一種消除流體微生物和有害物質的方法
2023-06-20 13:24:11
專利名稱:一種消除流體微生物和有害物質的方法
技術領域：
本發明涉及流體淨化領域，尤其是一種消除流體微生物和有害物質的方法。
背景技術：
含有選自蛋白、血液和血液製品的一種和多種成分、果汁、水及其它水性組合物，如全血、壓緊紅細胞、血小板和血漿等流體在保存、運輸過程中會受到不同程度的汙染，加之來自供體的感染，流體中微生物和有害物質的含量都會超過使用標準。被汙染的流體製成藥劑或作為藥物介質如用於治療血液病患者或具有嚴重免疫系統缺陷的患者時，其中的微生物使患者極易被感染，而其中地有害物質會造成機體器官組織的負擔甚至組織造成傷害，不僅對治療疾病無益，反而加重，病情嚴重者甚至會造成機體組織不可逆轉性的傷害至死亡；被汙染的流體應用於生物學研究、藥理學研究中，會使研究結果變得不確定甚至誤導，而造成造成嚴重後果和巨大的經濟損失。
因此在消除流體中的微生物，即寄生蟲、各類細菌、病毒、衣原體、支原體、噬菌體、螺旋體等方面，人們嘗試了多種方法，在該領域也取得了進展，諸如採用化學藥劑滅活微生物，藥物滅活微生物，光化學法滅活微生物等。公開號為CN1287496A的中國發明專利申請公開說明書公開了一種採用內源性光敏劑滅活生物汙染物的方法，主要步驟是將有效無毒量的內源光敏劑加入流體中，使所述流體暴露於足以活化所述內源光敏劑的光輻射，藉此滅活微生物。公告號為CN1052165C的中國發明書公開了一種使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活的組合物及其在滅活血漿中病毒的應用，將成分和配比為低分子醇1-3和磷酩三正丁酯100的組合物加入到血漿蛋白溶液中，在溫度為28℃以下，可以快速完全地使膜病毒失活。這些方法雖然以使流體中的大部分微生物失去活性，但是流體中滅活的微生物的殘留物、滅活過程中產生的代謝降解產物以及流體中已有的有害物質如各種毒素、致病介質卻無法去除，仍然會影響最終產品即製成藥劑或作為藥物介質應用治療疾病的效果，也會影響生物學研究和藥理學研究的效果。而且滅活過程中會造成流體中有效成份的缺失及功能異常。上述方法存在消除微生物穩定性欠佳，無法去除有害物質，並且也沒有使流體成分和功能恢復正常的處理等弊端。
發明內容
本發明的目的在於提供一種穩定有效滅活微生物，有效去除有害物質，補充流體中的缺失的有效成份，恢復流體正常功能的消除流體微生物和有害物質的方法。
本發明的目的是這樣實現的一種消除流體中微生物有害物質的方法，所述流體包括含有選自蛋白、血液和血液製品的一種和多種成分、果汁、水及其它水性組合物，所述有害物質包括毒素、致病介質、異常免疫物、代謝降解產物及其它異常物質，所述方法包括如下步驟
(A)在維持一定流速的所述流體中加入少量抗凝劑，使抗凝劑與所述流體充分混合；
(B)滅活所述流體中的微生物；
(C)將經過滅活的流體輸入淨化裝置，去除所述流體中的有害物質；
(D)通過調溫裝置將所述流體溫度調節至15-50℃。
所述滅活為加熱滅活、光化學滅活、物理滅活、藥物滅活。
採用加熱滅活方式滅活所述流體中的微生物時，所述流體進入調溫裝置加熱至38-85℃後迅速降溫至20-46℃。
在加入抗凝劑時添加增強劑和滅活劑中的一種或兩種，也可以在滅活所述流體中微生物後添加增強劑。
增強劑可以採用氧氣、甘露醇、葡萄糖、腺膘呤、組氨酸、半胱氨酸、抗壞血酸、穀胱甘肽、酪氨酸、色氨酸、沒食子酸丙酯、煙醯胺、賴氨酸、絲氨酸、甲硫氨酸、碳酪氫鈉、甘油、抗壞血酸、N-乙酸-L-半胱氨酸、巰基丙醯甘氨酸、二硫蘇糧醇、碳酸氫鈉中的一種或多種。
淨化裝置為吸附、過濾、特異性免疫吸附過濾、置換、成份分離方式或上述2種以上的方式的組合。
其中所述淨化裝置為炭式或樹脂式灌流器、纖維膜式過濾器、免疫吸附器或上述2種以上裝置的組合。
對經過滅活和淨化的流體補充添加所述流體中缺失的有效成份，或者採用物理、化學方法對流體處理。
所述流體的溫度可調節至32-45℃。
經過滅活、淨化、補充有效成份、調溫的流體通過氣體混合裝置排除的所述流體中的游離氣體並維持所述流體的流速。
本發明提供了一種安全可靠、穩定有效、淨化完全、全面平衡的消除流體微生物和有害物質的方法。首先在維持一定流速的流體中加入抗凝劑，採用不同滅活方式滅活微生物，防止損害流體中的有效成分；當採用加熱滅活方式滅活所述流體中的微生物時，所述流體進入調溫裝置加熱至38-85℃，後迅速降溫至20-46℃，通過對流體溫度的調控即升溫後實現迅速物理降溫，可以有效地滅活流體中的大部分微生物，還可以使以靜息狀態潛伏於組織細胞中的病毒(如HBV等)被激活而處於游離狀態易被有效滅活；滅活後的流體依然含有較多有害物質，如來自供體的各種毒素、代謝降解產物以及失去活性的微生物殘留，將流體輸入淨化裝置，通過吸附、過濾、特異性免疫吸附裝置、置換、成份分離等方式去除流體中有害物質，使得所述流體淨化徹底並儘可能不破壞流體中的有益成份和正常功能；然而經過滅活、淨化處理後的流體存在不同程度的有效成份缺失、功能失衡異常，所以一方面應中和去除在上述步驟中使用的滅活劑、增強劑等化學藥劑，另一方面須補充和添加流體中的有效缺失成份，使流體恢復正常平衡狀態，如補充氧氣等；在準備、滅活、淨化階段大多數情況下都需要加入氣體，加氣過程中會有少許氣體呈游離狀態存在於流體中，不利於治療和研究，通過氣體混合裝置排除游離氣體使得經過滅活、淨化、平衡處理後的流體完全達到正常平衡狀態。
下面結合附圖和具體實施方式
對本發明作進一步詳細的描述。
圖1是本發明的一種實施例。
圖2是本發明的另一種實施例。
圖3是本發明的又一種實施例。
具體實施方式
本方法包括被處理的流體/或其相關製品/或其他材料處於某個設定溫度的流體狀態下，選擇至少一種或幾種組合的滅活方式對存在於流體中的微生物進行有效滅活，隨即選擇至少一種或幾種組合的淨化方式去除流體中可能存在的有害物質，並使所述流體的成分和狀態達到計劃目的要求的全面平衡的處理/處置方法。
本文所用術語「滅活」是指或者通過殺傷/殺滅所述微生物，或者幹擾其繁殖能力，全部或部分阻止所述微生物的複製。
術語「淨化」是指通過對流體中有害物質進行吸附、過濾、分離、置換……等等去除手段，使所述流體中全部或部分有害物質的被去除或被減少。
術語「平衡」是指針對缺失的成分或異常的功能，針對性的或補充添加，或結合增強，或有效抑制，使所述流體天然或計劃的成分功能全部或部分恢復正常。
術語「容器」是指密閉或開放的空間，它可以由剛性或性材料製成，例如為袋、盒料。其頂部可以是密閉的或是開放的，其兩端可以具有開孔，例如可以是管或管道，以允許流體在其中流通。
可以用本方法處理的材料包括其中存在任何不需要成分的任何流體材料，這類材料的實例是全血和含蛋白血液或血液成分的生活活性蛋白的水性組合物、壓緊紅細胞、血小板和血漿(新鮮或冰凍的血漿)等所有與血液相關的材料可以從本發明受益的其它流體如用於腹膜透板的腹膜液，它們在連接期間有時受到汙染，導致腹膜汙染。還有果汁、水等其它水性組合物。
術語「光敏劑」是指及收限定波長的光，並將吸收的能量轉移至能量受體的化合物。它們的實例有補骨脂素、染料，諸如中性紅、亞甲藍、啶、苯胺、黃素(黃素鹽酸)和吩噻嗪衍生物等，維生素類中的一些物質。
術語「增強劑」又名「猝滅劑」，目的是為了使選擇的滅活方式對微生物的滅活更有效和更具選擇性，並防止或減少損害流體中需要的有益成分，實例有氧氣、腺膘呤、甘露醇、葡萄糖、組氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸、抗壞血酸、N-乙醯-L-半胱氨酸、沒食子酸丙酯、穀胱甘肽、巰基丙醯甘氨酸、二硫蘇糧醇、煙醯胺、BHT、BHA、賴氨酸、絲氨酸、甲硫氨酸、trolox、磷酸氫鈉、甘油和它們的混合物。
調溫方式及裝置、滅活方式及裝置、淨化方式及裝置及其組合的方式取決於所述流體的各種狀態及計劃的目的。
不論選擇哪一種處理方式，都不應使流體中感興趣的除致病物質外的流體有益成分(即需要保留/保護的成分)不會被不可逆的改變(例如使它們不再顯示其理想的生物活性)，尤其不應使細胞發生非程序性合成，即惡性突變；應儘量選擇在較短的時間內快速有效完成計劃目的的方式和裝置優選組合。
圖1顯示了本發明可能使用的一些處理步驟，將流體如血液(它可以是最近收集的血液或血液成分或貯存的血液)連接至主管路010，經泵21調速後流動，各儲存器31、32、33、35中的各種物質通過定量加注器41、42、43、45與流體混合，同時還有至少一種氣體貯存於貯存器71的氣態物質受定量控制器44控制流量，也與流體混合。為確保混合均勻，系統中設有混合裝置901、902，流體的溫度受調溫器61、62控制，滅活裝置51設在淨化裝置70之前，在某些時候，流體成分分離裝置72有時被使用，優先位置在滅活裝置51與淨化裝置70之間，貯存裝置35貯存成分分離裝置72分離出的流體成分，為防止流體中游離的氣體潛在的危險，應使用排氣裝置91排除游離的氣體，流體的流速及類型受調速泵控制，系統應設有各輔助安全檢查措施。在很多時候其中的步驟並非全部被使用，但這種流程演示可以簡單地使本領域和相關領域的人士很容易地了解本方案的要素及可能進行的拓展。
在這個系統內，一旦選定滅活和淨化的方式，實現本系統的各種信息便可以較容易的由經驗或計算獲得，則可設計提供使所述流體中存在的各種致病物質被滅活淨化的合適的流速、合適的溫度、合適的滅活、淨化裝備及能隨相應處理方式的製造材料。製作的材料可以使較單一的材料，如PVC、石英玻璃、不鏽鋼等等，也可以根據處理要求及兼顧經濟學的考慮，各裝置可由不同材料製成，通過合適的方式相連接。材料的選擇共同標準是無毒害、能承受一定溫度變化、具合適的透光性、能承受一定的酸鹼腐蝕的、有一定機械強度等等。
本系統各步驟的組成依大約的物理位置可以用以下方框圖大致顯示，這些步驟也可以稱為某「單元」
流體—調溫單元---預處理單元---滅活單元—淨化單元—平衡單元—受體
為實現對流體溫度調控以實現本系統計劃或天然目的的要求，流體溫度的調控方法及裝置應該是能在短時間短流程內較精確的使流體處於設定範圍之內的方法及設施。具體的溫度要求範圍取決於流體中可能存在的微生物和有害物質的特性測定和治療目的的要求。加熱方式可以是水浴器、可以是換能器式、可以是外置式，熱源可以是電加熱、可以是微波、可以是雷射等等。這些設施的監測、控制等輔助部分對調溫設施的監控應當是儘量精確的，可能需要較敏感的「溫度傳感器-反應裝置」以符合使用者的要求。在本系統中，至少需要一個調溫裝置。採用加熱高溫滅活方式時，優選能在瞬時能使流體溫度達到設定狀態的設施，這些設施可以自行設計製造，部分設施可以由商品渠道測得。
預處理單元的抗凝步驟在系統的各種變化中是一直存在的，對血液的抗凝處理是本領域已知的，《臨床輸血指南》等相關專著有關詳細說明，在本方案中，優選肝素作為抗凝劑。
滅活單元流體中滅活劑的添加量為足以充分滅活其中的微生物，但小於有毒量或不溶量的量，這些知識是本領域已知的，本領域技術人員容易確定滅活劑的最佳濃度。滅活劑最好應選擇那些能在較短時間內較徹底地滅活微生物且不會引起流體中需要成分被不可逆改變的，不易產生有害殘餘物質或即使有某些殘餘物質也較易從流體中去除的那些化合物，如氧氣、二甲基亞甲藍、補骨脂素、INACTIN維生素中的一些種。另外，在一些時候增強劑有時也被選擇配合使用，由於它們可能使選擇的處理方式更有效或更具選擇性且能防止損害所述流體所需成分，而且有時可防止溶血，所以在一些時候，客觀存在使用它們的要求。選擇的方法與添加劑量及藥劑的最佳濃度同上述滅活劑一樣，很容易被本領域人士確定。一般而言，增強劑與所述流體的混合在滅活劑之前，但有些時候部分增強劑最合適的混合時機是在滅活微生物後的即刻能最好發揮它們全用，它們的實例有可保護血小板的白蛋白、防止光照後溶血的甘露醇、色氨酸、還原型穀胱甘肽、氧氣等等。
另外，在淨化之前添加合適量的前列環素於流體中對防止如灌流對血小板的損害也被實驗證明是切實可行的。
滅活單元主要是使流體在此階段有足夠的時間暴露於被選擇的滅活方式以期微生物的滅活，毫無疑問，必須保證有滅活需要的合適環境。這些要素主要有合適的熱源、光源等。這些設施具體設定要求取決於選擇的滅活方式，例如光化學滅活需要能使適宜光敏劑發揮最佳效能的適宜波長的光，光源的波長範圍是150-2600nm。只要提供的波長相宜的，發光的光源設備並沒有非常特別的要求，可以是脈衝光、可以是連續光、可以是單譜法、可以是全譜光，可以由普通燈具發出、也可以由發光二級管或雷射發出，根據需要有時可以選擇光導纖維/光導管裝置將光送至需要的位置。
其它滅活方式如超低溫、輻射、壓力滅活、雷射等等，都有自己限定的方法及裝置要求。
淨化單元是使已滅活微生物的流體在此階段主要完成對流體中有害物質的去除，實現此計劃的手段有吸附、過濾、特異性免疫吸附過濾、置換、分離等等，選擇至少一種或幾種組合的淨化方式取決於流體可能存在的有害物質的種類和計劃的目的，尤其應注意選擇的淨化方式(含幾種優選組合的方式)可以最大限度地去除有害物質，同時最小可能破壞流體中感興趣需要保留/保護有益成分。可使用流體成分分離方法及裝置，如HBV、HCV、HIV等疾病都有血小板減少的可能，而現實的淨化方式如灌流器或多或少會造成血小板的破壞和/或減少，使病者出血危險的可能性增大。在類似的情況下，可以使用成分分離裝置從流體中分離血小板後再進行灌流，以後在合適的時機輸送受體，在現實中認為是可行的。本方案合適的淨化方式有炭式或樹脂式灌流器、纖維膜式過濾器、免疫吸附器等等。
平衡單元是指針對流體中可能存在的失衡的功能或/和缺失的成分或其它異常，採取相應的處理措施，糾正或恢復的過程。
由經驗或本領域已有已知的相關知識/資料確認，一些重症疾病往往處於血液成分或功能處於相對異常的狀態，而治療的效果往往依賴於對這些異常的糾正/或恢復，可以根據治療和天然的要求，針對性地選擇必要成分的添加和補充。
另外，在處理中使用的某些物質在此階段應當被中和和去除，以避免和防止對身體的傷害，例如肝素的使用往往使一部分人面臨血的危險，用魚精蛋白中和肝素的副作用，在本領域是成熟已知的。
同樣例如由經驗或/臨床資料可以明確的知道，絕大多數的情況患者血液中至少某些成分存在失衡或異常。如很多疾病同時存在某些缺氧狀態，血氧過低是很多疾病的結果，更是許多疾病的起因/誘因，這些知識是本領域已有共知的，多種醫學著作中有專門論述，通過合適的方式給氧在很多疾病的治療中發揮重要作用，某些處理方式如UBOI(紫外線照射充氧的光量子法)在治療領域中被安全、廣泛的應用。這種方法不但能迅速提高全身血氧濃度迅速而有效的緩解組織缺氧狀態，並且氧氣經光照作用產生H2O2，也具有殺滅細菌和病毒的作用。
本步驟為更好實現治療目的，迅速恢復血液應有或要求的形狀，還可以通過各種相對安全溫和的處理方式實現，這些方式可以是磁處理、或光照處理、或其它處理，可以對流體進行處理，也可以對添加的藥劑，置換液進行處理。
總而言之，應使流體經過平衡單元的處理後，流體的成分或功能能達到儘量符合天然或計劃的要求。
由於在本系統方法的處理過程中有時採用加氣混合方法，於是相應的排氣裝置被使用。當採用排氣裝置時，單泵產生的管內動力有可能中途被釋放。故本系統至少有時應使用雙泵協同工作以確保系統能恆穩平衡的工作狀態。甚至應考慮在系統設備中有應急的非電動動力設備的存在。
圖2顯示了用加熱滅活方式滅活病原的大致流程，從供體取出的流體經泵加壓並控制流速，與抗凝劑混合；抗凝劑31的添加劑量及添加速度受自動定量加注器41控制；流體進入加熱器被加熱至設定溫度以實現對微生物的滅活，根據微生物的不同，優選設定的溫度狀態，溫度的大致範圍為38~85，(隨即可以使用另一個換能器使流體溫度下降至設定範圍)，被滅活微生物的流體經主管路流向淨化裝置71，淨化裝置優選炭式或樹脂式灌流器，被淨化後流體可能存在的全部或部分致病物質被滅活或去除，然後流體在平衡步驟先後完成各治療成分補充或添加，治療成分38或氧氣39通過自動定量加注器42、43控制與流體混合後，通過氣體混合排除裝置91排除流體中可能存在的游離氣體，再經泵22調速後即可以通過多通莫非式管12回輸給受體或保存。
圖3顯示採用光化學滅活方式滅活微生物的大致流程，流體經泵21調速，接著完成與抗凝劑31、增強劑32、氧氣39、滅活劑33的混合後，各成分由各自獨立的管路進入流體(這些混合的成分與其加注量和速度受自動定量加注器41、42、45、43的控制)，透光容器51接受光照射並吸收光能以實現對微生物的滅活，選擇容器的長度和深度以確保淨化。與溫度檢測器53相連的冷卻系統54與容器51相鄰，以控制流體的溫度始終處於一定範圍，光反射增強58與光源57相對，鄰近容器51以增強到達容器中流體的光輻射量，已滅活微生物的流體再經過淨化器71的吸附過濾等淨化後，繼續完成與平衡成分34的混合，再通過氣體混合排除裝置91的氣體排除管87排除流體可能存在的游離氣體後，流經調溫裝置61，使流體溫度達到設定狀態，再經泵22調速後即可通過多通莫非式管12回輸給受體或保存。
本處理方式可以使用流體成分分離設施，以使處理或保全更有針對性，安排的安裝位置優選在滅活之後淨化之前(在圖例中未顯示)，為使本系統各個步驟和相互之間的行為精確協調，最好使用計算機技術完成以本系統所有行為的檢測和控制，使本系統能在使用者的安排指令下準確完成計劃目的。
本系統可以方便、容易地與其它流體治療/處理設施連接在一起結合使用，以拓展本系統的治療範圍，完善其它設備的治療功能，使一次治療效果更全面、更徹底，這些設備的實例有血液透析機、體外循環機、自體血液回收設備、各類人工肝等。
實施例1
(1)將不含病毒的200ml新鮮全血泵入英國產TL-10型換能器換能器，通過日本產尼普MP-300型調速泵使流速穩定在170ml/分，維持恆溫恆速20秒後注入10ml含有VSV、EMC、HIV病毒的血液製成待處理血液樣品。將血液樣品按如下步驟處理
(2)將待處理血液樣品輸入調速泵使流速維持170ml/分，採用自動定量加注器以均勻速度加入少量抗凝劑與血液樣品充分混合；
(3)滅活將與抗凝劑充分混合後的血液樣品輸入加熱器先後加熱至73℃、75℃、77℃、80℃維持0.006秒，然後使血液樣品通過冷卻器迅速降溫至36℃；
(4)將經過上述步驟的血液樣品輸入炭式或樹脂式灌流器通過過濾吸附方式淨化去除血液樣品中的殘留有害物質；
(5)在經過上述步驟的血液樣品中通過自動定量加注器加入治療添加劑或氧氣，補充血液樣品中缺失的有效成分，恢復正常平衡狀態；
(6)通過氣體混合排除血液樣品中存在的游離氣體後輸入密閉容器保存。
上述加熱方式滅活病毒的實驗結果對照分析如表1所示。
從表1可知，將血液樣品加熱至77℃維持0.006秒可完全滅活VSV、EMC、HIV病毒。
實施例2
將180ml經30℃水溶融化，轉至無菌PVC血漿袋中，加入20ml含有辛得比斯病毒(SV)、水泡性啖病毒(VSV)、人體免疫缺陷病毒(HIV-1)的病毒貯存液製成待處理血漿。
將該血液樣品按如下步驟處理
(1)將待處理血漿輸入日本產尼普MP-300型調速泵使流速維持50 ml/分，採用2個日本產JMS SP-500型自動定量加注器以均勻速度分別加入少量抗凝劑和亞甲藍酸染料使亞甲藍酸終濃度為1umol/L，血漿和抗凝劑、亞甲藍酸染料充分混勻10min，使染料與病毒結合，再輸入透光容器。
(2)在室溫(20-30℃)條件下用GGZ直管式紫外高壓汞燈光照處理透光容器中的血漿，記錄不同光照時間的光輻射量。
(3)將經過光照滅活的血漿輸入淨化器經過吸附過濾方式淨化。淨化器為廊坊愛爾血液淨化器材廠YFS-100型和南京雙威公司產白細胞過濾器。
(4)透光容器、淨化器與調溫裝置連接，在光照滅活和淨化處理時維持血漿的溫度處於穩定狀態。
(5)添加平衡治療劑與經過上述步驟的血漿混合，補充血漿缺失的有效成分並恢復正常平衡狀態。
(6)通過氣體混合排除裝置排除血漿中游離氣體，將血漿輸入調溫裝置調節血漿至設定溫度。
(7)重複上述步驟直至血漿中的病毒和有害物質含量達到設定指標。
上述光化學方式滅活血漿中病毒的實驗結果如表2所示。
從表2可知採用亞甲藍光敏劑光化學滅活病毒時，經20000lux，光照處理10min後，可使105.09TCID50的HIV，106.25TCID50的VSv和10650TCID50的Sindbis病毒完全滅活。
實施例3
用人喉癌細胞株(Hep-2)早幼粒白血病細胞株(HL-60)；正常人或癌患者外周血淋細胞，將上述三種細胞分別用10％小牛血清RPMI-1640培養液培養，使Hep-2濃度為2*105/ml，HL-60和外周血淋細胞濃度為2*106/ml。在觀察組的不同細胞懸液中每ml加入HPD200ul，即終濃度1ug/ml，對照組不加，37℃孵育30min。將三種細胞各100ul分別加入40孔板的相應孔內，然後以6種入射光劑量的UVA每孔照射2min。照射後立即每孔加入0.5％臺盼蘭染液100ul。以臺盼蘭拒染法計算每孔細胞的存活率並計算每孔細胞存活活力下降百分比。每一處理均有3組平行孔，取其均值。
附表 兩組細胞受照射後存活率下降百分比注採用X2檢驗，兩組相對*P＞0.05；**P＜0.05，***P＜0.01
實驗結果顯示殺傷癌細胞的主要影響因素有光敏劑的含量及與癌細胞共同孵育的時間和溫度，並且殺傷不同的癌細胞所需要的紫外線輻照強度也不同。
實施例4
從4℃冰箱取出全血，充分混勻，按無菌操作在南京雙威公司產白細胞過濾器上端分別接生理鹽水和血袋，先打開鹽水通道，排除濾器及管道中的空氣，然後過濾。血庫型濾器下端接收集袋，血袋與收集袋位差1米，過濾完畢用約50ml鹽水衝洗濾器，最後封好袋口，貼上標籤送臨床輸用。床邊型濾器下端接病人靜脈，過濾和輸血同時進行，輸注完畢用約50ml生理鹽水衝洗管道。
白細胞計數過濾前血樣採用標準技術，過濾後血樣採用Naggeotte計數和流式細胞儀檢測，其餘均採用標準技術。
計數池體積50ul，樣品用Tvrk’s液按1∶10稀釋(100+99ul)，血樣放置至少2min，混勻，充滿計數池，靜置至少1min，顯微鏡下計數整個區域，其精確度為顯微鏡下所見每個白細胞相當於0.2/ul。
玻纖膜濾器除白細胞效率
實施例5
方法抽取B型肝炎患者血每人6ml，患者均經免疫學檢測(B型肝炎6項)確定為HBsAg+，HBeAg+，HbcAb+又經PCR診斷為HBV陽性。與患者血中加入8-甲氧基補骨脂數0.25mg/L(8-methoxypsoralen8-MOP)，將血液無菌抗凝置303mm平皿中，上邊加一濾光片遮擋，紫外光λmax＝365mm，光源為GGZ直管型紫外高壓泵燈波長253.7mm-1 128mm，光源距平皿40cm，照射10min，輻射量為1J/cm2，照射後分別進行B型肝炎PCR檢測及B肝六項檢測。
經上述方法處理30例患者血清經PCR檢測均由陽性轉為陰性，在電泳後瓊脂糖凝膠在紫外燈下觀察均未見有424bp擴增區帶，但B肝六項檢測未發現顯著變化，該結果提示PUVA療法可以滅活血液中的HBV，抑制HBV的DNA複製，並不影響它的抗原性及免疫源性。
本領域技術人員容易理解，上述描述僅僅為了說明，在不脫離本發明範圍的情況下，可以進行許多修改和變化。另外根據本發明的內容，此領域技術人員不用過度實驗，可以容易地設計出各種優選的工作流程，而不違背權利要求
限定的本發明的範圍，所有的參考文獻和專利的公開內容引入本文以供參考。
權利要求
1、一種消除流體中微生物有害物質的方法，所述流體包括含有選自蛋白、血液和血液製品的一種和多種成分、果汁、水及其它水性組合物，所述有害物質包括毒素、致病介質、異常免疫物、代謝降解產物及其它異常物質，所述方法包括如下步驟
(A)在維持一定流速的所述流體中加入少量抗凝劑，使抗凝劑與所述流體充分混合；
(B)滅活所述流體中的微生物；
(C)將經過滅活的流體輸入淨化裝置，去除所述流體中的有害物質；
(D)通過調溫裝置將所述流體溫度調節至15-50℃。
2、根據權利要求
1所述的一種消除流體中微生物和有害物質的方法，其特徵在於所述滅活為加熱滅活、光化學滅活、物理滅活、藥物滅活。
3、根據權利要求
2所述的一種消除流體中微生物和有害物質的方法，其特徵在於採用加熱滅活方式滅活所述流體中的微生物時，所述流體進入調溫裝置加熱至38-85℃後迅速降溫至20-46℃。
4、根據權利要求
1所述的一種消除流體中微生物和有害物質的方法，其特徵在於在加入抗凝劑時添加增強劑和滅活劑中的一種或兩種，也可以在滅活所述流體中微生物後添加增強劑。
5、根據權利要求
1所述的一種消除流體中微生物和有害物質的方法，其特徵在於增強劑可以採用氧氣、甘露醇、葡萄糖、腺膘呤、組氨酸、半胱氨酸、抗壞血酸、穀胱甘肽、酪氨酸、色氨酸、沒食子酸丙酯、煙醯胺、賴氨酸、絲氨酸、甲硫氨酸、碳酪氫鈉、甘油、抗壞血酸、N-乙酸-L-半胱氨酸、巰基丙醯甘氨酸、二硫蘇糧醇、碳酸氫鈉中的一種或多種。
6、根據權利要求
1所述的一種消除流體中微生物和有害物質的方法，其特徵在於淨化裝置為吸附、過濾、特異性免疫吸附過濾、置換、成份分離方式或上述2種以上的方式的組合。
7、根據權利要求
1所述的一種消除流體中微生物和有害物質的方法，其特徵在於其中所述淨化裝置為炭式或樹脂式灌流器、纖維膜式過濾器、免疫吸附器或上述2種以上裝置的組合。
8、根據權利要求
1所述的一種消除流體中微生物和有害物質的方法，其特徵在於對經過滅活和淨化的流體補充添加所述流體中缺失的有效成份，或者採用物理、化學方法對流體處理。
9、根據權利要求
1所述的一種消除流體中微生物和有害物質的方法，其特徵在於所述流體的溫度可調節至32-45℃。
10、根據權利要求
1所述的一種消除流體中微生物和有害物質的方法，其特徵在於經過滅活、淨化、補充有效成份、調溫的流體通過氣體混合裝置排除的所述流體中的游離氣體並維持所述流體的流速。
專利摘要
本發明公開了一種涉及流體淨化領域的消除流體微生物和有害物質的方法。包括如下步驟將抗凝劑、增強劑、滅活劑加入維持一定流速的所述流體中，使所述流體經過滅活、淨化、平衡、調溫、排氣等步驟處理以達到穩定有效滅活微生物、去除有害物質、補充有效缺失成分，恢復正常平衡狀態的目的。具有安全可靠、穩定有效、淨化完全、全面平衡的優點。
文檔編號A01N63/00GKCN1456058SQ03118717
公開日2003年11月19日 申請日期2003年3月1日
發明者徐鐳, 楊雪蓮, 廖冰蓮, 嚴紅雷 申請人:徐鐳, 楊雪蓮, 廖冰蓮, 嚴紅雷導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan