min)10min，用Hank’s液洗2遍，最後將細胞懸浮於5mLRPMI1640培養液中，計數細胞數，用RPMI1640完全培養液將細胞濃度調整為5×106個/mL。將表層培養基加熱溶解後，放45℃水浴保溫，與等量pH7.2～7.4兩倍濃度的Hank’s液混合，分裝小試管，每管0.5mL，再向管內加10％SRBC(v/v，用SA緩衝液配製)50μL，20μL脾細胞懸液(5×106個/mL)，迅速混勻，傾倒於已刷瓊脂糖薄層的玻片上，待瓊脂凝固後，將玻片水平扣放在片架上，放入CO2培養箱中孵育1.5h，然後將製備好的補體1∶8稀釋後加入到玻片架凹槽內，繼續孵育1.5h後，計數溶血空斑數。
1.7.5小鼠碳廓清試驗 各劑量組動物連續灌胃1個月，每鼠尾靜脈注入4倍稀釋的印度墨汁(0.1mL/10g.bw)，待墨汁注入，立即計時。注入墨汁後2min及10min分別從眼內眥靜脈叢取血20μL，並將其加到2mL0.1％Na2CO3溶液中，用722分光光度計在600nm波長處測光密度值。
1.7.6小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗(半體內法) 各劑量組動物連續灌胃1個月，製備20％(v/v)的雞紅細胞懸液，每隻鼠腹腔注射1mL，間隔30min，頸椎脫臼處死小鼠，將其仰位固定於鼠板上，正中剪開腹壁皮膚，經腹腔注入生理鹽水2mL，轉動鼠板1min，然後吸出腹腔洗液1mL，平均分滴於2片載玻片上，放入墊有溼紗布的搪瓷盒內，移置37℃溫箱孵育30min，然後，於生理鹽水中漂洗，晾乾，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸緩衝液染色3min，再用蒸餾水漂洗晾乾，光鏡下觀察。
1.7.7 NK細胞活性測定(乳酸脫氫酶測定法) 各劑量組動物連續灌胃1個月，頸椎脫臼處死小鼠，無菌取脾，置於盛有適量無菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾臟，製成單細胞懸液，經200目篩網過濾，用Hank’s液洗2次，每次離心10min(1000r/min)，棄上清將細胞漿彈起，加入0.5mL滅菌水20秒，裂解紅細胞後再加入0.5mL2倍Hank’s液及8mLHank’s液，離心10min(1000r/min)，用1mL含10％小牛血清RPMI1640完全培養液重懸，用1％冰乙酸稀釋後計數，臺酚藍染色計數活細胞數(均在95％以上)，用RPMI1640完全培養液調整細胞濃度為2×107個/mL。
試驗前24h將靶細胞(YAC-1細胞)傳代培養，應用前以Hank’s液洗3次，用RPMI1640完全培養液調整細胞濃度為4×105個/mL。取YAC-1細胞和脾細胞各100μL(效靶比50∶1)加入U型96孔培養板中，YAC-1細胞自然釋放孔加YAC-1細胞和培養液各100μL，YAC-1細胞最大釋放孔加YAC-1細胞和1％NP40各100μL，上述各項均設三個平行孔，於37℃、5％CO2培養箱中培養4h，然後將96孔培養板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清液100μL置平底96孔培養板中，同時加入LDH基質液100μL，反應10min，每孔加入1mol/L的HCl 30μL，在酶標儀490nm處測定光密度值。
1.8數據分析用SPSS10.0軟體對各實驗原始數據進行方差齊性檢驗，滿足方差齊要求的數據資料，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理；對非正態分布或方差不齊的數據資料進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求後，用轉換所得的數據進行統計處理。
2結果 2.1對小鼠體重的影響 由表1可見，小鼠的初始體重在133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組與0mg/kg.bw組相比較，差異均無顯著性(P＞0.05)。表明小鼠的初始體重在各組間較為均衡。
經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物1個月，各劑量組體重增長值進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表2、表3結果可見133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組小鼠體重增長值與0mg/kg.bw組相比較，差異均無顯著性(P＞0.05)。即本發明中藥組合物對小鼠的體重增長無影響。
表1各組小鼠的初始體重
續表1 表2各組小鼠的中期體重
表3本發明中藥組合物對小鼠體重的影響
續表3 續表3 續表3 續表3 2.2本發明中藥組合物對小鼠胸腺、脾臟器官的影響 經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物1個月，所測定的胸腺/體比、脾/體比值進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性的要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表4結果可見，133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組與0mg/kg.bw組相比較，差異均無顯著性(P＞0.05)。
表4本發明中藥組合物對小鼠胸腺、脾臟器官的影響
2.3本發明中藥組合物對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化的影響 經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物1個月，將加ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表5結果可見，800mg/kg.bw組小鼠加ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值顯著高於0mg/kg.bw組(P＜0.01)。
表5本發明中藥組合物對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化的影響
2.4本發明中藥組合物對DNFB誘導小鼠DTH(耳腫脹法)的影響 經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物1個月，所測定值進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表6結果可見，133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組小鼠耳殼增重與0mg/kg.bw組相比較，差異均無顯著性(P＞0.05)。
表6本發明中藥組合物對DNFB誘導小鼠DTH的影響
2.5本發明中藥組合物對小鼠血清半數溶血值(HC50)的影響 經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物1個月，所測定值進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表7結果可見，133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組與0mg/kg.bw組相比較，差異均無顯著性(P＞0.05)。
表7本發明中藥組合物對小鼠HC50的影響
2.6本發明中藥組合物對小鼠抗體生成細胞(溶血空斑數)的影響 經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物1個月，所測定值進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表8結果可見，133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組與0mg/kg.bw組相比較，差異均無顯著性(P＞0.05)。
表8本發明中藥組合物對溶血空斑數的影響
2.7對小鼠碳廓清能力的影響 經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物1個月，所測定值進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表9結果可見，267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組小鼠碳廓清能力顯著高於0mg/kg.bw組(P＜0.05或P＜0.0 1)。
表9本發明中藥組合物對小鼠碳廓清能力的影響
2.8本發明中藥組合物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬百分率及吞噬指數的影響 經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物1個月，將所測定的吞噬指數、吞噬百分率經sin-1P1/2(P為吞噬百分率，用小數表示)轉化後進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性的要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表10結果可見，267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬百分率及吞噬指數顯著高於0mg/kg.bw組(P＜0.05或P＜0.01)。
表10對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞吞噬百分率及吞噬指數的影響
2.9本發明中藥組合物對小鼠NK細胞活性的影響 經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物1個月，所測定值經sin-1P1/2(P為NK細胞活性，用小數表示)轉化後進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表11結果可見，267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組小鼠NK細胞活性顯著高於0mg/kg.bw組(P＜0.01)。
表11本發明中藥組合物對小鼠NK細胞活性的影響
3.結論 本發明中藥組合物以133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw連續給樣1個月，結果顯示 (1)細胞免疫功能800mg/kg.bw組ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化顯著高於0mg/kg.bw組。
(2)單核-巨噬細胞免疫功能267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組小鼠碳廓清能力顯著高於0mg/kg.bw組；267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬率及吞噬指數顯著高於0mg/kg.bw組。
(3)NK細胞活性267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組小鼠NK細胞活性顯著高於0mg/kg.bw組。
可見，本發明中藥組合物具有增強免疫力功能。
二、本發明中藥組合物對輻射危害的輔助保護功能實驗 1.材料與方法 1.1受試樣品實施例2的本發明中藥組合物，黑色濃縮丸，密封置陰涼乾燥處保存，供實驗用。
1.2試驗動物選用上海西普爾-必凱實驗動物有限公司繁殖的ICR健康雌性小鼠180隻，實驗動物生產許可證號為SCXK(滬)2003-0002。其中18.0～23.1g小鼠60隻，按體重隨機分為4組，每組15隻，作為輻射I組，進行小鼠骨髓細胞DNA含量測定；18.1～23.3g小鼠60隻，按體重隨機分為4組，每組15隻，作為輻射II組，進行小鼠血清半數溶血值(HC50)測定；18.2～23.7g小鼠60隻，按體重隨機分為4組，每組15隻，作為輻射III組，進行小鼠外周血白細胞計數。
1.3劑量每人(按60kg體重計)每日推薦攝入量為1600mg，相當於26.7mg/d/kg.bw。分別按人體推薦攝入量5倍、10倍、30倍設計三個劑量組即133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw，另設0mg/kg.bw輻射模型對照組以無菌水代替受試物。樣品配製濃度高、中、低劑量分別為80mg/mL、26.7mg/mL、13.3mg/mL，小鼠灌胃量為10mL/kg.bw，經口每日一次給予小鼠相應劑量的受試物。
1.4飼養條件小鼠在溫度為18～22℃、相對溼度為40％～70％的屏障系統中飼養。實驗動物使用許可證號SYXK(蘇)2002-0014。小鼠輻照滅菌顆粒飼料由江蘇省協同醫藥生物工程有限公司提供。
1.5主要儀器Celly HY-318型血細胞分析儀、T-1000型電子天平、紫外分光光度計、722分光光度計。
1.6主要試劑Hank’s液、SRBC、豚鼠血清。
1.7試驗方法按《保健食品檢驗與評價技術規範(2003年版)》之對輻射危害有輔助保護功能檢驗方法進行。
1.7.1小鼠外周血白細胞計數 經口連續給予小鼠相應劑量的本發明中藥組合物19d，劑量組與輻射模型對照組均以同一劑量60Co-γ射線全身照射一次，照射劑量為4Gy，照射後繼續給予小鼠相應劑量受試物。分別於照射前、照射後第3d、照射後第14d三次取小鼠眼眶血進行白細胞計數。
1.7.2小鼠骨髓細胞DNA含量 經口連續給予小鼠相應劑量的本發明中藥組合物19d，劑量組與輻射模型對照組均以同一劑量60Co-γ射線全身照射一次，照射劑量為4Gy，照射後繼續給予小鼠相應劑量受試物。照射後第3d，用頸椎脫臼法處死小鼠，剝離股骨，取3mL Hank’s液，衝出股骨中的全部骨髓細胞，讓細胞懸液通過4號針頭的注射器，使細胞在懸液中充分分散，用紫外分光光度計於260nm處測光密度值。
1.7.3小鼠半數溶血值(HC50) 經口連續給予小鼠相應劑量的本發明中藥組合物19d，劑量組與輻射模型對照組均以同一劑量60Co-γ射線全身照射一次，照射劑量為2Gy，照射後繼續給予小鼠相應劑量受試物。照射後第9d，製備2％(v/v)的綿羊紅細胞(SRBC)懸液，每隻鼠腹腔注射0.2mL進行免疫，5d後摘除眼球取血於離心管內，放置1h，2000r/min離心10min，分離並收集血清。血清200倍稀釋後，測定樣品管及SRBC半數溶血時的光密度值。溶血素的量以半數溶血值(HC50)表示。
1.8數據分析用SPSS10.0軟體對各實驗原始數據進行方差齊性檢驗，滿足方差齊要求的數據資料用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理；對非正態分布或方差不齊的數據資料進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求後，用轉換所得的數據進行統計處理。
2結果 2.1本發明中藥組合物對小鼠體重的影響 由表1a可見，小鼠的初始體重在133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組與0mg/kg.bw組相比較，差異均無顯著性(P＞0.05)。即小鼠的初始體重在各組間較為均衡。
60Co-γ射線照射前，經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物19d，各劑量組小鼠體重進行方差齊性檢驗，滿足方差齊的要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表2a結果可見133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組與0mg/kg.bw組相比較，差異均無顯著性(P＞0.05)。
表1a各組小鼠的初始體重
表2a各組小鼠的終末體重
2.2本發明中藥組合物對照射後小鼠白細胞總數的影響 60Co-γ射線照射前後，經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物32d，所測定的照射前、照射後第3d、照射後第14d白細胞總數進行正態、方差齊性檢驗，滿足正態分布、方差齊的要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表3a結果可見，133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組與0mg/kg.bw組相比較，差異均無顯著性(＞0.05)。
表3a本發明中藥組合物對小鼠白細胞總數的影響 2.3本發明中藥組合物對照射後小鼠骨髓細胞DNA含量的影響 60Co-γ射線照射前後，經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物22d，所測定的各劑量組小鼠骨髓細胞DNA含量進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表4a結果可見267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組小鼠骨髓細胞DNA含量顯著高於0mg/kg.bw組(P＜0.05或P＜0.01)。
表4a本發明中藥組合物對照射後小鼠骨髓細胞DNA含量的影響
2.4本發明中藥組合物對照射後小鼠半數溶血值HC50的影響 60Co-γ射線照射前後，經口給予小鼠不同劑量的本發明中藥組合物32d，所測定的各劑量組小鼠半數溶血值進行正態、方差齊性檢驗，滿足正態分布要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表5a結果可見800mg/kg.bw組小鼠HC50顯著高於0mg/kg.bw組(P＜0.05)。
表5a本發明中藥組合物對小鼠HC50的影響
3結論 用一次照射60Co-γ射線的方法評價了本發明中藥組合物對輻射危害有輔助保護功能的作用。本發明中藥組合物以133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw劑量連續給予受試物19d，一次照射60Co-γ射線，照射後繼續給予受試物。結果顯示，267mg/kg.bw、800mg/kg.bw組小鼠骨髓細胞DNA含量顯著高於0mg/kg.bw組；800mg/kg.bw組小鼠HC50顯著高於0mg/kg.bw組。因此認為本發明中藥組合物對輻射危害有輔助保護功能。
權利要求
1.一種中藥組合物，其特徵在於，該中藥組合物由下述原料藥製成
西洋參20-100重量份 熟地黃120重量份 山茱萸60重量份
山藥60重量份茯苓45重量份 澤瀉45重量份。
2.根據權利要求1所述的中藥組合物，其特徵在於，所述原料藥中的西洋參為20重量份、45重量份、65重量份、70重量份、80重量份或100重量份。
3.根據權利要求1或2所述的中藥組合物，其特徵在於，其特徵在於所述組合物的形式為口服劑型。
4.根據權利要求3所述的中藥組合物，其特徵在於，所述中藥組合物的形式為濃縮丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液。
5.一種製備權利要求1至4任意一種中藥組合物的方法，其特徵在於所述中藥組合物的製備包括如下步驟
(1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，然後60～90℃烘乾粉碎成過100目篩的細粉，粉碎在10萬級潔淨區進行；
(2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製；
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片；
(4)將步驟(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓加水6～12倍量煎煮二次，每次1～3小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為135～1.40(20℃)的稠膏，過濾在10萬級潔淨區進行；
(5)將步驟(1)的西洋參和山藥細粉與步驟(4)所得山茱萸、地黃、澤瀉和茯苓的提取濃縮稠膏混合，得到中藥組合物的活性成分；
(6)將該活性成分製成所需劑型。
6.根據權利要求5所述的製備方法，其特徵在於，步驟(6)製備劑型的步驟為
(a)採用常規塑製法制丸，乾燥，打光，製得濃縮丸劑；或者
(b)制粒，然後壓製成片，製成片劑；或者
(c)制粒，然後填充膠囊，製成膠囊劑。
7、一種製備權利要求4所述的中藥組合物的方法，其特徵在於，該方法包括如下步驟
(1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，切片；
(2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製；
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片；
(4)將步驟(1)、(2)、(3)所得的西洋參、山藥、山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓加水6～12倍量煎煮二次，每次1～3小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.15(20℃)的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量達到70％，攪勻，靜置48小時，吸上清液，回收乙醇，濾過，濃縮至適量，加入蒸餾水至1000(w/v)，攪勻，過濾，灌封，最後高壓蒸汽滅菌，製成口服液。
8.一種製備權利要求4所述的中藥組合物的方法，其特徵在於，該方法包括如下步驟
(1)西洋參和山藥的處理篩檢西洋參和山藥，確保原料的清潔衛生，切片；
(2)山茱萸的處理篩檢山茱萸，確保原料的清潔衛生，然後蒸製；
(3)熟地黃、澤瀉和茯苓的處理篩檢熟地黃、澤瀉和茯苓，確保原料的清潔衛生，切厚片；
(4)將步驟(1)、(2)、(3)所得的西洋參、山藥、山茱萸、熟地黃、澤瀉和茯苓合併，加水6～12倍量，煎煮二次，每次1～3小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.30(20℃)的清膏，加入適量輔料糊精及蔗糖，制粒，包裝，即得顆粒劑。
9.權利要求1至4任意一種中藥組合物在製備增強免疫力藥物中的應用。
10.權利要求1至4任意一種中藥組合物在製備保護輻射危害作用的藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種中藥組合物及其製備方法與應用，該中藥組合物由西洋參、熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉的原料藥製備得到，所述組合物具有增強免疫力的作用，並對輻射危害有輔助保護功能。
文檔編號A61K9/08GK1981845SQ20051012960
公開日2007年6月20日 申請日期2005年12月15日 優先權日2005年12月15日
發明者孫耀志, 李長春, 高松, 郭水柱 申請人:河南省宛西製藥股份有限公司