新化合物、含該化合物的藥物組合物以及該化合物的應用方法

2023-05-27 17:12:06 2

專利名稱：新化合物、含該化合物的藥物組合物以及該化合物的應用方法
本申請是申請號為03818556.3、申請日為2003年7月9日、具有相同發明名稱的中國專利申請的分案申請。
背景技術：
脂肪酸合酶 在細胞的生理學中，脂肪酸具有三個主要作用。首先，它們是生物膜的構件。其次，脂肪酸衍生物起激素和胞內信使的作用。第三，對本發明特別重要的，脂肪酸是燃料分子，其可以作為三醯甘油酯儲存在脂肪組織，其亦稱為中性脂肪。
在脂肪酸合成路徑中涉及四種主要酶，它們是脂肪酸合酶(FAS)、炔基CoA羧基酶(ACC)、蘋果酸酶和檸檬酸裂解酶。首要的酶，FAS，催化前體丙二醯基-CoA和炔基-CoA的NADPH-依賴性縮合，生成脂肪酸。NADPH是一種還原劑，在FAS反應周期中的兩處通常起主要電子供體的作用。其它三種酶(即，ACC、蘋果酸酶和檸檬酸裂解酶)產生必要的前體。其它酶，例如產生NADPH的酶，也涉及脂肪酸的合成。
FAS具有一個酶學專門委員會(E.C.)號碼2.3.1.85，又名脂肪酸合成酶、脂肪酸連接酶，它的系統名醯基-CoA丙二醯基-CoA C-醯基轉移酶(脫羧基、氧醯基-和烯醯基-還原和硫代酸酯-水解)。在FAS催化合成脂肪酸中，存在7種不同的酶或不同的催化區炔基轉醯酶、丙二醯轉醯酶、β-酮脂醯合成酶(縮合酶)、β-酮脂醯還原酶、β-羥醯脫水酶、烯醯還原酶和硫酯酶。(Wakil，S.J.，Biochemistry，284523-4530，1989)。所有這7種酶共同形成FAS。
雖然FAS催化合成脂肪酸在低等生物例如細菌與在高等生物例如分枝桿菌、酵母和人中相似，但是還是存在一些重要的區別。在細菌中，七種酶反應是通過七種單獨的非結合多肽進行的。將此分類為II型FAS。相反，在分枝桿菌、酵母和人中的酶反應通過多功能多肽進行。例如，酵母具有一種由兩種單獨的多肽組成的絡合物，而在分枝桿菌和人中，所有七種反應都是通過單一的多肽進行。將此分類為I型FAS。
FAS抑制劑 已經表明，許多化合物抑制脂肪酸合酶(FAS)。FAS抑制劑可以通過化合物抑制純化FAS的酶活性的能力進行確認。通過測定結合到脂肪酸中的放射性標記前體(即，炔基-CoA或丙二醯基-CoA)，或者通過分光光度法測定NADPH的氧化，可以測定FAS活性。(Dils等人，Methods Enzymol.，3574-83)。
表1，在下闡述，列出若干FAS抑制劑。


在脂肪酸合成路徑的四種酶當中，FAS是優選的抑制靶標，因為FAS唯一在脂肪酸合成路徑內起作用，而其它三種酶涉及到其它細胞功能。因此，抑制其它三種酶中的一種更可能影響正常細胞。在由FAS進行的7種酶催化步驟當中，由縮合酶(即，β-酮脂醯合成酶)和烯醯還原酶催化的步驟是減少或停止脂肪酸合成的抑制劑的最常見候選。依據結構和功能很好地對FAS絡合物的縮合酶進行表徵。縮合酶的活性位點包含一種關鍵的半胱氨酸硫醇，其是抗血脂藥例如抑制劑淺藍菌素的靶標。
縮合酶的優選抑制劑包括各種化學化合物，包括烷基化劑、氧化劑和能夠進行二硫化物交換的試劑。酶的結合袋優選長鏈，E，E，二烯烴。
首要的是，含側鏈二烯烴和一種對硫醇鹽陰離子表現出反應的基團的試劑可能是一種好的縮合酶抑制劑。淺藍菌素[(2S，3R)-2，3-環氧-4-氧代-7，10十二二烯醯基醯胺]是一個例子
淺藍菌素與脂肪酸合酶的縮合酶的活性部位中關鍵的半胱氨酸硫醇基團共價結合，使這種關鍵酶催化步驟失活(Funabashi等人J.Biochem.，105751-755，1989)。雖然已經指明淺藍菌素具有其它活性，但是這些或者存在於微生物中，這些微生物可能不是人細胞的相關模型(例如，真菌中膽固醇合成的抑制，Omura(1976)，Bacteriol.Rev.，40681-697；或病毒中減少的RNA合成，Perez等人(1991)，FEBS，280129-133)，在基本上更高的藥物濃度下出現(在5mg/ml時抑制病毒性HIV蛋白酶，Moelling等人(1990)，FEBS，261373-377)或可以是抑制內源性脂肪酸合成的直接結果(B淋巴細胞和巨噬細胞中的抗原加工的抑制，Falo等人(1987)，J.Immunol.，1393918-3923)。某些數據表明淺藍菌素沒有特定抑制蛋白質的肉豆蔻醯化(Simon等人J.Biol.Chem.，2673922-3931，1992)。
更多一些FAS抑制劑公開在美國專利申請號08/096，908以及其1994年1月24日申請的CIP中，其內容在此引入作為參考。包括脂肪酸合酶、檸檬酸裂解酶、CoA羧化酶和蘋果酸酶的抑制劑。
Tomoda及同事(Tomoda等人Biochim.Biophys.Act 921595-5981987；Omura等人J.Antibiotics 391211-12181986)描述了三氮菌素C(有時稱為WS-1228A)，一種天然存在的醯基輔酶A合成酶抑制劑，其是Streptomyces sp.SK-1894的一種產物。三氮菌素C的化學結構是1-羥基-3-(E，E，E-2′，4′，7′-undecatrienylidine)三氮烯。在8.7μM時，三氮菌素C引起大鼠肝醯基輔酶A合成酶50％的抑制；一種有關的化合物，三氮菌素A，通過一種與長鏈脂肪酸競爭的機理抑制醯輔酶A合成酶。醯基輔酶A合成酶的抑制對動物細胞來說是毒性的。Tomoda等人(Tomoda等人，J.Biol.Chem.2664214-4219，1991)教導了在1.0μM時，三氮菌素C引起Raji細胞中的生長抑制，以及還表明三氮菌素C抑制Vero細胞和Hela細胞的生長。此外，tomoda等人教導了醯基輔酶A合成酶在動物細胞中是重要的，抑制該酶具有致死作用。
在美國專利號5,981,575(其內容在此引入作為參考)中所示的一族化合物(γ-取代的-α-亞甲基-β-羧基-γ-丁內酯)抑制脂肪酸的合成，抑制腫瘤細胞的生長以及引起體重減輕。在治療用途上，與天然產物淺藍菌素相比，575專利中公開的化合物具有一些優點[1]它們不含有淺藍菌素的高活性環氧基團，[2]它們在水溶液中是穩定的並且是可溶的，[3]它們可以通過兩步合成反應製備，因此可以容易地大量製備，以及[4]它們容易被氚化成高比活性，以便進行生化分析和藥理學分析。這族化合物的合成，其是脂肪酸合酶抑制劑，描述在『575專利中，也描述了它們用作治療表達FAS的腫瘤細胞的手段，以及它們用作減少體重的手段。『575專利還公開了任何脂肪酸合酶抑制劑全身地減少脂肪細胞物質(脂肪細胞數量或大小)的應用，作為減少體重的方法。
在小鼠和人中，脂肪酸合成的主要部位是肝臟(參見Roncari，Can.J.Biochem.，52221-230，1974；Triscari等人，1985，Metabolism，34580-7；Barakat等人，1991，Metabolism，40280-5)，泌乳的乳腺(參見Thompson等人，Pediatr.Res.，19139-143，1985)和脂肪組織(Goldrick等人，1974，Clin.Sci.Mol.Med.，46469-79)。
脂肪酸合成抑制劑作為抗微生物劑 最初從cephalosporium caerulens的培養肉湯中分離得到的淺藍菌素作為潛在的抗真菌抗生素。淺藍菌素的化學結構是(2R，3S)-環氧-4-氧代-7，10-反，反-十二烷酸醯胺。現已證明，它的作用機理是通過不可逆結合，抑制β-酮脂醯基-ACP合酶，是脂肪酸的生物合成所需的所述的縮合酶。現已將淺藍菌素分類為抗真菌劑，主要是抗念珠菌屬(candida)和Saccharomyces sp.。此外，表明其抗某些細菌、放線菌和分枝桿菌的一些體外活性，但是還沒有發現抗結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)活性。沒有對脂肪酸合成抑制劑和特別是淺藍菌素抗原生動物例如鼠弓形體(Toxoplasma gondii)或其它感染性真核病原體例如卡氏肺孢子蟲(Pneumocystis carinii)、蘭伯賈弟蟲(Giardia lamblia)、plasmodium sp.、陰道毛滴蟲(Trichomonas vaginalis)、隱孢子蟲屬(Cryptosporidium)、錐蟲屬(Trypanosoma)、利氏曼蟲屬(Leishmania)和血吸蟲屬(Schistosoma)和裂體吸蟲的活性進行評價。
對治療特別敏感的感染性疾病是這樣的疾病，其在感染動物的可及外表面造成損傷。可及外表面包括可以通過非侵入性方法(沒有割破或穿透皮膚)達到的所有表面，包括皮膚表面本身、黏膜例如覆蓋鼻腔、口腔、胃腸道或尿道表面的那些、以及肺面例如肺泡囊。易感疾病包括(1)皮真菌病或癬，尤其是由小孢子菌屬(Microsporum)、髮癬菌屬(Trichophyton)、表皮癬菌屬(Epidermophyton)或黏膜皮膚念珠菌(Mucoculaneous candidiasis)引起的；(2)mucotic角膜炎，尤其是由麴黴菌屬(Aspergillus)、鐮刀菌屬(Fusarium)或念株菌屬引起的；(3)阿米巴角膜炎，尤其是由棘阿米巴屬(Acanthamoeba)引起的；(4)胃腸道疾病，尤其是由蘭伯賈第蟲、內阿米巴屬(Entamoeba)、隱孢子蟲屬或念株菌屬(在無免疫應答的動物中最常見)；(5)泌尿生殖器感染，尤其是由白色念株菌(Candida albicans)或陰道毛滴蟲引起的；以及(6)肺病，尤其是由結核分枝桿菌、麴黴屬或卡氏肺囊蟲引起的。對用脂肪酸合成抑制劑治療敏感的感染生物包括結核分枝桿菌，尤其是抗多種藥物的菌株，以及原生動物例如弓形體屬(Toxoplasma)。
抑制脂肪酸合成的任何化合物可以用於抑制微生物細胞生長。但是，給予患者的化合物必須是對患者和目標微生物細胞具有不同的毒性。因此，選擇這樣的抑制劑是有益的，其僅僅或主要影響靶標微生物細胞。
依賴於它們自己內源性合成脂肪酸的真核微生物細胞將表達I型FAS。這可以通過以下兩個事實證明即FAS抑制劑是生長抑制性的，以及外部加入脂肪酸可以保護正常的患者細胞而不是這些微生物細胞免受FAS抑制劑作用。因此，防止細胞合成脂肪酸的藥劑可以用來治療感染。在真核生物中，使用底物炔基CoA、丙二醯CoA和NADPH，由I型FAS合成脂肪酸。因此，其它可以將底物送入這種途徑的酶也可以對脂肪酸合成的速率產生影響，因此在依賴內源性合成脂肪酸的微生物中是重要的。抑制任何這些酶的表達或活性將影響依賴於內源性合成脂肪酸的微生物細胞的生長。
在各種生物中，I型FAS的產物不同。例如，在真菌S.cerevisiae中，產物主要是與輔酶-A酯化的棕櫚酸酯和硬脂酸酯(sterate)。在恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis)中，產物是碳長度在16到24之間的飽和脂肪酸輔酶A酯。這些脂質往往被進一步加工，以滿足細胞對各種脂質組分的需要。
預期對下遊中脂肪酸加工或使用的關鍵步驟的抑制可以抑制細胞功能，不管是依賴內源性脂肪酸的細胞還是使用由外部供給脂肪酸的細胞，因此，這些下遊步驟的抑制劑對依賴內源性脂肪酸的微生物細胞並不具有足夠地選擇性。但是，現已發現，當給予這些微生物I型脂肪酸合成抑制劑時，可以使它們對通過的下遊脂肪酸加工和/或使用抑制劑的抑制更敏感。由於這種協同作用，脂肪酸合成抑制劑與在脂質生物合成和/或使用中的一種或多種下遊步驟的抑制劑一起給藥，將選擇性地對那些依賴內源性合成脂肪酸的微生物細胞產生影響。優選的組合包括一種FAS抑制劑和炔基CoA羧化酶，或者FAS和MAS抑制劑。
當確定哺乳動物被表達I型FAS的生物的細胞感染時，或者如果在患者的生物流體中發現FAS，那麼所述的哺乳動物或患者可以通過給予一種脂肪酸合成抑制劑進行治療(專利號5,614,551)。
抑制神經肽-Y從而降低食慾並刺激體重減輕的描述在國際專利申請No.PCT/US01/05316中，其內容在此引入作為參考。但是該申請沒有描述或公開任何在本申請中公開的化合物。
刺激肉鹼棕櫚醯轉移酶-1(CPT-1)以刺激體重減輕描述在美國專利申請序列No.60/354,480中，其內容在此引入作為參考。該申請也沒有描述或公開任何在在此公開的化合物。
使用FAS抑制劑抑制癌細胞的生長描述在美國專利No.5,759,837中，其內容在此引入作為參考。該申請沒有描述或公開任何在在此公開的化合物。
使用FAS抑制劑抑制癌細胞的生長描述在美國專利No.5,759,837中，其內容在此引入作為參考。但美國專利No.5,759,837沒有描述或公開任何在在此公開的化合物。
發明概述 現已發現新類型化合物，其具有各種在治療上有價值的性質，例如FAS-抑制、NPY-抑制、CPT-1刺激、引起重量減輕的能力以及抗癌和抗微生物性質。
本發明的另一目的是，通過給予一種含藥物稀釋劑和式I、II、III或IV的化合物的藥物組合物，提供一種引起動物和人中重量減輕的方法。
本發明的另一目的是，通過給予人或動物一種含藥物稀釋劑和式I、II、III或IV的化合物的藥物組合物，提供一種刺激CPT-1活性的方法。
本發明的另一目的是，通過給予一種含藥物稀釋劑和式I、II、III或IV的化合物的藥物組合物，提供一種抑制動物或人中神經肽Y合成的方法。
本發明的另一目的是，通過給予一種含藥物稀釋劑和式I、II、III或IV的化合物的藥物組合物，提供一種抑制動物或人中脂肪酸合酶活性的方法。
本發明的另一目的是，通過給予一種含藥物稀釋劑和式I、II、III或IV的化合物的藥物組合物，提供一種治療動物和人中癌症的方法。
本發明的還有另一目的是，通過給予一種含藥物稀釋劑和式I、II、III或IV的化合物的藥物組合物，提供一種預防動物和人中癌細胞生長的方法。
本發明的還有另一目的是，通過給予一種含藥物稀釋劑和式I、II、III或IV的化合物的藥物組合物，提供一種抑制侵入性微生物細胞生長的方法。
附圖的簡要說明

圖1表示製備硫乳黴素的合成方案。
圖2表示製備本發明某些化合物的合成方案。
圖3表示製備本發明某些化合物的合成方案。
圖4表示製備本發明某些化合物的合成方案。
圖5表示製備本發明某些化合物的合成方案。
圖6表示製備本發明某些化合物的合成方案。
圖7表示製備本發明的一個化合物的合成方案。
圖8表示製備本發明某些化合物的合成方案。
圖9表示製備本發明某些化合物的兩種合成方案。
圖10表示製備本發明某些化合物的合成方案。
圖11表示本發明某些化合物重量減輕的體內試驗結果。
圖12表示本發明的一種化合物抗癌活性的體內試驗結果。
發明的詳細說明 本發明的化合物可以通過常規方法進行製備。一些化合物的合成描述在實施例中。所述化合物可用於治療肥胖症、癌症或由微生物引起(microbially-based)的感染。
本發明的一種實施方案是具有以下通式的化合物
其中 R1＝H R2＝-OH、-OR5、-OCH2C(O)R5、-OCH2C(O)NHR5、-OC(O)R5、-OC(O)OR5、-OC(O)NHNH-R5或-OC(O)NR5R6，其中R5是H、C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R5可以任選含有滷原子； R3和R4，彼此相同或不同，是C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基； 條件是當R2是-OH、-OCH3或-OC(O)CF3以及R3是-CH3時，那麼R4不是-CH2CH2OH、-CH2-(C6H5)或-CH＝CH-CH3， 以及進一步的條件是當R3是-CH2-(C6H5)時，那麼R4不是-CH3或-CH2CH3。
(應該理解，當適用時，上述化合物的酮互變異構形式也包括在式I中) 在一種優選實施方案中，R5是C1-C10烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基。
在另一種優選實施方案中，R3是-H或-CH3。
在另一種優選實施方案中，R4是n-C6-C8烷基。
本發明的另一種實施方案是式II的化合物
其中 R6＝C2-C20烷基、環烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷芳基、-CHR10OR11、-CO(O)R10、-C(O)NR10R11、-CH2C(O)R10或-CH2C(O)NHR10，其中R10和R11每個獨立地是H、C1-C10烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，但是R6不是二-、三-或四-烷基取代的苯基， R7＝-OH、-OR12、-OCH2C(O)R12、-OCH2C(O)NHR12、-OC(O)R12、-OC(O)OR12、-OC(O)NHNH-R12或-OC(O)NR12R13，其中R12和R13每個獨立地是H、C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R12和R13可以任選含有滷原子； R8和R9，彼此相同或不同，是C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基， 條件如下 當R6是乙基時，如果R8和R9不相同，那麼R8或R9不是乙基、-CH2COOH、-CH2C(O)NH2、-CH2-(C6H5)，但是R8和R9可以相同，即使R6是乙基，以及 當R6是苯基以及R7是-OH時，R8和R9不能同時是-CH3和-丙烯基，以及 當R6是苯基時，R8和R9不能同時是-CH3或-CH2-(C6H5)。
在一種優選實施方案中，R10是C1-C10烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基。
在另一種優選實施方案中，R8是-H或-CH3。
在另一種優選實施方案中，R9是n-C6-C8烷基。
本發明的另一種實施方案包括式III的化合物
其中 R14＝-C(O)R18，其中R18是H、C1-C10烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，任選含有滷原子， R15＝-OH、-OR19、-OCH2C(O)R19、-OCH2C(O)NHR19、-OC(O)R19、-OC(O)OR19、-OC(O)NHNH-R19或-OC(O)NR19R20，其中R19和R20每個獨立地是H、C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R19和R20每個可以任選含有滷原子； R16和R17，彼此相同或不同，是C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基， 條件如下 -當R14是-C(O)CH3以及R16和R17不相同時，那麼R16或R17不是香葉基、p-氟苄基、肉桂基、法呢基、甲基或-CH2-(C6H5)，以及 -當R14是-C(O)C6H5時，那麼R16或R17都不是甲基。
本發明的另一種實施方案是一種藥物組合物，包含藥物稀釋劑和式I、II、III或IV的化合物
其中 R21＝H、C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基、-CH2OR25、-C(O)R25、-CO(O)R25、-C(O)NR25R26、-CH2C(O)R25或-CH2C(O)NHR25，其中R25和R26每個獨立地是H、C1-C10烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基， R22＝-OH、-OR27、-OCH2C(O)R27、-OCH2C(O)NHR27、-OC(O)R27、-OC(O)OR27、-OC(O)NHNH-R27或-OC(O)NR27R28，其中R27和R28每個獨立地是H、C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R27和R28每個可以任選含有滷原子； R23和R24，彼此相同或不同，是C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基或烷芳基。
本發明的組合物可以以單位劑型的形式給予人和其它動物，例如片劑、膠囊、丸劑、散劑、顆粒劑、無菌腸胃外溶液或懸浮液、口服溶液或懸浮液、含合適量所述化合物的水包油和油包水乳劑、栓劑以及流體懸浮液或溶液。當在本說明書中使用時，術語″藥物稀釋劑″和″藥物載體″具有相同的含義。對於口服給藥，可以製備固體或流體單位劑型。對於固體組合物例如片劑的製備，所述化合物可以與常規組分例如滑石粉、硬脂酸鎂、磷酸二鈣、矽酸鋁鎂、硫酸鈣、澱粉、乳糖、阿拉伯膠、甲基纖維素和作為藥物稀釋劑或載體的功能相似的材料。如下製備膠囊所述化合物與一種惰性藥物稀釋劑混合，接著將所述的混合物填充到一個合適大小的硬明膠膠囊中。如下製備軟明膠膠囊用機器將化合物與一種可接受的植物油、輕質液狀石蠟或其它惰性油的漿液進行包囊。
可以製備流體單位劑型或口服給藥例如糖漿劑、酏劑和懸浮液。所述的劑型可與糖、芳香調味劑和防腐劑一起溶於含水賦形劑中，形成一種糖漿劑。藉助於懸浮劑例如阿拉伯膠、黃蓍膠、甲基纖維素等等，可以用一種含水賦形劑製備懸浮液。
可以使用所述的化合物和一種無菌賦形劑製備用於腸胃外給藥的流體單位劑型。在製備溶液中，可以將所述化合物溶於注射用水中，過濾滅菌，然後填充到合適的瓶或安瓿中並密封。佐劑例如局部麻醉劑、防腐劑和緩衝劑可以溶於賦形劑中。填充到瓶中後，可以將組合物冷凍並在真空中除去水。然後，可以稱重冷凍乾燥粉末，在使用前重構。
預見的本發明化合物臨床治療適應症包括(1)由侵入性微生物例如葡萄球菌屬(staphylococci)和腸道球菌屬(enterococci)引起的感染；(2)在細胞過度表達脂肪酸合酶的許多組織中出現的癌症，以及(3)由於攝入過量卡路裡引起的肥胖症。治療的劑量和持續時間取決於各種因素，包括(1)患者的年齡、體重和器官功能(例如肝臟和腎功能)；(2)所治療疾病過程的性質和程度，以及任何現有顯著的並存病和服用的伴隨藥物，以及(3)與藥物有關的參數例如產生治癒所需的給藥途徑、給藥頻率和持續時間、以及藥物的治療指數。通常，為了達到在靶標位置約1μg/ml-10μg/ml的有效濃度的目的，選擇劑量以使血清水平達到1ng/ml-100ng/ml。
實施例 本發明將通過下列實施例進行說明，但是本發明並不受這些實施例的限制 按照如下所述合成了本發明的一系列化合物。某些化合物的生物學活性如下測定對每個化合物測試[1]純化人FAS的抑制，[2]整個細胞中脂肪酸合成活性的抑制以及[3]對培養的MCF-7人乳腺癌細胞的細胞毒性，已知該細胞具有高水平的FAS和脂肪酸合成活性，使用結晶紫和XTT試驗。選擇低細胞毒性水平的化合物，然後在Balb/C小鼠中進行體重減輕測試。此外，在Balb/C小鼠中測試來自表現出顯著體重減輕以及低水平細胞毒性組的代表性化合物對脂肪酸氧化和肉鹼棕櫚醯轉移酶-1(CPT-1)活性的影響，以及通過Northern分析對下丘腦NPY表達的影響。還測試了一些化合物抗革蘭氏陽性和/或陰性菌的活性。
化合物的化學合成
(2S，5R)-2-叔丁基-5-甲基-1，3-氧硫雜環戊烷(oxathiolan)-4-酮(1)。1向(S)-硫代乳酸1(4.0g，37.7mmol)在戊烷(24mL)中的溶液中加入三甲基炔基醛(4.5mL，41.5mmol)和三氟乙酸(TFA)(48μL)。使用迪安-斯達克榻分水器，將溶液在回流下加熱20小時。冷卻後，除去溶劑，得到1和2的順∶反混合物(2.5∶1)(6.4g，99％)。重結晶(戊烷/Et2O(8∶1)-78℃)，得到純的1[α]D24＝-38(c 0.4，CHCl3)。1HNMR(300MHz，CDCl3)順式異構體δ0.99(s，9H)；1.53(d，J＝7Hz，3H)；3.94(q，J＝7Hz，1H)；5.17(s，1H)。外消旋的1同樣從(±)-硫代乳酸中製備。

一般方法A.(2S，5R)-2-(叔丁基)-5-(1-羥基-2-甲基-2-丁烯基)-5-甲基-1，3-氧硫雜環戊烷-4-酮(3)。在-78℃下，向二異丙胺(0.6mL，4.6mmol)在THF(8.0mL)中的混合物中加入正丁基鋰(3.3mL，1.4M，在正己烷中)，所得溶液在0℃攪拌30分鐘，然後冷卻至-78℃。然後，在-78℃下，通過套管滴加在THF中的1(800mg，4.6mmol)，所得溶液在-78℃下攪拌30分鐘。然後，在-78℃下，通過套管加入在THF(1.4mL)中的反式2-甲基-2-丁烯醛(0.4mL，4.6mmol)。在-78℃下攪拌1.5小時後，加入1N的HCl(25mL)，溶液用Et2O(3 x 30mL)萃取。合併的有機物進行乾燥(MgSO4)，過濾，然後蒸發。快速色譜(10％的EtOAc/己烷，rf＝0.1)，得到3(955mg，81％)，是1.6∶1的非對映體的混合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(大多數的非對映體)0.99(s，9H)，1.40(s，3H)，1.63(d，J＝6.7Hz，3H)，1.69(m，3H)，4.36(s，1H)，5.25(s，1H)，5.60-5.65(m，1H)；(少量的非對映體)0.98(s，9H)，1.59(s，3H)，1.63(d，J＝6.7Hz，3H)，1.72(m，3H)，4.25(s，1H)，5.07(s，1H)，5.60-5.64(m，1H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ(大多數的非對映體)12.5，13.2，24.3，24.8，60.7，81.8，87.9，126.3，133.8，178.3；IR(ATR)3466，1743cm-1。C13H22O3S的分析計算值C，60.4；H，8.58；實測值C，60.4；H，8.60。

(±)-(2-(叔丁基)-5-(1-羥基-2-辛烯基)-5-甲基-1，3-氧硫雜環戊烷-4-酮(4)。按照一般方法A，由(±)1(800mg，4.59)和2-反辛烯醛(0.58mL，5.1mmol)，經快速色譜法(10％ EtOAc/己烷)後，獲得4(1.1g，81％)，是1.2∶1的非對映體混合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)大多數的非對映體δ0.85(t，J＝7.2Hz，3H)，0.97(bs，9H)，1.18-1.35(m，6H)，1.56(s，3H)，2.00-2.08(m，2H)，2.38(d，J＝5Hz，1H)，4.15-4.19(m，1H)，5.13(s，1H)，5.45-5.59(dd，J＝7，14Hz，1H)，5.72-5.77(m，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.7，22.3，24.7，28.5，31.3，32.1，35.2，60.6，78.8，87.4，127.2，136.5，175.7.1H NMR(300MHz，CDCl3)少量的非對映體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7.2Hz，3H)，0.97(s，9H)，1.18-1.35(m，6H)，1.40(s，3H)，2.00-2.07(m，2H)，2.31(d，J＝5Hz，1H)，4.25-4.30(m，1H)，5.27(s，1H)，5.45-5.59(dd，J＝7，14Hz，1H)，5.79-5.83(m，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.7，22.3，23.9，24.8，28.5，31.2，32.1，35.3，61.1，78.3，87.8，127.2，137.2，177.0.IR(NaCl)2959，1765cm-1.C16H28O3S的分析計算值C，63.9；H，9.39；實測值C，63.9；H，9.41.
(±)-2-(叔丁基)-5-(1-羥基-2-己烯基)-5-甲基-1，3-氧硫雜環戊烷-4-酮(5)。按照一般方法A，由(±)1(800mg，4.59)和2-反己烯醛(0.58mL，5.1mmol)，經快速色譜法(10％的EtOAc/己烷)後，獲得5(813mg，65％)，是2.4∶1的非對映體混合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.87(t，J＝7.3Hz，3H)，0.99(s，9H)，1.38-1.45(m，2H)，1.41(s，3H)，2.02(q，J＝7Hz，2H)，4.26-4.31(m，1H)，5.27(s，1H)，5.45-5.63(m，1H)，5.74-5.83(m，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.6，21.6，24.1，24.9，35.2，37.2，61.2，78.5，87.9，127.3，137.3，179.1.IR(NaCl)29601765cm-1. 分析計算值C14H24O3SC，61.7；H，8.88；實測值C，61.74；H，8.89.
(±)-2-(叔丁基)-5-(1-羥基-2-甲基-2-戊烯基)-5-甲基-1，3-氧硫雜環戊烷-4-酮(6)。按照一般方法A，由(±)1(800mg，4.59mmol)和2-甲基-2-戊烯醛(0.58mL，5.0mmol)，經快速色譜法(10％的EtOAc/己烷)後，獲得6(884mg，71％)，是1.8∶1的非對映體混合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.93-0.99(m，12H)，1.40(s，3H)，1.68(s，3H)，2.01-2.06(m 2H)，4.33(d，J＝6.9Hz，1H)，5.24(s，1H)，5.48-5.54(m，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ12.6，13.8，20.9，21.1，24.8，35.4，60.6，81.8，87.9，132.6，133.9，178.3.IR(NaCl)2961，1767cm-1. 分析計算值C14H24O3SC，61.7；H，8.88；實測值C，61.6；H，8.90.
一般方法B.(2S，5R)-2-(叔丁基)-5-(2-甲基-丁-1，3-二烯基)-5-甲基-1，3-氧硫雜環戊烷-4-酮(7)。向冷卻至0℃的3(3.23g，12.5mmol)在Cl(CH2)2Cl(115mL)中的溶液中加入NEt3(4.2ml，30mmol)和2，4-二硝基苄基亞磺醯氯(6.6g，28.2mmol)。溶液溫熱至室溫，持續30分鐘，或者直到TLC(10％ EtOAc/己烷，rf＝.55大多數rf＝.48少量)表明非對映的亞磺醯酯(sulfenate esters)的完全生成為止。然後，混合物於90℃回流4小時，或者通過TLC表明亞磺醯酯的轉化完成為止。冷卻至0℃後，然後加入戊烷(50mL)，將此混合物通過硅藻土過濾，蒸發。快速色譜法(2％的EtOAc/己烷，rf＝0.4)，得到純的7(2.3g，75％)。 [α]D24＝+237(c 1.0，CHCl3).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.98(s，9H)，1.72(s，3H)，1.86(s，3H)，5.06(d，J＝10.7Hz，1H)，5.18(s，1H)，5.24(d，J＝17.3Hz，1H)，5.70(s，1H)，6.24-6.33(dd，J＝10.7，17.3Hz，1H)；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ12.5，25.1，26.6，34.9，53.7，87.4，113.7，132.6，137.8，140.9，176.3； 分析計算值G13H20O2SC，64.9；H，8.38.實測值C，63.8；H，8.28.
(±)-2-(叔丁基)-5-(辛-1，3-二烯基)-5-甲基-1，3-氧硫雜環戊烷-4-酮(8)。按照一般方法B，由(±)4(306mg，1.00mmol)，經快速色譜法(2％的EtOAc/己烷)後，獲得8(212mg，75％，4∶1反∶順)。1H NMR(300MHz，CDCl3)反式異構體δ0.84-0.89(m，3H)，1.01(s，9H)，1.22-1.38(m，4H)，1.61(s，3H)，2.04-2.11(m，2H)，5.03(s，1H)，5.58(d，J＝15Hz，1H)，5.64-5.78(m，1H)，0.96-6.05(m，1H)，6.19(dd，J＝10.1，15.1Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)反式異構體δ13.6，22.0，22.5，25.2，31.2，32.1，34.6，55.9，87.0，128.5，129.6，130.2，137.2，174.7.IR(NaCl)2959，1772cm-1；HRMS(EI)m/z計算值C16H26O2S(M+)282.1653，觀察值282.1681.
(±)-2-(叔丁基)-5-(己-1，3-二烯基)-5-甲基-1，3-氧硫雜環戊烷-4-酮(9)。按照一般方法B，由(±)5(690mg，2.53mmol)，經快速色譜法(2％的EtOAc/己烷)後，獲得9(461mg，72％，4∶1反∶順)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.95-1.01(m，12H)，1.61(s，3H)，2.07-2.12(m，2H)，5.05(s，1H)，5.58(d，J＝15Hz，1H)，5.81(dt，J＝6，15Hz，1H)，6.00-6.05(m，1H)，6.15-6.24(dd，J＝10，15.2Hz，1H)；13C(75MHz，CDCl3)δ13.3，24.8，25.3，25.7，34.5，56.1，87.2，127.4，129.4，130.0，138.9，175.1.IR(NaCl)2966，1771cm-1.HRMS(ES)m/z計算值C14H22O2SNa+(M+Na+)277.1232，觀察值277.1237.
(±)-2-(叔丁基)-5-(2-甲基-戊-1，3-二烯基)-5-甲基-1，3-氧硫雜環戊烷-4-酮(10)。按照一般方法B，由(±)6(500mg，2.51mmol)，經快速色譜法(2％的EtOAc/己烷)後，獲得10(342mg，73％，14∶1反∶順)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.00(s，9H)，1.70(s，3H)，1.75(d，J＝6.6Hz，3H)，1.85(s，3H)，5.18(s，1H)，5.57(s，1H)，5.75(dq，J＝6.6，16Hz，1H)，5.97(d，J＝16Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)d 13.0，18.0，25.2，27.4，34.8，53.8，87.4，125.4，129.3，135.5，137.8，176.3.IR(NaCl)2961，1770cm-1.HRMS(EI)m/z計算值C14H22O2S(M+)254.1341，觀察值254.1309.
一般方法C。2-(R)-2，4-二甲基-2-硫代丙醯基-己-3，5-二烯酸乙酯(12)。將碳酸銫(332mg，1.0mmol)直接加入到7(250mg，1.0mmol)在EtOH(3.9mL)中的溶液中。20分鐘後，將此混合物倒入到NH4Cl(飽和)/1N的HCl(15mL，3∶1)的混合物中，然後用Et2O(3 x 20mL)萃取。合併的有機物進行乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發，得到粗的11。向11中加入CH2Cl2(7.5mL)，接著將溶液冷卻至0℃。加入NEt3(0.14mL，1.0mmol)和丙醯氯(.09mL，1.0mmol)，接著在0℃攪拌所述溶液。40分鐘後，加入NH4Cl(飽和)(20mL)，接著將此混合物用CH2Cl2(3 x15mL)萃取。合併的有機物進行乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發。快速色譜法(5％的EtOAc/己烷，rf＝0.4)，得到純的12(261mg，72％)。
[α]D23＝+4.2(c 0.9，CHCl3)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.11(t，J＝7.4Hz，3H)，1.23(t，J＝7.0Hz，3H)，1.83(s，3H)，1.85(s，3H)，2.48(q，J＝7.5Hz，2H)，4.18(q，J＝6.9Hz，2H)，5.02(d，J＝10.7Hz，1H)，5.18(d，J＝17.3Hz，1H)，5.73(s，1H)，6.24-6.34(dd，J＝10.7，17.3Hz,1H)；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ9.43，12.9，13.9，26.1，36.5，55.2，61.9，113.1，131.4，138.2，141.4，172.1，198.9.IR(NaCl)2981，1735，1694cm-1.HRMS(EI)m/z計算值C13H20O3S(M+)256.1133觀察值256.1127.
(±)-2-硫代炔基-2-甲基-癸-3，5-二烯酸乙酯(13)。按照一般方法C，由8(200mg，0.71mmol)和炔基氯(55μL，0.78mmol)，經快速色譜法(5％的EtOAc/己烷)後，獲得13(119g，59％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.84-0.89(m，3H)，1.23(t，J＝7.1Hz，3H)，1.28-1.38(m，4H)，1.71(s，3H)，2.01-2.08(m，2H)，2.23(s，3H)，4.18(q，J＝7.1Hz，2H)，5.66-5.76(m，2H)，5.89-6.03(m，1H)，6.20(dd，J＝10.3，15.3Hz，1H).；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.8，13.9，22.2，22.8，29.9，31.2，32.3，56.1，61.9，128.4，129.2，132.2，137.1，171.6，194.6.IR(NaCl)2930，1737，1694cm-1.HRMS(ES)m/z .計算值C15H24O3SNa+(M+Na+)307.1338觀察值307.1339.
(±)-2-硫代炔基-2-甲基-辛-3，5-二烯酸乙酯(14)。按照一般方法C，由9(353mg，1.39mmol)和炔基氯(98mL，1.39mmol)，經快速色譜法(5％的EtOAc/己烷)後，獲得14(142g，40％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.83(t，J＝7.3Hz，3H)，1.24(t，J＝7.1Hz，3H)，1.72(s，3H)，2.03-2.17(m，2H)，2.25(s，3H)，4.17(q，J＝7.1Hz，2H)，5.72-5.81(m，2H) 5.95-6.04(dd，J＝10，15Hz，1H)，6.18-6.27(dd，J＝10，15Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.2，13.9，22.8，25.6，30.2，56.1，61.9，128.2，128.4，132.1，138.5，171.6，194.8.IR(NaCl)2929，1736，1693cm-1；HRMS(ES)m/z計算值C13H20O3SNa+(M+Na+)279.1025觀察值279.1032.
(±)-2-硫代炔基-2，4-二甲基-庚-3，5-二烯酸乙酯(15)。按照一般方法C，由10(369mg，1.46mmol)和炔基氯(103μL，1.46mmol)，經快速色譜法(5％的EtOAc/己烷)後，獲得15(271mg，77％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.26(t，J＝7.1Hz，3H)，1.74(d，J＝6.6Hz，3H)，1.81(s，3H)，1.85(s，3H)，2.25(s，3H)，4.17(q，J＝7.1Hz，2H)，5.56(s，1H)，5.65-5.73(dq，J＝6.6，16Hz，1H)，5.99(d，J＝16Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.8，14.1，18.2，26.2，30.5，55.6，62.0，125.2，128.3，135.7，138.5，172.2，194.8.IR(NaCl)2926，1737，1694cm-1；HRMS(EI)m/z計算值C13H20O3S(M+)256.1133觀察值256.1118.
(±)-2-硫代炔基-2，4-二甲基-己-3，5-二烯酸乙酯(16)。按照一般方法C，由(±)7(380mg，1.56mmol)和炔基氯(110μL，1.56mmol)，經快速色譜法(5％的EtOAc/己烷)後，獲得16(230mg，61％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.25(t，J＝7.1Hz，3H)，1.84(s，3H)，1.87(s，3H)，2.24(s，3H)，4.21(q，J＝7.1Hz，2H)，5.03(d，J＝10.6Hz，1H)，5.21(d，J＝17.3Hz，1H)，5.74(s，1H)，6.26-6.35(dd，J＝10.6，17.3Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ12.9，13.9，25.9，30.1，55.8，62.0，113.3，131.3，138.3，141.3，182.3，194.6.IR(NaCl)2982，1735，1692cm-1.
一般方法D.5-(R)-4-羥基-3，5-二甲基-5-(2-甲基-丁-1，3-二烯基)-5-H-噻吩-2-酮(17)(硫乳黴素)。在-78℃下，向在THF(18.5mL)中的12(315mg，1.23mmol)中加入LiHMDS(3.1mL，3.1mmol，1.0M，在THF中)，將所述溶液緩慢溫熱至-5℃。然後，將溶液倒入到1N的HCl(25mL)中，用EtOAc(3 x 15mL)萃取。合併的有機物進行乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發。將此粗混合物倒入到NaHCO3(飽和，15mL)中，用Et2O(3 x 10mL)萃取。然後，用1N的HCl將水層酸化至pH 3(pH試紙)，用Et2O(3 x 10mL)萃取，接著用EtOAc(2 x 10mL)萃取。合併的有機物進行乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發，得到純的17。(182mg，70％，96％ee)。用己烷/丙酮(3∶1)重結晶，得到旋光富集的17。
[α]D24＝+174(c 0.6，MeOH)，mp 119.5-121℃(lit[α]D20+176(c 1.0，MeOH)，mp 120℃)2.1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.72(s，3H)，1.76(s，3H)，1.91(s，3H)，5.05(d，J＝10.7Hz，1H)，5.23(d，J＝17.3Hz，1H)，5.58(s，1H)，6.23-6.33(dd，J＝10.7，17.3Hz，1H)；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ7.60，12.0，29.8，55.3，110.6，113.9，129.1，140.3，140.7，179.2，196.7.IR(NaCl)3422，1607cm-1.分析計算值C11H14O2SC，62.8；H，6.71；實測值C，62.1，6.71.
(±)-4-羥基-5-甲基-5-辛-1，3-二烯基-5-H-噻吩-2-酮(18)。按照一般方法D，由13(62mg，0.22mmol)得到18(21mg，41％)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)(酮式互變體)δ0.88(t，J＝6.9Hz，3H)，1.19-1.41(m，4H)，1.75(s，3H) 2.03-2.19(m，2H)，3.22(d，J＝21Hz，1H)，3.51(d，J＝21Hz，1H)，5.67(d，J＝15Hz，1H)，5.80(dt，J＝7，17Hz，1H)，6.02(dd，J＝10，15Hz，1H)，6.37(dd，J＝10，15Hz，1H).1H NMR(300MHz，MeOD)烯醇式互變體δ0.97-1.03(m，3H)，1.36-1.53(m，4H)，1.87(s，3H)，2.15-2.22(m，2H)，5.78(d，J＝15Hz，1H)，5.82-5.90(m，1H)，6.10-6.19(m，1H)，6.38(dd，J＝10.3，15.4Hz，1H)；13C(75MHz，MeOD)烯醇式互變體δ14.4，23.3，25.2，32.6，33.4，60.9，102.1(m)，130.7，131.7，132，7，137.5，188.9，196.9.IR(NaCl)2927，1588cm-1；HRMS(ES) 計算值C13H18O2SNa+(M+Na+)261.0911；觀察值261.0912.
(±)-4-羥基-5-甲基-5-己-1，3-二烯基-5-H-噻吩-2-酮(19)。按照一般方法D，由14(364mg，0.46mmol)得到19(180mg，60％)。
1H(300MHz，CDCl3，以2.3∶1的酮式互變體∶烯醇式互變體的混合物存在)酮式互變體δ1.00(t，J＝7.4Hz，3H)；1.76(s，3H)；2.09-2.16(m，2H)；3.21(d，J＝21Hz，1H)；3.52(d，J＝21Hz，1H)；5.70(d，J＝15Hz，1H)；5.86(dt，J＝15Hz，6Hz，1H)，6.02(dd，J＝10，15Hz，1H)，6.38(dd，J＝15，10Hz，1H)；1H NMR(300MHz，MeOD)烯醇式互變體δ1.09(t，J＝7.4Hz，3H)，1.87(s，3H)，2.14-2.29(m，2H)，5.78(d，J＝15Hz，1H)，5.87(dt，J＝15，6.57Hz，1H)，6.09-6.18(m，1H)，6.38(dd，J＝10.2，15Hz，1H)；13C NMR(75MHz，MeOD)烯醇式互變體δ14.1，25.2，26.9，61.0，101(m)，129.7，131.7，132.7，138.9，188.9，197.1.IR(NaCl)2965，1592cm-1；HRMS(ES)m/z計算值C11H14O2SNa+(M+Na+)233.0607，觀察值233.0626.
(±)-4-羥基-5-甲基-5-(2-甲基-戊-1，3-二烯基)-5-H-噻吩-2-酮(20)。按照一般方法D，由15(226mg，0.9mmol)得到20(95mg，49％)。 1H NMR(300MHz，CDl3)(酮式互變體)δ1.75(s，3H)，1.77(d，J＝3.2Hz，3H)，1.84(s，3H)，3.42(d，J＝1.5Hz，2H)，5.43(d，J＝21Hz，1H)，5.66(bs，1H)，5.78(dd，J＝6，22Hz，1H)，6.04(d，J＝15Hz，1H)；1H NMR(300MHz，MeOD)

δ1.80-1.85(m，6H)，1.90(s，3H)，5.59(s，1H)，5.80-5.95(m，1H)，6.17(d，J＝15Hz，1H)；13C NMR(75MHz，MeOD)(烯醇式互變體)δ13.4，18.4，30.7，59.2，101.2(m)126.2，128.4，136.9，140.6，190.2，197.6.IR(NaCl)2929，1593cm-1；HRMS(ES)m/z計算值C11H14O2SNa+(M+Na+)233.0607觀察值233.0597.
(±)-4-羥基-5-甲基-5(2-甲基-丁-1，3-二烯基)-5-H-噻吩-2-酮(21)。按照一般方法D，由16(181mg，0.75mmol)得到21(66mg，45％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)(酮式互變體)δ1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，3.43(d，J＝5.6Hz，2H)，5.12(d，J＝10.6Hz，1H)，5.27(d，J＝17.3Hz，1H)，5.83(s，1H)，6.27-6.37(dd，J＝10.6，17.3Hz，1H).1H NMR(300MHz，MeOD)

δ1.79(s，3H)，1.84(s，3H)，5.04(d，J＝10.7Hz，1H)，5.25(d，J＝17.3Hz，1H)，5.66(s，1H)，6.36(dd，J＝10.7，17.3Hz，1H)；13C NMR(75MHz，MeOD)δ12.6，30.4，59.0，102(m)，116.9，131.4，140.6，142.3，189.9，197.3.HRMS(EI)m/z計算值C10H12O2S+(M+)196.0552觀察值196.0552.
(±)-5-苄基-4-羥基-5-甲基-5-H-噻吩-2-酮(22)。按照一般方法D，由31(1.4mg，5.0mmol)得到22(500mg，45％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.71(s，3H)，2.89(ab q，J＝22Hz，2H)，3.17(ab q，J＝14Hz，2H)，7.26(m，5H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)d 26.2，46.6，48.5，67.9，127.7，128.6，130.6，134.9，195.3，207.3.
一般方法E.(±)-2-叔丁基-5-甲基-5-辛基-[1，3]-氧硫雜環戊烷-4-酮(23)。在-78℃下，向LiHMDS(6.2mL，6.20mmol，1M，在THF中)在THF(9.7mL)中的混合物中，通過套管滴加在THF(9.60mL)中的(±)-1(1.00g，5.75mmol)，然後將所得溶液在-78℃下攪拌30分鐘。然後，在-78℃下通過套管加入在THF(4mL)中的三氟甲磺酸辛酯(1.63g，6.20mmol)。在-78℃下攪拌2小時後，加入1N的HCl(10mL)，所述溶液用Et2O(3 x 15mL)萃取。合併的有機物進行乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發。快速色譜法(2％的EtOAc/己烷)，得到純的23，是可分離非對映體的2∶1-6∶1的混合物(1.33g，81％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.5Hz，3H)，0.99(s，9H)，1.24-1.26(m，12H)，1.54(s，3H)，1.72-1.84(m，2H)，5.13(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，22.6，24.9，25.1，25.9，29.2，29.3，29.5，31.8，35.2，41.2，55.3，86.5，177.7.IR(NaCl)3443，2929，1829，1769cm-1； 分析計算值C16H30O2SC，67.0；H，10.6；實測值C，66.3；H，10.5.HRMS(EI)m/z計算值C16H30O2S+(M+)286.1967觀察值286.1969.
(±)-2-叔丁基-5-甲基-5-己基-[1，3]-氧硫雜環戊烷-4-酮(24)。由(±)-1(500mg，2.87mL)和三氟甲磺酸己酯(738mg，2.87mmol)，按照一般方法E，獲得24(557mg，75％)，產物是可分離非對映體的2∶1-6∶1的混合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.87(t，J＝6.5Hz，3H)，0.99(s，9H)，1.24-1.29(m，8H)，1.54(s，3H)，1.72-1.80(m，2H)，5.13(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，22.5，24.9，24.9，25.1，25.9，29.1，31.6，41.2，55.3，86.7，177.8.IR(NaCl)分析計算值C14H26O2SC，65.1；H，10.1；實測值C，64.5；H，10.1.HRMS(EI)m/z計算值C14H26O2S+(M+)258.1654觀察值286.1653..
一般方法F.(±)-2-炔基硫烷基-2-甲基-癸酸乙酯(26)。向在EtOH(14.1mL)中的23(650mg，2.27mmol)中加入NaOEt(2.1M)(2.16mL，4.54mmol)(剛剛從在EtOH(4.0mL)中的金屬Na(200mg，8.3mmol)製備)，然後將所述溶液在室溫下進行攪拌。2小時後，將所述溶液倒入到NH4Cl(飽和)/1N HCl(25mL，3∶1)中，然後將這種混合物用Et2O(3x 20mL)萃取。然後，合併的有機物用H2O(3 x 25mL)洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發，得到粗的25。在0℃下，向溶於CH2Cl2(26mL)中的25中加入NEt3(0.5mL，3.49mmol)和炔基氯(0.3mL，3.49mmol)。在0℃下40分鐘後，加入NH4Cl(飽和)(30mL)，溶液用CH2Cl2萃取。合併的有機物進行乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發。快速色譜法(5％的EtOAc/己烷)，得到純的26(542mg，79％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.87(t，J＝6.9Hz，3H)；1.22-1.27(m，15H)，1.61(s，3H)，1.75-1.84(m，2H)，2.26(s，3H)，4.18(q，J＝7.1Hz，2H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，14.1，22.6，23.4，24.4，29.1，29.2，29.6，30.3，31.8，38.3，55.8，61.5，173.1，195.8.IR(NaCl)3430，1868，1693，1644cm-1；分析計算值C15H28O3SC，62.5；H，9.78；實測值C，62.6；H，9.83.
(±)-2-炔基硫烷基-2-甲基-辛酸乙酯(28)。由24(940mg，3.63mmol)和炔基氯(0.3mL，3.63mmol)按照一般方法F，經快速色譜法(5％的EtOAc/己烷)後，獲得28(727mg，77％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)d0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.22-1.27(m，11H)，1.61(s，3H)，1.75-1.79(m，2H)，2.25(s，3H)，4.17(q，J＝7Hz，2H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，14.1，22.4，23.4，24.4，29.3，30.3，31.5，38.4，55.7，61.5173.0，194.7.IR(NaCl)3449，1736，1694cm-1；分析計算值C13H24O3SC，59.9；H，9.29；實測值C，60.6；H，9.44.
(±)-2-甲基2-丙醯基硫烷基-癸酸乙酯(30)。由23(613mg，2.14mmol)和丙醯氯(0.19mL，2.14mmol)，按照一般方法F，經快速色譜法(5％的EtOAc/己烷)後，獲得30(484mg，75％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.84(t，J＝6.9Hz，3H)，1.10(t，J＝7.5Hz，3H)，1.19-1.24(m，15H)，1.58(s，3H)，1.72-1.77(m，2H)，2.48(q，J＝7.5Hz，2H)，4.17(q，J＝7Hz，2H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ9.45，14.1，14.1，22.6，23.5，24.5，29.1，29.3，29.7，31.8，36.9，38.5，55.5，61.4，173.2，199.2.分析計算值C16H30O3SC，63.5；H，10.0；實測值C，63.7；H，10.0.
(±)-2-炔基硫烷基-2-甲基-3-苯基-癸酸乙酯(31)。由5-苄基-2-叔丁基-5-甲基-[1，3]氧硫雜環戊烷-4-酮1(1.2g，4.7mmol)按照一般方法F，經快速色譜法(5％的EtOAc/己烷)後，獲得31(954mg，76％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.19(t，J＝7Hz，3H)，1.55(s，3H)，2.26(s，3H)，3.13(q，J＝13Hz，2H)，4.13(q，J＝7Hz，2H)，7.1(m，2H) 7.2(m，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，23.1，30.3，43.6，56.3，61.7，127.2，128.1，130.7，135.4，172.8，194.8.
一般方法G.(±)-4-羥基-5-甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(32)。在-78℃下，向在甲苯(27mL)中的26(500mg，1.7mmol)中加入LiHMDS(4.3mL，4.3mmol，1.0M，在THF中)，將所述溶液緩慢溫熱至-5℃。然後，將溶液倒入到1N的HCl(40mL)中，用EtOAc(3 x 25mL)萃取。合併的有機物進行乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發。快速色譜法(20％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)，得到32(308mg，73％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)(酮式互變體)δ0.86(t，J＝6Hz，3H)，1.19-1.24(m，10H)，1.48-1.53(m，2H)，1.65(s，3H)，1.77-1.85(m，1H)，1.94-2.01(m，1H)，3.36(s，2H)；1H NMR(300MHz，MeOD)

0.87-0.89(m，3H)，1.29(m，10H)，3.29(s，3H)，1.81-1.87(m，2H)；13C NMR(75MHz，MeOD)

δ14.7，23.8，26.4，27.1，30.5，30.6，30.8，33.2，39.8，61.3，103.1(m)，189.8，197.8.(NaCl)3422，1593cm-1； 分析計算值C13H22O2SC，64.4；H，9.15；實測值C，64.3；H，9.10.
(±)-4-羥基-5-甲基-5-己基-5-H-噻吩-2-酮(33)。由28(715mg，2.75mmol)按照一般方法G，經快速色譜法(20％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)後，獲得33(402mg，69％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(酮式互變體)0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.27(bs，8H)，1.68(s，3H)，1.94-2.26(m，2H)，3.35(s，2H).1H NMR(300MHz，MeOD)

δ0.89(t，J＝6.5Hz，3H)，1.21-1.36(m，7H)，1.46-1.54(m，1H)，1.64(s，3H)，1.80-1.90(m，2H)；13C NMR(75MHz，MeOD)δ14.6，23.8，26.3，27.1，30.5，32.9，39.8，61.3，103.5(m)，189.8，197.8.分析計算值C11H18O2SC，61.6；H，8.47；實測值C，61.7；H，8.67.
(±)-4-羥基-3，5-二甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(34)。由30(469mg，1.55mmol)和NaHMDS(3.87mL，3.87mmol，1.0M，在THF中)，按照一般方法G，獲得34(397mg，70％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)

δ0.86(t，J＝6.8Hz，3H)，1.23(s，11H)，1.30-1.45(m，1H)，1.59(s，3H)，1.74(s，3H)，1.84-1.88(m，2H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ7.48，14.0，22.6，25.2，25.9，29.2，29.4，29.6，31.8，38.5，58.2，110.5，180.9，198.0.IR(NaCl)2927，1601cm-1
一般方法H.(±)-4-甲氧基-5-甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(35)。向冷卻至-40℃的在DMF(1.1mL)中的32(70mg，0.27mmol)中加入NaH(14mg，0.35mmol，60％，在礦物油中)，允許所述溶液溫熱並在0℃攪拌30分鐘。然後，直接加入硫酸二甲酯(50μl，0.55mmol)，允許混合物溫熱，並在室溫下攪拌2.5小時。加入NH4Cl(飽和/1NHCl(3∶1，10mL)，所述溶液用Et2O(3 x 10mL)萃取。合併的有機物用H2O(3 x 15mL)洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發。經快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)，得到純的35(59mg，80％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7Hz，3H)；1.07-1.18(m，1H)，1.23(s，10H)，1.43-1.49(m，1H)，1.61(s，3H)，1.74-1.81(m，2H)，3.81(s，3H)，5.29(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，22.6，25.1，26.4，29.1，29.3，29.5，31.8.38.8，59.3，59.4，101.3，187.3，193.8.分析計算值C14H24O2SC，65.6；H，9.50；實測值C，65.8；H，9.50.
(±)-4-甲氧基-5-甲基-5-己基-5-H-噻吩-2-酮(36)。由33(40.3mg，0.19mmol)和硫酸二甲酯(35μL，0.37mmol)，按照一般方H，經快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)後，獲得36(25mg，58％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.7Hz，3H)，1.08-1.13(m，1H)，1.24(s，6H)，1.35-1.39(m，1H)，1.61(s，3H)，1.75-1.82(m，2H)，3.81(s，3H)，5.30(s，1H)；13C NMR(75Mz，CDCl3)δ14.0，22.5，25.1，26.4，29.2，31.5，38.9，59.4，59.4，101.3，187.3，193.8.
(±)-4-甲氧基-3，5-二甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(37)。由34(40mg，0.16mmol)、KH(27mg，0.20mmol，30％，在礦物油中)和硫酸二甲酯(30μL，0.31mmol)，按照一般方法H，獲得37(30mg，71％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.06-1.09(m，1H)，1.24(s，10H)，1.41-1.48(m，1H)，1.55(s，3H)，1.71-1.79(m，2H)，1.98(s，3H)，4.09(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ9.59，14.1，22.6，25.2，26.5，29.2，29.4，29.6，31.8，38.9，58.7，59.8，111.3，180.2，195.7.IR(NaCl)2927，1676，1631，1582cm-1. 分析計算值C15H26O2SC，66.6；H，9.69；實測值C，66.5；H，9.67.
(±)-5-苄基-4-甲氧基-5-甲基-5-H-噻吩-2-酮(38)。由22(50mg，0.23mmol)和硫酸二甲酯(44μL，0.45mmol)，按照一般方法H，獲得38(38mg，74％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.65(s，3H)，3.1(q，J＝7Hz，2H)，3.84(s，3H)，5.19(s，1H)，7.21(m，5H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ26.0，45.0，59.3，59.9，101.9，127.2，128.0，130.4，135.9，186.5，192.9.
(±)-5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸乙酯(39)。由32(39mg，0.16mmol)和溴乙酸乙酯(36μL，0.32mmol)，按照一般方法H，經快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)後，獲得39(39mg，73％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6Hz，3H)，1.24(s，11H)，1.29(t，J＝7Hz，3H)，1.47-1.48(m，1H)，1.68(s，3H) 1.85-1.88(m，2H)，4.25(q，J＝7Hz，2H)，4.54(s，2H)，5.20(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，14.1，22.6，25.1，26.4，29.2，29.3，29.5，31.8，38.8，59.7，61.9，67.9，102.3166.2，185.3，193.4.IR(NaCl)2928，1762，1682，1612cm-1. 分析計算值C17H28O4SC，62.2；H，8.59實測值C，62.2；H，8.67.
(±)-5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸乙酯(40)。由33(20mg，0.09mmol)和溴乙酸乙酯(20μL，0.2mmol)，按照一般方法H，經快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)後，獲得40(18mg，67％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)d 0.86(t，J＝6.8Hz，3H)，1.24-1.27(m，7H)，1.32(t，J＝7Hz，3H)，1.47-1.48(m，1H)，1.68(s，3H)，1.84-1.88(m，2H)；4.25(q，J＝7Hz，2H)，4.54(s，2H)，5.21(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，14.1，22.5，25.1，26.4，29.2，31.6，38.9，59.7，61.9，68.0，102.3，166.2，1853，193.3.IR(NaCl)2932，1762，1682，1612cm-1. 分析計算值C15H24O4SC，59.9；H，8.05實測值C，59.9；H，8.08.
(±)-4-(4-氯-丁氧基)-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(41)。由32(47mg，0.18mmol)和3-碘代-1-氯丁烷(40μL，0.36mmol)，按照一般方法H，經快速色譜法(20％的EtOAc/己烷)後，獲得41(46mg，85％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.07-1.27(m，1H)，1.24(s，10H)1.48-1.51(m，1H)，1.62(s，3H)，1.75-1.82(m，2H)，1.89-1.98(m，4H)，3.59(t，J＝5.9Hz，2H)，3.95-3.98(m，2H)，5.28(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.1，26.0，26.5，29.0，29.2，29.3，29.5，29.7，31.8，44.1，59.6，71.7，101.6，186.1，193.8.分析計算值C17H29ClO2SC，61.3，H，8.78，實測值C，61.9；H，9.01.
(±)-4-(4-氯-丁氧基)-5-甲基-5-己基-5H-噻吩-2-酮(42)。由33(36mg，0.17mmol)和3-碘代-1-氯丁烷(40μL，0.34mmol)，按照一般方法H，經快速色譜法(20％的EtOAc/己烷)後，獲得42(32mg，75％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝5.1Hz，3H)，1.09-1.14(m，1H)，1.25(s，6H)，1.44-1.53(m，1H)，1.63(s，3H)，1.77-1.85(m，2H)，1.90-2.00(m，4H)，3.59(t，J＝4.5Hz，2H)，3.95-3.99(m，2H)，5.28(s，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.7，22.3，25.1，26.1，26.4，29.1，29.1，31.5，39.0，43.9，59.5，71.6，101.5，185.9，192.9.IR(NaCl)2927，1683，1607cm-1. 分析計算值C15H25ClO2SC，59.1；H，8.27；實測值C，59.3；H，8.39.
(±)-4-烯丙氧基-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(43)。由32(31mg，0.12mmol)和烯丙基溴(21μL，0.25mmol)，按照一般方法H，獲得43和44的3∶1的混合物(26mg，74％)，其可以使用快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)進行分離和提純。O-烷基化的產物43。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.3Hz，3H)，1.12-1.17(m，1H)，1.24(s，10H)，1.45-1.49(m，1H)，1.64(s，3H)，1.77-1.84(m，2H)，4.47(d，J＝5.6Hz，2H)，5.29(s，1H)，5.31(d，J＝11Hz，1H)，5.39(d，J＝17Hz，1H)，5.90-5.99(ddd，J＝5.6，11，17Hz，1H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.1，26.5，29.2，29.3，29.5，31.8，38.9，59.7，72.8，102.0，119.5，130.8，185.8，193.8.IR(NaCl)3441，1681，1609cm-1. 分析計算值C16H26O2SC，68.0，H，9.20，實測值C，68.1；H，9.34.(44)C-烷基化的產物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.5Hz，3H)，1.25(m，12H)，1.54(s，3H)，1.79-1.84(m，2H)，2.43-2.47(m，2H)，5.05-5.11(m，2H)，5.57-5.69(1H).
(±)-4-烯丙氧基-5-甲基-5-己基-5H-噻吩-2-酮(45)。由33(270mg，1.3mmol)和烯丙基溴(0.2mL，2.52mmol)，按照一般方法H，獲得45和46的2.3∶1的混合物(205mg，58％)，其可以使用快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)進行分離和提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)(45)(0-烷基化)δ0.84(t，J＝7Hz，3H)，1.09-1.17(m，1H)，1.23(s，6H)，1.40-1.51(m，1H)，1.62(s，3H)，1.73-1.83(m，2H)，4.46(d，J＝5.6Hz，2H)，5.33(d，J＝10Hz，1H)，5.38(d，J＝17Hz，1H)，5.28(s，1H)，5.87-5.98(ddd，J＝5.6，10，17Hz，1H)；13C NMR(75Mz，CDCl3)δ14.0，22.5，25.1，26.5，29.2，31.6，38.9，59.7，72.8，101.9，119.6，130.7，185.8，193.9. 分析計算值C14H22O2SC，66.10；H，8.72；實測值C，66.04；H，8.72.(46)(C-烷基化)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.24(bs，8H)，1.54(s，3H)，1.81-1.84(m，2H)，2.42-2.48(m，2H)，5.05-5.10(m，2H)，5.56-5.67(m，1H).
(±)-4-烯丙氧基-3，5-二甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(47)。(±)-烯丙基-3，5-二甲基-5-辛基-噻吩-2，4-二酮(48)。由34(70mg，0.27mmol)和烯丙基溴(47μL，0.55mmol)，按照一般方法H，獲得47和48的2.3∶1的混合物(C-烷基化數據沒有給出)(67mg，82％)，其可以使用快速色譜法(20％的EtOAc/己烷)進行分離和提純。
(47).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.06-1.48(m，12H)，1.58(s，3H)，1.71-1.82(m，2H)，1.94(s，3H)，4.80-4.82(m，2H)，5.28-5.46(m，2H)，5.89-5.03(m，1H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ9.65，14.0，22.6，25.2，26.6，29.2，29.3，29.6，31.8，39.2，57.5，72.5，118.2.119.5，132.6，179.4，193.8.IR(NaCl)2855.1676.1628.1580cm-1.(48).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.16-1.47(m，15H)，1.57(s，3H)，1.74-1.96(m，2H)，2.42-2.46(m，2H)，.5.04-5.10(m，2H)，5.53-5.67(m，1H).
(±)-5-甲基-5-4-丙-2-炔基氧基-5H-噻吩-2-酮(49)。由33(45mg，0.21mmol)和炔丙基溴(37μl，0.21mmol)，按照一般方法H，獲得49(21mg，40％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)d 0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.11-1.20(m，1H)，1.24(s，6H)，1.41-1.49(m，1H)，1.63(s，3H)，1.76-1.86(m，2H)，2.59(t，J＝2.5Hz，1H)，4.62(d，J＝3.7Hz，1H)，4.63(d，J＝3.7Hz，1H)，5.43(s，1H).
(±)-5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸叔丁酯(50)。由32(60mg，0.25mmol)和溴乙酸叔丁酯(73μL，0.49mmol)，按照一般方法H，經快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)後，獲得50(62mg，70％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.24(s，12H)，1.49(s，9H)，1.68(s，3H)，1.83-1.86(m，2H)，4.43(s，2H)，5.19(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，22.6，25.2，26.3，28.1，29.2，29.3，29.5，31.8，38.9，59.7，68.5，83.4，102.1，165.2，185.5，193.4.分析計算值C19H32O4SC，64.0；H，9.05；實測值C，64.1；H，9.08.
(±)-5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸叔丁酯(51)。由33(169mg，0.79mmol)和溴乙酸叔丁酯(0.23mL，1.58mmol)，按照一般方法H，經快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)，獲得51(206mg，80％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.82(t，J＝6.8Hz，3H)，1.21(s，8H)，1.47(s，9H)，1.64(s，3H)，1.78-1.83(m，2H)，4.41(s，2H)，5.15(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，22.5，25.1，26.3，28.0，29.1，31.5，38.9，59.6，68.4，83.4，102.1，165.2，185.5，193.4.
(±)-5-苯基-5-甲基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸叔丁酯(52)。由22(150mg，0.68mmol)和溴乙酸叔丁酯(0.20mL，1.36mmol)，按照一般方法H，經快速色譜法(20％的EtOAc/己烷)，獲得52(159mg，74％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.49(s，9H)，1.69(s，3H)，3.17(s，2H)，4.44(q，J＝8Hz，2H)，5.13(s，1H)，7.24(m，5H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ25.8，28.1，45.0，60.1，68.4，83.6，102.6，127.2，128.1，130.5，135.9，165.3，184.9，192.8.
一般方法I.(±)-5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸(53)。向溶於CH2Cl2(1.4mL)中的50(65mg，0.18mmol)中加入三氟乙酸(TFA)(0.7mL)，然後將所述溶液在室溫下攪拌4小時。蒸發溶劑，粗物料進行色譜分離(20％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)，得到純的53(48mg，89％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.24(s，11H)，1.47-1.48(m，1H)，1.68(s，3H)，1.84-1.88(m，2H)，4.62(s，2H)，5.31(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.1，26.1，29.2，29.3，29.5，31.8，38.9，60.1，67.7，102.4，169.8，185.8，195.4.IR(NaCl)3442，1645cm-1；分析計算值C15H24O4SC，59.9；H，8.05；實測值C，60.0；H，8.09.
(±)-5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸(54)。由51(177mg，0.54mmol)和三氟乙酸(TFA)(2.61mL)，按照一般方法I，經快速色譜法(20％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)後，獲得54(144mg，98％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.8Hz，3H)，1.24(s，7H)，1.44-1.47(m，1H)，1.68(s，3H)，1.84-1.91(m，2H)，4.62(s，2H)，5.33(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.1，26.1，29.2，31.6，38.9，60.3，67.7，102.4，169.8，185.9，196.1.
(±)-5-苯基-5-甲基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸(55)。由52(117mg，0.35mmol)和三氟乙酸(TFA)(1.4mL)，按照一般方法I，經快速色譜法(30％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)後，獲得55(68mg，70％)。
1H NMR(300MHz，MeOD)δ1.63(s，3H)，3.11(dd，J＝6.8Hz，13.6Hz，2H)，4.59(s，2H)，5.21(s，1H)，7.1(m，5H)；13C NMR(75MHz，MeOD)δ26.7，45.7，61.9，67.1，103.9，128.3，129.1，131.8，137.5，169.3，187.3，195.8.
(±)-N-烯丙基-(5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙醯胺(41)。向冷卻的53(64mg，0.21mmol)在CH2Cl2(1.1mL)中的溶液(0℃)中加入1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)(49mg，0.25mmol)、DMAP(3mg，0.02mmol)和烯丙胺(18μL，0.25mmol)，然後將混合物溫熱至室溫並攪拌12小時。將所述溶液倒入到1N的HCl/(飽和)(1∶3)溶液中，並用Et2O(3 x 10mL)萃取。合併的有機物進行乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發，得到粗的56。快速色譜法(50％的EtOAc/己烷)，得到純的56(50mg，66％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.12-1.22(m，1H)，1.24(s，10H)，1.41-1.51(m，1H)，1.68(s，3H)，1.82-1.87(m，2H)，3.98(app t，J＝6Hz，2H)，4.50(s，2H)，5.20(d，J＝10Hz，1H)，5.22(d，J＝17.3Hz，1H)，5.35(s，1H)，5.80-5.90(ddd，J＝6，10，17Hz，1H)，6.19(bs，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，22.6，25.3，26.5，29.2，29.4，29.5，31.8，39.1，41.6，59.3，70.3，103.4，117.2，133.2，165.3，183.9，192.8.分析計算值C18H29NO3SC，63.7；H，8.61；實測值C，63.4；H，8.67.
一般方法J.(±)-(5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-炔基-甲基氨基乙酸酯(57)。向54(42.4mg，0.15mmol)在CH3CN(0.86mL)的溶液中加入三(2-氧代-3-噁唑啉基)氧化膦3(91mg，0.20mmol)、甲基氨基乙酸酯鹽酸鹽(19.7mg，0.16mmol)和NEt3(43μL，0.31mmol)，接著將溶液在室溫下攪拌20分鐘。將混合物倒入到NH4Cl(飽和)/1N HCl(10mL)的溶液中，並用Et2O(3 x 10mL)萃取。合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發，色譜分離(40-50％的EtOAc/己烷)，得到純的57(43mg，80％)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.8Hz，3H)，1.23-1.26(m，7H)，1.49-1.55(m，1H)，1.65(s，3H)，1.84-1.90(m，2H)，3.79(s，3H)，4.11(d，J＝5Hz，1H)，4.12(d，J＝5Hz，1H)，4.47(s，2H)，5.36(s，1H)，6.76(bs，1H).
(±)-(5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-炔基氨基乙酸酯(58)。向冷卻至0℃的溶於THF/H2O(0.5mL，3∶1)中的57(22mg，0.06mmol)中加入LiOH(3mg，0.07mmol)，接著將此溶液攪拌45分鐘。然後，將所述混合物倒入到HCl(10mL，1N)的溶液中，並用Et2O(3 x10mL)萃取。合併的有機物進行乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發，得到粗的58。快速色譜法(50％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)，得到純的58(19mg，86％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.7Hz，3H)，1.25(s，7H)，1.48-1.52(m，2H)，1.68(s，3H)，2.08-2.10(m，2H)，4.05(s，2H)，4.56(s，2H)，5.41(s，1H).
(±)N-(4-溴丁基)-(5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙醯胺(59)。向54(61mg，0.22mmol)和1-氨基丙醇氫溴酸鹽(50mg，0.23mmol)中，按照一般方法J，經快速色譜法(50％的EtOAc/己烷)，得到59(65mg，74％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.12-1.15(m，1H)，1.23-1.28(s，6H)，1.46-1.53(m，1H)，1.69(s，3H)，1.82-1.88(m，2H)，2.14(quint.J＝6Hz，2H)，3.42(m，2H)，3.54(q，J＝6.3Hz，2H)，4.43(s，2H)，5.35(s，1H)6.45(bs，1H).
(±)N-烯丙基-(5-苯基-5-甲基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙醯胺(60)。向55(72mg，0.26mmol)和烯丙胺(21μL，0.28mmol)中，按照一般方法J，經快速色譜法(梯度10-50％的EtOAc/己烷)後，得到60(39mg，47％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.73(s，3H)，3.17(s，2H)，3.93(m，2H)，4.41(s，2H)，5.22(m，2H)，5.24(s，1H)，5.80(m，1H)，5.83(s，1H)，7.24(m，5H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ26.0，41.6，45.4，59.7，70.3，103.9，117.1，127.5，128.3，130.2，133.3，135.6，165.3，183.4，192.0.
一般方法K.(±)-4-碳酸乙酯-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(61)。向冷卻至-78℃的32(95mg，0.39mmol)在THF(1.8mL)中的溶液中加入LiHMDS(0.58mL，0.58mmol，1M，在THF中)，所述溶液在-78℃下攪拌30分鐘。然後，加入氯甲酸乙酯(60μL，0.62mmol)，混合物轉入到冰浴中，然後緩慢溫熱至室溫。在室溫下1小時後，將所述混合物倒入到HCl(1N)/NH4Cl(飽和)(10mL)的溶液中，並用Et2O(3x 10mL)萃取。合併的有機物乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發，色譜分離(20％的EtOAc/己烷)，得到純的61(111mg，91％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.9Hz，3H)，1.12-1.17(m，11H)，1.38(t，J＝7Hz，3H)，1.42-1.50(m，1H)，1.67(s，3H)，1.82(d，J＝9Hz，1H)，1.85(d，J＝9Hz，1H)，4.33(q，J＝7Hz，2H)，6.38(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，14.0，22.6，25.2，25.8，29.1，29.2，20.4，31.8，38.4，60.1，66.0，112.8，150.2，175.6，193.9.IR(NaCl)2928，1782，1690，1625cm-1. 分析計算值C16H26O4SC，61.1；H，8.33；實測值C，61.5；H，8.32.
(±)-4-碳酸甲酯-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(62)。由32(73mg，0.30mmol)和氯甲酸甲酯(37μL，0.48mmol)，按照一般方法K，經快速色譜法(20％的EtOAc/己烷)後，獲得62(63mg，70％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7Hz，3H)，1.15-1.21(m，1H)，1.22(s，10H)，1.41-1.51(m，1H)，1.66(s，3H)，1.81(d，J＝9Hz，1H)，1.83(d，J＝9Hz，1H)，3.92(s，3H)，6.39(s，1H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.2，25.9，29.2，29.3，29.4，31.8，38.4，56.2，60.2，112.9，150.9，175.5，194.1.IR(NaCl)3382，1626，1560，1542cm-1. 分析計算值C15H24O4SC，59.9；H，8.05；實測值C，60.3；H，8.10.
(±)-4-碳酸烯丙酯-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(63)。由32(51.5mg，0.21mmol)和氯甲酸烯丙酯(33μL，0.32mmol)，按照一般方法K，經快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)後，獲得63(46.3mg，67％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7，3H)，1.16-1.23(bs，10H)，1.41-1.51(m，2H)，1.67(s，3H)，1.81-1.87(m，2H)，4.74(app dt，J＝6，1.3Hz，2H)，5.37(app dq，J＝10.3，1.02Hz，1H)，5.44(appdq，J＝15.9，1.02Hz，1H)，5.90-6.0(m，1H)，6.39(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)14.0，22.6，25.2，25.8，29.1，29.2，29.4，31.8，38.4，60.1，70.2，112.9，120.6，130.23，150.0，175.5，193.7.IR(NaCl)2927，1782，1691，1606cm-1.分析計算值C17H26O4SC，62.5；H，8.03；實測值C，62.6；H，8.07.
(±)-4-丙醯基5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(64)。由32(40mg，0.17mmol)和丙醯氯(20μL，0.22mmol)，按照一般方法K，經快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)後，獲得64(23.1mg，47％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7Hz，3H)，1.12-1.25(m，13H)，1.42-1.49(m，2H)，1.64(s，3H)，1.78-1.84(m，2H)，2.57(q，J＝7.5Hz，2H)，6.39(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ8.71，14.0，22.6，25.1，25.9，27.9，29.1，29.3，29.5，31.8，38.6，60.4，113.8，169.1，177.0，179.9.IR(NaCl)2928，1787，1688cm-1；分析計算值C16H26O3SC，64.4；H，8.78；實測值C，64.3；H，8.89.
(±)-4-碳酸乙酯-5-苯基-5-甲基-5H-噻吩-2-酮(65)。由22(50mg，0.23mmol)和氯甲酸乙酯(35μL，0.36mmol)，按照一般方法K，獲得65(67mg，88％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.31(t，J＝7Hz，3H)，1.69(s，3H)，3.15(s，2H)，4.36(q，J＝7Hz，2H)，6.33(s，1H)，7.18-7.27(m，5H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，25.3，44.6，60.6，66.2，113.2，127.4，128.2，130.3，135.4，150.1，175.1，193.
4-羥基-3-(1-羥乙基)-5-甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮。(66，67)。向溶於己烷的32(247mg，1.02mmol)中加入三乙胺(0.23mL，1.68mmol)和三甲基甲矽烷基氯(0.21mL，1.64mmol)，將所述溶液在室溫下攪拌4h。混合物通過硅藻土過濾，蒸發，得到5-甲基-5-辛基-4-三甲基矽烷氧基-5-H-噻吩-2-酮。在-78℃下，向TiCl4(0.7mL，0.7mmol)在CH2Cl2(1.95mL)中的溶液中加入乙醛(54μL，0.97mmol)，然後將這種溶液在-78℃下攪拌5分鐘。然後，將溶於CH2Cl2(0.4mL)的5-甲基-5-辛基-4-三甲基矽烷氧基-5-H-噻吩-2-酮通過導管導入到TiCl4/乙醛溶液中，得到一種亮橙色。將此混合物溫熱，並在0℃下攪拌20分鐘。將所述混合物倒入到NH4Cl(飽和)(15mL)中，並用CH2Cl2(3 x 15mL)進行萃取。合併有機物，乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發。快速色譜法(10％的EtOAc/己烷)，得到純的66(34mg)和67(24mg)(50％)。(66) 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.05-1.08(m，1H)，1.24(bs，11H)，1.49(d，J＝6.5Hz，3H，旋轉異構體)1.55(d，J＝5.2Hz，3H，旋轉異構體)，1.62(s，3H)，1.78-1.82(m，2H)，4.68(q，J＝6.5Hz，1H，旋轉異構體)，5.04(q，J＝5.2Hz，1H，旋轉異構體).HRMS(ES)m/z 計算值C16H28O3SNa+(M+CH2+Na+)323.1660觀察值323.1660.(67)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.9Hz，3H)，1.24(bs，12H)，1.47(d，J＝6.6Hz，3H,旋轉異構體)，1.54(d，J＝5.4Hz，3H，旋轉異構體)，1.59(s，3H)，1.76-1.82(m，2H)，4.65(q，J＝6.3Hz，1H)，5.06(q，J＝5.4Hz，1H).HR(ES)m/z 計算值C16H28O3SNa+(M+CH2+Na+)323.1660觀察值323.1660.
一般方法L.3-炔基-4-羥基-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮。(68)。在0℃下，向在CH2Cl2(1.9mL)中的32(94mg，0.38mmol)中加入NEt3(58μL，0.42mmol)、二甲基氨基吡啶(DMAP)(19mg，0.15mmol)和乙酸酐(43μL，0.47mmol)。所述溶液在0℃攪拌15分鐘，然後進行溫熱，並在室溫下攪拌2-14h，或者直到TLC表明反應完成為止。將所述混合物倒入到NH4Cl(飽和)/HCl(1N)(3∶1，8mL)中，並用CH2Cl2(3 x 10mL)萃取。合併有機物，乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發，得到粗的68。快速色譜法30％的EtOAc/2％的AcOH/己烷，(rf＝0.44)，得到純的68(83mg，78％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.84(m，3H)，1.22(bs，10H)，1.48(m，2H),1.65(s，3H)，1.77-1.92(m，2H)，2.55(s，3H).13C NMR (75MHz，CDCl3)δ13.9，22.6，23.8，25.1，26.3，29.1，29.2，29.5，31.7，39.4，59.7，109.7，190.5，195.5，204.9.HRMS (EI)m/z計算值C15H24O3S+(M+)284.1441觀察值284.1414.
4-羥基-5-甲基-5-辛基-3-(2，2，2-三氟-炔基)-5H-噻吩-2-酮。(69)。由32(90mg，0.37mmol)、三氟醋酐(114μL，0.81mmol)、二甲基氨基吡啶(DMAP)(18mg，0.15mmol)和NEt3(108μL，0.77mmol)，按照一般方法L，經快速色譜法(40％的己烷/10％的THF/2％的AcOH/EtOAc)後，獲得69(107mg，86％)。
1H NMR(300MHz，MeOD)d 0.85(t，J＝6.9Hz，3H)，1.09(m，1H)，1.21(bs，11H)，1.38(s，3H)，1.51-1.60(m，1H)，1.65-1.71(m，1H).HRMS(EI)m/z計算值C15H21F3O3S+(M+)338.1158觀察值338.1171.
4-羥基-5-甲基-5-辛基-2-氧代-2，5-二氫-噻吩-3-羧酸甲酯(70)。由32(91mg，0.37mmol)、氯甲酸甲酯(63μL，0.81mmol)、二甲基氨基吡啶(DMAP)(23mg，0.18mmol)和NEt3(108μL，0.77mmol)，按照一般方法L，經快速色譜法(30％的EtOAc/2％的AcOH/己烷-10％的THF/2％的AcOH/EtOAc)後，獲得70(66mg，59％，79％基於回收的原料)。
1HNMR(300MHz，MeOD)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.20(bs，12H)，1.35(s，3H)，1.55(m，1H)，1.71-1.75(m，1H)，3.59(s，3H)；13C NMR(75MHz，MeOD)δ13.3，21.8，24.4，27.0，28.5，28.6，29.0，30.2，31.0，50.4，58.3，124.6，168.1，187.7，196.7.HRMS(EI)m/z計算值C15H24O4S+(M+)300.1389觀察值300.1375.
異丙基-氨基甲酸2-甲基-2-辛基-5-氧代-2，5-二氫-噻吩-3-基酯(71)。向溶於己烷的32(46mg，0.19mmol)中加入三乙胺(43μL，0.31mmol)和三甲基甲矽烷基氯(36μL，0.29mmol)，將所述溶液在室溫下攪拌4h。混合物通過硅藻土過濾，蒸發，得到5-甲基-5-辛基-4-三甲基矽烷氧基-5-H-噻吩-2-酮，其再溶解在CH2Cl2(0.4mL)中。向此混合物中加入異氰酸異丙酯(19.2mL，0.19mmol)，所述溶液在室溫下攪拌2小時。加入NH4Cl(飽和)(5ml)，接著將所述混合物用CH2Cl2(3x 10mL)萃取。合併有機物，乾燥(MgSO4)，過濾，蒸發，得到粗的71。快速色譜法(20％的EtOAc/2％的AcOH/己烷)，得到純的71(35mg，60％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7.0Hz，3H)，1.14-1.24(m，17H)，1.45(m，1H)，1.63(s，3H)，1.76-1.79(m，2H)，3.81-3.88(m，1H)，5.16(d，J＝7Hz，1H)，6.33(s，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，20.4，22.5，22.8，25.1，25.9，29.1，29.3，29.5，31.8，38.7，44.0，60.2，111.6，149.7，176.2，194.5.
一般方法M.(±)-(5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸-N′-(2-糠)-醯肼(72)。向53(100mg，0.33mmol)在CH2Cl2(1.61mL)中的冷卻溶液(0℃)中加入1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)(128mg，0.43mmol)、DMAP(6.0mg，0.05mmol)和2-糠醯肼(54mg，0.43mmol)。將此混合物在0℃下攪拌30分鐘，然後溫熱至室溫並攪拌12h。將所述溶液倒入到NH4Cl(10mL，飽和)中，並用CH2Cl2(3 x 10mL)萃取。合併的有機物進行乾燥(Na2SO4)，過濾，蒸發，得到粗的72。快速色譜法(10％的EtOAc/己烷)，得到純的72(91mg，68％)。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.84(t，J＝6.6Hz，3H)，1.21(m，11H)，1.43-1.47(m，1H)，1.66(s，3H)，1.81-1.86(m，2H)，4.64(s，2H)，5.42(s，1H)，6.47(dd，J＝1.6，3.6Hz，1H)，7.16(d，J＝4Hz，1H)，7.45(m，1H)，9.32(d，J＝4Hz，1H)，9.44(d，J＝4Hz，1H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.0，22.6，25.3，26.0，29.2，29.3，29.5，31.7，38.8，59.7，69.1，103.0，112.3，116.5，145.1，145.4，156.4，164.2，184.8，193.9.
(±)-(5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸-N′-乙醯基醯肼(73)。由53(100mg，0.33mmol)和乙酸醯肼(26.8mg，0.36mmol)，按照一般方法M，經快速色譜法(2％的AcOH/EtOAc)，獲得73(70.4mg，60％)。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7.2Hz，3H)，1.23(m，11H)，1.48-1.52(m，1H)，1.67(s，3H)，1.84-1.86(m，2H)，2.07(s，3H)，4.64(s，2H)，5.42(s，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，20.6，22.6，25.2，26.0，29.2，29.3，29.5，31.8，38.8，59.8，68.9，102.9，163.1，168.1，184.9，194.2.
(±)-(5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸-N′-(4-氯-苯基)-醯肼(74)。由53(100mg，0.33mmol)和4-氯苯肼鹽酸鹽(76.8mg，0.43mmol)，按照一般方法M，經快速色譜法(50％的EtOAc/己烷)，獲得74(74mg，53％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6Hz，3H)，1.24(m，11H)，1.46-1.54(m，1H)，1.71(s，3H)，1.82-1.90(m，2H)，4.57(s，2H)，5.39(s，1H)，6.75(d，J＝8.8Hz，2H)，7.18(d，J＝8.8Hz，2H)，7.38(s，1H)，8.09(s，1H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.3，26.1，29.2，29.3，29.5，31.8，38.8，59.7，69.7，103.2，114.7，126.4，145.8，129.2，165.9，184.3，193.5.IR(NaCl)2957，1695，1658，1609cm-1.
(±)-N-烯丙基-N-甲基-(5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙醯胺(75)。由53(83mg，0.28mmol)和N-甲基，N-allyalmine(29μL，0.30mmol)，按照一般方法M，經快速色譜法(40％的EtOAc/己烷)，獲得75(51mg，52％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.83(t，J＝6.9Hz，3H)，1.22(m，11H)，1.43-1.47(m，1H)，1.67(s，3H)，1.82-1.86(m，2H)，旋轉異構體12.91(s，3H)，旋轉異構體22.95(s，3H)，旋轉異構體13.84(d，J＝4.8.Hz，2H)，旋轉異構體23.98(d，J＝6Hz，2H)，旋轉異構體14.62(s，2H)，旋轉異構體24.65(s，2H)，5.12-5.28(m，2H)，旋轉異構體15.18(s，1H)，旋轉異構體25.25(s，1H)，5.65-5.81(m，1H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.0，22.5，25.1，26.2，29.1，29.3，29.4，31.7，33.4(旋轉異構體233.9)，38.8，50.2(旋轉異構體251.0)，59.7，69.0(旋轉異構體269.3)，102.3，117.4(旋轉異構體2118.2)，131.6(旋轉異構體2131.8)，164.5(旋轉異構體2164.9)，185.5(旋轉異構體2185.6)，193.4.
(±)-4-苄氧基-3，5-二甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(76)。由32(50mg，0.21mmol)和苄基溴(37mL，0.31mmol)，按照一般方法H，經快速色譜法(15％的EtOAc/己烷)，獲得76(49mg，75％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.24(m，11H)，1.41-1.48(m，1H)，1.66(s，3H)，1.79-1.86(m，2H)，4.98(s，2H)，5.39(s，1H)，7.31-7.42(m，5H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.0，26.4，29.1，29.3，29.4，31.8，38.8，59.7，74.0，102.2，127.6，128.8，128.8，134.3，185.8，194.1.IR(NaCl)2928，1681，1610cm-1. 參考文獻 1.Strijtveen，B.；Kellogg，R.M.Tetrahedron.1987，43，5039-5054。
2.Sasaki，H.；Oishi，H.；Hayashi，T.；Matsuura，I.；AndoK.；Sawada，M.J.Antibiotics 1982。
3.Kunieda，T.；Nagamatsu，T.；Higuchi，T.；Hirobe，M.Tetrahedron Lett.1988，29，2203-2206。
生物和生化方法 從ZR-75-1人乳腺癌細胞中提純FAS 人FAS從培養的ZR-75-1人乳腺癌細胞中提純，該細胞從美國典型培養物保藏中心獲得。該方法改編自Linn等人1981和Kuhajda等人1994的方法，使用低滲性裂解、連續性聚乙二醇(PEG)沉澱以及陰離子交換色譜。ZR-75-1細胞在37℃下用5％的CO2在含10％胎牛血清、青黴素和鏈黴素的RPMI培養基中進行培養。
將10個T150瓶的匯合細胞用1.5ml裂解緩衝液(20mM Tris-HCl，pH 7.5，1mM EDTA，0.1mM苯甲磺醯氟(PMSF)，0.1％ Igepal CA-630)溶解，在冰上勻漿20次的dounce裂解。在4℃下，將裂解產物在JA-20離心機轉子(Beckman)中以20,000rpm離心30分鐘，上清液用裂解緩衝液加至42ml。將50％的PEG 8000在裂解緩衝液中的溶液緩慢地加入到上清液上，使其最終濃度為7.5％。在4℃搖動60分鐘後，溶液在4℃下在JA-20離心機轉子(Beckman)中以15,000rpm離心30分鐘。然後，將固體PEG 8000加入到上清液中，使其最終濃度為15％。重複如上所述的搖動和離心後，粒狀沉澱在4℃下在10ml緩衝液A(20mMK2HPO4，pH 7.4)中再懸浮過夜。0.45μM過濾後，將蛋白質溶液應用於Mono Q5/5陰離子交換柱(Pharmacia)。柱子用緩衝液A以1ml/分鐘洗脫15分鐘，接著結合材料以在60分鐘內升至1M KCl的線性60-ml梯度溶液洗脫。FAS(MW-270kD)通常在0.25M KCl洗脫在三個0.5ml級份中，這些級份使用4-15％的帶有考馬斯(Bio-Rad)G250著色劑(Bio-Rad)的SDS-PAGE進行確定。FAS蛋白濃度使用考馬斯加蛋白測定試劑(Pierce)根據廠商的指示使用BSA作為標準進行測定。此方法製得基本上純的FAS(＞95％)的製備物，根據Coomassie-染色凝膠進行判斷。
FAS酶活性的測定以及化合物IC50的測定 通過在OD340處，在96孔板中，使用分光光度法監測NADPH的丙二醯基-CoA依賴性氧化(Dils等人和Arslanian等人，1975)，來測定FAS活性。每個孔中含有2μg純化FAS、100mM K2HPO4、pH 6.5、1mM二硫蘇糖醇(Sigma)和187.5μM β-NADPH(Sigma)。以2、1和0.5mg/ml在DMSO中製備抑制劑的儲備液，當每孔中加入1μL儲備液時，最終濃度為20、10和5μg/ml。對於每一個實驗，使用淺藍菌素(Sigma)作為陽性對照，以及DMSO對照、抑制劑和空白(沒有FAS酶)所有都是一式兩份。
在Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度計上進行測定。將含FAS、緩衝液、抑制劑和對照物的平板放在加熱至37℃的分光光度計中。使用動力學方案，使含100μl 100mM的K2HPO4，pH 6.5的孔為空白，一式兩份，平板在OD340處以10秒間隔讀數5分鐘，以測定任何NADPH的丙二醯基-CoA非依賴性氧化。將平板從分光光度計上移去，除空白外，每個孔中加入丙二醯基-CoA(67.4μM，每孔的最終濃度)和炔基-CoA(61.8μM，每孔的最終濃度)。使用動力學方案，如同上述對平板進行再次讀數，以測定丙二醯基-CoA依賴性NADPH氧化。丙二醯基-CoA依賴性NADPH氧化和非丙二醯基-CoA依賴性NADPH氧化之間的ΔOD340的差異是特定的FAS活性。由於FAS製劑的純度，非丙二醯基-CoA依賴性NADPH氧化是可忽視的。
化合物抗FAS的IC50通過對每個所測抑制劑濃度的ΔOD340進行繪圖，進行線性回歸併計算最佳擬合線，r2值和95％的置信區間來測定。化合物產生50％FAS抑制的濃度是IC50。對於每一化合物濃度，由SOFTmax PRO軟體(Molecular Devices)，描繪ΔOD340對時間圖。使用Prism 3.0版(Graph Pad軟體)計算線性回歸、最佳擬合線，r2和95％置信區間的計算。
結晶紫細胞生長試驗 結晶紫試驗測定細胞生長而不是細胞毒性。此試驗使用在96孔板中的結晶紫染色的固定細胞，隨後進行溶解並在分光光度計上測定OD490。OD490相應於所測的每單位時間的細胞生長。細胞用目的化合物或載體對照進行處理，計算每個化合物的IC50。
為了測定特定化合物抗癌細胞的細胞毒性，將5 x 104 MCF-7人乳腺癌細胞(從美國典型培養物保藏中心獲得)平鋪在24孔板中，每個孔中含帶有10％胎牛血清、青黴素和鏈黴素的DMEM培養基。在37℃和5％CO2下過夜培養後，將溶於DMSO中的測試化合物以50、40、30、20和10μg/ml的濃度一式三份加入到孔中，加入量為1μl。如果需要的話，測試其它的濃度。將1μl DMSO加入到一式三份孔中，是載體對照。使用C75以10和5μg/ml一式三份作為陽性對照。
孵育72小時後，每個孔中的細胞用0.5ml結晶紫染色劑(0.5％在25％甲醇中)染色。10分鐘後，衝洗孔，風乾，然後振動下用0.5ml10％的十二烷基硫酸鈉溶解2小時。從每個孔中轉移100μl到96孔板後，平板在OD490處在Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度計上進行讀數，使用SOFTmax Pro軟體(Molecular Devices)計算平均OD490值，使用Prism 3.02版(Graph Pad軟體，San Diego)通過線性回歸分析確定IC50值。
XTT細胞毒性試驗 XTT試驗是[51Cr]釋放細胞毒性試驗的非放射性替代。XTT是一種四唑鹽，其唯一由代謝活性的活細胞還原成甲

染料。XTT的還原通過分光光度法以OD490-OD650進行測定。
為了測定特定化合物抗癌細胞的細胞毒性，將9 x 103 MCF-7人乳腺癌細胞(從美國典型培養物保藏中心獲得)，平鋪在96孔板中，每個孔中含帶有10％胎牛血清、胰島素、青黴素和鏈黴素的DMEM培養基。在37℃和5％CO2下過夜培養後，將1μl體積溶於DMSO中的測試化合物以下列濃度加入到孔中80、40、20、10、5、2.5、1.25和0.625μg/m l，一式三份。如果需要的話，測試其它濃度。將1μl DMSO加入到一式三份孔中，是載體對照。使用C75以40、20、10、15、12.5、10和5μg/ml一式三份作為陽性對照。孵育72小時後，按照廠商的指示(細胞增殖試劑盒II(XTT)Roche)，將細胞與XTT試劑一起培養4小時。在OD490和OD650處在Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度計上對平板讀數。三個含XTT試劑而沒有細胞的孔用作板空白。XTT數據以OD490-OD650的方式報導。使用SOFTmax Pro軟體(MolecularDynamics)計算平均值和平均值的標準偏差。
化合物的IC50被定義為與對照相比，引起OD490-OD650 50％減少的藥物濃度。對於每一化合物濃度，由SOFTmax PRO軟體(MolecularDevices)計算OD490-OD650。通過線性回歸將以對照百分比表示的FAS活性對藥物濃度繪圖，計算IC50。使用Prism 3.0版(Graph Pad軟體)測定線性回歸、最佳擬合線、r2和95％置信區間。
摻入到總脂質中的[14C]乙酸的測定和化合物IC50的測定 本試驗測定[14C]乙酸向總脂質中的摻入，並且是體外脂肪酸合成路徑活性的尺度。用它來測量體外脂肪酸合成的抑制。
將如上所述培養的MCF-7人乳腺癌細胞，以每孔5 x 104細胞平鋪在24孔板中。過夜孵育後，將溶解在DMSO中的測試化合物以5、10和20μg/ml一式三份加入，如有必要使用更低的測試濃度。對於載體對照，將DMSO加入到一式三份孔中。使用C75以5和10μg/ml一式三份作為陽性對照。孵育4小時後，每個孔中加入0.25μCi的[14C]乙酸(10μl體積)。
再孵育2小時後，從孔中吸出培養基，向每個孔中加入800μL的氯仿∶甲醇(2∶1)和700μL的4mM的MgCl2。將每個孔中的內含物轉到1.5Eppendorf管中，在高速Eppendorf微量離心機5415D中全速旋轉2分鐘。除去含水層(上部)後，向每個管中加入另外700μL的氯仿∶甲醇(2∶1)和500μl的4mM的MgCl2，然後如上所述離心1分鐘。用巴斯德吸管除去水層並棄去。向每個管中再加入另外400μL的氯仿∶甲醇(2∶1)和200μl的4mM的MgCl2，然後，離心，棄去水層。將底層(有機)相轉移到閃爍瓶中，在40℃和N2氣下乾燥。一旦乾燥，加入3ml的閃爍劑(APB#NBC5104)，對瓶進行14C計數。貝克曼閃爍計數器計算一式三份的平均cpm值。
化合物的IC50被定義為與對照組相比，引起[14C]乙酸向脂質中摻入減少50％的藥物濃度。通過對每個所測試的抑制劑濃度的平均cpm繪圖，進行線性回歸併計算最佳擬合線、r2值和95％的置信區間，來測定該值。對於每個化合物濃度，通過貝克曼閃爍計數器(型號LS6500)計算平均cpm值。使用Prism 3.0版(Graph Pad軟體)計算線性回歸、最佳擬合線r2和95％置信區間的求解。
肉鹼棕櫚醯轉移酶-1(CPT-1)試驗 CPT-1催化長鏈脂肪酸從醯基-CoA向醯基-肉鹼的ATP依賴性轉移，丙二醯基-CoA抑制該轉移。由於CPT-1活性需要線粒體膜，因此酶活性在可通透細胞或線粒體中進行測定。本試驗使用可通透細胞測定[甲基-14C]L-肉鹼向有機可溶性醯基-肉鹼衍生物的轉移。
將MCF-7細胞以106細胞平鋪在24孔板中的含10％胎牛血清的DMEM中，對照、藥物和丙二醯基-CoA一式三份。開始試驗前兩小時，以標明的濃度加入藥物，這些濃度由在DMSO中的濃度為10mg/ml的儲備液配製得到，載體對照由不含藥物的DMSO組成。由於丙二醯基-CoA不能進入完整細胞，它僅僅加入到沒有與藥物進行預孵育的細胞的試驗緩衝液中。在37℃孵育過夜後，除去培養基，用700μl試驗緩衝液代替，其中所述的試驗緩衝液由下面組成50mM咪唑、70mMKCl、80mM蔗糖、1mM EGTA、2mM MgCl2、1mM DTT、1mM KCN、1mM ATP、0.1％無脂肪酸的牛血清清蛋白、70μM棕櫚醯基-CoA、0.25μCi[甲基-14C]L-肉鹼、40μg洋地黃皂苷，具有DMSO載體對照、或20μM丙二醯基-CoA。在試驗緩衝液中的藥物的濃度和DMSO與在2小時預孵育中使用的相同。在37℃孵育6分鐘後，通過加入500μl冰冷的4M高氯酸停止反應。然後，採集細胞，以13,000xg離心5分鐘。粒狀沉澱用500μl冰冷的2mM高氯酸洗滌，並再次離心。所得粒狀沉澱再懸浮在800μL dH2O中，用150μl丁醇萃取。丁醇相通過液體閃爍法進行計數，並代表醯肉鹼衍生物。
新FAS抑制劑的體重減輕篩選 使用Balb/C小鼠(Jackson實驗室)進行初始體重減輕篩選。將動物養在溫度和12小時白天/黑夜循環的房間中，給予小鼠食物和水，自由進食。每個測試化合物和載體對照使用三隻小鼠，每個實驗一式三份。在實驗中，將每個測試化合物的小鼠分開放養，三隻小鼠共用一個籠。將化合物以10mg/ml的濃度稀釋在DMSO中，小鼠通過腹膜內注射給予60mg/kg在約100μl DMSO中的劑量或者僅僅給予載體。多天觀察小鼠，並對小鼠進行稱重；用Excel(微軟公司)計算平均重量和標準誤差。繼續實驗，直到所治療的動物的體重達到治療前的體重為止。
選擇化合物在代謝籠中放養的動物中進行測試。動物的劑量與篩選實驗相同，三隻動物放養在一隻代謝蘢中。每日測定動物的體重、水和食物的消耗量、以及尿和糞便的產生。化合物21和44的測試結果表示在圖10中。
抗微生物性質 使用肉湯微稀釋試驗來評價化合物的抗微生物活性。化合物以二倍系列稀釋進行測定，抑制可見生長的濃度(OD600為對照的10％)被定義為MIC。測試的微生物包括金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)(ATCC#29213)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)(ATCC#29212)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)(ATCC#27853)和大腸桿菌(Escherichia coli)(ATCC#25922)。試驗在兩種生長培養基中進行，培養基分別為米勒欣頓肉湯(Mueller Hinton Broth)和胰酶解酪蛋白大豆肉湯(Trypticase Soy Broth)。
血液(Tsoy/5％的綿羊血)瓊脂平板從維持在含10％甘油的T大豆肉湯中的冰凍貯備液中接種，然後在37℃孵育過夜。將菌落懸浮在滅菌肉湯中，以便濁度與0.5麥克法蘭標準的濁度相當。將接種物以1∶10稀釋在滅菌肉湯中(米勒欣頓或胰酶解酪蛋白大豆)，在96孔板的每個孔中分配195u l。向孔中加入5ul體積下列濃度的溶於DMSO中的測試化合物25、12.5、6.25、3.125、1.56和0.78ug/ml一式兩份。如果需要的話，測試其它濃度。加入一式兩份孔的5ul DMSO是載體對照。在每次測試中包括陽性對照化合物--萬古黴素(糞腸桿菌和金黃色葡萄球菌)和託普黴素(大腸桿菌和綠膿桿菌)的系列稀釋。
在37℃孵育24小時後，平板在OD600處在Molecular DevicesSpectraMax Plus分光光度計上進行讀數。使用SOFTmax Pro軟體(Molecular Devices)計算平均OD600值，使用Prism 3.02版(Graph Pad軟體，聖地牙哥)通過線性回歸分析確定MIC值。MIC被定義為產生相當於10％的載體對照讀數的OD600讀數所需的化合物濃度。
抗腫瘤活性的體內試驗 本實驗的結果表示在圖11中。使用人結腸癌細胞系，HCT-116在nu/nu雌性小鼠(Harlan)中的皮下側面異種移植來研究化合物36在體內的抗腫瘤作用。所有動物試驗遵守規定的動物護理指南。將107HCT-116細胞(～0.1ml壓緊細胞)從補充有10％FBS的DMEM中的培養物中異種移植到10隻無胸腺小鼠中。接種約4天後，當可測量的腫瘤形成時，開始處理。化合物36(10mg/kg)稀釋成20μl DMSO中，並通過腹膜內注射i.p.處理。5隻動物在圖11中箭頭所示的天腹膜內注射接受JMM-II-265，以及5隻動物接受DMSO對照。在所示天測量腫瘤。誤差線代表平均標準誤差。
生物試驗的結果










































權利要求
1.下式的化合物
其中
R1是H
R2是-OC(O)NR5R6，其中R5和R6各自獨立地是H、C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R5和R6各自可以任選含有滷原子；
R3是C1-C10烷基；以及
R4是C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基。
2.根據權利要求1的化合物，其中R5是H、C1-C10烷基、環烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基。
3.根據權利要求2的化合物，其中R5是H或C1-C10烷基。
4.根據權利要求1的化合物，其中R4是C1-C10烷基、環烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基。
5.根據權利要求4的化合物，其中R4是C1-C10烷基。
6.根據權利要求1的化合物，其中R3是-CH3。
7.根據權利要求1的化合物，其中R5是-nC6-C8烷基。
8.根據權利要求1的化合物，其中所述的化合物是
9.藥物組合物，其包含藥物稀釋劑和下式IV的化合物
其中
R21是H、-CH-(OH)-CH3或-C(O)R29，其中R29是-CH3、-CF3或-OCH3；
R22是-OH、-OR27、-OCH2C(O)R27、-OCH2C(O)NHR27、-OC(O)R27、-OC(O)OR27、-OC(O)NHNH-R27或-OC(O)NR27R28，其中R27和R28各自獨立地是H、C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R27和R28各自可以任選含有滷原子；
R23是C1-C10烷基；以及
R24是C1-C20烷基、環烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基。
10.根據權利要求9的藥物組合物，其中所述化合物選自下組化合物
11.藥物組合物，其包含藥物稀釋劑和如下結構的化合物
12.藥物組合物，其包含藥物稀釋劑和式I的化合物。
13.化合物在製備用於誘導體重減輕的藥物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
14.根據權利要求13的用途，其中所述藥物用於對人給藥。
15.根據權利要求13的用途，其中所述藥物用於對動物給藥。
16.根據權利要求14的用途，其中所述化合物選自下組化合物
17.根據權利要求15的用途，其中所述化合物選自下組化合物
18.化合物在製備用於治療癌症的藥物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
19.根據權利要求18的用途，其中所述藥物用於對人給藥。
20.根據權利要求18的用途，其中所述藥物用於對動物給藥。
21.根據權利要求19的用途，其中所述化合物選自下組化合物
22.根據權利要求20的用途，其中所述化合物選自下組化合物
23.化合物在製備用於刺激CPT-1的藥物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
24.根據權利要求23的用途，其中所述藥物用於對人給藥。
25.根據權利要求23的用途，其中所述藥物用於對動物給藥。
26.根據權利要求24的用途，其中所述化合物是
27.根據權利要求25的用途，其中所述化合物是
28.化合物在製備用於抑制神經肽-Y的藥物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
29.根據權利要求28的用途，其中所述藥物用於對人給藥。
30.根據權利要求28的用途，其中所述藥物用於對動物給藥。
31.化合物在製備用於抑制脂肪酸合酶活性的藥物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
32.根據權利要求31的用途，其中所述藥物用於對人給藥。
33.根據權利要求31的用途，其中所述藥物用於對動物給藥。
34.化合物在製備用於抑制人或動物中侵入性微生物細胞生長的藥物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
35.根據權利要求34的用途，其中所述藥物用於對人給藥。
36.根據權利要求34的用途，其中所述藥物用於對動物給藥。
37.根據權利要求35的用途，其中所述化合物選自下組化合物
38.根據權利要求36的用途，其中所述化合物選自下組化合物
全文摘要
本發明涉及新化合物、含該化合物的藥物組合物以及該化合物的應用方法。所述新化合物例如為式IV的化合物，式中各變量的含義如說明書中所定義。本發明的化合物及其組合物可用於治療癌症、引起體重減輕、治療由微生物引起的感染、抑制神經肽-Y和/或脂肪酸合酶以及刺激CPT-1。
文檔編號A61P43/00GK101602756SQ200910203849
公開日2009年12月16日 申請日期2003年7月9日 優先權日2002年7月9日
發明者F·P·庫哈傑達, S·M·麥德格哈爾奇, J·M·麥科法登, J·圖帕裡, C·A·唐森德 申請人:法斯根公司, 約翰斯霍普金斯大學