一種治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法

2023-05-28 11:51:56 2

專利名稱：一種治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥製劑的鑑別方法，特別是涉及一種治療或輔助治療腫瘤疾病 的中藥製劑的鑑別方法，屬於中藥製劑質量控制技術領域。
背景技術：
本發明一種治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑是我們新研製的中藥複方製劑， 主要用於氣血兩虛型腫瘤疾病的治療或輔助治療，或者是用於腫瘤放、化療以及術後體虛 引起的氣血兩虛證。為了控制該中藥製劑質量，我們對該中藥製劑進行了鑑別研究。中藥製劑的鑑別歷來就是難點，素有「丸散膏丹、神仙難辨」的說法。目前，中藥制 劑的鑑別方法主要有顯微鑑別法、一般的理化鑑別法(如中國藥典2010年版一部附錄IV 一般鑑別試驗)、紫外-可見分光光度法、紙色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜 法等；此外，還有指紋圖譜鑑別等。這些鑑別方法各有千秋，對一個中藥製劑究竟應該選擇 什麼樣的鑑別方法，需要反覆試驗研究和方法學驗證來選擇。如果選用了其中一種鑑別方 法，如薄層色譜法，需要研究其所用的固定相、對照物質等，需要研究展開劑、顯色劑，還需 要研究供試品溶液和對照物質溶液的製備方法等等，包含了供試品溶液的製備工藝、對照 物質及其製備工藝、固定相、展開劑、點樣量、展開溫度、顯色方法、檢視方法等。正因為這 樣，這些鑑別方法的科學性逐步得到了國際社會的認可，中藥製劑質量標準的現代化開始 逐步實現。薄層色譜法，簡稱TLC法，系將供試品溶液點於薄層板上，在展開容器內用展開劑 展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的對照物質按同法所得的色譜圖對比，用 於鑑別。薄層色譜法主要由固定相、展開劑、顯色劑等部分構成，由薄層板、點樣器、展開容 器、顯色裝置、檢視裝置等儀器與材料構成。薄層板最常用的固定相有矽膠G、矽膠GF254、矽 膠H、矽膠HF254、微晶纖維素等。鑑別方法的專屬性直接決定了該鑑別方法的價值，如果專屬性不強，容易發生假 陽性。目前，許多中藥製劑的鑑別方法專屬性不強，我國曾經發生的奶粉中摻入三聚氰胺事 件，未能及時檢驗出來，就是由於當時的鑑別方法專屬性不強，產生了假陽性。紫河車、熟地 黃、女貞子、天花粉為本發明製劑所含的藥味，本發明提供的鑑別方法，具有很強的專屬性。

發明內容
本發明的目的是提供一種治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，採用 薄層色譜法鑑別該中藥製劑中是否含有紫河車、熟地黃、女貞子、天花粉中的任一種、或者 任兩種、或者任三種、或者全部，該方法專屬性強，重現性、耐用性好，可用於該中藥製劑中 的相應藥味鑑別。本發明採用的技術方案如下
一種治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，其特徵在於所述中藥製劑中 包括紫河車、熟地黃、女貞子、天花粉四種，所述鑑別方法包括如下鑑別方法的任一種、或者任兩種、或者任三種、或者全部
(1)所述中藥製劑中紫河車的鑑別方法，是以紫河車對照藥材為對照的薄層色譜鑑別 方法，包括以下步驟
①供試品溶液的製備取所述中藥製劑，加三氯甲烷或二氯甲烷，超聲處理，濾過，濾液 濃縮，製成每1 mL含生藥量相當於紫河車0. 2 5g的溶液，作為供試品溶液；
②對照藥材溶液的製備取紫河車對照藥材，加三氯甲烷或二氯甲烷，超聲處理，濾過， 濾液濃縮，製成每1 mL含生藥量相當於紫河車0. 2 5g的溶液，作為對照藥材溶液；
③測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取對照藥材溶液 和供試品溶液各2 20yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯9 廣9 為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以5% 50%高氯酸溶液，在60 120°C加熱至斑點顯色清 晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；
(2)所述中藥製劑中熟地黃的鑑別方法，是以熟地黃對照藥材為對照的薄層色譜鑑別 方法，包括以下步驟
①供試品溶液的製備取所述中藥製劑，加水，溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心， 取上清液，濃縮，用乙酸乙酯振搖提取1 3次，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解， 製成每1 mL含生藥量相當於熟地黃2 20g的溶液，作為供試品溶液；
②對照藥材溶液的製備取熟地黃對照藥材，加水煎煮1 2次，用脫脂棉濾過，合併濾 液，濃縮，用乙酸乙酯振搖提取1 3次，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，製成每 1 mL含生藥量相當於熟地黃2 20g的溶液，作為對照藥材溶液；
③測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取對照藥材溶液 和供試品溶液各2 20 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以鄰二甲苯-乙酸乙酯1:1為 展開劑，其中鄰二甲苯可替換為苯，或甲苯，或間二甲苯，或對二甲苯，或鄰二甲苯、間二甲 苯、對二甲苯三種按任意比例的混合物，展開，取出，晾乾，噴以0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙 醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；
其中0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液是取2，4- 二硝基苯胼lg，加無水乙醇1000 mL使溶解，再緩緩加入濃度為36% 38%的鹽酸10mL，搖勻，即得；
(3)所述中藥製劑中女貞子的鑑別方法，是以女貞子對照藥材和齊墩果酸對照品為對 照的薄層色譜鑑別方法，包括以下步驟
①供試品溶液的製備取所述中藥製劑，加三氯甲烷或二氯甲烷，提取1 3次，合併三 氯甲烷液或二氯甲烷液，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇，或者殘渣加無水乙醇-三氯甲烷3 2 混合溶液，在5 50°C，製成每1 mL含生藥量相當於女貞子0. 2 5g的溶液，作為供試品 溶液；
②對照藥材溶液的製備取女貞子對照藥材，加三氯甲烷或二氯甲烷，超聲處理，濾 過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇，或者殘渣加無水乙醇-三氯甲烷3 2混合溶液，在5 50°C，制 成每1 mL含生藥量相當於女貞子0. 2 5g的溶液，作為對照藥材溶液；
③對照品溶液的製備取齊墩果酸對照品，加甲醇或95%乙醇，在5 50°C，配製成每 ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；
④測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，在5 50°C，吸取供 試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各2 20μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸7 15 2 7 1 5 :0 0.5、或者以三氯甲烷-甲 醇-甲酸20 40 :1 :0. 3 1. 1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以m 20%硫酸乙醇溶 液，或者噴以1% 10%磷鉬酸乙醇溶液，在60 120°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜 中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；
如果製劑中女貞子的含量較低，製備供試品溶液前，可以對該製劑進行預處理，以達到 更好的鑑別效果，具體操作為取所述中藥製劑，加0.洲 0. 5%的氫氧化鈉溶液，溫熱使充 分溶散，加熱至沸，放冷，濾過或離心，取濾液或上清液，用鹽酸或硫酸調節PH值至1 2 ； 如果製劑中女貞子含量高，一般不需要進行預處理；
(4)所述中藥製劑中天花粉的鑑別方法，是以天花粉對照藥材和胍氨酸對照品為對照 的薄層色譜鑑別方法，包括以下步驟
①供試品溶液的製備取所述中藥製劑，加30% 100%乙醇，超聲處理，濾過，濾液蒸 幹，加50%乙醇使溶解，濾過，得濾液，製成每1 mL含生藥量相當於天花粉0. 01 Ig的溶 液，作為供試品溶液；
②對照藥材溶液的製備取天花粉對照藥材，加50%乙醇，超聲處理，濾過，得濾液， 製成每1 mL含生藥量相當於天花粉0. 01 Ig的溶液，作為對照藥材溶液；
③對照品溶液的製備取胍氨酸對照品，加50%乙醇配製成每ImL含Img的溶液，作為 對照品溶液；
④測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對 照藥材溶液和對照品溶液各1 20 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正丁醇-無水 乙醇-冰醋酸-水7 15 0 2 :2 6 :1 5、正丁醇-甲酸-水15 25 3 :2、正丁 醇-丙酮-水2 5 2 :1中的任一種為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1% 10%茚三 酮乙醇溶液，在60 120°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。所述中藥製劑是由紫河車、黃芪、熟地黃、黨參、白朮、當歸、甘草、女貞子、黃精、甜 地丁或紫花地丁、天花粉十一味中藥組成，紫河車粉碎成粉末，其餘十味藥材溶媒提取，制 成片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑各種適宜的劑型。進一步地，所述中藥製劑的處方按重量配比計為紫河車4 7、黃芪20 50、熟 地黃10 30、黨參5 20、白朮5 20、當歸5 15、甘草5 15、女貞子5 20、黃精 5 15、甜地丁或紫花地丁 5 20、天花粉5 20。所述中藥製劑的製備方法按照上述重量份數，(1)紫河車粉碎成8(Γ100目的粉 末，備用；(2)黃芪、熟地黃、黨參、白朮、當歸、甘草、女貞子、黃精、甜地丁或紫花地丁、天花 粉十味藥材加水煎煮1 3次，每次1 3小時，製成稠膏或幹膏；(3)向稠膏或幹膏中加 入紫河車粉末，製成適宜的劑型。更進一步地，所述中藥製劑中每克含生藥量相當於紫河車0. 15 0. 18g、熟地黃 0. 45 0. 55g、女負子 0. 25 0. 35g、天花粉 0. 25 0. 35g。優選的技術方案為所述鑑別方法包括如下鑑別方法的任一種、或者任兩種、或者 任三種、或者全部
(1)所述中藥製劑中紫河車的鑑別方法，是以紫河車對照藥材為對照的薄層色譜鑑別 方法，包括以下步驟
9①供試品溶液的製備取所述中藥製劑3 10g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 30mL，超聲 處理5 45分鐘，濾過，濃縮濾液，製成每1 mL含生藥量相當於紫河車0. 2 5g的溶液， 作為供試品溶液；
②對照藥材溶液的製備取紫河車對照藥材0.5 2g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 30mL,超聲處理5 45分鐘，濾過，濃縮濾液，製成每1 mL含生藥量相當於紫河車0. 2 5g 的溶液，作為對照藥材溶液；
③測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取對照藥材溶液 和供試品溶液各5 15yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯9 廣9 為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以5 50%的高氯酸溶液，在6(T12(TC加熱至斑點顯色清晰， 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；
(2)所述中藥製劑中熟地黃的鑑別方法，是以熟地黃對照藥材為對照的薄層色譜鑑別 方法，包括以下步驟
①供試品溶液的製備取所述中藥製劑6 15g，加水100 200mL，溫熱使充分溶散， 加熱至沸，放冷，離心，取上清液，濃縮至30 IOOmL,用乙酸乙酯振搖提取1 3次，每次 20 30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，製成每1 mL含生藥量相當於熟地黃 2 20g的溶液，作為供試品溶液；
②對照藥材溶液的製備取熟地黃對照藥材2 10g，加水煎煮廣2次，每次加水50 150mL,每次煎煮0. 5 2小時，用脫脂棉濾過，合併濾液，濃縮至30 IOOmL,用乙酸乙酯振 搖提取1 3次，每次20 30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，製成每1 mL 含生藥量相當於熟地黃2 20g的溶液，作為對照藥材溶液；
③測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取對照藥材溶液 和供試品溶液各5 15 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以鄰二甲苯-乙酸乙酯1:1為 展開劑，其中鄰二甲苯可替換為苯，或甲苯，或間二甲苯，或對二甲苯，或鄰二甲苯、間二甲 苯、對二甲苯三種按任意比例的混合物，展開，取出，晾乾，噴以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙 醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；
(3)所述中藥製劑中女貞子的鑑別方法，是以女貞子對照藥材和齊墩果酸對照品為對 照的薄層色譜鑑別方法，包括以下步驟
①供試品溶液的製備取所述中藥製劑1.5 12g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 IOOmL,超聲處理5 45分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇或者加無水乙醇-三氯甲烷按3 2混合的溶液，在10 50°C使溶解，製成每1 mL含生藥量相當於女貞子0. 2 5g的溶液， 作為供試品溶液；
②對照藥材溶液的製備取女貞子對照藥材0.5g,加三氯甲烷或二氯甲烷20mL，超聲 處理5 45分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇或者加無水乙醇-三氯甲烷按3 :2混合的溶 液，在10 50°C使溶解，製成1 mL含生藥量相當於女貞子0. 2 5g的溶液，作為對照藥材 溶液；
③對照品溶液的製備取齊墩果酸對照品，在10 50°C，加甲醇或95%乙醇配製成每 ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；
④測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，在10 50°C，吸取 供試品溶液5 15 μ L、對照藥材溶液和對照品溶液各2 5 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸7 15 2 7 1 5:0 0.5、或者以三 氯甲烷-甲醇-甲酸20 40 1 :0. 3 1. 1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以2 20%硫酸 乙醇溶液，或者噴以廣10%磷鉬酸乙醇溶液，在60 120°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色 譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；
(4)所述中藥製劑中天花粉的鑑別方法，是以天花粉對照藥材和胍氨酸對照品為對照 的薄層色譜鑑別方法，包括以下步驟
①供試品溶液的製備取所述中藥製劑6 12g，加30% 100%乙醇20 50mL，超聲 處理5 45分鐘，濾過，濾液蒸乾，加50%乙醇使溶解，濾過，製成每1 mL含生藥量相當於 天花粉0. 01 Ig的溶液，作為供試品溶液；
②對照藥材溶液的製備取天花粉對照藥材2g，加50%乙醇，超聲處理5 45分鐘，濾 過，製成每1 mL含生藥量相當於天花粉0. 01 Ig的溶液，作為對照藥材溶液；
③對照品溶液的製備取胍氨酸對照品，加50%乙醇配製成每ImL含Img的溶液，作為 對照品溶液；
④測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5 15 μ L，對照藥材溶液和對照品溶液各1 5yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正丁 醇-無水乙醇-冰醋酸-水7 15 0 2 :2 6 :1 5、正丁醇-甲酸-水15 25 3 2、正丁醇-丙酮-水2 5 2 :1中的任一種為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以廣10%的 茚三酮乙醇溶液，在6(T12(TC加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品 色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。 更優選的技術方案為所述鑑別方法包括如下鑑別方法的任一種、或者任兩種、或 者任三種、或者全部
(1)所述中藥製劑中紫河車的鑑別方法，包括以下步驟
取所述中藥製劑6g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為 供試品溶液；另取紫河車對照藥材1 g，同法製成對照藥材溶液；照中國藥典2010年版一部 附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以 正己烷-乙酸乙酯9 5為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以20%高氯酸溶液，在105°C加熱至 斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；
(2)所述中藥製劑中熟地黃的鑑別方法，包括以下步驟
取所述中藥製劑10g，加水150mL，溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心，取上清液， 濃縮至IOOmL,用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇 0. 5mL使溶解，作為供試品溶液；另取熟地黃對照藥材5g，加水煎煮2次，每次加水80mL，第 一次2小時，第二次1小時，用脫脂棉濾過，合併濾液，濃縮至IOOmL,用乙酸乙酯振搖提取 2次，每次30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5mL使溶解，作為對照藥材溶液；照 中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ L、對照藥材溶液 5yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以鄰二甲苯-乙酸乙酯1 1為展開劑，展開，取出， 晾乾，噴以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位 置上，顯相同顏色的主斑點；
(3)所述中藥製劑中女貞子的鑑別方法，包括以下步驟
取所述中藥製劑6g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇lmL，在35 40°C使溶解，作為供試品溶液；另取女貞子對照藥材0. 5g，同法製成對照藥材 溶液；再取齊墩果酸對照品，加甲醇在35 40°C配製成每ImL含Img的溶液，作為對照品 溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，在35 40°C，吸取供試品溶 液l(Tl5yL、對照藥材溶液和對照品溶液各5yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以環己 烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸12. 5 5 3 :0. 1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫 酸乙醇溶液，在110°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品 色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；
(4)所述中藥製劑中天花粉的鑑別方法，包括以下步驟
取所述中藥製劑10g，加50%乙醇30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，加50%乙 醇IOmL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取天花粉對照藥材2g，加50%乙醇20mL， 超聲處理30分鐘，濾過，取濾液作為對照藥材溶液；再取胍氨酸對照品，加50%乙醇製成每 ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試 驗，吸取供試品溶液10 μ L、對照藥材溶液和對照品溶液各2 μ L，分別點於同一矽膠G薄層 板上，以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水8 2 :4:3為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以洲 茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照 品色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。上述涉及的技術方案中，關於女貞子的鑑別方法中，可採取單獨以女貞子對照藥 材為對照或者單獨以齊墩果酸對照品為對照的薄層色譜鑑別方法；關於天花粉的鑑別方法 中，可採取單獨以天花粉對照藥材為對照或者單獨以胍氨酸對照品為對照的薄層色譜鑑別 方法。本發明提供的中藥製劑的鑑別方法，對照藥材為主的薄層色譜鑑別法是一條切 實可行的、簡便的、快速的、可控的、經濟的、科學的、現代化的鑑別方法。本發明通過對紫 外-可見分光光度法、紙色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法等多種方法比較，篩選出了 以對照藥材、化學對照品為對照的矽膠G薄層色譜法，來鑑別本發明中藥製劑中的紫河車、 熟地黃、女貞子、天花粉的方法。紫河車、熟地黃、女貞子、天花粉是該中藥製劑的主要藥味， 本發明提供的鑑別方法專屬性強，重現性、耐用性好，可以較好地控制本發明中藥製劑的質 量。
具體實施例方式實施例1
處方紫河車50g、黃芪300g、熟地黃150g、黨參100g、白朮100g、當歸75g、甘草 75g、女貞子100g、黃精75g、甜地丁 100g、天花粉IOOgo製法以上十一味，紫河車粉碎成8(Γ100目的粉末，其餘黃芪等十味加水煎煮兩 次，第一次2小時，第二次1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 32 1. 35 (50°C)的稠膏，加入紫河車粉末，混勻，制粒，裝入膠囊，每粒裝0. 3g，製成1000粒，即得。鑑別該膠囊劑的鑑別包括如下鑑別方法的任一種、或者任兩種、或者任三種、或 者全部，但不僅限於以下鑑別方法
(1)取本品內容物6g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1 mL，作 為供試品溶液。另取紫河車對照藥材lg，同法製成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ L，分別點於同一矽膠G薄層 板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 5)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以20%高氯酸溶液，在 105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色 的主斑點。(2)取本品內容物10g，加水150mL，溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心，取上 清液，濃縮至IOOmL,用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲 醇0. 5mL使溶解，作為供試品溶液。另取熟地黃對照藥材5g，加水煎煮2次，每次加水80mL， 第一次2小時，第二次1小時，用脫脂棉濾過，合併濾液，濃縮至lOOmL，用乙酸乙酯振搖提取 2次，每次30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5mL使溶解，作為對照藥材溶液。照 薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B )試驗，吸取供試品溶液10 μ L、對照藥材溶 液5yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以鄰二甲苯-乙酸乙酯(1 1)為展開劑，展開，取 出，晾乾，噴以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應 的位置上，顯相同顏色的主斑點。其中0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液配製方法取2，4-二硝基苯胼lg，加無水 乙醇1000 mL使溶解，再緩緩加入濃度為36% 38%的鹽酸10mL，搖勻，即得。(3)取上述(1)項下的供試品溶液，蒸乾，殘渣加甲醇lmL，在35 40°C使溶解，作 為供試品溶液。另取女貞子對照藥材0. 5g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液 蒸乾，殘渣加甲醇lmL，在35 40°C使溶解，作為對照藥材溶液。再取齊墩果酸對照品，加 甲醇，在35 40°C配製成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥 典2010年版一部附錄VI B )試驗，在35 40°C，吸取供試品溶液10 μ L、對照藥材溶液和 對照品溶液各5 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸( 12.5 5 3 :0. 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加熱至 斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏 色的主斑點。(4)取本品內容物10g，加50%乙醇30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，加 50%乙醇IOmL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取天花粉對照藥材2g，加50%乙 醇20mL，超聲處理30分鐘，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。再取胍氨酸對照品，加50%乙 醇，配製成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部 附錄VI B )試驗，吸取供試品溶液10 μ L、對照藥材溶液和對照品溶液各2 μ L，分別點於同 一矽膠G薄層板上，以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水(8 243)為展開劑，展開，取出， 晾乾，噴以洲茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照 藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。實施例2
處方紫河車50g、黃芪300g、熟地黃150g、黨參100g、白朮100g、當歸80g、甘草 80g、女貞子80g、黃精100g、紫花地丁 100g、天花粉IOOgo製法以上十一味，紫河車粉碎成8(Γ100目的粉末，其餘黃芪等十味加水煎煮兩 次，第一次2小時，第二次1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏，進一步乾燥成幹膏，再 粉碎成8(Γ100目的粉末，加入紫河車粉末，混勻，制粒，壓片，每片重0. 3g，包薄膜衣，製成 1000片，即得。
鑑別該片劑的鑑別包括如下鑑別方法的任一種、或者任兩種、或者任三種、或者 全部，但不僅限於以下鑑別方法
(1)取本品研碎的粉末6g，加三氯甲烷25mL，超聲處理20分鐘，濾過，殘渣備用，濾液濃 縮至0. 5mL，作為供試品溶液。另取紫河車對照藥材1 g，同法製成對照藥材溶液。照薄層色 譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各15 μ L，分別點於同一 矽膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 4)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以20%高氯 酸溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯 相同顏色的主斑點。(2)取本品研碎的粉末6g，加水IOOmL,溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心，取 上清液，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5mL使 溶解，作為供試品溶液。另取熟地黃對照藥材4g，加水60mL，煎煮30分鐘，用脫脂棉濾過， 濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5mL使溶 解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取供 試品溶液15 μ L、對照藥材溶液5 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以二甲苯-乙酸乙酯 (1 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液。供試品色譜 中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。其中①0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液配製方法取2，4_ 二硝基苯胼lg，加 無水乙醇1000 mL使溶解，再緩緩加入濃度為36% 38%的鹽酸10mL，搖勻，即得；②二甲 苯為鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯三種異構體的混合物。(3)取本品研碎的粉末1.5g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸 幹，殘渣加甲醇lmL，在30 35°C使溶解，作為供試品溶液。另取女貞子對照藥材0. 5g，同 法製成對照藥材溶液。再取齊墩果酸對照品，加甲醇，在30 35°C配製成每ImL含Img的 溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，在30 35°C，吸取供試品溶液15μ L、對照藥材溶液和對照品溶液各4μ L，分別點於同一矽膠G薄 層板上，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸(12.5 5 3:0.1)為展開劑，展開，取出， 晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照 藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。(4)取上述(1)項下備用的殘渣，加60%乙醇30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液 蒸乾，加50%乙醇IOmL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取天花粉對照藥材2g，加 50%乙醇20mL，超聲處理30分鐘，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。再取胍氨酸對照品，加 50%乙醇，配製成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年 版一部附錄VI B )試驗，吸取供試品溶液15 μ L、對照藥材溶液和對照品溶液各2 μ L，分別 點於同一矽膠G薄層板上，以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水(8 253)為展開劑，展 開，取出，晾乾，噴以洲茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中， 在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。實施例3
處方紫河車50g、黃芪300g、熟地黃150g、黨參100g、白朮100g、當歸75g、甘草 75g、女貞子100g、黃精75g、紫花地丁 100g、天花粉IOOgo製法以上十一味，紫河車粉碎成8(Γ100目的粉末，其餘黃芪等十味加水煎煮兩次，第一次2小時，第二次1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 32 1. 35 (50°C)的稠膏，加入紫河車粉末，混勻，制丸，乾燥，打光，製成2000粒濃縮丸，每粒重 0. 15g，即得。鑑別該濃縮丸的鑑別包括如下鑑別方法的任一種、或者任兩種、或者任三種、或 者全部，但不局限於以下鑑別方法
(1)取本品研碎的粉末6g，加二氯甲烷30mL，超聲處理25分鐘，濾過，濾液濃縮至lmL， 作為供試品溶液。另取紫河車對照藥材lg，同法製成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國 藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點於同一矽膠G薄層 板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 3)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以20%高氯酸溶液，在 105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色 的主斑點。(2)取本品研碎的粉末6g，加水IOOmL,溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心，取 上清液，濃縮至40mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加 甲醇ImL使溶解，作為供試品溶液。另取熟地黃對照藥材4g，加水60mL，煎煮30分鐘，用脫 脂棉濾過，濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL,合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇 ImL使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗， 吸取供試品溶液10 μ L、對照藥材溶液5 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以甲苯-乙酸 乙酯(1 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以0.1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液。供試品 色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。其中0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液配製方法取2，4-二硝基苯胼lg，加無水 乙醇1000 mL使溶解，再緩緩加入濃度為36% 38%的鹽酸10mL，搖勻，即得。(3)取本品研碎的粉末10g，加三氯甲烷30mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸乾， 殘渣加甲醇lmL，在25 30°C使溶解，作為供試品溶液。另取女貞子對照藥材0. 5g，同法制 成對照藥材溶液。再取齊墩果酸對照品，加甲醇，在25 30°C配製成每ImL含Img的溶液， 作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B )試驗，在25 30°C， 吸取供試品溶液15 μ L、對照藥材溶液2 μ L、對照品溶液5 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板 上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(25 1 :1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶 液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應 的位置上，顯相同顏色的主斑點。(4)取本品研碎的粉末12g，加70%乙醇50mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸乾， 加50%乙醇5mL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取天花粉對照藥材2g，加50%乙 醇20mL，超聲處理30分鐘，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。再取胍氨酸對照品，加50%乙 醇，配製成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部 附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液5 μ L、對照藥材溶液和對照品溶液各2 μ L，分別點於同一 矽膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(13 3:4)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以洲 茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照 品色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。實施例4
處方紫河車50g、黃芪300g、熟地黃150g、黨參100g、白朮100g、當歸75g、甘草75g、女貞子100g、黃精75g、甜地丁 100g、天花粉IOOgo製法以上十一味，紫河車粉碎成8(Γ100目的粉末，其餘黃芪等十味加水煎煮兩 次，第一次2小時，第二次1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至一半量，加入相同容量的95% 乙醇，2 10°C放置12小時，過濾，濾液回收乙醇後濃縮至相對密度為1. 29 1. 31(50°C) 的稠膏，加入紫河車粉末，混勻，制粒，裝入膠囊，每粒裝0. 3g，製成1000粒，即得。鑑別該膠囊劑的鑑別包括如下鑑別方法的任一種、或者全部，但不僅限於以下鑑 別方法
(1)取本品內容物12g，加二氯甲烷IOOmL,超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至1 mL，蒸 幹，殘渣加無水乙醇-三氯甲烷按3 2混合的溶液lmL，在20 25°C使溶解，作為供試品溶 液。另取女貞子對照藥材lg，同法製成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版 一部附錄VI B )試驗，在20 25°C，吸取供試品溶液10 μ L、對照藥材溶液5 μ L，分別點於 同一矽膠G薄層板上，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯(10:4 2.5)為展開劑，展開，取出，晾 幹，噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，在105°C熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材 色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。(2)取本品內容物10g，加30%乙醇20mL，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸乾，加50% 乙醇IOmL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取胍氨酸對照品，加50%乙醇，配製成每 ImL含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B )試 驗，吸取供試品溶液10 μ L、對照品溶液2 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正丁醇-丙 酮-水G 2 :1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以洲茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至 斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。實施例5
按實施例1膠囊劑的處方和製法製備三批膠囊劑進行方法學驗證 (1)紫河車鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取紫河車對照藥材ι g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾 過，濾液濃縮至1 mL，作為對照藥材溶液。供試品溶液的製備取膠囊內容物6g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過， 濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。依此法製備三批膠囊劑的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按膠囊處方比例及工藝製備缺紫河車的陰性對照樣品，取 陰性對照樣品6g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為陰性對 照溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B )試驗，吸取對照藥材 溶液、陰性對照溶液和三批不同批次膠囊的供試品溶液各10μ L，分別點於同一矽膠G薄層 板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 5)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以20%高氯酸溶液，在 105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主 斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，不顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該膠囊中紫河車的鑑別。(2)熟地黃鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取熟地黃對照藥材5g，加水煎煮2次，每次加水80mL，第一次2小時，第二次1小時，用脫脂棉濾過，合併濾液濃縮至IOOmL,用乙酸乙酯振搖提取2次，每次 30mL,合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5mL使溶解，作為對照藥材溶液。供試品溶液的製備取膠囊內容物10g，加水150mL，溫熱使充分溶散，加熱至沸， 放冷，離心(2000轉)5分鐘，取上清液，濃縮至IOOmL,用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30mL， 合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5mL使溶解，作為供試品溶液。依此法製備三批膠囊 劑的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按膠囊處方比例及工藝製備缺熟地黃的陰性對照樣品，取 陰性對照樣品10g，加水150mL，溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心(2000轉)5分鐘，取 上清液，濃縮至IOOmL,用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加 甲醇0. 5mL使溶解，作為陰性對照溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取對照藥 材溶液5 μ L、陰性對照溶液和三批不同批次膠囊的供試品溶液各10 μ L，分別點於同一矽 膠G薄層板上，以鄰二甲苯-乙酸乙酯(1 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以0.1%的 2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液。其中0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液配製方法取2，4- 二 硝基苯胼lg，加無水乙醇1000 mL使溶解，再緩緩加入濃度為36% 38%的鹽酸10mL，搖勻， 即得。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主 斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，不顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該膠囊中熟地黃的鑑別。(3)女貞子鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取女貞子對照藥材0. 5g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾 過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇lmL，35 40°C使溶解，作為對照藥材溶液。對照品溶液的製備取齊墩果酸對照品，加甲醇，在35 40°C配製成每ImL含Img 的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的製備取膠囊內容物6g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾 過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇lmL，35 40°C使溶解，作為供試品溶液。依此法製備三批膠囊劑 的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按膠囊處方比例及工藝製備缺女貞子的陰性對照樣品，取 陰性對照樣品6g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇lmL， 35 40°C使溶解，作為陰性對照溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，在35 40°C， 吸取對照藥材溶液和對照品溶液各5 μ L、陰性對照溶液和三批不同批次膠囊的供試品 溶液各10yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸( 12.5 5 3 :0. 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加熱至 斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯 相同顏色的主斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，不 顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該膠囊中女貞子的鑑別。
(4)天花粉鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取天花粉對照藥材2g，加50%乙醇20mL，超聲處理30分鐘，濾 過，取濾液作為對照藥材溶液。對照品溶液的製備取胍氨酸對照品，加50%乙醇，配製成每ImL含Img的溶液，作 為對照品溶液。供試品溶液的製備取膠囊內容物10g，加50%乙醇溶液20mL，超聲處理30分鐘， 濾過，濾液蒸乾，加50%乙醇IOmL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。依此法製備三批 膠囊劑的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按膠囊處方比例及工藝製備缺天花粉的陰性對照樣品，取 陰性對照樣品10g，加50%乙醇20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，加50%乙醇IOmL 使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B )試驗，吸取對照藥材 溶液和對照品溶液各2 μ L、陰性對照溶液和三批不同批次膠囊的供試品溶液各10 μ L，分 別點於同一矽膠G薄層板上，以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水(8 2:4:3)為展開劑，展 開，取出，晾乾，噴以洲茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯 相同顏色的主斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，不 顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該膠囊中天花粉的鑑別。本發明中提到的其他情形的鑑別方法，也進行了上述的相應的方法學驗證，證明 其他情形的鑑別方法同樣專屬性強、重複性好，可用於相應的鑑別。實施例6
按實施例2片劑的處方和製法製備三批片劑進行方法學驗證 (1)紫河車鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取紫河車對照藥材1 g，加三氯甲烷25mL，超聲處理20分鐘，濾 過，濾液濃縮至0. 5mL，作為對照藥材溶液。供試品溶液的製備取本品研碎的粉末6g，加三氯甲烷25mL，超聲處理20分鐘，濾 過，濾液濃縮至0. 5mL,作為供試品溶液。依此法製備三批片劑的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按實施例2片劑處方比例及工藝製備缺紫河車的陰性對照 樣品。取陰性對照樣品6g，加三氯甲烷25mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至0. 5mL,作 為陰性對照溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B )試驗，吸取對照藥材 溶液、陰性對照溶液和三批不同批次片劑的供試品溶液各15μ L，分別點於同一矽膠G薄層 板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 4)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以20%高氯酸溶液，在 105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主 斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，不顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該片劑中紫河車的鑑別。(2)熟地黃鑑別的方法學驗證對照藥材溶液的製備取熟地黃對照藥材4g，加水60mL煎煮30分鐘，用脫脂棉濾過， 用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5mL使溶解，作 為對照藥材溶液。供試品溶液的製備取本品研碎的粉末6g，加水IOOmL,溫熱使充分溶散，加熱至 沸，放冷，離心，取上清液，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘 渣加甲醇0. 5mL使溶解，作為供試品溶液。依此法製備三批片劑的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按實施例2片劑處方比例及工藝製備缺熟地黃的陰性對照 樣品。取陰性對照樣品研碎的粉末6g，加水IOOmL,溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心， 取上清液，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5mL 使溶解，作為陰性對照溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B )試驗，吸取陰性對照 溶液和三批不同批次片劑的供試品溶液各15 μ L、對照藥材溶液5 μ L，分別點於同一矽膠 G薄層板上，以二甲苯-乙酸乙酯(1 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以0.1%的2，4-二 硝基苯胼乙醇溶液。其中①0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液配製方法取2，4_ 二硝基苯胼lg，加 無水乙醇1000 mL使溶解，再緩緩加入濃度為36% 38%的鹽酸10mL，搖勻，即得；②二甲 苯為鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯三種異構體的混合物。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主 斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，不顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該片劑中熟地黃的鑑別。(3)女貞子鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取女貞子對照藥材0. 5g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾 過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇lmL，在30 35°C使溶解，作為對照藥材溶液。對照品溶液的製備取齊墩果酸對照品，加甲醇，在30 35°C配製成每ImL含Img 的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的製備取本品研碎的粉末1. 5g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘， 濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇lmL，在30 35°C使溶解，作為供試品溶液。依此法製備三批 片劑的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按實施例2片劑處方比例及工藝製備缺女貞子的陰性對照 樣品。取陰性對照樣品研碎的粉末1.5g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸 幹，殘渣加甲醇lmL，在30 35°C使溶解，作為陰性對照溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，在30 35°C， 吸取陰性對照溶液和三批不同批次片劑的供試品溶液各15yL、對照藥材溶液和對照 品溶液各4yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸( 12.5 5 3 :0. 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加熱至 斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯 相同顏色的主斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，不 顯示斑點。
19
結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該片劑中女貞子的鑑別。(4)天花粉鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取天花粉對照藥材2g，加50%乙醇20mL，超聲處理30分鐘，濾 過，取續濾液作為對照藥材溶液。對照品溶液的製備取胍氨酸對照品，加50%乙醇，配製成每ImL含Img的溶液，作 為對照品溶液。供試品溶液的製備取本品研碎的粉末6g，加60%乙醇30mL，超聲處理30分鐘，濾 過，濾液蒸乾，加50%乙醇IOmL使溶解，濾過，取續濾液作為供試品溶液。依此法製備三批 片劑的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按實施例2片劑處方比例及工藝製備缺天花粉的陰性對照 樣品。取陰性對照樣品研碎的粉末6g，加60%乙醇30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾， 加50%乙醇IOmL使溶解，濾過，取續濾液作為供試品溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B )試驗，吸取陰性對照 溶液和三批不同批次片劑的供試品溶液各15 μ L、對照藥材溶液和對照品溶液各2 μ L，分 別點於同一矽膠G薄層板上，以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水(8 2:5:3)為展開劑，展 開，取出，晾乾，噴以洲茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯 相同顏色的主斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，不 顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該片劑中天花粉的鑑別。實施例7
按實施例3濃縮丸的處方和製法製備三批濃縮丸進行方法學驗證 (1)紫河車鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取紫河車對照藥材1 g，加二氯甲烷30mL，超聲處理25分鐘，濾 過，濾液濃縮至lmL，作為對照藥材溶液。供試品溶液的製備取本品研碎的粉末6g，加二氯甲烷30mL，超聲處理25分鐘，濾 過，濾液濃縮至lmL，作為供試品溶液。依此法製備三批濃縮丸的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按實施例3濃縮丸處方比例及工藝製備缺紫河車的陰性對 照樣品。取陰性對照樣品研碎的粉末6g，加二氯甲烷30mL，超聲處理25分鐘，濾過，濾液濃 縮至lmL，作為陰性對照溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B )試驗，吸取對照藥材 溶液、陰性對照溶液和三批不同批次濃縮丸的供試品溶液各5μ L，分別點於同一矽膠G薄 層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 3)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以20%高氯酸溶液，在 105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主 斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，不顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該濃縮丸中紫河車的鑑別。(2)熟地黃鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取熟地黃對照藥材4g，加水60mL，煎煮30分鐘，用脫脂棉濾過，濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇ImL使溶解， 作為對照藥材溶液。供試品溶液的製備取本品研碎的粉末6g，加水IOOmL,溫熱使充分溶散，加熱至 沸，放冷，離心，取上清液，濃縮至40mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合併乙酸乙酯 液，蒸乾，殘渣加甲醇ImL使溶解，作為供試品溶液。依此法製備三批濃縮丸的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按實施例3濃縮丸處方比例及工藝製備缺熟地黃的陰性對 照樣品。取陰性對照樣品研碎的粉末6g，加水IOOmL,溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離 心，取上清液，濃縮至40mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘 渣加甲醇ImL使溶解，作為陰性對照溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B )試驗，吸取陰性對照 溶液和三批不同批次濃縮丸的供試品溶液各10 μ L、對照藥材溶液5 μ L，分別點於同一矽 膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯(1 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以0.1%的2，4-二 硝基苯胼乙醇溶液。其中0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液配製方法取2，4-二硝基苯胼lg，加無水 乙醇1000 mL使溶解，再緩緩加入濃度為36% 38%的鹽酸10mL，搖勻，即得。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主 斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，不顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該濃縮丸中熟地黃的鑑別。(3)女貞子鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取女貞子對照藥材0. 5g，加三氯甲烷30mL，超聲處理20分鐘，濾 過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇lmL，在25 30°C使溶解，作為對照藥材溶液。對照品溶液的製備取齊墩果酸對照品，加甲醇，在25 30°C配製成每ImL含Img 的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的製備取本品研碎的粉末10g，加三氯甲烷30mL，超聲處理20分鐘， 濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇lmL，在25 30°C使溶解，作為供試品溶液。依此法製備三批 濃縮丸的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按實施例3濃縮丸處方比例及工藝製備缺女貞子的陰性對 照樣品。取陰性對照樣品研碎的粉末10g，加三氯甲烷30mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液 蒸乾，殘渣加甲醇lmL，在25 30°C使溶解，作為陰性對照溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，在25 30°C， 吸取陰性對照溶液和三批不同批次濃縮丸的供試品溶液各15 μ L、對照藥材溶液2 μ L、對 照品溶液5 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(25 1 :1)為展開 劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯 相同顏色的主斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，不 顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該濃縮丸中女貞子的鑑別。(4)天花粉鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取天花粉對照藥材2g，加50%乙醇20mL，超聲處理30分鐘，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。對照品溶液的製備取胍氨酸對照品，加50%乙醇，配製製成每ImL含Img的溶液， 作為對照品溶液。供試品溶液的製備取本品研碎的粉末12g，加70%乙醇50mL，超聲處理20分鐘， 濾過，濾液蒸乾，加50%乙醇5mL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。依此法製備三批濃 縮丸的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按實施例3濃縮丸處方比例及工藝製備缺天花粉的陰性對 照樣品。取陰性對照樣品研碎的粉末12g，加70%乙醇50mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液 蒸乾，加50%乙醇5mL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取陰性對照 溶液和三批不同批次濃縮丸的供試品溶液各5 μ L、對照藥材溶液和對照品溶液各2 μ L，分 別點於同一矽膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(13 34)為展開劑，展開，取出，晾 幹，噴以2%茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯 相同顏色的主斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，不 顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該濃縮丸中天花粉的鑑別。實施例8
按實施例4膠囊劑的處方和製法製備三批膠囊劑進行方法學驗證 (1)女貞子鑑別的方法學驗證
對照藥材溶液的製備取女貞子對照藥材lg，加二氯甲烷IOOmL,超聲處理10分鐘，濾 過，濾液濃縮至lmL，蒸乾，殘渣加無水乙醇-三氯甲烷按3 :2混合的溶液lmL，在20 25°C 使溶解，作為對照藥材溶液。供試品溶液的製備取本品內容物12g，加二氯甲烷IOOmL,超聲處理10分鐘，濾 過，濾液濃縮至lmL，蒸乾，殘渣加無水乙醇-三氯甲烷按3 :2混合的溶液lmL，在20 25°C 使溶解，作為供試品溶液。依此法製備三批膠囊劑的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按實施例4膠囊處方比例及工藝製備缺女貞子的陰性對照 樣品。取陰性對照樣品內容物12g，加二氯甲烷IOOmL,超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至 1 mL，蒸乾，殘渣加無水乙醇-三氯甲烷按3 2混合的溶液lmL，在20 25°C使溶解，作為 陰性對照溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，在20 25°C， 吸取陰性對照溶液和三批不同批次膠囊的供試品溶液各10 μ L、對照藥材溶液5 μ L，分別 點於同一矽膠G薄層板上，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯(10:4 2.5)為展開劑，展開，取 出，晾乾，噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主 斑點；而陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，不顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該膠囊中女貞子的鑑別。(2)天花粉鑑別的方法學驗證
對照品溶液的製備取胍氨酸對照品，加50%乙醇，配製製成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的製備取本品內容物10g，加30%乙醇20mL，超聲處理5分鐘，濾過， 濾液蒸乾，加50%乙醇IOmL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。依此法製備三批膠囊劑 的供試品溶液。陰性對照溶液的製備按實施例4膠囊處方比例及工藝製備缺天花粉的陰性對照 樣品。取陰性對照樣品內容物10g，加30%乙醇20mL，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸乾，加 50%乙醇IOmL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液。測定法照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取陰性對照 溶液和三批不同批次膠囊的供試品溶液各10 μ L、對照品溶液2 μ L，分別點於同一矽膠G 薄層板上，以正丁醇-丙酮-水G 2:1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以洲茚三酮乙 醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結果三批供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑 點；而陰性對照色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不顯示斑點。結論該方法專屬性強、重複性好，可用於該膠囊中天花粉的鑑別。
2權利要求
1. 一種治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，其特徵在於所述中藥製劑 中包括紫河車、熟地黃、女貞子、天花粉四種，所述鑑別方法包括如下鑑別方法的任一種、或 者任兩種、或者任三種、或者全部(1)所述中藥製劑中紫河車的鑑別方法，是以紫河車對照藥材為對照的薄層色譜鑑別 方法，包括以下步驟①供試品溶液的製備取所述中藥製劑，加三氯甲烷或二氯甲烷，超聲處理，濾過，濾液 濃縮，製成每1 HiL含生藥量相當於紫河車0. 2 5g的溶液，作為供試品溶液；②對照藥材溶液的製備取紫河車對照藥材，加三氯甲烷或二氯甲烷，超聲處理，濾過， 濾液濃縮，製成每1 mL含生藥量相當於紫河車0. 2 5g的溶液，作為對照藥材溶液；③測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取對照藥材溶液 和供試品溶液各2 20 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯9 Γ9 為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以5% 50%高氯酸溶液，在60 120°C加熱至斑點顯色清 晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；(2)所述中藥製劑中熟地黃的鑑別方法，是以熟地黃對照藥材為對照的薄層色譜鑑別 方法，包括以下步驟①供試品溶液的製備取所述中藥製劑，加水，溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心， 取上清液，濃縮，用乙酸乙酯振搖提取1 3次，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解， 製成每1 mL含生藥量相當於熟地黃2 20g的溶液，作為供試品溶液；②對照藥材溶液的製備取熟地黃對照藥材，加水煎煮1 2次，用脫脂棉濾過，合併濾 液，濃縮，用乙酸乙酯振搖提取1 3次，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，製成每 1 mL含生藥量相當於熟地黃2 20g的溶液，作為對照藥材溶液；③測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取對照藥材溶液 和供試品溶液各2 20 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以鄰二甲苯-乙酸乙酯1:1為 展開劑，其中鄰二甲苯可替換為苯，或甲苯，或間二甲苯，或對二甲苯，或鄰二甲苯、間二甲 苯、對二甲苯三種按任意比例的混合物，展開，取出，晾乾，噴以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙 醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；(3)所述中藥製劑中女貞子的鑑別方法，是以女貞子對照藥材和齊墩果酸對照品為對 照的薄層色譜鑑別方法，包括以下步驟①供試品溶液的製備取所述中藥製劑，加三氯甲烷或二氯甲烷，提取1 3次，合併三 氯甲烷液或二氯甲烷液，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇，或者殘渣加無水乙醇-三氯甲烷3 :2 混合溶液，在5 50°C，製成每1 mL含生藥量相當於女貞子0. 2 5g的溶液，作為供試品 溶液；②對照藥材溶液的製備取女貞子對照藥材，加三氯甲烷或二氯甲烷，超聲處理，濾 過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇，或者殘渣加無水乙醇-三氯甲烷3 2混合溶液，在5 50°C，制 成每1 mL含生藥量相當於女貞子0. 2 5g的溶液，作為對照藥材溶液；③對照品溶液的製備取齊墩果酸對照品，加甲醇或95%乙醇，在5 50°C，配製成每 ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；④測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，在5 50°C，吸取供 試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各2 20μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸7 15 2 7 1 5 :0 0.5、或者以三氯甲烷-甲 醇-甲酸20 40 :1 :0. 3 1. 1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以m 20%硫酸乙醇溶 液，或者噴以1% 10%磷鉬酸乙醇溶液，在60 120°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜 中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；(4)所述中藥製劑中天花粉的鑑別方法，是以天花粉對照藥材和胍氨酸對照品為對照 的薄層色譜鑑別方法，包括以下步驟①供試品溶液的製備取所述中藥製劑，加30% 100%乙醇，超聲處理，濾過，濾液蒸 幹，加50%乙醇使溶解，濾過，得濾液，製成每1 mL含生藥量相當於天花粉0. 01 Ig的溶 液，作為供試品溶液；②對照藥材溶液的製備取天花粉對照藥材，加50%乙醇，超聲處理，濾過，得濾液， 製成每1 mL含生藥量相當於天花粉0. 01 Ig的溶液，作為對照藥材溶液；③對照品溶液的製備取胍氨酸對照品，加50%乙醇，配製成每ImL含Img的溶液，作為 對照品溶液；④測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對 照藥材溶液和對照品溶液各1 20 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正丁醇-無水 乙醇-冰醋酸-水7 15 0 2 :2 6 :1 5、正丁醇-甲酸-水15 25 3 :2、正丁 醇-丙酮-水2 5 2 :1中的任一種為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1% 10%茚三 酮乙醇溶液，在60 120°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。
2.根據權利要求1所述的治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，其特徵在 於所述中藥製劑是由紫河車、黃芪、熟地黃、黨參、白朮、當歸、甘草、女貞子、黃精、甜地丁 或紫花地丁、天花粉十一味中藥組成，紫河車粉碎成粉末，其餘十味藥材溶媒提取，製成片 劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑各種適宜的劑型。
3.根據權利要求2所述的治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，其特徵在 於所述中藥製劑的處方按重量配比計為紫河車4 7、黃芪20 50、熟地黃10 30、黨 參5 20、白朮5 20、當歸5 15、甘草5 15、女貞子5 20、黃精5 15、甜地丁或 紫花地丁 5 20、天花粉5 20。
4.根據權利要求3所述的治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，其特徵在 於所述中藥製劑中每克含生藥量相當於紫河車0. 15 0. 18g、熟地黃0. 45 0. 55g、女貞 子 0. 25 0. 35g、天花粉 0. 25 0. 35g。
5.根據權利要求1所述的治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，其特徵在 於所述0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液是取2，4-二硝基苯胼lg，加無水乙醇1000 mL 使溶解，再緩緩加入濃度為36% 38%的鹽酸10mL，搖勻，即得。
6.根據權利要求1所述的治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，其特徵在 於所述中藥製劑中女貞子的鑑別方法，製備供試品溶液前，對中藥製劑進行預處理，具體 操作為取所述中藥製劑，加0. 2% 0. 5%的氫氧化鈉溶液，溫熱使充分溶散，加熱至沸，放 冷，濾過或離心，取濾液或上清液，用鹽酸或硫酸調節PH值至1 2。
7.根據權利要求廣6所述的治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，其特徵 在於所述鑑別方法包括如下鑑別方法的任一種、或者任兩種、或者任三種、或者全部(1)所述中藥製劑中紫河車的鑑別方法，是以紫河車對照藥材為對照的薄層色譜鑑別 方法，包括以下步驟①供試品溶液的製備取所述中藥製劑3 10g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 30mL，超聲 處理5 45分鐘，濾過，濃縮濾液，製成每1 mL含生藥量相當於紫河車0. 2 5g的溶液， 作為供試品溶液；②對照藥材溶液的製備取紫河車對照藥材0.5 2g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 30mL,超聲處理5 45分鐘，濾過，濃縮濾液，製成每1 mL含生藥量相當於紫河車0. 2 5g 的溶液，作為對照藥材溶液；③測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取對照藥材溶液 和供試品溶液各5 15yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯9 廣9 為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以5 50%的高氯酸溶液，在6(T12(TC加熱至斑點顯色清晰， 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；(2)所述中藥製劑中熟地黃的鑑別方法，是以熟地黃對照藥材為對照的薄層色譜鑑別 方法，包括以下步驟①供試品溶液的製備取所述中藥製劑6 15g，加水100 200mL，溫熱使充分溶散， 加熱至沸，放冷，離心，取上清液，濃縮至30 IOOmL,用乙酸乙酯振搖提取1 3次，每次 20 30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，製成每1 mL含生藥量相當於熟地黃 2 20g的溶液，作為供試品溶液；②對照藥材溶液的製備取熟地黃對照藥材2 10g，加水煎煮廣2次，每次加水50 150mL,每次煎煮0. 5 2小時，用脫脂棉濾過，合併濾液，濃縮至30 IOOmL,用乙酸乙酯振 搖提取1 3次，每次20 30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，製成每1 mL 含生藥量相當於熟地黃2 20g的溶液，作為對照藥材溶液；③測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取對照藥材溶液 和供試品溶液各5 15 μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以鄰二甲苯-乙酸乙酯1:1為 展開劑，其中鄰二甲苯可替換為苯，或甲苯，或間二甲苯，或對二甲苯，或鄰二甲苯、間二甲 苯、對二甲苯三種按任意比例的混合物，展開，取出，晾乾，噴以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙 醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；(3)所述中藥製劑中女貞子的鑑別方法，是以女貞子對照藥材和齊墩果酸對照品為對 照的薄層色譜鑑別方法，包括以下步驟①供試品溶液的製備取所述中藥製劑1.5 12g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 IOOmL,超聲處理5 45分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇或者加無水乙醇-三氯甲烷按3 2混合的溶液，在10 50°C使溶解，製成每1 mL含生藥量相當於女貞子0. 2 5g的溶液， 作為供試品溶液；②對照藥材溶液的製備取女貞子對照藥材0.5g,加三氯甲烷或二氯甲烷20mL，超聲 處理5 45分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇或者加無水乙醇-三氯甲烷按3 :2混合的溶 液，在10 50°C使溶解，製成每1 mL含生藥量相當於女貞子0. 2 5g的溶液，作為對照藥 材溶液；③對照品溶液的製備取齊墩果酸對照品，在10 50°C，加甲醇或95%乙醇配製成每 ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；④測定法照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，在10 50°C，吸取 供試品溶液5 15 μ L、對照藥材溶液和對照品溶液各2 5 μ L，分別點於同一矽膠G薄層 板上，以環己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸7 15 2 7 1 5:0 0.5、或者以三 氯甲烷-甲醇-甲酸20 40 :1 :0. 3 1. 1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以2 20%硫酸 乙醇溶液，或者噴以廣10%磷鉬酸乙醇溶液，在60 120°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色 譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；(4)所述中藥製劑中天花粉的鑑別方法，是以天花粉對照藥材和胍氨酸對照品為對照 的薄層色譜鑑別方法，包括以下步驟①供試品溶液的製備取所述中藥製劑6 12g，加30% 100%乙醇，超聲處理5 45 分鐘，濾過，濾液蒸乾，加50%乙醇使溶解，濾過，製成每1 mL含生藥量相當於天花粉0. 01 Ig的溶液，作為供試品溶液；②對照藥材溶液的製備取天花粉對照藥材2g，加50%乙醇，超聲處理5 45分鐘，濾 過，製成每1 mL含生藥量相當於天花粉0. 01 Ig的溶液，作為對照藥材溶液；③對照品溶液的製備取胍氨酸對照品，加50%乙醇配製成每ImL含Img的溶液，作為 對照品溶液；④測定法照中國藥典2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5 15 μ L，對照藥材溶液和對照品溶液各1 5yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正丁 醇-無水乙醇-冰醋酸-水7 15 0 2 :2 6 :1 5、正丁醇-甲酸-水15 25 3 2、正丁醇-丙酮-水2 5 2 :1中的任一種為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以廣10%的 茚三酮乙醇溶液，在6(T12(TC加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品 色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。
8.根據權利要求7所述的治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，其特徵在 於所述鑑別方法包括如下鑑別方法的任一種、或者任兩種、或者任三種、或者全部(1)所述中藥製劑中紫河車的鑑別方法，包括以下步驟取所述中藥製劑6g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為 供試品溶液；另取紫河車對照藥材1 g，同法製成對照藥材溶液；照中國藥典2010年版一部 附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μ L，分別點於同一矽膠G薄層板上，以 正己烷-乙酸乙酯9 5為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以20%高氯酸溶液，在105°C加熱至 斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；(2)所述中藥製劑中熟地黃的鑑別方法，包括以下步驟取所述中藥製劑10g，加水150mL，溫熱使充分溶散，加熱至沸，放冷，離心，取上清液， 濃縮至IOOmL,用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇 0. 5mL使溶解，作為供試品溶液；另取熟地黃對照藥材5g，加水煎煮2次，每次加水80mL，第 一次2小時，第二次1小時，用脫脂棉濾過，合併濾液，濃縮至IOOmL,用乙酸乙酯振搖提取 2次，每次30mL，合併乙酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0. 5mL使溶解，作為對照藥材溶液；照 中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ L、對照藥材溶液 5yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以鄰二甲苯-乙酸乙酯1 1為展開劑，展開，取出， 晾乾，噴以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位 置上，顯相同顏色的主斑點；(3)所述中藥製劑中女貞子的鑑別方法，包括以下步驟取所述中藥製劑6g，加三氯甲烷20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇 lmL，在35 40°C使溶解，作為供試品溶液；另取女貞子對照藥材0. 5g，同法製成對照藥材 溶液；再取齊墩果酸對照品，加甲醇在35 40°C配製成每ImL含Img的溶液，作為對照品 溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，在35 40°C，吸取供試品溶 液l(Tl5yL、對照藥材溶液和對照品溶液各5yL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以環己 烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸12. 5 5 3 :0. 1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫 酸乙醇溶液，在110°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品 色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；(4)所述中藥製劑中天花粉的鑑別方法，包括以下步驟取所述中藥製劑10g，加50%乙醇30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，加50%乙 醇IOmL使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取天花粉對照藥材2g，加50%乙醇20mL， 超聲處理30分鐘，濾過，取濾液作為對照藥材溶液；再取胍氨酸對照品，加50%乙醇製成每 ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法試 驗，吸取供試品溶液10 μ L、對照藥材溶液和對照品溶液各2 μ L，分別點於同一矽膠G薄層 板上，以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水8 2 :4:3為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以洲 茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照 品色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。
全文摘要
本發明涉及一種治療或輔助治療腫瘤疾病的中藥製劑的鑑別方法，屬於中藥製劑質量控制技術領域。本發明提供的中藥製劑為新研製的中藥複方製劑，為控制該製劑的質量，本發明建立了採用薄層色譜法鑑別該中藥製劑中紫河車、熟地黃、女貞子、天花粉的方法。該方法專屬性強，重現性、耐用性好，可用於該中藥製劑中相應藥味的鑑別。
文檔編號A61K36/804GK102091175SQ201110065319
公開日2011年6月15日 申請日期2011年3月18日 優先權日2011年3月18日
發明者原慶泓, 朱平, 王志敏, 陳慶 申請人:王志敏