具有益生假長雙歧桿菌的寵物食品組合物的製作方法

2023-06-26 04:01:41 2

本發明涉及包含益生菌的寵物食品組合物。相關申請本申請要求2013年12月20日提交的美國專利申請號14/136,528的優先權，其全部內容通過引用併入本文。發明背景研究已開始著重於一些有價值的細菌菌株及其作為益生劑的潛在用途。益生菌被認為是存活或死亡的細菌的製劑、其組分如蛋白質或碳水化合物、或細菌發酵物的純化部分，其通過在GI道中保留和促進天然微生物群落，並加強對異常免疫反應的正常控制來促進哺乳動物的健康。一些人認為益生菌在從待治療的個體的物種或與其緊密相關的物種衍生時更有效。因此，需要不同於衍生自人類的益生菌株的待用於伴侶動物的衍生自伴侶動物的益生菌株。有效使用益生菌的持久的困難之一在於提供有效劑量。並且這通常涉及直到攝取時保持足夠的細菌存活。一旦與產品例如酸奶混合，細菌的數量在製造時間和銷售時間之間會下降到在其最終被攝取時其數量小到無法提供有益效果的這樣的點。涉及益生菌的有效性的另一問題可涉及引入細菌的產品的製造。最常見的製造條件不利於細菌的應用，例如過熱、過冷或過壓，所有這些條件可有害地減少細菌群落。另一個因素是細菌與施加它們的產品的相容性。儘管細菌可以提供有益效果，但是在與產品結合時，可能會有對細菌的產品有害的組分。或者，組分加入產品的方式可能對產品有害，使得產品的個別組分如果以某些方式或順序加入時僅對細菌有害。上述所有情況在面對寵物食物產品時尤其如此，所有寵物食物產品傳統上是以阻止細菌生長的方式製備和配製。一個實例是使用塑化劑，例如甘油，其通常用於寵物食品中的零食(treat)或仿微溼肉塊，以增強風味和/或質地，和/或改變最終產品的水活度。因此，將細菌引入寵物食物產品已經是持久的挑戰。不僅要嘗試保持有益細菌以益生菌形式存活，還要防止有害細菌的生長。所需要的是能夠遞送有效量的益生菌以提供益處的寵物食品。技術實現要素：提供了一種塗覆的磨成粗粒的食物(kibble)，其包括：磨成粗粒的食物；所述磨成粗粒的食物上的包含脂肪的塗層；所述磨成粗粒的食物上的包含益生菌的塗層；其中所述磨成粗粒的食物包含內部甘油。提供了一種用於製備塗覆的磨成粗粒的食物的方法，包括擠出具有內部甘油的磨成粗粒的食物；以及用假長雙歧桿菌(Bifidobacteriumpseudolongum)塗覆所述磨成粗粒的食物。附圖說明圖1是示例性塗覆的食物產品的剖視示意圖。圖2是示出在甘油和無甘油體系的存在下在23℃下AHC-7益生菌的穩定性的圖。圖3是示出在甘油和無甘油體系的存在下在40℃下AHC-7益生菌的穩定性的圖。圖4是示出在存在和缺少外部塗覆的甘油時AHC-7益生菌的穩定性的圖。圖5是示出在存在和缺少內部甘油時AHC-7細菌的穩定性的圖。圖6是示出在存在兩個不同水平的內部甘油和缺少內部甘油時磨成粗粒的食物中AHC-7的穩定性的圖。發明詳述本發明包括一種食物產品；例如，一種磨成粗粒的食物，其包含甘油和塗覆在所述磨成粗粒的食物外部上的益生菌如假長雙歧桿菌(Bifidobacteriumpseudolongum)(AHC-7)。已發現，如果甘油與AHC-7一起塗覆在磨成粗粒的食物的外部上使得AHC-7與甘油接觸，則會危害AHC-7的穩定性。然而，如果甘油加入到磨成粗粒的食物中而AHC-7施加到磨成粗粒的食物表面，則AHC-7是穩定的。如本文所用，「伴侶動物」意思是家養動物，例如家養的犬、貓、兔、白鼬、馬、牛等。如本文所用，術語「其突變體」包括與參考菌株的16s-23s基因間隔區多核苷酸序列(16s-23sintergenicspacerpolynulceotide)具有至少93％同源性、至少96％同源性、或至少98％同源性的衍生的細菌菌株，但是在細菌基因組中的其它DNA序列中另外包含DNA突變。如本文所用，術語「DNA突變」包括天然的或誘導的突變，包含至少單個鹼基改變，所述鹼基改變包括缺失、插入、顛換和對於本領域技術人員已知的其它DNA修飾，包括導入到親本核苷酸或胺基酸序列通過與親本序列保持至少50％同源性的遺傳修飾。包含一個或多個DNA突變的序列可以與親本序列具有至少60％、至少75％或至少85％的同源性。如本文所用，序列「同源性」可以使用本領域技術人員已知的標準技術來確定。例如可以使用在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/上公開的在線同源性算法「BLAST」程序來確定同源性。序列SEQ.IDNO.1：來自假長雙歧桿菌AHC-7(NCIMB41199)的16s-23s基因間隔區核苷酸序列。SEQ.IDNO.2：用於16s-23sDNA序列分析的引物序列。細菌保藏號下表示出了可用於本發明的假長雙歧桿菌菌株。細菌菌株保藏在英國阿伯丁國家工業食品與海洋細菌保藏中心(NationalCollectionsofIndustrialFoodandMarineBacteria，NCIMB)。保藏單位地址：聖馬恰爾大道23號，阿伯丁，郵編AB243RY，蘇格蘭(23StMacharDrive,Aberdeen,AB243RY,Scotland)。菌株保藏號保藏日期16s-23s序列假長雙歧桿菌AHC-7NCIMB411992003年9月4日SEQ.IDNO.1益生菌是對宿主產生有益影響的存活或死亡的微生物、經處理的微生物的組合物，其組分如蛋白質或碳水化合物，或者細菌發酵物的純化部分。益生菌的一般使用是以活細胞的形式。然而，其可以擴展到非存活細胞，如含有由益生菌表達的有益因子的殺滅的培養物或組合物。這可以包括熱殺滅的微生物或通過暴露於變化的pH或經受壓力而殺滅的微生物。對於本發明的目的而言，「益生菌」還意在包括在發酵期間由用於本發明的微生物產生的代謝物，如果它們沒有被單獨指出。這些代謝物可以被釋放到發酵培養基中，或者它們可以儲存在微生物內。如本文所用，「益生菌」也包括細菌、細菌勻漿、細菌蛋白質、細菌提取物、細菌發酵物上清液及它們的混合物，當以治療劑量給出時，其對宿主動物執行有益功能。已發現，在供給活細菌細胞後，通過從哺乳動物的切除並洗滌的GI道直接分離可獲得的假長雙歧桿菌的菌株粘附於GI道，並且當以存活、非存活或分次形式餵給動物時也具有顯著的免疫調節性。在未被理論束縛的情況下，據認為，通過從切除並洗滌的GI道分離可獲得的假長雙歧桿菌與腸黏膜組織密切相關。在未被進一步理論束縛的情況下，這被認為導致產生本發明的益生假長雙歧桿菌，其產生選擇性的宿主反應，該宿主反應帶來假長雙歧桿菌的益生作用。已發現，通過從切除並洗滌的GI道分離可獲得的益生菌可以通過與黏膜上皮和宿主免疫細胞的直接相互作用來調節宿主的免疫系統。這種免疫調節，結合與益生菌相關的傳統作用機制，即通過營養物的吸著(occlusion)和競爭阻止病原體粘附於腸，導致產生本發明的作為益生有機體高度有效的假長雙歧桿菌。通過從切除並洗滌的犬GI道分離可獲得的本發明的假長雙歧桿菌具有對抗許多致病菌菌株/種類的體外抗微生物活性，如通過本領域技術人員已知的抑菌圈或細菌生長抑制試驗所測定的。在不被理論束縛的情況下，據認為，體外抗微生物活性是動物(如犬和貓)體內的潛在益生活性的指標。本發明的細菌可以具有對抗鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)、李斯特單核細胞增生菌(Listeriamonocytogenes)、無害李斯特菌(Listeriainnocua)或大腸桿菌(Eschericiacoli)或它們的組合的體外抗微生物活性。在不被理論束縛的情況下，據認為，本發明的假長雙歧桿菌細菌的抗微生物活性可以是本文的假長雙歧桿菌細菌帶來的許多不同作用的結果。在本領域中先前已建議，分離自糞便樣本的幾個細菌菌株在口服食用後通過抑制致病有機體經吸收而附著至腸黏膜，表現出其對GI道的益生作用。這需要口服食用「活的」或存活的細菌細胞，從而使菌落在腸中形成。然而，據認為，本發明中使用的假長雙歧桿菌，在若以存活形式提供而由於吸收發揮一些益生作用時，由於抑制致病微生物的生長或殺滅致病微生物和/或改變宿主動物的免疫能力的一種或多種物質的體外發酵期間的生產，可以以存活或非存活形式實現很大程度的益生作用。這種形式的益生活性是令人期望的，因為本發明的細菌可以作為存活或非存活培養物或者純化的發酵產物給出，並且仍然對宿主動物實現有益的治療效果。在某些實施方案中，本發明的假長雙歧桿菌細菌能夠在通過GI道運輸後維持存活能力。這是令人期望的，以便於細菌的活培養物可被口服攝取，以及在通過食道和胃運輸後在腸道和腸中發生定植(colonization)。通過本發明的細菌在腸道和腸中的定植期望用於對宿主實現長期益生有益性。非存活細胞或其純化的分離物的口服給藥引起暫時的有益性，但是由於細菌是非存活的，因此它們不能生長，並在原位持續地實現益生作用。結果，這可能需要對宿主有規律地給藥，從而維持健康益處。相反，能夠以存活形式倖免於胃運輸並隨後通過附著於腸黏膜並在其上增殖而定植的活細胞能夠持續地在原位實現益生作用。因此，在某些實施方案中，本發明的細菌在pH為2.5的介質中懸浮1小時後維持存活能力。如本文所用，「維持存活能力」意思是，使用本領域技術人員已知的平板計數法，最初懸浮於測試介質中的至少25％的細菌是存活的。在某些實施方案中，「維持存活能力」意思是至少50％的最初懸浮的細菌是存活的。本發明的細菌期望用於在暴露於低pH後維持存活能力，因為這模擬於在動物口服食用後暴露於胃中的胃液和體內的上腸。此外，在某些實施方案中，當存在至少0.5％豬膽汁鹽時，本發明的細菌具有至少33％的生長。在進一步的實施方案中，當存在至少1％豬膽汁鹽時，本發明的細菌具有至少33％的生長。在不被理論束縛的情況下，據認為，能夠在至少0.5％豬膽汁的存在下生長的本發明的細菌能夠在腸中存在的條件下存活。這被認為是將豬膽汁加入模擬腸條件的培養基的結果。再者，本發明中使用的假長雙歧桿菌細菌可以對體外腸上皮細胞具有明顯的粘附性。如本文所用，「明顯的粘附性」意思是與體外上皮細胞共同培養的細菌總數的至少4％粘附於上皮細胞；或者在某些實施方案中，至少6％的共同培養的細菌細胞粘附於體外上皮細胞。在不被理論束縛的情況下，據認為，體外腸上皮細胞粘附性是細菌在體內定居於動物GI道的能力的指標。本領域技術人員已知16s-23s基因間多核苷酸序列是作為在細菌基因組中可用於識別細菌的不同種類和菌株的DNA的序列。在某些實施方案中，假長雙歧桿菌菌株具有與根據SEQ.IDNO.1的多核苷酸序列具有至少93％、至少96％或至少99％同源性的16s-23s基因間多核苷酸序列。在某些實施方案中，根據本發明的細菌菌株具有根據SEQ.IDNO.1的16s-23s多核苷酸序列。在另外的實施方案中，根據本發明的細菌菌株是假長雙歧桿菌菌株NCIMB41199(AHC-7)或其突變體。通過從切除且洗滌的犬胃腸道分離可獲得的假長雙歧桿菌菌屬的菌株可以用於在動物諸如伴侶動物或人類中口服食用後實現益生有益性。這種益生有益性通常維持並改善動物的整體健康。有益於在治療上緩解其症狀或通過預防療法進行疾病預防的動物健康和生理的非限制性元素包括：炎性疾病、免疫缺陷、炎症性腸疾病、腸易激綜合症、癌症(特別是胃腸系統和免疫系統的癌症)、腹瀉病、抗生素相關的腹瀉、闌尾炎、自身免疫疾病、多發性硬化、阿爾茨海默氏病、澱粉樣變性、類風溼性關節炎、關節炎、關節鬆動(jointmobility)、糖尿病、胰島素耐受性、細菌感染、病毒感染、真菌感染、牙周病、泌尿生殖系統疾病、手術相關的創傷、手術引起的轉移性疾病、敗血病、體重減輕、體重增加、過量脂肪組織積累、厭食症、發燒控制、惡病質、傷口癒合、潰瘍、腸道屏障感染、過敏、哮喘、呼吸紊亂、循環系統紊亂、冠心病、貧血、血液凝固系統紊亂、腎臟疾病、中樞神經系統疾病、肝臟疾病、局部缺血、營養失調、骨質疏鬆症、內分泌失調和表皮紊亂。優選的是治療胃腸道，包括治療或預防腹瀉、免疫系統調節，優選地治療或預防自身免疫疾病和炎症；維持或改善皮膚和/或包被系統(coatsystem)的健康，優選地治療或預防皮膚的特應性疾病；改善或減少老化的影響，包括精神意識和活動水平；以及預防感染期間和之後的體重減輕。上述公開的紊亂的治療可以通過使用本領域技術人員已知的技術來測定。例如，包括自身免疫疾病和炎症的炎性紊亂可以使用體內免疫功能測試如淋巴細胞母細胞化(lymphocyteblastogenesis)、自然殺傷細胞活性、抗體對疫苗的反應、遲髮型超敏反應和它們的混合來檢測和監控。在本文中簡要地描述了這類方法，但其對於本領域人員是已知的。本發明的假長雙歧桿菌細菌的使用方法通常涉及由動物口服食用。口服食用可以作為正常飲食攝入的一部分或者作為正常飲食攝入的補充而發生。口服食用通常每月至少一次進行，不然，每周至少一次或每日至少一次。本發明中使用的假長雙歧桿菌細菌以治療有效量給予伴侶動物，以維持或改善動物的健康。如本文所用，涉及細菌的術語「治療有效量」意思是當以本發明的方式使用時，細菌的量足以給需要治療的宿主動物提供期望的效果或益處，該量還足夠低以避免副作用如毒性、刺激或過敏反應，並與合理的益處/風險比相稱。具體的「治療有效量」將隨著諸如下列的因素而改變：所治療的具體病症、使用者的身體狀況、治療的持續時間、同時療法的性質(如果有的話)、待使用的具體給藥形式、採用的載體、劑型的溶解性和具體的給藥方案。細菌可以以每日約104菌落形成單位(CFU)至約1014CFU或每日約106CFU至約1012CFU的劑量給予伴侶動物。在某些實施方案中，磨成粗粒的食物可以含有約104CFU/g至約1012CFU/g的假長雙歧桿菌的至少0.001％。假長雙歧桿菌細菌可以以存活形式或者作為殺滅的細胞或蒸餾物、分離物或本發明細菌的發酵產物的其它部分或它們的任意混合物給予動物。假長雙歧桿菌細菌或者其純化或分離的部分用於製備用來維持或改善動物的健康的組合物。如上所示，組合物可以是正常飲食攝入的部分，或者是補充物。當組合物包括正常飲食攝入的一部分時，組合物可以是寵物食品諸如餅乾或磨成粗粒的食物的形式。圖1是示例性塗覆的磨成粗粒的食物18的剖視圖，磨成粗粒的食物10塗覆有一個或多個不同塗層12、14和16。如圖中實線和虛線所示，任意一個塗層或所有塗層可以完全或部分地覆蓋磨成粗粒的食物的表面。塗層12、14和16的選擇和組合可以用於改善塗覆的磨成粗粒的食物18的味道、質地或外觀，磨成粗粒的食物18是磨成粗粒的食物10與塗層12、14和16的一個或多個的組合。為避免疑義，塗層12、14和16的任意一個或任意組合可以存在於本發明的不同實施方案中。塗層12、14和16的至少一個將含有AHC-7。在某些實施方案中，AHC-7可以通過由調味系統組成的幹介質或液體介質與其它幹成分或液體成分以不同比例組合施加在磨成粗粒的食物上。如圖1所示，在一些實施方案中，塗層12、14和16可以是不同的。即，在塗層施加後可以有無關緊要的塗層混合，存在不同塗層的不同的層。通過無關緊要的混合，認為在不同塗層之間的界面處將會有一些相互作用，但並沒有塗層的混雜(commingling)，使得隨著時間的推移，出現僅一個塗層，而不是兩個或多個不同的塗層。可以使用額外的塗層，即三個以上的塗層。在圖1中，磨成粗粒的食物10具有圓形；然而，應理解的是，食物在形狀上是不受限制的，並且考慮到食物塊的體積和表面面積的功能方面以及美觀考慮，可以具有產品所需的任意形狀或尺寸。磨成粗粒的食物10可以是包括兩個或多個不同形狀、尺寸和/或組成的磨成粗粒的食物的食物產品的一個組分。磨成粗粒的食物10可以是乾燥的食物，其水分含量為磨成粗粒的食物重量的小於約20％、小於約15％、小於約12％、小於約9％、或小於約5％的水。低水分含量可以有助於磨成粗粒的食物10的儲存穩定性，特別是隨著時間的推移，磨成粗粒的食物10對微生物生長的抗性。磨成粗粒的食物10包含塑化劑，例如甘油。甘油具有低水活度(Aw)，小於或等於約0.1。甘油可以內部地加入到磨成粗粒的食物中(內部甘油)，或外部地作為包衣劑(enrobingagent)加入(外部甘油)。低至1％的外部加入的甘油水平對細菌具有有害作用。內部加入到磨成粗粒的食物的甘油水平對細菌顯示很小的有害作用，或者不顯示有害作用。當甘油被內部地加入到磨成粗粒的食物時，甘油通過預調配缸(pre-conditionercylinder)注入擠出機中，或者與口糧(ration)混合。對於甘油的外部施加，通過任意的噴塗和/或混合方法將甘油塗覆在磨成粗粒的食物表面。維持甘油的溫度，使得其具有足夠流動性用於泵送和噴塗。在某些實施方式中，磨成粗粒的食物10內部包含包括任何塗層在內的磨成粗粒的食物重量的約0.5％至約35％、約1％至約20％，或約5％至約15％的量的甘油。將甘油以某種水平包含在磨成粗粒的食物10內可以使磨成粗粒的食物比無甘油的水分含量相當的磨成粗粒的食物更柔軟，並更容易咀嚼。例如，根據最終水分含量，在某些實施方案中，最終水分含量可以是約0.1aw至約0.5aw，在磨成粗粒的食物內部具有甘油的磨成粗粒的食物的柔軟度可以比無內部甘油的磨成粗粒的食物的柔軟度高出(所測得的壓縮力低出)2或甚至3的係數。除了作為塑化劑的功能外，甘油可以為磨成粗粒的食物提供甜味。對於用來提供鮮味(savorytaste)的磨成粗粒的食物，如果比例沒有適當地平衡，這種甜味可能是不期望的。包含酸諸如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、山梨酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、磷酸、抗壞血酸、硫酸、鹽酸或它們的組合可以減少與塑化劑相關的味道的改變。酸可以以磨成粗粒的食物的大於0％且小於約2％或小於約1.5％的量存在。在一些實施方案中，將酸併入到甘油中，並如上所述將甘油加入磨成粗粒的食物中，即加入到磨成粗粒的食物內。在一些實施方案中，將酸與甘油分離地(內部地或外部地)加入磨成粗粒的食物。在一些實施方案中，在不加入抵消量的酸或其它酸味成分的情況下(例如，食物存在有甜味，而不是鮮味)，使用甘油。一些狗例如可以優選甜味，或者甘油可與用來具有甜味的食物一同使用。磨成粗粒的食物可以是可被人類或動物攝取並對人類或動物提供營養價值的任何適合的組合物。磨成粗粒的食物可以在按照這裡公開的處理之前進行塗覆，或者不經塗覆。磨成粗粒的食物通常將是蛋白質和澱粉成分的營養平衡的混合物的基礎食物組合物。磨成粗粒的食物可以經烘烤、擠出、壓丸或形成。磨成粗粒的食物的這類形狀及其生產方法對於食品製造領域技術人員是熟知的。擠出和擠壓蒸煮例如描述在食品科學與技術百科全書(EncyclopediaofFoodScienceandTechnology)第2卷的第794-800頁(Y.H.Hui編輯，JohnWiley&Sons股份有限公司1992)。磨成粗粒的食物不限於特定組合物。磨成粗粒的食物可以是營養全面且均衡的動物飲食，其提供所有必需的營養物(除了水之外)以維持生命。營養全面且均衡的磨成粗粒的食物可以滿足共有營養剖面(consensusnutrientprofile)，如用於狗糧或貓糧的美國飼料管理協會(AAFCO)標準。磨成粗粒的食物可以是非營養均衡的零食或補充物，但可以提供一些營養價值(例如卡路裡)。在這樣的情況下，磨成粗粒的食物可以作為零食或補充物而不是主要的飲食使用，或者，磨成粗粒的食物可以與不同顆粒混合，使得磨成粗粒的食物與其它食料的混合是營養全面且均衡的。例如，磨成粗粒的食物可以與營養上不同的磨成粗粒的食物、或者水果或蔬菜塊(如胡蘿蔔塊、豌豆塊、大豆碎塊(soymorsel)、乾果等)、或者肉塊(如乾燥的或儲藏的肉，包括肉乾，或者其它的製備的或儲藏的肉)、或者包含所需營養物的片劑、膠囊或藥丸或它們的組合混合，使得混合物是營養全面且均衡的。磨成粗粒的食物可以是任何適合的形式，如任意形狀的一口大小的或丸狀的。塗層12外部地施加在形成的磨成粗粒的食物上。塗層12是磨成粗粒的食物10外部之上或附近的表面塗層，據認為一些塗層12可以在磨成粗粒的食物10與塗層12之間的界面處遷移到磨成粗粒的食物10內。在某些實施方案中，塗層12可以包括脂肪；並且可以協助確保幹基質的粘附性，幹基質可以是具有或沒有益生菌的風味系統。術語「脂肪」是指任何食用級的脂肪或脂質，包括禽源、動物來源、植物來源、或人造來源的脂肪，包括但不限於粗脂肪或精脂肪。典型的動物來源脂肪包括例如動物脂肪，選擇白色油脂、豬油、乳源脂肪如黃油和通常包含在奶酪中的脂肪。典型的植物來源的脂肪包括椰子油、大豆油和玉米油。典型的禽源脂肪包括例如來自雞、火雞、鴨和鵝的組織的脂肪。在含有甘油的磨成粗粒的食物之上施加脂肪塗層可以降低脂肪塗層吸收到磨成粗粒的食物中。保持脂肪塗層在磨成粗粒的食物的表面上可以以相對較低水平的追加脂肪幫助增強食物的風味和/或口感，因為在食用食物時，在食物和口之間的界面處會有較大比例的脂肪。示例性脂肪包括家禽脂肪如雞脂，和牛脂。脂肪塗層可以以塗覆的磨成粗粒的食物的重量的約1％至約15％、約6％至約8％、或約11％至約13％的量存在。疏水脂肪塗層會幫助將水分保留在食物內；即，在運輸和儲存期間，特別是在乾燥條件下(相對溼度低於約35％)，防止食物失去額外的水分。相比在磨成粗粒的食物中不包含塑化劑的食物，較重的脂肪塗層對在磨成粗粒的食物中包含甘油的食物會是有益的，例如，在磨成粗粒的食物中具有塑化劑的塗覆的磨成粗粒的食物可具有塗覆的磨成粗粒的食物重量的約11％至約13％的脂肪塗層。如果食物產品是營養全面且均衡的寵物食品，可期望的是使食物的全部脂肪含量(包括在磨成粗粒的食物中任何脂肪以及在所有塗層的層中的脂肪)保持在塗覆的磨成粗粒的食物重量的小於約25％或小於約20％，以確保其它營養物以適合的比例存在。脂肪塗層可包含一個或多個結構劑(structurant)。結構劑可以改變在脂肪塗層中固體的濃度和/或結晶順序。結構劑可以改變脂肪塗層的其它物理化學性質，如粘性或密度。特別是，結構劑可以在塗覆的磨成粗粒的食物被加工、運送和使用時防止或減少脂肪塗層弄髒。例如，塗覆的磨成粗粒的食物的顆粒可以彼此相互作用，與製造設備(包括包裝設備)、包裝、食用餐具、食用餐盤，手等相互作用，並且結構劑可以幫助使脂肪塗層保持牢固和有彈力，以便在這些相互作用期間，塗層不會移動或離開食物。高熔點(大於或等於60℃)的脂肪或食用蠟可以用於該目的。在口感或味道方面，脂肪優選於食用蠟。脂肪塗層可以包含脂肪塗層組合物重量的約1％至約10％或約2％至約4％的結構劑。結構劑可以包含膠，如黃原膠或瓜爾豆膠、它們的變體或它們的組合。結構劑可以包含乳化劑。乳化劑可以提供極性組分，其改善脂肪塗層與其它塗層(如果使用親水塗層，則為親水塗層)之間的相互作用。在一些實施方案中，乳化劑通過與含水唾液的相互作用，可有助於脂肪從食物到口中的轉移，以及脂肪在口內的分布。因此，乳化劑可以幫助使脂肪塗層像釉一樣保留在磨成粗粒的食物表面，並且可以在其被食用時改善食物的味道和/或口感。由此，即使脂肪塗層(例如在添加乳化劑前)不是乳化液，乳化劑也可以是期望的。乳化劑可以以脂肪塗層組合物重量的約1％至約10％、或約2％至約5％的量存在。在一些實施方案中，乳化劑可以施加在脂肪塗層之上。當作為單獨塗層或單獨塗覆的層施加時，乳化劑可以以脂肪塗層組合物重量的約0.1％至約5％、或約1％至約3％的量存在。可以使用任何食用乳化劑，例如卵磷脂、聚甘油酯或它們的組合。一些化合物，如高熔融溫度(60℃至80℃)的單甘油酯和/或雙甘油酯，可以對脂肪塗層提供結構益處並提供極性組分。這樣的結構劑也可以根據脂肪體系中結構劑的水平提高脂肪體系(脂肪+結構劑)的總熔點。適合的甘油酯的混合物是市售的來自美國堪薩斯州萊內克薩地區的卡拉安配料(CaravanIngredients)公司的商品名為的商品。適合的甘油酯的混合物是例如Trancendim(註冊商標)180或130。結構劑可以以脂肪塗層組合物重量的約0.1％至約10％存在。結構劑可以共混到脂肪塗層內，使得有包含脂肪和結構劑的組合物的單一塗層。在一些實施方案中，結構劑可以作為包覆型塗層單獨地施加在脂肪塗層上。含有益生菌14的塗層可以施加在塗層12之上，塗層12可以是脂肪塗層。AHC-7塗層描述了將AHC-7添加至磨成粗粒的食物。在某些實施方案中，施加的AHC-7的重量為約103cfu/g的最小水平，或者約106cfu/g至約108cfu/g或約108cfu/g至約1010cfu/g。AHC-7也可以通過像脂肪酸、蛋白質、單甘油酯、多糖(碳水化合物、糖類、水解膠體等)的其它載體施加至磨成粗粒的食物基質。可以施加附加的塗層或塗層16。塗層16可以包含幹的添加劑或液態添加劑。如果脂肪塗層12包含乳化劑，則乳化劑能夠使液態添加劑成層。液態添加劑可以由於乳化劑而與脂肪塗層12保持關聯，但由於液態添加劑(大部分為親水的)和脂肪(大部分為疏水的)的不相容性，而在脂肪塗層12的表面處保留。這尤其但不排他地對液態增味劑(palatant)有用，因為最有效的是將增味劑施加在食物的最外面的塗層上，因此，當食物被食用時，增味劑容易地被口中的味覺感受器獲得。由於施加在脂肪塗層12之上的液態添加劑將吸引在表面而無意於通過脂肪塗層12或與其混合，液態添加劑應在食物的表面處更容易獲得。幹的添加劑，包括幹的增味劑或其它幹的成分可以施加在脂肪塗層12之上或者施加在脂肪塗層12之上所施加的液態添加劑之上。通常，幹的添加劑將可接受地粘附於脂肪潤溼的表面或液體潤溼的表面。一些具體的幹的添加劑將具有這樣的化學性質，其使得更有利地將幹的添加劑直接施加至脂肪塗層12，或在液態添加劑層被施加在脂肪塗層12之上以後，或者甚至作為脂肪塗層12的一部分或以液態添加劑的形式(如在將幹的添加劑施加至食物之前在水中溶解或混合幹的添加劑)施加幹的添加劑。在一些實施方案中，脂肪與液態添加劑的重量比可以是約0.3至約8。其它比例是可行的。塗層16可以包含乳化劑，以降低塗覆的磨成粗粒的食物的表面能，並減輕或防止磨成粗粒的食物粘著在一起，使得磨成粗粒的食物可以自由地分散並容易地作為不同塊食用。當然，有時使磨成粗粒的食物結塊會是期望的，猶如從塗覆的磨成粗粒的食物形成小吃或零食。通常，如果多個塗層施加在脂肪塗層12之上時，期望將增味劑安置在最外面塗層上，所以它們最容易被口中的味覺感受器接觸到。或者，增味劑可以以較高濃度包含在內層中。添加脂肪塗層可以密封水分，並幫助維持隨時間的推移的柔軟度。在一些實施方案中，通過使用該方法，食物的柔軟度增加至少20％、或至少40％。在一些實施方案中，當在18℃至22℃和40％至60％相對溼度下儲存6個月時，食物的柔軟度下降不超過25％。可以使用下述的食物柔軟度測試法測定柔軟度。柔軟性可以有助於使得咀嚼(masticate)較軟食物的過程可以比咀嚼鬆脆食物刺激更多的唾液分泌，這可以幫助將脂肪和增味劑從食物轉移至口中的味覺感受器，並因此提高了食物的適口性。食物柔軟度測試是壓縮應變測試。使用具有1KN測壓元件和板/砧設置(plate/anvilset-up)的校準的英斯特朗(Instron)壓縮試驗機(或等同裝置)，將一塊磨成粗粒的食物儘量平地放置在測試點處(這將根據所測試的磨成粗粒的食物的形狀而變化)。砧是圓柱形平底測試夾具，並且直徑必須大於所測試的磨成粗粒的食物的直徑。設置試驗機將磨成粗粒的食物壓縮至其原始高度的33.33％。對每一類測試的磨成粗粒的食物重複至少25個磨成粗粒的食物塊。清除樣品間的所有碎屑或殘餘物。報告最大裝載(kgf)壓力(最大觀察裝載/磨成粗粒的食物表面積)和楊氏模量(Young'sModulus)(使用英斯特朗布魯荷爾(Instron'sBluehill)軟體中的自動計算或等同方法)。對每組25個樣品報告平均最大壓力和平均楊氏模量。如果使用英斯特朗壓縮試驗機，則使用以下參數：·測試參數ο測試速率＝6.35mm/分鐘ο控制模式＝壓縮擴展(compressiveextension)ο測試值終點1＝33％壓縮應變壓縮測試結構以最大裝載(kgf)報告，其可以對硬質和軟質磨成粗粒的食物進行不同的描述。對於硬質磨成粗粒的食物，結果可以稱為硬度，而對於軟質磨成粗粒的食物，結果可以稱為咀嚼度或柔軟度。楊氏模量用於描述軟質和硬質磨成粗粒的食物的相同的特徵。所公開的塗層可以用於改變磨成粗粒的食物的質地(口感和溼感)。可以通過測量壓碎磨成粗粒的食物所需的力來測定質地。壓碎磨成粗粒的食物所需的力模擬咀嚼。在磨成粗粒的食物中不含有內部添加的甘油且僅覆蓋有含乳化劑的脂肪的磨成粗粒的食物的情況下，磨成粗粒的食物可以是光滑的並具有酥脆質地，並且其柔軟度的值可以為約4千克力(kgf)至約12kgf、約3kgf至約9kgf、或約3.5kgf至約5.5kgf。在某些實施方案中，如先前討論的，具有柔軟質地的磨成粗粒的食物可以含有磨成粗粒的食物重量的約0.5％至約35％、約1％至約20％、或約5％至約15％的量的內部添加的甘油，並且質地可以作為柔軟度或咀嚼度來測定，如在食物柔軟度測試中所描述的。軟質磨成粗粒的食物的「柔軟度」的值可以是約1千克力/平方釐米(kgf/cm2)至約9kgf/cm2、約3kgf/cm2至約8kgf/cm2、或約3kgf/cm2至約7kgf/cm2。硬質磨成粗粒的食物的質地也可以用磨成粗粒的食物的楊氏模量(磨成粗粒的食物的單位面積上的力，kgf/cm2)來表徵。對於硬質磨成粗粒的食物，最大壓力可以是約12kgf/cm2至約35kgf/cm2、或約12kgf/cm2至約20kgf/cm2。軟質磨成粗粒的食物顯示約1kgf/cm2至約15kgf/cm2、約2kgf/cm2至約7kf/cm2、或約2.5kgf/cm2至約5kgf/cm2的楊氏模量。具有不同質地和/或塗層的磨成粗粒的食物可以以任意期望的比例共混，以為寵物提供質地多樣性。如所公開的塗層或系列塗層的一個可能的優點是提高留在磨成粗粒的食物表面上的脂肪的量。表面上的脂肪水平可以為作為塗層沉積的脂肪總水平的約25％以上。例如，如果約10％脂肪添加在磨成粗粒的食物的表面上方，則期望水平的表面脂肪可以為至少約2.5％，或者甚至約5％或更多，其餘的是浸入磨成粗粒的食物的脂肪或其它塗覆層，或者二者。通常，除了包含在這些產品內的營養平衡添加劑如維生素和礦物質或其它添加劑如防腐劑和乳化劑等以外，大部分的磨成粗粒的食物將由可描述為基本為蛋白質或基本為澱粉的成分組成。儘管下列不應視為是限制性的，但蛋白質成分可以通常定義為具有至少約15wt％的蛋白質含量的任何材料；而澱粉材料具有比該含量低得多的蛋白質含量，並且具有含澱粉或含碳水化合物的材料的主要部分。常用於商品化寵物食品的蛋白質材料的實例包括植物蛋白粉，如大豆、棉花籽或花生粕(peanutmeal)，動物蛋白質如酪蛋白、白蛋白、乳清包括乾燥乳清，和肉組織包括鮮肉以及提取脂肪的或乾燥的「粉(meal)」，如魚粉、禽肉粉、肉粉、肉骨粉、酶處理蛋白質水解物等。蛋白質材料的其它類型包括微生物蛋白質如酵母，以及其它類型的蛋白質，包括諸如小麥麵筋或玉米面筋的材料。酵母也可以加入風味；小麥麵筋或玉米面筋也可以用作調質劑(texturizingagent)，並且可以用於提高產品的孔隙率。典型的澱粉材料的實例包括酶澱粉材料，穀物如玉米、玉蜀黍(maize)、小麥、高粱、大麥，和蛋白質相對較低的各種其它穀物。很多其它材料可以加入磨成粗粒的食物中，其不一定落入類別(蛋白質的或澱粉的)中，包括碳水化合物和豆類，如苜蓿或大豆。用於磨成粗粒的食物的典型配方是本領域公知的。除了蛋白質和澱粉材料，本發明的組合物通常可包括維生素、礦物質和其它添加劑，如調味劑、防腐劑、乳化劑和溼潤劑。根據獸醫和營養領域中已知的膳食標準確定營養平衡，包括維生素、礦物質、蛋白質、脂肪和碳水化合物的相對比例。幹的添加劑是指在施加至食物時包含幹的添加劑重量的小於40％的極性溶劑(如水)的任何添加劑。可以幹的形式提供的示例性添加劑包括各種香料，如肉類和奶酪調味劑；肉類固體和幹動物消化物；香草；幹的增味劑；水解的(通過化學或酶)植物蛋白；礦物質；益生元；益生菌；封裝的化合物；營養物；藥物或順勢療法的化合物；著色劑；及它們的組合。幹的添加劑的其它實例包括麵包酵母(Bakeryyeast)或啤酒酵母(Brewer'syeast)，其包含在釀造、圓酵母(Torulayeast)和各種酵母提取物中常用的酵母屬(Saccharomyces)(通常為釀酒酵母(S.cerevisiae))酵母的乾燥粉碎細胞。各種酵母和酵母提取物已知用作增味劑、益生元或益生菌，和其它食用微生物，活微生物提取物或死微生物提取物可以被期望用於相同或其它用途。液態添加劑是指包含液態添加劑組合物重量的至少40％、至少50％、至少60％或至多90％的極性溶劑(如水)的任何添加劑。液態添加劑包括在施加至食物前已經溶解、懸浮或浸沒在極性溶劑的幹的添加劑。可以液態形式提供的示例性增味劑包括動物源消化物；維生素；胺基酸；蛋白質或蛋白水解物，包括植物源的蛋白或蛋白水解物、動物源的蛋白或蛋白水解物和合成蛋白；其它營養物；酵母懸浮液；香料組合物；酸化劑；染料組合物；肉湯(broth)；抗氧化劑；及它們的組合。包含本發明的細菌的磨成粗粒的食物也可以包括益生元(prebiotic)。「益生元」包括這樣的物質或化合物，其通過寵物的腸道菌群發酵，並因此在損害致病菌的同時促進在寵物胃腸道中細菌的生長與發育。這種發酵的結果是在結腸中釋放脂肪酸，特別是短鏈脂肪酸。這具有降低結腸中的pH值的作用。適合的益生元的非限制性實例包括寡糖，如菊粉及其水解產物，通常已知為低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖或澱粉的低聚衍生物。益生元可以以任何適合的形式提供。例如，益生元可以以含有纖維的植物材料的形式提供。適合的植物材料包括蘆筍、朝鮮薊、洋蔥、小麥或菊苣，或這些植物材料的殘渣。或者，益生元纖維可以作為菊粉提取物提供，例如來自菊苣的提取物是適合的。適合的菊粉提取物可以獲自比利時的提爾蒙3300(Tirlemont3300)的歐拉夫提公司(OraftiSA)，商品名為「拉芙緹萊(Raftiline)」。例如，菊粉可以以拉芙緹萊(Raftiline)(g)ST的形式提供，其是精煉白色粉末，包含按重量計約90％至約94％的菊粉，按重量計至多約4％的葡萄糖和果糖，以及按重量計約4％至9％的蔗糖。或者，纖維可以是低聚果糖的形式，諸如獲自比利時的提爾蒙3300(Tirlemont3300)的歐拉夫提公司(OraftiSA)，商品名為「拉芙緹羅斯(Raftilose)」。例如，菊粉可以拉芙緹羅斯(Raftilose)(g)P95的形式提供。另外，低聚果糖可通過水解菊粉、酶促法或使用微生物獲得。對於乾燥磨成粗粒的食物，適合的加工方法是擠出蒸煮(extrusion)，然而也可使用烘焙和其它適合的加工方法。如果使用益生元，益生元可以在處理前與乾燥磨成粗粒的食物的其它成分混合。磨成粗粒的食物可以含有其它活性劑，如長鏈脂肪酸和鋅。適合的長鏈脂肪酸包括α-亞油酸、γ亞麻酸、亞油酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。魚油是二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的合適來源。琉璃苣油、黑加侖種子油和月見草油是γ亞麻酸的合適來源。紅花油、向日葵油、玉米油和大豆油是亞油酸的合適來源。這些油也可被用在上文提及的塗層基底中。鋅可以多種適合的形式提供，例如硫酸鋅或氧化鋅。此外，常用於寵物食品的多種成分是脂肪酸和鋅的來源。已經觀察到作為益生元來源的菊苣與富含亞油酸的油如大豆油的組合提供意料不到的益處，提示了協同效應。實施例實施例1作為塗層，期望AHC-7益生菌與以下物質直接接觸：磨成粗粒的食物原材料和其它塗層，如調味劑、脂肪、增味劑，以及外部施加用於改善質地的任意其它成分，如甘油或乳化劑。為了理解由與其它材料相互作用引起的對AHC-7的影響，以適當比例製備幾種樣品；樣品包含AHC-7益生菌和一個塗層成分，其包含雞脂、幹增味劑(SPF336)或甘油。樣品1是AHC-7原料(AHC-7原料包含AHC-7(益生菌)和麥芽糖糊精(載體)，其量為足以獲得約1011cfu/g的目標AHC-7濃度的量)和增味劑336(比例約為1:295)。樣品2是AHC-7原料與含有抗氧化劑(1:1086)的雞脂的混合物。樣品3是AHC-7原料與甘油的混合物(比例約為1:2090)。為了避免由於混合引起的誤差並提高測量準確性，對每個樣品(1、2和3)取樣四次，製備4個單獨樣品組(對於樣品1四個，對於樣品2四個，以及對於樣品3四個)，各包括裝載10g樣品的50ml塑料管。於室溫下，在渦旋型混合器上將塑料管中的樣品(1、2和3)完全混合，隨後使用塑料蓋將每個管密封。將樣品1、2和3(每個樣品4根管)儲存在23℃(代表典型室溫/儲存溫度)，以評定在其它塗層組分的存在下AHC-7的穩定性。在AHC-7的穩定性評定期間，在各取樣時間使用放置在塑料管中的10g樣品。對於樣品1以0天、8天、16天和30天的時間間隔，對於樣品2和3以0天、7天、15天和29天的時間間隔，從23℃的儲存條件取出樣品。圖2中示出了在23℃下，樣品1、2和3中的AHC-7益生菌損失。AHC-7損失測定為初始AHC-7計數(cfu/g)和各次取樣時的AHC-7計數(cfu/g)之間的δ。AHC-7計數表示為log計數。結果顯示，AHC-7在與增味劑(樣品1)和雞脂(樣品2)直接接觸時非常穩定。然而，在與甘油(樣品3)直接接觸時，AHC-7顯示快速損失。數據證實了在與甘油接觸時AHC-7的敏感性以及在脂肪和幹增味劑存在時的良好穩定性。實施例2為了確定在較高溫度(40℃)下存在其它塗層組分時AHC-7益生菌的穩定性，如同實施例1一樣製備另一組樣品。樣品4是AHC-7原料(AHC-7原料是AHC-7(益生菌)和麥芽糖糊精(載體)，其充足地添加以達到約1011cfu/g的目標AHC-7濃度)和含氧化劑的雞脂(比例約為1:1086)。樣品5是AHC-7原料與甘油的混合物(比例約為1:2090)。該實施例沒有增味劑。為了避免由於混合引起的誤差並提高測量準確性，對每個樣品(4和5)取樣四次，製備4個單獨樣品組(對於樣品4，四個，以及對於樣品5，四個)，各包括裝載10g樣品的50ml塑料管。於室溫下，在渦旋型混合器上將塑料管中的樣品4和5完全混合，隨後使用塑料蓋將管密封。將樣品4和5(每個樣品4根管)在40℃下儲存，以評定在其它塗層組分的存在下AHC-7的穩定性。在AHC-7的穩定性評定期間，在各取樣時間使用放置在塑料管中的10g樣品。對於樣品4和5，以0天、7天、15天和29天的時間間隔從40℃的儲存條件取出樣品。圖3中示出了在40℃下樣品4和5中的AHC-7益生菌損失。在40℃的較高溫度下與雞脂(樣品4)直接接觸29天時，AHC-7非常穩定。然而，在與甘油(樣品5)直接接觸時，AHC-7顯示快速損失。相比23℃(樣品3)，在較高溫度(40℃)(樣品5)下損失速率似乎較大。數據證實了在與甘油接觸時AHC-7的敏感性以及在脂肪存在時的良好穩定性。實施例3為了確定塗層是否對益生菌穩定性具有影響，製備了具有不同磨成粗粒的食物塗層的各種樣品。第一個磨成粗粒的食物是通過將表1中列出的成分擠出而產生，其獲得脂肪和蛋白質含量分別為13％和28％的磨成粗粒的食物。為了磨成粗粒的食物的製備，使用攪拌器(型號V-1401；霍巴特，特洛伊，OH)以1000kg為批次將幹成分(列於表1)共混約20min，以在處理之前在混合物中達到合理的均勻性。將成分的混合物轉移到預調配缸，在預調配缸中材料在95℃下以足夠的蒸汽/水(約21％的水)混合3分鐘(min)，以使澱粉部分地膠凝，並柔化和水化所有成分。然後用單螺杆擠出機將成分的水合混合物擠出，穿過不同擠出機筒區域(1-6)筒溫度為90℃至140℃。用於製備該產品的衝模(die)直徑為0.28"。將磨成粗粒的食物乾燥成最終水分含量為2.5％至3.5％，且水活度(Aw)為約0.2。在施加塗層前磨成粗粒的食物的體積密度為360g/lt。磨成粗粒的食物的組分示於表1。表1在乾燥後，對磨成粗粒的食物噴塗多個塗層。如表2所示，塗覆三個單獨的磨成粗粒的食物樣品組。每個樣品組包含30克塗覆的磨成粗粒的食物。表2對於樣品組6：在乾燥後，對磨成粗粒的食物噴塗脂肪層(塗覆的磨成粗粒的食物的總重量的不超過6％)，其包含50％雞脂和50％牛脂的混合物，並具有通常為35℃的熔融溫度。在對磨成粗粒的食物塗覆脂肪層後，將幹混合層施加至磨成粗粒的食物塗覆脂肪的表面。該混合物包含約1.2％的增味劑(palatant)(SPF336)和約0.02％的AHC-7原料(AHC-7原料包含AHC-7(益生菌)和麥芽糖糊精(載體)，其量為足以獲得約1011cfu/g的目標AHC-7濃度的量)。這種施加產生塗覆的磨成粗粒的食物重量的約0.02％的益生菌材料濃度，提供初始AHC-7濃度為108cfu/g。在第一脂肪層後添加第二層。通過使用具有多個遞送口(deliveryport)的混合器單程(singlepass)在第一層後施加第二層。脂肪層的溫度比熔點高約10℃，以確保在泵送和處理期間沒有問題，並確保最大程度吸收進磨成粗粒的食物。對於樣品組7：在乾燥後，對磨成粗粒的食物噴塗脂肪層，其包含49％雞脂、49％牛脂和2％乳化劑(180,卡拉安配料，萊內克薩，KS)的混合物，以獲得塗覆的磨成粗粒的食物重量的約5％的脂肪層濃度。使用的乳化劑具有56℃-68℃的熔融溫度，並包括約5:1至約25:1的單甘油酯與雙甘油酯的比例(平均比約為12:1)。在對磨成粗粒的食物塗覆脂肪層後，將幹混合層施加至磨成粗粒的食物塗覆脂肪的表面。該混合物包含約1.2％的增味劑(SPF336)和約0.02％的AHC-7原料(AHC-7原料是AHC-7(益生菌)和麥芽糖糊精(載體)，其充足地添加以達到約1011cfu/g的目標AHC-7濃度)。這種施加產生塗覆的磨成粗粒的食物重量的約0.02％的AHC-7原料濃度，提供初始AHC-7濃度為108cfu/g。在第一脂肪層後添加第二層。通過使用具有多個遞送口的混合器單向在第一層後施加第二層。脂肪層的溫度比熔點高約10℃，以確保在泵送和處理期間沒有問題，並確保最大程度吸收進磨成粗粒的食物。對於樣品組8：在乾燥後，在35℃至50℃下對磨成粗粒的食物噴塗一層甘油(化學部，P&G，辛辛那提，OH)，以獲得塗覆的磨成粗粒的食物重量的2.5％的外部甘油濃度。使用的甘油為99.7％甘油，MC＝0.3，比重(25℃下)＝1.261g/min，無水基底(anhydrousbases)上甘油的百分比＝99-101。該甘油塗層立即被磨成粗粒的食物吸收。在對磨成粗粒的食物塗覆甘油後，將包含50％雞脂和50％牛脂的混合物的脂肪層施加至磨成粗粒的食物的塗覆甘油的表面。這種施加產生塗覆的磨成粗粒的食物重量的約5％的脂肪層濃度。在對磨成粗粒的食物塗覆脂肪層後，將幹混合層施加至磨成粗粒的食物塗覆脂肪的表面。該混合物包含約1.2％的增味劑(SPF336)和約0.02％的AHC-7原料(AHC-7原料是AHC-7(益生菌)和麥芽糖糊精(載體)，其充足地添加以達到約1011cfu/g的目標AHC-7濃度)。這種施加產生塗覆的磨成粗粒的食物重量的約0.02％的AHC-7原料濃度，給出初始AHC-7濃度為108cfu/g。在第一脂肪層後添加第二層。通過使用具有多個遞送口的混合器單向在第一層後施加第二層。脂肪層的溫度比熔點高約10℃，以確保在泵送和處理期間沒有問題，並確保最大程度吸收進磨成粗粒的食物。將樣品組6、7和8的成品磨成粗粒的食物放置在開放的培養皿(petridish)中，並在不同相對溼度(RH)的25℃乾燥器中培養1個月。使用水活度(Aw)為0.23、0.33和0.43的飽和鹽漿維持乾燥器的RH(即，乾燥器RH＝鹽漿Aw×100％)。在培養期結束時，未觀察到樣品組6、7或8的水活度隨時間變化。該Aw的穩定性顯示，磨成粗粒的食物已達到平衡水分含量(M.C.'s)並因此達到平衡Aw，其也相當於乾燥器中鹽漿的Aw，如表3所示。這確保磨成粗粒的食物處於平衡狀態，其通常用於針對水活度和水分含量在樣品間進行區分。表3在樣品組6、7和8中使用的各種塗層對AHC-7穩定性的影響繪製在圖4中。通過取由菌落總數確定的AHC-7水平的Log，並驗算在T＝0和當針對水活度磨成粗粒的食物處於平衡時在1個月結束時的AHC-7計數之間的差異，來計算Log損失。圖4中的數據顯示，在脂肪中存在或不存在180乳化劑時(樣品組6和7)，AHC-7高度穩定。然而，證實外部甘油層對AHC-7穩定性不利，如在樣品組8中AHC-7益生菌水平的下降量所示。對於樣品組3和5，當僅用原料(甘油)培養AHC-7益生菌時(實施例1和2)，觀察到相似效果。在1個月後，每克磨成粗粒的食物，菌落形成單位有>4.64log的損失；然而，當用SPF336幹增味劑培養時，如在樣品組6和7中所示，AHC-7益生菌非常穩定。圖4中的數據還顯示，在高達0.43的Aw下在1個月培養期後可以檢測到AHC-7益生菌。然而，這並不暗示在如此高的Aw下持續了很長一段時間，AHC-7益生菌是穩定的。可能是AHC-7益生菌在這些條件下可以隨著時間快速死亡。實施例4為了確定併入磨成粗粒的食物的甘油是否對塗覆的AHC-7的穩定性具有不利效果，製備了以下樣品，其組分列於表4。第一個磨成粗粒的食物是通過將表1中列出的成分擠出而產生，其獲得脂肪和蛋白質含量分別為13％和28％的磨成粗粒的食物。為了磨成粗粒的食物的製備，使用攪拌器(型號V-1401；霍巴特，特洛伊，OH)以1000kg為批次將幹成分(列於表4)共混約20分鐘(min)，以在處理之前在混合物中達到合理的均勻性。在樣品組11和12中，使用甘油作為塑化劑，並直接泵送入預調配缸，在預調配缸中其被加入麵團(dough)。內部添加至磨成粗粒的食物的甘油的水平為9％。在預調配缸中，將材料在95℃下以足夠的蒸汽/水(約21％的水)混合3min，以使澱粉部分地膠凝，並柔化和水化所有成分。然後用單螺杆擠出機將成分的水合混合物擠出，穿過不同擠出機筒區域(1-6)筒的溫度範圍為90℃至140℃。用於製備該磨成粗粒的食物的衝模直徑為0.28"。表4在乾燥後，對磨成粗粒的食物噴塗多個塗層。類似於表2中的樣品組6，對四個磨成粗粒的食物樣品組(樣品組9至12)進行塗覆。每個樣品組包含30克磨成粗粒的食物(平均密度為300g/L至375g/L)。對於樣品組9至12：在乾燥後，對磨成粗粒的食物噴塗不超過塗覆的磨成粗粒的食物重量的6％的脂肪層，其包含50％雞脂和50％牛脂的混合物，並具有通常為35℃的熔融溫度。在對磨成粗粒的食物塗覆脂肪層後，將幹增味劑層施加至磨成粗粒的食物塗覆脂肪的表面。該混合物包含約1.2％的增味劑(SPF336)和約0.02％的AHC-7原料(AHC-7原料是AHC-7(益生菌)和麥芽糖糊精(載體)，其充足地添加以達到約1011cfu/g的目標AHC-7濃度)。這種施加產生塗覆的磨成粗粒的食物重量的約0.02％的益生菌原料濃度，給出初始AHC-7濃度為108cfu/g。在第一脂肪層後添加第二層。通過使用具有多個遞送口的混合器單向在第一層後施加第二層。脂肪層的溫度比熔點高約10℃，以確保在泵送和處理期間沒有問題，並確保最大程度吸收進磨成粗粒的食物。將樣品組9至12的成品磨成粗粒的食物放置在開放的培養皿中並在不同相對溼度(RH)的25℃乾燥器中培養1個月。使用水活度(Aw)為0.23、0.33和0.43的飽和鹽漿維持乾燥器的RH(即，乾燥器RH＝鹽漿Aw×100％)。如圖5所示，在1個月培養期後，觀察到在不同RH下磨成粗粒的食物產品上AHC-7益生菌有小於約0.1log的損失。圖表顯示，在儲存結束時，在任一Aw下沒有損失。數據顯示，在時間「0」時，在缺少甘油的樣品組(樣品組9和10)和具有9％內部甘油的樣品組(樣品組11和12)的表面上，且Aw水平為(0.23-0.43)時，AHC-7高度穩定。該數據與在具有外部甘油層的樣品組8(參見圖4)中觀察到的AHC-7的高log損失形成對比。因此，這項工作顯示，與外部甘油塗層相反，內部甘油對AHC-7塗覆細菌的穩定性幾乎沒有副作用，甚至當通過塗覆的脂肪層將AHC-7與甘油塗層分開時(如在樣品組8)也如此。表5此外，對於所有具有相同Aw的磨成粗粒的食物，觀察到的log損失是相似的(參見圖5)，這確認了與甘油為外部存在時所看到的相反，內部存在的甘油對AHC-7損失幾乎沒有影響；無論磨成粗粒的食物的最終水分含量如何(表5)。這些結果確認了磨成粗粒的食物的水活度是影響時間「0」時的益生菌穩定性的主要因素，而水分含量不是。這些觀察結果是有意義的，因為是水活度而不是水分含量確定了微生物生長的可用水的下限。此外，數據顯示高達0.43的Aw下在1個月培養期後可以檢測到AHC-7益生菌。然而，這並不暗示在如此高的Aw下持續了很長一段時間，益生菌是穩定的。可能是益生菌在這些條件下可以隨著時間快速死亡。實施例5測試了併入甘油的磨成粗粒的食物對AHC-7穩定性的影響。磨成粗粒的食物樣品的組分示於表6。表6樣品組13、14和15在小型擠出機上製備。為了磨成粗粒的食物的製備，使用攪拌器(型號HL-600；霍巴特，特洛伊，OH)以50kg為批次將幹成分(列於表6)共混約10min，以在處理之前在混合物中達到合理的均勻性。將成分的混合物轉移到預調配缸，在預調配缸中材料在95℃下以足夠的蒸汽/水(約21％的水)混合3min，以使澱粉部分地膠凝，並柔化和水化所有成分。然後用雙螺杆擠出機將成分的水合混合物擠出，穿過不同擠出機筒區域(1-6)筒溫度為90℃至140℃。用於製備該產品的衝模直徑為0.28"。將磨成粗粒的食物乾燥成最終水分含量為2.5％至3.5％，且水活度(Aw)為約0.2。在施加塗層前磨成粗粒的食物的體積密度為350g/lt。磨成粗粒的食物的組分示於表6。樣品組13、14和15具有相似的幹磨成粗粒的食物結構(chassis)，除了在樣品組14和15中內部存在3％和5％的甘油。將來自擠出機的幹磨成粗粒的食物(900g至1200g)放置在攪拌器(廚房助手(KitchenAid)，重型，本頓港，密西根州，USA)中，該攪拌器設定為慢速設置(設置2)。將雞脂加溫，之後裝載於磨成粗粒的食物上，將AHC-7與其混合，同時在裝載前機械攪拌雞脂。通過配備有蠕動泵的噴霧嘴組件(科勒-帕母(Cole-Parmer)，芝加哥，USA)將AHC-7通過脂肪(塗覆的磨成粗粒的食物重量的6％)裝載在磨成粗粒的食物上(目標AHC-7計數為107cfu/g)，該噴嘴組件允許將含有AHC-7的脂肪均勻噴塗在磨成粗粒的食物上，其在攪拌器內緩慢旋轉(設置2)，以達到脂肪在磨成粗粒的食物上的均勻沉積。將幹增味劑加六偏磷酸鈉(塗覆的磨成粗粒的食物重量的1.6％)緩慢加在噴塗脂肪的磨成粗粒的食物的頂部。針對AHC-7損失評價樣品組13、14和15。將樣品組轉移至紙袋，並使用紙和塑料帶密封。將紙袋儲存在40℃和75％相對溼度的恆定條件室中15天。以0天、4天、10天和15天的間隔對樣品組取樣，並通過平板計數法對AHC-7進行評定。結果在圖6中示出。對於沒有內部甘油(樣品組13)和具有兩個不同水平的內部甘油的樣品組(樣品組14和15)的AHC-7損失相互之間沒有顯著差異(P>0.05)。這較早地確認了實施例4的結果，即，無論磨成粗粒的食物配方如何(實施例4具有含玉米和雞肉副產品粉(CBPM)的磨成粗粒的食物配方，而實施例5具有不含玉米和雞肉副產品粉的磨成粗粒的食物配方)，當內部地添加甘油時，對AHC-7損失幾乎沒有影響。本文公開的尺寸和值不應理解為嚴格限制為所記載的確切數值。相反，除非另有說明，每個這樣的尺寸意指所記載的值和該值附近的功能上等同的範圍。例如，公開為「40mm」的尺寸意指「約40mm」。本文引用的每個文件，包括任何交叉引用或相關的專利或申請以及本申請要求優先權或其權益的任何專利申請或專利，以其全部內容通過引用合併於本文，除非明確的排除或另有限制。任何文件的引用，均不是承認其是關於本文公開或主張的任何發明的現有技術，或者，在單獨引用或與任何其它參考文獻組合時，其參考、教導、暗示或公開任何這樣的發明。此外，當本文件中術語的任何含義或定義與通過引用併入的文件中的同一術語的任何含義或定義有衝突時，在本文件中指定給該術語的含義或定義應適用。儘管已說明和描述了本發明的具體實施方案，但對於本領域的技術人員顯而易見的是，在不脫離本發明的精神和範圍的情況下可作出各種其它改變和變型。因此，隨附權利要求書中旨在涵蓋本發明範圍內的所有這些改變和變型。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp