Ngf拮抗劑和阿片樣藥劑在治療疼痛中的用途的製作方法

2023-06-11 21:02:51

專利名稱：Ngf拮抗劑和阿片樣藥劑在治療疼痛中的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及通過施用神經生長因子拮抗劑與阿片樣鎮痛劑的組合預防或治療患者中疼痛的方法和組合物。
背景技術：
重度疼痛通常用阿片樣鎮痛劑治療，但不幸的是其具有很多不良副作用，包括降低胃能動性，腎絞痛，精神混濁和呼吸抑制。神經生長因子(NGF)是第一個被鑑定的神經營養蛋白，其在外周和中樞神經元的發育和生存中的作用已經得到很好的特徵描述。已經證實，NGF是外周交感和胚胎感覺神經元以及基底前腦膽鹼能神經元的發育中至關重要的生存和維持因子(Smeyne等，Nature 368246-249(1994)；Crowley等，Cell 761001-1011(1994))。NGF上調神經肽在感覺神經元中的表達(Lindsay，等，Nature 337362-364(1989))，其活性通過兩種不同的膜結合受體(TrkA酪氨酸激酶受體和p75受體)介導，所述p75受體在結構上與腫瘤壞死因子受體家族的其它成員相關(Chao，等，Science 232518-521(1986))。
除了對神經系統的作用外，NGF越來越多地被提示涉及神經系統外的過程。例如，已經證實，NGF能增強血管通透性(Otten等，Eur J Pharmacol.106199-201(1984))，增強T細胞和B細胞免疫應答(Otten，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8610059-10063(1989))，誘導淋巴細胞分化和肥大細胞增殖以及導致可溶性生物信號從肥大細胞釋放(Matsuda，等，Proc. Natl.Acad.Sci.USA 856508-6512(1988)；Pearce，等，J Physio.372379-393(1986)；Bischoff等，Blood 792662-2669(1992)；Horigome，等，J Biol.Chem.26814881-14887(1993))。
NGF由多種細胞類型產生，包括肥大細胞(Leon等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 913739-3743(1994))，B淋巴細胞(Torcia等，Cell 85345-356(1996)，角質形成細胞(Di Marco等，J Biol.Chem.26822838-22846))，平滑肌細胞(Ueyama，等，J Hypertens.111061-1065(1993))，成纖維細胞(Lindholm，等，Eur.J.Neuosci. 2795-801(1990))，支氣管上皮細胞(Kassel，等，Clin，Exp.Allergy 311432-40(2001))，腎小球繫膜細胞(Steiner等，Am.J Physiol.261F792-798(1991))和骨骼肌肌管(Schwartz，等，JPhotochem，Photobiol.B 66195-200(2002))。在神經系統以外的多種細胞類型上發現了NGF受體。例如，在人類單核細胞，T淋巴細胞和B淋巴細胞和肥大細胞上已發現了TrkA。
在人類患者以及在一些動物模型中已經觀察到增加的NGF水平和多種炎性病症之間的關聯。這包括系統性紅斑狼瘡(Bracci-Laudiero，等，Neuroreport 4563-565(1993))，多發性硬化(Bracci-Laudiero，等，Neurosci.Lett.1479-12(1992))，銀屑病(Raychaudhuri，等，Acta Derm.l′enereol.7884-86(1998))，關節炎(Falcimi，等，Ann.Rheum.Dis.55745-748(1996))，間質性膀胱炎(Okragly，等，J.Urology 161438-441(1991))和哮喘(Braun，等，Eur.J Immunol.283240-3251(1998))。
一致性地，外周組織中NGF水平增高與痛覺過敏及炎症相關，並已經在多種形式的關節炎中觀察到。受類風溼性關節炎影響的患者的滑膜表達高水平的NGF，而在未發炎的滑膜中，已有報導滑膜NGF是無法檢測到的(Aloe，等，Arch.Rheum.35351-355(1992))。在實驗性誘導類風溼性關節炎的大鼠中也觀測到相似的結果(Aloe等，Clin.Exp.Rheumatol.10203-204(1992))。已有報導顯示，在轉基因關節炎小鼠中，NGF的水平增高並且肥大細胞數量增加(Aloe，等，Int.J.Tissue Reactions-Exp.Clin.Aspects 15139-143(1993))。
治療疼痛的藥物療法有兩個一般類別，其均有缺點。第一類包括非類固醇抗炎藥(NSAIDs)，其可用於治療輕度疼痛，但其治療用途受限於不良胃腸道反應諸如胃腐蝕、消化性潰瘍形成或十二指腸和結腸的炎症及長期使用造成的腎毒性，第二類包括嗎啡和相關阿片樣藥劑，其可用於治療中度至重度疼痛，但其治療用途受限於不良作用諸如鎮靜作用、意識錯亂、便秘、呼吸抑制、精神混濁、腎絞痛、長期使用的耐受和成癮危險。因此，需要具有較少或不具有副作用的可用於治療疼痛的化合物。
阿片樣鎮痛劑是一類良好確立的鎮痛劑。它們有時也稱作阿片劑。術語「阿片樣藥劑」(與「阿片樣鎮痛劑」互換使用)通常在一般意義上意指具有嗎啡樣活性的所有藥物(天然或合成的)。合成和半合成的阿片樣鎮痛劑是五類化合物的衍生物菲(phenanthrene)；苯基庚基胺；苯基哌啶；嗎啡喃和苯並嗎吩烷。這些化合物在藥理學上具有不同的活性，有些是針對阿片樣藥劑受體的強激動劑(例如嗎啡)；其它的是中度至輕度激動劑(例如可待因)；而其它的表現出混合的激動劑-拮抗劑活性(例如納布啡)；而其它的是部分激動劑(例如烯丙嗎啡)。阿片樣部分激動劑諸如烯丙嗎啡(嗎啡的N-烷基類似物)可對嗎啡的鎮痛效應產生拮抗作用，當單獨給藥時，其憑藉自身特性可以作為強效鎮痛劑。
在所有阿片樣鎮痛劑中，嗎啡的應用最為廣泛。不幸的是，除了其有用的治療特性外，嗎啡還具有大量副作用。另一不良特性是耐受性和軀體依賴性的形成，其限制了此類化合物的臨床用途。因此，需要開發採用較低劑量的阿片樣鎮痛劑諸如嗎啡的治療方法，由此降低副作用的發生和耐受性和依賴性的可能性，從而避免與停止施用相關的藥物戒斷的主要問題。非常需要開發可以增強阿片樣藥劑的疼痛治療的其它形式。
本文所引用的所有參考文獻，包括專利申請和出版物均全文引入作為參考。
發明概述本發明基於如下發現，NGF的拮抗劑與阿片樣鎮痛劑組合能有效治療疼痛。所述治療通常能夠使得劑量降低的阿片樣鎮痛劑產生相同量的疼痛降低效果和/或允許對阿片樣藥劑疼痛治療的其它形式的增強。
第一方面，本發明公開了治療(或，在其它實施方案中，預防)疼痛的方法，包括施用一定量的神經生長因子拮抗劑和一定量的阿片樣鎮痛劑，以便通過聯合兩者提供有效的疼痛緩減。NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑的相對量和比例可有所變化。在某些實施方案中，施用足量的NGF拮抗劑以便將阿片樣鎮痛劑的正常劑量降低至少約50％，所述阿片樣鎮痛劑的正常劑量是產生相同程度的疼痛改善作用所需的量。在某些實施方案中，施用足量的NGF拮抗劑以便將實現相同程度的疼痛改善作用所需的阿片樣鎮痛劑的正常劑量降低至少約5％、至少約10％、至少約20％、至少約30％、至少約40％、至少約60％、至少約70％、至少約80％，或至少約90％，或更高。
另一方面，本發明提供了增強阿片樣鎮痛劑的疼痛治療的方法，包括施用有效量的阿片樣鎮痛劑及有效量的NGF拮抗劑。如本文所使用的，聯合施用包括同時施用和/或在不同的時間施用。聯合施用還包括作為共製劑(co-formulation)施用(即，NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑存在(組合)於同一組合物中)和/或作為分開的組合物施用。如本文所使用的，「聯合施用」意在包括將有效量的阿片樣鎮痛劑和NGF拮抗劑施用於個體的任何情況。如本文進一步所述，應當理解的是，NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑可以以不同的給藥頻率或間隔進行施用。例如，抗NGF抗體可每周施用，而阿片樣鎮痛劑可更頻繁的施用。應當理解的是，NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑可採用相同的施用途徑或不同的施用途徑進行施用，而不同的給藥方案可隨著施用過程而改變。施用可在疼痛發作之前進行。
另一方面，本發明提供了在個體中降低疼痛發生率、改善疼痛、緩解疼痛的方法；和/或延遲疼痛的發生或發展的方法，所述方法包括施用有效量的阿片樣鎮痛劑及有效量的NGF拮抗劑。
本發明的方法適用於治療或預防具有任何病因學的疼痛，包括通常採用阿片樣鎮痛劑治療的疼痛，例如，胰腺炎、腎結石、頭痛、dismennorhea、肌與骨骼的疼痛(例如腰痛)、扭傷、內臟痛、卵巢囊腫、前列腺炎、膀胱炎、化學或熱燒傷、或癌症(諸如前列腺癌骨轉移、乳癌骨轉移、肺癌骨轉移、胰腺癌)。
本發明方法中適用的NGF拮抗劑是能夠直接或間接導致NGF生物活性減弱的任何藥劑。在某些實施方案中，NGF拮抗劑(例如，抗體)結合(物理上相互作用於)NGF、結合NGF受體(諸如trkA受體和/或p75)和/或降低(阻礙和/或阻滯)下遊NGF受體信號傳導(例如，激酶信號傳導抑制劑)。由此，在某些實施方案中，NGF拮抗劑結合(物理上相互作用於)NGF。在其它實施方案中，NGF拮抗劑結合NGF受體(諸如TrkA受體和/或p75)。在其它實施方案中，NGF拮抗劑降低(阻礙和/或阻滯)下遊NGF受體信號傳導(例如，激酶信號傳導抑制劑)。在其它實施方案中，NGF拮抗劑抑制(減少)NGF合成和/或釋放。在另一實施方案中，NGF拮抗劑是TrkA免疫粘合素。在某些實施方案中，NGF拮抗劑選自以下一種或多種抗NGF抗體，針對NGF的反義分子(包括針對編碼NGF的核酸的反義分子)，針對NGF受體(諸如trkA和/或p75)的反義分子，NGF抑制性化合物，NGF結構類似物，與NGF結合的TrkA和/或p75受體的顯性失活突變體，抗TrkA抗體，抗p75抗體，和激酶抑制劑。在另一實施方案中，NGF拮抗劑是抗NGF抗體。在其它實施方案中，抗NGF抗體識別人NGF。在其它實施方案中，抗NGF抗體特異性地結合人NGF。而在其它實施方案中，所述抗體與選自Mab 911，MAb 912和MAb 938的一種或多種小鼠單克隆抗體結合基本上相同的NGF表位6(參見Hongo等，Hybridoma 19215-227(2000))。在某些實施方案中，NGF拮抗劑結合NGF(諸如hNGF)且不顯著性結合相關神經營養蛋白，諸如NT-3，NT4/5，和/或BDNF。而在其它實施方案中，抗NGF抗體是人源化的(諸如本文所述的抗體E3)。在某些實施方案中，抗NGF抗體是抗體E3(如本文所述)。在其它實施方案中，抗NGF抗體包含抗體E3的一個或多個CDR(s)(諸如一個、兩個、三個、四個、五個，或在有些情況下所有六個來自E3的CDRs)。在其它實施方案中，抗體是人的。而在其它實施方案中，抗NGF抗體包含表1中所示重鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO1)和表2中所示輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO2)。而在其它實施方案中，抗體包含修飾的恆定區，諸如免疫上惰性的恆定區，例如，該恆定區不能觸發補體介導的裂解，或不能刺激抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)。在其它實施方案中，恆定區按照Eur.J.Immunol.(1999)292613-2624；PCT申請序號PCT/GB99/01441；和/或UK專利申請序號9809951.8中所述進行修飾。
在某些實施方案中，NGF拮抗劑結合NGF分子。而在其它實施方案中，NGF拮抗劑是特異性結合NGF(諸如人NGF)的抗體。但是，NGF拮抗劑可以可選地結合trkA受體。NGF拮抗劑可以是抗人NGF(抗hNGF)單克隆抗體，其能結合hNGF並有效地抑制hNGF與人TrkA(hTrkA)的結合和/或有效地抑制TrkA受體的活化。
抗NGF抗體對NGF(諸如hNGF)的結合親和力可以是約0.10nM至約0.80nM、約0.15至約0.75nM和約0.18至約0.72nM。而一個實施方案中，結合親和力為約2pM-22pM。在某些實施方案中，結合親和力為約10nM。在其它實施方案中，結合親和力小於約10nM。在其它實施方案中，結合親和力為約0.1nM或約0.07nM。在其它實施方案中，結合親和力小於約0.1nM，或小於約0.07nM。在其它實施方案中，結合親和力為約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM和約50pM中的任一項至約2pM、約5pM、約10pM、約15pM、約20pM和約40pM中的任一項。在某些實施方案中，結合親和力為約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM，或約50pM，或小於約50pM。在某些實施方案中，結合親和力小於約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM，或約50pM。而在其它實施方案中，結合親和力為約2pM、約5pM、約10pM、約15pM、約20pM、約40pM，或大於約40pM。如本領域眾所周知的，結合親和力可用KD，或解離常數進行表示，結合親和力增加相應於KD降低。抗NGF小鼠單克隆抗體911(Hongo等，Hybridoma 19215-227(2000)對人NGF的結合親和力為約10nM，而人源化抗NGF抗體E3(本文所述)對人NGF的結合親和力為約0.07nM。
在NGF拮抗劑是抗體的情況下，抗體可以是抗體片段，包括選自Fab、Fab』、F(ab』)2、Fv片段的抗體片段、由抗體片段形成的diabody、單鏈抗體分子和多特異性抗體，和單鏈Fv(scFv)分子。
阿片樣鎮痛劑可以是表現出嗎啡樣生物活性的任何化合物。在某些實施方案中，阿片樣鎮痛劑是以下的一項或多項嗎啡、可待因、雙氫可待因、二乙醯嗎啡、氫可酮、氫嗎啡酮、左啡烷、羥嗎啡酮、阿芬太尼、丁丙諾啡、布託啡諾、芬太尼、舒芬太尼、哌替啶、美沙酮、納布啡、丙氧芬和噴他佐辛；或其藥學上可接受的鹽。
NGF拮抗劑和/或阿片樣鎮痛劑可藉助任何適宜的途徑施用於個體。例如，其可經口、靜脈內、舌下、皮下、動脈內、肌內、經直腸、脊柱內、胸內、腹膜內、心室內、舌下、經皮或通過吸入而一同或分開，和/或同時和/或相繼地進行施用。施用可以是全身性的(例如，靜脈內)或局部性的。
第二方面，本發明公開了包含神經生長因子拮抗劑和/或阿片樣鎮痛劑的組合物。神經生長因子拮抗劑和阿片樣鎮痛劑可一起與一種或多種藥學上可接受的載體或賦形劑聯合存在，或它們可以存在於分開的組合物中。另一方面，本發明提供了NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑的協同性組合物。
第三方面，本發明公開了用於本文所述任何方法的藥盒，所述藥盒包括NGF拮抗劑和/或阿片樣鎮痛劑。該藥盒可進一步包括用於本文所述任何方法的說明書。該說明書可包括NGF拮抗劑與阿片樣藥劑的聯合施用(即，同時施用和/或在不同的時間施用)。在某些實施方案中，NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑被包裝在一起，但它們可以在或不在相同的容器內。由此，在某些實施方案中，藥盒包括存在於相同容器中的NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑，和用於本文所述任何方法的說明書。在其它實施方案中，藥盒包括存在於分開的容器中的NGF拮抗劑和阿片樣藥劑。
附圖簡介

圖1顯示了用嗎啡聯合NGF拮抗劑(小鼠抗NGF抗體911，Hongo，等，Hybridoma 19215-227(2000))進行治療的動物中累積的疼痛評分降低。手術前單獨用抗NGF抗體(「911」)以0.3mg/kg進行治療比單獨用0.3mg/kg嗎啡進行治療更有效地降低了靜止痛(resting pain)，而用抗NGF抗體聯合嗎啡進行治療比單獨用嗎啡或單獨用抗NGF抗體更有效地降低了靜止痛。
圖2顯示了用嗎啡聯合NGF拮抗劑(抗NGF抗體911)進行治療的動物中累積的疼痛評分降低。用抗NGF抗體加嗎啡的治療比單獨用嗎啡或單獨用抗NGF抗體更有效地降低了靜止痛。
圖3顯示了手術和用抗NGF抗體和/或嗎啡進行治療後動物中觀察到的靜止痛評分。動物在手術前15小時用NGF拮抗劑(抗NGF抗體911)進行治療，在手術後一天檢測疼痛行為。對動物進行無嗎啡(實線)、0.3mg/kg嗎啡(虛線)或1.0mg/kg嗎啡(點線)的檢測。與單獨用0.3mg/kg嗎啡進行治療相比，0.3mg/kg嗎啡聯合0.3mg/kg抗NGF抗體或1mg/kg抗NGF抗體進行的治療顯著改善了疼痛緩減(即，靜止痛降低)。此外，抗NGF抗體的單獨治療產生了與以0.3mg/kg給藥的嗎啡等價的疼痛緩減。用1.0mg/kg抗NGF抗體加0.3mg/kg嗎啡的治療產生至少等於單獨使用1mg/kg嗎啡所得的疼痛緩減。
發明詳述我們已經發現疼痛可通過施用有效量的NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體)及阿片樣鎮痛劑進行治療或預防。本發明的方法和組合物可用於治療或預防通常用阿片樣鎮痛劑進行治療的疼痛。通過使用神經生長因子拮抗劑聯合阿片樣鎮痛劑，根據本發明，目前可以用較低劑量的阿片樣鎮痛劑來治療疼痛，由此降低了與使用阿片樣鎮痛劑相關的副作用(例如呼吸抑制、便秘、腎絞痛、噁心和嘔吐，和耐受性和依賴性以及藥物戒斷相關問題)的可能性。在某些實施方案中，施用足量的NGF拮抗劑以便將實現相同程度的疼痛改善作用所需的阿片樣鎮痛劑的正常劑量降低至少約5％、至少約10％、至少約20％、至少約30％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％，或至少約90％，或更高。
採用阿片樣鎮痛劑的疼痛治療還可按本文所述，通過聯合施用阿片樣鎮痛劑及NGF拮抗劑而得以增強。
在一個方面中，本發明提供了治療或預防個體(包括哺乳動物，人類和非人類)中疼痛的方法，包括聯合施用有效量的NGF拮抗劑及有效量的阿片樣鎮痛劑。另一方面，本發明提供了增強阿片樣鎮痛劑治療或預防個體中疼痛的方法，包括聯合施用有效量的NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體)及有效量的阿片樣鎮痛劑。另一方面，本發明提供了預防、改善和/或防止疼痛的發展或進展的方法。
在某些實施方案中，抗NGF抗體能結合NGF和有效抑制NGF與其TrkA和/或p75受體的體內結合，和/或有效抑制NGF激活其TrkA和/或p75受體。
另一方面，本發明提供了改善、延遲疼痛的發生和/或防止疼痛的進展的方法。
本發明的阿片樣鎮痛劑的實例包括(但不限於)嗎啡、可待因、雙氫可待因、二乙醯嗎啡、氫可酮、氫嗎啡酮、左啡烷、羥嗎啡酮、阿芬太尼、丁丙諾啡、布託啡諾、芬太尼、舒芬太尼、哌替啶、美沙酮、納布啡、丙氧芬和噴他佐辛；或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方案中，阿片樣鎮痛劑是嗎啡；或其藥學上可接受的鹽。
本發明所用阿片樣鎮痛劑的鹽的示例包括硫酸嗎啡、鹽酸嗎啡、酒石酸嗎啡、磷酸可待因、硫酸可待因、重酒石酸二氫可待因、鹽酸二乙醯嗎啡、重酒石酸氫可酮、鹽酸氫嗎啡酮、酒石酸左啡烷、鹽酸羥嗎啡酮、鹽酸阿芬他尼、鹽酸丁丙諾啡、酒石酸布託啡諾、枸櫞酸芬太尼、鹽酸哌替啶、鹽酸美沙酮、鹽酸納布啡、鹽酸丙氧芬、萘磺酸丙氧芬(2-萘磺酸(1∶1)一水化物)，和鹽酸噴他佐辛。在一個實施方案中，阿片樣鎮痛劑是硫酸嗎啡。
本發明的方法和組合物可用於治療具有任何病因學的疼痛，包括急性和慢性疼痛、具有炎性成分的任何疼痛，和通常用阿片樣鎮痛劑處方治療的任何疼痛。疼痛的實例包括外科手術後疼痛(post-surgical pain)、處置後疼痛(post-operative pain)(包括牙痛)、偏頭痛、頭痛和三叉神經痛、與燒傷、傷口或腎結石相關的疼痛、與創傷(包括創傷性頭損傷)相關的疼痛、神經性疼痛、與肌骨骼的病症，諸如類風溼性關節炎、骨性關節炎、胰腺炎、炎性腸病、強直性脊椎炎、血清陰性(非類風溼性)關節病、非關節性風溼病和關節周疾病相關的疼痛，以及與癌症相關的疼痛(包括「突發性疼痛」(break-through pain)和與終末期癌相關的疼痛)、周圍神經病和皰疹後神經痛。具有炎性成分的疼痛的實例(除上述某些疾病外)包括風溼痛、與黏膜炎相關的疼痛，和痛經。在某些實施方案中，本發明的方法和組合物可用於治療或預防手術後疼痛和癌症疼痛。
NGF拮抗劑和/或阿片樣鎮痛劑可藉助任何適宜的途徑施用於個體。例如，其可經口、靜脈內、舌下、皮下、動脈內、肌內、經直腸、脊柱內、胸內、腹膜內、心室內、舌下、經皮或通過吸入而一同或分開，和/或同時，和/或相繼地進行施用。施用可以是全身性的(例如，靜脈內)或局部性的。
另一方面，本發明提供了治療疼痛的組合物和藥盒，其包括適用於本文所述任何方法的NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體、抗NGF單克隆抗體)和/或阿片樣鎮痛劑。在某些實施方案中，抗NGF抗體能有效抑制NGF結合其TrkA和/或p75受體和/或能有效抑制NGF激活其TrkA和/或p75受體。
一般技術實施本發明採用(除非另有指明)分子生物學(包括重組技術)，微生物學，細胞生物學，生物化學和免疫學的常規技術，其均為本領域的已知技術。所述技術在本領域中已得到充分的描述，諸如，Molecular CloningA Laboratory Manual，second edition(Sambrook，等，1989)Cold SpringHarbor Press；Oligonucleotide Synthesis (M.J.Gait，ed.，1984)；Methods inMolecularBiology，Humana Press；Cell BiologyA Laboratory Notebook(J.E.Cellis，ed.，1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney，ed.，1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P.Mather和P.E.Roberts，1998)Plenum Press；Cell and Tissue CultureLaboratoryProcedures(A.Doyle，J.B.Griffiths，和D.G.Newell，eds.，1993-8) J.Wiley and Sons；Methods in Enzymology(Academic Press，Inc.)；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell，eds.)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller和M.P.Calos，eds.，1987)；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel，等，eds.，1987)；PCRThe Polymerase Chain Reaction，(Mullis，等，eds.，1994)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan等，eds.，1991)；Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons，1999)；Immunobiology(C.A.Janeway和P.Travers，1997)；Antibodies(P.Finch，1997)；Antibodiesa practical approach(D.Catty.，ed.，IRL Press，1988-1989)；Monoclonal antibodiesa practical approach(P.Shepherd和C.Dean，eds.，Oxford University Press，2000)；Using antibodiesalaboratory manual(E.Harlow 和D.Lane(Cold Spring HarborLaboratory Press，1999)；The Antibodies(M.Zanetti和J.D.Capra，eds.，Harwood Academic Publishers，1995)。
定義「抗體」(與複數形式互換使用)是能夠通過至少一個抗原識別位點而特異性結合靶諸如糖、多核苷酸、脂質、多肽等的免疫球蛋白分子，所述抗原識別位點位於免疫球蛋白分子的可變區內。如本文所使用的，該術語不僅包括完整的多克隆或單克隆抗體，還包括其片段(諸如Fab，Fab′，F(ab′)2，Fv)、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白、人源化抗體、嵌合抗體、雙體(diabodies)線性抗體、單鏈抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)和包含具有所需特異性的抗原識別位點的免疫球蛋白分子的任何其它修飾的構型。抗體包括任何類型的抗體，諸如IgG、IgA或IgM(或其亞類)，所述抗體無須是任何特定類型。根據抗體重鏈恆定區的胺基酸序列，免疫球蛋白可被分為不同的類型。免疫球蛋白有五個主要類型IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，而其中某些還可進一步分為亞型(同種型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。與不同類型免疫球蛋白相對應的重鏈恆定區被分別稱為α、δ、ε、γ和μ。不同類型的免疫球蛋白的亞基結構和三維構型是眾所周知的。
「單克隆抗體」是指均質抗體群，其中單克隆抗體由抗原的選擇性結合所涉及的胺基酸(天然存在的和非天然存在的)組成。單克隆抗體群具有高度特異性，針對單一的抗原位點。術語「單克隆抗體」不僅包括完整單克隆抗體和全長單克隆抗體，還包括其片段(諸如Fab，Fab′，F(ab′)2，Fv)，單鏈(ScFv)，其突變體，包含抗體部分的融合蛋白質，人源化單克隆抗體，嵌合單克隆抗體和包含具有所需特異性的抗原識別位點並能夠結合抗原的免疫球蛋白分子的任何其它修飾構型。這不意在限制抗體的來源和製備其的方式(例如，通過雜交瘤、噬菌體選擇、重組表達、轉基因動物等)。
「人源化」抗體是指具有基本上源於非人類物種的免疫球蛋白的抗原結合位點的分子，該分子的剩餘免疫球蛋白結構基於人類免疫球蛋白的結構和/或序列。抗原結合位點可以包括融合至恆定區的完整可變區或被移植至可變區中適宜構架區上的僅僅互補決定區(CDRs)。抗原結合位點可以是野生型的或通過一個或多個胺基酸置換而修飾的，例如，被修飾以便更近似於人類免疫球蛋白。某些形式的人源化抗體保留了所有CDR序列(例如，包含來自小鼠抗體的所有六個CDRs的人源化小鼠抗體)。其它形式的人源化抗體相對於原始抗體具有一個或多個改變的CDRs(一個、兩個、三個、四個、五個、六個)。在某些情況下，人類免疫球蛋白的構架區(FR)殘基或其它殘基被相應的非人類殘基置換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體和供體抗體中未見的殘基。
本文所使用的術語「神經生長因子」和「NGF」是指神經生長因子和其保留了至少部分NGF活性的變體。如本文所使用的，NGF包括所有哺乳動物物種的天然序列NGF，包括人類、犬、貓、馬或牛的。
「NGF受體」是指由NGF結合或激活的多肽。NGF受體包括任何哺乳動物物種的TrkA受體和p75受體，所述哺乳動物物種包括(但不限於)人、犬、貓、馬、靈長類或牛。
「NGF拮抗劑」是指可阻滯、抑制或降低(包括顯著性地)NGF生物活性(包括由NGF信號傳導介導的下遊通路，諸如受體結合和/或誘導針對NGF的細胞反應)的任何分子。術語「拮抗劑」並非意在任何具體的生物作用機制，應理解其清楚地包括和包含所有可能的與NGF的藥理學、生理學和生物化學相互作用(無論是直接的還是間接的、或無論是與NGF、其受體的相互作用還是通過另一機制的相互作用)，及其結果(可通過多種不同的且化學上相異的組合物實現)。示例性NGF拮抗劑包括，但不限於，抗NGF抗體、針對NGF的反義分子(包括針對編碼NGF的核酸的反義分子)，NGF抑制性化合物，NGF結構類似物，與NGF結合的TrkA受體的顯性失活突變體，TrkA免疫粘合素，抗TrkA抗體，抗p75抗體，和激酶抑制劑。為了本發明的目的，應當明確地認識到術語「拮抗劑」包括所有先前鑑別的、可導致NGF自身，NGF生物活性(包括但不限於其介導疼痛的任何方面的能力)或該生物活性的結果以任何有意義的程度被實質上終止、降低或中和的術語、名稱和功能狀態及特徵。在某些實施方案中，NGF拮抗劑(例如，抗體)結合(物理上相互作用於)NGF，結合NGF受體(諸如trkA受體和/或p75受體)，降低(阻礙和/或阻滯)下遊NGF受體信號傳導，和/或抑制(降低)NGF合成、生成或釋放。在其它實施方案中，NGF拮抗劑結合NGF並防止TrkA受體二聚化和/或TrkA自磷酸化。在其它實施方案中，NGF拮抗劑抑制或降低NGF合成和/或生成(釋放)。本文中提供了各種NGF拮抗劑的實例。
本文所使用的「抗NGF抗體」是指一種抗體，其能夠結合NGF和抑制NGF生物活性和/或由NGF信號傳導介導的下遊通路。
「「TrkA免疫粘合素」是指包含TrkA受體片段和免疫球蛋白序列的可溶性嵌合分子，所述片段例如是TrkA受體的胞外域，該分子保留了TrkA受體的結合特異性。
NGF的「生物活性」通常是指結合NGF受體和/或激活NGF受體信號通路的能力。並非意在限制，生物活性包括以下的任一項或多項結合NGF受體(諸如p75和/或TrkA)的能力；促進TrkA受體二聚化和/或自磷酸化的能力；激活NGF受體信號通路的能力；促進細胞分化、增殖、生存、生長及其它細胞生理學改變的能力，所述改變包括(在神經元(包括外周和中樞神經元)的情況下)在神經元形態學、突觸發生、突觸功能、神經遞質和/或神經肽釋放和損傷後再生方面的改變；和介導疼痛的能力。
術語「表位「意指蛋白質抗原上抗體(單克隆或多克隆抗體)的結合位點。
本文所使用的「治療」是獲得有益的或需要的臨床結果的方法。為了本發明的目的，有益的或需要的臨床結果包括(但不限於)以下一項或多項改善或減輕疼痛，包括急性、慢性、炎性、神經性或手術後的疼痛的任何方面。為了本發明的目的，有益的或需要的臨床結果包括(但不限於)以下一項或多項減輕嚴重度，減輕與疼痛(包括疼痛的任何方面)相關的一種或多種症狀(諸如縮短疼痛持續期和/或降低疼痛敏感性或感覺)。
疼痛的「發生率降低」是指對嚴重度(其可包括降低了對通常用於治療該病症的其它藥物和/或療法的需要和/或量(例如，暴露量))、持續時間和/或頻率(包括例如，在個體中延遲疼痛的發生或增加疼痛發生前的時間)的任何降低。本領域技術人員應能理解，個體對治療的反應會有不同，因此，例如「降低個體中疼痛發生率的方法」反映的是基於如下的合理預期而聯合施用本文所述的NGF拮抗劑及本文所述的阿片樣鎮痛劑，所述合理預期為所述施用可能會在特定個體中導致疼痛發生率降低的預期。
疼痛或疼痛的一種或多種症狀的「改善」是指與未聯合施用NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑相比，疼痛的一種或多種症狀的減輕或改善。「改善」還包括縮短或減少症狀的持續時間。
疼痛或疼痛的一種或多種症狀的「緩解」是指在用NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑根據本發明進行聯合治療的個體或個體群中，減輕疼痛的一種或多種不良臨床表現的程度。
如本文所使用的，「延遲」疼痛的發展是指延遲、阻礙、減緩、延緩、穩定和/或推遲疼痛的進展。該延遲可以是各種長度的時間，這要根據病史和/或要治療的個體而定。對於本領域技術人員很清楚的是，實際上，充分或顯著的延遲包括預防，其中個體不會發生疼痛。「延遲」症狀發展的方法是指該方法與未使用該方法相比，能夠降低給定時間期限中症狀發展的可能性和/或減輕給定時間期限中症狀的程度。所述比較典型地採用統計學顯著性數目的受試者基於臨床研究進行。
疼痛的「發展」或「進展」是指病症的最初顯現和/或接著發生的進展。疼痛的發展可採用本領域眾所周知的標準臨床技術進行檢測和評估。然而，發展還指無法檢測到的進展。為了本發明的目的，發展或進展是指症狀的生物學過程。「發展」包括病狀出現(occurrence)、復發和發作。本文所使用的疼痛的「發作」或「出現」包括初次發作和/或復發。
「有效量」是足以產生有益的或需要的臨床結果的量，所述結果包括疼痛感覺的緩解或減輕。為了本發明的目的，NGF拮抗劑和阿片樣藥劑的有效量包括這樣的量，該量足以治療、改善、減輕任何類型的疼痛的強度，包括急性、慢性、炎性、神經性或手術後疼痛的強度。在某些實施方案中，阿片樣鎮痛劑和NGF拮抗劑的有效量是這樣的NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑的量，該量能夠將對於外界刺激的敏感閾調節至可與健康個體中觀測到的水平相當的水平。在其它實施方案中，該水平可不與健康個體中觀測到的相當，但其與不接受聯合治療的情況相比而言降低。NGF拮抗劑的有效量還包括足以增強疼痛的阿片樣藥劑治療(療效)(如本文所述)或降低疼痛治療或預防所必需的阿片樣藥劑的劑量(如本文所述)的NGF拮抗劑的量。如本領域中所理解的，與阿片樣藥劑聯合的NGF拮抗劑的有效量可根據，尤其是，疼痛類型(和患者病史以及其它因素諸如所使用的NGF拮抗劑和/或阿片樣藥劑的類型(和/或劑量)而變化。在本文中，有效量還可以是實現協同作用的NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑的量。在本發明文中，拮抗劑的有效量通常是指足以導致阿片樣藥劑對疼痛的治療效果增強(其又可以意味著劑量降低和/或觀察到某些其它有益效果)和/或導致與單獨的阿片樣藥劑治療相比而言的有益效果的量。NGF拮抗劑的「有效量」還可導致與單獨施用NGF拮抗劑或阿片樣藥劑相比而言的協同作用。在某些實施方案中，「有效量」是足以延遲疼痛發展的量。
「個體」是脊椎動物，優選哺乳動物，更優選為人。哺乳動物包括(但不限於)農用動物、運動用動物、寵物、靈長類、馬、牛、犬、貓、小鼠和大鼠。
術語「阿片樣鎮痛劑」是指具有嗎啡樣活性的所有藥物(天然的或合成的)。合成和半合成的阿片樣鎮痛劑是五類化合物的衍生物菲；苯基庚基胺；苯基哌啶；嗎啡喃和苯並嗎吩烷，所有這些均在該術語的範圍之內。示例性阿片樣鎮痛劑包括可待因、雙氫可待因、二乙醯嗎啡、氫可酮、氫嗎啡酮、左啡烷、羥嗎啡酮、阿芬太尼、丁丙諾啡、布託啡諾、芬太尼、舒芬太尼、哌替啶、美沙酮、納布啡、丙氧芬和噴他佐辛或其藥學上可接受的鹽。
如本文所使用的，「聯合」施用包括同時施用和/或在不同的時間施用。聯合施用還包括以共製劑形式施用(即，NGF拮抗劑和阿片樣藥劑存在於同一組合物中)或以分開的組合物施用。如本文所使用的，聯合施用意在包括將阿片樣藥劑和NGF拮抗劑施用於個體(其可同時和/或分開發生)的任何情況。如本文進一步所述，應當理解的是，NGF拮抗劑和阿片樣藥劑可以以不同的劑量頻率或間隔進行施用。例如，抗NGF抗體可每周施用，而阿片樣藥劑可更頻繁的施用。應當理解的是，NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑可採用相同的施用途徑或不同的施用途徑進行施用。
「手術後疼痛」(post-surgical pain)(可與術語「切割後」或「創傷後疼痛」互換)是指由深入個體組織中的外傷，諸如切割、刺傷、切開、撕裂或損傷，引起或導致的疼痛(包括由所有手術過程(無論是侵入性的或是非侵入性的)導致的疼痛)。本文所使用的「手術後疼痛」不包括無外部物理創傷而出現(引進或導致)的疼痛。在某些實施方案中，手術後疼痛為內部或外部(包括外周的)的疼痛，而損傷、切割傷、創傷、撕裂或切割的發生可以是偶然的(例如伴隨創傷)或有意的(例如伴隨手術切割)。本文所使用的「疼痛」包括傷害感受和疼痛感覺，而疼痛可採用疼痛評分以及本領域其它眾所周知的方法進行客觀和主觀的評估。本文所述的手術後疼痛包括異常性疼痛(即，對正常非有害刺激的反應增強)和痛覺過敏(即，對正常有害刺激或不適刺激的反應增強)，其又可能具有熱或機械性(觸覺的)性質。在一些實施方案中，疼痛具有熱敏感性、機械敏感性和/或靜止痛的特徵。在某些實施方案中，手術後疼痛包括機械性誘導的疼痛或靜止痛。在其它實施方案中，手術後疼痛包括靜止痛。如本領域所眾所周知的，疼痛可以是原發或繼發疼痛。
當阿片樣藥劑治療的一個方面被改善時(與施用阿片樣藥劑而不施用NGF拮抗劑時相比較)，疼痛的阿片樣藥劑治療被「增強」。例如，相對於不存在NGF拮抗劑時的阿片樣鎮痛劑的療效，疼痛的阿片樣藥劑治療效果可在存在NGF拮抗劑的情況下得到提高。作為另一實例，可通過聯合施用NGF拮抗劑及阿片樣鎮痛劑，「增強」阿片樣藥劑對疼痛的治療或預防，所述聯合施用能更好地緩解疼痛(例如，當所使用的阿片樣藥劑的劑量不能有效治療或預防疼痛時)。
本發明的方法本文所公開的所有方法中涉及NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑時，也包括包含這些藥劑之一種或多種的組合物。本發明可用於治療個體(包括所有哺乳動物，人類和非人類)中疼痛。
在一個方面中，本發明提供了在個體中治療疼痛的方法，其包括聯合施用有效量的NGF拮抗劑及有效量的阿片樣鎮痛劑。在某些實施方案中，施用足量的NGF拮抗劑以便將實現相同程度的疼痛改善作用所需的阿片樣鎮痛劑的正常劑量降低至少約5％、至少約10％、至少約20％、至少約30％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％，或至少約90％，或更高。
另一方面，本發明提供了在個體中增強阿片樣鎮痛劑的疼痛治療的方法，其包括聯合施用有效量的NGF拮抗劑和有效量的阿片樣鎮痛劑。
在某些實施方案中，疼痛包括以下任何一項或多項急性和/或慢性疼痛、具有炎性成分的任何疼痛、外科手術後疼痛、處置後疼痛(包括牙痛)、偏頭痛、頭痛和三叉神經痛、與燒傷、傷口或腎結石相關的疼痛、與創傷(包括創傷性頭損傷)相關的疼痛、神經性疼痛、和與癌症相關的疼痛(包括「突發性」痛和與終末期癌相關的疼痛)。在其它實施方案中，疼痛是通常用阿片樣鎮痛劑(諸如嗎啡)治療的任何疼痛，例如，胰腺炎、腎結石、頭痛、痛經、肌與骨骼的疼痛(例如腰痛)、扭傷、內臟痛、卵巢囊腫、前列腺炎、膀胱炎、化學或熱燒傷、癌症(諸如前列腺癌骨轉移、乳癌骨轉移、肺癌骨轉移、胰腺癌)。
另一方面，本發明提供了預防、改善和/或防止疼痛的發展或進展的方法。由此，在某些實施方案中，在疼痛事件(諸如手術)之前施用NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體)和/或阿片樣鎮痛劑。例如，可在可能導致疼痛的活動或有危險導致疼痛的活動(諸如外傷或手術)前30分鐘、1小時、5小時、10小時、15小時、24小時或甚至更長時間，諸如1日，幾日甚或1周、2周、3周或更長時間施用NGF拮抗劑。
對疼痛的治療或預防的評估是本領域眾所周知的。評估可根據客觀檢測，諸如觀測行為諸如對刺激的反應，面部表情等來實施。評估還可根據主觀檢測，諸如患者對疼痛的特徵描述，採用各種疼痛等級來進行。參見例如，Katz等，Surg Clin North Am.(1999)79(2)231-52；Caraceni等，J Pain Symptom Manage(2002)23(3)239-55。
應當理解的是，當聯合施用NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑時(以單一或以分開的組合物)，神經生長因子拮抗劑和阿片樣鎮痛劑的比例將與表現出期望效應相一致。在某些實施方案中，該比例按神經生長因子拮抗劑對阿片樣鎮痛劑的重量計，為大約1∶1。在某些實施方案中，該比例可以是約0.001∶約1至約1000∶約1，或約0.01∶約1至約100∶約1。其它比例也是可預期的。
應當理解的是，神經生長因子(NGF)拮抗劑和阿片樣鎮痛劑用於治療或預防疼痛所需要的量不僅會隨著具體所選的化合物或組合物變化，還會隨著施用途徑、要治療的病症的性質和患者的年齡和狀態而變化，其最終取決於主治醫師的判斷。
NGF拮抗劑本發明的方法使用NGF拮抗劑，其是指能夠阻滯、抑制或降低(包括顯著性地)NGF生物活性(包括由NGF信號傳導介導的下遊通路，諸如受體結合和/或引起對NGF的細胞反應)的任何分子。術語「拮抗劑」並非意在任何具體的生物活性機制，而且應當認為其明確包括和包含所有可能的與NGF的藥理學、生理學和生物化學相互作用及其結果，這可通過各種不同的，且化學趨異的組合物實現。示例性NGF拮抗劑包括，但不限於，抗NGF抗體，針對NGF的反義分子(包括針對編碼NGF的核酸的反義分子)，針對NGF受體(諸如trkA受體和/或p75受體)的反義分子(包括針對編碼TrkA和/或p75的核酸的反義分子)，NGF抑制性化合物，NGF結構類似物，與NGF結合的TrkA受體的顯性失活突變體，TrkA免疫粘合素，抗TrkA抗體，抗p75抗體，和激酶抑制劑。為了本發明的目的，應當明確地認識到術語「拮抗劑」包括所有先前鑑別的術語、名稱和功能狀態和特性，它們可以引起NGF自身、NGF生物活性(包括但不限於NGF介導疼痛之任何方面的能力)或該生物活性的結果以任何有意義的程度被實質上無效、降低或中和。在某些實施方案中，NGF拮抗劑(例如，抗體)結合(物理上相互作用於)NGF，結合NGF受體(諸如trkA受體和/或p75受體)，和/或降低(阻礙和/或阻滯)下遊NGF受體信號。由此，在某些實施方案中，NGF拮抗劑結合(物理上相互作用於)NGF。在其它實施方案中，NGF拮抗劑結合NGF受體(諸如TrkA受體或p75)。在其它實施方案中，NGF拮抗劑降低(阻礙和/或阻滯)下遊NGF受體信號(例如，激酶信號的抑制劑)。在其它實施方案中，NGF拮抗劑抑制(減少)NGF合成和/或釋放。在另一實施方案中，NGF拮抗劑是TrkA免疫粘合素。在另一實施方案中，NGF拮抗劑不是抗NGF抗體。在某些實施方案中，NGF拮抗劑結合NGF(諸如hNGF)且不顯著性結合相關神經營養蛋白，諸如NT-3，NT4/5，和/或BDNF。在其它實施方案中，NGF拮抗劑是抗NGF抗體。而在其它實施方案中，抗NGF抗體是人源化的(諸如本文所述的抗體E3)。在某些實施方案中，抗NGF抗體是抗體E3(如本文所述)。在其它實施方案中，抗NGF抗體包括抗體E3的一個或多個CDR(s)(諸如一個、兩個、三個、四個、五個，或在一些情況下所有六個來自E3的CDRs)。在其它實施方案中，抗體是人的。而在其它實施方案中，抗NGF抗體包括表1中所示重鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO1)和表2中所示輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO2)。而在其它實施方案中，抗體包括修飾的恆定區，諸如免疫學上惰性的恆定區，例如，該恆定區不能觸發補體介導的細胞裂解，或不能刺激抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)。在其它實施方案中，恆定區按照Eur.J.Immunol.(1999)292613-2624；PCT申請序號PCT/GB99/01441；和/或UK專利申請序號9809951.8中所述進行修飾。
抗NGF抗體在本發明的某些實施方案中，NGF拮抗劑包括抗NGF抗體。抗NGF抗體應表現出以下任何一種或多種特徵(a)結合NGF；(b)抑制NGF生物活性或由NGF信號功能介導的下遊通路；(c)預防或治療疼痛的任何方面，特別是在與阿片樣鎮痛劑聯合的情況下；(d)阻滯或降低NGF受體活化(包括TrkA受體二聚化和/或自磷酸化)；(e)增加NGF的清除；(f)抑制(減少)NGF合成、生成或釋放；(g)增強疼痛的阿片樣藥劑治療。
抗NGF抗體是本領域已知的，參見例如，PCT公開序號WO01/78698，WO 01/64247，美國專利5,844,092、5,877,016和6,153,189；Hongo等，Hybridoma，19215-227(2000)；Cell.Molec.Biol.13559-568(1993)；GenBank登記序號U39608、U39609、LI 7078或L 17077。
在某些實施方案中，抗NGF抗體是命名為抗體「E3」的人源化小鼠抗NGF單克隆抗體，其包括人類重鏈IgG2a恆定區(其中包含以下突變A330P331至S330S331(胺基酸編號參照野生型IgG2a序列；參見Eur.J.Immunol.(1999)292613-2624))；人類輕鏈κ恆定區；以及表1和2所示的重鏈和輕鏈可變區。
表1重鏈可變區QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVS(SEQ ID NO1)。
表2輕鏈可變區DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRT(SE Q ID N02)。
編碼E3重鏈可變區或E3輕鏈可變區的下列多核苷酸於2003年1月8日保藏於ATCC。
載體Eb.911.3E是編碼表2中所示輕鏈可變區的多核苷酸；載體Eb.pur.911.3E是編碼表2中所示輕鏈可變區的多核苷酸而載體Db.911.3E是編碼表1中所示重鏈可變區的多核苷酸。
在另一實施方案中，抗NGF抗體包括抗體E3的一個或多個CDR(s)(諸如一個、兩個、三個、四個、五個，或在一些情況下所有六個來自E3的CDRs)。確定CDR區是本領域中眾所周知的技術。
可用於本發明的抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片段(例如，Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、Fc等)、嵌合抗體、雙特異性抗體、雜綴合抗體(heteroconjugate antibody)、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白質、人源化抗體和包含具有所需特異性的抗原識別位點的免疫球蛋白分子的任何其它修飾的構型，包括抗體的糖基化變體，抗體的胺基酸序列變體和共價修飾的抗體。抗體可以是小鼠源、大鼠源、人源或任何其它來源的(包括嵌合的或人源化抗體)。為了本發明的目的，抗體以抑制NGF和/或由NGF信號功能介導的下遊通路的方式與NGF反應。而一個實施方案中，抗體是人類抗體，其識別人類NGF上的一個或多個表位。在另一實施方案中，抗體是小鼠或大鼠抗體，其識別人類NGF上的一個或多個表位。在另一實施方案中，抗體識別選自以下的NGF上的一個或多個表位靈長動物、犬、貓、馬和牛的NGF。在其它實施方案中，抗體包括修飾的恆定區，諸如免疫學上惰性的恆定區，例如，該恆定區不能觸發補體介導的裂解，或不能刺激抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)。ADCC活性可採用美國專利號5,500,362中所述方法進行評估。在其它實施方案中，恆定區按照Eur.J.Immunol.(1999)292613-2624；PCT申請序號PCT/GB99/01441；和/或UK專利申請序號9809951.8中所述進行修飾。
抗NGF抗體對NGF(諸如hNGF)的結合親和力可以是約0.10至約0.80nM、約0.15至約0.75nM和約0.18至約0.72nM。在一些實施方案中，結合親和力是約2pM、約5pM、約10pM、約15pM、約20pM、約40pM或大於約40pM。而一個實施方案中，結合親和力為約2pM-22pM。在其它實施方案中，結合親和力小於約100nM，約50nM，約10nM，約1nM，約500pM，約100pM，約50pM，約10pM。在某些實施方案中，結合親和力為約10nM。在其它實施方案中，結合親和力小於約10nM。在其它實施方案中，結合親和力為約0.1nM或約0.07nM。在其它實施方案中，結合親和力小於約0.1nM，或小於約0.07nM。在其它實施方案中，結合親和力為約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM或約50pM的任一項至約2pM、約5pM、約10pM、約15pM、約20pM或約40pM的任一項。在某些實施方案中，結合親和力為約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM或約50pM的任一項，或小於約50pM。而在其它實施方案中，結合親和力為約2pM、約5pM、約10pM、約15pM、約20pM、約40pM或大於約40pM。
測定抗體對NGF的結合親和力的一個方法是檢測抗體的單功能性Fab片段的結合親和力。為了獲得單功能性Fab片段，可用木瓜蛋白酶酶切或重組表達抗體(例如，IgG)。抗體的抗NGF Fab片段的親和力可通過表面等離子共振(BlAcore3000TM表面等離子共振(SPR)系統，BIAcore，INC，Piscaway NJ)進行測定。CM5晶片可用N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)根據廠商說明書進行活化。人類NGF可在10mM醋酸鈉pH 4.0中稀釋，並以0.005mg/mL的濃度注射到活化的晶片上。採用跨各晶片通道的變化流動時間，得到兩個範圍的抗原密度用於詳細動力學研究的100-200反應單位(RU)以及用於篩選試驗的500-600RU。該晶片可用乙醇胺封閉。再生研究顯示出，Pierce洗脫緩衝液(產品號21004，Pierce Biotechnology，Rockford IL)和4M NaCl(2∶1)的混合物經過注射200次以上，能有效地除去結合的Fab，而在晶片上保留hNGF的活性。HBS-EP緩衝液(0.01M HEPES，pH 7.4，0.15 NaCl，3mM EDTA，0.005％表面活性劑P29)被用作BIAcore測定的運行緩衝液。純化的Fab樣品的連續稀釋物(0.1-10×估計的KD)以100μL/分鐘注射1分鐘，允許多達2小時的解離時間。Fab蛋白質的濃度通過ELISA和/或SDS-PAGE電泳，採用已知濃度的Fab(通過胺基酸分析測定的)作為標準進行測定。通過採用BIA評估程序，將數據與1∶1 Langmuir結合模型(Karlsson，R.Roos，H.Fagerstam，L. Petersson，B.(1994).MethodsEnzymology 6.99-110)相擬合而同時得到動力學締合速率(kon)和解離速率(koff)。以kon/koff計算平衡解離常數(KD)值。該方案適用於測定抗體對任何物種的NGF的結合親和力，所述任何物種的NGF包括人類NGF，其它脊椎動物的NGF(在某些實施方案中，哺乳動物)(諸如小鼠NGF、大鼠NGF、靈長類NGF)，並且該方案也適用於與其它神經營養蛋白，諸如相關的神經營養蛋白NT3，NT4/5和/或BDNF一起使用。
在某些實施方案中，抗體結合人類NGF，而不顯著性結合來自其它脊椎動物物種(在某些實施方案中，哺乳動物)的NGF。在某些實施方案中，抗體結合人類NGF以及來自其它脊椎動物物種(在某些實施方案中，哺乳動物)的一種或多種NGF。而在其它實施方案中，抗體結合NGF，且不顯著性地與其它神經營養蛋白(諸如相關的神經營養蛋白，NT3，NT4/5和/或BDNF)發生交叉反應。在某些實施方案中，抗體結合NGF以及至少一種其它神經營養蛋白。在某些實施方案中，抗體結合哺乳動物物種的NGF，諸如馬或犬的，但不顯著性結合來自其它哺乳動物物種的NGF。
表位可以是連續的或不連續的。而一個實施方案中，抗體與選自以下的抗體基本上結合相同的hNGF表位MAb 911、MAb 912和MAb 938，如Hongo等，Hybridoma，19215-227(2000)中所述。在另一實施方案中，抗體與MAb 911基本上結合相同的hNGF表位。而在另一實施方案中，抗體與MAb 909基本上結合相同的表位。Hongo等，如上。例如，表位可包括以下之一或多個hNGF的可變區1(胺基酸23-35)中的殘基K32、K34和E35；hNGF的可變區4(胺基酸81-88)中的殘基F79和T81；可變區4中的殘基H84和K88；hNGF的可變區5(胺基酸94-98)和hNGF的C末端(胺基酸111-118)之間的殘基R103；hNGF的前可變區(pre-variableregion)1(胺基酸10-23)中的殘基Ell；hNGF的可變區2(胺基酸40-49)和hNGF的可變區3(胺基酸59-66)之間的Y52；hNGF的C末端中的殘基L112和S113；hNGF的可變區3中的殘基R59和R69；或hNGF的前可變區1中的殘基V18、V20和G23。此外，表位可以包括hNGF的可變區1，可變區3，可變區4，可變區5，N末端區和/或C末端區的一個或多個。而在另一實施方案中，抗體顯著性降低hNGF的殘基R103的溶劑可達性。應當理解，雖然上述表位涉及人類NGF，但本領域技術人員能將人類NGF的結構和其它物種的NGF相比對，並鑑別這些表位的可能對應物。
在一個方面中，能夠抑制NGF的抗體(例如，人的，人源化的，小鼠的，嵌合的)可通過採用表達NGF的全長或部分序列的免疫原進行製備。另一方面，可使用包含過表達NGF的細胞的免疫原。可使用的免疫原的另一實例是包含全長NGF或NGF蛋白質的部分的NGF蛋白質。
抗NGF抗體可通過本領域已知的任何方法製備。宿主動物免疫接種的途徑和方案通常與用於抗體刺激和製備的成熟常規技術保持一致，如本文進一步所述的。製備人類和小鼠抗體的一般技術是本領域已知的，並已被本文公開。
可以想到，任何哺乳動物受試者(包括人類)或來自其的產生抗體的細胞均可被操作以便作為製備哺乳動物(包括人類)雜交瘤細胞系的基礎。典型地，用一定量的免疫原(包括如本文所述的)經腹膜內、肌內、口服、皮下、足底內和/或皮內接種宿主動物。
雜交瘤可由淋巴細胞和永生化骨髓瘤細胞製備，其中採用Kohler，B.和Milstein，C.(1975)Nature 256495-497的一般體細胞雜交技術或按Buck，D.W.等，In Vitro，18377-381(1982)所修飾的技術。現有的骨髓瘤細胞系(包括但不限於X63-Ag8.653和來自Salk Institute，Cell DistributionCenter，San Diego，Calif.，USA的那些細胞系)可用於雜交。一般地，該技術包括採用促融劑諸如聚乙二醇，或通過本領域技術人員眾所周知的電方法來融合骨髓瘤細胞和淋巴樣細胞。融合後，從融合培養基中分離細胞然後在選擇性生長培養基諸如次黃嘌呤-氨基喋呤-胸苷(HAT)培養基中生長，以清除未雜交的親本細胞。本文所述任何培養基(添加或未添加血清)均可用於培養分泌單克隆抗體的雜交瘤。作為細胞融合技術的另一可選方式，由EBV永生化的B細胞可被用於產生本發明的抗NGF單克隆抗體。將雜交瘤擴增並亞克隆，如有需要，通過常規免疫測定方法(例如，放射免疫測定、酶免疫分析法或螢光免疫分析)對上清液檢測抗免疫原活性。
可作為抗體來源的雜交瘤包括能夠產生特異性針對NGF或其部分的單克隆抗體的親本雜交瘤的所有衍生物、後代細胞。
採用已知的方法可在體外或體內生長能產生所述抗體的雜交瘤。通過常規的免疫球蛋白純化方法，諸如硫酸銨沉澱、凝膠電泳、透析、色譜法和超濾(如需要)，可從培養基或體液中分離單克隆抗體。如果存在不需要的活性，可通過，例如，將製品過由附著於固相的免疫原製成的吸附劑和從免疫原上洗脫或釋放所需抗體而將不需要的活性除去。採用人類NGF或包含靶胺基酸序列的片段(通過雙功能性試劑或衍生化試劑，例如馬來醯亞胺苯甲醯基磺基琥珀醯亞胺酯(通過半胱氨酸殘基的綴合)，N-羥基琥珀醯亞胺(通過賴氨酸殘基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOC12或R1N＝C＝NR(其中R和R1是不同的烷基基團)而與在要免疫的物種中具有免疫原性的蛋白質(例如，匙孔蟲戚血蘭蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑)綴合)，免疫宿主動物，可產生抗體群(例如，單克隆抗體)。
如有需要，可對感興趣的抗NGF抗體(單克隆或多克隆)測序，然後將多核苷酸序列克隆至載體中來表達或增殖。編碼目的抗體的序列可被保持於宿主細胞的載體中，然後可將宿主細胞擴增並冷凍備用。在可選的方式中，多核苷酸序列可被用於遺傳操作以對抗體「人源化」或增強抗體的親和力或抗體的其它特徵。例如，如果抗體被用於人類臨床試驗和治療，可以對恆定區進行工程化處理以便更加類似人類恆定區從而避免免疫反應。可能需要對抗體序列進行遺傳操作以便獲得對NGF更高的親和力和抑制NGF的更高效能。對本領域技術人員來說很明顯的是，可以對抗NGF抗體進行一個或多個多核苷酸的改變而仍保留其與NGF的結合能力。
對單克隆抗體人源化有四個一般步驟。它們是(1)確定起始抗體輕和重可變區的核苷酸和預測的胺基酸序列(2)設計人源化抗體，即，決定在人源化過程中使用何種抗體構架區(3)實際的人源化方法學/技術和(4)轉染和表達人源化抗體。參見，例如，美國專利序號4,816,567；5,807,715；5,866,692；6,331,415；5,530,101；5,693,761；5,693,762；5,585,089和6,180,370。
包含來源於非人類免疫球蛋白的抗原結合位點的大量「人源化」抗體分子已被公開，包括具有與人類恆定區融合的嚙齒類或修飾的嚙齒類V區和其相關互補決定區(CDRs)的嵌合抗體。參見，例如，Winter等，Nature349293-299(1991)，Lobuglio等，Proc.Nat.Acad.Sci. USA 864220-4224(1989)，Shaw等，J Immunol.1384534-4538(1987)和Brown等，CancerRes.473577-3583(1987)。其他參考文件公開了將嚙齒類CDRs在與適宜的人類抗體恆定區融合前植入人類支持構架區(FR)中。參見，例如，Riechmann等，Nature 332323-327(1988)，Verhoeyen等，Science 2391534-1536(1988)和Jones等，Nature 321522-525(1986)。另一參考文件公開了由重組鑲嵌的嚙齒類構架區支持的嚙齒類CDRs。參見，例如，歐洲專利公開號519596。這些「人源化」分子的設計目的在於將針對嚙齒類抗人抗體分子的不需要的免疫反應最小化，所述免疫反應限制了這些部分在人類受者中治療應用的持續時間和功效。還可使用的抗體人源化的其它方法被公開於Daugherty等，Nucl.Acids Res.192471-2476(1991)和美國專利序號6,180,377；6,054,297；5,997,867；5,866,692；6,210,671和6,350,861和PCT公開序號WO01/27160中。
而在另一可選方式中，完全人類抗體可通過使用商業小鼠獲得，所述小鼠已被工程操作以表達特異性人類免疫球蛋白。被設計為產生更需要的(例如，完全人類抗體)或更強的免疫反應的轉基因動物也可用於生成人源化或人類抗體。所述方法的實例為Abgenix公司(Fremont，CA)的XenomouseTM和Medarex公司(Princeton，NJ)的HuMAb-Mouse和TCMouseTM。
顯而易見的是，雖然上述內容涉及人源化抗體，但所公開的一般原理也適用於定製抗體而用於，例如，犬、貓、靈長類、馬和牛中。此外顯而易見的是，本文所述抗體人源化的一個或多個方面可與，例如CDR移植、構架突變和CDR突變聯合。
在一個可選方式中，抗體可採用本領域已知的任何方法重組地製備和表達。在另一可選方式中，抗體可通過噬菌體展示技術而重組地製備。參見，例如，美國專利序號5,565,332；5,580,717；5,733,743和6,265,150；和Winter等，Annu.Rev.Immunol.12433-455(1994)。可選地，噬菌體展示技術(McCafferty等，Nature 348552-553(1990))可被用於從來自未免疫供者的免疫球蛋白可變(V)區基因庫中體外製備人類抗體和抗體片段。根據該技術，將抗體V區基因以符合讀框方式克隆至絲狀噬菌體諸如M13或fd的主要或次要外殼蛋白基因中，並以功能性抗體片段而展示在噬菌體顆粒的表面上。因為絲狀噬菌體顆粒包括噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，基於抗體功能特性的選擇也導致選擇出編碼展示這些特性的抗體的基因。由此，噬菌體模擬了B細胞的某些特性。噬菌體展示可以以多種方式實施，綜述參見例如，Johnson，Kevin S.和Chiswell，David J.，Current Opinion inStructural Biology 3，564-571(1993)。幾種V基因區段來源可被用於噬菌體展示。Clackson等，Nature 352624-628(1991)從來自免疫小鼠的脾的V基因的小隨機組合文庫中分離了多種抗唑酮抗體。可構建來自未免疫人類供者的V基因庫，而且基本上根據Mark等，J Mol.Biol. 222581-597(1991)或Griffith等，EMBO J.12725-734(1993)所述技術可分離針對一系列不同抗原(包括自體抗原)的抗體。在天然免疫反應中，抗體基因以高速率累積突變(體細胞高變)。引入的某些改變將提供更高的親和力，展示高親和力表面免疫球蛋白的B細胞在隨後抗原攻擊期間被優先複製和分化。該天然過程可通過使用被稱為「鏈改組」(chain shuffling)的技術進行模擬，Marks，等，Biol/Technol.10779-783(1992))。在該方法中，通過噬菌體展示得到的「初級」人類抗體的親和力可通過隨後用獲自未免疫供者的V區基因天然突變體庫(repertoires)替換重和輕鏈V區基因而得以提高。該技術能夠生產具有pM-nM範圍親和力的抗體和抗體片段。製備非常大的噬菌體抗體庫的策略(也稱為「the mother-of-all libraries」)已被公開於Waterhouse等，Nucl.Acids Res.212265-2266(1993)。基因改組還可被用於從嚙齒類抗體中衍生人類抗體，其中人類抗體具有與起始嚙齒類抗體相似的親和力和特異性。根據該方法(也被稱為「表位印記」(epitopeimprinting))，通過噬菌體展示技術得到的嚙齒類抗體的重或輕鏈V區基因被人類V區基因庫替換，產生嚙齒類-人類嵌合體。在抗原上的選擇導致分離能恢復功能性抗原結合位點的人類可變區，即，表位支配(印記)配偶體的選擇。當重複該過程以便替換剩餘的嚙齒類V區時，得到人類抗體(參見PCT申請序號WO 93/06213，1993年4月1日公布)。與通過CDR移植的嚙齒類抗體傳統人源化不同，該技術提供了完全的人類抗體，其不含有嚙齒類來源的構架或CDR殘基。顯然，雖然上述內容涉及人源化抗體，但所述一般原則也適用於定製抗體在例如，犬、貓、靈長類、馬和牛中使用。
抗體可通過如下方法重組製備，即首先從宿主動物中分離抗體和產生抗體的細胞，得到基因序列，和使用該基因序列以在宿主細胞(例如，CHO細胞)中重組表達抗體。可使用的另一方法是在植物(例如，菸草)或轉基因乳中表達抗體序列。在植物或乳中重組表達抗體的方法已被公開。參見，例如，Peeters等，Vaccine 192756(2001)；Lonberg，N.和D.Huszar Int.Rev.Immunol 1365(1995)和Pollock，等，J Immunol Methods 231147(1999)。製備抗體衍生物，例如，人源化抗體、單鏈抗體等的方法是本領域已知的。
免疫測定法和流式細胞分選技術諸如螢光激活細胞分選術(FACS)也可被用於分離特異性針對NGF的抗體。
抗體可與多種不同的載體結合。載體可以是活性的和/或惰性的。眾所周知的載體的實例包括聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龍、澱粉酶、玻璃、天然和改性的纖維素、聚丙烯醯胺、瓊脂糖和磁石。根據本發明的目的，載體的性質可以是可溶的或不可溶的。本領域技術人員將能知曉用於結合抗體的其它適宜載體，或能夠採用常規實驗確定所述載體。
採用常規技術(例如，通過採用能夠特異性結合編碼單克隆抗體的重和輕鏈的基因的寡核苷酸探針)可很容易地對編碼單克隆抗體的DNA分離和測序。雜交瘤細胞是所述DNA的優選來源。一經分離，可將DNA置於表達載體中(諸如WO 87/04462中公開的表達載體)，然後將其轉染至不另外產生免疫球蛋白的宿主細胞諸如大腸桿菌細胞，猿COS細胞，中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞中，以便在重組宿主細胞中獲得單克隆抗體的合成。參見例如，PCT公開序號WO 87/04462。DNA還可通過如下方式進行修飾，例如，通過用人類重和輕鏈恆定區的編碼序列替換同源鼠序列(Morrison等，Proc.Nat.Acad.Sci.816851(1984))或通過將非免疫球蛋白多肽的編碼序列的全部或部分共價連接至免疫球蛋白的編碼序列。以該方式，製備具有本文所述抗NGF單克隆抗體的結合特異性的「嵌合」或「雜合」抗體。
抗NGF抗體可採用本領域眾所周知的方法進行表徵。例如，一種方法是鑑別其結合的表位，或「表位作圖」。本領域中存在多種已知的用於蛋白質上表位的定位的作圖和表徵方法，包括解析抗體-抗原複合物的晶體結構，競爭測定法，基因片段表達測定法和基於合成肽的測定法，其被描述於，例如，Harlow和Lane，抗體使用，實驗室手冊(Using Antibodies，a Laboratory Manual)，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，New York，1999的第11章中。在其它實例中，表位作圖可被用於測定抗NGF抗體所結合的序列。表位作圖可獲自多種商業來源，例如，Pepscan Systems(Edelhertweg 15，8219 PH Lelystad，The Netherlands)。表位可以是線性表位，即，包含在一段胺基酸序列中，或可以是由不一定包含在一段胺基酸序列中的多個胺基酸的三維相互作用形成的構象表位。可分離或合成(例如，重組地)具有各種長度的肽(例如，至少4-6個胺基酸長度)，並與抗NGF抗體用於結合測定法。在另一實例中，抗NGF抗體所結合的表位可通過採用來自NGF序列的重疊肽和測定其與抗NGF抗體的結合而在系統篩選中得以確定。根據基因片段表達測定法，編碼NGF的開放讀碼框被隨機或由特異性遺傳構建體進行片段化，然後測定表達的NGF片段與要被檢測的抗體的反應性。基因片段可通過，例如，PCR進行製備，然後在存在放射性胺基酸的情況下，於體外轉錄和翻譯為蛋白質。然後通過免疫沉澱和凝膠電泳測定抗體與放射性標記的NGF片段的結合。某些表位還可通過採用噬菌體顆粒表面上展示的大型隨機肽序列文庫(噬菌體文庫)進行鑑別。可選地，由重疊肽片段組成的確定文庫可被用在簡單結合測定法中檢測與試驗抗體的結合。在其它實例中，可實施抗原結合域的誘變，域交換試驗和丙氨酸掃描誘變以便鑑別對於實現表位結合而言需要的、足夠的和/或必須的殘基。例如，可採用突變NGF實施域交換試驗，所述突變NGF中，NGF多肽的不同片段已被來自非常相關的、但抗原性不同的蛋白質(諸如神經營養蛋白家族的其它成員)的序列替換(交換)。通過評估抗體對突變NGF的結合，可評估特定NGF片段對抗體結合的重要性。
而可用於表徵抗NGF抗體的另一方法是使用已知結合相同抗原(即，NGF上的各種片段)的其它抗體的競爭測定法，以測定抗NGF抗體是否與其它抗體結合相同的表位。競爭測定法是本領域技術人員眾所周知的。可用於本發明的競爭測定法的抗體的實例包括MAb 911，912，938，如Hongo等，Hybridoma 19215-227(2000)中所述。
其它NGF拮抗劑可使用非抗NGF抗體的NGF拮抗劑。在本發明的某些實施方案中，NGF拮抗劑包括至少一種能夠阻滯或降低功能性NGF表達的反義分子。NGF的核苷酸序列是已知的，可很容易地從公眾可得到的資料庫中獲得。參見例如，Borsani等，Nuc.Acids Res.1990，18，4020；登錄號NM 002506；Ullrich等，Nature 303821-825(1983)。製備能夠特異性結合NGF mRNA而不與其它多核苷酸發生交叉反應的反義寡核苷酸分子是常規的方法。靶向的實例性位點包括，但不限於，起始密碼子，5′調節區，編碼序列和3′非翻譯區。在某些實施方案中，寡核苷酸的長度為約10-100個核苷酸，長度為約15-50個核苷酸，長度為約18-25個核苷酸，或更多。寡核苷酸可包括本領域眾所周知的主鏈修飾諸如，硫代磷酸酯鍵和2′-O糖修飾。示例性反義分子包括美國公開序號20010046959中公開的NGF反義分子；還可參見http//www.rna-tec.com/repair.htm。
在其它實施方案中，NGF拮抗劑包括至少一種能夠阻滯或降低功能性NGF受體(諸如TrkA和/或p75)表達的反義分子。Woolf等，J.Neuroscie(2001)21(3)1047-55；Taglialetela等，J Neurochem(1996)66(5)1826-35。TrkA和p75的核苷酸序列是已知的，並可很容易地從公眾可得到的資料庫中獲得。
可選地，採用基因敲除、嗎啉寡核苷酸、RNAi或核酶，以本領域眾所周知的方法可降低NGF表達和/或釋放。參見http//www.macalester.edu/～montgomery/RNAi.html；
http//pub32.ezboard.com/fmorpholinosfrml9.showMessage？topicID＝6.topic；http//www.highveld.com/ribozyme.html。
在其它實施方案中，NGF拮抗劑包括至少一種NGF抑制性化合物。本文所使用的「NGF抑制性化合物」是指除抗NGF抗體之外的化合物，其能夠直接或間接地減少、抑制、中和或終止NGF生物活性。NGF抑制性化合物應表現出以下任一項或多項特性(a)結合NGF；(b)抑制NGF生物活性或由NGF信號功能介導的下遊通路；(c)特別是與阿片樣鎮痛劑聯合，預防或治療疼痛的任何方面；(d)阻滯或降低NGF受體活化(包括TrkA受體二聚化和/或自磷酸化)；(e)增加NGF的清除；(f)抑制(減少)NGF合成、生成或釋放；(g)增強阿片劑的疼痛治療。示例性NGF抑制性化合物包括美國公開序號20010046959中所述的小分子NGF抑制劑；抑制NGF與p75結合的化合物，如PCT公開序號WO 00/69829中所述；抑制NGF與TrkA/p75結合的化合物，如PCT公開序號WO 98/17278中所述。NGF抑制性化合物的其它實例包括PCT公開序號WO 02/17914和WO02/20479中所描述的，以及美國專利序號5,342,942；6,127,401；和6,359,130中所描述的化合物。其它示例性NGF抑制性化合物是作為NGF的競爭性抑制劑的化合物。參見美國專利序號6,291,247。此外，本領域技術人員可製備其它小分子NGF抑制性化合物。
在某些實施方案中，NGF抑制性化合物結合NGF。靶向(結合)的示例性位點包括，但不限於，NGF中結合TrkA受體和/或p75受體的部分，和NGF中鄰近受體結合區的那些部分和負責(部分地)受體結合部分的正確三維形狀的那些部分。在另一實施方案中，NGF抑制性化合物結合NGF受體(諸如TrkA和/或p75)，並抑制NGF生物活性。靶向的示例性位點包括TrkA和/或p75中結合NGF的那些部分。
在包含小分子的實施方案中，小分子的分子量可以是約100-20,000道爾頓，500-15,000道爾頓，或1000-10,000道爾頓。小分子的文庫可通過商業獲得。小分子可採用本領域任何已知方法進行施用，包括吸入、腹膜內、靜脈內、肌內、皮下、鞘內、心室內、經口、經腸、腸胃外、鼻內或經皮。一些實施方案中，當NGF-拮抗劑是小分子時，其將以0.1-300mg/kg患者體重的比率，分為1-3或更多劑量進行施用。對於正常體重的成年患者，可施用範圍為1mg-5g/劑的劑量。
在其它實施方案中，NGF拮抗劑包括至少一種NGF結構類似物。本發明中的「NGF結構類似物」是指三維結構與NGF的部分三維結構相似並在生理條件下於體外或體內結合NGF受體的化合物。而一個實施方案中，NGF結構類似物結合TrkA和/或p75受體。示例性NGF結構類似物包括，但不限於，PCT公開序號WO 97/15593中所述二環肽；美國專利序號6,291,247中所述二環肽；美國專利號6,017,878中所述環狀化合物；和PCT公開序號WO 89/09225中所述源於NGF的肽。適宜的NGF結構類似物還可通過對NGF-受體結合進行分子模建，例如通過PCT公開序號WO 98/06048中所述方法進行設計和合成。NGF結構類似物可以是單體或是通過與相同或不同結構的任何所需組合形成的二聚體/寡聚體，以便得到提高的親和力和生物效應。
在其它實施方案中，本發明提供了包含至少一種TrkA受體和/或p75受體的顯性失活突變體的NGF拮抗劑。本領域技術人員可製備例如，TrkA受體的顯性失活突變體以便使該受體結合NGF並由此作為「槽子」(sink)俘獲NGF。然而，顯性失活突變體在結合NGF後不具有受體(例如TrkA受體)的正常生物活性。示例性顯性失活突變體包括，但不限於，下述參考文件中公開的突變體Li等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1998，95，10884；Eide等，J.Neurosci.1996，16，3123；Liu等，J Neurosci 1997，17，8749；Klein等，Cell 1990，61，647；Valenzuela等，Neuron 1993，10，963；Tsoulfas等，Neuron 1993，10，975和Lamballe等，EMBO J 1993，12，3083，各參考文件均全文引入此處作為參考。顯性失活突變體可以用蛋白質形式或用可以在體內表達顯性失活突變體例如突變TrkA受體的表達載體形式進行施用。蛋白質或表達載體可採用本領域任何已知方法進行施用，諸如腹膜內、靜脈內、肌內、皮下、鞘內、心室內、經口、經腸、腸胃外、鼻內、經皮或通過吸入。例如，表達載體的施用包括局部或全身施用，包括注射、口服施用、基因槍或插入導管施用，及局部施用。本領域技術人員可很熟練地施用表達載體以獲得外源蛋白質在體內的表達。參見例如，美國專利序號6,436,908；6,413,942和6,376,471。
還可使用包含反義多核苷酸、表達載體或亞基因組多核苷酸的治療性組合物的靶向遞送。受體介導的DNA遞送技術已被公開於，例如，Findeis等，Trends Biotechnol.(1993)11202；Chiou等，Gene TherapeuticsMethods And Applications Of Direct Gene Transfer(J.A.Wolff，ed.)(1994)；Wu等，J.Biol.Chem.(1988)263621；Wu等，J Biol Chem.(1994)269542；Zenke等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1990)873655；Wu等，J.Biol.Chem.(1991)266338。包含多核苷酸的治療性組合物在基因治療方案中以約100ng至約200mg(或更多)DNA的量局部施用。在某些實施方案中，在基因治療過程期間還可施用小於約500ng、約500ng至約50mg、約1μg至約2mg、約5μg至約500μg和約20μg至約100μg的DNA或更高的濃度範圍。本發明的治療性多核苷酸和多肽可採用基因遞送運載體進行遞送。基因遞送運載體可以是病毒或非病毒來源的(通常參見，Jolly，Cancer Gene Therapy(1994)151；Kimura，Human Gene Therapy(1994)5845；Connelly，Human Gene Therapy(1995)1185；和Kaplitt，NatureGenetics(1994)6148)。所述編碼序列的表達可採用內源性哺乳動物啟動子或異源性啟動子和/或增強子進行引導。編碼序列的表達可以是組成性的或被調節的。
用於遞送所需多核苷酸和在所需細胞中實現表達的基於病毒的載體是本領域眾所周知的。示例性基於病毒的載體包括，但不限於，重組反轉錄病毒(參見例如，PCT公開序號WO 90/07936；WO 94/03622；WO 93/25698；WO 93/25234；WO 93/11230；WO 93/10218；WO 91/02805；美國專利序號5,219,740和4,777,127；GB專利號2,200,651；和EP專利號0 345 242)，基於甲病毒的載體(例如，辛德比斯病毒載體、塞姆利基森林病毒(ATCCVR-67，ATCC VR-1247)，羅斯河病毒(ATCC VR-373；ATCC VR-1246)和委內瑞拉馬腦炎病毒(ATCC VR-923；ATCC VR-1250；ATCC VR 1249；ATCC VR-532))，和腺相關病毒(AAV)載體(參見，例如，PCT公開序號WO 94/12649，WO93/03769；WO93/19191；WO 94/28938；WO 95/11984和WO 95/00655)。還可使用如Curiel，Hum.Gene Ther.(1992)3147中所述的，與死腺病毒相連接的DNA的施用。
還可使用非病毒遞送運載體和方法，包括但不限於，單獨地未與死腺病毒連接的或與之連接的聚陽離子濃縮的DNA(參見例如，Curiel，Hum.Gene Ther.(1992)3147)；與配體連接的DNA(參見例如，Wu，J Biol.Chem.(1989)26416985)；真核細胞遞送運載體細胞(參見例如，美國專利序號5,814,482；PCT公開序號WO 95/07994；WO 96/17072；WO 95/30763；和WO 97/42338)和核電荷中和或與細胞膜融合。還可使用裸DNA。示例性裸DNA導入方法已被公開於PCT公開序號WO 90/11092和美國專利序號5,580,859中。可作為基因遞送運載體的脂質體已被公開於美國專利序號5,422,120；PCT公開序號WO95/13796；WO94/23697；WO 91/14445；和EP專利號0524968。其它方法已被公開於Philip，Mol.Cell Biol.(1994)142411和Woffendin，Proc.Natl.Acad.Sci.(1994)911581中。
很明顯，表達載體可被用於指導任何本文所述的基於蛋白質的NGF拮抗劑(例如，抗NGF抗體，TrkA免疫粘合素等)的表達。例如，能夠阻滯(部分至全部阻滯)NGF和/或NGF生物活性的其它TrkA受體片段是本領域已知的。
在另一實施方案中，NGF拮抗劑包含至少一種TrkA免疫粘合素。本文所使用的TrkA免疫粘合素是指可溶性嵌合分子，其包含TrkA受體的胞外域(或其部分)和免疫球蛋白序列，其保留了TrkA受體的結合特異性(在一些實施方案中，基本上保留了trkA受體的結合特異性)，且能結合NGF。TrkA免疫粘合素能夠阻滯(降低和/或抑制)NGF生物活性，如本文所述。
TrkA免疫粘合素是本領域中已知的，且已發現其能阻滯(降低或抑制)NGF與TrkA受體的結合。參見，例如，美國專利序號6,153,189。一個實施方案中，TrkA免疫粘合素包括能夠結合NGF的TrkA受體胺基酸序列(或基本上保留了trkA受體的結合特異性的胺基酸序列)和免疫球蛋白序列(或基本上保留了trkA受體的結合特異性的胺基酸)的融合。在某些實施方案中，TrkA受體是人類TrkA受體序列，且所述融合是與免疫球蛋白恆定區序列的融合。在其它實施方案中，免疫球蛋白恆定區序列是免疫球蛋白重鏈恆定區序列。在其它實施方案中，兩個TrkA受體-免疫球蛋白重鏈融合物的締合(例如，藉助通過二硫鍵的共價鍵)產生同型二聚體免疫球蛋白樣結構。免疫球蛋白輕鏈可進一步與二硫鍵鍵合的二聚體中的一個或兩個TrkA受體-免疫球蛋白嵌合體締合以生成同型三聚體或同型四聚體結構。適宜的TrkA免疫粘合素的實例包括如美國專利序號6,153,189中所述的那些。
在另一實施方案中，NGF拮抗劑包含至少一種抗TrkA抗體，該抗體能阻滯、抑制、改變和/或降低NGF與TrkA受體的物理相互作用和/或下遊信號，由此降低和/或阻滯NGF生物活性。抗TrkA抗體是本領域已知的。示例性抗TrkA抗體包括如PCT公開序號WO 97/21732，WO00/73344，WO 02/15924和美國公開序號20010046959所述的那些。
在另一實施方案中，NGF拮抗劑包含至少一種抗p75抗體，該抗體能阻滯、抑制和/或降低NGF與p75受體的物理相互作用和/或下遊信號，由此降低和/或阻滯了NGF生物活性。
在另一實施方案中，NGF拮抗劑包含至少一種激酶抑制劑，該抑制劑能抑制與TrkA和/或p75受體活性相關的下遊激酶信號傳導。示例性激酶抑制劑是K252a或K252b，其是本領域已知的並已被公開於Knusel等，J.Neurochem.59715-722(1992)；Knusel等，J Neurochemistry 57955-962(1991)；Koizumi等，J.Neuroscience 8715-721(1988)；Hirata等，Chemical Abstracts 111728，XP00204135，參見摘要以及12th CollectiveChemical Substance Index，p.34237，c.3(5-7)，55-60，66-69)，p.34238，c.1(41-44)，c.2(25-27，32-33)，p.3423，c.3(48-50，52-53)和美國專利序號6,306,849。
可以預期，若臨床醫師需要，將可鑑定大量其它類型的NGF拮抗劑。
NGF拮抗劑的鑑定採用本領域已知的方法，可對抗NGF抗體和其它NGF拮抗劑進行鑑定和特徵描述，其中由所述已知方法可檢測和/或測定NGF生物活性的降低、改善或中和。例如，美國專利序號5,766,863和5,891,650中公開的激酶受體活化(KIRA)測定法可用於鑑定NGF拮抗劑，該ELISA型測定法適於定性或定量地檢測激酶的活化(其中測定受體蛋白酪氨酸激酶(以下稱為「rPTK」)，例如TrkA受體的激酶結構域的自磷酸化作用)，以及適用於鑑定和表徵選擇的rPTK，例如，TrkA的可能拮抗劑。此測定法的第一階段包括激酶受體(例如，TrkA受體)的激酶結構域的磷酸化，其中受體存在於真核細胞的細胞膜中。該受體可以是內源性受體或可以將編碼受體或受體構建體的核酸轉化至細胞中。典型地，第一固相(例如，第一測定板的孔)用基本上均質的所述細胞群(通常是哺乳動物細胞系)進行包被，以便將細胞粘附於固相。通常，細胞具有貼壁性，由此自然地粘附於第一固相。如果使用「受體構建體」，其通常包含激酶受體和Flag多肽的融合。Flag多肽在此測定法的ELISA部分中被俘獲劑(常是俘獲抗體)識別。然後，將分析物，諸如候選抗NGF抗體或其它NGF拮抗劑，與NGF一同加入具有貼壁細胞的孔中，由此將酪氨酸激酶受體(例如TrkA受體)暴露於(或接觸)NGF和分析物。該測定法能夠鑑定可抑制TrkA的配體NGF對TrkA的活化的抗體(或其他NGF拮抗劑)。在暴露於NGF和分析物之後，採用裂解緩衝液(其中含有增溶性去汙劑)以溶解貼壁的細胞，然後輕柔攪拌，由此釋放細胞裂解產物，其可被直接用於本測定法的ELISA部分，而無須對細胞裂解產物濃縮或澄清化。
然後將由此製備的細胞裂解產物置於本測定法的ELISA階段。作為ELISA階段的第一步，用俘獲劑(常是俘獲抗體)包被第二固相(通常是ELISA微量滴定板的孔)，所述俘獲劑特異性結合酪氨酸激酶受體，或(在受體構建體的情況下)結合Flag多肽。對第二固相實施包被，以便使俘獲劑粘附於第二固相。俘獲劑一般是單克隆抗體，但，如本文實施例中所述，還可以使用多克隆抗體。然後將得到的細胞裂解產物暴露於，或接觸粘附的俘獲劑，以便使受體或受體構建體粘附於(或被俘獲於)第二固相。然後實施洗滌步驟，以便除去未結合的細胞裂解產物，而保留俘獲的受體或受體構建體。然後將粘附的或俘獲的受體或受體構建體暴露於或接觸能夠鑑定酪氨酸激酶受體中磷酸化的酪氨酸殘基的抗磷酸酪氨酸抗體。而一個實施方案中，抗磷酸酪氨酸抗體與酶綴合(直接或間接)，所述酶催化非放射性顏色試劑的顏色改變。由此，可通過隨後試劑的顏色改變而檢測受體的磷酸化。可將該酶直接結合於抗磷酸酪氨酸抗體，或可將綴合性分子(例如，生物素)綴合於抗磷酸酪氨酸抗體上，隨後可藉助此綴合性分子而將酶結合於抗磷酸酪氨酸抗體上。最終，例如，通過顏色試劑的顏色改變來檢測抗磷酸酪氨酸抗體與俘獲的受體或受體構建體的結合。
NGF拮抗劑還可通過將候選試劑和NGF孵育和監測以下一項或多項特性而進行鑑定(a)結合NGF；(b)抑制NGF生物活性或由NGF信號功能介導的下遊通路；(c)阻滯或降低NGF受體活化(包括TrkA受體二聚化和/或自磷酸化)；(d)增加NGF的清除；(e)特別是與阿片樣鎮痛劑聯合，預防、改善或治療疼痛的任何方面；(f)抑制(減少)NGF合成、生成或釋放；(g)增強疼痛的阿片樣藥劑治療。在某些實施方案中，NGF拮抗劑可通過將候選試劑和NGF孵育並監測結合及與之伴隨的NGF生物活性的降低或中和而進行鑑定。結合測定法可採用純化的NGF多肽，或採用天然表達或轉染表達NGF多肽的細胞來實施。而一個實施方案中，結合測定法是競爭性結合測定法，其中評估候選抗體與已知NGF拮抗劑競爭結合NGF的能力。該測定法可以用多種形式(包括ELISA形式)實施。在其它實施方案中，NGF拮抗劑可通過將候選試劑和NGF孵育並監測與之伴隨的對TrkA受體的二聚化和/或自磷酸化的抑制而進行鑑定。
初步鑑定後，可通過生物測定法(已知用於檢測靶向生物活性)來進一步證實和精細化候選抗NGF拮抗劑的活性。可選地，生物測定法可被用於直接篩選候選物。例如，NGF促進應答細胞中多種形態學上可識別的改變。其包括，但不限於，促進PC 12細胞的分化和增強神經突從這些細胞的生長(Urfer等，Biochem.364775-4781(1997)；Tsoulfas等，Neuron 10975-990(1993))，促進神經突從應答性感覺和交感神經節外植體向外生長(Levi-Montalcini，R.和Angeletti，P.神經生長因子，Physiol.Rev.48，534-569，1968)以及促進NGF依賴性神經元諸如胚胎背根神經節、三叉神經節或交感神經節神經元的存活(例如，Chun Patterson，Dev.Biol.75705-711，(1977)；Buchman Davies，Development 118989-1001，(1993)。由此，用於NGF生物活性抑制的測定法需要將NGF應答細胞與NGF加分析物，諸如候選抗NGF抗體或候選NGF拮抗劑一同培養。適宜時間後，測定細胞反應(細胞分化、神經突向外生長或細胞存活)。
候選NGF拮抗劑阻滯或中和NGF生物活性的能力還可通過監測候選劑在胚胎大鼠背根神經節存活生物測定法中抑制NGF介導的存活的能力而進行評估，如Hongo等，Hybridoma 19215-227(2000)中所述。
組合物本發明的組合物包含有效量的NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體)和/或阿片樣鎮痛劑，如本文多種實施方案中所述。在某些實施方案中，該組合物還包含藥學上可接受的賦形劑。在某些實施方案中，該組合物用於本文所述的任何方法中(諸如治療手術後疼痛的方法)。所述組合物以及其配製方法的實例也在前面和下面的章節中給出描述。NGF拮抗劑和阿片樣藥劑可存在於單一組合物中，或是分開的組合物中。由此，在某些實施方案中，NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑存在於相同組合物中。在其它實施方案中，NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑存在於分開的組合物中。
在另一方面中，本發明提供了NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑的協同性組合物。
在某些實施方案中，本發明提供了用於治療疼痛(諸如手術後疼痛)的包含NGF拮抗劑的藥物組合物，其中所述使用包括同時和/或相繼施用阿片樣鎮痛劑。在某些實施方案中，本發明提供了用於治療疼痛的包含阿片樣鎮痛劑的藥物組合物，其中所述使用包括同時和/或相繼施用NGF拮抗劑。在某些實施方案中，本發明提供了用於治療疼痛的、包含以分開、同時和/或相繼方式施用的NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑的藥物組合物。在某些實施方案中，NGF拮抗劑是抗NGF抗體(諸如本文所述的抗體E3)。在其它實施方案中，阿片樣鎮痛劑是嗎啡。而在其它實施方案中，NGF拮抗劑是抗NGF抗體而阿片樣鎮痛劑是嗎啡。
應當理解的是，組合物可包含一種以上NGF拮抗劑。例如，組合物可包含一類NGF拮抗劑的一個以上成員(例如，能識別NGF不同表位的抗NGF抗體的混合物)，以及不同類NGF拮抗劑的成員(例如，抗NGF抗體和NGF抑制性化合物)。其它示例性組合物包含一種以上識別相同表位的抗NGF抗體、結合NGF不同表位的不同種抗NGF抗體或不同的NGF抑制性化合物。在其它實施方案中，組合物包含一種或多種選自以下的NGF拮抗劑結合(物理上相互作用於)NGF的拮抗劑(例如，抗體)，結合NGF受體(諸如trkA受體或p75受體)的拮抗劑，和/或降低(阻礙和/或阻滯)下遊NGF受體信號的拮抗劑。
本發明使用的組合物可進一步包含藥學上可接受的載體、賦形劑或穩定劑(RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy 20th Ed.(2000)Lippincott Williams和Wilkins，Ed.K.E.Hoover.)，以凍幹製劑或水溶液的形式。可接受的載體、賦形劑或穩定劑在劑量和濃度上對受者是無毒的，其可包括緩衝液諸如磷酸鹽、枸櫞酸鹽和其它有機酸；包括維生素C和甲硫氨酸的抗氧化劑；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲氯銨；苯扎氯銨，苄索氯銨，酚，丁基或苄基醇；對羥苯甲酸烷基酯諸如對羥基苯甲酸甲基或丙基酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇和間甲苯酚)；低分子量(低於約10個殘基)多肽；蛋白質諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物諸如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸諸如甘氨酸、穀氨醯胺、天冬醯胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖，二糖和其它糖類包括葡萄糖、甘露糖或右旋糖酐；螯合劑諸如EDTA；糖諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽性反荷離子諸如鈉；金屬複合物(例如Zn蛋白質複合物)；和/或非離子表面活性劑諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。本文進一步描述了藥學上可接受的賦形劑。
本文所述的組合物可包括已知可用於治療疼痛的其它化合物。NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑，及其組合物還可以與增強和/或補充藥劑的功效的其它藥劑聯合使用。
藥盒本發明還提供了用於本發明方法的藥盒。本發明的藥盒包括一個或多個包含NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體，諸如本文所述的人源化抗體E3)和/或阿片樣鎮痛劑的容器，而在某些實施方案中，還包括根據本發明的任何方法進行使用的說明書。在某些實施方案中，藥盒包括抗NGF抗體(諸如本文所述的抗體E3)。在其它實施方案中，藥盒包括抗NGF抗體，該抗體包含抗體E3的一個或多個CDR(s)(諸如一個、兩個、三個、四個、五個，或在一些實施方案中所有六個來自E3的CDRs)。藥盒還可包括根據鑑別個體是否具有疼痛或個體是否有發生疼痛的危險而選擇適用於治療的個體的說明書。在某些實施方案中，本發明提供了用於本發明所述任何方法的藥盒，所述藥盒包括NGF拮抗劑。而在其它實施方案中，藥盒包含抗體(諸如本文所述的抗體E3)。而在其它實施方案中，說明書包括關於聯合施用NGF拮抗劑及阿片樣鎮痛劑來治療、預防和/或改善任何疼痛(諸如手術後疼痛)的說明。
在某些實施方案中，藥盒包括NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體)，阿片樣鎮痛劑，和同時和/或相繼施用NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑以有效治療疼痛的說明書。在另一實施方案中，藥盒包括NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體)，和同時和/或相繼施用NGF抗體和阿片樣鎮痛劑以有效治療疼痛的說明書。在其它實施方案中，藥盒包括NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體)，和阿片樣鎮痛劑(諸如嗎啡)，和分開、同時和/或相繼施用NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑以有效治療疼痛的說明書。
在某些實施方案中，藥盒包括抗NGF抗體。在其它實施方案中，抗NGF抗體是包含表1中所示重鏈可變區和表2中所示輕鏈可變區的抗體。而在其它實施方案中，抗NGF抗體是本文所述的抗體E3。
NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體)和阿片樣鎮痛劑可存在於分開的容器中或在單個容器中。應當理解，藥盒可包括獨立的一種組合物或兩種或多種組合物(其中一種組合物包括NGF拮抗劑而一種組合物包括阿片樣鎮痛劑)。
本發明的藥盒是適宜的包裝形式。適宜的包裝形式包括，但不限於小瓶、瓶、罐、軟包裝(例如，密封Mylar或塑膠袋)，等。藥盒可任選地提供其它組分諸如緩衝液和說明信息。
關於使用NGF拮抗劑的說明書一般包括這樣的信息，即，用於預期治療的劑量、給藥方案和給藥途徑。容器可以是單位劑量、大包裝(例如，多劑量包裝)或亞單位劑量。本發明的藥盒中提供的說明書通常是寫於標籤或包裝插入物(例如，藥盒包含的紙片)上的說明書，但機器可讀說明書(例如，由磁或光存儲碟片攜帶的說明書)也是可接受的。
標籤或包裝插入物指明組合物用於治療、改善和/或預防手術後疼痛。說明書可被提供用於實施本文所述任何方法。
本發明的藥盒是適宜的包裝形式。適宜的包裝形式包括，但不限於小瓶、瓶、罐、軟包裝(例如，密封Mylar或塑膠袋)，等。聯合特定裝置，諸如吸入器、經鼻給藥裝置(例如，霧化器)或輸注裝置諸如微泵而進行使用的包裝也是可預期的。藥盒可具有無菌入口(例如容器可以是靜脈內給藥溶液袋或瓶，其具有可通過皮下注射針頭刺穿的塞子)。容器也可具有無菌入口(例如容器可以是靜脈內給藥溶液袋或瓶，其具有可通過皮下注射針頭刺穿的塞子)。組合物中至少一種活性成分是NGF拮抗劑，諸如抗NGF抗體。容器可進一步包含第二藥學上活性藥劑。
藥盒可任選地提供其它組分諸如緩衝液和說明信息。通常，藥盒包括容器和容器上的或與之連接的標籤或包裝插入物。
NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑的施用和治療評估NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑可藉助任何適宜的途徑施用於個體。例如，其可經口、靜脈內、舌下、皮下、動脈內、肌內、經直腸、脊柱內、胸內、腹膜內、心室內、舌下、透皮或通過吸入而一同或分開進行施用。它們可經口，例如以通過本領域已知的方法製備的片劑、錠劑、膠囊劑、酏劑、混懸劑、糖漿劑、糯米紙囊劑、咀嚼膠、棒棒糖(lolliopop)、栓劑等形式進行施用。對本領域技術人員顯而易見的，本文所述的實例並非意在限制而是用於例舉說明可用技術。
由此，在某些實施方案中，NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體)可按照已知的方法而被施用於個體，諸如靜脈內施用，例如，推注或經一段時間連續輸注，通過肌內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、滑膜內、鞘內、經口、吸入或局部途徑。商業上可獲得的用於液體製劑的霧化器(包括噴射霧化器和超聲霧化器)可用於施用。液體製劑可被直接霧化，而凍幹的粉末可在復水之後被霧化。可選地，NGF拮抗劑可採用碳氟化合物製劑和定量吸入器進行氣霧化，或以凍幹且研碎的粉末形式被吸入。
位點特異性的或靶向的局部遞送技術也可用於施用。位點特異性的或靶向的局部遞送技術的實例包括各種NGF拮抗劑和/或阿片樣鎮痛劑的可植入的貯存源或局部遞送導管，諸如輸注導管、留置導管或針頭導管，合成移植物，外膜包裹物(adventitial wraps)，分流器(shunt)和支架或其它可植入的裝置，位點特異性載體，直接注射，使用患者自控鎮痛(PCA)技術或裝置和/或直接施用。參見例如，PCT公開序號WO 00/53211和美國專利公開序號5,981,568。
NGF拮抗劑(諸如抗NGF抗體)的各種製劑均可被用於給藥。在某些實施方案中，NGF拮抗劑可單獨地進行施用。在某些實施方案中，NGF拮抗劑包括抗NGF抗體，且可以是各種製劑，包括包含藥學上可接受的賦形劑的製劑。藥學上可接受的賦形劑是本領域已知的，是相對惰性的物質，其能促進藥理學上有效的物質的施用。例如，賦形劑賦予形狀或稠度，或發揮稀釋劑的作用。適宜的賦形劑包括(但不限於)穩定劑、溼潤劑和乳化劑、改變摩爾滲透壓濃度的鹽、成膠囊劑、緩衝液和透皮促進劑。用於胃腸外和非胃腸外藥物遞送的賦形劑以及製劑已被公開於Remington，等，The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed.Mack Publishing(2000)。
在某些實施方案中，NGF拮抗劑可被製備為用於通過注射(例如，經腹膜內、靜脈內、皮下、肌內等)給藥的製劑。由此，這些藥劑可與藥學上可接受的載體諸如鹽水、林格氏液、葡萄糖溶液等組合。具體的劑量方案，即，劑量、給藥時間和重複，應根據具體的個體和個體的醫療史決定。劑量方案(包括使用的NGF拮抗劑)可隨時間改變。
施用抗NGF抗體可採用任何適宜的方法，包括經注射(例如，經腹膜內、靜脈內、皮下、肌內等)。抗NGF抗體還可經由吸入進行施用，如本文所述。一般地，對於施用抗NGF抗體，初始候選劑量可以是約2mg/kg。在某些實施方案中，典型的每日劑量可以是約3μg/kg至30μg/kg至300μg/kg至3mg/kg至30mg/kg至100mg/kg或更高，這要根據上述因素決定。對於在數日或更長時間(根據病症)內的重複施用，持續治療直至出現期望的症狀抑制或直至達到降低疼痛的足夠治療水平。示例性的劑量方案包括施用初始劑量為約2mg/kg，隨後抗NGF抗體的每周維續劑量為約1mg/kg，或隨後每隔一周維續劑量為約1mg/kg。然而，其它劑量方案也是可用的，這取決於醫師希望實現的藥代動力學衰減模式。例如，1-4次每周的劑量是可以預期的。其它劑量方案包括不超過1次/日，1-4次/周，或更低頻率的方案。在某些實施方案中，化合物可按約1次/周，約1-4次/月施用。本文中公開了抗NGF抗體的劑量。該治療的進展可通過常規技術和測定法而被很容易地監測。
在某些實施方案中，當NGF拮抗劑不是抗體時，根據本發明的NGF拮抗劑可(在某些實施方案中)按0.1-300mg/kg患者體重的速率分成1-3個劑量施用，或如本文所述施用。在某些正常體重的成年患者中，可以施用約0.3-5.00mg/kg的劑量。具體的劑量方案，即，劑量、給藥時間和重複，將取決於具體的個體和個體的醫療史，以及各藥劑的特性(諸如藥劑的半壽期，和本領域眾所周知的其它考慮因素)。
阿片樣鎮痛劑的施用劑量水平可以是不超過用於此類鎮痛劑的常規劑量水平的劑量水平。在某些實施方案中，阿片樣鎮痛劑以降低的水平施用。適宜的劑量水平要根據所選阿片樣鎮痛劑的鎮痛效果而定，但典型的適宜水平是約0.001-25mg/kg/日，約0.005-10mg/kg/日，或約0.05-1mg/kg/日，或更低。化合物的給藥方案可以是多達6次/日(或更多)，1-4次/日，或其可以以更低的頻率施用。在某些實施方案中，連續地，或非常頻繁地(如使用PCA)施用阿片樣鎮痛劑。
當聯合施用時(以單一或以分開的組合物)，神經生長因子拮抗劑和阿片樣鎮痛劑的比例將與表現出期望的效應相一致。在某些實施方案中，該比例按神經生長因子拮抗劑對阿片樣鎮痛劑的重量計，為大約1∶1。在某些實施方案中，該比例可以是約0.001∶約1至約1000∶約1，或約0.01∶約1至100∶約1。其它比例也是可預期的。
應當理解的是，神經生長因子拮抗劑和阿片樣鎮痛劑用於治療或預防疼痛所需要的量不僅會隨著具體所選的化合物或組合物而變化，還會隨著施用途徑、要治療的病症的性質和患者的年齡和狀態、治療過程或階段而變化，其最終取決於主治醫師的判斷。例如，NGF拮抗劑(例如抗NGF抗體)的適宜劑量取決於施用的NGF拮抗劑(或其組合物)，要治療的疼痛類型和嚴重度，藥劑是否被用於預防性或治療性目的，在先治療、患者的臨床史和對藥劑的反應，和主治醫師的判斷。典型地，臨床醫師將施用NGF拮抗劑，諸如抗NGF抗體，直至劑量達到可實現需要的結果的劑量。
經驗性考慮因素，諸如半壽期，一般將有助於對劑量的確定。例如，與人類免疫系統相容的抗體，諸如人源化抗體或完全人類抗體可被用於延長抗體的半壽期和防止抗體被宿主的免疫系統攻擊。施用頻率可在治療過程期間進行確定和調整，通常(但非必須地)這基於疼痛的治療和/或抑制和/或改善和/或延緩而定。可選地，NGF拮抗劑和/或阿片樣鎮痛劑的持久連續釋放製劑可能是適宜的。獲得持續釋放的多種製劑和裝置是本領域所已知的。
在一個實施方案中，在已一或多次接受NGF拮抗劑施用以治療疼痛的個體中可以經驗性地確定NGF拮抗劑的劑量。聯合阿片樣鎮痛劑，給予個體遞增劑量的NGF拮抗劑(例如，抗NGF抗體)。為了評估治療的功效，可跟蹤疼痛的指徵。
根據本發明的方法施用NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑可以是連續的或間斷的，這要依賴於例如受者的生理條件、施用目的是治療性的還是預防性的，以及本領域執業醫師已知的其它因素。NGF拮抗劑的施用可以是在一個預選的時間段內基本上連續的或可以是一系列的間隔給藥，例如，在疼痛發生之前；期間；或之後；疼痛發生之前和之後；期間和之後；之前和期間；或之前、期間和之後。例如，施用可以是在損傷、切割、創傷、手術和其它任何可能引起疼痛的事件之前、期間和/或之後。
在某些實施方案中，可存在一種以上NGF拮抗劑，諸如抗體。這些拮抗劑可以是彼此相同或彼此不同的。可存在至少一種、至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種或更多種不同的NGF拮抗劑。一般而言，所述NGF拮抗劑具有彼此間無不利影響的互補活性。NGF拮抗劑還可與增強和/或補充該藥劑的功效的其它藥劑聯合使用。
在某些實施方案中，可存在一種以上阿片樣鎮痛劑。這些阿片樣鎮痛劑彼此間可以是相同或不同的。可存在至少一種、至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種或更多種不同的阿片樣鎮痛劑。通常，這些阿片樣鎮痛劑具有不會彼此發生不良影響的互補活性。阿片樣鎮痛劑還可與能夠增強和/或互補藥劑效能的其它藥劑聯合使用。
根據本發明所使用的NGF拮抗劑(諸如抗體)和阿片樣鎮痛劑的治療性製劑可通過將具有所需純度的抗體與任選的藥學上可接受的載體、賦形劑或穩定劑(Remington，The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed.Mack Publishing(2000))混合而製備成凍幹製劑或水溶液的形式用於保藏。可接受的載體、賦形劑或穩定劑在所使用的劑量和濃度下不具有對受者的毒性，並可包括緩衝液諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸；鹽諸如氯化鈉；包括抗壞血酸和甲硫氨酸的抗氧化劑；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲氯銨；苯扎氯銨，苄索氯銨；苯酚，丁基或苄基醇；對羥苯甲酸烷基酯諸如對羥苯甲酸甲基或丙基酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和間甲苯酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物諸如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸諸如甘氨酸、穀氨醯胺、天冬醯胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖，和包括葡萄糖、甘露糖或糊精的其它糖類；螯合劑諸如EDTA；糖諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽性反荷離子諸如鈉；金屬複合物(例如Zn蛋白質複合物)；和/或非離子表面活性劑諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
包含NGF拮抗劑(諸如抗體)的脂質體可通過本領域已知的方法製備，所述方法諸如Epstein等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 823688(1985)；Hwang等，Proc.Natl Acad.Sci.USA 774030(1980)；和美國專利序號4,485,045和4,544,545中所示。美國專利序號5,013,556中公開了循環時間提高的脂質體。尤其有用的脂質體可通過採用脂質組合物的反相蒸發法來生成，所示脂質組合物包含磷脂醯膽鹼、膽固醇和聚乙二醇衍生的磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)。將脂質體擠壓通過具有確定孔徑的濾器，以便生成具有所需直徑的脂質體。
活性成分還可截留在膠體遞藥系統(例如，脂質體、白蛋白微球體、微乳劑、納米粒和納米囊)或粗乳劑中，或者在例如通過凝聚技術或通過界面聚合製備的微囊，例如，羥甲基纖維素或明膠微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊中。所述技術已被公開於Remington，The Science and Practice ofPharmacy 20th Ed.Mack Publishing(2000)中。
可製備緩釋製劑。緩釋製劑的適宜實例包括含有抗體的固體疏水聚合物的半透性基質，該基質的形式可以是成形物、例如膜，或微囊。緩釋基質的實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)，或聚(乙烯醇)、聚乳酸(美國專利號3,773,919)、L-穀氨酸和7-乙基-L-穀氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-醋酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物諸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射的微球體)、蔗糖醋酸異丁酸酯和聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
用於體內施用的製劑必須是無菌的。這可通過例如，經過除菌濾過膜的過濾而很容易地實現。治療性抗NGF抗體組合物通常被置於具有無菌入口的容器中，所述容器為例如，靜脈用溶液袋或瓶(其具有可通過皮下注射針頭刺穿的塞子)。
根據本發明的組合物可以是單位劑型諸如片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、溶液或混懸劑，或栓劑，而用於經口、非胃腸的或經直腸的使用，或通過吸入或吹入的施用。
為了製備固體組合物諸如片劑，將主要活性成分與藥學載體，例如常規壓片成分諸如玉米澱粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸氫鈣或樹膠和其它藥學稀釋劑，例如水，混合，以形成包含本發明化合物或其無毒性藥學上可接受鹽的均質混合物的固體預製組合物(preformulation composition)。當提及這些預製組合物為均質形式時，其意指活性成分均勻地分散於整個組合物中以致使組合物可易於細分為同等有效的單位劑型諸如片劑、丸劑和膠囊劑。該固體預製組合物然後被細分為上述類型的單位劑型，其中包含約0.01mg-約0.1mg-500mg本發明的活性成分。新型組合物的片劑或丸劑可被包衣或複合以生成能提供長效優勢的劑型。例如，片劑或丸劑可包括內部劑量和外部劑量組分，後者為包封在前者上的形式。該兩種組分可被腸衣分開，腸衣的作用在於抵抗胃內崩解和使內部組分可完好地進入十二指腸或延遲釋放。多種材料可用於所述腸衣或包衣層，這些材料包括多種聚合酸(polymeric acid)和聚合酸與諸如紫膠、鯨蠟醇和乙酸纖維素的材料的混合物。
本發明的組合物可摻入用於經口或注射給藥的液體形式中，該液體形式包括水溶液、適當調味的糖漿劑、水性或油性混懸劑，和採用食用油諸如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油的調味乳劑，以及酏劑和相似的藥學載體。適用於水性懸浮液的分散劑或懸浮劑包括合成和天然的樹膠諸如西黃蓍膠、阿拉伯膠、藻酸鹽、右旋糖酐、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。活性成分還可被摻入高粘性的控釋產品諸如蔗糖醋酸異丁酯或其它產品中。這些製劑可被用於口服給藥或注射。該注射可導致藥物的局部貯存，其可在1日至3個月的時期內在局部釋放。
用於經注射給藥的組合物包括含有NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑作為活性成分以及表面活性劑(或溼潤劑或表面活性劑)或乳劑形式(如油包水或水包油乳劑)的那些組合物。
適宜的表面活性劑包括，特別是，非離子表面活性劑，諸如聚氧乙烯失水山梨醇(例如TweenTM20、40、60、80或85)和其它失水山梨醇(例如SpanTM20、40、60、80或85)。具有表面活性劑的組合物應適宜地包括0.05-5％或0.1-2.5％的表面活性劑。應當認識到，如有需要，可加入其它成分，例如甘露醇或其它藥學上可接受的載體。
適宜的乳劑可採用商業上可獲得的脂肪乳，諸如IntralipidTM、LiposynTM、InfonutrolTM、LipofundinTM和LipiphysanTM來製備。活性成分可溶解於預先混合的乳劑組合物中或可選地其可溶解於油(例如豆油、紅花油、棉籽油、麻油、玉米油或杏仁油)和通過將磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)和水混合而形成的乳液中。應當認識到，可加入其它成分，例如甘油或葡萄糖，來調整乳劑的張力。適宜的乳劑通常包含不超過20％的油，例如，5-20％。脂肪乳可包含0.1-1.0μm，特別是0.1-0.5μm的脂肪滴，且pH為5.5-8.0。
一些實施方案中，乳劑組合物可通過將神經生長因子拮抗劑和IntralipidTM或其組分(豆油、卵磷脂、甘油和水)混合來製備。
用於吸入或吹入的組合物包括在藥學可接受的水性或有機溶劑或其混合物中的溶液和混懸液，和粉末。液體或固體組合物可包含上述適宜的藥學上可接受的賦形劑。組合物通過經口或經鼻的呼吸途徑進行施用以便產生局部或全身效應。在優選無菌的藥學上可接受的溶劑中的組合物可通過使用氣體而被霧化。霧化後的溶液可經由噴霧裝置直接呼吸，或可將噴霧裝置連接於面罩、帷罩或間歇正壓呼吸機上。溶液、混懸液或粉末組合物可由能以適宜的方式遞送製劑的裝置進行施用(包括經口或經鼻)。
治療效果可通過本領域眾所周知的方法進行評估。
以下實施例用於例舉說明而並非限制本發明。
實施例實施例1抗NGF單克隆抗體聯合阿片樣鎮痛劑用於治療手術後疼痛我們採用模擬手術後疼痛的疼痛模型來評估抗NGF抗體聯合阿片樣鎮痛劑(嗎啡)的功效。每一實驗包括16隻動物(n＝8/組)。
動物。對於每一實驗而言，在使用前，於正常光照條件下，舍養16隻體重為200-220g的雄性成年Sprague Dawley大鼠(Harlan；Indianapolis，IN)至少一周，食物和水隨意取用。
在手術前一日，將大鼠於實驗籠中適應2小時後，將大鼠分為兩組一組在手術前15小時接受抗體，另一組在該時刻接受載體(5％葡萄糖/0.45％鹽水USP)。將抗NGF拮抗劑抗體Mab 911(參見Hongo，等，Hybridoma 19215-227(2000))以0.3-20mg/kg的濃度經腹膜內(i.p.)給藥。手術後24小時，將0.1、0.3、1和3mg/kg多種濃度的硫酸嗎啡經皮下(s.c.)給予所有動物。沒有動物接受多於兩種不同的嗎啡劑量，這些劑量相隔至少兩小時，較大的劑量總是在第二次給予。例如，在典型的實驗中，半數動物在手術前15小時經腹膜內(i.p.)接受抗NGF抗體劑量，在動物的一隻後爪上實施手術，並留置恢復。手術後22時，檢測大鼠的「基線」靜止痛，兩小時後給予較低劑量的嗎啡(通常是0.3mg/kg)。給予嗎啡劑量後30分鐘，如前檢測靜止痛，給予初始嗎啡劑量後兩小時，給予較高劑量(通常是1.0mg/kg)。再經過30分鐘後，按下述再次檢測靜止痛。
根據Brennan，等，Pain 64493-501(1996)所公開的步驟實施手術。用2％異氟烷和空氣混合物麻醉動物，並於手術期間經由鼻錐維持。用聚維酮碘墊準備右後爪的蹠面，經皮膚和肌膜做1-cm中心縱向切口，始於距踵邊0.5em處並向足趾延伸。將足保持於彎曲狀態，用尺進行測量。用彎鉗提起蹠肌然後縱向切開。在起端(origin)和止端(insertion)之間，將肌肉最大深度切開。手術全程通過用紗布墊施加按壓來控制出血。以兩次褥式縫合(5-0黑色單股縫線線(ethilon))閉合傷口。這些縫合打結5-6次，第一個結松扎。用桿菌肽溶液擦洗傷口點。行為試驗開始前，允許動物恢復，將其靜置於乾淨籠中至少兩小時。
評估靜止痛。將累積的疼痛評分用於評估與承重相關的疼痛。將動物置於乾淨塑料籠中的塑料網(網格8mm2)上，將塑料籠提升至高處平臺(h18」)，以便觀察其爪的底面。20分鐘適應期後，以0-2級評估承重。如果爪變白或擠壓在網上則評分為0，這提示承受全部體重。如果爪偏向於僅以皮膚接觸網，而沒有皮膚變白或皮膚凹痕，則評分為1。如果爪完全松離網，則評分為2。如果大鼠仍處於靜止，爪退縮被認為是2。在30分鐘內，每5分鐘觀察各個動物1分鐘。在1/2小時期間所得6個評分的總和(0-12)被用於評估有切口的足中的疼痛。還計算了評分為2的頻率，並將其用於評估嚴重疼痛或動物對爪的完全保護的發生率。在手術前24小時(基線)，和手術後2小時、24小時對所有動物進行測驗。承重與動物願意使用肢體的程度優良相關，由此是對疼痛緩減的有效測量。
以下方法步驟被用於圖1、2和3中所述實驗。將動物分為兩組(對照組和抗體治療組)。在手術前15小時，將小鼠抗NGF抗體Mab 911(Hongo等，如上)經腹膜內施用(0.3mg/kg體重和/或1mg/kg體重，依據試驗而定)。對照動物不接受抗體，而接受0mg/kg，0.3mg/kg，或1mg/kg嗎啡，如本文所述。按照上述實施手術，於手術後22小時在兩組中評估靜止痛(「基線」)。手術後24小時，用嗎啡以0.3mg/kg處理所有動物，在嗎啡處理後30分鐘開始評估靜止痛。在手術後26小時再給予1.0mg/kg的嗎啡，然後在該最後嗎啡劑量後30分鐘開始再次評估靜止痛。所有的嗎啡處理均通過皮下(動物的頸背下)實施。這些實驗的結果如圖1、2和3中所示。
圖1顯示了在接受0.3mg/kg抗NGF抗體911和0、0.3mg/kg體重或1.0mg/kg體重嗎啡的動物中檢測的靜止痛評分。該實驗證實了與僅用嗎啡或僅用抗NGF抗體進行治療相比，用嗎啡聯合抗NGF抗體(抗NGF抗體911)治療的動物中累積的疼痛評分降低。因此，抗NGF抗體治療聯合嗎啡治療比僅用嗎啡或僅用抗NGF抗體能更有效地降低靜止痛。這些結果還顯示出在手術前僅用NGF拮抗劑以0.3mg/kg進行治療比僅用嗎啡以0.3mg/kg進行治療能更有效地降低靜止痛。
圖2顯示了在接受1.0mg/kg抗NGF抗體911和0、0.3mg/kg體重或1mg/kg體重嗎啡的動物中檢測的靜止痛評分。這些結果證實了與僅用抗NGF抗體或僅用嗎啡進行治療相比，用嗎啡聯合抗NGF抗體治療的動物中累積的疼痛評分降低。由此，抗NGF抗體加嗎啡比僅用嗎啡或僅用抗NGF抗體能更有效地降低靜止痛。這些結果還顯示出在手術前僅用抗NGF抗體以1mg/kg進行治療比僅用嗎啡以0.3mg/kg進行治療能更有效地降低靜止痛。
圖3顯示了用0.3mg/kg或1.0mg/kg抗NGF抗體和0、0.3mg/kg或1mg/kg體重嗎啡按照上述方法步驟治療後的靜止痛評分。與僅用0.3mg/kg嗎啡治療相比，0.3mg/kg嗎啡聯合0.3mg/kg抗NGF抗體或1mg/kg抗NGF抗體的治療顯著地提高了疼痛緩減。圖3中所示結果還證實，僅用0.3mg/kg或1mg/kg抗NGF抗體進行治療(即，無嗎啡治療)提供了與用0.3mg/kg劑量的嗎啡治療後等同的疼痛緩減。此外，用抗NGF抗體以1.0mg/kg進行治療聯合用嗎啡以0.3mg/kg進行治療產生了至少等價於僅用1mg/kg嗎啡所獲得的疼痛緩減。這些結果證實了用抗NGF抗體治療降低了實現有效疼痛緩減所需的嗎啡量。
這些實驗證實了抗NGF抗體加嗎啡的治療比僅用嗎啡或僅用抗體治療能更有效地降低靜止痛。
雖然通過示例性說明和實施例為便於清楚理解的目的對上述發明進行了一定詳細程度的描述，但說明書和實施例並非意在限制本發明的範圍。
權利要求
1.一種治療個體中疼痛的方法，其包括對個體施用一定量的神經生長因子(NGF)拮抗劑和一定量的阿片樣鎮痛劑，由此NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑聯合提供有效的疼痛緩減。
2.權利要求1的方法，其中阿片樣鎮痛劑選自嗎啡、可待因、雙氫可待因、二乙醯嗎啡、氫可酮、氫嗎啡酮、左啡烷、羥嗎啡酮、阿芬太尼、丁丙諾啡、布託啡諾、芬太尼、舒芬太尼、哌替啶、美沙酮、納布啡、丙氧芬和噴他佐辛。
3.權利要求2的方法，其中阿片樣鎮痛劑是嗎啡。
4.權利要求1的方法，其中NGF拮抗劑是抗NGF抗體。
5.權利要求3的方法，其中NGF拮抗劑是抗NGF抗體。
6.權利要求4或5的方法，其中抗NGF抗體結合人類NGF。
7.權利要求6的方法，其中抗NGF抗體結合人類NGF，親和力為約10nM或小於約10nM。
8.權利要求5的方法，其中抗NGF抗體是人類抗體。
9.權利要求5的方法，其中抗NGF抗體是人源化抗體。
10.權利要求1的方法，其中疼痛是手術後疼痛。
11.權利要求4的方法，其中疼痛是手術後疼痛。
12.一種用於治療疼痛的藥物組合物，其包含有效量的NGF拮抗劑和藥學上可接受的載體，其中所述使用包括同時或相繼施用阿片樣藥劑拮抗劑。
13.權利要求12的組合物，其中NGF拮抗劑是抗NGF抗體。
14.一種用於治療疼痛的藥盒，其包含NGF拮抗劑，和同時或相繼施用NGF拮抗劑和阿片樣鎮痛劑以有效治療疼痛的說明書。
全文摘要
本發明公開了治療或預防疼痛的方法，其包括施用一定量的神經生長因子拮抗劑和一定量的阿片樣鎮痛劑，使二者聯合能夠提供有效的疼痛緩減。本發明還公開了包含神經生長因子拮抗劑和阿片樣鎮痛劑的組合物以及包含其的藥盒。
文檔編號C07K16/22GK1878794SQ200380105337
公開日2006年12月13日 申請日期2003年10月8日 優先權日2002年10月8日
發明者D·L·謝爾頓, G·J·韋爾加拉 申請人:裡納特神經系統學公司