Gpr22和其相關方法

2023-05-30 04:58:26

專利名稱：：Gpr22和其相關方法
技術領域：
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背景技術：
：充血性心臟衰竭(CHF)影響近5百萬美國人且每年診斷出超過500,000例新病例。CHF是一種臨床綜合症，其減少心臟輸出量、增加靜脈壓且伴隨有引起衰竭心臟的進行性惡化和過早肌細胞死亡的分子異常。當前幾乎沒有甚至完全沒有臨床可用的藥物可經設計用於抑制心肌細胞死亡或直接激活存活路徑。所述藥物應適用於改良心臟功能且促進存活。因此，用於治療和預防人類心臟衰竭的治療策略的發展仍具有很大前景。GPR22為G蛋白偶聯受體(GPCR)，其由心肌細胞表達且顯示在心臟保護中發揮一定作用(賦予心臟保護)。心肌細胞中GPR22的下調與局部缺血和與心肌細胞凋亡相關的其它心臟病(諸如CHF)相聯繫。GPR22由單一外顯子編碼且呈現與GPR22偶聯到Gi相一致的可檢測的組成性活性。對GPR22調節劑的鑑別受到關注，因為所述藥劑可對心臟輸出量、靜脈壓、心肌梗塞、CHF、缺血性心臟病、肌細胞凋亡和其類似目標具有治療和預防作用。用於鑑別所述GPR22調節劑的分析通常在基於細胞的系統中進行。因此，表達足夠高水平的GPR22多肽為有用的以便有助於其在基於細胞的分析系統(於其中篩檢GPR22多肽的調節劑)中的使用。此外，提供增加的GPR22的細胞表面表達將增強所述分析的效率。本發明滿足所述目的。文獻WO2004/013285;美國專利第5,994,097號；O'Dowd等人，基因(Gene)(1997)187:75-81;Guhaniyogi等人，基因(2001)265:11-23;Cello等人，科學(Science)(2002)297:1016-1018;Bernal,基因(2005)PMID:15922516;Fujimori等人，英國醫學研究理事會基因組學(BMCGenomics)(2005)6(1):26;Semon等人，人類分子遺傳學(HumMolGenet.)(2005)14(3):421-427。
發明內容本發明提供產生表達增強的GPR22核酸的方法以及提供經編碼GPR22多肽的增強表達的經取代GPR22核酸。在實施本方法中，通過鑑別GPR22胺基酸序列的編碼區的各種密碼子且取代核苷酸使得在不改變經編碼GPR22多肽的胺基酸序列的情況下增強表達來使編碼哺乳動物GPR22受體多肽的核酸(例如野生型核酸)表達增強。本發明也提供使用其篩檢GPR22調節劑的方法、組合物和試劑盒。在第一方面中，本發明提供一種修飾編碼哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的第一核酸以提供經編碼哺乳動物GPR22受體多肽於真核宿主細胞中的增強表達的方法，其包含以下步驟(a)鑑別所述第一核酸的哺乳動物GPR22受體編碼區中的包含目標核苷酸的密碼子，所述目標核苷酸為可在不改變密碼子所編碼的胺基酸的情況下經鳥嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶取代的腺嘌呤，或者所述目標核苷酸為可在不改變密碼子所編碼的胺基酸的情況下經鳥嘌呤、胞嘧啶或腺嘌呤取代的胸腺噴啶；和(b)用鳥嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶取代為腺嘌呤的所述目標核苷酸，或者用鳥嘌呤、胞嘧啶或腺嘌呤取代為胸腺嘧啶的所述目標核苷酸，以產生編碼哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的非內源經取代核酸；其中產生所述非內源經取代核酸可提供經編碼哺乳動物GPR22受體多肽於真核宿主細胞中的增強表達，其中所述增強表達是與第一核酸或編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型核酸相比較而言。在一些實施例中，為腺嘌呤的目標核苷酸經鳥嘌呤或胞嘧啶取代。在一些實施例中，為胸腺嘧啶的目標核苷酸經鳥嘌呤或胞嘧啶取代。在一些實施例中，為腺嘌呤或為胸腺嘧啶的目標核苷酸經鳥嘌呤或胞嘧啶取代。在一些實施例中，哺乳動物GPR22受體胺基酸序列為野生型哺乳動物GPR22受體胺基酸序列。在一些實施例中，野生型哺乳動物GPR22受體胺基酸序列為野生型人類GPR22受體胺基酸序列。在一些實施例中，野生型哺乳動物GPR22受體胺基酸序列為野生型人類GPR22R425或GPR22C425胺基酸序列。在一些實施例中，野生型哺乳動物GPR22受體胺基酸序列為SEQIDNO:2或SEQIDNO:6。在一些實施例中，第一核酸為野生型哺乳動物GPR22受體核酸。在一些實施例中，第一核酸為野生型人類GPR22受體核酸。在一些實施例中，第一核酸為野生型人類GPR22R425或C425核酸。在一些實施例中，第一核酸為SEQIDNO:1或SEQIDNO:在一些實施例中，非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。在一些實施例中，編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型核酸為野生型人類GPR22核酸。在一些實施例中，編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型核酸為野生型人類GPR22R425或GPR22C425核酸。在一些實施例中，編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型核酸為SEQIDNO:1或SEQIDNO:5。在一些實施例中，真核宿主細胞為哺乳動物細胞。在一些實施例中，真核宿主細胞為黑素細胞。在一些實施例中，真核宿主細胞為酵母細胞。在一些實施例中，對於組成經鑑別密碼子的每個目標核苷酸重複步驟(b)。在一些實施例中，對於哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的所述編碼區中的包含目標核苷酸的至多每個密碼子重複步驟(a)至(b)。在一些實施例中，重複步驟(a)至(b)使得哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的所述編碼區中所有密碼子中的至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%或至少約60%或更多有至少一個目標核苷酸經取代。在一些實施例中，重複步驟(a)至(b)使得哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的所述編碼區中所有密碼子中的至少約60%有至少一個目標核苷酸經取代。在一些實施例中，重複步驟(a)至(b)使得所述編碼區中至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或至少約95%的包含目標核苷酸的密碼子中的腺嘌呤或胸腺嘧啶經鳥嘌呤或胞嘧啶取代。在一些實施例中，重複步驟(a)至(b)使得所述編碼區中至少約75%、至少約80%、至少約85%或至少約90%的包含目標核苷酸的密碼子中的腺嘌呤或胸腺嘧啶經鳥嘌呤或胞嘧啶取代。在一些實施例中，重複步驟(a)至(b)使得所述編碼區中100%的包含目標核苷酸的密碼子中的腺嘌呤或胸腺嘧啶經鳥嘌呤或胞嘧啶取代。在一些實施例中，重複步驟(a)至(b)使得編碼晡乳動物GPR22受體胺基酸序列的經取代非內源核酸的編碼區的GC含量與編碼哺乳動物GPR22胺基酸序列的第一核酸的編碼區相比增加至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%或至少約65%或更多。在一些實施例中，重複步驟(a)至(b)使得編碼哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的經取代非內源核酸的編碼區的GC含量與編碼哺乳動物GPR22胺基酸序列的第一核酸的編碼區相比增加至少約50%、至少約55%或至少約60%。在一些實施例中，重複步驟(a)至(b)使得編碼哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的經取代核酸的編碼區的GC含量為至少約35%、至少約36%、至少約37%、至少約38%、至少約39%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%或至少約60%。重複步驟(a)至(b)使得編碼哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的經取代核酸的編碼區的GC含量為至少約459fc、至少約50%或至少約55%。在一些實施例中，所述目標核苷酸為所述編碼區內三個或三個以上連續腺嘌呤或胸腺嘧啶中的一者。在第二方面中，本發明提供一種修飾編碼哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的第一核酸以提供經編碼哺乳動物GPR22受體多肽於真核宿主細胞中的增強表達的方法，其包含第一方面的方法的步驟且進一步包含(c)將真核宿主細胞中由非內源經取代核酸編碼的哺乳動物GPR22受體多肽的第一表達水平與由第一核酸或編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型核酸編碼的哺乳動物GPR22受體多肽的第二表達水平相比較；其中哺乳動物GPR22受體多肽的所述第一表達水平大於第一核酸的哺乳動物GPR22受體多肽的所述第二表達水平或野生型核酸的哺乳動物受體多肽的所述第二表達水平表示非內源經取代核酸提供經編碼哺乳動物GPR22受體多肽於真核宿主細胞中的增強表達。在一些實施例中，所述比較是以包含測量受體功能水平的方法來進行。在一些實施例中，所述方法包含測量第二信使的含量。在一些實施例中，所述方法包含測量選自由環AMP(cAMP)、環GMP(cGMP)、三磷酸肌醇(IP3)、甘油二酯(DAG)、Ca"和MAP激酶活性組成的群組的第二信使的含量。在一些實施例中，所述方法包含測量細胞內IP3聚集含量。在一些實施例中，所述方法包含測量細胞內Ca"含量。在一些實施例中，所述方法包含測量細胞內cAMP含量。在一些實施例中，所述方法包含測量細胞內IP3聚集的增加或刺激。在一些實施例中，對於所述非內源經取代核酸的細胞內IP3聚集增加或刺激為對於所述野生型核酸的細胞內IP3聚集增加或刺激的至少約130%、至少約150%、至少約200%、至少約250%、至少約300%、至少約350%、至少約400%、至少約450%、至少約500%、至少約550%、至少約600%、至少約650%、至少約700%、至少約750%、至少約800%、至少約850%、至少約900%、至少約950%或至少約1000%。在一些實施例中，對於所述非內源經取代核酸的細胞內IP3聚集增加或刺激為對於所述野生型核酸的細胞內IP3聚集增加或刺激的至少約200%、至少約300%、至少約400%、至少約500%、至少約600%、至少約700%、至少約800%、至少約卯0%或至少約1000%。在一些實施例中，對於所述非內源經取代核酸的細胞內IP3聚集增加或刺激為對於所述野生型核酸的細胞內IP3聚集增加或刺激的至少約400%、至少約500%、至少約600%、至少約700%或至少約800%。在一些實施例中，對於所述非內源經取代核酸的細胞內IP3聚集增加或刺激為對於所述野生型核酸的細胞內IP3聚集增加或刺激的至少約130%、至少約150%、至少約200%、至少約250%、至少約300%、至少約350%、至少約400%、至少約450%、至少約500%、至少約550%、至少約600%、至少約650%、至少約700%、至少約750%、至少約800%、至少約850%、至少約900%、至少約950%或至少約1000%表示非內源經取代核酸提供經編碼哺乳動物GPR22受體的增強表達。在一些實施例中，對於所述非內源經取代核酸的細胞內IP3聚集增加或刺激為對於所述野生型核酸的細胞內IP3聚集增加或刺激的至少約200%、至少約300%、至少約400%、至少約500%、至少約600%、至少約700%、至少約800%、至少約900%或至少約1000%表示非內源經取代核酸提供經編碼哺乳動物GPR22受體的增強表達。在一些實施例中，對於所述非內源經取代核酸的細胞內IP3聚集增加或剌激為對於所述野生型核酸的細胞內IP3聚集增加或剌激的至少約400%、至少約500%、至少約600%、至少約700%或至少約800%表示非內源經取代核酸提供經編碼哺乳動物GPR22受體的增強表達。在一些實施例中，所述方法包含測量包含Gq(del)/Gi嵌合G蛋白的細胞中的細胞內IP3聚集。在一些實施例中，所述方法包含測量細胞內cAMP聚集的減少或抑制。在一些實施例中，對於所述非內源經取代核酸的細胞內cAMP聚集的減少或抑制為對於所述野生型核酸的細胞內cAMP聚集減少或抑制的至少約L5倍、至少約2.0倍、至少約2.5倍、至少約3.0倍、至少約3.5倍、至少約4.0倍、至少約4.5倍或至少約5.0倍。在一些實施例中，對於所述非內源經取代核酸的細胞內cAMP聚集的減少或抑制為對於所述野生型核酸的細胞內cAMP聚集減少或抑制的至少約2.0倍、至少約2.5倍或至少約3.0倍。在一些實施例中,對於所述非內源經取代核酸的細胞內cAMP聚集的減少或抑制為對於所述野生型核酸的細胞內cAMP聚集減少或抑制的至少約1.5倍、至少約2.0倍、至少約2.5倍、至少約3.0倍、至少約3.5倍、至少約4.0倍、至少約4.5倍或至少約5.0倍表示非內源經取代核酸提供經編碼哺乳動物GPR22受體的增強表達。在一些實施例中，對於所述非內源經取代核酸的細胞內cAMP聚集的減少或抑制為對於所述野生型核酸的細胞內cAMP聚集減少或抑制的至少約1.5倍、至少約2.0倍、至少約2.5倍或至少約3.0倍表示非內源經取代核酸提供經編碼哺乳動物GPR22受體的增強表達。在一些實施例中，所述方法包含測量包含信號增強子的細胞中的細胞內cAMP聚集。在一些實施例中，所述比較是以包含測量穩定態GPR22受體多肽表達水平的方法來進行。在一些實施例中，所述比較是以包含測量穩定態GPR22受體mRNA表達水平的方法來進行。在第三方面中，本發明提供一種經分離聚核苷酸，其包含根據第一或第二方面、如其中所述或根據第一或第二方面的方法所產生的編碼哺乳動物GPR22受體的非內源經取代核酸。在一些實施例中，經分離聚核苷酸包含編碼哺乳動物GPR22受體的非內源經取代核酸，其中所述非內源經取代核酸是根據第一或第二方面、如其中所述或根據第一或第二方面的方法產生。在一些實施例中，經分離聚核苷酸包含編碼哺乳動物GPR22受體的非內源經取代核酸，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。在第四方面中，本發明提供一種包含第三方面的經分離聚核苷酸的載體。在一些實施例中，所述載體為表達載體且所述聚核苷酸可操作性地連接至啟動子。在一些實施例中，所述經分離聚核苷酸包含編碼哺乳動物GPR22受體的非內源經取代核酸，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。在第五方面中，本發明提供一種包含根據第四方面的載體的重組宿主細胞。在一些實施例中，所述載體為表達載體且所述聚核苷酸可操作性地連接至啟動子。在一些實施例中，所述經分離聚核苷酸包含編碼哺乳動物GPR22受體的非內源經取代核酸，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。在第六方面中，本發明提供一種產生重組宿主細胞的方法，其包含-(a)將根據第四方面的表達載體轉染到真核宿主細胞中從而產生經轉染宿主細胞；和(b)在足以由表達載體表達哺乳動物GPR22受體的條件下培養經轉染宿主細胞。在一些實施例中，宿主細胞為哺乳動物細胞。在一些實施例中，宿主細胞為黑素細胞。在一些實施例中，宿主細胞為酵母細胞。在一些實施例中，所述經分離聚核苷酸包含編碼哺乳動物GPR22受體的非內源經取代核酸，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。在第七方面中，本發明提供一種鑑別作為哺乳動物GPR22受體調節劑的候選化合物的方法，所述方法包含以下步驟(a)使候選化合物與包含根據第六方面的重組宿主細胞或宿主細胞膜的哺乳動物GPR22受體或與根據第六方面的方法產生的重組宿主細胞或其包含哺乳動物GPR22受體的膜接觸，其中哺乳動物GPR22受體偶聯到G蛋白；和(b)測定候選化合物抑制或刺激哺乳動物GPR22受體功能的能力；其中候選化合物抑制或刺激所述功能的能力表示所述候選化合物為哺乳動物GPR22受體的調節劑。在某些實施例中，所述方法進一步包含根據第六方面的方法產生重組宿主細胞。在某些實施例中，所述方法進一步包含提供由第六方面的方法所產生的重組宿主細胞。在一些實施例中，G蛋白為Gi。在一些實施例中，G蛋白為Gq(del)/Gi嵌合G蛋白。在一些實施例中，所述測定是以包含測量第二信使含量的方法來進行。在一些實施例中，所述測定是以包含測量選自由環AMP(cAMP)、環GMP(cGMP)、三磷酸肌醇(IP3)、甘油二酯(DAG)、Ca"和MAP激酶活性組成的群組的第二信使含量的方法來進行。在一些實施例中，所述方法包含測量細胞內IP3聚集含量。在一些實施例中，所述方法包含測量細胞內Ca"含量。在一些實施例中，所述方法包含測量細胞內cAMP含量。在一些實施例中，候選化合物為小分子。在一些實施例中，候選化合物為小分子，其艱制條件為所述小分子不為多肽。在一些實施例中，候選化合物為小分子，其限制條件為所述小分子不為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，候選化合物為小分子，其限制條件為所述小分子不為脂質。在一些實施例中，候選化合物為小分子，其限制條件為所述小分子不為多肽或脂質。在一些實施例中，候選化合物為多肽。在一些實施例中，候選化合物為多肽，其限制條件為所述多肽不為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，候選化合物為脂質。在一些實施例中，候選化合物不為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，候選化合物為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，候選化合物不為哺乳動物GPR22受體的內源配體。在一些實施例中，候選化合物為小分子。在一些實施例中，候選化合物不為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，所述調節劑是選自由激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑組成的群組。在一些實施例中，所述方法包含鑑別哺乳動物GPR22受體的激動劑、部分激動劑、反向激動劑或拮抗劑。在一些實施例中，所述方法進一步包含將所述激動劑、部分激動劑、反向激動劑或拮抗劑調配為藥品的步驟。在一些實施例中，所述方法包含鑑別哺乳動物GPR22受體的激動劑或部分激動劑。在一些實施例中，所述經分離聚核苷酸包含編碼哺乳動物GPR22受體的非內源經取代核酸，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。在第八方面中，本發明提供一種鑑別作為哺乳動物GPR22受體配體的候選化合物的方法，所述方法包含以下步驟(a)使候選化合物與包含根據第六方面的重組宿主細胞或宿主細胞膜的哺乳動物GPR22受體或與根據第六方面的方法產生的重組宿主細胞或其包含哺乳動物GPR22受體的膜接觸；和(b)測量化合物結合於哺乳動物GPR22受體的能力；其中所述結合表示所述候選化合物為哺乳動物GPR22受體的配體。在某些實施例中，所述方法進一步包含根據第六方面的方法產生重組宿主細胞。在某些實施例中，所述方法進一步包含提供由第六方面的方法所產生的重組宿主細胞。本發明也提供一種鑑別作為哺乳動物GPR22受體配體的候選化合物的方法，所述方法包含以下步驟(a)在有或無候選化合物存在下，使視情況經標記的哺乳動物GPR22受體的已知配體與包含根據第六方面的重組宿主細胞或宿主細胞膜的哺乳動物GPR22受體或與根據第六方面的方法產生的重組宿主細胞或其包含所述哺乳動物GPR22受體的膜接觸；(b)檢測所述已知配體與哺乳動物GPR22受體的複合體；和(c)判定在候選化合物存在下是否比在沒有候選化合物存在下形成較少的所述複合體；其中所述判定表示所述候選化合物為哺乳動物GPR22受體的配體。在某些實施例中，所述方法進一步包含根據第六方面的方法產生重組宿主細胞。在某些實施例中，所述方法進一步包含提供由第六方面的方法所產生的重組宿主細胞。在一些實施例中，視情況經標記的已知配體是經放射性標記。在一些實施例中，候選化合物為小分子。在一些實施例中，候選化合物為小分子，其限制條件為所述小分子不為多肽。在一些實施例中，候選化合物為小分子，其限制條件為所述小分子不為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，候選化合物為小分子，其限制條件為所述小分子不為脂質。在一些實施例中，候選化合物為小分子，其限制條件為所述小分子不為多肽或脂質。在一些實施例中，候選化合物為多肽。在一些實施例中，候選化合物為多肽，其限制條件為所述多肽不為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，候選化合物為脂質。在一些實施例中，候選化合物不為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，候選化合物為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，候選化合物不為哺乳動物GPR22受體的內源配體。在一些實施例中，候選化合物為小分子。在一些實施例中，候選化合物不為抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，所述方法進一步包含將所述配體調配為藥品的步驟。在一些實施例中，所述經分離聚核苷酸包含編碼哺乳動物GPR22受體的非內源經取代核酸，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。在第九方面中，本發明提供一種根據第七或第八方面的方法，其進一步包含將調節劑或配體調配成醫藥組合物。本發明也提供一種根據第七或第八方面的方法，其進一步包含再合成調節劑或配體的步驟。在第十方面中，本發明提供一種針對人類GPR22受體轉基因的非人類哺乳動物，其中所述人類GPR22受體是由根據第三方面的聚核苷酸編碼或由其表達。在一些實施例中，非人類哺乳動物為小鼠、大鼠或豬。產生轉基因非人類哺乳動物的方法在此項技術中為熟知的。例如參見Wall等人，細胞生物化學雜誌(JCellBiochem)(1992)49:113-120;Hogan等人，操作小鼠胚胎(ManipulatingtheMouseEmbryo,)實驗室手冊(ALaboratoryManual.)(1986)冷泉港實驗室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)，冷泉港(ColdSpringHarbor),紐約(N.Y.);Costa等人，美國實驗生物學學會聯合會雜誌(FASEBJ)(1999)13:1762-1773;WO91/08216;美國專利第4,736,866號和美國專利第6,504,080號，其各自的揭示內容以全文引用的方式併入本文。在一些實施例中，人類GPR22受體的表達具有心肌細胞選擇性。在一些實施例中，人類GPR22受體的所述心肌細胞選擇性表達是由a肌球蛋白重鏈啟動子賦予[Subramaniam等人，生物化學雜誌(JBiolChem)(1991)266:24613-24620,其揭示內容以全文引用的方式併入本文]。在一些實施例中，人類GPR22的表達具有神經元選擇性。在一些實施例中，根據第三方面的聚核苷酸包含編碼哺乳動物GPR22受體的非內源經取代核酸，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。在第十一方面中，本發明提供一種使用根據第十方面的轉基因非人類哺乳動物鑑別候選化合物是否具有預防或治療與哺乳動物GPR22受體相關的疾病或病症的功效的方法，其包含投與轉基因非人類哺乳動物候選化合物的步驟。在某些實施例中，轉基因非人類哺乳動物體內的所述功效表示在哺乳動物體內的功效。在某些實施例中，候選化合物為人類GPR22受體的調節劑或配體。在一些實施例中，候選化合物不為人類GPR22受體的內源配體。在一些實施例中，與哺乳動物GPR22受體相關的疾病或病症為心肌局部缺血或其相關病狀，包括(但不限於)心肌梗塞。在一些實施例中，與哺乳動物GPR22受體相關的疾病或病症為充血性心力衰竭。在一些實施例中，與哺乳動物GPR22受體相關的疾病或病症為大腦局部缺血或其相關病狀，包括(但不限於)缺血性中風。投與非人類哺乳動物候選化合物的途徑在此項技術中為熟知的且包括(但不限於)經口、腹膜內、皮下和靜脈內投與。在一些實施例中，化合物劑量為0.1-100mg/kg。在一些實施例中，劑量選自由O.lmg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg組成的群組。鑑別候選化合物對哺乳動物的心肌梗塞是否具有功效的方法在此項技術中為熟知的(例如參見Fryer等人，循環研究(CircRes)(1999)84:846-851，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)。鑑別候選化合物對哺乳動物的充血性心力衰竭是否具有功效的方法在此項技術中為熟知的(例如參見Wang等人，藥理和毒理方法雜誌(JPharmacolToxicolMethods)(2004)50:163-174，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)。鑑別候選化合物對哺乳動物的缺血性中風是否具有功效的方法在此項技術中為熟知的(例如參見Welsh等人，神經化學雜誌(JNeurochem)(1987)49:846-851，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)。在一些實施例中，候選化合物為根據第七方面的人類GPR22受體的調節劑或根據第八方面的人類GPR22受體的配體。在第十二方面中，本發明提供一種使用根據第十方面的轉基因非人類哺乳動物鑑別候選化合物對哺乳動物的心臟保護或神經保護是否具有功效的方法，其包含投與轉基因非人類哺乳動物候選化合物的步驟。在某些實施例中，轉基因非人類哺乳動物體內的所述功效表示哺乳動物體內的功效。在某些實施例中，候選化合物為人類GPR22受體的調節劑或配體。在一些實施例中，候選化合物不為人類GPR22受體的內源配體。投與非人類哺乳動物候選化合物的途徑在此項技術中為熟知的且包括(但不限於)經口、腹膜內、皮下和靜脈內投與。在一些實施例中，化合物劑量為0.1-100mg/kg。在一些實施例中，劑量是選自由0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg組成的群組。鑑別候選化合物對哺乳動物的心臟保護是否具有功效的方法在此項技術中為熟知的(例如參見Fryer等人，循環研究(1999)84:846-851，Wang等人，藥理和毒理方法雜誌(2004)50:163-174，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)。鑑別候選化合物對哺乳動物的神經保護是否具有功效的方法在此項技術中為熟知的(例如參見Welsh等人，神經化學雜誌(1987)49:846-851，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)。在一些實施例中，候選化合物為根據第七方面的人類GPR22受體的調節劑或根據第八方面的人類GPR22受體的配體。圖1A為顯示野生型人類GPR22R425編碼區的核苷酸序列(SEQIDNO:l)的圖示。組成編碼區的密碼子以交替突出形式顯示。圖1B為顯示由圖1A的核苷酸序列編碼的人類GPR22R425的胺基酸序列(SEQIDNO:2，Genbank登陸號NP_005286)的圖示。圖2A為顯示示範性表達增強的人類GPR22R425編碼區的核苷酸序列(SEQIDNO:3)的圖示。組成編碼區的密碼子以交替突出形式顯示。小寫字母表明參考SEQIDNO:l的核苷酸取代。無格式小寫字母表明用鳥嘌呤或胞嘧啶取代腺嘌呤或胸腺嘧啶。斜體小寫字母表明用胸腺嘧啶取代腺嘌呤或用腺嘌呤取代胸腺嘧啶。粗體小寫字母表明用胞嘧啶取代鳥嘌呤或用鳥嘌呤取代胞嘧啶。無格式核苷酸取代增加編碼區的GC含量。斜體和粗體核苷酸取代不改變編碼區的GC含量。圖2B為顯示由圖2A的核苷酸序列編碼的人類GPR22R425的胺基酸序列(SEQIDNO:4)的圖示。圖3A為顯示野生型人類GPR22C425編碼區的核苷酸序列(SEQIDNO:5)的圖示。組成編碼區的密碼子以交替突出形式顯示。圖3B為顯示由圖3A的核苷酸序列編碼的人類GPR22C425的胺基酸序列(SEQIDNO:6，Genbank登陸號AAB63815)的圖示。圖4A為顯示示範性表達增強的人類GPR22C425編碼區的核苷酸序列(SEQIDNO:7)的圖示。組成編碼區的密碼子以交替突出形式顯示。小寫字母表明參考SEQIDNO:5的核苷酸取代。無格式小寫字母表明用鳥嘌呤或胞嘧啶取代腺嘌呤或胸腺嘧啶。斜體小寫字母表明用胸腺嘧啶取代腺嘌呤或用腺嘌呤取代胸腺嘧啶。粗體小寫字母表明用胞嘧啶取代鳥嘌呤或用鳥嘌呤取代胞嘧啶。無格式核苷酸取代增加編碼區的GC含量。斜體和粗體核苷酸取代不改變編碼區的GC含量。圖4B為顯示由圖4A的核苷酸序列編碼的人類GPR22C425的胺基酸序列(SEQIDNO:8)的圖示。圖5為顯示通過經轉染HEK293細胞中的GPR22受體的環化酶分析對表達增強的GPR22核酸與野生型GPR22核酸進行比較的圖表。圖6為顯示通過經Gq(del)/Gi共轉染的HEK293細胞中的GPR22受體的IP3分析對表達增強的GPR22核酸與野生型GPR22核酸進行比較的圖表。圖7為一系列描述經瞬時轉染的COS-7細胞的免疫染色的照片。圖8為顯示表達增強的GPR22mRNA在經轉染細胞中的表達的吸印轉移法。具體實施例方式本發明提供產生GPR22受體編碼核酸的方法，所述編碼核酸提供經編碼GPR22受體多肽的增強表達(例如"表達增強"的GPR22編碼核酸)。本發明也提供利用所述GPR22受體編碼核酸篩檢GPR22受體調節劑的組合物、方法和試劑盒。在某些優選實施例中，GPR22受體為哺乳動物GPR22受體。在進一步描述本發明時，首先更詳細地描述本方法的代表性實施例，隨後評論所述方法適用的不同應用。此外，將會更詳細地描述可用於本方法的某些實施例中的組合物和試劑盒。在進一步描述本發明之前，應了解本發明並不限於所述特定實施例，其當然可有所變化。也應了解本文所用術語僅用於描述特定實施例的目的，且並不打算構成限制，因為本發明的範疇僅由隨附權利要求書所限定。在提供值範圍時，應了解介於所述範圍的上限與下限之間的各中間值(除非上下文另外明確說明，否則精確至下限單位的十分的一)和所述所述範圍中的任何其它所述或中間值均涵蓋於本發明中。這些較小範圍的上限和下限可獨立包括於較小範圍中，且也涵蓋於本發明中，其從屬於所述範圍中任何特定排除的界限。當所述範圍包括一或兩個界限時，排除那些所包括界限的一或兩者的範圍也包括於本發明中。當實施例中提到一組特定數值(例如百分比)時，明確涵蓋個別數值(例如百分比)或其組合各自為本發明範疇內的另外獨立實施例。除非另外定義，'否則本文所用的所有技術和科學術語均具有與本發明所屬領域的技術人員通常所了解相同的含義。雖然類似於或等同於本文所述的任何方法和材料均也可用於本發明的實施或測試中，但目前所述為優選方法和材料。所有本文提及的公開案均以引用方式併入本文中以揭示並描述與所引用公開案相關的方法和/或材料。應注意除非上下文另外明確說明，否則如本文和隨附權利要求書中所用的單數形式"一"和"所述"包括複數指示物。因此，舉例來說，對"核苷酸"的提及包括複數個所述核苷酸且對"密碼子"的提及包括對一個或一個以上密碼子和其為所屬領域的技術人員所知的等效物的提及等等。另外應注意可將權利要求書擬定成排除任何可選要素。因此，此陳述想要作為關於敘述權利要求書要素使用諸如"單獨"、"唯一"和其類似術語的排他性術語學或使用"否定"限制的前置基礎。僅提供本文所討論的公開案的在本申請案申請日期之前的揭示內容。本文中無任何內容允許被解釋為承認本發明由於先前發明而並無優先於所述公開案的權利。此外，所提供公開案的日期可能不同於實際公開日期，其需要獨立認可。定義本文所用的胺基酸縮寫列於表A中表Atableseeoriginaldocumentpage20本文所用的核苷酸縮寫為A(腺嘌呤)、G(鳥嘌呤)、C(胞嘧啶)和T(胸腺嘧啶)。術語"聚核苷酸"與"核酸"在本文中可互換使用以指代任何長度的聚合形式核苷酸。本發明的聚核苷酸通常含有脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，且可以重組或合成方式產生。術語聚核苷酸包括單鏈、雙鏈和三螺旋分子。寡核苷酸通常是指具有介於約3與約100個之間的單鏈或雙鏈DNA的核苷酸的聚核苷酸。然而，對於本揭示案來說，寡核苷酸的長度無上限。寡核苷酸也稱為寡聚物且可由基因分離，或以此項技術中已知的方法化學合成。在本說明書通篇中，當關於核苷酸序列提及聚核苷酸時，所述序列通常顯示為DNA序列。應了解本發明也涵蓋RNA聚核苷酸，其中示範性RNA序列可容易地通過用尿嘧啶(U)取代胸腺嘧啶(T)自本文中所提供的示範性DNA序列獲得。本文所用的術語"密碼子"是指DNA或RNA鏈中的一組三個連續核苷酸，其提供編碼併入蛋白質鏈中或充當終止信號的特定胺基酸的基因信息。本文所用的術語"編碼區"是指核酸(DNA或RNA)鏈中的一系列連續核苷酸，其提供多肽基因產物的基因信息。本文中可互換使用的術語"多肽"和"蛋白質"是指任何長度的聚合形式胺基酸，在本發明上下文中的所述胺基酸是經遺傳編碼。所述術語包括融合蛋白、經免疫標記的蛋白質和其類似物。術語"內源"應意味脊椎動物(例如哺乳動物)天然產生的物質。作為說明而非限制，關於GPR22核酸或GPR22多肽的內源應意味由脊椎動物，例如哺乳動物(例如，但不限於人類)天然產生的GPR22核酸或GPR22多肽。本文所用的"內源"和"野生型"可互換使用。相比而言，本文上下文中的術語"非內源"應意味並非由脊椎動物，例如哺乳動物(例如，但不限於人類)天然產生的物質。術語"變異體"應意味分別不同於參考聚核苷酸或多肽但保留基本特性的聚核苷酸或多肽。聚核苷酸的典型變異體在核苷酸序列方面與另一參考聚核苷酸有所不同。變異體核苷酸序列方面的變化可能會改變或可能不會改變由參考聚核苷酸編碼的多肽的胺基酸序列。多肽的典型變異體在胺基酸序列方面與另一參考多肽有所不同。變異體與參考多肽的不同之處可為胺基酸序列中一處或一處以上取代、添加、缺失的任何組合。聚核苷酸或多肽的變異體可為天然存在的變異體(諸如對偶基因變異體)，或者可為未知天然存在的變異體。聚核苷酸和多肽的非天然存在變異體可以突變技術或通過直接合成來製得。本文所用的術語"表達增強"是指第一哺乳動物GPR22編碼核酸經修飾而產生對於相同類型的宿主細胞(例如真核宿主細胞，諸如哺乳動物或黑素宿主細胞)提供經編碼哺乳動物GPR22多肽的增強表達的非內源經取代核酸，其中所述增強表達是與第一核酸或與編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型核酸相比較而言。"表達載體"應意味在針對表達載體重組的適當宿主細胞中轉錄克隆DNA和翻譯經轉錄mRNA所需的DNA序列。經適當構建的表達載體應含有用於在宿主細胞中自主複製的複製起點、可選擇標記、有限數目的適用限制酶位點、高拷貝數的可能性和活性啟動子。待轉錄的克隆DNA可操作性地連接至表達載體內的組成性或調節性活性啟動子。"宿主細胞"應意味可在其中併入載體的細胞。在本文中，載體通常含有編碼GPR22受體的核酸，其與合適啟動子序列可操作性結合以允許表達GPR22受體。在一優選實施例中，宿主細胞為真核細胞，諸如哺乳動物細胞、酵母細胞或黑素細胞。術語"調節"意指特定活性、功能或分子的量、質量或作用的增加或降低。"GPR22受體調節劑"為當結合於GPR22受體時調節或改變細胞內反應的物質，例如配體或化合物。與短語"候選化合物"或"測試化合物"相關的"直接鑑別"或"經直接鑑別"應意味在無G蛋白偶聯受體的己知配體(例如己知激動劑)存在下針對G蛋白偶聯受體篩檢候選化合物。"激動劑"為由於結合於GPCR而刺激GPCR所介導的細胞內反應的物質，例如配體或化合物。除非另外明確說明，否則本文所用的激動劑涵蓋完全激動劑和部分激動劑。"部分激動劑"為由於結合於GPCR而刺激GPCR所介導的細胞內反應，但刺激程度低於完全激動劑的物質，例如配體或化合物。"反向激動劑"為結合於GPCR且抑制活性形式受體所引發的基線細胞內反應低於在無激動劑或部分激動劑存在下所觀測到的正常基準水平活性的物質，例如配體或化合物。"組成性活性GPCR"為通過受體結合於激動劑或部分激動劑之外的方式穩定在活性狀態的GPCR。組成性活性GPCR可為內源或非內源性的。"拮抗劑"為在與激動劑或部分激動劑大致相同的位點結合且優選競爭性結合於GPCR,但並不激活由活性形式GPCR引發的細胞內反應且從而可抑制由激動劑或部分激動劑引起的細胞內反應的物質，例如配體或化合物。拮抗劑通常不削減在無激動劑或部分激動劑存在下的基線細胞內反應。本文關於GPCR使用的"調節劑"為結合於GPCR且剌激或抑制受體功能的物質，例如配體或化合物。GPCR調節劑應理解為涵蓋如上文所定義的激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。"配體"為特異性結合於GPCR的化合物。內源配體為結合於內源GPCR的內源化合物。GPCR配體可為(但不限於)如上文所定義的GPCR的激動劑、部分激動劑、反向激動劑或拮抗劑。與術語"反應"相關的術語"抑制"應意味相對於在無化合物存在下，在所述化合物存在下降低或預防反應。與術語"反應"相關的"刺激"應意味相對於在無化合物存在下，在所述化合物存在下增加反應。"受體功能"在本文中是指GPCR接受刺激且調節細胞內效應的正常運作，其包括(但不限於)調節基因轉錄、調節離子流入或流出、實現催化反應和/或經由G蛋白調節活性，諸如引發第二信使反應。術語"第二信使"應涉及由於GPCR激活而產生的細胞內反應。第二信使的非限制性實例包括1,4，5-三磷酸肌醇(IP3)、甘油二酯(DAG)、環AMP(cAMP)、環GMP(cGMP)、MAP激酶活性和Ga"。可測量第二信使反應用以鑑別(例如)作為受體的反向激動劑、部分激動劑、激動劑和拮抗劑的候選化合物。在一特定實施例中，可測量第二信使反應用以評定GPR22受體表達水平。"化合物功效"應意味化合物抑制或刺激受體功能(而非受體結合親和性)的能力的量度。測量化合物功效的示範性方式揭示於本專利文獻的實例部分中。本文在GPR22多肽的範圍中所用的"細胞表面表達"是指在細胞表面上存在GPR22多肽(例如)以提供可在分析中用於鑑別影響GPR22活性的藥劑的功能性GPR22。"小分子"應意味具有小於每摩爾約10，000克的分子量的化合物，其包括肽、肽模擬劑、胺基酸、胺基酸類似物、聚核苷酸、聚核苷酸類似物、核苷酸、核苷酸類似物、有機化合物或無機化合物(也就是包括雜有機化合物或有機金屬化合物)和其鹽、酯和其它醫藥學上可接受的形式。在某些優選實施例中，小分子為分子量小於每摩爾約5,000克的有機或無機化合物。在某些優選實施例中，小分子為分子量小於每摩爾約1,000克的有機或無機化合物。在某些優選實施例中，小分子為分子量小於每摩爾約500克的有機或無機化合物。本文中可互換使用的術語"候選化合物"和"測試化合物"應意味接受篩檢技術的分子(例如，但不限於化合物)。術語"接觸"意味在活體外系統或活體內系統中使至少兩個部分集合在一起。術語"醫藥組合物"應意味包含至少一種活性成份的組合物，從而使所述組合物接受針對哺乳動物(例如，但不限於人類)體內指定功效結果的研究。所屬領域的技術人員應理解並了解適用於測定(例如)基於技術人員需要活性成份是否具有所要功效結果的技術。本文在關於化合物的治療範圍中所用的術語"功效"是指化合物在組織、系統或個體中引發研究者、獸醫、內科醫生或其它臨床醫師所尋求的生物學或醫學反應的能力，所述反應包括下列反應中的一種或一種以上(1)預防疾病；例如對可能易患疾病、病狀或病症但尚未經歷或顯示所述疾病的病理學或症狀學的個體預防疾病、病狀或病症；(2)抑制疾病；例如對經歷或顯示疾病、病狀或病症的病理學或症狀學的個體抑制疾病、病狀或病症(也就是遏制病理學和/或症狀學的進一步發展)；(3)改善疾病；例如對經歷或顯示疾病、病狀或病症的病理學或症狀學的個體改善疾病、病狀或病症(也就是逆轉病理學和/或症狀學)；和(4)保護免受心肌細胞或神經元細胞死亡。本文所用的"哺乳動物"打算包括(但不限於)哺乳類家畜、哺乳類運動動物、哺乳類寵物、小鼠、大鼠、兔、狗、貓、豬、牛、綿羊、馬、非人類靈長動物、靈長動物且最優選為人類。在優選實施例中，哺乳動物為人類。綜述在不受縛於理論的情況下，本發明是基於對哺乳動物GPR22編碼核酸的編碼序列進行修飾可用於增強經編碼多肽的表達(包括細胞表面表達)的發現，其中所述修飾不改變蛋白質的胺基酸序列。在實施本發明的方法中，分析編碼哺乳動物GPR22多肽的核酸的編碼區以鑑別編碼區序列中的目標核苷酸。本文所用的"目標核苷酸"為可在不改變目標核苷酸存在於其中的密碼子所指定的胺基酸的情況下經歷核苷酸取代的腺嘌呤或胸腺嘧啶。接著在不改變密碼子所指定的胺基酸的情況下用另一核苷酸取代目標核苷酸以產生包含哺乳動物GPR22編碼區的"經取代核酸"，其提供經編碼GPR22多肽的增強表達。在優選實施例中，經取代核酸為非內源性的。因此，本發明提供製造提供經編碼GPR22多肽的增強表達的GPR22編碼核酸(例如"表達增強的"GPR22編碼核酸)的方法。本發明也提供利用所述GPR22編碼核酸(例如用以在基於細胞的分析中篩檢GPR22調節劑)的組合物、試劑盒和方法。在進一步描述本發明時，首先更詳細地描述本方法的代表性實施例，隨後評論所述方法適用的不同應用。此外，更詳細地描述可用於本方法的某些實施例中的組合物和試劑盒。如上文所總結，本發明提供修飾第一哺乳動物GPR22編碼核酸以產生編碼哺乳動物GPR22的非內源經取代核酸的方法，所述非內源經取代核酸提供GPR22多肽在真核細胞(例如哺乳動物細胞、酵母細胞或黑素細胞)中的增強表達。因此，表達增強意味在相同類型宿主細胞(例如真核宿主細胞，諸如哺乳動物或黑素宿主細胞)中由非內源核酸編碼的GPR22多肽的表達相對於由第一核酸或野生型GPR22核酸編碼的GPR22多肽的表達有所增加(例如通過GPR22受體多肽表達或GPR22受體功能活性所測量)。如下文更詳細地說明，表達增強可通過將由第一核酸或野生型核酸編碼的GPR22多肽的表達與由根據本文所述的方法產生的非內源經取代GPR22核酸編碼的GPR22多肽的表達相比較來評定。所述比較可通過此項技術中已知的任何合適方法進行，且其包括(但不限於)測量諸如環AMP(cAMP)、環GMP(cGMP)、三磷酸肌醇(IP3)、甘油二酯(DAG)、Ca"和MAP激酶活性的第二信使的含量的基於細胞的分析。一般來說，在實施本方法中，測定編碼GPR22多肽的核酸的編碼區和編碼區內的密碼子。在鑑別密碼子後，鑑別可在不改變密碼子所編碼的胺基酸的情況下經歷取代的那些核苷酸，本文中將其稱為"目標核苷酸"。接著用保留經編碼胺基酸序列的另一核苷酸取代一個或一個以上目標核苷酸。任何核苷酸均可取代目標核苷酸，只要進行所述取代不會改變密碼子所指定的胺基酸即可，但在某些實施例中經取代核苷酸為增加編碼區GC含量的核苷酸。以此方式，可產生提供經編碼GPR22多肽的增強表達的非內源經取代核酸。GPR22編碼核酸本發明的GPR22編碼核酸包含編碼GPR22多肽的核酸序列，優選其中GPR22為哺乳動物GPR22。所揭示的方法適用於修飾來源於任何哺乳動物物種的編碼GPR22多肽的核酸序列，其包括任何天然存在的和所有天然存在的對偶基因變異體。舉例來說且並不局限於此，可修飾編碼GPR22多肽的人類(SEQIDNO:1或SEQIDNO:5)、小鼠(SEQIDNO:9)、大鼠(SEQIDNO:10)或牛(SEQIDNO:11)核酸以提高經編碼GPR22多肽於所選重組宿主細胞(例如重組哺乳動物或黑素宿主細胞)中的表達。也應了解起始材料(例如GPR22核酸)可為天然存在的核酸(例如野生型GPR22核酸序列)、重組核酸、合成核酸或其類似物。因此，可根據本文所述的方法修飾任何形式的哺乳動物GPR22編碼核酸以提供經編碼GPR22多肽於哺乳動物細胞中的增強表達，只要待表達的GPR22多肽的胺基酸序列是已知的或能夠得知且未因對編碼所述多肽的基本聚核苷酸序列進行修飾而改變。明確涵蓋包含編碼GPR22多肽的核酸序列的本發明的GPR22編碼核酸(優選其中GPR22為哺乳動物GPR22)可進一步包含5'和域3'未翻譯核苷酸序列。也明確涵蓋包含編碼GPR22多肽的核酸序列的本發明的GPR22編碼核酸(優選其中GPR22為哺乳動物GPR22)可編碼包含經編碼GPR22多肽的融合蛋白。在尤其關注的一個實施例中，待修飾的核酸編碼人類GPR22多肽的對偶基因變異體。存在數種熟知的人類GPR22多肽的對偶基因變異體。兩種所述變異體為GPR22R425和GPR22C425(在胺基酸位置425處分別包含精氨酸或半胱氨酸殘基的人類GPR22受體多肽)。GPR22R425和GPR22C425的示範性胺基酸序列為人所熟知且分別陳述於本說明書的附錄的SEQIDNO:2和6中。以進一步示範而非限制野生型人類GPR22C425胺基酸序列的方式，呈現GenBank登陸號第AAI07129號的GPR22胺基酸序列，其與SEQIDNO:6的不同之處在於在SEQIDNO:6的胺基酸位置53處包含甘氨酸殘基而非纈氨酸殘基。然而，雖然關於修飾編碼GPR22R425或GPR22C425多肽的核酸的編碼區以便與由野生型核酸序列(也就是分別為SEQIDNO:1和5)編碼的多肽的所觀測表達相比增強經編碼多肽的表達(例如通過增加的多肽表達或增加的功能活性所評定)來描述本發明，但是應了解所揭示的方法同樣適用於修飾編碼GPR22多肽的任何核酸變異體以便提供經編碼GPR22多肽的增強表達。因此，明確涵蓋在某些實施例中"哺乳動物GPR22受體"為內源哺乳動物GPR22受體。以說明而非限制的方式，為內源哺乳動物GPR22受體的"哺乳動物GPR22受體"涵蓋SEQIDNO:2的人類GPR22受體、SEQIDNO:6的人類GPR22受體、SEQIDNO:10的小鼠GPR22受體、SEQIDNO:12的大鼠GPR22受體和SEQIDNO:14的牛GPR22受體。在某些實施例中，"哺乳動物GPR22受體"為選自由下列各物組成的群組的內源哺乳動物GPR22受體SEQIDNO:2的人類GPR22受體、SEQIDNO:6的人類GPR22受體、SEQIDNO:10的小鼠GPR22受體、SEQIDNO:12的大鼠GPR22受體和SEQIDNO:14的牛GPR22受體。另外明確涵蓋在某些實施例中"哺乳動物GPR22受體"為與內源哺乳動物GPR22受體具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR。另外明確涵蓋在某些實施例中"哺乳動物GPR22受體"為與選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:6、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14組成的群組的哺乳動物GPR22受體多肽具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR。在某些實施例中，與內源哺乳動物GPR22受體或與選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:6、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14組成的群組的哺乳動物GPR22受體多肽具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%一致性的GPCR為內源GPCR。在某些實施例中，與內源哺乳動物GPR22受體或與選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:6、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14組成的群組的哺乳動物GPR22受體多肽具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.I免、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR為非內源GPCR。在某些實施例中，與內源哺乳動物GPR22受體或與選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:6、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14組成的群組的哺乳動物GPR22受體多肽具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR可顯示促進(增加)心肌細胞存活。在某些實施例中，與內源哺乳動物GPR22受體或與選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:6、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14組成的群組的哺乳動物GPR22受體多肽具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR可顯示拯救心肌細胞免於凋亡(降低心肌細胞凋亡)。在某些實施例中，與內源哺乳動物GPR22受體或與選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:6、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14組成的群組的哺乳動物GPR22受體多肽具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9呢一致性的GPCR呈現可檢測的組成性活性。在某些實施例中，與內源哺乳動物GPR22受體或與選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:6、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14組成的群組的哺乳動物GPR22受體多肽具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR呈現降低細胞內cAMP含量的可檢測組成性活性。在某些實施例中，與內源哺乳動物GPR22受體或與選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:6、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14組成的群組的哺乳動物GPR22受體多肽具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性且呈現降低細胞內cAMP含量的可檢測組成性活性的GPCR偶聯到Gi。在某些實施例中，與內源哺乳動物GPR22受體或與選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:6、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14組成的群組的哺乳動物GPR22受體多肽具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR特異性結合識別內源哺乳動物GPR22受體的抗體(識別內源哺乳動物GPR22受體的抗體例如可從美國科羅拉多州戈爾登ABR-AffinityBioReagents公司(AffinityBioReagents,Golden,CO):德克薩斯州聖安東尼奧GeneTex抗體公司(GeneTex,San■Antonio,TX)和科羅拉多州李特爾頓NovusBiologicals公司(NovusBiologicals,Littleton,CO)購得)或特異性結合內源哺乳動物GPR22受體的已知配體。在某些實施例中，內源哺乳動物GPR22受體的已知配體為內源哺乳動物GPR22受體的已知調節劑。在某些實施例中，內源哺乳動物GPR22受體的已知配體為內源哺乳動物GPR22受體的內源配體。另外明確涵蓋在某些實施例中"哺乳動物GPR22受體"為與SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的內源人類GPR22受體具有至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR。在某些實施例中，與SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的內源人類GPR22受體具有至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR為內源GPCR。在某些實施例中，與SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的內源人類GPR22受體具有至少約75呢、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR為非內源GPCR。在某些實施例中，與SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的內源人類GPR22受體具有至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR可顯示促進(增加)心肌細胞存活。在某些實施例中，與SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的內源人類GPR22受體具有至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR可顯示拯救心肌細胞免於凋亡(降低心肌細胞凋亡)。在某些實施例中，與SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的內源人類GPR22受體具有至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR呈現可檢測的組成性活性。在某些實施例中，與SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的內源人類GPR22受體具有至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR呈現降低細胞內cAMP含量的可檢測組成性活性。在某些實施例中，與SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的內源人類GPR22受體具有至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性且呈現降低細胞內cAMP含量的可檢測組成性活性的GPCR偶聯到Gi。在某些實施例中，與SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的內源人類GPR22受體具有至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%或至少約99.9%—致性的GPCR特異性結合識別內源哺乳動物GPR22受體的抗體(識別內源哺乳動物GPR22受體的抗體例如可從美國科羅拉多州戈爾登ABR-AffinityBioReagents公司；德克薩斯州聖安東尼奧GeneTex抗體公司和科羅拉多州李特爾頓NovusBiologicals公司購得)或特異性結合內源哺乳動物GPR22受體的己知配體。在某些實施例中，內源哺乳動物GPR22受體的己知配體為內源哺乳動物GPR22受體的已知調節劑。在某些實施例中，內源哺乳動物GPR22受體的已知配體為內源哺乳動物GPR22受體的內源配體。另外明確涵蓋在某些實施例中"人類GPR22受體"為與SEQIDNO:2或SEQIDNO:6具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%、至少約99.9%—致性或100%—致性的GPCR。在某些實施例中，"小鼠GPR22受體"為與SEQIDNO:10具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%、至少約99.9%—致性或100%—致性的GPCR。在某些實施例中，"大鼠GPR22受體"為與SEQIDNO:12具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%、至少約99.9%—致性或100呢一致性的GPCR。在某些實施例中，"牛GPR22受體"為與SEQIDNO:14具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、至少約99.1%、至少約99.2%、至少約99.3%、至少約99.4%、至少約99.5%、至少約99.6%、至少約99.7%、至少約99.8%、至少約99.9%—致性或100%—致性的GPCR。在某些實施例中，"人類GPR22受體"為通過在SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的胺基酸序列中取代、缺失或添加一個或數個胺基酸而來源於SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的GPCR。在某些實施例中，"小鼠GPR22受體"為通過在SEQIDNO:10的胺基酸序列中取代、缺失或添加一個或數個胺基酸而來源於SEQIDNO:10的GPCR。在某些實施例中，"大鼠GPR22受體"為通過在SEQIDNO:12的胺基酸序列中取代、缺失或添加一個或數個胺基酸而來源於SEQIDNO:12的GPCR。在某些實施例中，"牛GPR22受體"為通過在SEQIDNO:14的胺基酸序列中取代、缺失或添加一個或數個胺基酸而來源於SEQIDNO:14的GPCR。在某些實施例中，"人類GPR22受體"為通過SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的胺基酸序列中不超過10個保守胺基酸取代和/或不超過3個非保守胺基酸取代而來源於SEQIDNO:2或SEQIDNO:6的GPCR。在某些實施例中，"小鼠GPR22受體"為通過SEQIDNO:10的胺基酸序列中不超過10個保守胺基酸取代和/或不超過3個非保守胺基酸取代而來源於SEQIDNO:10的GPCR。在某些實施例中，"大鼠GPR22受體"為通過SEQIDNO:12的胺基酸序列中不超過IO個保守胺基酸取代和/或不超過3個非保守胺基酸取代而來源於SEQIDNO:12的GPCR。在某些實施例中，"牛GPR22受體"為通過SEQIDNO:14的胺基酸序列中不超過IO個保守胺基酸取代和/或不超過3個非保守胺基酸取代而來源於SEQIDNO:14的GPCR。在某些實施例中，精氨酸、賴氨酸和組氨酸可彼此保守性取代；穀氨酸和天冬氨酸可彼此保守性取代；穀氨醯胺和天冬醯胺可彼此保守性取代；白氨酸、異白氨酸和纈氨酸可彼此保守性取代；苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸可彼此保守性取代；且甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸和甲硫氮酸可彼此保守性取代。胺基酸取代、胺基酸缺失和胺基酸添加可發生於任何位置(例如C或N末端或內部位置)。在某些實施例中，"人類GPR22受體"、"小鼠GPR22受體"、"大鼠GPR22受體"或"牛GPR22受體"為內源GPCR。在某些實施例中，"人類GPR22受體"、"小鼠GPR22受體"、"大鼠GPR22受體"或"牛GPR22受體"為非內源GPCR。在某些實施例中，"人類GPR22受體"、"小鼠GPR22受體"、"大鼠GPR22受體"或"牛GPR22受體"可顯示促進(增加)心肌細胞存活。在某些實施例中，"人類GPR22受體"、"小鼠GPR22受體"、"大鼠GPR22受體"或"牛GPR22受體"可顯示拯救心肌細胞免於凋亡(降低心肌細胞凋亡)。在某些實施例中，"人類GPR22受體"、"小鼠GPR22受體"、"大鼠GPR22受體"或"牛GPR22受體"呈現可檢測的組成性活性。在某些實施例中，"人類GPR22受體"、"小鼠GPR22受體"、"大鼠GPR22受體"或"牛GPR22受體"呈現降低細胞內cAMP含量的可檢測組成性活性。在某些實施例中，"人類GPR22受體"、"小鼠GPR22受體"、"大鼠GPR22受體"或"牛GPR22受體"呈現降低細胞內cAMP含量的可檢測組成性活性且偶聯到Gi。在某些實施例中，"人類GPR22受體"、"小鼠GPR22受體"、"大鼠GPR22受體"或"牛GPR22受體"特異性結合識別內源哺乳動物GPR22受體的抗體(識別內源哺乳動物GPR22受體的抗體例如可從美國科羅拉多州戈爾登ABR-AffinityBioReagents公司；德克薩斯州聖安東尼奧GeneTex抗體公司和科羅拉多州李特爾頓NovusBiologicals公司購得)或特異性結合內源哺乳動物GPR22受體的已知配體。在某些實施例中，內源哺乳動物GPR22受體的已知配體為內源哺乳動物GPR22受體的已知調節劑。在某些實施例中，內源哺乳動物GPR22受體的已知配體為內源哺乳動物GPR22受體的內源配體。在某些實施例中，使用此項技術中熟知的基本局部比對搜尋工具(BasicLocalAlignmentSearchTool,"BLAST")評估一致性百分比[例如參見Karlin和Altschul，美國政府國家自然科學院學報(ProcNatlAcadSciUSA)(1990)87:2264-2268;Altschul等人，分子生物學雜誌(JMolBiol)(1990)215:403-410;Altschul等人，自然遺傳學(NatureGenetics)(1993)3:266-272和Altschul等人，核酸研究(NucleicAcidsRes)(1997)25:3389-3402，其各自的揭示內容以全文引用的方式併入本文中]。BLAST程序可使用預設參數或使用者所提供的修正參數。參數優選為預設參數。測定査詢序列(例如SEQIDNO:2或6的胺基酸序列)與待詢序列之間的最優選總體匹配的優選方法(也稱作總體序列比對)可基於Bmtlag等人[比較應用生物科學(CompAppBiosci)(1990)6:237-245，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中]的算法使用FASTDB電腦程式來判定。在序列比對中，查詢序列和待詢序列均為胺基酸序列。所述總體序列比對的結果為一致性百分比。FASTDB胺基酸比對中所用的優選參數為矩陣二PAM0，k元組=2,錯配罰分=1,接合罰分=20，隨機化群=25,長度=0，截斷計分=1,窗口大小=序列長度，間隙罰分=5，間隙大小罰分=0.05,窗口大小=247或待詢胺基酸序列的長度，取其中較短者。如果待詢序列由於N或C末端缺失而非因為內部缺失而短於查詢序列，那麼一致性百分比結果必須人工校正，因為FASTDB程序在計算總體一致性百分比時並不考慮待詢序列的N和C末端截斷。對於在N和C末端截斷的待詢序列來說，相對於查詢序列，通過計算為待詢序列的N和C末端，不與對應待詢序列殘基匹配/比對的查詢序列殘基的數目(計算為査詢序列總胺基酸的百分比)來校正一致性百分比。由FASTDB序列比對的結果來判定殘基是否匹配/比對。接著從通過使用指定參數的上述FASTDB程序計算出的一致性百分比中減去此百分數而得到最終一致性百分比計分。此最終一致性百分比計分是用於本發明的目的。僅對應於待詢序列的N末端和C末端不與查詢序列匹配/比對的殘基被認為需用於人工調節一致性百分比計分的目的。也就是僅待詢序列的最遠N末端和C末端殘基之外的查詢胺基酸殘基。舉例來說，將90個胺基酸殘基的待詢序列與100個殘基的查詢序列相比對以測定一致性百分比。在待詢序列的N末端發生缺失，且因此FASTDB比對不與N末端的第一殘基形成匹配/比對。IO個未配對殘基表示序列的10%(N和C末端不匹配的殘基數目/查詢序列中的殘基總數)，因此由通過FASTDB程序所計算出的一致性百分比計分中減去10%。如果剩餘90個殘基完全匹配，那麼最終一致性百分比為90%。在另一實例中，將90個殘基的待詢序列與100個殘基的査詢序列相比較。此次缺失為內部缺失，因此在待詢序列的N或C末端不存在不與查詢序列匹配/比對的殘基。在此狀況下，不對由FASTDB計算的一致性百分比進行人工校正。再次重申僅對目標序列的N和C末端之外不與查詢序列匹配/比對的殘基位置(如FASTDB比對中所顯示)進行人工校正。對於本發明來說不進行任何其它校正。另外明確涵蓋在某些實施例中"哺乳動物GPR22受體"為由在高嚴格度下與編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型聚核苷酸的補體雜交或與選自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13組成的群組的聚核苷酸的補體雜交的聚核苷酸編碼的GPCR。在某些實施例中，由在高嚴格度下與編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型聚核苷酸的補體雜交或與選自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13組成的群組的聚核苷酸的補體雜交的聚核苷酸所編碼的GPCR為內源GPCR。在某些實施例中，由在高嚴格度下與編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型聚核苷酸的補體雜交或與選自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13組成的群組的聚核苷酸的補體雜交的聚核苷酸編碼的GPCR為非內源GPCR。在某些實施例中，由在高嚴格度下與編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型聚核苷酸的補體雜交或與選自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13組成的群組的聚核苷酸的補體雜交的聚核苷酸所編碼的GPCR可顯示促進(增加)心肌細胞存活。在某些實施例中，由在高嚴格度下與編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型聚核苷酸的補體雜交或與選自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13組成的群組的聚核苷酸的補體雜交的聚核苷酸所編碼的GPCR可顯示拯救心肌細胞免於凋亡(降低心肌細胞凋亡)。在某些實施例中，由在高嚴格度下與編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型聚核苷酸的補體雜交或與選自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13組成的群組的聚核苷酸的補體雜交的聚核苷酸所編碼的GPCR呈現可檢測的組成性活性。在某些實施例中，由在高嚴格度下與編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型聚核苷酸的補體雜交或與選自由SEQIDNO:l、SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13組成的群組的聚核苷酸的補體雜交的聚核苷酸所編碼的GPCR呈現降低細胞內cAMP含量的可檢測組成性活性。在某些實施例中，由在高嚴格度下與編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型聚核苷酸的補體雜交或與選自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13組成的群組的聚核苷酸的補體雜交的聚核苷酸所編碼且呈現降低細胞內cAMP含量的可檢測組成性活性的GPCR偶聯到Gi。在某些實施例中，由在高嚴格度下與編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型聚核苷酸的補體雜交或與選自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:5、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13組成的群組的聚核苷酸的補體雜交的聚核苷酸所編碼的GPCR特異性結合識別內源哺乳動物GPR22受體的抗體(識別內源哺乳動物GPR22受體的抗體例如可由ABR-AffinityBioReagents公司、GeneTex抗體公司和NovusBiologicals公司購得)或特異性結合內源哺乳動物GPR22受體的已知配體。在某些實施例中，內源哺乳動物GPR22受體的已知配體為內源哺乳動物GPR22受體的已知調節劑。在某些實施例中，內源哺乳動物GPR22受體的已知配體為內源哺乳動物GPR22受體的內源配體。雜交技術為所屬領域的技術人員所熟知。在一些實施例中，嚴格雜交條件包括在包含下列各物的溶液中在42'C下培養過夜50%甲醯胺、5xSSC(lxSSC=150mMNaCl、15mM檸檬酸三鈉)、50mM磷酸鈉(pH7.6)、5x丹哈德溶液(Denhardt'ssolution)、10%硫酸葡聚糖和20嗎/ml變性被修飾的鮭魚精DNA;隨後在約65'C下於O.lxSSC中洗漆過濾器。明確涵蓋可將權利要求書擬定成排除"哺乳動物GPR22受體"的任何真子集。應了解本發明涵蓋DNA和RNA兩種聚核苷酸。然而，在本說明書通篇中，僅出於明晰和方便的目的，根據脫氧核糖核苷酸提供核苷酸序列和關於根據本發明進行取代的指導(例如本文所提供的序列為DNA序列)。RNA分子的示範性序列以及關於修飾以產生本發明RNA分子的指導可容易地由本揭示案通過用尿嘧啶(U)取代胸腺嘧啶(T)而獲得。本方法中的第一步為判定編碼GPR22多肽的核酸的編碼區。此可以此項技術中熟知的方式進行。舉例來說，此可通過分離、擴增和測序由選定哺乳動物樣本(例如人類)獲得的編碼所關注GPR22多肽的核酸來進行。以此方式，可獲得所述核酸的基因序列和經編碼蛋白質的胺基酸序列且判定翻譯起始和終止位點，從而判定編碼區。或者，可通過參考編碼GPR22多肽的己知核酸序列(諸如Genbank中公開者)來判定編碼GPR22多肽的核酸的編碼區。舉例來說，SEQIDNO:1表示通過(例如)參考Genbank登陸號第NMJ305295號而判定的編碼人類GPR22R425多肽的野生型核酸序列。SEQIDNO:5表示通過(例如)參考Genbank登陸號第AC002381.1號而判定的編碼人類GPR22C425多肽的野生型核酸序列。在確定編碼所關注GPR22多肽的核酸的編碼區後，即可判定編碼GPR22多肽的密碼子。由於遺傳密碼的簡併性，密碼子通常允許核苷酸序列中的變化而不改變經編碼蛋白質的胺基酸序列。因為各密碼子均由三個核苷酸組成，且組成DNA的核苷酸僅限於四種核苷酸(A、C、G或T),所以存在64種可能的核苷酸組合，其中61種編碼胺基酸(剩餘三種密碼子編碼終止翻譯的信號)。顯示何種密碼子編碼何種胺基酸的"遺傳密碼"如本文表l中所呈現。因此，由一個以上密碼子指定多種胺基酸。舉例來說，胺基酸丙氨酸和脯氨酸各自由四種不同密碼子編碼且絲氨酸和精氨酸各自由六種密碼子編碼，而色氨酸和甲硫氨酸那麼僅由一種三聯體密碼子編碼。此簡併性允許DNA鹼基組成在較大範圍內變化而不改變DNA所編碼的蛋白質的胺基酸序列。因此，對於本發明來說，雖然由待修飾的GPR22核酸所編碼的胺基酸序列保持固定，但是組成編碼那些胺基酸的密碼子的核苷酸經歷改變。tableseeoriginaldocumentpage35因此，可通過鑑別密碼子內可在不改變基本胺基酸序列的情況下經歷用另一核苷酸進行取代的目標核苷酸來產生編碼GPR22多肽的本發明的表達增強的核酸序列。此可使用此項技術中已知的任何方法進行，例如可使用如表1所示的標準遺傳密碼錶定義用於任何既定胺基酸的各種密碼子且用不同核苷酸取代密碼子內的至少一個核苷酸來手工設計表達增強的GPR22核酸序列。或者，此可通過使用計算機輔助方法來實現，例如購自美國加利福尼亞州聖地牙哥阿賽樂公司(Accelrys，Inc.,SanDiego，CA)的威斯康星(Wisconsin)GeneticsComputerGroup反向翻譯軟體包。此外，用於產生編碼GPR22多肽的根據本發明的表達增強的經取代核酸的各種其它算法和計算機軟體程序易於為所屬領域的技術人員所使用，例如參見購自威斯康星麥迪遜DNAstar公司(DNAstar，Inc.,Madison,Wis.)的LasergenePackage中的"EditSeq"函數和購自美國馬裡蘭州貝塞斯達InforMax公司(InforMax,Inc.,Bethesda，Md)的VectorNTISuite中的反向翻譯函數。任何核苷酸均可取代目標核苷酸，只要進行所述取代不會改變密碼子所指定的胺基酸即可。為方便起見，置換目標核苷酸的核苷酸在本文中稱作"取代核苷酸"，且所得經修飾核酸在本文中稱作"經取代核酸"。舉例來說，如果指定密碼子所編碼的胺基酸為白氨酸且密碼子之前兩個核苷酸為CT(也就是非TT)，那麼密碼子第3位置上的A、C、G或T核苷酸可用任何其它核苷酸替換而不改變所編碼的基本胺基酸。參見表l。因此，如果白氨酸密碼子中的目標核苷酸為A,那麼取代核苷酸可為C、G或T。如果白氨酸密碼子中的目標核苷酸為T，那麼取代核苷酸可為C、G或A。應注意雖然對於此實例來說，經取代核苷酸是在密碼子的位置3上，但其並不構成限制。密碼子任何位置(1、2或3)上的任何核苷酸均可經替換成另一核苷酸，只要不改變經編碼胺基酸即可。舉例來說，TTG和CTG密碼子均編碼白氨酸。此外，可取代密碼子中一個以上的目標核苷酸，例如TTA和CTG均編碼白氨酸。目標核苷酸經取代核苷酸置換的密碼子在本文中稱作"經修飾密碼子"。如所屬領域的技術人員所了解，可應用本發明的方法使得經修飾密碼子於編碼序列中的分布可顯著變化，其限制條件為經編碼胺基酸序列保持不變。明確涵蓋修飾編碼哺乳動物GPR22胺基酸序列的核酸以便產生提供經編碼GPR22多肽的增強表達的包含至少一個取代核苷酸的非內源經取代核酸的方法是在本發明的範疇內。然而，應注意雖然經取代核酸(DNA或RNA)在序列方面不同於衍生其的未經修飾核酸(例如野生型GPR22核酸)，但由未經修飾和經修飾核酸所編碼的GPR22胺基酸序列是相同的。在尤其關注的一個實施例中，取代核苷酸為增加編碼區GC含量(且因此降低編碼區AT含量)的核苷酸。在另一實施例中，取代核苷酸為維持編碼區GC含量(且因此維持編碼區AT含量)的核苷酸。在一實施例中，尤其關注的目標核苷酸為存在於編碼區中至少三個或三個以上連續的編碼區中需求性較低的核苷酸的序列中的目標核苷酸。舉例來說，包括(但不限於)需要降低編碼區AT含量的狀況，用於取代的尤其關注的目標核苷酸為存在於三個或三個以上A或T的連續序列(例如ATAT)中，或三個或三個以上A的連續序列(例如AAAA)，或三個或三個以上T的連續序列(例如TTTT)中的A或T。以此方式可設計出包含哺乳動物GPR22編碼區的表達增強的核酸序列。在其它相關實施例中，目標核苷酸存在於具有3、4、5、6、7、8、9、10或更多A和/或T的序列中。雖然在編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的密碼子中進行核苷酸取代可用以增強表達，但此並不意味在根據本發明產生提供GPR22的增強表達的核酸中，所有可能的目標核苷酸必須經取代核苷酸置換。也就是，根據本發明產生提供GPR22的增強表達的核酸並不需要改變密碼子內可改變的每個核苷酸或編碼區內可改變的每個密碼子。在一實施例中，GC含量增加。舉例來說，編碼區的GC含量可增加至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%或至少約65%或更多。在一些實施例中，編碼哺乳動物GPR22受體胺基酸序列經取代核酸的編碼區的GC含量為至少約35呢、至少約36呢、.至少約37%、至少約38%、至少約39%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%或至少約60%。在一非限制性實施例中，如圖2A中所示，提供經取代人類GPR22R425聚核苷酸，其中GC含量增加至少60%，特定言的為約64%。特定言的，圖1A的野生型GPR22R425核苷酸序列具有約36%的GC含量，而自其衍生的經取代GPR22R425核苷酸序列(圖2A)的GC含量為約59呢，其相當於GC含量增加約649fc。在另一非限制性實施例中，如圖4A中所示，提供經取代人類GPR22C425聚核苷酸，其中GC含量增加至少約60%,特定言的為約64%。特定言的，圖3A的野生型GPR22C425核苷酸序列具有約36%的GC含量，而自其衍生的經取代GPR22C425核苷酸序列(圖4A)的GC含量為約59呢，其相當於GC含量增加約64%。如參考圖2A和4A可發現，經取代GPR22R425序列中的核苷酸取代與經取代GPR22C425序列中的那些取代相同，然而，經編碼蛋白質因位置425上的一個胺基酸而不同，其中在GPR22R425中位置425上的胺基酸為精氨酸(R)，且在GPR22C425中位置425上的胺基酸為半胱氨酸(C)。這是由於核苷酸位置1273上的C/T核苷酸多態現象，其是造成胺基酸位置425上的R/C胺基酸多態現象的原因。應注意陳述上述兩種經取代核酸僅是出於示範目的，且此不應將此解釋為以任何方式限制本發明的範疇。在GPR22R425和GPR22C425中存在433個密碼子(排除終止密碼子)。在示範性經取代GPR22R425和GPR22C425聚核苷酸中，433個密碼子中的278個(也就是約64%)具有至少一處改變(增加)核酸GC含量的核苷酸取代。在不改變GC含量的情況下修飾另外三個密碼子。包含可經取代以改變(例如增加)核酸GC含量的目標核苷酸的16個密碼子未經修飾(編碼SEQIDN0:2和6的胺基酸位置40的苯丙氨酸、位置41的穀氨醯胺、位置43和380的絲氨酸、位置118的組氨酸、位置120的丙氨酸、位置121的半胱氨酸、位置140和296的精氨酸、位置151和162和164的異白氨酸、位置235的白氨酸、位置253的賴氨酸、位置391的穀氨酸和位置428的脯氨酸的密碼子)，使得約95%的包含可經取代以改變(例如增加)GC含量的目標核苷酸的密碼子經修飾。所得經取代構建體顯示GPR22受體表達的增強(如圖5-7中所示)。因此，圖2A或4A中未經取代的任何核苷酸位置不需要經取代以提供增強表達，但所述取代可具有進一步的積極效果且因此在本發明的範疇內。在SEQIDNO:3和7中，存在302處核苷酸取代；所述核苷酸取代中的295處改變GC含量(圖2A和4A中的無格式小寫字母)，而所述核苷酸取代中的7處不改變GC含量(圖2A和4A中的斜體或粗體小寫字母，例如圖2A和4A中的核苷酸位置229和943)。明確涵蓋可取代少至1或2個的核苷酸位置且導致增強表達(無論所述取代是否改變核酸的GC含量或AT含量)且因此在本發明的範疇內。因此，也可背離對完全最優化的嚴格遵守，例如(i)以適應限制位點的引入或維持，(ii)斷裂非所需的核苷酸鏈段，(iii)提供或維持PCR擴增位點和其類似目的。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約10%的密碼子中的A(腺嘌呤)或T(胸腺嘧啶)核苷酸經G(鳥嘌呤)或C(胞嘧啶)核苷酸取代。在另一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約15%的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在另一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約20%的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在另一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約25%的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在另一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約30%的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在另一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約35%的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在另一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約40%的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在另一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約45%的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在另一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約507。的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在另一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約55%的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在另一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約60%的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。然而，應注意由於僅一個密碼子ATG編碼甲硫氨酸，因此此密碼子中的A或T均不能在不改變經編碼胺基酸的情況下經改變。類似地，僅一個密碼子TGG編碼色氨酸，因此T不能在不改變經編碼胺基酸的情況下經改變。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約10%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A(腺嘌呤)或T(胸腺嘧啶)核苷酸經G(鳥嘌呤)或C(胞嘧啶)核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約20%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約30%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約40%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約50%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約60%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約70%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約75%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約80%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約85%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約90%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約95%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的100%包含可經取代以增加GC含量的目標核苷酸的密碼子中的A或T核苷酸經G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約10%包含目標核苷酸A(腺嘌吟)的密碼子中的A核苷酸經T(胸腺嘧啶)、G(鳥嘌呤)或C(胞嘧啶)核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約20%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約30%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約40%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約50%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約60%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約70%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約75%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約80%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約85%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約90%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約95%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的100%包含目標核苷酸A的密碼子中的A核苷酸經T、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約107。包含目標核苷酸T(胸腺嘧啶)的密碼子中的T核苷酸經A(腺嘌呤)、G(鳥嘌呤)或C(胞嘧啶)核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約20%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約30%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約40%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約50%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約60%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約70%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約75%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約80%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約85%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約90%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的至少約95%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。在一實施例中，編碼GPR22多肽的核酸的編碼區的100%包含目標核苷酸T的密碼子中的T核苷酸經A、G或C核苷酸取代。舉例來說，在一實施例中，使用編碼SEQIDNO:2的GPR22R425蛋白的SEQIDNO:1的野生型核酸序列作為模板用於設計編碼GPR22R425蛋白的非內源表達增強的核酸序列。在一特定實例中，經取代核酸為SEQIDNO:3的核酸，其編碼SEQIDNO:4的GPR22R425多肽。應注意雖然SEQIDNO:1與3彼此不同，但是經編碼蛋白質(也就是SEQIDNOs:2與4)卻並非如此(也就是SEQIDNO:2與SEQIDNO:4相同)。在另一實施例中，使用編碼SEQIDNO:6的GPR22C425蛋白的SEQIDNO:5的野生型核酸序列作為模板用於設計編碼GPR22C425蛋白的非內源表達增強的核酸序列。在一特定實例中，經取代核酸為SEQIDNO:7的核酸，其編碼SEQIDNO:8的GPR22C425多肽。應注意雖然SEQIDNO:5與7彼此不同，但是經編碼多肽(也就是SEQIDNOs:6與8)卻並非如此(也就是SEQIDNO:6與SEQIDNO:8相同)。圖1-4中顯示GPR22R425和GPR22C425蛋白的野生型編碼序列與經取代編碼序列的比較。這些圖示展示GPR22R425和GPR22C425野生型編碼區內的許多可經取代而不改變經編碼GPR22多肽的胺基酸序列的核苷酸經改變而提供這些圖中所示範的經取代核酸。對於這些圖中示範的經取代核酸來說，根據本發明的密碼子修飾導致GC含量增加和AT(U)含量降低。合成GPR22編碼核酸在設計提供經編碼GPR22多肽的增強表達的經取代GPR22核酸後(優選其中經取代GPR22核酸為非內源核酸)，可進行多種選擇使用所屬領域的技術人員熟知的標準和常規分子生物學操作來合成經取代核酸。舉例來說但並不受限於此，可使用野生型GPR22編碼核酸作為模板，且通過使模板核酸序列經歷使用TransformerSite-Directed突變試劑盒(Clontech)或QuickChangeSite-Directed突變試劑盒(Stratagene)(均根據廠商說明書)的定點突變來構建經取代核酸。以此方式，任何非所需目標核苷酸均可經任何更合需要的那些核苷酸取代，只要進行所述取代不會改變密碼子所指定的胺基酸即可。或者，在設計後，即可通過使用標準方法首先合成跨越所要序列全長的各自長度為約80-90個核苷酸的一系列互補寡核苷酸對來構建全長表達增強的GPR22編碼核酸。合成這些寡核苷酸對使得其在退火後可形成含有黏性末端的80-90個鹼基對的雙鏈片段，例如合成寡核苷酸對中的各寡核苷酸使其延伸超出與寡核苷酸對中另一寡核苷酸互補的區域3、4、5、6、7、8、9、10個或更多鹼基。設計各對寡核苷酸的單鏈末端使其與另一對寡核苷酸的單鏈末端退火。使寡核苷酸對退火，且接著使這些雙鏈片段中的大約5至6個片段經由黏性單鏈末端退火在一起，且接著使其連接在一起並克隆入標準細菌克隆載體中。接著通過標準方法對構建體進行測序。製備數個由連接在一起的具有80至90個鹼基對片段的5-6個片段(也就是約500個鹼基對的片段)組成的這些構建體，使得以一系列質粒構建體表示完整所要序列。接著用適當限制酶切割這些質粒的插入物且使其連接至一起以形成最終合成構建體。接著將最終構建體克隆入載體中，且測序以確定序列一致性。其他方法將直接為熟練人員所了解。此外，基因合成易於在商業上獲得。例如參見J.Cello,A.V.Paul,E.Wimmer,科學297，1016(2002)。因此，在使用所述方法時，可增強完整多肽序列或其片段、變異體或衍生物的表達。設計各種所要片段、變異體或衍生物，且其各自隨後個別增強表達。載體和宿主細胞在設計並產生提供經編碼GPR22多肽的增強表達的非內源經取代GPR22核酸之後，即可以此項技術中熟知的方法(諸如下文所述的方法)將經取代核酸克隆入載體中且可操作性地連接至適當調控序列、啟動子、終止子序列和其類似物。可使用如此產生的載體基因修飾相關宿主細胞且接著可評定經編碼蛋白質的表達水平。因此，在一實施例中，本發明是針對聚核苷酸表達構建體、載體和宿主細胞，其包含提供經編碼GPR22多肽或其片段的增強表達的經取代GPR22核酸。因此，本發明提供載體(也稱作"構建體")，其包含提供經編碼GPR22多肽的增強表達的經取代GPR22核酸。在本發明的許多實施例中，提供經編碼GPR22多肽的增強表達的經取代GPR22核酸可操作性地連接至表達控制序列，諸如指導使用經取代核酸作為模板轉錄GPR22mRNA的啟動子。合適啟動子可為在真核宿主細胞中具功能性的任何啟動子，包括病毒啟動子和來源於真核基因的啟動子。其它合適啟動子可為在動物宿主細胞(例如昆蟲、哺乳動物、魚類、兩棲類、鳥類或爬行類動物宿主細胞)中具功能性的任何啟動子，包括病毒啟動子和來源於動物基因的啟動子。示範性啟動子包括(但不限於)下列各物小鼠金屬硫蛋白I基因序列的啟動子(Hamer等人，分子應用遺傳學雜誌(J.Mol.Appl.Gen.)1:273-288，1982)、皰疹病毒的TK啟動子(McKnight，細胞(Cell)31:355-365，1982)、SV40早期啟動子(Benoist等人，自然(Nature)(London)290:304-310,1981)、酵母gall基因序列啟動子(Johnston等人，國家自然科學院學報(Proc.Natl.Acad.Sci.)(USA)79:6971-6975，1982)、CMV啟動子、EF-1啟動子、蛻皮激素反應性啟動子、四環素反應性啟動子和其類似物。病毒啟動子尤其受到關注，因為其通常為尤其較強的啟動子。選擇用於本發明的啟動子使得其在引入其中的細胞類型(和/或哺乳動物)中具有功能性。此外，根據本發明的方法產生的經取代GPR22核酸可為轉錄單元的部分，所述轉錄單元也含有3'和5'未翻譯區(UTR)和轉錄終止子。接著可將轉錄單元放在(例如)可用於宿主細胞(例如哺乳動物、酵母或黑素細胞)的瞬時或穩定轉染方法中的表達載體中。表達載體可含有可選擇標記(例如新黴素抗性基因)以允許檢測經本發明的GPR22核酸序列轉染的那些細胞(例如參見美國專利第4,704,362號，其揭示內容以引用的方式併入本文中)。載體(包括單和雙表達序列盒載體)為此項技術中所熟知的(Ausubel等人，精編分子生物學實驗指南(S/zo"/VWocoZ"72MoZecwZflrfi!'oZog;y),第3版，Wiley&Sons,1995;紐約冷泉港Sambrook等人，分子克隆實驗手冊(Mo/ec"/arC7o"z'"g:4Lfl6orato^^"iMaD，第2版，(1989))。合適表達載體包括可引入宿主細胞中且指導經編碼GPR22受體多肽表達的病毒載體、質粒和其類似物。也可使用反轉錄病毒、腺病毒和腺相關病毒載體。可使用杆狀病毒(例如美國加利福尼亞州聖地牙哥Pharmingen公司(Pharmingen,SanDiegoCA))在昆蟲細胞中自根據本發明的方法產生的經取代GPR22核酸表達GPR22受體多肽。所屬領域的技術人員可使用多種真核表達載體且其包括市售表達載體(例如購自美國加利福尼亞州卡爾斯巴德英傑生命技術有限公司(Invitrogen，Carlsbad，CA);美國加利福尼亞州芒廷維尤科隆泰克公司(Clontech，MountainView,CA);美國加利福尼亞州拉霍亞Stratagene公司(Stratagene,LaJolla,CA))。以非限制性實例說明，市售表達載體包括基於CMV啟動子的載體。一種合適表達載體為pCMV。根據本發明的方法產生的經取代GPR22核酸也可含有限制位點、多克隆位點、引物結合位點、可連接末端、重組位點等，通常以有助於構建GPR22表達序列盒，接著可將其引入特定宿主細胞中。將GPR22編碼核酸引入細胞中的方法為此項技術中所熟知的。合適方法包括電穿孔法、粒子槍技術、磷酸鈣沉澱法、直接顯微注射法、轉染法、轉導法和其類似方法。對方法的選擇通常取決於所轉化細胞的類型和發生轉化的環境(也就是活體外轉化)。對這些方法的一般討論可在Ausubel等人，精編分子生物學實驗指南，第3版，Wiley&Sons,1995中找到。在一些實施例中，使用脂質轉染劑(lipofectamine)和鈣介導基因轉移技術。本發明的合適宿主細胞包括可表達由根據本發明的方法產生的經取代GPR22核酸所編碼的GPR22受體多肽的任何真核細胞。所述真核細胞可為動物細胞(例如昆蟲、哺乳動物、魚類、兩棲類、鳥類或爬行類動物細胞)、植物細胞(例如玉米或芥菜屬(Arabidopsis)細胞)或真菌細胞(例如酵母細胞、釀酒酵母(S.ce"Wsiae)細胞))。通常使用動物宿主細胞系，其非限制性實例如下猴腎細胞(COS細胞)、由SV40轉化的猴腎CVI細胞(COS-7,ATCCCRL1651)、人類胚胎腎細胞(HEK-293["293"]細胞，Graham等人，基因病毒學雜誌(J.GenVirol.)36:59(1977))、HEK-293T["293T"]細胞、幼倉鼠腎細胞(BHK,ATCCCCL10)、中華倉鼠卵巢細胞(CHO，UrlaubandChasin，國家自然科學院學報(USA)77:4216,(1980))、敘利亞金倉鼠細胞MCB3901(ATCCCRL-9595)、小鼠賽氏細胞(mouseSertolicell)(TM4，Mather,生殖生物學(Biol.Reprod.)23:243-251(1980))、猴腎細胞(CVIATCCCCL70)、非洲綠猴腎細胞(VERO-76,ATCCCRL-1587)、人類宮頸癌細胞(HELA，ATCCCCL2)、犬腎細胞(MDCK，ATCCCCL34)、水牛鼠肝細胞(BRL3A，ATCCCRL1442)、人類肺細胞(W138,ATCCCCL75)、草地黏蟲(Spodopterafrugiperda)昆蟲Sf9細胞(ATCCCRL-1711)、人類肝細胞(hepG2，HB8065)、小鼠乳房瘤(MMT060562,ATCCCCL51)、TRI細胞(Mather等人，紐約科學院紀事(AnnalsN.Y.Acad.Sci)383:44-68(1982))、NIH/3T3細胞(ATCCCRL-1658)和小鼠L細胞(ATCCCCL-1)。在某些實施例中，動物宿主細胞為哺乳動物宿主細胞。在某些實施例中，使用黑素細胞。黑素細胞為在低等脊椎動物(例如兩棲類動物)中發現的皮膚細胞。與黑素細胞使用相關的材料和方法依照美國專利第5,462,856號和美國專利第6,051,386號的揭示內容，所述專利以全文引用的方式併入本文中。在某些實施例中，使用心肌細胞。在某些實施例中，所述心肌細胞為哺乳動物心肌細胞；在某些實施例中，所述心肌細胞為新生大鼠心室肌細胞(NRVM)，其可以此項技術中熟知的方法獲得[例如參見Adams等人，生物化學雜誌(1996)271:1179-1186，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中]。其他細胞系將為所屬領域的技術人員所了解，且許多種細胞系均可自美國菌種保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)(10801美國維吉尼亞州馬納薩斯Boulevard大學(UniversityBoulevard,Manassas,Va.)20110-2209)獲得。因此，在一實施例中，本發明是針對一種產生重組宿主細胞的方法，其包括用含有提供經編碼哺乳動物GPR22受體多肽的增強表達的經取代哺乳動物GPR22核酸(如上所述)的表達載體轉染合適宿主細胞(例如哺乳動物、酵母或黑素細胞)以產生經轉染宿主細胞，且在足以由表達載體表達哺乳動物GPR22受體的條件下培養宿主細胞。如下文更詳細地描述，以此方式經轉染的宿主細胞可用於顯示根據本文所述方法產生的經取代哺乳動物GPR22編碼核酸為表達增強的核酸的方法中。如下文更詳細地描述，以此方式經轉染的宿主細胞可用於鑑別調節哺乳動物GPR22受體的化合物的方法中。這些方法通常包括使候選化合物與經一表達載體轉染的重組宿主細胞接觸，所述表達載體包含提供經編碼GPR22受體多肽的增強表達的經取代GPR22核酸；且測量所述化合物抑制或刺激經表達GPR22受體的功能的能力，其中對功能的抑制或刺激表明所述候選化合物為GPR22受體的調節劑(其非限制性實例包括激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑)。在某些實施例中，產生哺乳動物GPR22受體多肽的方法包括瞬時轉染合適宿主細胞。在某些實施例中，產生哺乳動物GPR22受體多肽的方法包括穩定轉染合適宿主細胞。此外，在一實施例中，本發明是針對一種針對人類GPR22受體轉基因的非人類哺乳動物，其中所述GPR22受體是由根據本發明的方法產生的經取代核酸編碼。在另一實施例中，提供一種使用轉基因非人類哺乳動物鑑別候選化合物是否具有預防或治療與哺乳動物GPR22受體相關的疾病或病症的功效的方法。在一些實施例中，與哺乳動物GPR22受體相關的疾病或病症為心肌局部缺血或其相關病狀，包括(但不限於)心肌梗塞和充血性心臟衰竭。在一些實施例中，與哺乳動物GPR22受體相關的疾病或病症為大腦局部缺血或其相關病狀，包括(但不限於)缺血性中風。在一些實施例中，與哺乳動物GPR22受體相關的疾病或病症為阿茲海默氏病(Alzheimer'sdisease)。在另一實施例中，提供一種使用轉基因非人類哺乳動物鑑別候選化合物對哺乳動物的心臟保護是否具有功效的方法。在另一實施例中，提供一種使用轉基因非人類哺乳動物鑑別候選化合物對哺乳動物的神經保護是否具有功效的方法。評定GPR22編碼核酸的表達水平在將GPR22編碼核酸引入合適宿主細胞(例如哺乳動物或黑素宿主細胞)進行瞬時或穩定表達後，即可以此項技術中熟知的任何方法評定經編碼GPR22多肽的表達水平。舉例來說，通過相對於固定量的經轉染DNA將第一核酸或野生型GPR22核酸所編碼的GPR22受體多肽的表達與經取代GPR22核酸所編碼的GPR22受體多肽的表達進行比較，可顯示根據本發明的方法自第一核酸產生的非內源經取代GPR22核酸提供增強表達。在一些實施例中，野生型GPR22核酸為野生型人類GPR22核酸。在一些實施例中，野生型GPR22核酸為具有SEQIDNO:1或SEQIDNO:5的野生型人類GPR22核酸。所述比較可通過此項技術中已知的任何合適方法進行。在一些實施例中，所述比較是以包含測量第二信使含量的方法來進行，第二信使的非限制性實例包括環AMP(cAMP)、環GMP(cGMP)、三磷酸肌醇(IP3)、甘油二酯(DAG)、Ca2+禾卩MAP激酶活性。以說明而非限制的方式，可通過測量GPR22mRNA含量，尤其是穩定態mRNA含量(例如參見實例13);通過評定GPR22mRNA的翻譯或通過評定GPR22多肽的表達(例如測量穩定態GPR22多肽表達水平，參見實例12)來測定表達水平。明確涵蓋識別GPR22受體多肽或識別融合至GPR22受體多肽的抗原決定基標識的抗體可用於測量穩定態GPR22多肽表達水平的方法中(下文提供示範性市售抗體)。在某些實施例中，穩定態GPR22多肽的表達水平為GPR22多肽的細胞表面表達水平。此項技術中熟知的使用抗體評定穩定態多肽表達水平的方法包括(但不限於)固定細胞免疫染色、流式細胞測量法、放射免疫分析、基於細胞的ELISA和定量免疫印跡法。此外，如下文和實例部分中進一步陳述，可通過包含測量GPR22功能的方法評定GPR22多肽表達，例如通過包含測量細胞內IP3含量、測量細胞內cAMP含量、測量細胞內Ca"含量或其類似物的方法(例如參見實例10和11)。下文更詳細地描述示範性功能分析。使用基於第二信使的分析來評定GPR22表達GPR22為呈現可檢測組成性活性的Gi偶聯受體。a.cAAf屍分析Gi抑制酵素腺苷酸環化酶。腺苷酸環化酶催化ATP轉化成cAMP，因此偶聯到Gi蛋白的經激活GPR22受體與cAMP細胞含量降低相關。[一般參見"突觸傳遞的間接機理(IndirectMechanismsofSynapticTransmission),"第8章，從神經至U大腦(FromNeurontoBrain)(第3版)NicholsJ.G.等人編，SinauerAssociates,Inc.(1992)。]因此，檢測cAMP的分析可通過測量GPR22組成性活性的水平而用於評定GPR22表達(也就是其中細胞內cAMP含量組成性降低)。可利用此項技術中己知的用於測量cAMP的多種方法，例如在一些實施例中，一種方法是依賴於在基於ELISA的格式中使用抗cAMP抗體。然而，對於偶聯到Gi而抑制cAMP形成的經激活受體(諸如GPR22)來說，測量cAMP含量的分析可存在挑戰性，因為所測量的變量為激活後的信號降低。因此，在一些實施例中，可通過共轉染信號增強子，例如在經激活後偶聯到Gs的非內源組成性激活受體(或已知其激動劑的內源Gs偶聯受體)來實現測量cAMP產生降低的有效技術，cAMP產生降低指示在經激活後偶聯到Gi的GPR22受體的激活作用。Gs偶聯受體的激活導致cAMP產生的增加。Gi偶聯受體的激活導致cAMP產生的降低。因此，共轉染方法打算有利地利用這些"相對"影響。舉例來說，用空表達載體共轉染非內源組成性激活Gs偶聯受體("信號增強子")提供基線cAMP信號(也就是說，雖然Gi偶聯受體將降低cAMP含量，但此"降低"是相對於由組成性激活Gs偶聯信號增強子產生的cAMP含量的實質增加來說)。通過用GPR22受體共轉染信號增強子，Gi偶聯受體的反向激動劑將增加所測量的cAMP含量，而Gi偶聯受體的激動劑(或在無激動劑存在下的組成性活性Gi偶聯受體)將降低此信號。在以此方式鑑別由根據本發明的方法產生的經取代GPR22核酸編碼的GPR22多肽受體的表達增強之後，接著即可將此系統用於鑑別調節GPR22受體的候選化合物。在某些實施例中，如果在包含或不包含信號增強子之前述分析中經取代GPR22核酸所引起的細胞內cAMP聚集含量的遏制或抑制或降低為野生型GPR22核酸效果的至少約1.5倍、至少約2.0倍、至少約2.5倍、至少約3.0倍、至少約3.5倍、至少約4.0倍、至少約4.5倍或至少約5.0倍，那麼非內源經取代GPR22核酸為表達增強的GPR22核酸。在一些實施例中，野生型GPR22核酸為野生型人類GPR22核酸。在一些實施例中，野生型GPR22核酸為具有SEQIDNO:1或SEQIDNO:5的野生型人類GPR22核酸(例如參見下文實例10)。6.，此外，不同的共轉染方法包括通過以用於將GPR22受體多肽的Gi信號轉導轉化為Gq信號轉導的Gq(del)/Gi嵌合G蛋白共轉染宿主細胞來將Gi信號轉導轉化為Gq信號轉導。Gq與酵素磷脂酶C的激活相關，磷脂酶C接著水解磷脂PIP2，從而導致釋放兩種細胞內信使甘油二酯(DAG)和1，4，5-三磷酸肌醇(IP3)。Gq偶聯受體的激活與細胞內IP3聚集的增加和細胞內Ca"含量的增加相關。[一般參見"突觸傳遞的間接機理，"第8章'從神經到大腦(第3版)NicholsJ.G.等人編，SinauerAssociates,Inc.(1992)。]因此，Gq(del)/Gi嵌合G蛋白將GPR22受體Gi信號轉導轉化為Gq信號轉導，使得可替代cAMP產生而測量(例如)第二信使三磷酸肌醇(IP3)或甘油二酯(DAG)或Ca2+。因此，由於GPR22受體呈現可檢測的組成性活性水平，因此此分析可通過測量細胞內IP3聚集含量或細胞內Ca"含量來測量GPR22受體表達。以說明而非限制的方式，較高的細胞內IP3聚集含量與較高的GPR22受體表達水平相關。此方法可用於顯示根據本發明的方法產生的非內源經取代GPR22核酸為表達增強的GPR22核酸(例如參見下文實例11)。在以此方式鑑別由根據本發明的方法產生的經取代GPR22核酸編碼的GPR22多肽受體的表達增強之後，接著即可將此系統用於鑑別調節GPR22受體的候選化合物。舉例來說，Gq(del)/Gi偶聯GPR22受體的激動劑將增加細胞內IP3聚集含量或細胞內Ca"含量，而反向激動劑或拮抗劑將降低細胞內IP3聚集含量或細胞內Ca"含量。以說明而非限制的方式，如下文所述可通過螢光成像盤讀取器(FLIPR)分析來測量細胞內Ca2+含量。在某些實施例中，如果在包含用Gq(del)/Gi嵌合G蛋白共轉染之前述分析中由經取代核酸所編碼的GPR22引起的IP3聚集的刺激或增加程度為由野生型核酸所編碼的GPR22引起的IP3聚集的刺激程度的至少約130%、至少約150%、至少約200%、至少約250%、至少約300%、至少約350%、至少約400%、至少約450%、至少約500%、至少約550%、至少約600%、至少約650%、至少約700%、至少約750%、至少約800%、至少約850%、至少約900%、至少約950%或至少約1000%,那麼非內源經取代GPR22核酸為表達增強的GPR22核酸。在一些實施例中，野生型GPR22核酸為野生型人類GPR22核酸。在一些實施例中，野生型GPR22核酸為具有SEQIDNO:1或SEQIDNO:5的野生型人類GPR22核酸(例如參見下文實例ll)。使用本發明的合成性GPR22編碼核酸的調節劑分析在一實施例中，包含根據本發明的方法產生的經取代GPR22核酸的聚核苷酸表達構建體、載體和宿主細胞可用於篩檢作為GPR22受體多肽的調節劑的候選化合物的分析中。可通過使候選化合物與表達根據本發明的方法產生的核酸所編碼的GPR22多肽的重組宿主細胞接觸來鑑別調節(例如增加或降低)GPR22受體活性的藥劑。因此，本發明提供篩檢測試化合物以鑑別GPR22多肽配體的方法。雖然在下文陳述了數種不同分析，但其僅用於說明目的且不應解釋為以任何方式限制本發明。在許多實施例中，這些方法為活體外方法，其包括使產生表達增強的GPR22受體多肽的細胞與測試化合物接觸，且相對於合適對照標準判定測試化合物對可觀測細胞內活性(例如cAMP或IP3或Ca"聚集)的作用。在許多實施例中，合適對照標準為在無測試化合物存在下表達增強的GPR22受體多肽。GPR22受體調節劑與對照標準相比較通常增加或降低可檢測因子(也就是cAMP或IP3或Ca")的量。舉例來說，當可檢測因子為細胞內第二信使(也就是cAMP或IP3或Ca")時，GPR22受體調節劑將增加或降低所述第二信使的細胞內聚集(參見以下實例10和11)。在某些實施例中，與對照標準相比，經鑑別為GPR22受體調節劑的測試化合物將可檢測因子的量降低至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。在某些實施例中，與對照標準相比，經鑑別為GPR22受體調節劑的測試化合物將可檢測因子的量增加至少約10%、至少約20%、至少約40%、至少約60%、至少約80%、至少約100%、至少約150%、至少約200%、至少約300%、至少約500%、至少約IO倍或至少約20倍或更多。在一示範性實施例中，將根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸引入合適宿主細胞中，且在提供經編碼GPR22多肽的表達的條件下培養細胞。在有和無測試化合物存在下，測試產生表達增強的GPR22多肽的細胞或所述細胞的群的可檢測因子(例如cAMP或IP3或C+)的量。在某些實施例中，在產生表達增強的GPR22多肽的細胞與測試化合物接觸之前以及在細胞接觸測試化合物接觸之後，通常在與候選測試化合物接觸後至少約IO分鐘、至少約30分鐘、至少約1小時、至少約2小時、至少約4小時、至少約8小時、至少約12小時或至少約24小時或更長，測定其中的可檢測因子(例如cAMP或IP3或Ca2。的量。在某些實施例中，平行而非連續進行所述測定。可以任何合適方法進行如上所述的對產生表達增強的GPR22受體多肽的細胞的可檢測因子的檢測。'可以上述方法篩檢多種不同的測試化合物。測試化合物涵蓋多種化學類別，但其通常為有機分子，優選為分子量大於50且小於約2,500道爾頓的小有機化合物。測試化合物包含與蛋白質的結構相互作用(尤其為氫鍵結)所必需的官能團，且通常包括至少一個胺、羰基、羥基或羧基，優選為所述化學官能團中的至少兩種。測試化合物通常包含經上述官能團中的一或多者取代的環碳或雜環結構和/或芳族或聚芳族結構。測試化合物也可在生物分子中發現，其包括肽、糖類、脂肪酸、類固醇、嘌呤、嘧啶、其衍生物、結構類似物或組合。測試化合物可由多種來源獲得，包括合成或天然化合物文庫。可通過針對調節(例如抑制、拮抗或激動)GPR22受體活性的分子篩檢化學文庫來測試候選化合物。化學文庫可為肽文庫、肽仿真劑文庫、化學合成文庫、重組文庫(例如噬菌體展示文庫)、基於活體外翻譯的文庫和其它非肽合成有機文庫(諸如已知具有生物活性的內源化合物的文庫)等。也可篩檢包含生物材料(諸如但不限於血漿和組織提取物)的內源候選化合物。在一些實施例中，結合經由組合化學技術產生的化合物(從而隨機製備數千種化合物用於所述分析)進行對候選化合物的直接鑑別。候選化合物可為化學文庫的成員，所述化學文庫可包含任何適宜數目的個別成員(例如數十至數百至數千至數百萬的合適化合物)，例如肽、類肽、其它寡聚化合物(環狀或線性)和基於模板的較小分子，例如低分子量和潛在治療劑(例如苯幷二氮呼(benzodiazepines乙內醯脲(hydantoin)、聯芳、碳環和多環化合物、萘、啡噻嗪、吖啶、類固醇、碳水化合物和胺基酸衍生物、二氫吡啶、二苯甲基和雜環、三嗪、吲哚、噻唑烷等)。所列舉的化合物類型為說明性而非限制性的。示範性化學文庫可購自數種來源(ArQule、Tripos/PanLabs、ChemDesign、Pharmacopoeia)。在一些狀況下，使用組合策略產生這些化學文庫，所述組合策略編碼各文庫成員對成員化合物所附著的底物的同一性，因此允許直接和立即鑑別為有效調節劑的分子。因此，在許多組合方法中，化合物板上的位置說明所述化合物的組成。可以所述方法篩檢許多候選分子。醫藥組合物可使用所屬領域的技術人員熟知的技術將經選擇供進一步開發的候選化合物(包括根據本發明的方法鑑別為哺乳動物GPR22受體的調節劑或配體的候選化合物)調配成醫藥組合物。所屬領域的技術人員可使用合適的醫藥學上可接受的載劑，例如參見雷氏藥學大全(Remington'sPharmaceuticalSciences),第16版，1980，Mack出版公司(MackPublishingCo.)(Osol等人編)。試劑盒本發明也提供包含用於實施如上所述的本發明方法的試劑的試劑盒。舉例來說，在一些實施例中，提供鑑別GPR22調節劑的試劑盒，其包括包含根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸的組合物，所述GPR22核酸可操作性地連接至合適宿主細胞啟動子。在另一實施例中，表達增強的GPR22核酸可構成轉錄單元的部分，所述轉錄單元包括下列各物中的一種或一種以上3'和5'未翻譯區(UTR)和轉錄終止子。在另一實施例中，可進一步將表達增強的GPR22核酸放在可提供經編碼GPR22受體多肽於宿主細胞中的表達的表達載體中。試劑盒組件可存在於存儲容器和/或在實施針對其設計試劑盒的分析期間所使用的容器中。除上述組份外，本發明的試劑盒可進一步包括用於實施本發明的方法的說明書。這些說明書可以各種形式存在於本發明的試劑盒中，並且試劑盒中可存在一個或一個以上說明書。這些說明書可存在的一種形式是作為合適媒介物或基材，例如印刷信息的一或多張紙上、試劑盒包裝中、包裝插頁中等等的印刷信息。另一方式可為記錄信息的計算機可讀媒體，例如磁碟、光碟(CD)等。可存在的另一方式為可經由網際網路使用以訪問遠程地點信息的網址。任何適宜構件均可存在於試劑盒中。實例提出以下實例以便提供給所屬領域的技術人員關於如何進行和使用本發明的完整揭示和描述，且所述實例並不打算限制發明者視作其發明的範疇且也不打算表示以下實驗為所進行的所有或唯一實驗。己付出努力來確保所用數字(例如數量、溫度等)的精確性，但仍應考慮一些實驗誤差和偏差。除非另外指出，否則分數為重量份，分子量為重量平均分子量，溫度為攝氏度且壓力為大氣壓或接近大氣壓。可使用標準縮寫，例如bp,鹼基對；kb，千鹼基；pl，皮升；s或sec，秒；min，分鐘；h或hr，小時；aa，胺基酸；kb，千鹼基；bp，鹼基對；nt，核苷酸；i.m.，肌肉內；i.p.，腹膜內；S.C.，皮下；和其類似縮寫。除非另外指出，否則本發明的實施將使用此項技術的範圍內的細胞生物學、細胞培養、分子生物學(包括PCR)、疫苗學、微生物學、重組DNA和免疫學的傳統技術。文獻中已充分解釋所述技術。例如參見分子克隆實驗指南(MolecularCloningALaboratoryManual),第2版，Sambrook等人編，冷泉港實驗室出版社(1989);DNA克隆(DNACloning)，第I和II巻(D.N.Glover編，1985);寡核苷酸合成(OligonucleotideSynthesis)(M.J.Gait編，1984);Mullis等人。美國專利第4,683,195號；核酸雜交(NucleicAcidHybridization)(B.D.Hames&S.J.Higginsli,1984);轉錄-和箭Si華(TranscriptionAndTranslation)(B.D.Hames&S.J.Higgins編，1984);動物細胞的培養(CultureOfAnimalCells)(R.I.Freshney，AlanR.Liss,Inc.,1987);固定化細胞和酶(ImmobilizedCellsAndEnzymes)(IRLPress,1986);B.Perbal,分子克隆的實踐指導(APracticalGuideToMolecularCloning)(1984);i侖文酶學中的方法(MethodsInEnzymology)(紐約學術出版社有限公司(AcademicPress,Inc.,N.Y.));哺乳動物細胞的基因轉移載體(GeneTransferVectorsForMammalianCells)(J.H.Miller和M.P.Calos編，1987，冷泉港實驗室出版社)；酶學中的方法，第154和155巻(Wu等人編)，細胞和分子生物學中的免疫化學方法(ImmunochemicalMethodsInCellAndMolecularBiology)(Mayer和Walker編，倫敦學術出版社(AcademicPress,London),1987)禾HAusubel等人，最新分子生物學指南(CurrentProtocolsinMolecularBiology)，JohnWiley禾QSons,美國馬裡蘭州巴爾的摩(Baltimore,Md.)(1989)。實例l:受體表達雖然多種細胞可用於此項技術以表達蛋白質，但優選利用真核細胞且更優選利用動物細胞(例如哺乳動物細胞或黑素細胞)。其主要原因是基於用於表達GPCR的(例如)酵母細胞的實用性(也就是利用性)，當可能時在實驗方案中引入非動物細胞，其可能不包括(實際上在酵母狀況下不包括)對於(例如)哺乳動物系統來說已進化的受體偶聯、遺傳機制和分泌路徑，因此在可能使用的非動物細胞中所獲得的結果不如在哺乳動物細胞或黑素細胞中所獲得的結果優選。在哺乳動物細胞中，CHO、COS-7、MCB3901、293和293T細胞尤其優選，但所用的特定哺乳動物是基於技術人員的特定需求。在一些實施例中，可使用從哺乳動物獲得的心肌細胞。參見與黑素細胞相關的下文段落。a.瞬時轉染第1天，以4xl0e個/10cm培養皿塗布293細胞。第2天，製備兩個反應管(各管所遵循的比例是對於每個培養盤來說)通過在0.5ml無血清DMEM(GibcoBRL)中混合4pgDNA(例如pCMV載體，具有GPR22(其中應了解"GPR22"可為野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸或其它哺乳動物GPR22編碼核酸)等的pCMV載體)來製備管A:通過在0.5ml無血清DMEM中混合24pl脂質轉染劑(GibcoBRL)來製備管B。通過倒轉(數次)來混合管A和B，隨後在室溫下培養30-45分鐘。此混合物稱為"轉染混合物"。用lxPBS洗滌經塗布的293細胞，隨後添加5ml無血清DMEM。將1ml轉染混合物添加到細胞中，隨後在37°C/5%C02下培養4小時。通過抽吸去除轉染混合物，隨後添加10ml的DMEM/10免胎牛血清。在37'C/5免C02下培養細胞。培養48小時後，收穫細胞且用於分析。b.穩定細胞系將大約12xl0S個293細胞塗布在15cm組織培養盤上且使其在含有10免胎牛血清和1%丙酮酸鈉、L-穀氨醯胺和抗生素的DME高葡萄糖培養基中生長。在塗布293細胞後24小時(或達到~80%融合度)，使用12pgDNA(例如具有GPR22的pCMV-ne(/載體(其中應了解"GPR22"可為野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸或其它哺乳動物GPR22編碼核酸))轉染細胞。將12貼DNA與60pl脂質轉染劑和2ml無血清DME高葡萄糖培養基組合。從培養盤抽吸培養基且用無血清培養基將細胞洗滌一次。將DNA、脂質轉染劑和培養基混合物連同10ml無血清培養基添加到培養盤中。在37'C下培養4至5小時後，抽吸培養基且添加25ml含血清培養基。在轉染後24小時，再次抽吸培養基，且添加新鮮的含血清培養基。在轉染後48小時，抽吸培養基且添加含有最終濃度為500pg/ml的遺傳黴素(G418藥物)的含血清培養基。現在對經轉染細胞進行選擇，選出含有G418抗性基因的陽性轉染細胞。在進行選擇時每4至5天替換培養基。在選擇期間，使細胞生長以產生穩定池，或使細胞分裂以進行穩定克隆選擇。實例2:用於測定GPCR激活作用的分析(例如篩槍分析)多種方法可用於評定GPCR的激活作用(諸如用於篩檢分析)。下文內容是說明性的，相信所屬領域的技術人員具有判定優選有益於技術者需要的那些技術的能力。a.膜結合分析[3SS]GTPyS分析當G蛋白偶聯受體由於配體結合或組成性激活而呈現活性態時，受體偶聯到G蛋白且刺激GDP釋放且隨後刺激GTP與G蛋白的結合。G蛋白-受體複合體的a亞單元充當GTP酶且將GTP緩慢水解成GDP，此時受體通常失活。失活受體繼續將GDP轉換為GTP。非水解性GTP類似物["S]GTPYS可用於證明["S]GTPyS與表達激活受體的膜的增強結合。使用["S]GTPYS結合測量激活作用的優勢在於(a)其通常適用於所有G蛋白偶聯受體；(b)其鄰接於膜表面，使得收穫影響細胞內級聯的分子的可能性較低。所述分析使用G蛋白偶聯受體刺激["S]GTPyS結合於表達相關受體的膜的能力。所述分析因此可用於篩檢作為GPR22受體(例如根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22受體)的調節劑的候選化合物。所述分析為通用分析且適用於關於所有G蛋白偶聯受體的藥物發現。GTPyS分析是在20mMHEPES和介於1與約20mM之間的MgCl2(此量可經調節以優化結果，但20mM為優選)pH7.4，含有介於約0.3與約1.2nM之間的[35S]GTPyS(此量可經調節以優化結果，但1.2nM為優選)和12.5至75膜蛋白(例如表達GPCR22受體(例如根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22受體)的293細胞，此量可經調節以優化)的結合緩衝液和10pMGDP(此量可經改變以優化)中培養1小時。接著添加麥芽凝集素珠粒(25^1;Amersham)且將混合物在室溫下培養另外30分鐘。接著將管在室溫下以1500xg離心5分鐘且接著以閃爍計數器計數。b.用於Gi偶聯GPCR的基於細胞的cAMP分析TSHR為激活後引起cAMP聚集的Gs偶聯GPCR。TSHR將通過使胺基酸殘基623突變(也就是將丙氨酸殘基改變為異白氨酸殘基)而得以組成性激活。預期Gi偶聯受體抑制腺苷酸環化酶，且因此降低cAMP產生含量，其可使得cAMP含量的評定存在挑戰性。測量指示Gi偶聯受體的激活作用的cAMP產生降低的有效技術可(例如)通過與編碼作為"信號增強子"的非內源組成性激活TSHR(TSHR-A623I)(或內源組成性活性Gs偶聯受體)的核酸共轉染編碼Gi偶聯受體的核酸來實現。僅轉染編碼"信號增強子"的核酸會產生基線cAMP含量。因此，將編碼GPR22的核酸(例如野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸)與編碼信號增強子的核酸共轉染，且即此材料可用於評定GPR22受體表達水平或用於篩檢。所述方法可用於在使用cAMP分析時有效產生信號。在一些實施例中，此方法優選用於評定GPR22受體表達水平或鑑別作為GPR22受體調節劑的候選化合物。應注意當使用此方法時，對於Gi偶聯GPCR(諸如GPR22)來說，GPCR的反向激動劑將增強cAMP信號且激動劑將降低cAMP信號。第l天，每10cm培養盤塗布4xl0e個293細胞。第2天，製備兩個反應管(各管所遵循的比例是對於每個培養盤來說)通過在0.5ml無血清DMEM(IrvineScientific,Irvine,CA)中混合2轉染到哺乳動物細胞中的各受體的DNA(總共為4DNA(例如pCMV載體，具有突變THSR(TSHR-A623I)、TSHR-A623I和GPR22(例如野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸)等的pCMV載體))來製備管A;通過在0.5ml無血清DMEM中混合24nl脂質轉染劑(GibcoBRL)來製備管B。接著通過倒轉(數次)來混合管A和B，隨後在室溫下培養30-45分鐘。此混合物稱為"轉染混合物"。用lxPBS洗滌經塗布的293細胞，隨後添加5ml無血清DMEM。接著將l.Oml轉染混合物添加到細胞中，隨後在37'C/5呢C02下培養4小時。接著通過抽吸去除轉染混合物，隨後添加10ml的DMEM/10呢胎牛血清。接著在37°C/5%C02下培養細胞。培養24小時後，接著收穫細胞且用於分析。FlashPlateTM腺苷酸環化酶試劑盒(NewEnglandNuclear,目錄號SMP004A)是針對基於細胞的分析而設計，但可視技術者需要對其改良以用於粗質膜。HashPlate孔含有閃爍體塗層，其也含有識別cAMP的特異性抗體。孔中所產生的cAMP可通過對放射性cAMP示蹤劑與cAMP抗體的結合的直接競爭來量化。下文為測量表達GPR22(例如野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸)的全部細胞中cAMP含量變化的簡要實驗方案。在瞬時轉染後大約24至48小時收穫經轉染細胞。謹慎吸出培養基且丟棄。將10mlPBS緩慢添加到各細胞培養皿中，隨後謹慎抽吸。將1mlSigma細胞解離緩衝液和3mlPBS添加到各培養盤中。從培養盤中吸出細胞且將細胞懸浮液收集入50ml錐形離心管中。接著將細胞在室溫下以1,100rmp離心5分鐘。將細胞小球謹慎再懸浮於適當體積的PBS(約3ml/培養盤)中。接著使用血球計計數細胞且添加另外PBS以得到適當數目的細胞(最終體積為約50pI/孔)。製備cAMP標準物和檢測緩衝液(包含1liCi示蹤劑[1251]cAMP(50|il)至11ml檢測緩衝液)且根據廠商說明書維持。應新鮮製備分析緩衝液用於篩檢且其含有50pi刺激緩衝液、3pl測試化合物(12pM最終分析濃度)和50pl細胞。可將分析緩衝液存儲在冰上直到使用。可通過添加50lalcAMP標準物至適當孔中隨後添加50|ilPBS至孔H-ll和H12中來起始分析。添加50|il刺激緩衝液至所有孔中。使用能夠分配3pi化合物溶液的加樣頭將所選化合物(例如TSH)添加到適當孔中，最終分析濃度為12測試化合物且總分析體積為100W。接著將細胞添加到孔中且在室溫下培養60分鐘。接著將lOOpl含有示蹤劑cAMP的檢測混合物添加到孔中。接著將培養盤再培養2小時，隨後以WallacMicroBeta閃爍計數器計數。接著由包含在各分析盤中的標準cAMP曲線外推cAMP/孔的值。c.基於報導基因的分析1拔遣基，折^裙關辦J將293和293T細胞以每孔2xl04個細胞的密度塗布在96孔培養盤上且在第二天根據廠商說明書使用脂質轉染試劑(BRL)轉染。如下製備用於各6孔轉染的DNA/脂質混合物將100nlDMEM中的260ng質粒DNA與100plDMEM中的2[il脂質緩慢混合(所述260ng質粒DNA是由200ng8xCRE-Luc報導基因質粒、50ngpCMV-GPR22(含有GPR22核酸，例如野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸的pCMV)或單獨pCMV和10ngGPRS表達質粒(pcDNA3(Invitrogen)中的GPRS)組成)。如下製備8xCRE-Luc報導基因質粒通過在ppgal-basic載體(Clontech)中的BglV-HindIII位點處克隆大鼠生長抑素啟動子(-71/+51)來獲得載體SRIF-(3-gal。通過PCR由腺病毒模板AdpCF126CCRE8獲得八個(8)cAMP反應元件的拷貝(參見Suzuki等人，人類基因治療(HumGeneTher)(1996)7:1883-1893，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)且將其在Kpn-BglV位點處克隆入SRIF-P-gal載體中，從而得到8xCRE-p-gal報導基因載體。通過用從pGL3-basic載體(Promega)獲得的螢光素酶基因在HindIII-Bamm位點置換8xCRE-p-gal報導基因載體中的(3-半乳糖苷酶基因來產生8xCRE-Luc報導基因質粒。在室溫下培養30分鐘後，用400DMEM稀釋DNA/脂質混合物且添加100^經稀釋混合物至各孔中。在細胞培養物培養箱中培養4小時後，將含有10%FCS的100^DMEM添加到各孔中。第二天用含有10%FCS的200pl/孔DMEM轉換經轉染細胞。八(8)小時後，用PBS洗滌一次，隨後將孔換成100pl/孔無酚紅的DMEM。在第2天使用LucLite加報導基因分析試劑盒(Packard)遵循廠商說明書來測量螢光素酶活性且以1450MicroBeta^閃爍和發光計數器(Wallac)讀取。2.aw浙遣基厲，"9裙關f沐；檢測Gq刺激作用的方法視Gq依賴性磷脂酶C引起在其啟動子內含有API元件的基因激活的已知特性而定。可遵循上文對於CREB報導基因分析所述的實驗方案使用PathdetectTMAP-l順式報導系統(Stratagene,目錄號#219073),其例外為磷酸鈣沉澱物的組份為410ngpAPl-Luc、80ngpCMV-GPR22表達質粒(含有GPR22核酸，例如野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸的pCMV)和20ngCMV-SEAP(經分泌鹼性磷酸酶表達質粒，在經轉染細胞的培養基中測量鹼性磷酸酶活性以控制樣本之間轉染效率的差異)。3.，-麼叛譜基厲督《g務關f沐>>一種檢測Gq刺激作用的方法視Gq依賴性磷脂酶C引起在其啟動子內含有血清反應因子的基因激活的己知特性而定。PathdetectTMSRF-Luc-報導系統(Stratagene)可用55於分析例如COS7細胞中的Gq偶聯活性。使用MammalianTransfection試劑盒(Stratagene,目錄號#200285)根據廠商說明書，以所述系統的質粒組份和編碼GPR22多肽的指定表達質粒轉染細胞。簡單來說，根據廠商說明書在磷酸鈣沉澱物中組合410ngSRF-Luc、80ngpCMV-GPR22(含有GPR22核酸，例如野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸的pCMV)表達質粒和20ngCMV-SEAP。將一半沉澱物均等分布在96孔培養盤中的3個孔上，在無血清培養基中的細胞上維持24小時。在最後5小時將細胞與(例如)1)iM測試化合物一起培養。接著使細胞溶解且使用LucliteTM試劑盒(Packard,目錄號6016911)和"Trilux1450Microbeta"液體閃爍和發光計數器(Wallac)根據廠商說明書分析螢光素酶活性。可使用GraphPadPrism2,0a(GraphPadSoftwareInc.)分析資料。d.細胞內IP3聚集分析(Gq相關受體)第l天，可將包含根據本發明的方法產生的GPR22受體多肽的細胞(例如經Gq(dd)/Gi嵌合G蛋白和野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸或其它哺乳動物GPR22編碼核酸共轉染的細胞)塗布在24孔培養盤上，通常為lx105個細胞/孔(但此數目可經優化)。第2天，可通過首先在50pl無血清DMEM/孔中混合0.25jagDNA且在50pl無血清DMEM/L中混合2pl脂質轉染劑來轉染細胞。緩慢混合溶液且在室溫下培養15-30分鐘。用0.5mlPBS洗滌細胞且將400pl無血清培養基與轉染培養基混合併添加到細胞中。接著將細胞在37'C/59fcC02下培養3-4小時，且接著去除轉染培養基並用lml/孔的常規生長培養基替換。第3天用SH-肌醇標記細胞。簡單來說，去除培養基且用0.5mlPBS洗滌細胞。接著每孔添加0.5ml無肌醇/無血清培養基(GIBCOBRL)，同時每孔添加0.25^Ci311-肌醇且將細胞在37°C/5%032下培養16-18小時。第4天，用0.5mlPBS洗滌細胞且添加0.45ml分析培養基(其含有無肌醇/無血清培養基、10pM帕吉林(pargyline)、10mM氯化鋰)或0.4ml分析培養基和可選的50pl測試化合物。接著將細胞在37。C下培養30分鐘。接著用0.5mlPBS洗漆細胞且每孔添加200^新鮮/冰冷終止溶液(1MKOH，18mM硼酸鈉，3.8mMEDTA)。將溶液在冰上維持5-10分鐘或直到細胞溶解且接著用200pl新鮮/冰冷中和溶膠(7.5%HC1)中和。接著將溶胞物轉移到1.5ml微量離心管中且每管添加1ml氯仿/甲醇(1:2)。將溶液渦旋15秒且將上層相施加到BioradAGl-X8TM陰離子交換樹脂(100-200目)。首先，用水以1:1.25W/V洗滌樹脂且將0.9ml上層相裝載至管柱上。用10ml的5mM肌醇和10ml的5mM硼酸鈉/60mM甲酸鈉洗滌管柱。將三磷酸肌醇洗脫入含有10ml閃爍混合液的閃爍瓶中，所述閃爍混合液含有2ml的0.1M甲酸/1M甲酸銨。通過用10ml的0.1M甲酸/3M甲酸銨洗滌來再生管柱且將其用ddH20衝洗兩次並在4'C下存儲在水中。實例3:『3SS1GTPtS分析l.膜製備在一些實施例中，包含根據本發明的方法產生的GPR22受體多肽(例如經野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸或其它哺乳動物GPR22編碼核酸轉染的細胞)且用於鑑別候選化合物(例如作為反向激動劑、激動劑或拮抗劑)的膜優選如下製備"膜刮擦緩衝液"包含20mMHEPES和10mMEDTA(pH7.4)，"膜洗滌緩衝液"包含20mMHEPES和0.1mMEDTA(pH7.4)，"結合緩衝液"包含20mMHEPES、100mMNaCI和10mMMgCl2(pH7.4)。在整個程序中所有材料均保持在冰上。首先，從融合單層細胞抽吸培養基，隨後用10ml冷PBS衝洗，隨後抽吸。其後，將5ml膜刮擦緩衝液添加到刮擦細胞中；此後將細胞提取物轉移到50ml離心管中(在4。C下以20,000rpm離心17分鐘)。其後，抽吸上清液且將離心塊再懸浮於30ml膜洗滌緩衝液中，隨後在4'C下以20,000rpm離心17分鐘。接著抽吸上清液且將離心塊再懸浮於結合緩衝液中。接著使用BrinkmanPolytron均質機將其均質化(15-20秒碎裂直到所有材料呈懸浮液形式)。其在本文中稱作"膜蛋白"。在均質化之後，使用Bradford蛋白分析來測定膜的蛋白濃度(可將蛋白質稀釋到約1.5mg/ml，等分且冷凍(-8(TC)以便隨後使用；冷凍時，所用實驗方案如下在分析當天，在室溫下將冷凍膜蛋白解凍，隨後渦旋且接著用Polytron以約12x1,000rpm均質化約5-10秒；應注意對於多次製備來說，均質機應在不同製備的均質化之間經徹底清潔)。遵循廠商說明書(Biorad，目錄號500-0006)使用結合緩衝液(根據上文)、Bradford染料試劑、Bradford蛋白標準物。&.辦製備雙重複管，一支管包括膜且另一支作為對照"空白"。各自含有800pl結合緩衝液。其後，將10^Bradford蛋白標準物(1mg/ml)添加到各管中，且接著將10pl膜蛋白添加到剛才那隻管(非空白)中。其後，將200^1Bradford染料試劑添加到各管中，隨後將各管渦旋。五(5)分鐘後，將管再次渦旋且將其中的材料轉移到比色皿中。接著使用CECIL3041分光光度計在波長595下讀取比色皿。GDP緩衝液是由37.5ml結合緩衝液和2mgGDP(Sigma，目錄號G-7127)組成，隨後在結合緩衝液中連續稀釋以達到0.2GDP(各孔中的GDP最終濃度為0.1GDP);包含候選化合物的各孔具有200iil的最終體積，其是由100plGDP緩衝液(最終濃度，0.1^MGDP)、50^xl結合緩衝液中的膜蛋白和50^il結合緩衝液中的["S]GTPyS(0.6nM)(每10ml結合緩衝液2.5nl[35S]GTPyS)組成。6.辦優選使用96孔培養盤模式篩檢候選化合物(可將其在-8(tc下冷凍)。短暫均質化膜蛋白(或具有排除目標GPCR的表達載體的膜，作為對照)直到呈現懸浮液形式。接著使用上文所述的Bradford蛋白分析來測定蛋白濃度。接著將膜蛋白(和對照)在結合緩衝液中稀釋到0.25mg/ml(最終分析濃度，12.5pg/孔)。其後，將100|idGDP緩衝液添加到WallacScintistrip(Wallac)的各孔中。接著使用5pl加樣頭將5pl候選化合物轉移到所述孔中(也就是200pl總分析體積中的5pl為1:40的比率，使得候選化合物的最終篩檢濃度為10(iM)。另外，為避免汙染，在各轉移步驟之後，應將加樣頭在包含水(lx)、乙醇(lx)和水(2x)的三個儲槽中清洗--在各清洗之後應從所述工具搖晃排出過量液體且以紙和拭淨紙乾燥。其後，將50^膜蛋白添加到各孔(也使用包含不含GPR22受體多肽的膜的對照孔)中，且在室溫下預培養5-10分鐘。其後，將50pl結合緩衝液中的["S]GTPyS(0.6nM)添加到各孔中，隨後在震蕩器上在室溫下培養60分鐘(另外，在此實例中，用箔片覆蓋培養盤)。接著通過在22。c下以4000RPM旋轉培養盤15分鐘來終止分析。接著以8通道歧管抽吸培養盤且將其用培養盤覆蓋物密封。接著在Wallac1450上使用設定"Prot.#37"(根據廠商說明書)讀取培養盤。實例4:環amp分析另一種鑑別(例如)作為反向激動劑、激動劑或拮抗劑的候選化合物的分析方法通過使用基於環化酶的分析來實現。除如此鑑別候選化合物外，此分析方法也可用作獨立方法以提供對來自上文實例3中所述的["S]GTPyS方法的結果的確認。根據以下實驗方案，優選使用經修飾FlashPlateTM腺苷酸環化酶試劑盒(NewEnglandNuclear,目錄號SMP004A)鑑別作為GPR22，優選為根據本發明的方法產生的GPR22(例如經野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸或其它哺乳動物GPR22編碼核酸轉染的細胞)的調節劑的候選化合物。在轉染後大約3天收穫經轉染細胞。通過在含有20mMHEPES(pH7.4)和10mMMgCl2的緩衝液中均質化懸浮細胞來製備膜。均質化是使用BrinkmanPolytronTM在冰上進行大約IO秒鐘。將所得勻漿在4'C下以49，000xg離心15分鐘。接著將所得離心塊再懸浮於含有20mMHEPES(pH7.4)禾[]0.1mMEDTA的緩衝液中，均質化10秒鐘，隨後在4'C下以49，000xg離心15分鐘。接著將所得離心塊存儲在-8(TC下直到使用。在直接鑑別篩檢當天，將膜離心塊在室溫下緩慢解凍，再懸浮於含有20mMHEPES(pH7.4)和10mMMgCl2的緩衝液中以得到0.60mg/ml的最終蛋白濃度(將再懸浮膜放在冰上直到使用)。製備cAMP標準物和檢測緩衝液(包含2pCi示蹤劑[1251]cAMP(100至11ml檢測緩衝液)且根據廠商說明書維持。新鮮製備分析緩衝液用於篩檢且其含有20mMHEPES(pH7.4)、10mMMgCl2、20mM磷酸肌酸(Sigma)、0.1單位/ml肌酸磷酸激酶(Sigma)、50|iMGTP(Sigma)和0.2mMATP(Sigma);接著將分析緩衝液存儲在冰上直到使用。優選將候選化合物連同40pi膜蛋白(30pg/孔)和50nl分析緩衝液添加到(例如)96孔培養盤的孔中(3pl/孔，12^M最終分析濃度)。接著伴隨緩慢震蕩在室溫下培養此混合物30分鐘。在培養後，向各孔中添加100ixl檢測緩衝液，隨後培養2-24小時。接著在WallacMicroBetaTM盤讀取器上使用"prot.#31"(根據廠商說明書)對培養盤計數。實例5:GO(DEL)/GI融合構建體Gq(del)/Gi融合構建體為嵌合G蛋白，從而Gq蛋白a亞單元("Gaq")之前六(6)個胺基酸缺失且Gaq的C末端的最後五(5)個胺基酸經Gai亞單元的對應胺基酸置換。Gq(del)/Gi嵌合G蛋白將Gi信號轉導轉化為Gq信號轉導，使得可替代cAMP產生而測量(例如)第二信使三磷酸肌醇(IP3)或甘油二酯(DAG)或Ca"。如下設計Gq(del)/Gi融合構建體缺失Gaq亞單元的N末端六(6)個胺基酸(胺基酸2至7，其具有序列TLESIM(SEQIDNO:15))，且以Gai蛋白的對應胺基酸(具有序列DCGLF(SEQIDNO:17))置換C末端五(5)個胺基酸(具有序列EYNLV(SEQIDNO:16))。使用以下引物且使用質粒63313(ATCCNumber63313)作為模板通過PCR獲得此融合構建體，所述引物為5'-gatcaagcttcCATGGCGTGCTGCCTGAGCGAGGAG-3'(SEQIDNO:18)和5'-gatcggatccTTAGAACAGGCCGCAGTCCTTCAGGTTCAGCTGCAGGATGGTG-3'(SEQIDNO:19)，所述質粒63313含有具有血球凝集素標記的小鼠Gcxq野生型型式。小寫形式的核苷酸包括HindlII/BamHI的克隆位點和間隔基。使用TaqPIus精確DNA聚合酶(Stratagene)通過以下循環進行擴增，其中步驟2至4重複35次95°C，2分鐘；95°C，20秒鐘；56°C，20秒鐘；72°C，2分鐘；和72°C，7分鐘。將PCR產物克隆入pCRII-TOPO載體(Invitrogen)中且使用ABIBigDye終止子試劑盒(P.E.Biosystems)測序。通過兩步克隆處理使含有融合構建體序列的來自TOPO克隆的插入物在HindlII/BamHI位點處穿投於表達載體pcDNA3.1(+)中。關於核酸序列請參見SEQIDNO:20且關於Gq(del)/Gi融合構建體的經編碼胺基酸序列請參見SEQIDNO:21。實例6:測量細胞內鈣濃度的螢光成像盤讀取器(FLIPR)分析將來自各別克隆系的經pCMV-GPR22(含有GPR22核酸，例如野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸或其它哺乳動物GPR22編碼核酸的pCMV,實驗)或pCMV(陰性對照)和Gq(del)/Gi嵌合G蛋白穩定共轉染的細胞以5.5乂104個細胞/孔接種至具有完全培養基(含有10呢FBS、2mML-穀氨醯胺、1mM丙酮酸鈉的DMEM)的經聚-D-賴氨酸預處理的96孔培養盤(Becton-Dickinson，#356640)中用於在第2天分析。為製備Fluo4-AM(分子探針(MolecularProbe)，#F14202)培養緩衝儲備液，將1mgFluo4-AM溶解於467piDMSO和467pi泊洛尼克酸(Pluronicacid)(分子探針，#P3000)中以得到1mM儲備溶液，其可於-20。C下存儲1個月。Fluo4-AM為螢光鈣指示染料。在洗滌緩衝液(lxHBSS/2.5mM丙磺舒(Probenicid)/20mMHEPES，pH7.4)中製備候選化合物。在分析時，從孔中去除培養基且以100pi的4Fluo4-AM/2.5mM丙磺舒(Sigma，#P8761)/20mMHEPES/完全培養基(pH7.4)裝載細胞。在37°C/5%C02下培養60分鐘。培養1小時後，去除Fluo4-AM培養緩衝液且用100pi洗滌緩衝液將細胞洗滌兩次。在各孔中留下IOOW洗滌緩衝液。將培養盤送回至培養箱中，在37'C/5呢C02下歷時60分鐘。對FLIPR(螢光成像盤讀取器，MolecularDevice)設定程序以在第30秒添加50pi候選化合物且記錄由候選化合物引起的細胞內鈣濃度([Ca2+])的瞬時變化，歷時另外150秒。使用FLIPR軟體，用總螢光變化計數判定激動劑活性。以儀器軟體將螢光讀數標準化以得到零點的等效起始讀數。在一些實施例中，以pCMV-GPR22(含有GPR22核酸，例如野生型GPR22核酸或根據本發明的方法產生的表達增強的GPR22核酸或其它哺乳動物GPR22編碼核酸的pCMV,實驗)或pCMV(陰性對照)和Gal5或Gal6混雜G蛋白穩定共轉染細胞。雖然上文提供使用穩定轉染細胞的用於激動劑活性的FLIPR分析，但所屬領域的技術人員可容易地修改所述分析用以表徵拮抗劑活性。所屬領域的技術人員也將容易了解可替代性使用經瞬時轉染的細胞。實例7:MAP激酶分析可監測MAP激酶(有絲分裂促進劑激活的激酶)以評估受體激活作用。可以數種方法檢測MAP激酶。一種方法是基於對未經磷酸化(無活性)或經磷酸化(活性)的磷酸化狀態的評估。經磷酸化蛋白質在SDS-PAGE中具有較低移動力且因此可使用免疫印跡法與未經刺激的蛋白質相比較。或者，可使用經磷酸化蛋白質的特異性抗體(NewEnglandBiolabs),其可用於檢測經磷酸化激酶的增加。在任一方法中，均以測試化合物刺激細胞且接著用Laemmli緩衝液提取。將可溶性部分施加於SDS-PAGE凝膠且以電泳法將蛋白轉移到硝酸纖維素或Immobilin。以標準免疫印跡技術檢測免疫活性帶。在薄膜上記錄可見或化學發光信號且可通過密度測定法量化。另一方法是基於經由磷酸化分析對MAP激酶活性的評估。以測試化合物剌激細胞且製備可溶性提取物。在30'C下將提取物與Y-32P-ATP、ATP再生系統和MAP激酶的特異性底物(諸如由胰島素調節的磷酸化熱穩定和酸穩定蛋白質或PHAS-I)—起培養10分鐘。通過添加H3P04來終止反應且將樣本轉移到冰上。將等分試樣點斑於WhatmanP81層析紙上，其保留磷酸化蛋白質。洗滌層析紙且以液體閃爍計數器計數32P。或者，將細胞提取物與Y-32P-ATP、ATP再生系統和由抗生蛋白鏈菌素結合於過濾器支撐的生物素標記的髓磷脂鹼性蛋白一起培養。髓磷脂鹼性蛋白質為激活MAP激酶的底物。磷酸化反應是在30'C下進行IO分鐘。可接著經由過濾器抽吸提取物，所述過濾器保留磷酸化髓磷脂鹼性蛋白質。洗滌過濾器且通過液體閃爍計數法計數"P。實例8:黑素細胞技術黑素細胞為在低等脊椎動物(例如兩棲類動物)中所發現的皮膚細胞。其含有稱為黑素體的有色細胞器。黑素細胞能夠在G蛋白偶聯受體(GPCR)激活時沿微管網絡再分布這些黑素體。此色素移動的結果為細胞明顯變亮或變暗。在黑素細胞中，由Gi偶聯受體激活引起的細胞內cAMP含量的降低會引起黑素體向細胞中心遷移，從而導致顏色顯著變亮。如果在Gs偶聯受體激活之後接著cAMP含量升高，那麼黑素體再分散且細胞再次變暗。由Gq偶聯受體激活引起的甘油二酯含量的增加也可誘發此再分散作用。黑素細胞的反應在受體激活的數分鐘內發生且導致簡單強烈的顏色變化。可使用傳統吸光度微定量盤讀取器或合適視頻成像系統容易地檢測反應。不同於其它皮膚細胞，黑素細胞來源於神經脊且似乎表達信號轉導蛋白的所有補體。具體來說，所述細胞表達極大範圍的G蛋白且因此能夠功能性地表達幾乎所有GPCR。黑素細胞可用於鑑別抗GPCR的化合物，包括天然配體。此方法可通過引入能夠回應於特定剌激而分散或聚集其色素且表達諸如哺乳動物GPR22受體之外源GPCR的色素細胞系的測試細胞來進行。刺激物(例如褪黑激素)設定色素沉積的初始狀態，其中如果GPCR激活誘發色素分散，那麼色素在測試細胞內聚集。然而，用刺激物刺激細胞以設定色素沉積的初始狀態，其中如果GPCR激活誘發色素聚集，那麼色素分散。接著使測試細胞與化合物接觸，且判定細胞中的色素沉積是否相對於色素沉積的初始狀態變化。由候選化合物(包括但不限於配體)與GPCR偶聯所引起的色素細胞沉積將在皮氏培養皿上顯示變暗，而色素細胞聚集將顯示變亮。可遵循根據美國專利第5,462,856號和美國專利第6,051,386號的揭示內容的材料和方法。這些專利揭示內容的全文以引用的方式併入本文中。例如，將細胞塗布在96孔培養盤中(每個培養盤一種受體)。轉染後48小時，用10nM褪黑激素處理各培養盤上的一半細胞。褪黑激素激活黑素細胞中的內源Gi偶聯受體且引起黑素細胞聚集其色素。將另一半細胞轉移到無血清培養基0.7XL-15(Gibco)中。1小時後，無血清培養基中的細胞仍保持色素分散狀態，而經褪黑激素處理的細胞呈色素聚集狀態。此時，用劑量反應的測試/候選化合物處理細胞。如果經塗布GPCR結合於測試/候選化合物，預期黑素細胞響應化合物而經歷顏色變化。如果受體為Gs或Gq偶聯受體，那麼褪黑激素聚集的黑素細胞將經歷色素分散。相反，如果受體為Gi偶聯受體，那麼預期色素分散的細胞經歷劑量依賴性色素聚集。實例9:製備表達增強的GPR22R425和GPR22C425核酸已鑑別數種天然存在的GPR22多肽變異體，包括GPR22R425和GPR22C425。根據本發明的方法使編碼GPR22R425或GPR22C425的野生型核酸經歷核苷酸取代，且將其用於下述表達分析中以顯示由經取代核酸引起的經編碼GPR22多肽的增強表達。野生型GPR22R425編碼區的核苷酸序列在SEQIDNO:l中提供，且經編碼GPR22R425胺基酸序列在SEQIDNO:2中提供。提供經編碼GPR22R425多肽的增強表達的經取代GPR22R425編碼區的核苷酸序列在SEQIDNO:3中提供，且經編碼GPR22R425胺基酸序列在SEQIDNO:4中提供。SEQIDNO:2與SEQIDNO:4的胺基酸序列相同。野生型GPR22C425編碼區的核苷酸序列在SEQIDNO:5中提供，且經編碼GPR22C425胺基酸序列在SEQIDNO:6中提供。提供經編碼GPR22C425多肽的增強表達的經取代GPR22C425編碼區的核苷酸序列在SEQIDNO:7中提供，且經編碼GPR22C425胺基酸序列在SEQIDNO:8中提供。SEQIDNO:6與SEQIDNO:8的胺基酸序列相同。使用GPR22R425和GPR22C425的野生型編碼區作為模板。判定編碼區內的個別密碼子且鑑別待進行的個別核苷酸取代。將個別核苷酸取代引入野生型GPR22R425和GPR22C425編碼區中，且產生合成GPR22R425和GPR22C425編碼聚核苷酸並接著進行測序。舉例來說，在設計後，將全長表達增強的GPR22編碼核酸切成一系列長度至多為約150bp的連續片段，其中在兩個鄰近片段之間具有經設計的限制位點。各片段由一或兩組互補寡核苷酸組成，對其進行設計使得在退火後將產生雙鏈DNA片段，其具有與特異性限制位點兼容的末端使得經退火片段可克隆入標準細菌克隆載體中。在將類似如上所述產生的鄰近節段插入限制位點中之前，以標準測序方法確定序列。確定提供經編碼GPR22R425多肽的增強表達的示範性經取代GPR22R425核酸的核酸和推導出的胺基酸序列以及提供經編碼GPR22C425多肽的增強表達的示範性經取代GPR22C425核酸的核酸和推導出的胺基酸序列，且其分別作為SEQIDNO:3和SEQIDNO:7列於附屬於本專利文獻的隨附"序列表"中。實例10:通過經轉染HEK293細胞中GPR22受體的環化瞎分析來比較表達增強的GPR22核酸與野生型GPR22核酸甲狀腺刺激激素(TSH或促甲狀腺激素)受體(TSHR)在經其配體TSH激活後引起細胞內cAMP的聚集。測量對應於組成性活性Gi偶聯受體(諸如GPR22)的cAMP產生降低的有效技術為用Gi偶聯受體共轉染TSHR且在升高基礎cAMP含量的TSH存在下進行分析，從而TSHR充當"信號窗口增強子"。此處使用所述方法。以甲狀腺刺激激素(TSH或促甲狀腺激素)受體(TSHR)和pCMV載體或含有選自由下列各物組成的群組的核酸的pCMV共轉染HEK293細胞提供經編碼GPR22R425多肽的增強表達的經取代GPR22(R425)["sGPR22(R425)"]核酸(SEQIDNO:3)、野生型GPR22(R425)["wtGPR22(R425)"]核酸(SEQIDNO:l)、提供經編碼GPR22C425多肽的增強表達的經取代GPR22(C425)["sGPR22(C425)"]核酸(SEQIDNO:7)和野生型GPR22(C425)["wtGPR22(C425)"]核酸(SEQIDNO:5)。使用脂質轉染劑(Invitrogen)進行轉染。轉染後48小時，用100nMTSH(Sigma)刺激細胞或保持不受刺激("基礎")歷時1小時，隨後如下文所述使用購自珀金埃爾默[目錄號SMP004B]的腺苷酸環化酶閃盤分析試劑盒測定全細胞cAMP。結果呈現於圖5中。將經轉染細胞放在經抗cAMP抗體塗覆的孔中，所述孔含有100nMTSH或載體。所有條件一式三份進行測試。在室溫下培養1小時以允許刺激cAMP後，添加含有125I-cAMP的檢測混合物(在珀金埃爾默試劑盒中提供)到各孔中且使培養盤在室溫下另外培養1小時。接著抽吸孔以去除未結合的125I-cAMP。使用WallacMicrobeta計數器檢測結合的125I-cAMP。通過與標準曲線比較來判定各樣本中cAMP的量，所述標準曲線是通過將已知濃度的cAMP放在培養盤上的一些孔中而獲得。如圖5中所示，由野生型核酸編碼的GPR22R425和GPR22C425僅表達出較弱的Gi活性，而由經取代核酸編碼的GPR22R425和GPR22C425GPR22顯示出較強的Gi活性且抑制經TSH刺激的cAMP聚集約80%。對於圖5中所示的實驗來說，由經取代GPR22核酸引起的細胞內cAMP聚集含量的抑制為野生型核酸效果的約3.4倍。這些結果證實經取代核酸提供經編碼GPR22多肽的增強表達。胺基酸425處的多態現象(R與C)似乎對野生型或經取代形式下的Gi活性不具有影響。實例11:通過經GO(DEL)/GI共轉染的HEK293細胞中GPR22受體的IP，分析來比較表達增強的GPR22核酸與野生型GPR22核酸用Gq(del)/Gi嵌合G蛋白和pCMV或含有野生型人類GPR22("wtGPR22")核酸或提供經編碼GPR22多肽的增強表達的經取代人類GPR22("sGPR22")核酸的pCMV共轉染HEK293細胞。用Gq(del)/Gi嵌合體共轉染GPR22構建體以將Gi信號轉導轉化為Gq信號轉導。使用總磷酸肌醇聚集含量作為替代讀出，通過測量細胞內IP3聚集含量來評定Gq信號轉導。在轉染前一天以每10cm培養皿3xl06個細胞的密度塗布HEK293細胞。使用Lipofectamine2000(Invitrogen#11668-027)，以2Gq(del)/Gi和2嗎GPR22/pCMV或空pCMV轉染HEK293細胞。在轉染後一天以每孔8xl05個細胞將經轉染細胞再塗布在經聚-L-賴氨酸處理的12孔培養盤中且使細胞黏附4至6小時。為以3H-肌醇標記細胞，去除培養基且用無肌醇培養基洗滌細胞，隨後添加補充有1.5g/L碳酸氫鈉和0.5pCi3H-肌醇(珀金埃爾默生命科學公司(PerkinElmerLifeSciences))的lml無肌醇無血清培養基(Invitrogen/Gibco配方02-5092EA，含有D-葡萄糖、L-穀氨醯胺、酚紅和鹽酸吡哆醇(pyridoxine)且不含肌醇、碳酸氫鈉和丙酮酸鈉的DMEM)至各孔中且將細胞培養16-18小時。在如上所述轉染後約48小時將HEK293細胞用於圧3分析。去除培養基且用1ml分析培養基(補充有10pM帕吉林和10mM氯化鋰的上述無肌醇培養基)替換，並將細胞在37'C下培養3小時。(為篩檢作為GPR22調節劑的測試化合物，可在此3小時培養中包括測試化合物。)在培養後，通過抽吸去除培養基且以含有1MKOH、18mM硼酸鈉和3.8mMEDTA的300)il新鮮製得的冰冷終止溶液替換。將培養盤在冰上培養5-10分鐘或直到細胞溶解。以含有7.5呢HC1的300^U新鮮製得的冰冷中和溶液中和溶胞物，將其轉移到2ml微量離心管中且通過渦旋15秒以1ml氯仿:甲醇(1:2)提取並在高速下離心5分鐘。使1ml上層水相經過預裝填樹脂的陰離子交換管柱(Biorad，AG1-X8100-200目，甲酸鹽形式)。用10ml的5mM肌醇洗滌管柱，隨後用10ml含5mM硼酸鈉和60mM甲酸鈉的溶液洗滌管柱。接著用2ml含0.1M甲酸和1M甲酸銨的洗脫溶液將全部磷酸肌醇直接洗脫入閃爍瓶中。將10ml閃爍混合液添加到瓶中且通過閃爍計數來測定放射性磷酸肌醇。由經取代核酸編碼的GPR22在介導IP3聚集方面顯示出比由野生型核酸編碼的GPR22顯著更強的活性(圖6)。對於圖6中所示的實驗來說，由經取代核酸所編碼的GPR22對IP3聚集的刺激水平為由野生型核酸所編碼的GPR22對IP3聚集的刺激水平的約830%。這些結果證實經取代核酸提供經編碼GPR22多肽的增強表達。此與如使用圖5的環化酶分析所示經取代核酸所編碼的GPR22的Gi活性與野生型GPR22所編碼的GPR22的Gi活性相比顯著更高相一致。實例12:經瞬時轉染的COS-7細胞的免疫染色用pCMV(陰性對照)或用對應於N末端血球凝集素(HA)標記(32-腎上腺素受體("卩2腎上腺素"，陽性對照)、由野生型GPR22核酸("野生型GPR22核酸")編碼的N末端HA標記人類GPR22或由提供經編碼GPR22多肽的增強表達的經取代GPR22核酸("表達增強的GPR22核酸")編碼的N末端HA標記人類GPR22的質粒DNA轉染COS-7細胞，且在轉染後24小時將其塗布在經聚D-賴氨酸塗覆的腔室載玻片上。在轉染後48小時，在室溫下將細胞固定於4%聚甲醛中歷時15-20分鐘，且用0.1%TritonX-100在室溫下滲透15分鐘。接著在室溫下將細胞與含有2呢BSA和0.1%TritonX-100的阻斷緩衝液一起培養30分鐘，隨後與第一抗體(小鼠抗HA抗體或兔抗人類GPR22肽抗體)溶液一起培養1小時。洗滌細胞且與螢光標記的第二抗體(經FITC標記的抗小鼠IgG或經RITC標記的抗兔IgG)和DAPI(用於染色)在黑暗下一起培養30分鐘。洗滌細胞且安裝載玻片用於螢光顯微檢查。如圖7中所示，用經取代GPR22核酸轉染的細胞比用野生型GPR22核酸轉染的細胞顯示出顯著更高的GPR22多肽表達水平，從而證實經取代核酸提供經編碼GPR22多肽的增強表達。此可使用檢測N末端的HA標記的抗HA抗體(RocheDiagnosticsCorporation,Indianapolis,IN)或識別GPR22的C末端細胞質尾處的肽序列的GPR22特異性抗體來證實。通過顯示僅GPR22轉染細胞而非載體轉染細胞或卩2腎上腺素受體轉染細胞經GPR22C末端抗體染色，GPR22C末端抗體的特異性得以證明。此外，共染色實驗顯示GPR22C末端抗體僅標記那些也經抗HA抗體染色的GPR22轉染細胞。實例13:表達增強的GPR22MRNA在經轉染細胞中的表達在轉染前一天以每10cm培養皿3xl06個細胞的密度塗布COS-7細胞。使用Lipofectamine2000(Invitrogen#11668-027)，用4嗎含有表達增強的人類GPR22核酸("sGPR22")的pCMV或空pCMV("pCMV")轉染COS-7細胞。在轉染後48小時，使用Trizol試劑(Invitrogen)根據廠商說明書從細胞收穫總RNA。為進行吸印轉移分析，在含有甲醛的瓊脂糖凝膠上以電泳方式分離20總RNA且將其轉移到PVDF膜(Amersham)上。接著用對應於SEQIDNO:7的核苷酸391-935的經32P標記的sGPR22cDNA片段(作為SEQIDNO:22提供)探測膜。在含有50%甲醯胺、1MNaCl、10%硫酸葡聚糖、50mMTris(EMD化學公司(Chemicals),#9230)(pH7.5)、1%十二烷基硫酸鈉(SDS)和100pg/ml變性鮭魚精DNA的溶液中在42'C下進行雜交過夜。接著使膜經歷一系列洗滌，包括在65'C下用0.2xSSC/0.1%SDS最終洗滌。在室溫下使經洗滌膜暴露在薄膜下25分鐘。所得結果顯示於圖8中。根據圖8，顯然在室溫下短暫暴露後易於檢測sGPR22mRNA。使用由野生型GPR22cDNA產生的合適探針對野生型GPR22核酸序列進行的類似的吸印轉移分析無法在等同暴露條件下可再現地得到可檢測信號，而是僅在長期暴露(未圖示)後得到可檢測信號。不希望受縛於任何特定理論，穩定態mRNA含量的此差別與sGPR22mRNA比野生型GPR22mRNA更穩定地相一致。實例14:經放射性標記的化合物本發明也涉及適用於檢測結合於GPR22受體的配體的測試配體的經放射性同位素標記的型式。在一些實施例中，本發明明確涵蓋適用於檢測結合於GPR22受體的配體的所述經放射性標記的測試配體的文庫。在某些實施例中，所述文庫包含至少約10、至少約102、至少約103、至少約105或至少約106種所述經放射性標記的測試化合物。本發明的另一目的是開發包含所述經放射性同位素標記的測試配體的新穎GPR22受體分析法。本發明進一步涉及一種GPR22受體的已知配體的經放射性同位素標記的型式，其可用於鑑別作為GPR22受體的配體的候選化合物的競爭性結合方法中。在一些實施例中，化合物的經放射性同位素標記的型式與所述化合物相同，但實際上一個或一個以上原子經具有與自然界中通常發現(也就是天然存在)的原子質量或質量數不同的原子質量或質量數的原子置換或取代。可併入本發明的化合物中的合適放射性核素包括(但不限於)2H(氘)、3H(氚)、"C、13C、14C、13N、15N、150、170、180、18F、35S、36C1、82Br、75Br、76Br、77Br、l23I、124I、125I和131I。併入本發明的經放射性標記的化合物中的放射性核素將取決於所述經放射性標記的化合物的特定應用。舉例來說，對於活體外GPR22受體標記和競爭分析，併入3H、14C、S2Br、125I、131I、35S的化合物通常最為適用。對於放射成像應用來說，"C、I8F、125I、123I、124I、131I、75Br、76Br或"Br通常最為適用。在一些實施例中，放射性核素是選自由3^[、"C、1SF、14C、125I、124I、131I、"S和s2Br組成的群組。將放射性同位素併入有機化合物中的合成方法適用於本發明的化合物且為此項技術中所熟知。舉例來說，將放射性含量的氚併入目標分子中的這些合成方法如下所示A.用氣氣催化還原-此程序通常得到高比放射性產物且需要滷化或不飽和前體。B.用硼氫化鈉[3印還原--此程序相對廉價且需要含有可還原官能團(諸如醛、酮、內酯、酯和其類似物)之前體。C.用氫化鋁鋰[311]還原--此程序提供具有幾乎理論比放射性的產物。其也需要含有可還原官能團(諸如醛、酮、內酯、酯和其類似物)之前體。D.氚氣暴露標記--此程序包括在合適催化劑存在下使含有可交換質子之前體暴露在氚氣下。E.使用甲基碘^H]進行N-甲基化-此程序通常通過以高比放射性甲基碘(3H)處理適當前體而用於製備O-甲基或N-甲基(3H)產物。此方法一般來說提供較高比放射性，例如約70-90Ci/mmo1。將放射性含量的1251併入目標分子中的合成方法包括A.Sandmeyer反應和其類似反應-此程序將芳基胺或雜芳基胺轉化為重氮鹽(諸如四氟硼酸鹽)且隨後使用Na^I將其轉化為經^I標記的化合物。代表程序由Zhu，D.-G.和其合作者於有機化學雜誌(義Org.C/iem.)2002，67,943-948中報導。B.對苯酚進行鄰位125碘化--此程序允許在苯酚鄰位上併入1251，如Collier,T.L.和其合作者於放射藥物與標記物雜誌(義LaZ7eZedCom;^iac!'op/zarm.)1999，42，S264-S266中所報導。C.用1251交換芳基溴和雜芳基溴--此方法通常為兩步方法。第一步為在三烷基滷化錫或六烷基二錫[例如(CH3)3SnSn(CH3)3]存在下，使用(例如)Pd催化反應[也就是Pd(Ph3P)4]或經由芳基鋰或雜芳基鋰，將芳基溴或雜芳基溴轉化為對應的三烷基錫中間物。代表程序由Bas,M,D.和其合作者於放射藥物與標記物雜誌2001,4《S280-S282中報導。在一些實施例中，化合物的經放射性同位素標記的型式與所述化合物相同，但添加有一個或一個以上包含放射性核素的取代基。在一些其它實施例中，化合物為多肽。在一些其它實施例中，化合物為抗體或其抗原結合片段。在一些其它實施例中，所述抗體為單克隆抗體。合適的所述放射性核素包括(但不限於)2H(氘)、3H(氚)、"C、13C、14C、13N、15N、150、I70、180、18F、35S、36C1、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I和131I。併入本發明的經放射性標記化合物中的放射性核素將視所述經放射性標記化合物的特定應用而定。舉例來說，對於活體外GPR22受體標記和競爭分析，併入SH、14C、82Br、125I、131I、"S的化合物通常將最為適用。對於放射成像應用來說，"C、18F、125I、123I、124I、131I、75Br、"Br或"Br通常將最為適用。在一些實施例中，放射性核素是選自由3H、"C、18F、14C、125I、124I、131I、35s和82Br組成的群組。添加一個或一個以上包含放射性核素的取代基的方法是在技術者的能力範圍內且包括(但不限於)以酶促方法[MarchalonicJfJ，生物化學雜誌(BiochemicalJournal)(1969)113:299-305;ThorellJI和JohanssonBG，生物化學與生物物理學報(BiochimicaetBiophysicaActa)(1969)251:363-9;其各自揭示內容以全文引用的方式併入本文中]和/或以氯胺-T/Iodogen/Iodobead方法[HunterWM和GreenwoodFC，自然(1962)194:495-6;GreenwoodFC等人，生物化學雜誌(1963)89:114-23;其各自揭示內容以全文引用的方式併入本文中]添加放射性同位素碘。實例15:GPR22激動劑活性的酵母報導基因分析基於酵母細胞的報導基因分析先前已於文獻中描述(例如參見Miret等人，生物化學雜誌(2002)277:6881-6887;Campbell等人，生物有機化學與醫藥化學通訊(BioorgMedChemLett)(1999)9:2413-2418;King等人，科學(Science)(1990)250:121-123;WO99/14344;WO00/12704和US6,100,042)。簡單來說，對酵母細胞進行已工程設計使得內源酵母G-a(GPA1)缺失且經使用多種技術構建的G蛋白嵌合體進行置換。此外，使內源酵母a-細胞GPCR(Ste3)缺失以允許同源表達所選哺乳動物GPCR。在酵母中，保留於真核細胞中的信息素信號轉導路徑(例如有絲分裂原激活的蛋白激酶路徑)的元件驅動Fusl的表達。通過將p-半乳糖苷酶(LacZ)放置在Fusl啟動子(Fuslp)的控制下，已研發一種系統，從而受體激活作用導致酶促讀出。通過Agatep等人(Agatep等人，1998,通過乙酸鋰/單鏈載體DNA/聚乙二醇(LiAc/ss-DNA/PEG)方案轉化啤酒酵母菌(TransformationofSaccharomycescerevisiaebythelithiumacetate/single-strandedcarrierDNA/polyethyleneglycol(LiAc/ss-DNA/PEG)protocol).TechnicalTipsOnline,TrendsJournals,Elsevier)所述的乙酸鋰方法的修改方法轉化酵母細胞。簡單來說，使酵母細胞在酵母胰化蛋白培養盤(YT)上生長過夜。將載體單鏈DNA(10嗎)、2兩種Fuslp-LacZ報導基因質粒中的每一種(一種具有URA選擇標記且另一種具有TRP)、2pg在酵母表達載體(2ng複製起點)中的GPR22(例如人類受體)和乙酸鋰/聚乙二醇/TE緩衝液移液至微量離心管中。含有受體/不含有受體(對照)的酵母表達質粒均具有LEU標記。將酵母細胞接種於此混合物中且30'C下進行反應60分鐘。接著在42'C下使酵母細胞熱休克歷時15分鐘。接著洗滌細胞且將其分布於選擇培養盤上。選擇培養盤為無LEU、URA和TRP(SD-LUT)的合成性限定酵母培養基。在3(TC下培養2-3天後，接著在LacZ分析中測試生長於選擇培養盤上的克隆。為進行針對P-半乳糖苷酶的螢光酶分析，使具有本發明的GPR22受體的酵母細胞在液體SD-LUT培養基中生長過夜直到不飽和濃度(也就是細胞仍然分裂且尚未達到靜止相)。在新鮮培養基中將其稀釋到最優選分析濃度且將90pl酵母細胞添加到96孔黑色聚苯乙烯培養盤(Costar)中。將溶解於DMSO中且於109fcDMSO溶液中稀釋到10x濃度的測試化合物添加到培養盤中且所述培養盤於3(TC下置放4小時。4小時後，將p-半乳糖苷酶的底物添加到各孔中。在這些實驗中，使用釋放螢光素的酶的底物，螢光素二(p-D-吡喃半乳糖糖苷)(FDG)，從而允許螢光讀出。每孔添加20的500FDG/2.5%TritonX100(清潔劑為使得細胞可滲透所必需)。在細胞與底物一起培養60分鐘後，每孔添加20pl的1M碳酸鈉以終止反應且增強螢光信號。接著以螢光計於485/535nm下讀取培養盤。經GPR22轉化的酵母細胞中的螢光信號相比經空載體轉化的酵母細胞中的螢光信號的增加指示測試化合物為刺激GPR22受體功能的化合物。在某些實施例中，本發明的化合物提供螢光信號相比背景信號(在單獨載體存在下所獲得的信號)的增加。實例16:受體結合分析可評估測試化合物減少已知為本發明的G蛋白偶聯受體的配體的化合物與受體之間形成複合體的能力。在某些實施例中，已知配體經放射性標記。經放射性標記的已知配體可用於篩檢分析中以鑑別/評估化合物。一般來說，通過新近合成或鑑別的化合物(也就是測試化合物)減少經放射性標記的已知配體與受體之間形成複合體的能力，可評估其降低經放射性標記的已知配體與受體結合的能力。在另一方面中，測試化合物可經放射性標記，且通過評估其結合於包含本發明的GPCR的細胞或結合於包含本發明的GPCR的膜的能力，顯示其為本發明的GPCR的配體。在測試化合物存在下經放射性標記的己知配體的特異性結合水平低於無測試化合物存在下經放射性標記的已知配體的特異性結合水平指示在測試化合物存在下所述經放射性標記的已知配體與所述受體之間形成的複合體少於無測試化合物存在下的情況。檢測巳知為本發明G蛋白偶聯受體的配體的化合物與受體之間的複合體的分析實驗方案A.受體製備使用60pl脂質轉染劑(每15cm培養皿)，以包含編碼本發明的G蛋白偶聯受體的聚核苷酸的10嗎表達載體瞬時轉染293細胞。使經瞬時轉染的細胞在更換培養基的情況下於培養皿中生長24小時(75%融合)，且用10毫升/培養皿Hepes-EDTA緩衝液(20mMHepes+10mMEDTA，pH7.4)去除。接著將細胞於BeckmanCoulter離心機中以17,000rpm(JA-25.50轉子)離心20分鐘。隨後，將離心塊再懸浮於20mMHepes+1mMEDTA(pH7.4)中，且用50mlDounce均質機均質化並再次離心。在去除上清液之後，將離心塊存儲在-8(TC下直到用於結合分析中。當用於分析中時，將膜在冰上解凍20分鐘且接著添加10ml培養緩衝液(20mMHepes，1mMMgCl2，100mMNaCl(pH7.4))。接著將膜渦旋以再懸浮粗膜離心塊且用BrinkmannPT-3100Polytron均質機在設定6下均質化15秒鐘。使用BRLBradford蛋白分析測定膜蛋白濃度。B.結合分析對於總結合來說，將總體積50pl經適當稀釋的膜(於含有50mMTrisHCl(pH7.4)、10mMMgCh和1mMEDTA的分析緩衝液中稀釋，5-50蛋白)添加到96孔聚丙烯微量滴定盤中，隨後添加100nl分析緩衝液和50pl經放射性標記的已知配體。對於非特異性結合來說，添加50pi分析緩衝液而非100pi且在添加50pi所述經放射性標記的已知配體之前再添加50pi的10piM未經放射性標記的所述己知配體。接著將培養盤在室溫下培養60-120分鐘。通過經具有Brandell96孔培養盤收穫器的MicroplateDevicesGF/CUnifilter過濾盤過濾分析培養盤，隨後用含有0.9%NaCl的冷50mMTrisHCl(pH7.4)洗滌來終止結合反應。接著，密封過濾盤底部，將50plOptiphaseSupermix添加到各孔中，密封培養盤頂部且以TriluxMicroBeta閃爍計數器對培養盤計數。為測定在測試化合物存在下在所述經放射性標記的已知配體與所述受體之間是否形成較少的複合體，代替添加100pl分析緩衝液，將100pl經適當稀釋的所述測試化合物添加到適當孔中，隨後添加50pl所述經放射性標記的已知配體。實例17:促進心肌細胞存活如本文所述本發明的哺乳動物GPR22受體可顯示促進(增加)心肌細胞存活。更特定來說，如本文所述本發明的哺乳動物GPR22受體可顯示促進無血清培養基中的心肌細胞存活。如Adams等人(生物化學雜誌(1996)271:1179-1186，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)所述製備新生大鼠心室肌細胞(NRVM)。簡單來說，從1至2日齡的Sprague-Dawley大鼠幼崽獲得心臟且以膠原酶消化，並通過經Percoll梯度來純化肌細胞。在血清存在下將細胞於經昆布氨酸塗覆(3.5mg/cm2)的腔室載玻片(Nunc)上培養過夜，洗滌且在無血清培養基DMEM/F12(Sigma)中另外培養8小時，隨後進行腺病毒感染。如Adams等人(循環研究(2000)87:1180-1187，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)所述進行腺病毒表達載體對NRVM的感染。將編碼哺乳動物GPR22受體的聚核苷酸次克隆入pShuttleCMV(Qbiogene)中，隨後產生重組GPR22腺病毒(AdGPR22)。在無血清培養基中用AdGPR22或不含GPR22聚核苷酸的對照空腺病毒載體以100PFU/細胞的感染劑量感染NRVM歷時48小時。通過用TexasRed共軛蕈毒素和Hoechst33342共染色NRVM來評定而48小時的細胞存活。通過比較從AdGPR22群組獲得的結果與從對照腺病毒群組或未感染細胞獲得的結果，可顯示哺乳動物GPR22受體促進(增加)心肌細胞存活。實例18:拯救心肌細胞免於凋亡如本文所述，本發明的哺乳動物GPR22受體可顯示拯救心肌細胞免於凋亡(降低心肌細胞凋亡)。更特定來說，如本文所述，本發明的哺乳動物GPR22受體可顯示拯救心肌細胞免於因血清剝奪所誘發的細胞凋亡或免於因缺氧(8小時)隨後再充氧(24小時)所刺激的增加的細胞凋亡。如Adams等人(生物化學雜誌(1996)271:1179-1186，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)所述製備新生大鼠心室肌細胞(NRVM)。也參見上文實例17。如Adams等人(循環研究(2000)87:1180-1187，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)所述進行腺病毒表達載體對NRVM的感染。也參見上文實例17。產生重組GPR22腺病毒(AdGPR22)和重組綠色螢光蛋白腺病毒(AdGFP)。以AdGPR22感染第一組NRVM。以AdGFP感染第二對照組NRVM。在感染後於無血清培養基DMEM/F12中培養16小時後，使一半經AdGPR22感染的NRVM和一半經AdGFP感染的NRVM經歷缺氧處理8小時。使用充滿95%N2和5%C02的密封培養箱達成缺氧(VanHeugten等人，分子與細胞心臟病學雜誌(JMolCellCardiol)(1994)26:1513-24，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中)。在缺氧處理後，將細胞移到周圍空氣中且更新無血清培養基。在感染後48小時收穫細胞。通過分析寡核小體DNA破裂(aka碎裂(a/taladdering))來評定細胞凋亡。使用PUREGENEDNA分離試劑盒根據廠商說明書(Gentra)從NRVM分離DNA。在2%瓊脂糖凝膠上分離等量DNA,且通過在紫外光下用溴化乙錠染色來檢測破裂。通過比較從未經歷缺氧處理的經AdGPR22感染細胞獲得的結果與從未經歷缺氧處理的對照經AdGFP感染細胞獲得的結果，可顯示哺乳動物GPR22受體拯救心肌細胞免於因血清剝奪所誘發的細胞凋亡。通過比較從經歷缺氧處理的經AdGPR22感染細胞獲得的結果與從經歷缺氧處理的對照經AdGFP感染細胞獲得的結果，可顯示哺乳動物GPR22受體拯救心肌細胞免於因缺氧(8小時)隨後再充氧(24小時)所刺激而增加的細胞凋亡。雖然己參考本發明的特定實施例描述本發明，但所屬領域的技術人員應了解可在不偏離本發明的真實精神和範疇的情況下進行各種改變和替換等效物。此外，可對本發明的目的、精神和範疇進行多種修改以適應特定情形、材料、相關組合物、方法、方法步驟。所有所述修改均屬於隨附本文的權利要求書的範疇內。權利要求1.一種修飾編碼哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的第一核酸以提供經編碼哺乳動物GPR22受體多肽於真核宿主細胞中的增強表達的方法，其包含以下步驟(a)鑑別所述第一核酸的哺乳動物GPR22受體編碼區中的包含目標核苷酸的密碼子，所述目標核苷酸為可在不改變所述密碼子所編碼的胺基酸的情況下經鳥嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶取代的腺嘌呤，或者所述目標核苷酸為可在不改變所述密碼子所編碼的胺基酸的情況下經鳥嘌呤、胞嘧啶或腺嘌呤取代的胸腺嘧啶；和(b)用鳥嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶取代為腺嘌呤的所述目標核苷酸，或者用鳥嘌呤、胞嘧啶或腺嘌呤取代為胸腺嘧啶的所述目標核苷酸，以產生編碼所述哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的非內源經取代核酸；其中產生所述非內源經取代核酸可提供經編碼哺乳動物GPR22受體多肽於真核宿主細胞中的增強表達，其中所述增強表達是與所述第一核酸或編碼所述哺乳動物GPR22受體多肽的野生型核酸相比較而言。2.根據權利要求1所述的方法，其中為腺嘌呤的所述目標核苷酸、為胸腺嘧啶的所述目標核苷酸或為腺嘌呤或胸腺嘧啶的所述目標核苷酸經鳥嘌呤或胞嘧啶取代。3.根據權利要求1所述的方法，其中所述哺乳動物GPR22受體胺基酸序列為野生型哺乳動物GPR22受體胺基酸序列。4.根據權利要求3所述的方法，其中所述野生型哺乳動物GPR22受體胺基酸序列為野生型人類GPR22受體胺基酸序列。5.根據權利要求3所述的方法，其中所述野生型哺乳動物GPR22受體胺基酸序列為野生型人類GPR22R425或GPR22C425胺基酸序列。6.根據權利要求3所述的方法，其中所述野生型哺乳動物GPR22受體胺基酸序列為SEQIDNO:2或SEQIDNO:6。7.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一核酸為野生型哺乳動物GPR22受體核酸。8.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一核酸為野生型人類GPR22受體核酸。9.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一核酸為野生型人類GPR22R425或GPR22C425核酸。10.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一核酸為SEQIDNO:1或SEQIDNO:5。11.根據權利要求1所述的方法，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQformulaseeoriginaldocumentpage312.根據權利要求1所述的方法，其中編碼所述哺乳動物GPR22受體多肽的所述野生型核酸為野生型人類GPR22受體核酸。13.根據權利要求1所述的方法，其中編碼所述哺乳動物GPR22受體多肽的所述野生型核酸為野生型人類GPR22R425或GPR22C425核酸。14.根據權利要求1所述的方法，其中編碼所述哺乳動物GPR22受體多肽的所述野生型核酸為SEQIDNO:l或SEQIDNO:5。15.根據權利要求l所述的方法，其中所述真核宿主細胞為哺乳動物細胞。16.根據權利要求l所述的方法，其中所述真核宿主細胞為黑素細胞。17.根據權利要求l所述的方法，其中所述真核宿主細胞為酵母細胞。18.根據權利要求l所述的方法，其中對於包括所述經鑑別密碼子的每個目標核苷酸重複步驟(b)。19.根據權利要求l所述的方法，其中將步驟(a)至(b)重複一次。20.根據權利要求1所述的方法，其中對於包含目標核苷酸的所述哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的所述編碼區中的至多每個密碼子重複步驟(a)至(b)。21.根據權利要求1所述的方法，其中重複步驟(a)至(b)使得所述哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的所述編碼區中所有密碼子中的至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%或更多有至少一個目標核苷酸經取代。22.根據權利要求1所述的方法，其中重複步驟(a)至(b)使得所述編碼區中至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或100%的包含目標核苷酸的所述密碼子中的腺嘌呤或胸腺嘧啶經鳥嘌呤或胞嘧啶取代。23.根據權利要求1所述的方法，其中重複步驟(a)至(b)使得編碼所述哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的所述經取代非內源核酸的編碼區的GC含量與編碼所述哺乳動物GPR22胺基酸序列的所述第一核酸的編碼區相比增加至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%或更多。24.根據權利要求1所述的方法，其中重複步驟(a)至(b)使得編碼所述哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的所述經取代非內源核酸的編碼區的GC含量為至少約35%、至少約36%、至少約37%、至少約38%、至少約39%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%或至少約60%。25.根據權利要求l所述的方法，其中所述目標核苷酸為所述編碼區內三個或三個以上連續腺嘌呤或胸腺嘧啶中的一者。26.—種修飾編碼哺乳動物GPR22受體胺基酸序列的第一核酸以提供經編碼哺乳動物GPR22受體多肽於真核宿主細胞中的增強表達的方法，其包含根據權利要求1至25中任一權利要求所述的方法的步驟且進一步包含(c)將真核宿主細胞中由所述非內源經取代核酸編碼的哺乳動物GPR22受體多肽的第一表達水平與由所述第一核酸或由所述編碼哺乳動物GPR22受體多肽的野生型核酸編碼的哺乳動物GPR22受體多肽的第二表達水平相比較；其中所述哺乳動物GPR22受體多肽的所述第一表達水平大於對於所述第一核酸的哺乳動物GPR22受體多肽的所述第二表達水平或大於對於所述野生型核酸的哺乳動物受體多肽的所述第二表達水平表示非內源經取代核酸提供經編碼哺乳動物GPR22受體多肽於真核宿主細胞中的增強表達。27.根據權利要求26所述的方法，其中所述比較是以包含測量受體功能水平的方法來進行。28.根據權利要求27所述的方法，其中所述方法包含測量第二信使含量。29.根據權利要求27所述的方法，其中所述方法包含測量第二信使含量，所述第二信使是選自由環AMP(cAMP)、環GMP(cGMP)、三磷酸肌醇(IP3)、甘油二酯(DAG)、Ca"和MAP激酶活性組成的群組。30.根據權利要求29所述的方法，其中所述方法包含測量細胞內IP3聚集含量。31.根據權利要求30所述的方法，其中所述方法包含測量細胞內IP3聚集的增加。32.根據權利要求31所述的方法，其中對於所述非內源經取代核酸的所述細胞內IP3聚集增加為對於所述野生型核酸的細胞內IP3聚集增加的至少約130%、至少約150%、至少約200%、至少約250%、至少約300%、至少約350%、至少約400%、至少約450%、至少約500%、至少約550%、至少約600%、至少約650%、至少約700%、至少約750%、至少約800%、至少約850%、至少約900%、至少約950%或至少約1000%。33.根據權利要求30至32中任一權利要求所述的方法，其中對於非內源經取代核酸的細胞內IP3聚集增加為對於所述野生型核酸的細胞內IP3聚集增加的至少約130%、至少約150%、至少約200%、至少約250%、至少約300%、至少約350%、至少約400%、至少約450%、至少約500%、至少約550%、至少約600%、至少約650%、至少約700%、至少約750%、至少約800%、至少約850%、至少約900%、至少約950%或至少約1000免表示非內源經取代核酸提供經編碼哺乳動物GPR22受體的增強表達。34.根據權利要求30至33中任一權利要求所述的方法，其中所述方法包含測量包含Gq(del)/Gi嵌合G蛋白的細胞中的細胞內IP3聚集。35.根據權利要求29所述的方法，其中所述方法包含測量細胞內Ca"含量。36.根據權利要求29所述的方法，其中所述方法包含測量細胞內cAMP含量。37.根據權利要求36所述的方法，其中所述方法包含測量細胞內cAMP聚集的減少。38.根據權利要求37所述的方法，其中對於所述非內源經取代核酸的細胞內cAMP聚集的減少為對於所述野生型核酸的細胞內cAMP聚集減少的至少約1.5倍、至少約2.0倍、至少約2.5倍、至少約3.0倍、至少約3.5倍、至少約4.0倍、至少約4.5倍或至少約5.0倍。39.根據權利要求36至38中任一權利要求所述的方法，其中對於所述非內源經取代核酸的細胞內cAMP聚集的減少為對於所述野生型核酸的細胞內cAMP聚集減少的至少約1.5倍、至少約2.0倍、至少約2.5倍、至少約3.0倍、至少約3.5倍、至少約4.0倍、至少約4.5倍或至少約5.0倍表示非內源經取代核酸提供經編碼哺乳動物GPR22受體的增強表達。40.根據權利要求36至39中任一權利要求所述的方法，其中所述方法包含測量包含信號增強子的細胞中的細胞內cAMP聚集。41.根據權利要求26所述的方法，其中所述比較是以包含測量穩定態GPR22受體多肽表達水平的方法來進行。42.根據權利要求26所述的方法，其中所述比較是以包含測量穩定態GPR22受體mRNA表達水平的方法來進行。43.—種經分離聚核苷酸，其包含編碼哺乳動物GPR22受體的非內源經取代核酸，其中所述非內源經取代核酸是根據權利要求1至42中任一權利要求所述的方法產生。44.根據權利要求43所述的經分離聚核苷酸，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。45.—種載體，其包含根據權利要求43或44所述的經分離聚核苷酸。46.根據權利要求45所述的載體，其中所述載體為表達載體且其中所述聚核苷酸可操作性地連接至啟動子。47.—種重組宿主細胞，其包含根據權利要求45所述的載體。48.—種重組宿主細胞，其包含根據權利要求46所述的載體。49.一種產生重組宿主細胞的方法，其包含(a)將根據權利要求46所述的表達載體轉染到真核宿主細胞中從而產生經轉染宿主細胞；和(b)在足以由所述表達載體表達所述哺乳動物GPR22受體的條件下培養所述經轉染宿主細胞。50.根據權利要求49所述的方法，其中所述宿主細胞為哺乳動物細胞。51.根據權利要求49所述的方法，其中所述宿主細胞為黑素細胞。52.根據權利要求49所述的方法，其中所述宿主細胞為酵母細胞。53.根據權利要求49至52中任一權利要求所述的方法，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。54.—種鑑別作為哺乳動物GPR22受體的調節劑的候選化合物的方法，所述方法包含以下步驟(a)使所述候選化合物與根據根據權利要求49至53中任一權利要求所述的方法產生的重組宿主細胞或其包含所述哺乳動物GPR22受體的膜接觸，其中所述哺乳動物GPR22受體偶聯到G蛋白；和(b)測定所述候選化合物抑制或刺激所述哺乳動物GPR22受體功能的能力；其中所述候選化合物抑制或刺激所述功能的能力表示所述候選化合物為所述哺乳動物GPR22受體的調節劑。55.根據權利要求54所述的方法，其中所述G蛋白為Gi。56.根據權利要求54所述的方法，其中所述G蛋白為Gq(del)/Gi嵌合G蛋白。57.根據權利要求54所述的方法，其中所述測定是以包含測量第二信使含量的方法來進行。58.根據權利要求54所述的方法，其中所述測定是以包含測量第二信使含量的方法進行，所述第二信使是選自由環AMP(cAMP)、環GMP(cGMP)、三磷酸肌醇(IP3)、甘油二酯(DAG)、Ca"和MAP激酶活性組成的群組。59.根據權利要求58所述的方法，其中所述方法包含測量細胞內IP3聚集含量。60.根據權利要求58所述的方法，其中所述方法包含測量細胞內Ca"含量。61.根據權利要求58所述的方法，其中所述方法包含測量細胞內cAMP含量。62.根據權利要求54至61中任一權利要求所述的方法，其中所述方法包含鑑別哺乳動物GPR22受體的激動劑、部分激動劑、反向激動劑或拮抗劑。63.根據權利要求62所述的方法，其中所述方法進一步包含將所述激動劑、部分激動齊U、反向激動劑或拮抗劑調配為藥品的步驟。64.根據權利要求54至61中任一權利要求所述的方法，其中所述方法包含鑑別哺乳動物GPR22受體的激動劑或部分激動劑。65.根據權利要求64所述的方法，其中所述方法進一步包含將所述激動劑或部分激動劑調配為藥品的步驟。66.根據權利要求54至65中任一權利要求所述的方法，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。67.—種鑑別作為哺乳動物GPR22受體的配體的候選化合物的方法，所述方法包含以下步驟，(a)使所述候選化合物與根據根據權利要求49至53中任一權利要求所述的方法產生的重組宿主細胞或其包含所述哺乳動物GPR22受體的膜接觸；和(b)測量所述化合物結合於所述哺乳動物GPR22受體的能力；其中所述結合表示所述候選化合物為所述哺乳動物GPR22受體的配體。68.根據權利要求67所述的方法，其中所述方法進一步包含將所述配體調配為藥品的步驟。69.根據權利要求67或68所述的方法，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。70.—種針對人類GPR22受體轉基因的非人類哺乳動物，其中所述人類GPR22受體是由根據權利要求43所述的聚核苷酸表達。71.根據權利要求70所述的非人類哺乳動物，其中所述非內源經取代核酸為SEQIDNO:3或SEQIDNO:7。72.—種使用根據權利要求70或71所述的轉基因非人類哺乳動物鑑別候選化合物是否具有預防或治療與哺乳動物GPR22受體相關的疾病或病症的功效的方法，其中該方法包含投與所述轉基因非人類哺乳動物所述候選化合物的步驟。73.—種使用根據權利要求70或71所述的轉基因非人類哺乳動物鑑別候選化合物對哺乳動物的心臟保護或神經保護是否具有功效的方法，其包含投與所述轉基因非人類哺乳動物所述候選化合物的步驟。74.根據權利要求72或請求項73所述的方法，其中所述候選化合物為所述人類GPR22受體的調節劑或配體。全文摘要本發明提供一種產生表達增強的GPR22核酸的方法以及提供經編碼GPR22多肽的增強表達的經取代GPR22核酸。在實施本方法中，通過鑑別GPR22胺基酸序列的編碼區的各種密碼子且取代核苷酸使得在不改變經編碼GPR22多肽的胺基酸序列的情況下增強表達來使編碼哺乳動物GPR22受體多肽的核酸(例如野生型核酸)表達增強。本發明也提供使用其篩檢GPR22調節劑的方法、組合物和試劑盒。文檔編號C12N15/09GK101287832SQ200680038124公開日2008年10月15日申請日期2006年10月12日優先權日2005年10月14日發明者廖王蓁申請人:艾尼納製藥公司