溶解結構域融合構建體及其製備和使用方法

2023-05-29 16:09:06

專利名稱：溶解結構域融合構建體及其製備和使用方法
技術領域：
本發明涉及融合構建體，使用融合構建體的方法以及治療不良的或異常的細胞增 殖或高度增殖疾病(例如非轉移性和轉移性贅生瘤(neoplasias)、癌症、腫瘤和惡性腫瘤) 的方法。
背景技術：
當考慮癌症患者的五年存活率時，會發現開發治療原發腫瘤和轉移腫瘤的新型 療法的需求是顯而易見的當診斷出遠距離轉移性疾病時，僅有10-40%的患有肺、結腸直 腸、乳腺和前列腺癌的患者能存活。

發明內容
本發明至少部分基於融合或連接至結合部分的溶解結構域(在此稱為融合構建 體)。細胞與溶解結構域的接觸被認為會引起細胞膜的破壞，從而導致細胞死亡。該結合部 分靶向被該溶解結構域破壞的細胞，包括不良的或異常的增殖細胞或高度增殖細胞，例如 非轉移性和轉移性贅生瘤、癌症、腫瘤和惡性腫瘤。一些非轉移性和轉移性贅生瘤、癌症、腫 瘤和惡性細胞過量表達受體或配體。例如，許多非轉移性和轉移性贅生瘤、癌症、腫瘤和惡 性腫瘤表達可用作該融合構建體的結合部分的激素(例如，促黃體激素/絨毛膜促性腺激 素(LH/CG)或促黃體激素釋放激素(LHRH)等)、生長因子、細胞因子、抗體等的受體.融合構建體可被設計為靶向表達該結合部分的結合位點的任意細胞或細胞群。結 合部分如配體、抗體及其片段、生長因子、細胞因子等可被連接至溶解結構域靶向殺死表達 或包含受體、抗原、抗體、配體等的細胞，從而減少或抑制細胞增殖或生長。融合構建體不需要細胞分裂以殺死靶細胞。進一步地，融合構建體不太可能具有 免疫原性，因為它們可被製備為具有相對較小的大小。此外，融合構建體可殺死多重耐藥細 胞。此外，融合構建體就抗細胞增殖活性或殺傷活性和低溶血活性(HA5tl)而言具 有更大的細胞毒活性(低IC5tl),從而使IC5tl HA5tl的比例(IC5tZHA5tl)低於具有該活 性的其它化合物。例如，融合構建體通過更低的IC5tl值確定具有比W!0r21-i3CG-ala、 Phor21-GSGGS-3 CG-ala、Phor21-ASAAS-β CG-ala 或 Phorl4_ β CG-ala 更高的抗細胞增 殖活性；具有比 Phor21-3 CG-ala、Phor21_GSGGS-β CG-ala、Phor21-ASAAS-β CG-ala 或 PhorH-β CG-ala 更低的 IC50AiA50 比例；或者具有小於約 0. 02,0. 01 或 0. 005 的 IC50AiA50 比例。根據本發明，提供了包含第一和第二結構域的融合構建體。在一個實施方式中，融合構建體包含由包含選自例如KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、 KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF, KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的Jft序列的 12、13、15、16、17、18、19、20、22、23、24、25、 26,27或28殘基L-或D-胺基酸序列組成的第一結構域以及包含靶向或結合部分或由其 組成的第二結構域，或由該第一和第二結構域組成。在另一實施方式中，融合構建體包含 由選自 KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、 KFAKFAKKFAKFAKKFAKF、KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的 L-或D-胺基酸序列組成的第一結構域和包含靶向或結合部分或者由其組成的第二結 構域，或由該第一和第二結構域組成。在進一步的實施方式中，融合構建體包含由選 自 KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、 KFAKFAKKFAKFAKKFAKF, KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的 L-或 D-胺基酸序列組成的第一結構域和由不同於所述第一結構域的1-25L-或D-胺基酸序列 (例如，靶向或結合部分)組成的第二結構域，或由該第一和第二結構域組成。根據本發明，還提供了包含第一結構域或由其組成的分離或純化的肽。在 不同的實施方式中，分離或純化的肽為KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、 KFAKFAKKFAKFAKKFA, KFAKFAKKFAKFAKKFAK, KFAKFAKKFAKFAKKFAKF 或 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA。在附加的實施方式中，分離或純化的肽為KFAKFAKKFAKFAKK、 KFAKFAKKFAKFAKKF, KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK, KFAKFAKKFAKFAKKFAKF 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA，其中一個或多個K殘基被F或L殘基的任意一個所替換，一個或多 個F殘基被K、A或L殘基的任意一個所替換，或者一個或多個A殘基被K、F或L殘基的任 意一個所替換。融合構建體包含結合受體、配體或抗原的結合部分。結合部分還可包括配體、抗原 或抗體。配體包括結合受體的分子(如受體激動劑或拮抗劑)，或由其組成。結合部分可包 括線性或環狀結構，或由其組成。結合部分的特定的非限制性範例包括一個或多個胺基酸(例如，肽、多肽、蛋白)、 核酸和碳水化合物。結合部分的特定的非限制性類別包括結合受體的激素、激素類似物以 及激素和激素類似物的片段、生長因子、細胞因子、抗體等。激素的特定非限制性範例包括 促性腺激素-釋放激素或其類似物、促黃體激素β鏈、促黃體激素、絨毛膜促性腺激素、絨 毛膜促性腺激素亞單位、促黑色素細胞激素、雌二醇、乙烯雌酚、乳鐵蛋白、多巴胺、生 長激素抑制素或其類似物、促卵泡成熟激素(FSH)、糖皮質激素、雌激素、睪丸激素、雄烯二 酮、二氫睪丸激素、脫氫表雄酮、雄性激素、黃體酮、甲狀腺刺激激素(TSH)、胰島素、兒茶酚 胺、促腎上腺皮質激素(ACTH)、血管緊縮素、抗利尿素、降血鈣素、縮膽囊肽、蛙皮素、促腎上 腺皮質激素-釋放激素、促胃液素、飢餓激素、胰高血糖素、生長激素釋放激素及其類似物、 抑制素、食慾素、KiSS肽(GPR54)、kissp印tin、泌乳刺激素、泌乳刺激素釋放激素、生長激 素、Herf/neu、葉酸、維生素H、鐵蛋白、副甲狀腺激素、鬆弛激素、分泌素、促甲狀腺素釋放 激素、內皮素、腎素、促脂解素、褪黑素等。生長激素的特定非限制性範例為表皮生長因子 (EGF)、胰島素-樣生長因子-1和2(IGF-l、IGF-2)、血管內皮生長因子(VEGF)、神經生長因 子(NGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、轉化生長因子α和β (TGFa、TGFi3、血小板衍生生 長因子(PDGF)、肝細胞生長因子(HGF)、血漿銅藍蛋白等。細胞因子或配體的非限制性類別
11為白細胞介素(例如白介素2、白介素17、CD154、Fas配體等)、腫瘤壞死因子(TNFs)、幹擾素等。結合部分可任選地在細胞上表達。可表達結合部分(例如，受體、配體、抗原、抗 體)或者可根據本發明的方法靶向的細胞包括高度增殖細胞。表達受體、配體或抗原或 者可根據本發明的方法靶向的細胞還包括乳腺、卵巢、子宮、子宮頸、前列腺、睪丸、胰腺、皮 膚、血液細胞、腎上腺、腦垂體和子宮內膜細胞。在細胞上表達的結合部分的特定的非限制 性類別為激素、細胞因子、生長因子(例如EGF受體、Herf/neiuRORl)、鐵蛋白、鐵傳遞蛋白 受體、細胞粘附分子等的受體。在可被抗體或其片段靶向的增殖細胞上表達的抗原的特定 非限制性範例為 CD19、CD20、CD23、CD27、CD28、CD30、CD33、CD40、CD52、CD56、CD70、CD154、 類免疫球蛋白受體等。其它的抗原包括，例如，前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺特異性膜 抗原(PSMA)、癌胚抗原(CEA)、α-胎兒球蛋白(AFP)、前列腺特異性抗原(PSA)、癌症抗原 125(CA-125)以及結合此處披露的配體的其它受體分子。第一和第二結構域可以包括胺基酸或胺基酸序列，或由其組成。在特定的方面，第 一或第二結構域具有約 1-10、10-20、15-20 (i. e.、15、16、17、18、19 或 20 胺基酸)、20_30、 30-40、40-50、60-70、70-80、80-90、90-100 或更多的胺基酸殘基。在特定的方面，第一結構域包括兩親α -螺旋結構，或由其組成。在其它特定的方 面，第二結構域包括如SYAVALSAQAALARR或QHWSYGLRPG所列的胺基酸序列，或由其組成。第一和第二結構域可定位在相對彼此的NH-末端或C-末端。因此，在一個實施方 式中，該第一(溶解肽)結構域定位在相對於第二(結合部分或配體)結構域的NH-末端， 而在另一實施方式中，該第二(結合部分或配體)結構域定位在相對於該第一(溶解肽) 結構域的C-末端。第一和第二結構域可包括一個或多個D-胺基酸，或由其組成。在特定的方面，第 一結構域例如在K、F或A殘基任意一個上具有D-胺基酸。第一和第二結構域可通過共價鍵連接。例如，第一和第二結構域可通過肽或非肽 接頭連接。在特定的方面，第一和第二結構域通過具有約1-25個胺基酸殘基或具有線性碳 鏈的肽序列連接。在更特定的方面，第一和第二結構域通過包括一個或多個A、S或G氨基 酸殘基或由其組成的肽序列連接。在其它特定的方面，第一和第二結構域通過肽序列連接， 第一和第二結構域通過包含GSGGS、ASAAS或CCCCCC或由其組成的肽序列連接。第一和第二結構域可進一步包括額外的結構域或由其組成。因此，在不同的方面， 融合構建體包含第三、第四、第五、第六、第七結構域等。融合構建體包含分離或純化的形式或由其組成。融合構建體還包含混合物或由 其組成。該種混合物包括組合物，例如融合構建體和適於施用至對象或與對象體內接觸的 藥學可接受的載體或賦形劑的混合物，或者融合構建體和抗細胞增殖或免疫刺激劑的混合 物。 融合構建體包含單位劑型或由其組成。在一個實施方式中，融合構建體是其數量 可有效治療患有不良細胞增殖或高度增殖紊亂的對象的單位劑型。在另一實施方式中，融 合構建體是其數量可有效治療患有贅生瘤、腫瘤或癌症的對象的單位劑型。在額外的實施 方式中，融合構建體是其數量可有效減少對象生育力的單位劑型。
融合構建體可包括在試劑盒內，該試劑盒可選地具有實施方法的說明。在一個實施方式中，試劑盒包含融合構建體以及說明書，其用於減少或抑制細胞增殖、減少或抑制高 度增殖細胞的增殖、減少或抑制贅生瘤、腫瘤或癌症細胞的增殖、治療患有高度增殖紊亂的 對象、治療患有贅生瘤、腫瘤或癌症的對象或者減少動物的生育力。根據本發明，還提供了編碼融合構建體的核酸。在一個實施方式中，核酸編 碼融合構建體，該融合構建體包含由包含選自KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、 KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF, KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的肽序列的 12、13、15、16、17、18、19、20、22、23、 對、25、沈、27或觀殘基1^-或0-胺基酸序列組成的第一結構域以及包含靶向或結合 部分或由其組成的第二結構域，或由該第一和第二結構域組成。在另一實施方式中，核 酸編碼融合構建體，該融合構建體包含由選自KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、 KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF、KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK的L-或D-胺基酸序列組成的第一結構域和包含 靶向或結合部分或者由其組成的第二結構域，或由該第一和第二結構域組成。在進一 步的實施方式中，核酸編碼融合構建體，該融合構建體包含由選自KFAKFAKKFAKFAKK、 KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF, KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的 L-或 D-胺基酸序列組成的 第一結構域和由不同於所述第一結構域的1-25L-或D-胺基酸序列(例如，靶向或結合部 分)組成的第二結構域。核酸可被包含在載體中，例如在細胞中表達時編碼融合構建體的表達載體。宿主 細胞可被載體中的核酸轉化，從而使該細胞表達由該核酸編碼的融合構建體。融合構建體可用於，例如，減少或抑制細胞的增殖、減少或抑制細胞增殖、減少或 抑制高度增殖細胞的增殖、減少或抑制贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞的增殖以及治療不良 或異常細胞增殖(例如高度增殖細胞或高度增殖紊亂)。高度增殖紊亂的非限制性範例包 括良性增生、非轉移性和轉移性贅生瘤、癌症和惡性腫瘤(例如，實體或液態瘤、骨髓瘤、淋 巴瘤、白血病、癌、肉瘤、黑素瘤、神經的、網狀內皮的和造血的瘤)。根據本發明，進一步提供了減少或抑制細胞的增殖的方法；減少或抑制細胞增殖 的方法；減少或抑制高度增殖細胞的增殖的方法；以及減少或抑制贅生瘤、腫瘤、癌症或惡 性細胞增殖的方法。在不同的實施方式中，一種方法包括了將細胞與數量上足以減少或抑 制細胞的增殖的融合構建體相接觸；將細胞與數量上足以減少或抑制細胞增殖的融合構建 體相接觸；將細胞與數量上足以減少或抑制高度增殖細胞的增殖的融合構建體相接觸；以 及將細胞與數量上足以減少或抑制贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞的增殖的融合構建體相 接觸。根據本發明，此外提供了選擇性減少或抑制表達受體或抗原的細胞的增殖的方 法；選擇性減少或抑制表達受體或抗原的高度增殖細胞的增值的方法；以及選擇性減少或 抑制表達受體或抗原的贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞的增殖的方法。在不同的實施方式 中，一種方法包括將細胞與數量上足以減少或抑制細胞的增值的融合構建體相接觸，其中 所述肽的結合部分結合該細胞所表達的受體、配體或抗原；將細胞與數量上足以減少或抑 制高度增殖細胞的增殖的融合構建體相接觸，其中所述肽的結合部分結合高度增殖細胞表 達的受體、配體和抗原；以及將細胞與數量上足以減少或抑制贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞的增殖的融合構建體相接觸，其中所述融合構建體的結合部分結合該細胞表達的受體、 配體或抗原。根據本發明的方法靶向的細胞包括表達受體或抗原(例如激素受體，例如，性或 性腺類固醇激素或者性或性腺類固醇激素受體)的細胞。根據本發明的方法靶向的細胞 還包括表達受體的細胞，其中該受體結合促性腺激素釋放激素I、促性腺激素釋放激素II、 八目鰻III促黃體激素釋放激素、促黃體激素β鏈、促黃體激素、絨毛膜促性腺激素、絨毛 膜促性腺激素β-亞單位、促黑色素細胞激素、雌二醇、乙烯雌酚、多巴胺、生長激素抑制 素、促卵泡成熟激素(FSH)、糖皮質激素、雌激素、睪丸激素、雄烯二酮、二氫睪丸激素、脫氫 表雄酮、黃體酮、雄性激素、泌乳刺激素、泌乳刺激素釋放激素、抗利尿素、血管緊縮素、兒 茶酚胺、表皮生長因子(EGF)、類胰島素生長因子-1和2(IGF-1、IGF-2)、生長激素(GH)、 Herf/neu、維生素H、葉酸、鐵傳遞蛋白、甲狀腺刺激激素(TSH)、副甲狀腺激素(PTH)、內皮 素、蛙皮素、腎素、促脂解素、褪黑素激素、鬆弛激素、分泌素、生長激素、血管內皮生長因子 (VEGF)、血管活性腸肽、乳鐵蛋白、整合素(例如，α_5β3或α-5 β 1整合素)、神經生長 因子、轉化生長因子α和β (TGF-α和β)、肝細胞生長因子(HGF)、成纖維細胞生長因子 (FGF)、CD-33、CD19、CD20、CD40、RORl、IGF-I、癌胚抗原(CEA)、α-胎兒球蛋白(AFP)、前列 腺特異性抗原(PSA)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、癌抗原125(CA-125)、白介素17、⑶154、 可溶性白介素-2 (IL-2)受體、酪氨酸酶、MAGE-I、MAGE-2、NY-ESO-1、Melan-A/MART-l、糖蛋 白(gp)75、gplOO、β -連環蛋白、PRAME、MUM-U ZFP161、泛素-1、H0X-B6、YB-I、骨粘連蛋 白、ILF3、葉酸或其衍生物、腫瘤壞死因子(TNF)家族成員、TNF-α ,TNF-β (淋巴細胞毒素、 LT)、TRAIL、Fas, LIGHT、41BB、轉化生長因子α、轉化生長因子β、胰島素、血漿銅藍蛋白、 HIV-tat、包含RGD序列基序的肽或蛋白、單糖、二糖、寡糖、涎酸、半乳糖、甘露糖、巖藻糖或 乙醯神經氨酸。除了別的以外，實施的方法包括，接觸需要抑制、減少或預防細胞(例如，高度增 殖細胞或不良增殖細胞)的增殖、存活、分化、死亡或活性的對象。示範性的對象包括患有 或可能罹患不良或異常細胞增殖的對象；患有或可能罹患良性增生的對象；或者非轉移性 或轉移性贅生瘤、癌症、重量或惡性腫瘤(例如，實體或液態瘤，骨髓瘤、淋巴瘤、白血病、 癌、肉瘤、黑素瘤、神經的、網狀肉皮的和造血的贅生瘤)。根據本發明，額外提供了治療患有高度增殖紊亂的對象的方法和治療患有贅生 瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤(轉移性、非轉移性或良性)的對象的方法。在不同的實施方式 中，一種方法包括，向對象施用數量上足以治療高度增殖紊亂的融合構建體；以及向對象施 用數量上足以減少或抑制贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤的增殖的融合構建體。這些方法包括治療患有或可能罹患轉移瘤的對象。例如，可有效減少或抑制腫瘤、 癌症或贅生瘤擴散或散播至對象體內的其它位點、局部或區域的一定量的融合構建體。在 不同的實施方式中，一種方法減少或抑制原發腫瘤或癌症轉移至一個或多個其它位點、轉 移瘤在一個或多個其它位點、局部或區域形成或確立(establishment)，從而減少或抑制腫 瘤或癌症復發或者腫瘤或癌症的進展。在進一步的實施方式中，一種方法減少或抑制潛在 或者已經形成轉移的腫瘤或癌症細胞(例如，散播腫瘤細胞)的生長、增殖、遷移或侵染； 減少或抑制由原發腫瘤或癌症產生的轉移瘤在不同於該原發腫瘤或癌症的位點、局部或區 域的形成或確立；減少或抑制轉移瘤形成或確立之後該轉移瘤在不同於該原發腫瘤或癌症的一個或多個其它位點、局部或區域的生長或增殖；或者減少或抑制該轉移瘤形成或確立 之後其它轉移瘤的形成或確立。在仍然另一實施方式中，一種方法減少或抑制了贅生瘤、腫 瘤、癌症或惡性腫瘤的復發或進展。根據本發明，還進一步提供了減少或抑制贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞轉移至其 它位點或者轉移性贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤在遠離原發贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫 瘤的其它位點的形成或確立的方法。在不同的實施方式中，一種方法包括向對象施用足以 減少或抑制贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞轉移至其它位點或者轉移性贅生瘤、腫瘤、癌症 或惡性腫瘤在遠離原發贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤的其它位點的形成或確立的一定量 的融合構建體。可根據本發明治療的贅生瘤、腫瘤、癌症和惡性腫瘤包括實體細胞量、造血細胞或 癌、肉瘤(例如，淋巴肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤或纖維肉 瘤)、淋巴瘤、白血病、腺瘤、腺癌、黑素瘤、神經膠質瘤、惡性膠質瘤、腦膜瘤、成神經細胞瘤、 成視網膜細胞瘤、星形細胞瘤、少枝膠質細胞瘤、間皮瘤、網狀內皮的、淋巴的或造血的(例 如，骨髓瘤、淋巴瘤或白血病)贅生瘤、腫瘤、癌症和惡性腫瘤。可根據本發明治療的贅生瘤、腫瘤、癌症和惡性腫瘤包括可存在於或感染肺(小 細胞肺癌或非小細胞肺癌)、甲狀腺、頭或頸、鼻咽、喉、鼻或竇、腦、脊柱、乳腺、腎上腺、腦垂 體腺、甲狀腺、淋巴腺、胃腸的(嘴、食道、胃、十二指腸、迴腸、空腸(小腸)、結腸、直腸)、 泌尿生殖道(子宮、卵巢、子宮頸、子宮內膜、膀胱、睪丸、陰莖、前列腺)、腎、胰腺、肝、骨、骨 髓、淋巴腺、血液、肌肉、皮膚或幹細胞贅生瘤、腫瘤、癌症和惡性腫瘤。這些方法可與其它的治療或療法(例如，手術切除、放射療法、電離或化學放射療 法、化學療法、免疫療法、局部或區域熱(高熱)療法或疫苗接種)一起實施。該種治療或 療法可在施用融合構建體之前、同時(單獨或在混合物中)或之後施用。在一個實施方式 中，一種方法包括施用抗細胞增殖、抗贅生瘤、抗腫瘤、抗癌症或免疫增強治療或療法。在進 一步的實施方式中，一種方法包括施用烷化劑、抗代謝物、植物提取物、植物生物鹼、亞硝基 脲、激素、核苷酸或核苷酸類似物；環磷醯胺、硫唑嘌呤、環孢菌素A、強的松龍、苯丙氨酸氮 芥、苯丁酸氮芥、氮芥、白消安、氨甲蝶呤、6-巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、、 5-氮胞苷(5-AZC)和5-氮胞苷相關化合物、博來黴素、放射菌素D、光神黴素、絲裂黴素C、 卡氮芥、環己亞硝脲、司莫司汀、鏈脲菌素、羥脲、順式鉬氨、卡鉬、草酸鉬、米託坦、甲基苄 胼、氮烯唑胺、紫杉酚、長春花鹼、長春新鹼、阿黴素或二溴甘露醇、拓撲異構酶抑制劑、(依 立替康、託泊替康、依託泊甙、替尼泊甙)、吉西他濱、培美曲塞等。細胞或免疫療法包括淋巴 細胞、漿細胞、巨噬細胞、樹狀細胞、T-細胞、NK細胞或B-細胞；抗體、細胞生長因子、細胞 存活因子、細胞分化因子、細胞因子或趨化因子(範例為白細胞介素IL-2、IL_1 α ,IL-I β、 IL-3、IL-6、IL-7、粒細胞-巨噬細胞-集落刺激因子(GMCSF)、IFNi、IL-12、TNF-α、 TNFβ ,MIP-ΙαMIP-I β、RANTES、SDF-1、MCP-1、MCP_2、MCP_3、MCP_4、嗜酸粒細胞親合素、 嗜酸粒細胞親合素 _2、I-309/TCA3、ATAC、HCC-I、HCC-2、HCC-3、LARC/MIP-3 α、PARC、TARC、 CKβ、0(β 6、CK3 7、CK3 8、CK3 9、CK3 ΙΙΧΚβ 12、C10、IL_8、GR0 α、GR0 3、ENA_78、GCP_2、 PBP/CTAPIII β -TG/NAP-2、Mig、PBSF/SDF-l 或淋巴細胞趨化因子)等。其它適用於融合構建體的藥劑為靶向藥物或者生物藥劑如抗體或小分子。單 克隆抗體的非限制性範例包括利妥昔單抗(Rituxan )、曲妥單抗(Herceptin)、貝伐單抗(Avastin)、西妥昔單抗(Erbitux)、阿侖單抗(Campath)、帕木單抗(Vectibix)、替伊 莫單抗(Zevalin)、託西莫單抗(Bexxar)等，其可特別與本發明的融合構建體聯用。適 合與該融合構建體聯用的其它靶向藥物為伊馬替尼(Gleevec)、吉非替尼(Iressa)、硼替 佐米(Velcade)、拉帕替尼(Tykerb)、舒尼替尼(Sutent)、索拉非尼(Nevaxar)、尼羅替尼 (Tasigna)等。本發明的方法包括向對象提供益處。在特定的實施方式中，一種治療方法導致了 贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞量、體積、大小或細胞數量的破壞，刺激、誘導或增加贅生瘤、 腫瘤、癌症或惡性細胞壞死、溶解或凋亡，減少贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤體積大小、細 胞量，抑制或防止贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤體積、量、大小或細胞數量的進展或增加， 或者延長壽命；導致與該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤相關或由其引起的不良症狀或並發 症的嚴重性、持續時間或頻率的減少或下降；導致疼痛、不適、噁心、虛弱或嗜睡的減少或下 降；或者導致更高的精力、食慾、改善的靈活性或心理狀態。根據本發明，還額外提供了減少動物生育力的方法；治療或減少子宮內膜異位、兩 性前列腺增生、纖維瘤或息肉的方法。在不同的實施方式中，一種方法包括向動物(例如， 哺乳動物，如人)施用足以減少生育力的一定量的融合構建體；向動物(例如，哺乳動物，如 人)施用足以治療或減少子宮內膜異位的一定量的融合構建體；向動物(例如，哺乳動物， 如人)施用足以治療或減少良性前列腺增生的一定量的融合構建體；以及向動物(例如，哺 乳動物，如人)施用足以治療或減少纖維瘤或息肉的一定量的融合構建體。可根據該方法治療的對象包括哺乳動物。在特定的實施方式中，該對象為人。


圖1顯示了 LHRH_Phor21比Phor21_ β CG_ala更快殺死癌症細胞。人乳腺癌細胞 (MDA-MB-435S. luc，不同傳代次數)與 Phor21_ β CG-ala 或 LHRH_Phor21 進行孵育。圖2顯示了與Phor21_ β CG-ala相比，在溶解結構域具有21 (Phor21)、 18 (Phorl8 (338983) = CLIP71)和15(Phorl5)個胺基酸的融合構建體對細胞的細胞毒性。圖3顯示了 β CG-ala和LHRH融合構建體對MDA-MB-435S. Iuc細胞的細胞毒性 (微摩爾IC5tl)。融合構建體比圖右所列的Wior21-0CG-ala對MDA-MB-435S. Iuc細胞更具 毒性。圖4顯示了 LHRH融合構建體對MDA_MB_435S. Iuc細胞的細胞毒性(微摩爾 IC50)。該融合構建體為323033 = Phor21-β CG-ala、337479 = LHRH_Phor21、337480 = Phor21-LHRH、338611 = D-ala-Phor21_LHRH、338612 = Phor18-ASAAS-LHRH,338613 = Phor 18-LHRH、339385 = D-ala-Phorl8_LHRH 和 339347 = Phorl8-柳菩林。圖5顯示了相比Wior21-0CG_ala，β CG_ala和LHRH融合構建體對人紅細胞 的急性溶血活性(微摩爾HA50)。除7 LHRH-Phor21、Phor21-LHRH和Phor 18-柳菩林 (QHWSY(D-Leu)LRPNEt =柳菩林)，所有的融合構建體具有明顯低於Wior21_ β CG-ala的溶 血活性。圖6顯示了細胞毒性和溶血活性的比較。箭頭所指的肽比Phor21_i3 CG-ala對細 胞更具毒性。圖7是一個治療計劃綱要。
圖8A-8J是以3個β CG結合物相比未結合的Phor21、未結合的Phorl8 (338983) =(CLIP71)以及(KKKFAFA) 3結合物(338984)在治療過程中和研究終點的腫瘤 狀態綜述。融合構建體代碼 33 = Phor21 β -CG-ala ；76 = Phorl8-β CG-ala ； 81 = D-ala-Phor21-β CG-ala ；85 = D-ala-Phorl8-LHRH ；47 = Phorl8-柳菩林； 13 = Phorl8-LHRH ； 11 = D-ala-Phor21_LHRH ； 12 = Phor18-ASAAS-LHRH ；71 = Phorl5-0 CG-ala ；以及74 = Phorl5-C6_ β CG-ala，代碼之後是本研究中所用的構建體的 量。圖9A-9H顯示了在最多30天的指定時間段內A) Phor21_ β CG-ala (33) ；B) D-ala-Phor21-LHRH(ll) ；C)Phorl8-柳菩林(47) ；D)Phor18-ASAAS-LHRH(12) ；Ε) Phorl8-LHRH(13) ；F) (KKKFAFA) 3"LHRH ；G) D-ala-Phor 18-LHRH(85)相對鹽水和基線值以及 H)相對於基線的治療組腫瘤體積。圖10A-10E顯示了採用5種LHRH結合物相比Phor21_ β CG-ala在研究終點 對A)腫瘤重量、B)相比基線的腫瘤重量變化、C)活腫瘤細胞總數、D)相比基線的活腫 瘤細胞總數變化以及E)體重的腫瘤狀態的綜述。338614 = (KKKFAFA)3LHRH、338612 = Phorl8-ASAAS-LHRH、338613 = Phorl8_LHRH和 339385 = D-ala-Phorl8_LHRH。圖11顯示了與上升濃度的Wior21_i3 CG-ala在指定量的阿黴素存在下孵育的具 有多重耐藥性的卵巢癌細胞(0VCAR 3)以及在最高阿黴素濃度下由該組合得到的因子為 200的細胞殺死增毒作用。圖12顯示了 LHRH和Phor21以及β CG和Phor21融合構建體對CHO(中國倉鼠卵 巢)和TM4細胞的細胞毒性，與對MDA-MB-435S. Iuc細胞的細胞毒性相比。TM4細胞為LHRH 受體陰性，CHO細胞為CG受體陰性，MDA-MB-435S. Iuc細胞表達LHRH和CG受體。發明詳述本發明至少部分基於融合構建體，該融合構建體包括連接或融合至第二結構域結 合部分的第一結構域溶解部分。在一個典型的結構中，融合構建體第一結構域包括溶解部 分，其直接或間接對細胞具有毒性，從而可以減少細胞增殖或存活或者刺激、誘導、增加或 促進細胞死亡、殺死或凋亡；而融合構建體第二結構域包括靶向細胞的部分，稱為結合部分 實體。根據本發明，提供了融合構建體，其包括第一「溶解」結構域或由其組成，且包括了 第二 「靶向」或「結合」結構域或由其組成。在一個實施方式中，融合構建體包含由包含選 自例如 KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、 KFAKFAKKFAKFAKKFAKF, KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的 肽序列(選自胺基酸，例如賴氨酸=K、苯丙氨酸=F，丙氨酸=A)的12、13、15、16、17、 18、19、20、22、23、24、25、26、27或觀殘基L-或D-胺基酸序列組成的第一結構域以及 包含靶向或結合部分或由其組成的第二結構域。在另一實施方式中，融合構建體包含 第一結構域和第二結構域，第一結構域由選自KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、 KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF、KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK的L-或D-胺基酸序列組成，第二結構域包含靶向或結 合部分或者由其組成。在進一步的實施方式中，融合構建體包含由選自KFAKFAKKFAKFAKK、 KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF,KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的 L-或 D-胺基酸序列組成的 第一結構域和由不同於所述第一結構域的1-25L-或D-胺基酸序列(例如，靶向或結合部 分)組成的第二結構域，或由該第一和第二結構域組成。此處所用的術語「融合」或「嵌合」及其語法上的變體在指代構建體時表示該構建 體包含從彼此不同且在自然界中一般不同時存在的兩個分子實體所衍生、獲得、分離、基於 其獲得或者構造的部分。即，例如，融合構建體的一個部分包含溶解部分或由其組成，且該 融合構建體的第二部分包含靶向部分(例如具有結合能力的部分)或由其組成，第一和第 二結構域的每個結構上不同。融合構建體還可被稱為「結合物」，其中結合物包含第一結構 域溶解部分和第二結構域靶向或結合部分，或者由其組成。融合構建體的第一結構域和第二結構域包括胺基酸序列(肽、多肽、蛋白、凝集 素)、核酸(DNA、RNA)和碳水化合物(糖、涎酸、半乳糖、甘露糖、巖藻糖、乙醯神經氨酸 等)，或由其組成。術語「胺基酸序列」、「蛋白」、「多肽」和「肽」可互換使用，表示通過醯 胺鍵或同等方式共價連接的兩個或多個胺基酸或「殘基」。可通過非天然和非醯胺化學鍵 連接的胺基酸序列包括，例如，以戊二醛、N-羥基琥珀醯亞胺酯、雙功能馬來醯亞胺或N， N』 - 二環己基碳二亞胺(DCC)形成的胺基酸序列。非醯胺鍵包括，例如，南五味子酮、氨基 亞甲基、烯烴、醚、硫醚等(參見，例如 Spatola in Chemistry andBiochemistry of Amino Acids, Perptides and Proteins, Vpl.7, pp267~357(1983) , "Peptide and Backbone Modifications, "MarcelDecker, NY)。融合構建體或嵌合體的第一和第二結構域包括L-胺基酸序列、D-胺基酸序列和 具有L-胺基酸和D-胺基酸混合物的胺基酸序列。第一和第二結構域的胺基酸序列可具有 線性或環狀結構，結合至不同的部分(例如，第三、第四、第五、第六、第七等結構域)，形成 分子內或分子間二硫鍵，且還可形成具有相同或不同胺基酸序列或其它分子的更高的多聚 體或低聚體。示範性的融合構建體的長度為從約5至15，20至25，25至50，50至100，100至 150，150至200或200至300或更多個胺基酸殘基。在特定的實施方式中，第一和第二結 構域包含約 1-10、10-20、15-20、20-30、30-40、40-50、60-70、70-80、80-90、90-100 或更多
殘基的胺基酸序列，或由其組成。在更特定的實施方式中，第一結構域由15、16、17、18、19、 20,28或更多個殘基的胺基酸序列組成。融合構建體第一結構域單獨地或與第二結構域聯合形成兩親α-螺旋。兩親 α-螺旋在該α-螺旋一側主要包含親水胺基酸，而在另一側主要包含疏水胺基酸。由於 α -螺旋中每3. 6個殘基形成一個完全的旋轉，兩親α -螺旋的胺基酸序列每3-4個殘基進 行親水和疏水殘基的交替。ΡΝΝΡΝΝΡ重複模式或基序預計形成兩親α-螺旋，其中P代表帶 正電胺基酸殘基，而N代表中性胺基酸殘基。ΡΝΝΡΝΝΡ重複模式為溶解肽結合至帶負電荷細 胞膜提供了陽離子結合位點，並為膜相互作用/穿透提供了疏水位點。融合構建體從而包 含可形成兩親α -螺旋的具有一個或多個未中斷ΡΝΝΡΝΝΡ重複模式或基序或者一個或多個 中斷的ΡΝΝΡΝΝΡ重複模式或基序的第一結構域。例如，具有未中斷和中斷的ΡΝΝΡΝΝΡ重複 基序的 15 或 18 殘基胺基酸序列(如 KFAKFAKKFAKFAKK 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAK)。融合構建體第二結構域，例如靶向或結合部分，包括配體、抗體(或其抗原結合 片段)、抗原、整合素、整合素受體(例如，包含「RGD」序列基序的蛋白或肽，以及胞外基質
18(ECM)中的成分，例如單糖、二糖或寡糖、涎酸、半乳糖、甘露糖、巖藻糖、乙醯神經氨酸)、生 長因子、細胞因子、趨化因子以及能結合受體、抗體、抗原、整合素、整合素受體(例如，包含 「RGD」序列基序的蛋白或肽，以及胞外基質(ECM)中的成分，例如單糖、二糖或寡糖、涎酸、 半乳糖、甘露糖、巖藻糖、乙醯神經氨酸)、生長因子受體、細胞因子受體以及趨化因子受體 的靶向和結合部分，或由其組成。「受體」通常存在於細胞上(例如，膜受體)或細胞內。受體可以結合在細胞膜表 面上或者跨域細胞膜。例如，受體蛋白可具有跨細胞膜的跨膜結構域，可選地具有細胞質 部分或胞外部分或者兩者。因此受體包括具有包含胞外、跨膜或細胞質部分的全長完整天 然受體，及其截短形式或片段(例如，單獨的胞外、跨膜或細胞質部分或受體子序列或其組 合)。例如，可溶性受體通常缺失跨膜部分，且可選地還可缺失所有或部分的天然胞外或細 胞質區域(如存在於天然受體)。該種截短的受體形式和片段可至少保留部分對配體的結
I=I O特別或非特別地，融合結構域的靶向和結合部分結構域包含結合至受體的任意實 體(稱為受體配體)，或由其組成。靶向或結合部分的非限制性範例因而包括激素、激素類 似物、結合至激素受體的激素或激素類似物片段、生長因子，生長因子類似物、結合至受體 的生長因子或生長因子類似物片段、結合至激素或激素受體的激素受體或配體，以及結合 至激素、激素類似物、結合至激素受體的激素或激素類似物片段、結合至激素或激素受體的 激素受體或配體、生長因子，生長因子類似物、結合至受體的生長因子或生長因子類似物片 段、結合至生長因子或生長因子受體的生長因子受體或配體的靶向和結合部分。可用作結合部分的示範性激素包括促性腺激素釋放激素I、促性腺激素釋放激素 II、八目鰻III促黃體激素釋放激素、促黃體激素β鏈、促黃體激素(LH)、絨毛膜促性腺激 素(CG)、絨毛膜促性腺激素β -亞單位(β -或β -CG)、促黑色素細胞激素、雌二醇、乙烯雌 酚、多巴胺、生長激素抑制素、促卵泡成熟激素(FSH)、糖皮質激素、雌激素、睪丸激素、雄烯 二酮、二氫睪丸激素、脫氫表雄酮、黃體酮、雄性激素及其衍生物。可用作結合部分的示範性 激素受體包括促性腺激素釋放激素I受體、促性腺激素釋放激素II受體、八目鰻III促黃 體激素釋放激素受體、促黃體激素受體、絨毛膜促性腺激素受體、促黑色素細胞激素受體、 雌二醇受體、多巴胺受體、生長激素抑制素受體、促卵泡成熟激素(FSH)受體、表皮生長因 子(EGF)受體、生長激素(GH)受體、Her2-neU受體、糖皮質激素激素受體、雌激素受體、睪 丸激素受體、黃體酮受體和雄性激素受體。示範性生長因子包括表皮生長因子(EGF)、生長激素(GH)和Herf-neu。示範性生 長因子受體包括表皮生長因子(EGF)受體、生長激素(GH)受體和Her2-neu受體、IGF-I。靶向或結合部分的特定非限制性範例包括LHRH、LHRH功能性(結合)片段、 LHRH類似物以及i3CG、β CG功能性(結合)片段和β CG類似物。LHRH是一種全功能配 體，並可通過配體受體相互作用產生藥理作用，例如信號轉導途徑的活化。β CG-ala是 能夠結合至細胞膜而不會導致任何藥理作用的hCG片段。靶向或結合部分的特定非限制 性範例包括如下包含或列舉的胺基酸序列，或由該胺基酸序列組成SYAVALSAQAALARR ； SYAVALSAQAALARRA,其為 β CG 的片段，以及 QHWSYGLRPG，其為 LHRH 序列。靶向和結合部分進一步包括特別或優先在贅生瘤、腫瘤或癌症細胞或者與贅生 瘤、腫瘤或癌症細胞相關的淋巴管或血管中表達的配體的抗原。該種抗原可被統稱為「腫瘤相關抗原」或「TAA」，並包括癌胚抗原(CEA)、α-胎兒球蛋白(AFP)、前列腺特異性抗原 (PSA)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、CA-125(殘留上皮卵巢癌)、可溶性白介素-2(IL-2)受 體、RAGE-1、酪氨酸酶、MAGE-l、MAGE-2、NY-ES0-l、Melan-A/MART-l、糖蛋白(gp) 75、gplOO、 3-連環蛋白、？肌1^、]\0\1-1、2卩卩161、類泛素-1、!1( -86、￥8-1、骨粘連蛋白以及ILF3、IGF_1 等等。可被靶向的其它抗原為 CD19、CD20、CD23、CD27、CD28、CD30、CD33、CD40、CD52、CD56、 ⑶70、⑶154、類免疫球蛋白受體等。靶向和結合部分還包括鐵傳遞蛋白、葉酸及其衍生物(例如，葉酸)以及腫瘤壞死 因子(TNF)家族成員和TNF受體，例如TNF-α、TNF-β (淋巴細胞毒素、LT)、TRAIL、Fas、 LIGHT、41BB。第二結構域包含靶向或結合結構域或由其組成的融合構建體可以結合至生成或 表達能結合該第二結構域的抗原、受體或配體、整合素、抗體或抗原或者TAA的細胞。細胞 的非限制性範例包括高度增殖細胞和顯示異常或不良高度增殖的細胞。在特定的非限制性 範例中，該種細胞包括非轉移性和轉移性贅生瘤、癌症、腫瘤和惡性細胞，以及散播的贅生 瘤、癌症、腫瘤和惡性細胞以及休眠的贅生瘤、癌症、腫瘤和惡性細胞。以相對於正常或者 非高度增殖細胞的升高水平表達抗原、受體、配體、整合素、TAA等的細胞為該種細胞提供了 選擇性。因此，靶向或結合部分可結合至在高度增殖細胞(例如，非轉移性或轉移性贅生 瘤、癌症、腫瘤和惡性腫瘤，以及散播和休眠的贅生瘤、癌症、腫瘤和惡性細胞)中表達或由 該高度增殖細胞生成的，但在正常或非高度增殖細胞中不可測表達或者以相對更低的水平 生成或表達的抗原、受體、配體、整合素或TAA，從而優選靶向高度增殖細胞。表達抗原、受 體、配體、整合素或TAA的非限制性示範細胞和組織類型包括乳腺、卵巢、子宮、子宮頸、前 列腺、睪丸、腎上腺、腦垂體、胰腺、肝臟、胃腸的、皮膚、肌肉或子宮內膜細胞。結合部分的其它範例包括抗體和抗體片段。「抗體」指任意單克隆或多克隆免疫球 蛋白分子，例如IgM、IgG、IgA、IgE、IgD及任意其亞類。IgG的示範性亞類為IgG1UgG2UgG3 及IgG4。抗體包括由細胞(例如B細胞)生成或表達的抗體。抗體片段或子序列指相對於全 長抗體至少保留部分抗原結合能力的全長抗體的部分。示範性的抗體片段包括Fab、Fab』、 F(ab，)2、Fv、Fd、單鏈 Fv(scFv)、二硫鍵連接的 Fvs (sdFv)、Vl、Vh、三特異性(Fab3)、雙特異 性(Fab2)、雙特異抗體((Vl-Vh) 2或(Vh-Vl) 2)、三特異抗體(三價)、四特異抗體(四價)、微 抗體((scFv_Ch3)2)、雙特異性單鏈 Fv(Bis-scFv)、IgGdeltaCH2、scFv-Fc、(ScFv)2-Fc 或完 整免疫球蛋白的其它抗原結合片段。融合構建體包括在氨基末端具有第一結構域和在羧基末端具有第二結構域的那 些。融合構建體還包括在羧基末端具有第一結構域和在氨基末端具有第二結構域的那些。 當存在額外的結構域(例如，第三、第四、第五、第六、第七等結構域)時，第一結構域相對於 第二結構域定位在NH2-末端，或者第二結構域相對於第一結構域定位在NH2-末端。 還包括此處列舉的各種胺基酸序列，例如KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、 KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF、KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK或結合部分的子序列和胺基酸替換。在特定的實施方 式中，第一或第二結構域的子序列具有至少5-10、10-15、15-20、20-25、25-30、30-35或更 多個胺基酸殘基。 因此，本發明包括了修飾或替換，例如對第一或第二結構域或者第一和第二結構域兩者的替換、添加或刪除。因而，包含肽序列第一或第二結構域的融合構建體可結合任意 數量的保守或非保守胺基酸替換，只要該種替換不破壞第一或第二結構域的活性(溶解或 結合)。因此，例如，修飾的溶解部分(第一結構域)可保留未修飾第一結構域的至少部分 溶解活性，例如細胞殺死或凋亡，而修飾的結合部分或其類似物可保留未修飾結合部分的 至少部分結合活性。「保守替換」是一個胺基酸被生物、化學或結構類似的殘基所替換。生物類似表示 該替換與生物活性(例如，溶解活性)相容。結構類似表示該胺基酸具有類似長度的側鏈， 如丙氨酸、甘氨酸和絲氨酸，或者具有類似的大小，或者保留了第一、第二或附加結構域的 結構(例如兩親α螺旋)。化學類似表示該殘基具有相同的電荷或均為親水或疏水。特定 的範例包括用一個疏水殘基(例如異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸或蛋氨酸)替換另一個疏水殘 基，或者用一個極性殘基替換另一個極性殘基，例如用精氨酸替換賴氨酸，穀氨酸替換天冬 氨酸，或者用穀氨醯胺替換天冬醯胺，絲氨酸替換蘇氨酸等。常規測定可用於確定融合構建 體變體是否具有活性，例如，溶解活性或結合活性。特定的範例包括肽第一或第二結構域中一個或多個胺基酸(例如，1-3、3_5、 5-10、10-20或更多個)殘基的替換或刪除。修飾的融合構建體可具有與參考序列 (例如，第一結構域，例如 KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、 KFAKFAKKFAKFAKKFAK, KFAKFAKKFAKFAKKFAKF, KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 或 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 或者第 二結構域如結合部分)具有 50 %、60 %、70 %、 75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或更高一致性的肽序列。在特定的實施方式中，融合構建體包含肽第一結構域，該肽第一結構域包含了具 有選自 KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、 KFAKFAKKFAKFAKKFAKF、KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 以及 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的 肽的 12、13、15、16、17、18、19、20、22、23、24、25、26、27 或 28 個殘基的 L-或 D-胺基酸序列 或由其組成，其中一個或多個K殘基被F或L殘基的任意一個所替換，一個或多個F殘基 被K、A或L殘基的任意一個所替換，或者一個或多個A殘基被K、F或L殘基的任意一個 所替換。在另一特定的實施方式中，融合構建體包含肽第一結構域，該肽第一結構域由具 有選自 KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、 KFAKFAKKFAKFAKKFAKF、KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的 L-或D-胺基酸序列組成，其中一個或多個K殘基被F或L殘基的任意一個所替換，一 個或多個F殘基被K、A或L殘基的任意一個所替換，或者一個或多個A殘基被K、F或 L殘基的任意一個所替換；該融合構建體還包含具有結合部分或由其組成的肽第二結構 域。在進一步的特定實施方式中，融合構建體包含肽第一結構域，該肽第一結構域由具有 選自 KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、 KFAKFAKKFAKFAKKFAKF、KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的 L-或 D-胺基酸序列組成，其中一個或多個K殘基被F或L殘基的任意一個所替換，一個或多個 F殘基被K、A或L殘基的任意一個所替換，或者一個或多個A殘基被K、F或L殘基的任意 一個所替換；該融合構建體還包含具有不同於該第一結構域的1-25個L-或D-胺基酸序列 (例如，結合部分)組成的肽第二結構域，或者該融合構建體由該肽第一結構域和肽第二結 構域組成。
術語「一致性」和「同源性」及其語法變化指兩個或多個所指的實體相同。因此， 當兩個胺基酸序列為一致時，它們具有相同的胺基酸序列。「一致的範圍、區域或結構域」表 示兩個或多個所指實體中的部分相同。因此，當一個或多個序列區域的兩個胺基酸序列一 致或同源時，它們在這些區域具有一致性。術語」互補性」在指核酸序列時表示參考區域具 有100%互補性，即，顯示了沒有錯配的100%鹼基配對。由於在結構和功能相關蛋白之間序列保留數量的變化，保留功能或活性所需的序 列一致性的數量依賴於該蛋白、區域和該區域的功能或活性(例如，溶解或結合)。例如，對 於溶解肽序列，可存在多個PNNPNNP序列重複模式或基序，但不需要存在一個或多個中斷 或未中斷PNNPNNP序列重複模式或基序兩個序列之間的一致性程度可通過本領域已知的電腦程式和數學算法得以 確定。該種計算序列一致性(同源性)百分比的算法通常可說明比較區域的序列間隙 和錯配。例如，BLAST(例如，BLAST 2.0)檢索算法(例如，參見Altschul等人，J. MoI. Biol. 215 :403(1990)，可從NCBI上公開獲取)具有如下示範性檢索參數錯配2 ；間隙開 口 5 ；間隙延伸2。對於多肽序列比對，BLASTP算法通常組合使用計分矩陣，例如PAM100、 PAM 250、BLOSUM 62 或 BLOSUM 50。FASTA (例如，FASTA2 和 FASTA3)禾口 SSEARCH 序列 比對程序同樣用於對一致性程度的定量(Pearson等人，Proc. Natl. Acad. Sd. USA 85: 2444(1988) ；Pearson, Methods MoI Biol. 132 :185(2000)；以及 Smith 等人，J. MoI. Biol. 147 :195(1981))。採用基於Delaimay的拓撲映射的蛋白結構相似性定量程序已被開 發(Bostick 等人，Biochem Biophys Res Commun. 304 :320 (2003))。單獨的殘基和第一、第二和附加結構域可通過共價或非共價鍵連接。共價鍵的 非限制性範例為醯胺鍵、非天然和非醯胺化學鍵(其包括，例如，戊二醛，N-羥基琥珀醯亞 胺酯、雙功能馬來醯亞胺、N, N』 - 二環己基碳二亞胺(DCC)或N，N』 - 二異丙基碳二亞胺 (DIC))。替代醯胺鍵的連接基團包括，例如，南五味子酮(例如，-C( = 0)-CH2-或-C(= 0) -NH-)、氨基亞甲基(CH2-NH)、亞乙基、烯烴(CH = CH)、醚(CH2-O)、硫醚(CH2-S)、四唑 (CN4-)、噻唑、反醯胺(retroamide)、硫醯胺或酯(例如，參見Spatola(1983)於Chemistry and Biochemistryof Amino Acids, Peptides and Proteins.第 7 卷， 第 267-357 頁，「Peptide and Backbone Modifications, " Marcel Decker, NY)。第一和第二結構域可通過共價或非共價鍵直接融合或結合在一起。第一和第二結 構域可通過位於第一和第二結構域之間的居間序列(例如鉸鏈、間隔子或接頭)分隔。在 一個實施方式中，第一和第二結構域通過碳鏈連接。多碳鏈包括羧酸(例如二羧酸)如戊 二酸、琥珀酸和己二酸。在另一實施方式中，第一和第二結構域通過該第一和第二結構域之間的胺基酸、 肽或非肽鉸鏈、間隔子或接頭連接。肽鉸鏈、間隔子或接頭序列可具有任意長度，但通常在 約1-10、10-20、20-30、30-40或40-50胺基酸範圍內。在特定的實施方式中，第一和第二結 構域之間的肽鉸鏈、間隔子或接頭具有1-25個L-或D-胺基酸殘基或1-6個L-或D-氨基 酸殘基。包含在該第一和第二結構域之間的序列中的特定胺基酸殘基包括C、A、S或G氨基 酸殘基中的一個或多個。該第一和第二結構域之間的肽的特定非限制性範例包括如下列舉 或包含的序列GSGGS、ASAAS或CCCCCC。胺基酸和肽的衍生物可位於該第一和第二結構域 之間。胺基酸衍生物的特定非限制性範例為賴氨酸衍生物或6碳接頭如α-氨基-己酸。
具有或不具有鉸鏈、間隔子或接頭或者第三、第四、第五、第六、第七等結構域的融 合構建體可完全由合成、非天然胺基酸或胺基酸類似物組成或者可包含衍生形式。在不同 的實施方式中，融合構建體的第一或第二結構域中包含一個或多個替換L-胺基酸的D-氨 基酸、D-胺基酸和L-胺基酸混合物或完全由D-胺基酸殘基組成的序列。融合構建體可包含非天然結構成分的任意組合，其通常來自三個結構基團a)非 天然醯胺鍵(「肽鍵」)連接的殘基連接基團；b)代替天然存在胺基酸殘基的非天然殘基； 或者c)誘導二級結構擬態即，誘導或穩定化二級結構例如，α螺旋構型的殘基。融合構建 體包含環狀結構例如分子的氨基和羧基末端之間的端至端醯胺鍵或者分子內或分子間二 硫鍵。融合構建體可被體外或體內修飾，例如，通過翻譯後修飾以包含，例如，糖或碳水化合 物殘基、磷酸基團、脂肪酸、脂質等。添加的特定範例包括第三、第四、第五、第六或第七結構域。具有第一和第二結構 域的融合構建體因而包含與其共價連接的一個或多個附加結構域(第三、第四、第五、第 六、第七等)，從而賦予不同的或者補充的功能或活性。示範性的附加結構域包括有助分離 的結構域，其包括，例如，金屬鰲合肽(例如可支持在固定化金屬上純化的聚組氨酸束和組 氨酸-色氨酸模塊，可支持在固定化免疫球蛋白上純化的蛋白A區域，以及可在FLAGS伸展 /親和純化系統使用的區域(Immunex Corp,Seattle WA))。在純化結構域和融合構建體間 可選地包含裂解序列如fe因子或腸激酶以用於幫助純化。例如，表達載體可包含連接至六 組氨酸殘基的編碼融合構建體的核酸序列，後接硫氧還蛋白和腸激酶裂解位點。組氨酸殘 基促進融合構建體的檢測和純化，而腸激酶裂解位點提供從蛋白的剩餘部分純化該構建體 的手段(例如，參見 Kroll，DNA Cell. Biol. 12 441 (1993)) 融合構建體活性被各種因素影響，因此，融合構建體可通過考慮一種或多種這些 因素進行設計或優化。該種因素包括，例如，融合構建體的長度，這可影響對細胞的毒性。具 體而言，Phor21-0 CG-ala和Phor21相比Phorl4_ β CG_ala可觀察到更高的細胞毒性。形 成溶解肽結構域的α螺旋的細胞殺死活性還可依賴於該螺旋的穩定性。鉸鏈和間隔子可 影響第一結構域和肽溶解結構域的螺旋結構的膜相互作用。例如，更短的融合構建體，例如 可選地包含間隔子或鉸鏈的小於21個胺基酸的結構域，可由於更高的螺旋穩定性而顯示 更高的細胞毒性。具體而言，間隔子如ASAAS和6氨基己酸可能會提高更短融合結構域的 毒性。溶解肽結構域的電荷(部分通過該結構域中存在的特定胺基酸進行確定)同樣影響 細胞殺死能力。該結合部分相對於該溶解結構域的位置(N-或C-末端)也會影響融合構建體的 細胞殺死活性。例如，相對於溶解結構域處在C-末端的結合部分比相對溶解結構域處在 N-末端時具有更大的細胞殺死活性。融合構建體體內半衰期可通過以一個或多個非天然存在的胺基酸或衍生物構建 融合構建體肽結構域以得到提高。例如，具有D-胺基酸的融合構建體(例如，所有殘基中 高達30%或更多的殘基為D-對應異構體)耐受血清蛋白水解，因此可被激活更長時間，從 而提高體內效力。此外，用一個或多個非天然存在胺基酸或衍生物構建融合構建體肽結構 域可以減少溶血活性。該種具有D-對應異構體的融合構建體還更容易在溶液中成為單體， 它們不會明顯聚集。根據本發明，提供了通過更低的IC5tl值(其代表了實現對細胞的細胞毒性所需的融合構建體的量)確定的比Phor21- β CG-ala、Phor21-GSGGS- β CG_ala、 Phor21-ASAAS- β CG-ala或Wior 14- β CG-ala的一種或多種具有更大抗細胞增殖活性 的融合構建體。根據本發明，還提供了比Wior21-β CG-ala、Phor21-GSGGS-β CG-ala, Phor21-ASAAS-0CG-ala 或 Phor 14-β CG-ala 具有以 IC5(1/HA5(1 (溶血活性)比例表示的更 小溶血活性的融合構建體。根據本發明，進一步提供了以IC5tZHA5tl(溶血活性)比例表示小 於約0. 02,0. 01或0. 005的溶血活性的融合構建體。實施例1中列舉了測定細胞毒性和溶 血活性的代表性測定條件。肽和類肽物(ρ印tidomimetics)可採用本領域已知的方法生成和分離。肽可通 過本領域已知的化學方法完全或部分合成(例如，參見Caruthers (1980) Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 215 ；Hom(1980) ；and Banga, Α. K. , Therapeutic Peptides and Proteins, FormulationProcessinR and Delivery Systems(1995)Technomic Publishing Co., Lancaster，PA)。肽合成可通過多種固相技術實施(例如，參見Roberge Science 269 202(1995) ；Merrifield, Methods Enzymol. 289 :3 (1997))，而自動合成可通過如 ABI 431A 肽合成儀(Perkin Elmer)根據生產商說明得以實現。肽和肽模擬物還可採用組合方法合 成。合成的殘基和多肽結合類似物可通過本領域已知的多種步驟和方法合成(例如，參見 OrRanic Syntheses Collective Volumes, Gilman,等人(Eds) John Wiley & Sons, Inc., NY)。修飾的肽可通過化學修飾方法生成(例如，參見Belousov，Nucleic Acids Res. 25 3440(1997) ；Frenkel,Free Radic. Biol. Med. 19:373(1995) ；and Blommers,Biochemistry 33 :7886(1994)。本發明進一步提供了編碼本發明的融合構建體的核酸以及包含編碼融合 構建體的核酸的載體。在特定的實施方式中，核酸編碼融合構建體，其由第一和第 二結構域組成，該第一結構域由包含選自KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、 KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF, KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的肽序列的 12、13、15、16、17、18、19、20、22、23、24、 25、26、27或28殘基胺基酸序列組成，第二結構域包含靶向或結合部分或由其組成。在 另一實施方式中，核酸編碼融合構建體，融合構建體包含由選自KFAKFAKKFAKFAKK、 KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF、 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK 的胺基酸序列組成的第一 結構域和包含靶向或結合部分或者由其組成的第二結構域。在進一步的實施方式中， 核酸編碼融合構建體，該融合構建體包含由選自KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、 KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF, KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 和KFAKFAKKFAKFAKKFAKFAKKFAKFAK的胺基酸序列組成的第一結構域和由不同於所述第一 結構域的1-25胺基酸序列(例如，靶向或結合部分)組成的第二結構域，或由該第一和第 二結構域組成。核酸，在此也可稱為基因、多聚核苷酸、核苷酸序列、引物、寡聚核苷酸或探針，表 示天然或修飾的任意長度的含嘌呤和嘧啶聚合物，指多核糖核苷酸或多脫氧核糖核苷酸或 者混合的多核糖-多脫氧核糖核苷酸及其α-異構形式。兩個或多個含嘌呤和嘧啶聚合物 通常通過磷酸酯鍵或其類似物進行連接。這些術語可互換使用以表示所有形式的核酸，包 括脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。核酸可以是單鏈、雙鏈或三鏈，呈線性或環狀。核酸包括遺傳DNA、cDNA和反義。RNA核酸可以是剪接或未剪接的mRNA、rRNA、tRNA或反 義。核酸包括天然存在的、合成的以及核苷酸類似物和衍生物。作為遺傳密碼簡併的結果，核酸包括針對編碼本發明的融合構建體的序列簡併的 序列。因此，提供了編碼融合構建體的簡併核酸序列。核酸可通過多種已知的標準克隆和化學合成方法生成，並可通過定點突變或本領 域技術人員已知的其它重組技術進行有義的修飾。多聚核苷酸的純度可通過測序、凝膠電 泳、UV光譜測定進行檢測。核酸可被插入核酸構建體，其中該核酸的表達受到表達控制元件」(在此稱為「表 達盒」)的影響或調節。術語「表達控制元件」指調節或影響與之可操作連接的核酸序列表 達的一種或多種核酸序列元件。表達控制元件可在蛋白編碼基因前適當地包括啟動子、增 強子、轉錄終止子、基因沉默、起始密碼子(例如，ATG)等。可操作地連接至核酸序列的表達控制元件控制核酸序列轉錄，並適當地翻譯核酸 序列。術語「可操作地連接」指一種毗鄰(juxtaposition)，其中涉及的成分所處的關係允 許它們以其預期的方式作用。通常表達控制元件毗鄰在基因的5'或3'端，但也可以是內 含子。表達控制元件包括可誘導(即，需要外部信號進行激活)或可脫阻抑(即，需要 信號關閉激活；當該信號不再存在時，轉錄被激活或「脫阻抑」)的組成性激活轉錄的元件。 本發明的表達盒中還包含了足以賦予基因表達針對特定細胞類型或組織的可控性的控制 元件(即，組織特異性控制元件)。該種元件通常位於編碼序列的上遊或下遊(即，5'和 3')。啟動子通常位於編碼序列的5'。通過重組DNA或合成技術生成的啟動子可用於提 供本發明的多聚核苷酸的轉錄。「啟動子」表示足以引導轉錄的最小序列元件。核酸可被插入質粒以增殖進入宿主細胞和進行所需的後續遺傳操作。質粒是能在 宿主細胞中穩定增殖的核酸；質粒可以可選地包含表達控制元件，以驅動該核酸的表達。此 處所用的載體與質粒同義，並可包含針對在宿主細胞中表達的表達控制元件。質粒和載體 通常包含至少用以在細胞內增殖的複製起始區和啟動子。因此質粒和載體可用於融合構建 體編碼核酸的遺傳操作，生成融合構建體或反義核酸，以及在宿主細胞或有機體中表達該 融合構建體。細菌系統啟動子包括T7和可誘導啟動子，如噬菌體λ的pL、plac、ptrp、 ptac(ptrp-lac雜交啟動子)以及四環素應答啟動子。昆蟲細胞系統啟動子包括組成的或 是可誘導的啟動子(例如，蛻化素)。哺乳動物細胞組成型啟動子包括SV40、RSV、牛乳頭瘤 病毒(BPV)和其它病毒啟動子，或者由哺乳動物細胞(例如，金屬硫蛋白HA啟動子；熱休克 啟動子)或哺乳動物病毒(例如，腺病毒晚期啟動子；可誘導的小鼠乳房腫瘤病毒長末端重 復)的基因組獲得的可誘導啟動子。替代性地，逆轉錄病毒基因組可被遺傳修飾，以導入適 當的宿主細胞並引導融合構建體的表達。表達系統進一步包括經設計在體內使用的載體。特定的非限制性範例包括腺病毒 載體(美國專禾IJ 5，700, 470和5，731，172)，腺病毒相關載體(美國專利5，604，090)，單純 皰疹病毒載體(美國專利5，501，979)，逆轉錄病毒載體(美國專利5，624，820，5，693，508 和5，674，703)，BPV載體(美國專利5，719，054)以及CMV載體(美國專利5，561，063)。酵母載體包含組成型和可誘導啟動子(例如，參見Ausubel等人，In =CurrentProtocols in Molecular Biology, Vol.2，Ch. 13，ed.，Greene Publish.Assoc.& Wiley Interscience，1988 ；Grant 等 人 Methods in Enzymology,153 :516 (1987)， eds. Wu & Grossman :BitterMethods in Enzymology,152 :673 (1987)，eds.Berger & Kimmel, Acad. Press, N. Y.以及 Strathera 等人，The Molecular Bioloey of the YeastSaccharomyces (1982) eds. Cold Spring Harbor Press，第 I 禾口 II 卷)。可使用組 成型酵母啟動子如ADHesive或LEU2，或使用可誘導啟動子如GAL(R. Rothstein In :DNA Clonina, A Practical Approach, Vol. 11，Ch. 3，ed. D. M. Glover, IRL Press，Wash.，D. C.， 1986)。通過同源性重組等方式促進外源核酸序列整合進入酵母染色體的載體已為本領域 所知。當插入的多聚核苷酸對於常規載體而言過大時(例如，大於約12Kb)，常可使用酵母 人工染色體(YAC)。表達載體還可包含賦予對選擇性壓力的耐受性或可鑑定標記(例如，beta-半乳 糖苷酶)的選擇性標記，從而允許細胞具有待選擇、生長和擴增的載體。替代性地，選擇性 標記可位於伴隨含有編碼融合構建體的核酸的第一載體共轉染進入宿主細胞的第二載體 上。選擇系統包括但不限於可分別應用於tk-，hgprt-或aprt-細胞的單純皰疹 病毒胸苷激酶(Wigler等人，Cell 11 :223 (1977))，次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶 (Szybalska 和 kybalski，Proc. Natl. Acad. Sci USA 48 :2026 (1962)),以及腺嘌呤磷酸核 糖轉移酶(Lowy等人.，Cell 22 :8171980)基因。此外，抗代謝產物耐受可作為對可賦予 對氨甲喋呤的耐受性的 dhfr(0' Hare 等人，Proc. Natl. Acad. ki. USA 78:1527(1981))； 可賦予對黴酚酸耐受性的gpt基因(Mulligan等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78 2072(1981))；可賦予對氨基糖苷G-418的耐受性的新黴素基因(Colberre-Garapin等 人，J. MoI. Biol. 150 :1(1981))；嘌呤黴素；以及可賦予對潮黴素耐受性的潮黴素基因 (Santerre等人，Gene 30:147(1984)選擇性的基礎。其它的選擇性基因包括trpB，其允 許細胞取代色氨酸利用吲哚；hisD，其允許細胞取代組氨酸利用histinol (Hartman等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA85 :8047 (1988))；以及ODC (鳥氨酸脫羧酶)，其賦予對鳥氨酸脫 羧酶抑制劑，2-( 二氟甲基)-DL-鳥氨酸，DFMO的耐受性(McConlogue (1987) In =Current Communications in Molecular Biology, Cold SpringHarbor Laboratory)。還提供了表達融合構建體的宿主細胞，用編碼融合構建體的核酸轉化的宿主細胞 以及包含了編碼融合構建體的核酸的載體。在一個實施方式中，宿主細胞為原核細胞。在 另一實施方式中，宿主細胞為真核細胞。在不同的方面，該真核細胞為酵母或哺乳動物(例 如，人，靈長動物等)細胞。此處所用的「宿主細胞」是導入了核酸且能被增殖、表達轉錄或編碼核酸構建體的 細胞。該術語還包括該宿主細胞的任意子代或亞克隆。宿主細胞包括表達融合構建體的細 胞以及不表達融合構建體的細胞。不表達融合構建體的宿主細胞被用於增殖包含了編碼融 合構建體或反義的核酸或載體。宿主細胞包括但不限於微生物(如細菌和酵母)，以及植物、昆蟲和哺乳動物細 胞。例如，以重組噬菌體核酸、質粒核酸或粘粒核酸表達載體轉化的細菌；以重組酵母表達 載體轉化的酵母；以重組病毒表達載體(例如，花椰菜花葉病毒，CaMV ；菸草花葉病毒，TMV) 或以重組質粒表達載體(例如，Ti質粒)轉化的植物細胞系統；以重組病毒表達載體(例如，杆狀病毒)感染的昆蟲細胞系統，以重組病毒表達系統(例如，逆轉錄病毒，腺病毒，牛 痘病毒)感染的動物細胞系統，或經過工程改造可瞬時或穩定增殖或表達的轉化動物細胞 系統。融合構建體、編碼融合構建體的核酸、表達融合構建體或者以編碼融合構建體編 碼的核酸轉化的載體和宿主細胞以及反義包括分離和純化的形式。術語「分離的」在修飾 本發明的組合物時表示該組合物通過人工製備或者基本完全或至少部分從天然存在的體 內環境中分離。一般而言，分離的組合物基本不含一種或多種通常與之天然伴隨的物質，例 如，一種或多種蛋白、核酸、脂質、碳水化合物、細胞膜。術語「分離的」不排除該組合物的替 代物理形式，例如多聚體/低聚體、變體、修飾或衍生形式或由人工生成的宿主細胞中表達 的形式。術語「分離的」還不排除其組合中的任意一個由人工製備的形式(例如，藥物製劑 和組合物)。當不含部分、大量、基本所有通常與之天然相伴的物質時，「分離的」組合物也可以 是」純化的」。因此，基本純的分離的融合構建體不包含數百萬種其它序列的多肽或多聚核 苷酸，例如在蛋白庫中的蛋白或在基因組或cDNA庫中的核酸。「純化的」組合物可結合一種 或多種其它分子。根據本發明，提供了融合構建體的混合物或組合物。在一個實施方式中，混合物包 含一種或多種融合構建體以及藥學可接受的載體或賦形劑。在另一實施方式中，混合物包 含一種或多種融合構建體和抗細胞增殖、抗腫瘤、抗癌或抗贅生瘤的治療或藥劑。在進一步 的實施方式中，混合物包含一種或多種融合構建體和免疫增強劑。還提供了例如一種或多 種融合構建體在藥學可接受的載體或賦形劑中與一種或多種抗細胞增殖、抗腫瘤、抗癌或 抗贅生瘤的治療或藥劑以及免疫增強的治療或藥劑的組合。本發明的融合構建體(例如包含具有第一溶解結構域和第二結合部分結構域的 胺基酸序列的多肽)可用於靶細胞的溶解、細胞死亡或凋亡。該種細胞可被選擇性靶向。例 如，表達受體、配體、抗原或抗體的細胞可被融合構建體靶向，從而相對於表達更少受體、配 體、抗體或抗體的細胞更優先被殺死。根據本發明，提供了減少或抑制細胞的增殖的方法，以及減少或抑制細胞增殖的 方法。在一個實施方式中，一種方法包括將細胞與數量上足以減少或抑制該細胞的增殖的 融合構建體相接觸。在另一實施方式中，一種方法包括將細胞與數量上足以減少或抑制細 胞增殖的融合構建體相接觸。還提供了減少或抑制高度增殖細胞的增殖的方法，以及減少或抑制高度增殖細胞 的增殖的方法。在一個實施方式中，一種方法包括將高度增殖細胞(一種或多種)與數量 上足以減少或抑制增殖的融合構建體相接觸。進一步提供了減少或抑制非轉移性或轉移性贅生瘤、癌症、腫瘤和惡性細胞的增 殖的方法。在一個實施方式中，一種方法包括將贅生瘤、癌症、腫瘤或惡性細胞與數量上足 以減少或抑制該細胞的增殖的融合構建體相接觸。還進一步提供了減少或抑制休眠或非分裂非轉移性或轉移性贅生瘤、癌症、腫瘤 和惡性細胞的增殖的方法。在一個實施方式中，一種方法包括將休眠或非分裂贅生瘤、癌 症、腫瘤或惡性細胞與數量上足以減少或抑制該休眠或非分裂細胞的增殖的融合構建體相 接觸。
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此外提供了選擇性減少或抑制表達受體、配體、抗體或抗原的細胞(例如，高度增 殖細胞)的增殖的方法。在一個實施方式中，一種方法包括將細胞與數量上足以減少或抑 制該細胞(例如，高度增殖細胞)的增殖的融合構建體相接觸，其中所述肽的結合部分結合 至由該細胞表達的受體、配體、抗體或抗原。還額外提供了選擇性減少或抑制表達受體、配體、抗體或抗原的贅生瘤、腫瘤、癌 症或惡性細胞的增殖的方法。在一個實施方式中，一種方法包括將細胞與數量上足以減少 或抑制該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞的增殖的融合構建體相接觸，其中所述融合構建體 的結合部分結合至由該細胞表達的受體、配體、抗體或抗原。術語「接觸」表示兩個或更多個實體之間(例如，融合構建體和細胞之間)的直接 或間接結合或相互作用。此處所用的接觸包括在溶液中、固相中、體外、間接體內、細胞中以 及體內接觸。體內接觸可被稱為施用。被靶向以非選擇性或選擇性減少或抑制增殖的細胞包括表達任意被該融合結構 域的結合部分結合的分子的細胞。示範性的細胞包括表達受體(例如，激素受體、生長因子 受體、細胞因子受體、趨化因子受體)、配體(例如，激素、生長因子、細胞因子、趨化因子)或 者抗體或抗原或整合素或整合素受體(含「RGD」序列基序的肽)或存在於胞外介質(ECM) 中的成分如單糖、二糖或寡糖、涎酸、半乳糖、甘露糖、巖藻糖、乙醯神經氨酸、含「RGD」序列 基序的肽等的細胞。靶細胞包括表達性或性腺類固醇激素或者性或性腺類固醇激素受體的細胞。靶細 胞還包括表達受體的細胞，其中該受體結合至促性腺激素釋放激素I、促性腺激素釋放激素 II、八目鰻III促黃體激素釋放激素、促黃體激素、絨毛膜促性腺激素、促黑色素細胞激素、 雌二醇、乙烯雌酚、多巴胺、生長激素抑制素、促卵泡成熟激素(FSH)、糖皮質激素、雌激素、 睪丸激素、雄烯二酮、二氫睪丸激素、脫氫表雄酮、黃體酮、雄性激素、表皮生長因子(EGF)、 Herf/neu、維生素H、葉酸或其衍生物(例如，葉酸)、鐵傳遞蛋白、甲狀腺刺激激素(TSH)、 內皮素、蛙皮素、生長激素、血管活性腸肽、乳鐵蛋白、整合素(例如，α-5β3或α_5β1整 合素)、神經生長因子、CD19、CD20、CD23、CD27、CD28、CD30、CD33、CD40、CD52、CD56、CD70、 CD154、類免疫球蛋白受體、RORU IGF-1、癌胚抗原(CEA)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺 特異性膜抗原(PSMA)、轉化生長因子α、轉化生長因子β、胰島素-樣生長因子、血管內皮 生長因子、胰島素、血漿銅藍蛋白或HIV-tat。靶細胞進一步包括表達結合性或性腺類固醇激素或者性或性腺類固醇激素受體 的受體的細胞。靶細胞還包括表達受體的細胞，所述受體結合至促性腺激素釋放激素I、促 性腺激素釋放激素II、八目鰻III促黃體激素釋放激素、促黃體激素β鏈、促黃體激素、 絨毛膜促性腺激素、絨毛膜促性腺激素亞單位、促黑色素細胞激素、雌二醇、乙烯雌酚、 多巴胺、生長激素抑制素、促卵泡成熟激素(FSH)、糖皮質激素、糖皮質激素、雌激素、睪丸激 素、雄烯二酮、二氫睪丸激素、脫氫表雄酮、黃體酮、雄性激素、表皮生長因子(EGF)、Her2/ neu、維生素H、葉酸或其衍生物(例如，葉酸)、鐵傳遞蛋白、甲狀腺刺激激素(TSH)、內皮素、 蛙皮素、生長激素、血管活性腸肽、乳鐵蛋白、整合素(例如，α-5β3ΟΓ α_5β1整合素)、 神經生長因子、CD19、CD20、CD23、CD27、CD28、CD30、CD33、CD40、CD52、CD56、CD70、CD154、 類免疫球蛋白受體、R0R1、IGF-1、癌胚抗原(CEA)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺特異性 膜抗原(PSMA)、轉化生長因子α、轉化生長因子β、胰島素、血漿銅藍蛋白、HIV-tat或其類似物(例如，米非司酮、氟他胺、柳菩林、zxoladex、醋酸組氨瑞林、synatel曲普瑞林、布舍 瑞林、西曲瑞克、加尼瑞克、阿巴瑞克、安肽、替維瑞克或地加瑞克(Fe200486))。被靶向以非選擇性或選擇性減少或抑制增殖的細胞額外包括表達「腫瘤相關抗 原」如癌胚抗原(CEA)、α-胎兒球蛋白(AFP)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺特異性膜 抗原(PSMA)、CA 125(殘留上皮卵巢癌)、可溶性白介素-2 (IL-2)受體、RAGE-1、酪氨酸酶、 MAGE-1、MAGE-2、NY-ESO-UMelan-A/MART-1、糖蛋白(gp)75、gpl00、3 -連環蛋白、PRAME、 MUM-1、ZFP161、類泛素-1、H0X-B6、YB-1、骨粘連蛋白和ILF3的細胞。被靶向以非選擇性 或選擇性減少或抑制增殖的細胞還額外包括表達鐵傳遞蛋白、葉酸及其衍生物(例如，葉 酸)和腫瘤壞死因子(TNF)家族成員例如TNF-α ,TNF-β (淋巴細胞毒素、LT)、TRAIL、Fas、 LIGHT和41BB以及受體的細胞。本發明的融合構建體和方法還可適用於治療不良或異常的細胞增殖和高度增殖 紊亂。因此，根據本發明，提供了治療不良或異常細胞增殖和高度增殖紊亂的方法。在一個 實施方式中，一種方法包括向(需要治療的)對象施用數量上足以治療不良或異常細胞增 殖或高度增殖紊亂的融合構建體。術語「高度增殖紊亂」指任意不良的、異常的細胞存活(例如，未進行程序性細胞 死亡或凋亡)、生長和增殖。該種疾病包括增生、非轉移性和轉移性贅生瘤、癌症、腫瘤和惡 性腫瘤。不良的、異常細胞增殖和高度增殖紊亂可影響對象中的任意細胞、組織、器官。不 良的或異常的細胞增殖和高度增殖紊亂可局部、區域或系統地存在於對象中。高度增殖紊 亂可由多個組織或器官發生，該組織或器官包括但不限於乳腺、肺(例如，小細胞或非小細 胞)、甲狀腺、頭和頸、腦、鼻咽、喉、鼻或竇、淋巴、腎上腺、腦垂體腺、甲狀腺、淋巴腺、胃腸的 (嘴、食道、胃、十二指腸、迴腸、空腸(小腸)、結腸、直腸)、泌尿生殖道(子宮、卵巢、陰道、 子宮頸、子宮內膜、輸卵管、膀胱、睪丸、陰莖、前列腺)、腎、胰腺、肝、骨、骨髓、淋巴腺、血液、 肌肉、皮膚和幹細胞，其可以或不可以轉移至其它次級位點、區域或位置。本發明的融合構建體和方法還適用於任意細胞、器官或組織來源的轉移性或非轉 移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤。該種紊亂可實際上影響任意細胞或組織類型，例如， 癌，肉瘤，黑素瘤，神經的和網狀內皮的或造血的贅生紊亂(例如，骨髓瘤，淋巴瘤或白血 病)。術語「贅生瘤」和「腫瘤」表示生長、增殖或存活大於普通的對應細胞的生長、增殖 或存活的細胞或細胞群體，例如，細胞增殖或分化疾紊亂。腫瘤是形成了明顯胞塊和生長的 贅生瘤。「癌症」和「惡性腫瘤」指可侵入臨近空間、組織或器官的贅生瘤或腫瘤。「轉移瘤」 指從其原發位點散播或擴散至對象體內一個或多個次級位點、位置或區域的贅生瘤、腫瘤、 癌症或惡性腫瘤，其中該位點、位置或區域不同於原發腫瘤或癌症。(轉移性或非轉移性)贅生瘤、腫瘤、癌症和惡性細胞包括休眠或殘留贅生瘤、腫 瘤、癌症和惡性細胞。該種細胞通常由未分裂(G0-G1停滯)的殘餘腫瘤細胞組成。這些細 胞可存留在原發位點或作為散播的贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞成為微小殘留疾病。這些 休眠的贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞保持為頓挫型(imsymptomatic)，但當這些休眠細胞 增殖時可形成嚴重的症狀和死亡。本發明可用於減少或抑制休眠贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性 細胞的增殖，這可進而抑制或減少腫瘤或癌症的方法或者腫瘤或癌症的轉移或進展。根據本發明，提供了治療具有轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤的方法。在一個實施方式中，一種方法包括向(有治療需要的)對象施用數量上足以治療(例 如，減少或抑制增殖)轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤的融合構建體。該轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤可處於任意階段，例如，早期 或晚期，例如I、II、III、IV或V階段腫瘤。該轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅 生瘤可經過預先處理或被穩定化(非進展)或緩解。就轉移性而言，本發明的方法可用於減少或抑制原發腫瘤或癌症轉移至其它位點 或者轉移性腫瘤或癌症在遠離原發性腫瘤或癌症的其它位點的形成或確立，從而抑制或減 少腫瘤或癌症方法或者腫瘤或癌症進展。因此，除了其它作用，本發明的方法可1)減少或 抑制潛在或者已經形成轉移的腫瘤或癌症細胞(例如，散播腫瘤細胞，DTC)的生長、增殖、 遷移或侵染；2)減少或抑制由原發腫瘤或癌症產生的轉移瘤在不同於該原發腫瘤或癌症 的位點、局部或區域的形成或確立；幻減少或抑制轉移瘤形成或確立之後該轉移瘤在不同 於該原發腫瘤或癌症的一個或多個其它位點、局部或區域的生長或增殖；以及4)者減少或 抑制該轉移瘤形成或確立之後其它轉移瘤的形成或確立。轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤的細胞可聚集在「實體」細胞塊 中或者可被分散或擴散。「實體」腫瘤指通常具體在一起並形成胞塊的癌症、贅生瘤或惡性 腫瘤。特定的非限制性範例包括內臟腫瘤如黑素瘤、乳腺、胰腺、子宮和卵巢癌、睪丸癌(包 括精細胞瘤)、胃結腸癌、肝癌、腎上腺、直腸和膀胱癌、肺、頭和頸癌以及腦腫瘤/癌症。癌(其指上皮或內分泌腺組織的惡性腫瘤)包括呼吸系統癌、胃腸系統癌、泌尿生 殖系統癌、睪丸癌、乳腺癌、前列腺癌、內分泌系統癌和黑素瘤。示範性的癌包括由子宮、子 宮頸、肺、前列腺、乳腺、頭和頸、結腸、胰腺、睪丸、腎上腺、腎、食道、胃、肝和卵巢形成的癌。 該術語還包括癌肉瘤，例如，包括由癌和肉瘤組織構成的惡性腫瘤。腺癌包括腺組織的癌， 或者腫瘤形成腺狀結構的癌。肉瘤指間質細胞來源的惡性腫瘤。示範性的肉瘤包括，例如，淋巴肉瘤、脂肪肉瘤、 骨肉瘤、軟骨肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤和纖維肉瘤。神經贅生瘤包括神經膠質瘤、惡性膠質瘤、腦膜瘤、成神經細胞瘤、成視網膜細胞 瘤、星形細胞瘤和少枝膠質細胞瘤。「液態瘤」表示具有分散或擴散性質的贅生瘤，因為它們通常不形成固體團塊。特 定的範例包括網狀內皮組織或造血系統的贅生瘤，如淋巴瘤、骨髓瘤和白血病。白血病的非 限制性範例包括急性和慢性成淋巴細胞、成髓細胞白血病以及多發性骨髓瘤。通常而言，該 種疾病源自於分化較差的急性白血病，例如，成紅細胞白血病和急性成巨核細胞白血病。特 定的骨髓疾病包括，但不限於，急性早幼粒白血病(APML)，急性骨髓性白血病(AML)以及慢 性骨髓性白血病(CML)。淋巴惡性腫瘤包括，但不限於，急性成淋巴細胞白血病(ALL)，其包 括B系ALL和T系ALL，慢性淋巴細胞白血病(CLL)，幼淋巴細胞白血病(PLL)，毛細胞白血 病(HLL)以及特發性巨球蛋白血症(WM)。特定的惡性淋巴瘤包括，非Hodgkin淋巴瘤及變 體、周邊T細胞淋巴瘤、成年T細胞白血病/淋巴瘤(ATL)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、大顆 粒淋巴細胞白血病(LGF)、Hodgkin疾病和Reed-Sternberg疾病。此處所披露的不良或異常細胞增殖或高度增殖紊亂可發生於子宮、乳腺、陰道、子 宮頸和輸卵管。子宮內膜異位發生於子宮的細胞生長於子宮外並進入氣體區域(例如，卵 巢、膀胱或腸)時。纖維瘤和息肉可影響子宮、乳腺、陰道、子宮頸和輸卵管。
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因此，根據本發明，提供了治療子宮內膜異位和纖維瘤或息肉的方法。在一個實施 方式中，一種方法包括向對象施用數量上足以治療子宮內膜異位的融合構建體。在另一實 施方式中，一種方法包括向對象施用數量上足以治療纖維瘤或息肉的融合構建體。靶細胞包括參與生殖或生育力或者生殖或生育力所需的細胞。因此，根據本發明， 提供了減少動物生育力的方法。在一個實施方式中，一種方法包括向對象施用數量上足以 減少生育力或減少受孕可能性或者減少雄性哺乳動物精子生成的融合構建體。同樣如此處披露，不良或異常細胞增殖或高度增殖紊亂可發生於前列腺。因此，根 據本發明，提供了治療良性前列腺增生或轉移性前列腺贅生瘤的方法。在一個實施方式中， 一種方法包括向對象施用數量上足以治療良性前列腺增生或轉移性前列腺贅生瘤的融合 構建體。任意具有抗細胞增殖活性或效果的組合物、治療、方案、療法或用藥法可與融合構 建體聯用或者與本發明的方法聯用。本發明的融合構建體和方法因此包括抗增殖、抗腫瘤、 抗癌症、抗贅生瘤以及抗轉移瘤的治療、方案、療法，其包括任意其它抑制、減少、阻礙、減 緩、降低或防止高度增殖紊亂(例如腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤)的生長、進展、轉移、增 殖或存活或者在體外或體內惡化的組合物、治療、方案或治療方案。抗增殖(例如，腫瘤)療 法的特定非限制性範例包括化學療法、免疫療法、放射療法(電離或化學)、局部熱(高熱) 療法、手術切除和疫苗接種。融合構建體可施用於該抗細胞增殖、抗贅生瘤、抗腫瘤、抗癌、 抗轉移瘤或免疫增強治療或療法施用之前、施用同時或施用之後。融合構建體可作為與抗 細胞增殖、抗贅生瘤、抗腫瘤、抗癌症、抗轉移瘤或免疫增強治療或療法的組合施用，以治療 轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤。抗增殖、抗贅生瘤、抗腫瘤、抗癌症和抗轉移瘤組合物、療法、計劃、或治療包括能 夠防止、破壞、中斷、抑制或延緩細胞周期進展或細胞增殖；刺激或增強凋亡或細胞死亡，抑 制核酸或蛋白合成或代謝，抑制細胞分化或減少、降低或抑制細胞存活，或必要的細胞存活 因子、生長因子或信號轉導途徑(胞外或胞內)的生成和利用的組合物、療法、計劃或治療。 具有抗細胞增殖、抗贅生瘤、抗腫瘤、抗癌症和抗轉移瘤活性的化學劑類別的非限制性範例 包括烷化劑、抗代謝物、植物提取物、植物生物鹼、亞硝基脲、激素、核苷酸和核苷酸類似物。 具有抗細胞增殖、抗贅生瘤、抗腫瘤、抗癌症和抗轉移瘤活性的藥物的特定範例包括環磷醯 胺、硫唑嘌呤、環孢菌素A、強的松龍、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、氮芥、白消安、氨甲蝶呤、 6-巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、AZT、5-氮胞苷(5-AZC)和5-氮胞苷相關化 合物如如地西他濱(5-氮雜-2'脫氧胞苷)、阿糖胞苷、1-β-D-阿拉伯呋喃糖-5-氮胞嘧 啶和二氫-5-氮雜胞苷、博來黴素、放射菌素D、光神黴素、絲裂黴素C、卡氮芥、環己亞硝脲、 司莫司汀、鏈脲菌素、羥脲、順式鉬氨、米託坦、甲基苄胼、氮烯唑胺、紫杉酚、長春花鹼、長春 新鹼、阿黴素和二溴甘露醇等。適用於融合構建體和方法的其它藥劑已為本領域所知且可被採用。例如，生物制 品如抗體、細胞生長因子、細胞存活因子、細胞分化因子、細胞因子和趨化因子可被施用。 單克隆抗體的非限制性範例包括利妥昔單抗(Rituxan )、曲妥單抗(Herceptin)、貝伐 單抗(Avastin)、西妥昔單抗(Erbitux)、阿侖單抗(Campath)、帕木單抗(Vectibix)、替 伊莫單抗(Zevalin)、託西莫單抗(Bexxar)等，其可特別與本發明的融合構建體聯用。適 於與該融合構建體聯用的其它靶向藥物為伊馬替尼(Gleevec)、吉非替尼(Iressa)、硼替佐米(Velcade)、拉帕替尼(Tykerb)、舒尼替尼(Sutent)、索拉非尼(Nevaxar)、尼羅替尼 (Tasigna)等。細胞生長因子、細胞存活因子、細胞分化因子、細胞因子和趨化因子的非限 制性範例包括IL-2、IL-I α、IL-I β、IL_3、IL_6、IL_7、粒細胞-巨噬細胞-集落刺激因子 (GMCSF)、IFN- y、IL—12、TNF- α、TNF β ,MIP-Ια MIP-I β、RANTES, SDF—l、MCP_1、MCP_2、 MCP-3、MCP-4、嗜酸粒細胞親合素、嗜酸粒細胞親合素-2、I-309/TCA3、ATAC、HCC-l、HCC-2、 HCC-3、LARC/MIP-3a、PARC、TARC、CK β、CK β 6、CK β 7、CK β 8、CK β 9、CK β 11、CK β 12,C10, IL-8、GRO α、GRO β、ΕΝΑ-78、GCP-2、PBP/CTAPIII β -TG/NAP-2、Mig、PBSF/SDF-1 和淋巴細 胞趨化因子。額外的非限制性範例包括免疫增強治療和療法，其包括基於細胞的療法。具體而 言，免疫增強治療和療法包括施用淋巴細胞、漿細胞、巨噬細胞、樹狀細胞、NK細胞和B-細 胞。提供了治療轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、贅生瘤或惡性腫瘤的方法，由於患有或 易患有轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤而有此需要的對象的治療方法，以 及提高抗增殖、抗腫瘤、抗癌症、抗贅生瘤或抗惡性腫瘤的療法的效力或對其改進的方法。 在各自的實施方式中，一種方法包括向患有或易患轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤 或贅生瘤的對象施用數量上足以治療該轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤 的融合構建體；向對象施用數量上足以治療該對象的融合構建體；以及向正經歷或已經經 歷轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤療法的對象施用數量上足以提高該抗 增殖、抗腫瘤、抗癌症、抗贅生瘤或抗惡性腫瘤療法的效果的融合構建體。本發明的方法可在不良或異常細胞增殖或高度增殖紊亂、疾病或病症開始的證據 (例如，一種或多種症狀)出現之前(即，預防)、同時或之後進行施用。在不良或異常細胞 增殖或高度增殖紊亂的症狀形成之前、同時或之後立即施用融合構建體可減少該對象的不 良或異常細胞增殖或高度增殖紊亂、疾病或病症的一種或多種症狀的發生、頻率、嚴重性、 進展或持續時間。此外，在不良或異常細胞增殖或高度增殖紊亂的一種或多種症狀形成之 前、同時或之後立即施用融合構建體可抑制、減少或防止高度增殖細胞(例如，轉移瘤)擴 散或散播至對象體內其它位點、區域、組織或器官或者高度增殖細胞(例如，轉移瘤)在對 象體內其它位點、區域、組織中形成。本發明的融合構建體和方法(例如治療方法)可向對象提供可檢測或可測量治療 效果或改進。治療效果或改進是任意可測量或可檢測的、客觀的或主觀的、瞬時的、臨時的、 或者更長期的對對象的效果或對對象的組織、器官、細胞或細胞群中任意程度的狀況、紊亂 或疾病、有害症狀、後果或基本病因的改進。治療效果和改進包括，但不限於，減少或降低與 紊亂、疾病或病症相關的一種或多種症狀或併發症的發作、頻率、嚴重性、進展或期限，或者 減少或降低紊亂、疾病或病症的發病原因或後續作用。本發明的融合構建體和方法因而包 括向對象提供治療效果和改進。在治療效果和改進作為期望的結果的本發明的一種方法中，本發明的融合構建體 可以充分量或有效量施用至需要的對象。「充分量」或「有效量」指以單獨或多重劑量、單用 或與一種或多種其它組合物(治療劑，例如化療或免疫刺激藥物)、治療、計劃或治療方案 聯用時，可向對象提供任意時間長度(長期或短期)的可測應答、任意可測量或可檢測程度 的或是任意時間長度(例如，持續小時、天、月、年或治癒)的預期結果或效果的數量。用於治療(例如，提供治療效果或改進)的劑量或「充分量」或「有效量」通常能夠以可測量的程 度有效改善紊亂、疾病或病症，或者該紊亂、疾病或病症的一種、多種或所有的有害症狀、後 果或併發症，儘管減少或阻止該紊亂、疾病或病症或症狀的進展或惡化被認為是理想結果。術語「改善」表示對於對象病症的可檢測的客觀或主觀改進。可檢測的改進包括 由紊亂、疾病或病症引起或與之相關的症狀的發作、頻率、嚴重性、進展或期限的主觀或客 觀上的減少，對疾病、疾病或病症的發病原因或後果的改進，或者紊亂、疾病或病症的取消。因此治療可導致紊亂、疾病或病症，或者相關的症狀或後果，或者發病原因的抑 制、減少或防止；紊亂、疾病、病症、症狀或後果的進展或惡化，或者該紊亂的一種或多種其 它症狀、疾病狀況或症狀的進一步惡化或發作的抑制、減少或防止。因此，成功的治療結果 導致「治療作用」或「效果」或者抑制、減少或防止對對象體內一種或多種症狀的發作、頻率、 嚴重性、進展或期限，或者病症、紊亂、疾病或症狀的發病原因或後果。因此，可影響該病症、 紊亂、疾病或症狀的一種或多種發病原因的治療方法被認為是有益的。對紊亂或病症的進 展或惡化的穩定或抑制同樣是成功的治療結果。因此治療效果或改進不需要完全消除與病症、紊亂或疾病相關的任意一種、多數 或所有症狀、併發症、後果或發病原因。因此，當對於對象的症狀有了改進，或者在較短或較 長的時間期限內(小時、天、周、月等)一種或多種相關有害症狀或併發症或後果或發病原 因的發作、頻率、嚴重性、進展或期限有了部分減少，或者該紊亂或疾病的一種或多種生理、 生化或細胞表現或特徵的惡化或進展有了部分減少(例如，穩定該病症、紊亂或疾病的一 種或多種症狀或併發症)時，便達到了令人滿意的終點。在特定的實施方式中，治療方法導致轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅 生瘤細胞量、體積、大小或細胞數量的部分或完全破壞；導致刺激、誘導或提高轉移性或非 轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤細胞壞死、溶解或凋亡；導致減少轉移性和非轉移性 腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤體積大小、細胞量；導致抑制或防止高度增殖細胞(例如轉 移瘤)擴散或散播至對象體內其它(次級)位點、區域、組織或器官或者高度增殖細胞(例 如，轉移瘤)在對象體內其它(次級)位點、區域、組織或器官的確立；或導致延長對象壽 命。除了特定的實施方式之外，一種治療方法導致減少或降低了與轉移性或非轉移性腫瘤、 癌症、惡性腫瘤或贅生瘤相關或由其因引起的不良症狀或併發症的嚴重性、持續時間或頻 率。充分量或有效量不需要在單次施用中提供，並且可以(但非必須)單用或與另一 組合物(例如，化療或免疫增強或刺激藥劑)、治療、計劃或治療方案聯用。例如，該數量可 根據該對象、紊亂的狀態、所治療的疾病或病症或者待治療的副作用的需求相應增加。此 外，如果在沒有第二組合物(例如，化療或免疫刺激藥劑)、治療、計劃或治療方案時以單劑 量或多劑量給用時，充分量或有效量不需要充分或有效，因為還可在該劑量之外採用附加 的劑量、數量或期限，或者可包含附加組合物(例如，化療或免疫刺激藥劑)、治療、計劃或 治療方案以達到對給定對象的充分和有效。認為充分的數量還包括導致另一治療、治療方 案或計劃的使用減少的數量。 充分量或有效量無需對每一個治療對象有預防或治療效果，或對給定組或群內大 部分治療對象有效。在治療方法中常見的是，部分對象對給定的治療、治療方案或計劃顯示 出更大或更小的應答。充分量或有效量指對特定對象充分或有效，而非對組或一般群充分或有效。該種數量將部分依賴於待治療的病症，例如不良的或異常的細胞增殖或高度增殖 紊亂(例如，轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤)的類型和階段，預期的治療 效果，以及個體對象(例如，該對象的生物利用度、性別、年齡等)。不良或異常細胞增殖如高度增殖紊亂(例如，轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性 腫瘤或贅生瘤)的治療效果或改進的特定非限制性範例包括細胞大小、量或體積的減小， 細胞大小、量或體積的抑制，惡化或進展的減緩或抑制，刺激細胞壞死、溶解或凋亡，減少或 抑制贅生瘤或重量、惡性腫瘤或轉移瘤，減少死亡率，以及延長對象壽命。因此，儘管沒有 形成對轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤的完全消除，但抑制或減緩大小、 量、體積或轉移的上升(穩定化)可增加壽命(減少死亡率)，即使只有數天、數周或數月。 可以減少或降低的與高度增殖紊亂(例如，轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生 瘤)相關的不良症狀或併發症包括，例如，疼痛、噁心、不適、食欲不振、嗜睡和虛弱。對不良 的或異常的細胞增殖，例如高度增殖紊亂(例如，轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤 或贅生瘤)的症狀的發作、頻率、嚴重性、進展或持續時間的減少，例如，對主管感受的改進 (例如，精神、食慾的改善，噁心的減少，活動能力或心理健康的改善等)均為治療效果或改 進的範例。例如，如果施用可導致對不良或異常細胞增殖如高度增殖紊亂(例如，轉移性或 非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤)的治療所需的化學治療藥物、放射或免疫療法更 少，融合構建體的重複或有效量被認為具有治療效果。術語「對象」指動物，通常為哺乳動物，例如人，非人靈長動物(猿、長臂猿、黑猩 猩、猩猩、獼猴)，馴養動物(狗和貓)，畜牧動物(馬、牛、山羊、綿羊、豬)，實驗動物(小鼠、 大鼠、兔子、豚鼠)。對象包括動物疾病模型，例如，用於體內融合構建體分析的不良的或異 常的細胞增殖如高度增殖紊亂(例如，轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤) 的動物模型。適於治療的對象包括具有或者易具有轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或 贅生瘤細胞，正經歷或者曾經歷抗增殖(例如，轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或 贅生瘤)療法的對象，包括緩解中的對象。「易患」對象通常具有與不良或異常細胞增殖、增 生的形成(例如，腫瘤)相關的風險因素。具有風險或候選對象的特定範例包括具有表達融合構建體可結合的受體、配體、 抗原或抗體的細胞的對象，特別地靶向壞死、溶解、殺死或破壞的細胞比非靶細胞表達更高 數量或量的受體、配體、抗原或抗體。該種細胞可選擇性或優選地靶向壞死、溶解或殺死。具有風險的對象還包括候選進行或正進行手術切除、化學療法、免疫療法、電離或 化學放射療法、局部或區域熱(高熱)療法或疫苗接種的對象。本發明因而適用於治療易 患轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤或者與轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、 惡性腫瘤或贅生瘤相關的併發症(例如，由於轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅 生瘤在一個穩定或緩解時期後重新出現或者重新生長)的對象。風險因素包括年齡、生活習慣(飲食，吸菸)、職業(醫療和臨床人員，農業和畜業 工作者)、環境因素(致癌物質暴露)、家族史(自身免疫疾病，糖尿病等)、遺傳傾向等。例 如，易患黑色素瘤的對象的風險因素包括過量日光照射(紫外輻射)、白皮膚、痣數量過多 (發育不良痣)、患者顯型、家族史或之前的黑色素瘤史。因此，易患癌症的對象可通過生物習慣、職業、環境因素、家族史以及腫瘤相關基因、基因刪除或基因突變的篩選得以鑑別。例 如，易患乳腺癌的對象缺失Brcal。易患結腸癌的對象具有幼年或高頻率的鼻息肉形成，或 者刪除或突變的腫瘤抑制基因，例如腺瘤性結腸息肉病(APC)基因。對象還包括被其它治療排除的對象。例如，特定的對象可以不是手術切除、化學療 法、免疫療法、電離或化學放射療法、局部或區域熱(高熱)療法或疫苗接種的良好候選者。 因此，根據本發明的治療的候選對象包括並非手術切除、化學療法、免疫療法、電離或化學 放射療法、局部或區域熱(高熱)療法或疫苗接種候選者的對象。融合構建體可配製為單位劑量或單位劑型。在特定的實施方式中，融合構建體 的數量可有效治療患有不良或異常細胞增殖或高度增殖紊亂的對象。在附加的特定實施 方式中，融合構建體的量可有效治療患有轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤 的對象。在進一步特定的實施方式中，融合構建體的量可有效減少對象生育力。示範性 的單位劑量的範圍為 25-250、250-500、500-1000、1000-2500or 2500-5000,5000-25, 000、 5000-50, OOOng ；and fromabout 25-250、250-500、500_1000、1000-2500 或 2500-5000、 5000-25，000,5000-50, 000 μ g。本發明的組合物和方法可在體外、間接體外或體內接觸或提供。組合物可作 為單獨或多重劑量(例如，以有效或充分量)施用以提供目標作用。在連續數天、隔 天或間歇性施用的示範性劑量的範圍為約25-250、250-500、500-1000、1000-2500或 2500-5000,5000-25, 000,5000-50,OOOpg/kg ；從約 50-500、500-5000、5000_25，000 或 25，000-50，000ng/kg ；以及從約 25-250、250-500、500_1000、1000_2500or 2500-5000、 5000-25，000,5000-50, 000μ g/kg。單獨或多重劑量可連續數天、隔天或間歇地施用。可通過全身、區域或局部施用等任何途徑施用該組合物和實施該方法。例如，融合 構建體可全身、區域或局部、靜脈、口服(例如，攝取或吸入)、肌肉、腹膜、皮內、皮下、腔內、 顱內、透皮(局部)、腸胃外(例如經黏膜或經直腸)施用。本發明的組合物和方法包括可 通過(微)膠囊化傳遞系統施用或裝填進入移植物進行施用的藥物製劑。本發明進一步提供了融合構建體和方法，其中該融合構建體包含在藥物組合物 中。藥物組合物指「藥學可接受的」和「生理可接受」的載體、稀釋劑或賦形劑。此處所用的 術語「藥學可接受的」和「生理可接受的」在涉及載體、稀釋劑或賦形劑時包括與藥物施用以 及與該製劑中其它成分相容的溶劑(水性或非水性)、清潔劑、溶液、乳液、分散介質、塗層、 等張劑和吸收促進或延緩劑。該種製劑可包含在片劑(包衣或未包衣)、膠囊(硬或軟)、 微粒、乳劑、粉末、顆粒、晶體、懸浮劑、糖漿或酏劑。藥物組合物可製成與特定施用途徑相容的劑型。用於腸胃外、皮內或皮下施用的 組合物可包含無菌稀釋劑，例如水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成 的溶劑。該製劑可包含一種或多種防腐劑以防止微生物生長(例如，苯甲醇或羥苯甲酸甲 酯等抗菌劑；抗壞血酸或重亞硫酸鈉等抗氧化劑；乙二銨四醋酸等螯合劑；醋酸鹽、檸檬酸 鹽或磷酸鹽等緩衝液以及氯化鈉或右旋糖等調節張力的試劑)。適於注射的藥物組合物包括無菌水溶液(具有水溶性時)或分散體以及用於臨時 製備無菌水溶液或分散體的無菌粉末。對於靜脈施用，適合的載體包括生理鹽水、抑菌水、 Cremophor EL (BASF, Parsippany, NJ)或磷酸鹽緩衝液(PBS)。該載體可以是一種溶劑或 分散介質，其包含，例如，水、乙醇、多羥基化合物(例如，丙三醇、丙二醇、以及聚乙二醇)及
35其適當的混合物。可通過，例如，採用卵磷脂等塗層或使用表面活性劑來保持流動性。抗菌 劑和抗真菌劑包括，例如，對羥苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸和硫柳汞。包括延緩吸收 的藥劑，例如，單硬脂酸鋁和明膠可延長可注射組合物的吸收。其它藥物製劑和傳遞系統已為本領域所知並適用於本發明的方法(參見，例 如，ReminRton』 s Pharmaceutical Sciences (1990) 18thed. , Mack Publishing Co., Easton,PA :The Merck Index(1996) 12th ed. ,Merck Publishing Group,ffhitehouse,NJ ； Pharmaceutical Principles ofSolid DosaRe Forms, Technonic Publishing Co.，Inc.， Lancaster, Pa. , (1993) ；and Poznansky,等人，DruR Delivery Systems, R. L. Juliano, ed.，Oxford, N. Y. (1980)，pp. 253—315)。本發明提供了包括本發明融合構建體，其聯合組合物以及藥物製劑並用適當包裝 材料進行包裝的試劑盒。試劑盒可選擇性包含帶有成分描述或者對其中成分的體外、體內 或間接體內的使用的說明的標籤或包裝插頁。示範性的說明書包括對以下方法的說明減 少或抑制細胞的增殖，減少或抑制不良或異常細胞(例如高度增殖細胞)的增殖，減少或抑 制轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤細胞的增殖，治療患有高度增殖紊亂的 對象，治療患有轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤的對象或者減少動物的生 育力。試劑盒可包含該種成分的集合，例如，兩種或多種單獨的融合構建體或與其它治 療用途組合物(例如，抗增殖或免疫增強藥物)的組合。術語「包裝材料」指包容該試劑盒的成分的物理結構。該包裝材料可維持該成分無 菌，並可用常用於該種目的的材料(例如，紙，波紋纖維，玻璃，塑料，箔，安瓿，小瓶，管等) 製作。本發明的試劑盒可包含標籤或插頁。標籤或插頁包括「印刷品」，例如，單獨或粘 帖至成分、試劑盒或包裝材料(例如，箱子)，或貼在包含試劑盒成分的安瓿、管子或小瓶的 紙張或紙板。標籤或插頁可進一步包括計算機可讀介質，例如磁碟(例如，軟盤，硬碟，ZIP 盤)，如CD-或DVD-ROM/RAM，DVD, MP3等光碟，磁帶，或RAM和ROM等電子存儲介質或其復 合體，如磁/光存儲介質，FLASH介質或記憶類型卡。標籤或插頁還可包括其中一種或多種成分的鑑別信息，劑量，活性成分的臨床藥 理學(包括作用機制，藥代動力學和藥效學)。標籤或插頁可包括生產商信息，批次，生產商 地址以及日期的識別信息。標籤和插頁可包含有關試劑盒成分可能針對的病症、紊亂或疾病或症狀的信息。 標籤和插頁可包含針對臨床醫師或對象在方法、治療計劃或治療方案中使用一種或多種試 劑盒成分的說明。說明可包括劑量、頻率或期限，以及實施此處所述的任意方法、治療計劃 或治療方案的說明。示範性的說明包括對治療不良或異常細胞增殖、高度增殖細胞和紊亂 (例如，轉移性或非轉移性腫瘤、癌症、惡性腫瘤或贅生瘤)的說明。因此本發明的試劑盒可 進一步包括針對實施本發明所述的任意方法(包括治療方法)的標籤或說明。標籤或插頁可包括試劑盒成分可能提供的任意效果(例如，預防性或治療性效 果)的信息。標籤或插頁可包括有關潛在有害副作用的信息，例如對臨床醫生或對象有關 不適於使用特定組合物的情形的警示。不良副作用還可能在該對象曾經，將要或正在採用 一種或多種可能與該組合物不相容的其它藥物時出現，或在該對象曾經，將要或正在接受與該組合物不相容的其它治療方案時出現，因此，該說明可包括有關該種不相容性的信息。本發明的試劑盒可進一步包含其它成分。該試劑盒的各個成分可封入單獨的容器 中，且所有不同的容器包含在單個包裝中。本發明的試劑盒可冷凍保存。本發明的試劑盒 可進一步設計為包含表達本發明的融合構建體或包含編碼融合構建體的宿主細胞。該試劑 盒中的該細胞可保存在適當的貯存條件下，直至該細胞即將被使用。例如，含有一種或多種 細胞的試劑盒可包含適當的細胞貯存培養基，從而使該細胞可被融解和生長。除非另行說明，此處所用的技術和科學術語的含義等同於本發明所屬領域普通技 術人員的普遍理解。儘管其它與此處所述類似或等同的方法和材料也可用於對本發明的實 施或測試，此處描述了適用的方法和材料。此處引用的所有應用，出版物，專利及其它參考文獻，GenBank引文以及ATCC弓丨文 均在此全文引用作為參考。在產生衝突的情況下，將受本說明書包括定義所支配。除非上下文另行明確指出，此處所用的單數形式的「一種」、「一個」和「該」包括復 數含義。因此，例如，「融合構建體」或「溶解結構域」包括了複數個該種融合構建體或溶解 結構域，以此類推。除非上下文另行明確指出，此處所用的所有數值或數值範圍包括該範圍內的整 數以及該值或該範圍內整數的分數。因此，例如，90-100%的範圍包括91 ^^92^^93%, 94%、95%、96%、97%等，以及 91. 1%,91. 2%,91. 3%,91. 4%,91. 5%等，92. 1%,92. 2%, 92. 3%,92. 4%,92. 5%等，並依次類推。此處一般披露的本發明採用肯定性的語言描述多個實施方式。本發明還特別包 括了完全或部分排除特定對象(例如，物質或材料、方法步驟和條件、計劃、步驟、測定或分 析)的實施方式。因此，儘管本發明一般不以本發明包括什麼來進行表示，本發明未明確排 除的方面仍然在此披露。本發明的一系列實施方式已得到描述。然而，應當理解可在不脫離本發明的精神 和範圍的基礎上進行各種改動。相應地，下列實施例目的在於闡述，而非限制權利要求書中 描述的本發明的範圍。
實施例實施例1初始的研究包括體外篩選28種溶解結構域肽，其在溶解肽部分和配體之間包含 不同的鉸鏈序列；其包含30%的D胺基酸(D-對映異構體)，溶解肽部分為18和15個氨基 酸的長度，且包含鉸鏈序列或其D-對映異構體。研究了在21、18和15胺基酸Wu)r21類似 物上引入作為間隔子的α-氨基己酸。為進行研究所選擇的配體包括β CG-ala(來自絨毛 膜促性腺激素的β鏈的結合部分的15個胺基酸片段)和LHRH(代表全功能配體的十肽)。實施例2本實施例描述了採用人乳腺癌細胞系篩選細胞毒性(IC5tl)和溶血活性。對十八種β CG-ala和八種LHRH結合的融合構建體進行了研究，並與 Phor21-3 CG-ala 和未結合的 Phor21 和 Phorl8(338913) = CLIP71 肽進行比較。過量 表達絨毛膜促性腺激素(CG)和促黃體激素-釋放激素(LHRH)受體的人乳腺癌細胞系 MDA-MB-435S. Iuc在傳代數248-252時被用於篩選。該MDA-MB_4;35S. Iuc細胞系可從由美國菌種保藏中心獲得的MDA-MB-435S細胞系通過以包含美洲螢火蟲螢光素酶基因和抗體 耐受基因的PRC/CMV-luc質粒通過脂質轉染法穩定轉化構建得到。穩定轉染的細胞系可採 用G418進行選擇，對具有最高螢光素酶基因表達的克隆測試LH和LHRH受體表達。MDA-MB-435S. Iuc 細胞生長於 Leibovitz，s L 15 培養基，10%胎牛血清，0. Olmg/ ml牛胰島素，100IU/ml盤尼西林，100微克/ml鏈黴素。該細胞培養於密閉燒瓶中。孵育 以10，000細胞/微孔採用96孔板進行。細胞通常被接種至96孔板，並在孵育48小時後 替換培養基。每次測定在0,0. 001,0. 01,0. 05,0. 1,0. 5、1、2、5、10和100微摩爾劑量的溶 解肽-結合結構域結合物的升高濃度下進行。每種溶解肽-結合結構域結合物以凍幹形式 提供，新鮮溶解於鹽水中並添加至細胞。孵育的時間通常為M小時，通過甲簪(formazan) 轉化測定(MTT測定)進行細胞活性測定。分別包含鹽水或0. 1% triton的對照作為0和 100%細胞死亡的參考。數據採用Graph Pad Prizm 4 軟體(Graph Pad Prizm, Inc)進行處理和分析。 通過雙尾學生T-檢驗確定統計學分析的顯著性。進行每個研究以使N至少為8。增加融合構建體長度的作用被確定(Javadpour等人，J MedChem 39 3107(1996) Javadpour 禾口 Barkeley， Biochemistry 36:9540(1997) ；Leuschner 禾口 Hansel, Current Pharmaceutical Design,10 :2299(2004)；以及 Leuschner 禾口 Hansel, Biol Reprod 73 :255 (2005))。在C末端結合至β CG-ala的溶解肽隨著構建體長 度的增加毒性增強。各種長度的肽的IC5tl為14胺基酸(Phor 14)5. 74，15胺基酸 (Phor 15) 1. 92，18 胺基酸(Phorl8 = CLIP71) 1. 09，21 胺基酸(Phor21) 2. 31 和 28 胺基酸 (Phor28) 1.36yM(表 3)。結合部分的位置(N-或C-末端)的作用被確定。簡言之，對 Phor21-^ CG-ala(C-末端)、β CG-ala Phor21 (N-末端)、LHRH_Phor21 (N-末端)禾口 Phor21-LHRH(C-末端)融合構建體進行了研究。這些肽的IC5tl為Phor21_ β CG-ala 2. 3 μ Μ, β CG-ala-Phor214. 7 μ Μ, LHRH-Phor212. 65 μ Μ, Phor21-LHRH 1. 71 μ Μ。數據顯示 β CG-ala和LHRH結合部分的C-末端定位比結合部分的N-末端定位顯示了更大的毒性。LHRH-受體存在於許多人癌症中(參見表1)。對LHRH作為結合部分和β CG-ala 作為結合部分的活性進行了比較。在人MDA-MB-435S. Iuc乳腺癌細胞體外孵育2或24小時對LHRH-Phor21和 Phor21-β CG-ala的毒性進行了比較。數據表示LHRH_Phor21比Phor21_ β CG-ala更快殺 死細胞，LHRH-Phor21在2小時內誘發細胞殺死(圖1)。表1 人癌症的LH和LHRH受體
權利要求
1.融合構建體，其包含第一結構域和第二結構域，其中所述第一結構域由包含選 自 KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、 KFAKFAKKFAKFAKKFAKF 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 的肽的 12-28 胺基酸序列或包含選 自 KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、 KFAKFAKKFAKFAKKFAKF 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 的肽的 12-25 胺基酸序列組成，其中一個 或多個K殘基被F或L殘基中的任一個所替換，一個或多個F殘基被K、A或L殘基中的任 一個所替換，或者一個或多個A殘基被K、F或L殘基中的任一個所替換；且所述第二結構域 包含結合部分。
2.融合構建體，其包含第一結構域和第二結構域，其中所述第一結構域由選自 KFAKFAKKFAKFAKK、KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、 KFAKFAKKFAKFAKKFAKF 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 的胺基酸序列或選自 KFAKFAKKFAKFAKK、 KFAKFAKKFAKFAKKF、KFAKFAKKFAKFAKKFA、KFAKFAKKFAKFAKKFAK、KFAKFAKKFAKFAKKFAKF 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA的胺基酸序列組成，其中一個或多個K殘基被F或L殘基中的任一 個所替換，一個或多個F殘基被K、A或L殘基中的任一個所替換，或者一個或多個A殘基被 K、F或L殘基中的任一個所替換；且所述第二結構域包含結合部分。
3.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述結合部分結合至受體、配體或抗原。
4.如權利要求3所述的融合構建體，其中所述配體包括受體激動劑和拮抗劑。
5.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述結合部分結合至在細胞上表達的受 體、配體或抗原。
6.如權利要求5所述的融合構建體，其中所述細胞為高度增殖細胞。
7.如權利要求5所述的融合構建體，其中所述細胞為乳腺、卵巢、子宮、子宮頸、前列 腺、睪丸、腎上腺、腦垂體或子宮內膜細胞。
8.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述結合部分包括配體、受體或抗體。
9.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述結合部分包括肽、多肽、蛋白、核酸或 碳水化合物。
10.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述結合部分為激素、激素類似物、與激 素受體結合的激素或激素類似物的片段、激素受體或者與激素或激素受體結合的藥劑。
11.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述結合部分具有線性或環狀結構。
12.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述結合部分結合至激素或激素受體。
13.如權利要求12所述的融合構建體，其中所述激素選自促性腺激素釋放激素I、促性 腺激素釋放激素II、八目鰻III促黃體激素釋放激素、促黃體激素β鏈、促黃體激素、絨毛 膜促性腺激素、絨毛膜促性腺激素β-亞單位、促黑色素細胞激素、雌二醇、乙烯雌酚、多巴 胺、生長激素抑制素、促卵泡成熟激素(FSH)、糖皮質激素、雌激素、睪丸激素、雄烯二酮、二 氫睪丸激素、脫氫表雄酮、黃體酮或雄性激素。
14.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第二結構域由胺基酸序列組成或包 含胺基酸序列。
15.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一或第二結構域由約1-10、 10-20、15-20、20-30、30-40、40-50、60-70、70-80、80-90、90-100 或更多的胺基酸序列所組成或包含該胺基酸序列。
16.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一結構域由約15至約20個氨基 酸的序列所組成。
17.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一結構域由具有15、16、17、18、 19或20個胺基酸的序列所組成。
18.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第二結構域由如下列舉的胺基酸序 列所組成或包含該胺基酸序列SYAVALSAQAALARR。
19.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第二結構域由如下列舉的胺基酸序 列所組成或包含該胺基酸序列QHWSYGLRPG。
20.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一結構域定位於相對所述第二結 構域的NH2-末端處。
21.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第二結構域定位於相對所述第一結 構域的NH2-末端處。
22.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一結構域或所述第二結構域具有 一個或多個D-胺基酸。
23.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一結構域在K、F或A殘基具有D-胺基酸。
24.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一結構域形成兩親α-螺旋。
25.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一和第二結構域通過共價鍵連接。
26.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一和第二結構域通過肽或非肽接 頭連接。
27.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一和第二結構域通過具有1-25 個胺基酸殘基的肽序列或通過線性碳鏈連接。
28.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一和第二結構域通過包含一個或 多個A、S或G胺基酸殘基的肽序列連接。
29.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述第一和第二結構域通過包含 GSGGS、ASAAS或CCCCCC或者由其組成的肽序列連接。
30.如權利要求1或2所述的融合構建體，進一步包含第三、第四、第五、第六或第七結 構域。
31.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述融合構建體被分離或純化。
32.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述融合構建體包含混合物。
33.包含如權利要求1或2所述的融合構建體的組合物。
34.包含如權利要求1或2所述的融合構建體的藥物組合物。
35.包含如權利要求1或2所述的融合構建體的單位劑型，該融合構建體的量可有效治 療具有不良細胞增殖或高度增殖紊亂的對象。
36.包含如權利要求1或2所述的融合構建體的單位劑型，該融合構建體的量可有效治 療具有贅生瘤、腫瘤或癌症的對象。
37.包含如權利要求1或2所述的融合構建體的單位劑型，該融合構建體的量可有效降 低對象的生育力。
38.包含如權利要求1或2所述的融合構建體以及說明書的試劑盒，其用於減少或抑制 細胞增殖、減少或抑制高度增殖細胞的增殖、減少或抑制贅生瘤、腫瘤或癌症細胞的增殖、 治療患有高度增殖紊亂的對象、治療患有贅生瘤、腫瘤或癌症的對象或者減少動物的生育 力。
39.包含如權利要求1或2所述的融合構建體以及抗細胞增殖劑或免疫刺激劑的組合物。
40.編碼如權利要求9所述的融合構建體的核酸分子。
41.包含權利要求40所述的核酸分子的載體。
42.用權利要求41所述載體轉化的宿主細胞。
43.表達如權利要求1或2所述的融合構建體的細胞。
44.減少或抑制細胞增殖的方法，其包括將細胞與數量上足以減少或抑制該細胞增殖 的如權利要求1或2任意一項所述的融合構建體相接觸。
45.減少或抑制細胞增殖的方法，其包括將細胞與數量上足以減少或抑制細胞增殖的 如權利要求1或2任意一項所述的融合構建體相接觸。
46.減少或抑制高度增殖細胞的增殖的方法，其包括將細胞與數量上足以減少或抑制 該高度增殖細胞的增殖的如權利要求1或2任意一項所述的融合構建體相接觸。
47.減少或抑制贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞的增殖的方法，其包括將細胞與數量上 足以減少或抑制該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞的增殖的如權利要求1或2任意一項所述 的融合構建體相接觸。
48.如權利要求45-47任意一項所述的方法，其中該細胞表達受體、配體或抗原。
49.如權利要求45-47任意一項所述的方法，其中該細胞表達激素或激素受體。
50.如權利要求45-47任意一項所述的方法，其中該細胞表達性或性腺類固醇激素或 者性或性腺類固醇激素受體。
51.如權利要求45-47任意一項所述的方法，其中該細胞表達受體，該受體結合促性腺 激素釋放激素I、促性腺激素釋放激素II、八目鰻III促黃體激素釋放激素、促黃體激素β 鏈、促黃體激素、絨毛膜促性腺激素、絨毛膜促性腺激素β -亞單位、促黑色素細胞激素、雌 二醇、乙烯雌酚、多巴胺、生長激素抑制素、促卵泡成熟激素(FSH)、糖皮質激素、雌激素、睪 丸激素、雄烯二酮、二氫睪丸激素、脫氫表雄酮、黃體酮、雄性激素、表皮生長因子(EGF)、生 長激素(GH)、Her2/neU、維生素H、葉酸、鐵傳遞蛋白、甲狀腺刺激激素(TSH)、內皮素、蛙皮 素、生長激素、血管活性腸肽、乳鐵蛋白、整合素、神經生長因子、⑶_8、⑶-33、⑶19、⑶20、 ⑶40、RORl、IGF-I、癌胚抗原(CEA)、α -胎兒球蛋白(AFP)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列 腺特異性膜抗原(PSAM)、CA 125(殘留上皮卵巢癌)、可溶性白介素-2(IL-2)受體、RAGE-1、 酪氨酸酶、MAGE-I、MAGE-2、NY-ES0-1、Melan-A/MART-l、糖蛋白(gp) 75、gplOO、β -連環蛋 白、？肌1^、]\0\1-1、2 161、泛素-1、!1( -86、￥8-1、骨粘連蛋白、11^3、葉酸或其衍生物、腫瘤 壞死因子(TNF)家族成員、TNF-α、TNF-β (淋巴細胞毒素、LT)、TRAIL、i^as、LIGHT、41BB、 轉化生長因子α、轉化生長因子β、胰島素、血漿銅藍蛋白、HIV-tat、包含R⑶序列基序的 肽或蛋白、單糖、二糖、寡糖、涎酸、半乳糖、甘露糖、巖藻糖或乙醯神經氨酸。
52.如權利要求51所述的方法，其中該整合素選自α_5β3或α-5β 1整合素。
53.如權利要求45-47任意一項所述的方法，其中該細胞表達受體，該受體結合促性腺激素釋放激素I、促性腺激素釋放激素II、八目鰻III促黃體激素釋放激素、促黃體激素β 鏈、促黃體激素、絨毛膜促性腺激素、絨毛膜促性腺激素β -亞單位、促黑色素細胞激素、雌 二醇、乙烯雌酚、多巴胺、生長激素抑制素、促卵泡成熟激素(FSH)、糖皮質激素、雌激素、睪 丸激素、雄烯二酮、二氫睪丸激素、脫氫表雄酮、黃體酮、雄性激素、表皮生長因子(EGF)、生 長激素(GH)、Herf/neu、維生素H、葉酸、鐵傳遞蛋白、甲狀腺刺激激素(TSH)、內皮素、蛙皮 素、生長激素、血管活性腸肽、乳鐵蛋白、整合素、神經生長因子、⑶_8、⑶-33、⑶19、⑶20、 CD40、RORU IGF-I癌胚抗原(CEA)、α -胎兒球蛋白(AFP)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列 腺特異性膜抗原(PSMA)、CA 125(殘留上皮卵巢癌)、可溶性白介素-2(IL-2)受體、RAGE-1、 酪氨酸酶、MAGE-I、MAGE-2、NY-ES0-1、Melan-A/MART-l、糖蛋白(gp) 75、gplOO、β -連環蛋 白、PRAME、MUM-1、ZFP161、類泛素-1、Η0Χ-Β6、YB-1、骨粘連蛋白和 ILF3。
54.如權利要求53所述的方法，其中該類似物選自米非司酮、氟他胺、柳菩林、諾雷德、 醋酸組氨瑞林、synatel曲普瑞林、布舍瑞林、西曲瑞克、加尼瑞克、阿巴瑞克、安肽、替維瑞 克和地加瑞克(Fe200486)。
55.選擇性減少或抑制表達受體或抗原的細胞的增殖的方法，其包括將該細胞與數量 上足以減少或抑制該細胞增殖的如權利要求1或2任意一項所述的融合構建體相接觸，其 中所述肽的結合部分結合由該細胞表達的受體、配體或抗原。
56.選擇性減少或抑制表達受體或抗原的高度增殖細胞的增殖的方法，其包括將該細 胞與數量上足以減少或抑制該高度增殖細胞增殖的如權利要求1或2任意一項所述的融合 構建體相接觸，其中所述肽的結合部分結合由該高度增殖細胞表達的受體、配體或抗原。
57.選擇性減少或抑制表達受體或抗原的贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞的增殖的方 法，其包括將該細胞與數量上足以減少或抑制該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞增殖的如權 利要求1或2任意一項所述的融合構建體相接觸，其中所述融合構建體的結合部分結合由 該細胞表達的受體、配體或抗原。
58.如權利要求55-57任意一項所述的方法，其中該細胞表達受體或抗原。
59.如權利要求55-57任意一項所述的方法，其中該細胞表達激素或激素受體。
60.如權利要求55-57任意一項所述的方法，其中該細胞表達性或性腺類固醇激素或 者性或性腺類固醇激素受體。
61.如權利要求55-57任意一項所述的方法，其中該細胞表達受體，該受體結合促性腺 激素釋放激素I、促性腺激素釋放激素II、八目鰻III促黃體激素釋放激素、促黃體激素β 鏈、促黃體激素、絨毛膜促性腺激素、絨毛膜促性腺激素β -亞單位、促黑色素細胞激素、雌 二醇、乙烯雌酚、多巴胺、生長激素抑制素、促卵泡成熟激素(FSH)、糖皮質激素、雌激素、睪 丸激素、雄烯二酮、二氫睪丸激素、脫氫表雄酮、黃體酮、雄性激素、表皮生長因子(EGF)、生 長激素(GH)、Her2/neU、維生素H、葉酸、鐵傳遞蛋白、甲狀腺刺激激素(TSH)、內皮素、蛙皮 素、生長激素、血管活性腸肽、乳鐵蛋白、整合素、神經生長因子、⑶_8、⑶-33、⑶19、⑶20、 ⑶40、RORl、IGF-I、癌胚抗原(CEA)、α -胎兒球蛋白(AFP)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列 腺特異性膜抗原(PSAM)、CA 125(殘留上皮卵巢癌)、可溶性白介素-2(IL-2)受體、RAGE-1、 酪氨酸酶、MAGE-I、MAGE-2、NY-ES0-1、Melan-A/MART-l、糖蛋白(gp) 75、gplOO、β -連環蛋 白、PRAME、MUM-I、ZFP161、泛素-1、Η0Χ-Β6,YB-U骨粘連蛋白、ILF3、葉酸或其衍生物、腫瘤 壞死因子(TNF)家族成員、TNF-α、TNF-β (淋巴細胞毒素、LT)、TRAIL、i^as、LIGHT、41BB、轉化生長因子α、轉化生長因子β、胰島素、血漿銅藍蛋白、HIV-tat、包含R⑶序列基序的 肽或蛋白、單糖、二糖、寡糖、涎酸、半乳糖、甘露糖、巖藻糖或乙醯神經氨酸。
62.如權利要求55-57任意一項所述的方法，其中該細胞表達受體，該受體結合促性腺 激素釋放激素I、促性腺激素釋放激素II、八目鰻III促黃體激素釋放激素、促黃體激素β 鏈、促黃體激素、絨毛膜促性腺激素、絨毛膜促性腺激素β -亞單位、促黑色素細胞激素、雌 二醇、乙烯雌酚、多巴胺、生長激素抑制素、促卵泡成熟激素(FSH)、糖皮質激素、雌激素、睪 丸激素、雄烯二酮、二氫睪丸激素、脫氫表雄酮、黃體酮、雄性激素、表皮生長因子(EGF)、生 長激素(GH)、Herf/neu、維生素H、葉酸、鐵傳遞蛋白、甲狀腺刺激激素(TSH)、內皮素、蛙皮 素、生長激素、血管活性腸肽、乳鐵蛋白、整合素、神經生長因子、⑶_8、⑶-33、⑶19、⑶20、 ⑶40、RORl、IGF-I、癌胚抗原(CEA)、α -胎兒球蛋白(AFP)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列 腺特異性膜抗原(PSMA)、CA 125(殘留上皮卵巢癌)、可溶性白介素-2(IL-2)受體、RAGE-1、 酪氨酸酶、MAGE-I、MAGE-2、NY-ES0-1、Melan-A/MART-l、糖蛋白(gp) 75、gplOO、β -連環蛋 白、PRAME、MUM-I、ZFP161、泛素-1、Η0Χ-Β6,YB-U骨粘連蛋白、ILF3、葉酸或其衍生物、腫瘤 壞死因子(TNF)家族成員、TNF-α、TNF-β (淋巴細胞毒素、LT)、TRAIL、i^as、LIGHT、41BB、 轉化生長因子α、轉化生長因子β、胰島素、血漿銅藍蛋白、HIV-tat、包含R⑶序列基序的 肽或蛋白、單糖、二糖、寡糖、涎酸、半乳糖、甘露糖、巖藻糖、乙醯神經氨酸或其類似物。
63.治療患有高度增殖紊亂的對象的方法，其包括向該對象施用足以治療高度增殖紊 亂的量的如權利要求1或2任意一項所述的融合構建體。
64.治療患有贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤的對象的方法，其包括向該對象施用足以 治療贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤的量的如權利要求1或2任意一項所述的融合構建體。
65.減少或抑制贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤轉移至其它位點或者在遠離原發贅生 瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤的其它位點形成或建立轉移性贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤的 方法，其包括向對象施用一定量的如權利要求1或2任意一項所述的融合構建體，該量足以 減少或抑制贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤轉移至其它位點或者在遠離原發贅生瘤、腫瘤、 癌症或惡性腫瘤的其它位點形成或建立轉移性贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤。
66.如權利要求64或65所述的方法，其中該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤為轉移性、 非轉移性或良性的。
67.如權利要求64或65所述的方法，其中該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤包含實體細 胞物質。
68.如權利要求64或65所述的方法，其中該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤包含造血細胞。
69.如權利要求64或65所述的方法，其中該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤包括癌、肉 瘤、淋巴瘤、白血病、腺瘤、腺癌、黑素瘤、神經膠質瘤、惡性膠質瘤、腦膜瘤、成神經細胞瘤、 成視網膜細胞瘤、星形細胞瘤、少枝膠質細胞瘤、間皮瘤、網狀內皮的、淋巴的或造血的贅生 瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤。
70.如權利要求64或65所述的方法，其中該肉瘤包括淋巴肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、軟 骨肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤或纖維肉瘤。
71.如權利要求68所述的方法，其中該造血的贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤包括骨髓 瘤、淋巴瘤或白血病。
72.如權利要求64或65所述的方法，其中該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤包括肺、甲 狀腺、頭或頸、鼻咽、喉、鼻或竇、腦、脊柱、乳腺、腎上腺、腦垂體腺、甲狀腺、淋巴腺、胃腸的 (嘴、食道、胃、十二指腸、迴腸、空腸(小腸)、結腸、直腸)、泌尿生殖道(子宮、卵巢、子宮 頸、子宮內膜、膀胱、睪丸、陰莖、前列腺)、腎、胰腺、肝、骨、骨髓、淋巴腺、血液、肌肉或皮膚 贅生瘤、腫瘤或癌症。
73.如權利要求72所述的方法，其中該肺贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤包括小細胞肺 癌或非小細胞肺癌。
74.如權利要求64或65所述的方法，其中該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤包括幹細胞 贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤。
75.如權利要求64或65所述的方法，其中該方法抑制或減少該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡 性腫瘤的復發或進展。
76.如權利要求63或64的方法，其進一步包括施用抗細胞增殖、抗贅生瘤、抗腫瘤、抗 癌症或免疫增強治療或療法。
77.如權利要求76所述的方法，其中該治療或療法包括手術切除、放射療法、電離或化 學放射療法、化學療法、免疫療法、局部或區域熱(高熱)療法或疫苗接種。
78.如權利要求76所述的方法，其中該治療或療法包括施用烷化劑、抗代謝物、植物提 取物、植物生物鹼、亞硝基脲、激素、核苷或核苷酸類似物。
79.如權利要求76所述的方法，其中該治療或療法包括施用環磷醯胺、硫唑嘌呤、環孢 菌素A、強的松龍、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、氮芥、白消安、氨甲蝶呤、6-巰基嘌呤、硫鳥 嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、AZT、5-氮胞苷(5-AZC)和5-氮胞苷相關化合物、博來黴素、 放射菌素D、光神黴素、絲裂黴素C、卡氮芥、環己亞硝脲、司莫司汀、鏈脲菌素、羥脲、順式鉬 氨、米託坦、甲基苄胼、氮烯唑胺、紫杉酚、長春花鹼、長春新鹼、阿黴素或二溴甘露醇。
80.如權利要求76所述的方法，其中該治療或療法包括施用淋巴細胞、漿細胞、巨噬細 胞、樹狀細胞、NK細胞或B-細胞。
81.如權利要求76所述的方法，其中該治療或療法包括施用抗體、細胞生長因子、細胞 存活因子、細胞分化因子、細胞因子或趨化因子。
82.如權利要求76所述的方法，其中該治療或療法包括施用IL-2、IL-Iα、IL-I β、 IL-3、IL-6、IL-7、粒細胞-巨噬細胞-集落刺激因子(GMCSF)、IFNi、IL-12、TNF-α、 TNFβ ,MIP-Ια,MIP-I β、RANTES, SDF-U MCP-U MCP-2、MCP-3、MCP-4、嗜酸粒細胞親合 素、嗜酸粒細胞親合素 _2、I-309/TCA3、ATAC, HCC-U HCC-2、HCC-3、LARC/MIP-3 α、PARC、 TARC、CK3、0(β 6、CK3 7、CK3 8、CK3 9、CK3 ΙΙΧΚβ 12、C10、IL_8、GR0 α、GR0 β、ΕΝΑ_78、 GCP-2、PBP/CTAPIII β -TG/NAP-2、Mig、PBSF/SDF-1 或淋巴細胞趨化因子。
83.如權利要求76所述的方法，其中該融合構建體施用於該抗細胞增殖、抗贅生瘤、抗 腫瘤、抗癌或免疫增強治療或療法施用之前、施用同時或施用之後。
84.如權利要求64或65所述的方法，其中該對象已經歷了手術切除、化學療法、免疫療 法、電離或化學放射療法、局部或區域熱(高熱)療法或疫苗接種。
85.如權利要求64或65所述的方法，其中該對象是手術切除、化學療法、免疫療法、電 離或化學放射療法、局部或區域熱(高熱)療法或疫苗接種的候選者。
86.如權利要求64或65所述的方法，其中該對象不是手術切除、化學療法、免疫療法、電離或化學放射療法、局部或區域熱(高熱)療法或疫苗接種的候選者。
87.如權利要求64或65所述的方法，其中該治療導致該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞 量、體積、大小或細胞數量的部分或完全破壞，刺激、誘導或提高贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性 細胞壞死、溶解或凋亡，減少贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤體積大小、細胞量，抑制或防止 贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫瘤體積、量、大小或細胞數量的進展或提高或者延長壽命。
88.如權利要求64或65所述的方法，其中該治療導致與該贅生瘤、腫瘤、癌症或惡性腫 瘤相關或由其引起的不良症狀或併發症的嚴重性、持續時間或頻率的減少或下降。
89.如權利要求64或65所述的方法，其中該治療導致疼痛、不適、噁心、虛弱或嗜睡的 減少或下降。
90.如權利要求64或65所述的方法，其中該治療導致更高的精力、食慾、改善的靈活性 或心理狀態。
91.如權利要求64或65所述的方法，其中該對象為哺乳動物。
92.如權利要求64或65所述的方法，其中該對象為人。
93.降低動物生育力的方法，其包括向該動物施用一定量的足以降低生育力的如權利 要求1或2任意一項所述的融合構建體。
94.如權利要求93所述的方法，其中該動物為哺乳動物。
95.如權利要求93所述的方法，其中該動物為人。
96.減少或治療動物子宮內膜異位的方法，其包括向該動物施用一定量的足以治療動 物子宮內膜異位的如權利要求1或2任意一項所述的融合構建體。
97.減少或治療良性前列腺增生的方法，其包括向動物施用一定量的足以治療良性前 列腺增生的如權利要求1或2任意一項所述的融合構建體。
98.減少或治療纖維瘤或息肉的方法，其包括向動物施用一定量的足以治療纖維瘤或 息肉的如權利要求1或2任意一項所述的融合構建體。
99.如權利要求98所述的方法，其中該纖維瘤或息肉存在於乳腺、子宮、陰道、子宮頸 或輸卵管。
100.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述融合構建體通過更低的IC50 值確定具有比 Phor21-3 CG-ala、Phor21_GSGGS-β CG-ala、Phor21-ASAAS-β CG-ala 或 PhorH-β CG-ala更高的抗細胞增殖活性。
101.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述融合構建體具有比 Phor21-^ CG-ala, Phor21-GSGGS-β CG-ala, Phor21-ASAAS-β CG-ala 或 Phor 14- β CG-ala更小的IC50/ (HA50，溶血活性)比例。
102.如權利要求1或2所述的融合構建體，其中所述融合構建體具有小於約0.02、 0. 01或0. 005的IC50/(HA50，溶血活性)比例。
103.選自 KFAKFAKKFAKFAKK、 KFAKFAKKFAKFAKKF, KFAKFAKKFAKFAKKFA 、 KFAKFAKKFAKFAKKFAK, KFAKFAKKFAKFAKKFAKF 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 的分離或純化的 肽。
104.選自 KFAKFAKKFAKFAKK、 KFAKFAKKFAKFAKKF, KFAKFAKKFAKFAKKFA、 KFAKFAKKFAKFAKKFAK, KFAKFAKKFAKFAKKFAKF 和 KFAKFAKKFAKFAKKFAKFA 的分離或純化的 肽，其中一個或多個K殘基被F或L殘基的任意一個所替換，一個或多個F殘基被K、A或L殘基的任意一個所替換，或者一個或多個A殘基被K、F或L殘基的任意一個所替換。
105.編碼如權利要求103或104所述的肽的核酸。
106.包含編碼如權利要求103或104所述的肽的核酸的載體。
107.以包含編碼如權利要求103或104所述的肽的核酸的載體轉化的宿主細胞。
108.表達如權利要求103或104所述的肽的細胞。
全文摘要
本發明涉及融合構建體，使用融合構建體的方法以及治療不良的或異常的細胞增殖或高度增殖疾病(例如腫瘤、癌症、贅生瘤(neoplasia)和惡性腫瘤)的方法。
文檔編號A61P35/00GK102089320SQ200980111383
公開日2011年6月8日 申請日期2009年1月26日 優先權日2008年1月24日
發明者卡羅拉·勒施奈, 赫克託·阿里拉 申請人:埃斯佩蘭斯醫藥公司, 路易斯安那州立大學以及農業和機械學院監事會