用於檢測埃裡希體屬抗體的肽、裝置和方法

2023-06-07 15:18:51

專利名稱：用於檢測埃裡希體屬抗體的肽、裝置和方法
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埃裡希體屬(Ehrlichia)細菌是感染哺乳動物宿主中循環淋巴細胞的專性細胞內病原體。犬埃裡希體(Ehrlichia canis)和恰菲埃裡希體(Ehrlichia chaffeensis)是分別感染犬和人並且引發犬單核細胞埃裡希體病(CME)和人單核細胞埃裡希體病(HME)的相同亞屬組的成員。犬疾病的特徵在於發熱、淋巴結病、體重減輕和全血細胞減少症。在人中，疾病的特徵在於發熱、頭痛、肌痛和白細胞減少。早期檢測和治療對於治療犬和人埃裡希體病是非常重要的。間接免疫螢光測定法(IFA)和酶聯免疫吸附測定法(ELISA)通常用於這類疾病的診斷。這類測定法測量或以其它方式檢測來自受試者的血液、血漿或血清的杭-埃裡希體屬抗體對感染的細胞、細胞裂解物或部分純化的全埃裡希體屬蛋白的結合。然而，目前已知的用於檢測杭-埃裡希體屬抗體或其片段的測定法因與這類測試中使用的埃裡希體屬抗原的不純性質直接相關的敏感性和特異性問題而在效用上受到嚴重限制。即，目前已知的測定法使用許多全埃裡希體屬抗原或非物種特異性抗原的混合物。因此，本領域中仍然需要用於檢測埃裡希體屬抗原和進行單核細胞埃裡希體病血清學診斷的其它測定法。發明概述本發明部分基於這樣的發現埃裡希體屬外膜蛋白I(OMP-I)蛋白質的片段的某些序列變體可對針對多種埃裡希體屬物種的抗體反應提供穩健的檢測。因此，本發明提供了用於檢測結合埃裡希體屬抗原的抗體和診斷單核細胞埃裡希體病的組合物、裝置、方法和試劑盒。在ー個方面，本發明提供了能夠結合識別埃裡希體屬抗原的抗體的肽。在某些實施方案中，本發明的妝包含 SEQ ID NO: I 的序列 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-T-Xltl-X11-X12-X13-G-L-K-Q-X18-W-X2Q-G-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X3tl-X31-X32-X33-X34-X35-X36-X37-X38-X39-X40 (SEQ ID NO: I)，其中X1 - X6和X27 - X40的每ー個為任意胺基酸，X7為選自N和Q的胺基酸，X8為選自T和P的胺基酸，X10為選自T和V的胺基酸，X11為選自G和A的胺基酸，X12為選自L和V的胺基酸，X13為選自Y和F的胺基酸，X18為選自D和N的胺基酸，X20為選自D和N的胺基酸，X22為選自S和V的胺基酸，X23為選自A、S和T的胺基酸，X24為選自A和I的胺基酸，X25為選自S、T和P的胺基酸，以及X26為選自S、N和K的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X7為Q，並且X25為選自T和P的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X7為N並且X25為S。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X1為選自S和K的胺基酸，X2為選自A、V和R胺基酸，X3為選自K和D的胺基酸，X4為E，X5為選自E、D和N的胺基酸，X6為選自K和Q的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中，X1為S，X2為選自A和V的胺基酸，X3為K，XjE，X5為選自E和D的胺基酸，並且X6為K。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X1 - X6具有序列K-R-D-E-N-Q (SEQ ID NO: 2)。在某些實施方案中，X27 - X4tl 具有選 自 Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E (SEQ ID NO: 3),M-A-P-F-H-E-L-D-V-N-N-H-P-N(SEQ ID NO:4)、S-L-N-V-S-F-L-I-D-P-M-A-P-F(SEQ IDNO:5)和 Q-D-S-N-L-Y-S-S-I-F-F-V-P-Q(SEQ ID NO:6)的序列。在其它實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO:59的序列F-S-A-K-X5-X6-X7-A-E-T-X11-X12-T-F-G-X16-X17-X18-X19-X20-D-G-A-X24-X25-X26-X27-N-X29-V-X31-N-X33-F-T-I-S-N (SEQ ID NO:59)，其中X5為選自E和Q的胺基酸，X6為選自E和Q的胺基酸，X7為任意胺基酸，X11為選自K和R的胺基酸，X12為任意胺基酸，X16為選自L和I的胺基酸，X17為任意胺基酸，X18為選自R和K的胺基酸，X19為選自Q和N的胺基酸，X20為選自Y和T的胺基酸，X24為任意胺基酸，X25為選自I和L的胺基酸，X26為任意胺基酸，X27為選自D和E的胺基酸，X29為選自E和Q的胺基酸，X31為選自E和Q的胺基酸，以及X33為選自K和R的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO:59的序列，其中X5為E，X6為E，X16為l、x18為K、X2tl為Y、X25為I、X29為Q、X31為Q，以及X33為K。在其它實施方案中，本發明的肽包含或由SEQ ID NO:59的序列組成，其中X7為K，X12為選自K和R的胺基酸，X17為選自E和D的胺基酸，X24為選自K和Q的胺基酸，以及X26為選自E和T的胺基酸。在其它實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO:92的序列G-X2-F-S-A-K-X7-X8-K_X10_A_D_T_R_X15_T_F_G_L_X20_K_Q_T_D_G—A_X27_I_X29_E_N_X32_V_X34_N_X36_F_T_I_S_N (SEQID NO:92)，其中X2為選自D和N的胺基酸，X7為選自E和Q的胺基酸，X8為選自E和Q的胺基酸，X10為任意胺基酸，X15為任意胺基酸，X20為任意胺基酸，X27為任意胺基酸，X29為任意胺基酸，X32為選自E和Q的胺基酸，X34為選自E和Q的胺基酸，以及X36為選自K和R的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID N0:92的序列或由其組成，其中も為N、X7 為 E、X8 為 E、X32 為 Q、X34 為 Q，以及 X36 為 K。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:92的序列並且還包括額外的N-末端肽序列。額外的N-末端肽序列可包含1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10或更多個胺基酸並且可以是天然或非天然序列。在某些實施方案中，本發明的肽包含由SEQ ID NO: K SEQ ID N0:59或SEQ ID NO:92定義的序列並且還包含額外的C-末端肽序列。額外的C-末端肽序列可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個胺基酸並且可以是天然或非天然序列。在某些實施方案中，非天然序列包含非-0MP-1埃裡希體屬抗原(例如，埃裡希體屬 P38、p43、pl20、pl40、pl53、pl56、p200、gpl9、gp36、gp47、gp200 或 HGE-3)。在某些實施方案中，本發明的肽包含至少25、30、35、40、45、50或更多個胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽是分離的(例如，合成和/或純化的)肽。在某些實施方案中，本發明的肽被綴合至配體。例如，在某些實施方案中，肽被生物素化。在其它實施方案中，肽被綴合至鏈黴抗生物素蛋白、抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白。在其它實施方案中，肽被綴合至載體蛋白(例如，血清白蛋白或免疫球蛋白Fe結構域)。在其它實施方案中，肽被綴合至樹狀聚合物和/或為多抗原肽體系(MAPS)的部分。在某些實施方案中，本發明的肽被連接至或固定在固體支持物上。在某些實施方案中，固體支持物為珠粒(例如，膠粒、納米顆粒、膠乳珠粒等)、側流免疫測定裝置中的流的流動通道(flow path)(例如，多孔膜)、分析轉頭中的流動通道或管或孔(例如，在適用於ELISA測定的板中)。
在另ー個方面，本發明提供了包含兩種或更多種本發明的肽的組合物。例如，在某些實施方案中，組合物包含2、3、4或更多種不同的本發明的肽的混合物，其中每ー種肽包含SEQ ID N0:1的序列。在某些實施方案中，組合物包含2、3、4或更多種不同的本發明的肽的混合物，其中每ー種肽包含SEQ ID N0:59的序列。在其它實施方案中，組合物包括2、
3、4或更多種不同的本發明的肽的混合物，其中每ー種肽包含SEQ ID N0:92的序列。在某些實施方案中，肽被綴合至配體。例如，在某些實施方案中，肽被生物素化。在其它實施方案中，肽被綴合至鏈黴抗生物素蛋白、抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白。在其它實施方案中，肽被綴合至載體蛋白(例如，血清白蛋白或免疫球蛋白Fe結構域)。在其它實施方案中，肽被綴合至樹狀聚合物和/或為多抗原肽體系(MAPS)的部分。在另ー個方面，本發明提供了包含編碼本發明的肽的序列的核酸。此外，本發明提供了包含這類核酸的載體以及包含此類載體的宿主細胞。在某些實施方案中，載體為穿梭載體。在其它實施方案中，載體為表達載體(例如，細菌或真核表達載體)。在某些實施方案中，宿主細胞為細菌細胞。在其它實施方案中，宿主細胞為真核細胞。在另ー個方面，本發明提供了裝置。在某些實施方案中，裝置對於進行免疫測定是有用的。例如，在某些實施方案中，裝置為側流免疫測定裝置。在其它實施方案中，裝置為分析轉頭。在其它實施方案中，裝置為管或孔(例如在適用於ELISA測定的板中)。在其它實施方案中，裝置為電化學、光學或光電傳感器。在某些實施方案中，所述裝置包括本發明的肽。在其它實施方案中，所述裝置包括不同的本發明的肽的混合物。例如，在某些實施方案中，所述裝置包括2、3、4或更多種不同的本發明的肽。在某些實施方案中，肽或混合物中的每ー種肽包括SEQ ID NO: 1、SEQ IDN0:59或SEQ ID NO:92的序列。在某些實施方案中，肽被連接至或固定在裝置上。在另ー個方面，本發明提供了檢測樣品中針對埃裡希體屬抗原的表位的抗體。在某些實施方案中，所述方法包括將樣品與本發明的肽接觸，並檢測包含所述肽的抗體-肽複合物的形成，其中所述複合物的形成表明所述樣品中存在針對埃裡希體屬抗原的表位的抗體。在某些實施方案中，埃裡希體屬抗原來自感染性埃裡希體屬物種例如犬埃裡希體和恰菲埃裡希體。在某些實施方案中，所述方法包括將樣品與2、3、4或更多種不同的本發明的肽的混合物接觸。在某些實施方案中，肽或混合物中的每ー種肽為分離的(例如，合成和/或純化的)肽。在某些實施方案中，肽或肽的混合物被連接至或固定在固體支持物上。在某些實施方案中，固體支持物為珠粒(例如，膠粒、納米顆粒、膠乳珠粒等)、側流免疫測定裝置中的流動通道(例如，多孔膜)、分析轉頭中的流動通道或管或孔(例如，在適用於ELISA測定的板中)。在某些實施方案中，固體支持物包括金屬、玻璃、基於纖維素的材料(例如，硝酸纖維素)或聚合物(例如，聚苯こ烯、聚こ烯、聚丙烯、聚酯、尼龍、聚碸等)。在某些實施方案中，肽或不同肽的混合物被連接至樹狀聚合物和/或摻入MAPS體系。在某些實施方案中，檢測步驟包括進行ELISA測定。在其它實施方案中，檢測步驟包括進行側流免疫測定法(側流免疫測定)。在其它實施方案中，檢測步驟包括進行凝集測定。在其它實施方案中，檢測步驟包括在在分析轉頭中離心樣品。在其它實施方案中，檢測步驟包括用電化學傳感器、光學傳感器或光電傳感器分析樣品。在某些實施方案中，樣品是 體液例如血液、血清、血漿、腦脊髓液、尿、粘液或唾液。在其它實施方案中，樣品是組織(例如，組織勻漿物)或細胞裂解物。在某些實施方案中，樣品來自野生動物(例如，鹿或嚙齒類動物例如小鼠、金花鼠、松鼠等)。在其它實施方案中，樣品來自實驗室動物(例如，樣品來自實驗室動物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴、靈長類動物等)。在其它實施方案中，樣品來自馴養動物或野化家畜(例如，狗、貓、馬)。在其它實施方案中，樣品來自人。在另ー個方面，本發明提供了診斷受試者的單核細胞埃裡希體病的方法。在某些實施方案中，所述方法包括將來自受試者的樣品與本發明的肽接觸，和檢測包含所述肽的抗體-肽複合物的形成，其中所述複合物的形成表明受試者患有單核細胞埃裡希體病。在某些實施方案中，所述方法包括將樣品與本發明的2、3、4或更多種不同肽的複合物接觸。在某些實施方案中，肽或混合物中的每ー種肽是分離的(例如，合成和/或純化的)肽。在某些實施方案中，肽或不同肽的混合物被連接至或固定在固體支持物上。在某些實施方案中，固體支持物是珠粒(例如，膠粒、納米顆粒、膠乳珠粒等)、側流免疫測定裝置中的流動通道(例如，多孔膜)、分析轉頭中的流動通道或管或孔(例如，在適用於ELISA測定的板中)。在某些實施方案中，固體支持物包括金屬、玻璃、基於纖維素的材料(例如，硝酸纖維素)或聚合物(例如，聚苯こ烯、聚こ烯、聚丙烯、聚酯、尼龍、聚碸等)。在某些實施方案中，肽或不同肽的混合物被連接至樹狀聚合物和/或摻入MAPS體系。在某些實施方案中，檢測步驟包括進行ELISA測定。在其它實施方案中，檢測步驟包括進行側流免疫測定。在其它實施方案中，檢測步驟包括進行凝集測定。在其它實施方案中，檢測步驟包括在分析轉頭中離心樣品。在其它實施方案中，檢測步驟包括用電化學傳感器、光學傳感器或光電傳感器分析樣品。在某些實施方案中，樣品為體液例如血液、血清、血漿、腦脊髓液、尿或唾液。在其它實施方案中，樣品為組織(例如，組織勻漿物)或細胞裂解物。在某些實施方案中，受試者為野生動物(例如，鹿或嚙齒類動物，例如小鼠、金花鼠、松鼠等)。在其它實施方案中，受試者為實驗室動物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴、靈長類動物等)。在其它實施方案中，受試者為馴養動物或野化家畜(例如，狗、貓、馬)。在其它實施方案中，受試者為人。在另ー個方面，本發明提供了試劑盒。在某些實施方案中，試劑盒包括本發明的肽。在某些實施方案中，試劑盒包括2、3、4或更多種不同的本發明的肽。所述肽可包含SEQID NO: 1、SEQ ID NO: 59或SEQ ID NO:92的序列。在某些實施方案中，所述肽被連接至或固定在固體支持物上。例如，在某些實施方案中，固體支持物是珠粒(例如，膠粒、納米顆粒、膠乳珠粒等)、側流免疫測定裝置中的流動通道、分析轉頭中的流動通道或管或孔(例如，在板中)。在某些實施方案中，肽被連接至樹狀聚合物和/或摻入MAPS體系。在某些實施方案中，試劑盒還包括珠粒群或板(例如，適用於ELISA測定的板)。在其它實施方案中，試劑盒還包括裝置，例如側流免疫測定裝置、分析轉頭、電化學傳感器、光學傳感器或光電傳感器。在某些實施方案中，珠粒、板或裝置群用於進行免疫測定。例如，在某些實施方案中，珠粒群、板或裝置用於檢測包含來自樣品的抗體和本發明的肽的抗體-肽複合物的形成。在某些實施方案中，本發明的肽或不同肽的混合物被連接至或固定在珠粒、板或裝置上。在某些實施方案中，試劑盒進ー步包括說明書。例如，在某些實施方案中，試劑盒包括指示如何使用本發明的肽檢測針對埃裡希體屬抗原的抗體或用於診斷單核細胞埃裡希體病的說明書。在某些實施方案中，試劑盒包括指示如何使用珠粒群、板或裝置(例如，包括本發明的肽或不同肽的混合物)檢 測針對埃裡希體屬抗原的抗體或診斷單核細胞埃裡希體病。通過下面的詳細描述，本發明的其它方面和實施方案將變得明顯。附圖
簡述圖I是可用於檢測針對埃裡希體屬抗原的抗體的間接夾心測定法的示圖。在此實施方案中、抗-人IgG/IgM或抗-狗IgG/IgM抗體被固定至測試位點上的適當基底(例如，硝酸纖維素膜)。測試樣品中的抗體被固定的抗體結合。隨後針對適當的埃裡希體屬抗原的測試樣品抗體將結合本發明的肽。當本發明的肽被綴合至生物素時，可使用膠體金-標記鏈黴抗生物素蛋白來檢測肽在測試位點上的存在。可以理解，可逆向操作間接夾心測定-即可將本發明的肽固定至基底以捕獲測試樣品中的抗-埃裡希體屬抗體，然後可將綴合至標記物(例如膠體金)的抗-人IgG/IgM或抗-狗IgG/IgM抗體用於檢測與測試位點上固定的肽結合的抗體的存在。圖2為基於圖I的間接夾心測定法的側流免疫測定裝置的示圖。在側流免疫測定裝置的此實施方案中，將樣品施加於加樣墊上，隨後流經綴合墊至測試膜。當樣品通過綴合墊時，肽-生物素-鏈黴抗生物素-金複合物溶解，隨後形成本發明的肽與適當的抗-埃裡希體屬抗原抗體之間的複合物。測試位點包含樣品的適當抗-IgG或抗-IgM抗體,所述抗體結合樣品中的所有抗體。例如蛋白L可用於替代抗-IgG或抗-IgM抗體。如果樣品中充足的抗體已結合至本發明的肽，則陽性信號將出現在測試位點上。在側流免疫測定裝置的另ー個實施方案中，本發明的肽被固定在測試位點(T)上並且綴合至可檢測標記物(例如膠體金顆粒)的樣品的適當的抗-IgG或抗-IgM抗體(例如抗-人或抗-犬)存在於綴合墊中。通過綴合墊的樣品溶解標記抗體和存在於測試樣品中的任何杭-埃裡希體屬抗原抗體，並且這類抗體複合物被測試位點上的本發明的固定的埃裡希體屬肽捕獲，從而產生陽性信號。在任一實施方案中，所述裝置還可包括在其上固定識別綴合墊中的標記肽或標記抗體的結合伴侶的對照位點(C)。圖3為可用於檢測針對埃裡希體屬抗原的抗體的雙抗原夾心測定法的示圖。在此實施方案中，本發明的肽被固定至測試位點上的適當基底(例如，硝酸纖維素膜、ELISA板的孔)。測試樣品中的抗體被本發明的固定的肽結合。針對適當埃裡希體屬抗原的測試樣品抗體隨後將結合被綴合至檢測分子(例如，膠體金、辣根過氧化物酶(HRP)、鹼性磷酸酶(ALP))的本發明的第二組肽，所述檢測分子檢測與固定在測試位點上的第一組肽結合的抗體的存在。發明詳述如本文中使用的，下列術語可具有下列含義
如本文中所用，術語「抗原」是指能夠被抗體識別的分子。抗原可以是例如肽或其修飾形式。抗原可包括ー個或多個表位。如本文中所用，術語「表位」是被抗體特異性識別的抗原部分。表位例如可包肽(例如，本發明的肽)的一部分含或由其組成。表位可以是線性表位、順序表位或構象表位。術語「0MP-1蛋白」是指埃裡希體屬的外膜蛋白I旁系同源物，包括但不限於犬埃裡希體(E. canis)P_30、犬埃裡希體P30-1、恰菲埃裡希體(E. chaffeensis) P28、恰菲埃裡希體0MP-1C、恰菲埃裡希體0MP-1D、恰菲 埃裡希體0MP-1E和恰菲埃裡希體0MP-1F。術語「核酸」、「寡核苷酸」和「多核苷酸」在本文中可互換使用並且包括DNA、RNA、cDNA，無論是單鏈還是雙鏈的，以及其化學修飾形式。本文中使用的單字母胺基酸縮寫在本領域中具有其標準含義，並且本文中描述的所有肽序列根據本發明以N末端為左和以C末端為右來進行書寫。其它術語將在後面的詳細說明中按需要進行定義。組合物和裝置本發明部分地基於這樣的發現埃裡希體屬0MP-1蛋白的片段的某些序列變體為針對多種埃裡希體屬的物種的抗體反應提供了的穩健的檢測。因此，在ー個方面，本發明提供了能夠結合識別埃裡希體屬抗原的抗體的肽。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8_T_X1(TX11_X12_X13_G_L_K-Q-X18-W-X2(I-G-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X3(I-X31-X32-X33-X34-X35-X36-X37-X38-X39-X4q(SEQ ID NO: I)，其中除非另有指示，否則說明書通篇所使用的SEQ IDNO: I具有下列特徵=X1 - X6和X27 - X40的每ー個為任意胺基酸，X7為選自N和Q的胺基酸，X8為選自T和P的胺基酸，X10為選自T和V的胺基酸，X11為選自G和A的胺基酸，X12為選自L和V的胺基酸，X13為選自Y和F的胺基酸，X18為選自D和N的胺基酸，X20為選自D和N的胺基酸，X22為選自S和V的胺基酸，X23為選自A、S和T的胺基酸，X24為選自A和I的胺基酸，X25為選自S、T和P的胺基酸，以及X26為選自S、N和K的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X7為0，X25為選自T和P的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X7為N，以及X25為S。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X1為選自S和K的胺基酸，X2為選自A、V和R的胺基酸，X3為選自K和D的胺基酸，XjE, X5為選自E、D和N的胺基酸，以及X6為選自K和Q的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X1為S，X2為選自A和V的胺基酸，X3為K，XjE, X5為選自E和D的胺基酸，以及X6為K。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X1-X6具有序列K-R-D-E-N-Q (SEQ ID N0:2)。在某些實施方案中，X27-X40 具有選自 Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E (SEQ ID NO: 3),M-A-P-F-H-E-L-D-V-N-N-H-P-N(SEQ ID NO:4), S-L-N-V-S-F-L-I-D-P-M-A-P-F(SEQ IDNO:5)和 Q-D-S-N-L-Y-S-S-I-F-F-V-P-Q(SEQ ID NO:6)的序列。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X1為S，X2為選自A和V的胺基酸，X3為K，X4為E，X5為選自E和D的胺基酸，X6為K，X7為Q，且X25為選自T和P的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID N0:1的序列，其中X1*S，X2為選自A和V的胺基酸，X3為K，X4為E，X5為選自E和D的胺基酸，X6為K，X7為N，以及X25為S。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X1為S，X2為選自A和V的胺基酸，X3為K，X4為E，X5為選自E和D的胺基酸，X6為K，X7為Q，X25為選自 T 和 P 的胺基酸，以及 X27 - X4。具有選自 Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E (SEQ IDNO:3)、M-A-P-F-H-E-L-D-V-N-N-H-P-N(SEQ ID NO:4),S-L-N-V-S-F-L-I-D-P-M-A-P-F(SEQID NO :5)和 Q-D-S-N-L-Y-S-S-I-F-F-V-P-Q(SEQ ID NO :6)的序列。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X1為S，X2為選自A和V的胺基酸，X3為K, X4為E, X5為選自E和D的胺基酸，X6為K, X7為N, X25為 S，以及 X27-X4tl 具有選自 Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:3)、M-A-P-F-H-E-L-D-V-N-N-H-P-N(SEQ ID NO:4), S-L-N-V-S-F-L-I-D-P-M-A-P-F(SEQ IDNO:5)和 Q-D-S-N-L-Y-S-S-I-F-F-V-P-Q(SEQ ID NO:6)的序列。
在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X1 - X6具有序列K-R-D-E-N-Q (SEQ ID N0:2)，X7為Q，以及X25為選自T和P的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID N0:1的序列，其中X1-X6具有序列K-R-D-E-N-Q(SEQID N0:2)，X7*N，以及X25*S。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: I的序列，其中X1 - X6具有序列K-R-D-E-N-Q (SEQ ID NO: 2)，X7為Q，X25為選自T和P 的胺基酸，以及 X27 - X4。具有選自 Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E (SEQ ID NO: 3),M-A-P-F-H-E-L-D-V-N-N-H-P-N(SEQ ID NO:4), S-L-N-V-S-F-L-I-D-P-M-A-P-F(SEQ IDNO:5)和 Q-D-S-N-L-Y-S-S-I-F-F-V-P-Q(SEQ ID N0:6)的序列。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID N0:1的序列，其中X1-X6具有序列K-R-D-E-N-Q(SEQ ID NO:2),X7* N, X25 為 S，以及 X27 - X4tl 具有選自 Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E (SEQ ID NO: 3)、M-A-P-F-H-E-L-D-V-N-N-H-P-N(SEQ ID N0:4), S-L-N-V-S-F-L-I-D-P-M-A-P-F(SEQ IDNO:5)和 Q-D-S-N-L-Y-S-S-I-F-F-V-P-Q(SEQ ID NO:6)的序列。在某些實施方案中，本發明的肽包含以下序列或由以下序列組成=S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ IDNO:7) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:8) ;S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:9) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:10) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-T-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:11)；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-T-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:12) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-V-A-A-T-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:13) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-V-A-A-T-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:14) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-P-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:15) ;S_A-K-E-E-K-Q-P-T-t-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-S-A-A-P-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:16) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-S-A-A-P-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:17) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-S-A-A-P-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:18) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E (SEQ ID NO:19) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQID NO:20) ;S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:21);或 S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-S-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:22)。在本段的任何實施方案中，肽的前 6 個胺基酸殘基可用選自 S-V-K-E-E-K(SEQ ID NO: 23), S-A-K-E-D-K(SEQ ID NO: 24)、S-A-K-E-E-K (SEQ ID NO: 25)和 K-R-D-E-N-Q (SEQ ID NO: 26)的序列替代。在本段的任何實施方案中，肽的最後14個胺基酸殘基可用選自Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ IDNO:3)、M-A-P-F-H-E-L-D-V-N-N-H-P-N(SEQ ID NO:4),S-L-N-V-S-F-L-I-D-P-M-A-P-F(SEQID NO:5)和 Q-D-S-N-L-Y-S-S-I-F-F-V-P-Q(SEQ ID NO:6)的序列替代。
在某些實施方案中，本發明的肽包含以下序列或由以下序列組成S-A-K-E-E_K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ IDNO :27) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:28) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-S-A-A-T-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:29) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO :30) ； S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-T-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:31) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-T-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:32) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-V-A-A-T-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:33) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-V-A-A-T-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO :34) ； S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-P-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO :35) ； S-A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-P-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ IDNO:36) ; S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-P-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:37) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-S-A-A-P-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:38) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO :39) ; S-A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO :40) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:41);或 S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-N-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID N0:42)。在本段的任何實施方案中，肽的前6個胺基酸殘基可用選自 S-V-K-E-E-K (SEQ ID NO: 23), S-A-K-E-D-K (SEQ ID NO: 24), S-A-K-E-E-K (SEQID NO: 25)和 K-R-D-E-N-Q (SEQ ID NO: 26)的序列替代。在某些實施方案中，本發明的肽包含以下序列或由以下序列組成=S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ IDNO:43) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:44) ;S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:45) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-T-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO :46) ； S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-T-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO :47)；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-T-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:48) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-V-A-A-T-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:49) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-V-A-A-T-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO :50) ； S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-P-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:51) ;S_A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-S-A-A-P-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E (SEQ ID NO:52) ；S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-S-A-A-P-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:53) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-ff-D-G-S-A-A-P-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E (SEQ ID NO :54) ； S-A-K-E-E-K-Q-T-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO :55) ；S-A-K-E-E-K-Q-P-T-T-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P- K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQID NO :56) ; S-A-K-E-E-K-Q-T-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO :57);或 S-A-K-E-E-K-Q-P-T-V-G-L-Y-G-L-K-Q-D-W-D-G-V-A-A-P-K-Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ ID NO:58)。在本段的任何實施方案中，肽的前 6 個胺基酸殘基可用選自 S-V-K-E-E-K(SEQ ID NO:23), S-A-K-E-D-K(SEQ ID NO:24)、S-A-K-E-E-K (SEQ ID NO: 25)和 K-R-D-E-N-Q (SEQ ID NO: 26)的序列替代。在本段的任何實施方案中，肽的最後14個胺基酸殘基可用選自Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E(SEQ IDNO:3)、M-A-P-F-H-E-L-D-V-N-N-H-P-N(SEQ ID NO:4),S-L-N-V-S-F-L-I-D-P-M-A-P-F(SEQID NO:5)和 Q-D-S-N-L-Y-S-S-I-F-F-V-P-Q(SEQ ID NO:6)的序列替代。在其它實施方案中，本發明的肽包含或由SEQ ID NO:59的序列F-S-A-K-X5-X6-X7-A-E-T-X11-X12-T-F-G-X16-X17-X18-X19-X20-D-G-A-X24-X25-X26-X27-N-X29-V-X31-N-X33-F-T-I-S-N(SEQ ID NO: 59)組成，其中X5為選自E和Q的胺基酸，X6為選自E和Q的胺基酸，X7為任意胺基酸，X11為選自K和R的胺基酸，X12為任意胺基酸，X16為選自L和I的胺基酸，X17為任意胺基酸，X18為選自R和K的胺基酸，X19為選自Q和N的胺基酸，X20為為選自Y和T的胺基酸，X24為任意胺基酸，X25為選自I和L的胺基酸，X26為任意胺基酸，X27為選自E和E的胺基酸，X29為選自E和Q的胺基酸，X31為選自E和Q的胺基酸，以及X33為選自K和R的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含或由SEQ ID NO:59的序列組成，其中X5為E，X6為E，X16為L，X18為K，X20為Y，X25為I，X29為Q，X31為Q，以及X33為K。在其它實施方案中，本發明的肽包含或由SEQ ID NO:59的序列組成，其中X7為K，X12為選自K和R的胺基酸，X17為選自E和D的胺基酸，X24為選自K和D的胺基酸，以及X26為選自E和T的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含以下序列或由以下序列組成=F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-K-T-F-G-L-E-K-N-Y-D-G-A-K-I-E-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:60)；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-K-T-F-G-L-E-K-N-Y-D-G-A-K-I-T-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:61) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-K-T-F-G-L-E-K-N-Y-D-G-A-Q-I-E-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:62) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-K-T-F-G-L-E-K-N-Y-D-G-A-Q-I-T-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:63) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-K-T-F-G-L-D-K-N-Y-D-G-A-K-I-E-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:64) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-K-T-F-G-L-D-K-N-Y-D-G-A-K-I-T-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:65) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-K-T-F-G-L-D-K-N-Y-D-G-A-Q-1-E-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N (SEQ IDNO:66) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-K-T-F-G-L-D-K-N-Y-D-G-A-Q-I-T-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:67) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-R-T-F-G-L-E-K-N-Y-D-G-A-K-1-E-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:68) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-R-T-F-G-L-E-K-N-Y-D-G-A-K-I-T-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:69) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-R-T-F-G-L-E-K-N-Y-D-G-A-Q-I-E-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:70) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-R-T-F-G-L-E-K-N-Y-D-G-A-Q-I-T-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:71) ;F-S_A-K-E-E-K-A-E-T-K-R-T-F-G-L-D-K-N-Y-D-G-A-K-I-T-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ IDNO:72) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-R-T-F-G-L-D-K-N-Y-D-G-A-K-I-E-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:73) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K -R-T-F-G-L-D-K-N-Y-D-G-A-Q-1-E-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:74);或F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-K-R-T-F-G-L-D-K-N-Y-D-G-A-Q-I-T-D-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:75)。在其它實施方案中，本發明的肽包含以下序列或由以下序列組成F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-K-T-F-G-L-E-K-Q-Y-D-G-A-K-I-E-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:76)；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-K-T-F-G-L-E-K-Q-Y-D-G-A-K-I-T-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:77) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-K-T-F-G-L-E-K-Q-Y-D-G-A-Q-I-E-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:78) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-K-T-F-G-L-E-K-Q-Y-D-G-A-Q-I-T-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:79) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-K-T-F-G-L-D-K-Q-Y-D-G-A-K-I-E-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N (SEQ ID NO:80) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-K-T-F-G-L-D-K-Q-Y-D-G-A-K-I-T-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:81) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-K-T-F-G-L-D-K-Q-Y-D-G-A-Q-I-E-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ IDNO:82) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-K-T-F-G-L-D-K-Q-Y-D-G-A-Q-I-T-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:83) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-R-T-F-G-L-E-K-Q-Y-D-G-A-K-1-E-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:84) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-R-T-F-G-L-E-K-Q-Y-D-G-A-K-I-T-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:85) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-R-T-F-G-L-E-K-Q-Y-D-G-A-Q-I-E-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:86) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-R-T-F-G-L-E-K-Q-Y-D-G-A-Q-I-T-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:87) ;F-S_A-K-E-E-K-A-E-T-R-R-T-F-G-L-D-K-Q-Y-D-G-A-K-I-T-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ IDNO:88) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-R-T-F-G-L-D-K-Q-Y-D-G-A-K-I-E-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:89) ；F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-R-T-F-G-L-D-K-Q-Y-D-G-A-Q-1-E-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:90);或F-S-A-K-E-E-K-A-E-T-R-R-T-F-G-L-D-K-Q-Y-D-G-A-Q-I-T-E-N-Q-V-Q-N-K-F-T-I-S-N(SEQ ID N0:91)。在一些實施方案中，本發明的肽包含或由SEQ ID NO:92的序列G-X2-F-S-A-K-X7-X8_K_X10_A_D_T_R_X15_T_F_G_L_X20_K_Q_T_D_G_A_X27_I_X29_E_N_X32~V_X34_N_X36_F_T_I_S_N(SEQ ID NO:92)組成，其中X2為選自D和N的胺基酸，X7為選自E和Q的胺基酸，X8為選自E和Q的胺基酸，X10為任意胺基酸，X15為任意胺基酸，X20為任意胺基酸，X27為任意胺基酸，X29為任意胺基酸，X32為選自E和Q的胺基酸，X34為選自E和Q的胺基酸，以及X36為選自K和R的胺基酸。在某些實施方案中，本發明的肽包含或由SEQ ID N0:92的序列組成，其中X2為N，X7為E，X8為E，X32為Q，X34為Q，以及X36為K。在其它實施方案中，本發明的肽包含或由 SEQ ID N0:93 的序列 DNQVQNKFTISNYSFKYEDNP(SEQ ID NO:93)組成。在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:92的序列以及額外的N末端肽序列(例如，N末端延伸)。額外的N末端序列可包含1、2、3、
4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或更多個胺基酸。在某些實施方案中，N末端肽序列具有約5至約10、約10至約15、約15至約20、約20至約25、約25至約30、約30至約40或約40至約50個胺基酸的長度。在一個實施方案中，N末端肽序列可以是G-N或G-D。例如，在某些實施方案中，本發明的肽包含SEQ ID NO:59的序列和額外的N末端肽序列G-N或G-D。額外的N末端肽序列可以是天然序列。如本文中所用，「天然」序列是來自天然存在的埃裡希體屬0MP-1序列的肽序列或其變體。在某些實施方案中，肽序列為天然存在的埃裡希體屬0MP-1序列的片段。肽序列可以例如來自0MP-1的保守或非保守區域。
肽序列可包括例如表位，例如優勢免疫表位或可被宿主(例如，人、狗等)免疫系統識別的任何其它表位。0MP-1蛋白及其肽已描述於例如美國專利第6，544，517號、第6，893，640號、第6，923，963號、第7，063，846號和第7，407，770號、美國專利申請2004/0265333和第2009/0075368號以及歐洲專利第1026949號中，這些專利的內容以引用的方式併入本文。變異多肽與SEQ ID N0:USEQ ID N0:7_22和SEQ ID NO:27-94中顯示的肽具有至少約80%、85%、90%、95%、98%或99%的同一性並且也是本發明的多肽。序列同一性百分比具有本領域公認的意義並且存在許多測量兩個多肽或多核苷酸序列之間的同一性的方法。參見，例如，Lesk 編著，Computational Molecular Biology, Oxford University Press, NewYork, (1988) ;Smith 編著，Biocomputing :Informatics And Genome Projects, AcademicPress, New York, (1993) ；Griffin & Griffin, Eds. , Computer Analysis Of SequenceData, Part I, Humana Press, New Jersey, (1994) ；von Heinje, Sequence Analysis InMolecular Biology, Academic Press, (1987)以及 Gribskov & Devereux, Eds. , SequenceAnalysis Primer, M Stockton Press, New York, (1991)。用於比對多核苷酸或多妝的方法被編碼在電腦程式中，包括GCG程序包(Devereux等，Nuc. Acids Res. 12:387(1984))、BLASTP、BLASTN、FASTA (Atschul 等，J Molec. Biol. 215:403 (1990))和 Bestfit 程j予(Wisconsin Sequence Analysis Package,用於 Unix 的 8 fe. , Genetics ComputerGroup, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, Wis. 5371JJ ，其使用Smith 和 Waterman 的局部同源性算法(Adv. App. Math.，2:482-489 (1981))。例如，可使用採用FASTA算法的電腦程式ALIGN,對於仿射空位搜索(affine gap search)使用為-12的空位開放罰分(gapopen penalty)和為_2的空位拓展罰分(gap extension penalty)。當使用任何序列比對程序確定特定序列例如是否與參照序列具有約95%的同一性時，將參數設定為在參照多核苷酸的全長範圍內計算同一性百分比並和允許達到參照多核苷酸的核苷酸總數的5%的同一'丨生中的空位。肽序列的變體可由本領域技術人員部分基於序列的已知性質來容易地確定。例如，變異肽可包括胺基酸置換(例如，保守胺基酸置換)和/或缺失(例如，小的、單個胺基酸缺失、或包括2、3、4、5、10、15、20或更多個連續胺基酸的缺失)。因此，在某些實施方案中，天然肽序列的變體是與天然存在的序列相異在於(i) ー個或多個(例如，2、3、4、5、6或更多個)保守胺基酸置換，(ii)l個或多個(例如，2、3、4、5、6或多個)胺基酸的缺失或(iii)其組合的序列。缺失的胺基酸可以是連續的或非連續的。保守胺基酸置換是在它們的側鏈和化學性質上相關的胺基酸的家族內發生的那些置換。這些包括例如(I)酸性胺基酸天冬氨酸、穀氨酸；(2)鹼性胺基酸賴氨酸、精氨酸、組氨酸；(3)非極性胺基酸丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；(4)不帶電荷的極性胺基酸甘氨酸、天冬醯胺、穀氨醯胺、半胱氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸；(5)脂族胺基酸甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸，絲氨酸和蘇氨酸任選地被分別分類為脂肪族-羥基；(6)芳族胺基酸苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸；(7)醯胺胺基酸天冬醯胺、穀氨醯胺；和(9)含硫胺基酸半胱氨酸和甲硫氨酸。參見，例如，Biochemistry，第2版，編著L. Stryer，W H Freeman和Co. :1981。用於確認合適變異多肽的方法是傳統和常規的方法。
肽序列的變體包括先前定義的肽序列上的變異。例如，包含已知表位的先前描述的肽序列可在一端或兩端被延伸或縮短(例如，約1-3個胺基酸)，和/或1、2、3、4或更多個胺基酸可被保守胺基酸置換等。此外，如果蛋白質的區域已被鑑定為包含目標表位，則研究者可從原始未加工區域的終點「遷移」目標區域(例如，在任一方向上約5個胺基酸)以最優化活性。在某些實施方案中，額外的N末端肽序列可包含或由另ー個肽組成，所述肽具有SEQ ID N0:USEQ ID N0:59或SEQ ID NO:92的序列。因此，在一些實施方案中，本發明的肽可以是具有SEQ ID NOiUSEQ ID N0:59或SEQ ID N0:92的序列的序列的多聚體。在其它實施方案中，N末端肽序列是與SEQ ID NO: 1、SEQ ID N0:59或SEQ ID N0:92的序列的N末端天然相鄰的天然0MP-1肽序列。例如，在一個實施方案中，肽可包括SEQ ID N0:94的多聚體，(KEEKAETRKTFGLEKQYDGAKIEENQVQNKGGGGG)n，其中 N=l-10。在其它實施方案中，肽可任選地通過ー個或多個連接胺基酸包括SEQ ID NO: K SEQ ID NO:59, SEQ ID N0:92或SEQ ID NO:94的序列的融合序列。例如，在一個實施方案中，肽可包括任選地通過ー個或多個連接胺基酸(例如甘氨酸殘基)連接至SEQ ID N0:94的SEQ ID NO: I的序列。在另一個實施方案中，肽可包括任選地通過ー個或多個連接胺基酸(例如甘氨酸殘基)連接至SEQ ID NO:92 的 SEQ ID NO: I 的序列。在某些實施方案中，額外的N末端肽序列為非天然序列。如本文中所用，「非天然」序列是除天然0MP-1肽序列外的任何蛋白質序列，無論是來自埃裡希體屬蛋白還是是來自其它蛋白。在某些實施方案中，額外的N末端肽序列包含埃裡希體屬表面抗原的表位。在某些實施方案中，額外的N末端肽序列包括埃裡希體屬抗原例如p38、p43、pl20、pl40、pl53、pl56、p200、gpl9、gp36、gp47、gp200或HGE-3的表位。已描述了對應於埃裡希體屬抗原的蛋白質和肽序列。參見，例如，美國專利No. 6，306，402,6, 355，777,7, 204，992和7，407，770以及W02006/138509，所述專利和公布的內容以引用的方式併入本文。還可使用來源於其它微生物的多肽或肽。在某些實施方案中，額外的N末端肽序列是序列的組合。例如，額外的N末端肽序列可包含天然序列、非天然序列或這類序列的任何組合(例如，兩個或更多個天然序列、兩個或更多個非天然序列或ー個或多個天然序列與ー個或多個非天然序列的組合)。在某些實施方案中，本發明的肽包含由SEQ ID NO: I、SEQ ID N0:59或SEQ IDNO:92定義的序列並且還包含額外的C末端序列。額外的C末端肽序列可包1、2、3、4、5、6、
7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或更多個胺基酸。在某些實施方案中，額外的C末端序列具有約5至約10、約10至約15、約15至約20、約20至約25、約25至約30、約30至約40或約40至約50個胺基酸的長度。額外的C末端肽序列可以是天然OMP-I序列。在某些實施方案中，C末端肽序列為天然存在的埃裡希體屬0MP-1序列的片段。肽序列可以例如來自0MP-1的保守或非保守區域。肽序列可包含例如表位，例如優勢免疫表位或可被宿主(例如，人、狗等)免疫系統識別的任何其它表位。在某些實施方案中，額外的C末端肽序列可包含或由另ー個具有SEQ ID NO: K SEQ ID N0:59或SEQ ID NO:92的序列的肽組成。例如，在某些實施方案中，本發明的肽可以是各自具有SEQ ID NO: K SEQ ID N0:59或SEQID N0:92的序列的序列的多聚體。在其它實施方案中，天然序列為與SEQ ID N0:USEQ IDNO:59或SEQ ID NO:92的序列的C末端天然相鄰的0MP-1序列。在某些實施方案中，額外的C末端肽序列為非天然序列。在某些實施方案中，額外的C末端肽序列包含除0MP-1外的埃裡希體屬表面抗原的表位。在某些實施方案中，額外C末端肽序列包含埃裡希體屬抗原例如p38、p43、pl20、pl40、pl53、pl56、p200、gpl9、gp36、gp47、gp200或HGE-3的表位。還可使用來源於其它微生物的多肽或肽。
在某些實施方案中，額外的C末端肽序列是序列的組合。例如，額外的C末端肽序列可包含天然、非天然序列或這類序列的任何組合(例如，兩個或更多個天然序列、兩個或更多個非天然序列或ー個或多個天然序列與ー個或多個非天然序列的組合)。在某些實施方案中，本發明的肽包含由SEQ ID NO: I、SEQ ID N0:59或SEQ IDNO: 92定義的序列並且還包含額外的N末端肽序列和額外的C末端肽序列。額外的N末端和C末端肽序列可是上文中所描述的。本發明的肽不由全長0MP-1蛋白組成。然而，在某些實施方案中，本發明的肽可包含全長0MP-1蛋白。在其它實施方案中，本發明的肽不包含全長0MP-1蛋白。可設計包含額外的N末端和/或C末端肽序列的本發明的肽以用於在感染後早期(例如，在感染發生後I至2周內)診斷埃裡希體屬感染。例如，在某些實施方案中，額外的N末端和/或C末端肽序列包含與埃裡希體屬感染的早期階段相關的抗原或表位。除了上述序列外，額外的N末端和C末端序列還可包含或由柔性序列組成，所述柔性序列經設計用以在免疫測定(例如，ELISA測定、側流免疫測定、凝集測定等)中更好地呈遞本發明的肽以進行檢測。此類柔性序列可由本領域技術人員容易地鑑定。在某些實施方案中，本發明的肽包含或由25或更多個(例如，26、27、28、29或更多個)胺基酸殘基組成。在某些實施方案中，本發明的肽包含或由30或更多個(例如，31、32、33、34或更多個)胺基酸殘基組成。在某些實施方案中，本發明的肽包含或由35或更多個(例如，36、37、38、39或更多個)胺基酸殘基。在某些實施方案中，本發明的肽包含或由40或更多個(例如，41、42、43、44或更多個)胺基酸殘基。在某些實施方案中，本發明的肽包含或由45或更多個(例如，46、47、48、49或更多個)胺基酸殘基。在某些實施方案中，本發明的肽包含或由50或更多個(例如，51、52、53、54或更多個)胺基酸殘基。在某些實施方案中，本發明的肽包含或由55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多個胺基酸殘基組成。在某些實施方案中，本發明的肽包含本文中描述的肽序列的表位。例如，在某些實施方案中，本發明的肽包含選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID N0:7至SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:94的序列的表位。在某些實施方案中，本發明的肽包含本文中描述的肽序列的片段。例如，在某些實施方案中，本發明的肽包含選自SEQ ID NO: I、SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:22以及SEQ IDN0:27至SEQ ID N0:94的序列的片段。片段的長度可以為例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43或44個胺基酸。片段可以是連續的或可包括一個或多個缺失(例如，I、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個胺基酸殘基的缺失)。在某些實施方案中，片段包括美國專利第 6，306，402 號、第 6，355，777 號、第 7，204，992 號或第 7，407，770 號或 W02006/138509中所示的序列。在某些實施方案中，片段不由美國專利第6，306，402號、第6，355，777號、第7，204, 992號和第7，407，770號以及W02006/138509的一個或多個中所示的序列組成。包含本文中描述的肽序列的片段的本發明的肽還可包含額外的N末端肽序列、額外的C末端肽序列或其組合。額外的N末端和C末端肽序列 可為如上所述。包含額外N末端或C末端肽序列的本發明的肽還可包含連接肽(例如，SEQ IDNO: I、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 92的肽或其片段)與額外的N末端或C末端肽序列的接頭。接頭可以是例如肽間隔區。這類間隔區可由例如約I至5個(例如，約3個)胺基酸殘基，優選不帶電荷的胺基酸例如脂肪族殘基(例如甘氨酸或丙氨酸)組成。在一個實施方案中，間隔區是三聯體甘氨酸間隔區。在另ー個實施方案中，間隔區是三聚體丙氨酸間隔區。在另ー個實施方案中，間隔區包含甘氨酸和丙氨酸殘基。或者，接頭可以是化學(即，非妝)接頭。在某些實施方案中，本發明的肽通過合成化學(即，「合成肽」)產生。在其它實施方案中，本發明的肽通過生物產生(即，通過細胞機器例如核糖體)。在某些實施方案中，本發明的肽是分離的。如本文中所用，「分離的」肽是已合成或生物產生的並且隨後至少部分地從用於產生所述肽的化學藥品和/或細胞機器純化的肽。在某些實施方案中，本發明的分離的肽是基本上純化的。術語「基本上純化的」，如本文中所用，是指分子例如肽，其大體上不含用於肽的合成的細胞材料(蛋白質、脂質、糖類、核酸等)、細胞培養基、化學前體、化學藥品及其組合。基本上純化的肽具有約40%、30%、25%、20%、15%、10%、5%、2%、1%或更少的用於肽的合成的細胞材料、細胞培養基、其它多肽、化學前體和/或化學藥品。因此，大體上純的分子例如肽，可以為按乾重計至少約60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%的目標分子。本發明的分離的肽可存在於水、緩衝液中或以待覆水的乾燥形式例如作為試劑盒的部分存在。本發明的分離的肽可以以藥學上可接受的鹽的形式存在。能夠與本發明的肽形成鹽的適當的酸和鹼對於本領域技術人員而言是熟知的，並且包括無機和有機酸及鹼。在某些實施方案中，親和純化本發明的肽。例如，在某些實施方案中，本發明的肽利用它們結合杭-埃裡希體屬抗體(例如，針對0MP-1蛋白和任選地其它埃裡希體屬抗原的抗體)的能力來純化，通過將這類抗體與本發明的肽接觸(以便肽-抗體複合物能夠形成)，洗滌肽-抗體複合物以除去雜質，然後從抗體洗脫肽來進行。抗體可以被例如連接至固體支持物。親和純化的方法對於本領域技術人員來而言是熟知的和常規的。在某些實施方案中，對本發明的肽進行修飾。可通過多種技術，例如通過用加熱和/或去垢劑(例如，SDS)變性來修飾本發明的肽。或者，可通過與ー種或多種其它部分結合來修飾本發明的肽。結合可以是共價或非共價的，並且可以是例如通過末端胺基酸接頭例如賴氨酸或半胱氨酸、化學偶聯劑或肽鍵。其它部分可以是例如配體、配體受體、融合伴侶、可檢測標記物、酶或固定肽的基底。
可將本發明的肽綴合至配體例如生物素(例如，通過半胱氨酸或賴氨酸殘基)、月旨質分子(例如，通過半胱氨酸殘基)或載體蛋白(例如，血清白蛋白、免疫球蛋白Fe結構域，通過例如半胱氨酸或賴氨酸殘基)。與配體例如生物素的連接對於將肽與配體受體例如抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白、多聚鏈黴抗生物素蛋白(參見，例如US2010/0081125和US2010/0267166，兩者以引用的方式併入本文)或中性抗生物素蛋白結合是有用的。抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白、多聚鏈黴抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白又可連接至信號部分(signaling moiety)(例如,酶例如辣根過氧化物酶(HRP)或鹼性磷酸酶,或可被可觀察到的其它部分，例如膠體金或螢光部分)或固體基底(例如，Immobi Ion 或硝酸纖維素膜)。或者，可將本發明的肽與配體受體例如抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白、多聚鏈黴抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白融合或連接，從而促進肽與對應的配體例如生物素和任何部分(例如，信號部分)或與其連接的固體基底的結合。其它配體-受體對的實例在本領域是熟知的並且可以類似方式使用。本發明的肽可與至融合伴侶(例如，肽或其它部分)融合，所述融合伴侶可用於改善純化，以增強肽在宿主細胞中的表達，幫助檢測、使肽穩定等。用於融合伴侶的適當化合物的實例包括載體蛋白質(例如，血清白蛋白、免疫球蛋白Fe結構域)、辣根過氧化物酶 (HRP)、β -半乳糖苷酶、穀胱甘肽S-轉移酶、組氨酸標籤等。融合可通過例如肽鍵來實現。例如，本發明的肽和融合伴侶可以是融合蛋白並且可在框內直接融合或可包含肽接頭，如上文在額外的N末端和C末端肽序列的上下文中所論述。此外，可修飾本發明的肽以包括任何已知化學基團或分子種類。這類修飾包括但不限於糖基化、こ醯化、醯化、ADP-核糖基化、醯胺化、與聚こニ酵的共價連接(例如，PEG化)、黃素的共價連接、血紅素部分的共價連接、核苷酸或核苷酸衍生物的共價連接、脂質或脂質衍生物的共價連接、磷脂醯肌醇的共價連接、交聯、環化、ニ硫鍵形成、脫甲基化、共價交聯的形成、胱氨酸的形成、焦穀氨酸的形成、甲醯化、Y羧化、GPI錨形成、羥化、碘化、甲基化、豆蘧醯化、氧化、蛋白酶解加工、磷醯化、異戊烯化、外消旋化、硒化(selenoyleation)、硫酸化、遍在蛋白化、利用脂肪酸的修飾、轉運RNA介導的胺基酸至蛋白質的添加例如精氨醯化等。還可包含胺基酸的類似物(包括非天然胺基酸)和具有取代的連接的肽。由本文中論述的任何序列組成的本發明的肽可通過任何論述的修飾來進行修飾。這類肽仍然由胺基酸「組成」。上文所示的修飾對於本領域技術人員而言是熟知的並且已十分詳細地描述在科學文獻中。幾種特別常見的修飾例如糖基化、脂質連接、硫酸化、穀氨酸殘基的Y-羧化、羥化和ADP-核糖基化描述於許多基礎教科書中，例如Proteins-Structure and MolecularProperties,第 2 版，Τ· E. Creighton, ff. H. Freeman and Company, New York (1993)。可獲得關於該主題的許多詳細綜述，例如由Wold, F.撰寫的Posttranslational CovalentModification of Proteins, B. C. Johnson, Ed. , Academic Press, New York 1-12(1983)；Seifter 等(1990)Meth. Enzymol. 182:626-646 和 Rattan 等(1992)Ann. N. Y. Acad.Sci.663:48-62。在某些實施方案中，本發明的肽被連接至或固定在基底上，例如固體或半固體支持物。連接可以是共價或非共價連接，並且可通過與使得能夠共價或非共價結合的肽連接的部分(例如對連接至載體、支持物或表面的組分具有高親和カ的部分)來促迸。例如，肽可與配體例如生物素連接，與表面連接的組分可以是對應的配體受體例如抗生物素蛋白。可在免疫測定過程中在添加含抗體的樣品之前或之後，將肽連接至或固定在基底上。在某些實施方案中，基底為珠粒例如膠粒(例如，由金、銀、鉬、銅、金屬複合材料、其它軟金屬製造的膠體納米顆粒、核心-殼結構顆粒或中空金納米球)或其它類型的顆粒(例如，磁珠或包含ニ氧化矽、乳膠、聚苯こ烯、聚碳酸酷、聚丙烯酸酯或PVDF的顆粒或納米顆粒)。這類顆粒可以包含標記物(例如，比色、化學發光或螢光標記物)並且可在免疫測定過程用於使肽的定位可看。在某些實施方案中，本發明的肽的末端半胱氨酸用於將肽直接結合至從金、銀、鉬、銅、金屬複合材料、其它軟金屬等 製造的納米顆粒。在某些實施方案中，基底為點印跡或側流免疫測定裝置中的流動通道。例如，肽可被連接至或固定在多孔膜例如PVDF膜(例如，ImmobiIon 膜)、硝酸纖維素膜、聚こ烯膜、尼龍膜或相似類型的膜上。在某些實施方案中，基底為分析轉頭中的流動通道。在其它實施方案中，基底為管或孔例如適用於ELISA測定的板(例如，微量滴定板)中的孔。這類基底可包括玻璃、基於纖維素的材料、熱塑性聚合物例如聚こ烯、聚丙烯或聚酷、由顆粒材料組成的燒結構(例如，玻璃或各種熱塑性聚合物)或由硝酸纖維素、尼龍、聚碸等組成的澆鑄膜薄膜。基底可以是聚こ烯的燒結細粒，通常稱為多孔聚こ烯，例如，來自ChiOmexCorporation (Albuquerque, NM)的O. 2-15微米多孔聚こ烯。所有這類基底材料可以以適當形狀(例如薄膜、片或板)使用，或可將它們塗覆至或結合或層合至適當的惰性載體例如紙、玻璃、塑料薄膜或織物上。用於將肽固定在固相上的適當的方法包括離子、疏水、共價相互作用等。因此，在另ー個方面，本發明提供了裝置。在某些實施方案中，裝置用於進行免疫測定。例如，在某些實施方案中，裝置為側流免疫測定裝置。在其它實施方案中，裝置為分析轉頭。在其它實施方案中，裝置為斑點印跡。在其它實施方案中，裝置為管或孔，例如適用於ELISA測定的板中的。在其它實施方案中，裝置為電化學傳感器、光學傳感器、或光電傳感器。在某些實施方案中，裝置包含本發明的肽。在其它實施方案中，裝置包含本發明的不同肽的混合物。例如，在某些實施方案中，裝置包含2、3、4或更多種不同的本發明的肽。在某些實施方案中，肽或混合物中的每ー種肽包含SEQ ID NO: I、SEQ ID N0:59或SEQ IDNO:92的序列。在其它實施方案中，肽或混合物中的每ー種肽包含SEQ ID NO: I的序列。在某些實施方案中，肽被連接至或固定在裝置上。在另ー個方面，本發明提供了包含一種或多種本發明的肽的組合物。例如，在某些實施方案中，本發明提供了包含含有SEQ ID NO: I的序列的肽或其混合物的組合物。在某些實施方案中，組合物包含 2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、400、500或更多種肽(例如，由SEQ ID NO: I定義的所有可能的肽)的混合物。在某些實施方案中，肽包含N末端和/或C末端添加和/或被修飾(例如，通過與ー種或多種其它部分結合)，如本文中所描述的。在某些實施方案中，肽包含相同N末端和/或C末端添加。在其它實施方案中，肽包含不同N末端和/或C末端添加。在其它實施方案中，本發明提供了包含含有SEQ ID N0:59或SEQ ID N0:92的序列的肽或其混合物的組合物。在某些實施方案中，組合物包含 2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、400、500 或更多種肽(例如，由 SEQ ID N0:59 或 SEQ ID NO: 92
定義的所有可能的肽)的混合物。在某些實施方案中，組合物包含一種或多種本發明的肽以及ー種或多種額外的肽例如埃裡希體屬肽或抗原、來自ー個或多種感染性埃裡希體屬的物種的肽或抗原，或來自單核細胞埃裡希體病的ー種或多種病原體的肽或抗原。埃裡希體屬肽或抗原可以是任何埃裡希體屬表面肽或抗原，或本文中描述的任何肽或抗原(例如，OMP-U p38、p43、pl20、P140、p 153、p 156、p200、gp 19、gp36、gp47、gp200或HGE-3蛋白的任何肽或抗原或其任何片段或表位。組合可包含各個肽或多肽的混合物(簡單混合物)，其可以以融合肽或多肽的形式存在(例如，多聚體肽)，或肽可通過樹狀聚合物連接(例如，如在MAPS結構中)。本發明的肽可在其N末端或C末端融合至另ー種合適的肽。可將兩個或更多個拷貝的本發明的肽與另ー種肽(単獨地或與ー個或多個額外的肽組合地)連接。可使用融合或未融合的肽或多肽的組合。在一個實施方案中，額外的肽包含來自埃裡希體屬肽或抗原、來自感染性埃裡希體屬的物種的肽或抗原或來自單核細胞埃裡希體病的病原體的肽或抗原的B細胞和/·或T細胞表位。在另ー個方面，本發明提供了包含編碼本發明的肽的序列的核酸。本發明的核酸包含少於完整微生物基因並且可以是單鏈或雙鏈的。核酸可以是RNA、DNA、cDNA、基因組DNA、化學合成的RNA或DNA或其組合。核酸可經純化而不含其它組分例如蛋白質、脂質和其它多核苷酸。例如，核酸可以是50%、75%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%純化的。本發明的核酸編碼本文中描述的肽。在某些實施方案中，核酸分子編碼具有SEQ ID NO: 1、SEQID N0:7-22或SEQ ID NO: 27-94的序列或其組合的肽。本發明的核酸可包含其它核苷酸序列，例如編碼接頭、信號序列、TMPR終止轉移序列、跨膜結構域或用於蛋白質純化的配體例如穀胱甘肽S-轉移酶、組氨酸標籤和葡萄球菌屬的蛋白A的序列。可分離本發明的核酸。「分離的」核酸是不與與其天然連接的5'和3'側翼基因組序列之一或兩者直緊接的核酸。分離的核酸可以是例如任何長度的重組DNA分子，只要天然地被發現在天然存在的基因組中緊密地側翼連接重組DNA分子的核酸序列被除去或不存在。分離的核酸還包括非天然存在的核酸分子。本發明的核酸還可包含編碼免疫原性肽的片段。本發明的核酸可編碼全長多肽、肽片段以及變體或融合肽。本發明的核酸可以至少部分地從存在於例如來自被感染的個體的生物樣品例如血液、血清、唾液、或組織中的核酸序列分離。核酸還可以例如使用自動合成儀在實驗中合成。擴增法例如PCR可用於至少部分地從編碼多肽的基因組DNA或cDNA擴增核酸。本發明的核酸可包含天然存在的多肽的編碼序列或可編碼非天然存在的改變的序列。若需要，可將核酸克隆入包含表達控制元件(包括例如，複製起始點、啟動子、增強子或在宿主細胞中驅動本發明的多核苷酸表達的其它調控元件)的表達載體。表達載體可以是例如質粒例如pBR322、pUC或ColEl，或腺病毒載體例如原病毒2型載體或5型載體。任選地，可使用其它載體，包括但不限於辛德畢斯病毒、猿猴病毒40、甲病毒屬載體、痘病毒載體以及巨細胞病毒和逆轉錄病毒載體例如鼠肉瘤病毒、小鼠乳腺瘤病毒、Moloney鼠白血病病毒和勞斯肉瘤病毒。還可使用微型染色體(Minichromosome)例如MC和MCI、卩遼菌體、曬菌粒、酵母人工染色體、細菌人工染色體、病毒顆粒、病毒樣顆粒、粘粒(已向其中插入了 λ噬菌體cos位點的質粒)和複製子(能夠在它們自已的控制下在細胞中複製的基因元件)。
用於製備有效地連接至表達控制序列的多核苷酸和在宿主細胞中表達它們的方法在本領域是熟知的。參見例如，美國專利No. 4，366，246。當本發明的核酸位於鄰近或接近一個或多個指導多核苷酸的轉錄和/或表達的表達控制元件時，所述核酸是有效連接的。因此，例如，本發明的肽可按常規基因工程技術重組產生。為了產生本發明的重組肽，將編碼肽的核酸插入適當的表達載體。通常，構建重組分子或載體，其中編碼選擇的肽的多核苷酸序列被有效地連接至允許所述肽表達的表達控制序列。許多類型的適當的表達載體在本領域是已知的，包括例如包含細菌、病毒、酵母、真菌、昆蟲或哺乳動物表達系統的載體。獲得和使用這類表達載體的方法是熟知的。關於用於本發明的組合物或方法的該和其它分子生物學技術的指導，參見，例如，Sambrook等，Molecular Cloning, ALaooratory Manual, current edition, Cold Spring Harbor Laboratory, New fork ；Miller 等，Genetic Engineering, 8:277-298 (Plenum Press,現行版本)，Wu 等，Methodsin Gene Biotechnology (CRC Press, New York, N. Y.,現行版本)，Recombinant GeneExpression Protocols, in Methods in Molecular Biology,第 62 在，(Tuan 編著，HumanaPress, Totowa, N. J.,現行版本)和 Current Protocols in Molecular Biology, (Ausabel 等，Eds·，)John Wiley & Sons，NY (現行版本)以及其中引用的參考資料。因此，本發明還提供了包含本發明的核酸的載體，和包含這類載體的宿主細胞。在某些實施方案中，載體是穿梭載體。在其它實施方案中，載體是表達載體(例如，細菌或真菌表達載體)。在某些實施方案中，宿主細胞是細菌細胞。在其它實施方案中，宿主細胞是真核細胞。用於通過本方法進行本發明的重組核酸或載體轉染的適當宿主或細胞系包括細菌細胞。例如，大腸桿菌(E. coli)的各種菌株(例如，HBlOU MC1061)眾所周知為生物技術學領域的宿主細胞。枯草桿菌(Bacillus subtilis)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、鏈黴菌屬(Streptomyces)的各種菌株以及其它桿菌等也可用於該方法。或者，可使用常規方法在酵母、昆蟲、哺乳動物或其它細胞類型中表達本發明的肽。本發明還提供了用於產生重組肽或多肽的方法，所述方法包括例如通過常規方法例如電穿孔用至少ー種表達載體轉染或轉化宿主細胞，所述表達載體包含處於表達控制序列(例如，轉錄調控序列)的控制之下的本發明的多核苷酸。隨後將轉染或轉化的宿主細胞在允許所述肽或多肽表達的條件下進行培養。回收、分離表達的肽或多肽，任選地通過對於本領域技術人員而言是已知的適當方法包括液相色譜(例如正相或反相)(使用HPLC、FPLC等)、親和層析(例如利用無機配體或單克隆抗體)、大小排阻層析、固定金屬螯合層析、凝膠電脈等從細胞(或從培養基，如果細胞外表達的話)純化所述肽或多肽。本領域技術人員可在不背離本發明的範圍的情況下選擇最適當的分離和純化技術。本領域技術人員可通過使用標準方法包括例如聚丙烯醯胺凝膠(例如，SDS-PAGE)、毛細管電泳、柱層析(例如，高效液相色譜(HPLC))或氨基-末端胺基酸分析來測定肽或多肽的純度。方^在另ー個方面，本發明提供了檢測樣品中的針對埃裡希體屬抗原的表位的抗體的方法。在某些實施方案中，所述方法包括將樣品與本發明的肽接觸，檢測包含所述肽的抗體-肽複合物的形成，其中所述複合物形成表示針對埃裡希體屬抗原的表位的抗體存在於所述樣品中。在某些實施方案中，埃裡希體屬抗原來自感染性埃裡希體屬的物種。在某些實施方案中，埃裡希體屬抗原來自病原性埃裡希體屬的物種例如恰菲埃裡希體和犬埃裡希體。還可使用本發明的方法檢測牽涉單核細胞埃裡希體病的埃裡希體屬的其它物種，只要它們可誘導可與本發明的肽特異性反應的抗體。因此，應理解，術語「病原性埃裡希體屬」，如本文中所用，是指引發單核細胞埃裡希體病的任何這樣的埃裡希體屬的物種。在某些實施方案中，所述方法包括將樣品與2、3、4或更多種(例如，5、6、7、8、9、
10、15、20、25、30、40、50、60、7 0、80、90、100、150、200、250、300、400、500 或更多種)不同的本發明的肽的混合物接觸。在某些實施方案中，所述方法包括將樣品與一種或多種本發明的肽和ー種或多種其它肽(例如，埃裡希體屬肽或其抗原性片段或表位例如埃裡希體屬表面抗原或 0MP-1、p38、p43、pl20、pl40、pl53、pl56、p200、gpl9、gp36、gp47、gp200 或 HGE-3蛋白)的混合物接觸。在某些實施方案中，肽或混合物中的每ー種肽是分離的(例如，合成和/或純化的)肽。在某些實施方案中，肽或肽的混合物被連接至或固定在固體支持物上。在某些實施方案中，固體支持物為珠粒(例如，膠粒、納米顆粒、膠乳珠粒等)、側流免疫測定裝置中的流動通道(例如，多孔膜)、分析轉頭中的流動通道、管或孔(例如，在適用於ELISA測定的板中)或傳感器(例如，電化學、光學或光電傳感器)。在某些實施方案中，檢測步驟包括進行ELISA測定。在其它實施方案中，檢測步驟包括進行側流免疫測定。在其它實施方案中，檢測步驟包括進行凝集測定(例如，血凝集或顆粒/珠粒凝集測定)。在其它實施方案中，檢測步驟包括在分析轉頭中離心樣品。在其它實施方案中，檢測步驟包括用電化學、光學或光電傳感器分析樣品。存在許多不同的用於檢測包含本發明的肽的抗體-肽複合物的形成的常規測定法。例如，檢測步驟可包括進行ELISA測定，進行側流免疫測定，進行凝集測定，分析分析轉頭中的樣品，或利用電化學、光學或光電傳感器分析樣品。這三種測定法在上文中進行了描述和/或對於本領域技術人員而言是熟知的。在一個實施方案中，所述方法包括檢測天然存在的抗埃裡希體屬抗原(例如，病原性埃裡希體屬例如和恰菲埃裡希體或犬埃裡希體的抗原)抗體的存在，所述抗體由感染的受試者的免疫系統在其生物液體或組織中產生，並且能夠與本發明的肽或本發明的肽的組合和任選地ー種或多種適當的額外的抗原性多肽或肽特異性結合。適當的免疫測定法通常包括接受或獲得(例如，從患者)可能含有抗體的體液或組織的樣品；將(例如，溫育或反應)待測定的樣品與本發明的肽在對於特異性肽-抗體複合物的形成是有效的條件下接觸(例如，以進行肽與抗體的特異性結合)；和測定接觸的(反應的)樣品的抗體-肽反應的存在(例如，測定抗體-肽複合物的量)。増加量的抗體-肽複合物的存在表示受試者暴露於並且感染了感染性埃裡希體屬的物種。「特異性結合」(例如，「特異幹」或與……「特異性」結合)抗埃裡希體屬抗原抗體的肽，包括其修飾形式，與抗體相互作用，或以一定的量與其形成或經歷物理結合併且進行足夠的時間以允許檢測抗體。所謂〃特異性地〃或〃優先地〃是指肽對於這樣的抗體比對於樣品中的其它抗體具有更高的親和カ(例如，更高的選擇性程度)。例如，肽對於所述抗體與對於樣品中的其它抗體相比較可具有至少約I. 5倍、2倍、2. 5倍、3倍或更高的親和力。這樣的親和力或特異性的程度可通過多種常規方法來測定，包括例如，競爭性結合研究。在ELISA測定中，陽性反應被定義為大於ー組健康対照的平均值2或3個標準差。在一些實施方案中，需要第二層次的測定(second tier assay)來提供明確的單核細胞埃裡希體病的血清診斷。短語例如「含抗體的樣品」或「檢測樣品中的抗體」不是指排除其中不含抗體或未檢測到抗體的樣品或測定(例如，檢測嘗試)。在一般意義上，本發明包括確定響應感染性埃裡希體屬的感染而產生的抗體是否存在於樣品中，無論其是否被檢測到。用於使肽與抗體反應以便它們特異性反應的條件對於本領域技術人員而言是熟知的。參見，例如，Current Protocols in Immunology (Coligan 等，編者，John Wiley &bons, Incノ。所述方法包括接受或獲得可能包含來自受試者的抗體的體液或組織的樣品。抗體可具有例如IgG、IgE、IgD、IgM或IgA類型。一般地，IgM和/或IgA抗體被檢測到，例如在感染的早期被檢測到。當將某些上述其它肽(例如，用於鞭毛蛋白的檢測的肽)用於本方法時，可檢測到IgG抗體。樣品優選易於獲得並且可以是來源於靜脈血樣品或甚至來自手指刺扎的全血、血漿或血清。已知來自其它身體部分的組織或其它液體例如腦脊髓液(CSF)、唾液、胃分泌物、粘液、尿等包含抗體，從而可用作樣品的來源。 一旦允許肽抗原和樣品抗體在適當的介質中反應，則進行測定以確定抗體-肽反應的存在或不存在。在許多類型的適當測定法中，對於本領域技術人員來部很明顯的是免疫沉澱和凝集測定。在本發明的某些實施方案中，測定包括固定樣品中的抗體；添加本發明的肽；和檢測抗體與肽結合的程度，例如通過被標記的肽或通過添加標記物質例如標記結合伴侶(例如，鏈黴抗生物素蛋白-HRP或鏈黴抗生物素蛋白-膠體金複合物)或特異性識別所述肽的標記抗體。參見例如，圖I。在其它實施方案中，測定包括固定本發明的肽；添加包含抗體的樣品；和檢測與肽結合的抗體的量，例如通過添加直接或間接綴合至標記物(例如，膠體金複合物、螢光標記物、酶(例如，辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶))的本發明的另ー種肽，或通過添加標記物質例如特異性識別樣品抗體(例如，抗-人IgG抗體、抗-人IgM抗體，抗-狗IgG抗體、抗-狗IgM抗體、蛋白A、蛋白G、蛋白L或其組合等)的結合伴侶或標記抗體來進行檢測。參見例如，圖3。在其它實施方案中，測定包括將肽與包含抗體的樣品反應(無任何反應物被固定)，隨後檢測抗體與肽的複合物的量，例如通過被標記的肽或通過添加標記物質，例如標記結合伴侶(例如，鏈黴抗生物素蛋白-HRP或鏈黴抗生物素蛋白-肢體金複合物)或特異性識別所述肽的標記抗體來進行檢測。本發明的肽的固定可以是共價或非共價的，非共價固定可以是非特異性的(例如，在例如微量滴定孔中與聚苯こ烯表面的非特異性結合)。與固體或半固體載體、支持物或表面的特異性或半特異性結合可通過肽來實現，所述肽具有使得其能夠與固體或半固體載體、支持物或表面共價或非共價結合的部分或與該部分結合。例如，所述部分可具有對連接至載體、支持物或表面的組分的親和力。在該情況下，所述部分可以是例如與肽的胺基酸基團例如6-氨基己酸結合的生物素或生物素基或其類似物，並且組分是抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白、中性抗生物素蛋白或其類似物。另ー選擇是其中所述部分具有胺基酸序列His-His-His-His-His-His (SEQ ID NO: 95)並且載體包含帶有Ni++或Co++離子的次氮基三こ酸(NTA)衍生物的情況。適當的載體、支持物和表面包括但不限於珠粒(例如，磁珠、膠粒或納米顆粒例如膠體金或包含ニ氧化矽、乳膠、聚苯こ烯、聚碳酸酯或HWF的顆粒或納米顆粒)、共聚物例如苯こ烯-ニこ烯基苯、輕基化苯こ烯-ニこ烯基苯、聚苯こ烯、羧化聚苯こ烯的膠乳、碳黑的珠粒、非活化的或聚苯こ烯或聚氯こ烯活化的玻璃、環氧-活化的多孔磁性玻璃、明膠或多糖顆粒或其它蛋白質顆粒、紅細胞、單或多克隆抗體或這類抗體的Fab片段。用於使用抗原檢測特異性抗體的免疫測定的方案在本領域是熟知的。例如，可使用常規夾心測定法，或可使用常規競爭性測定形式。關於ー些適當類型的測定法的論述，參見Current Protocols inlmmunology(同上)。在某些實施方案中，在添加包含抗體的樣品之前或之後，通過共價或非共價結合將本發明的肽固定在固體或半固體表面或載體上。用於進行特異性結合測定尤其是免疫測定的裝置是已知的並且可容易地調節以適用於本方法。固相測定法通常比需要分離步驟，例如沉澱、離心、過濾、色譜或磁力的非勻相測定法(heterogeneous assay method)更容易進行，因為試劑的分離更快更簡單。固相測定裝置包括微量滴定板、流通測定(flow-through assay)裝置(例如，側流免疫測定裝置)、浸潰片和免疫毛細管(immunecapillary)或免疫色譜免疫測定(immunochromatographic immunoassay)裝:在本發明的實施方案中，固體或半固體表面或載體為微量滴定孔中的底或孔、濾·紙表面或膜(例如，硝酸纖維素膜或PVDF(聚偏氟こ烯)膜例如Immobi Ion 膜)、中空纖維、珠粒色譜介質(beaded chromatographic medium)(例如，瓊脂糖或聚丙烯醯胺凝膠)、磁珠、纖維狀纖維素基質、HPLC基質、FPLC基質、具有這樣的尺寸的分子的物質(所述尺寸可使具有與其結合的肽的分子，當溶解或分散在液相中時，可通過過濾器保留)、能夠形成膠束或參與膠束的形成(從而允許液相改變或交換而不夾帶膠束的物質、水溶性聚合物或任何其它適當的載體、支持物或表面。在本發明的某些實施方案中，給肽提供使得能夠檢測其的適當標記物。可使用能夠單獨地或與其它組合物或化合物協同地提供可檢測信息的常規標記物。適當的標記物包括但不限於酶(例如，HRP、β-半乳糖苷酶等)、螢光標記物、放射性標記物和綴合有金屬的標記物(例如，綴合有膠體金的標記物)。適當的檢測法包括例如，利用比色測定進行的被直接或間接標記的試劑的檢測(例如，用於HRP或β_半乳糖苷酶活性的檢測)、使用光學顯微鏡進行的目檢、免疫螢光顯微鏡檢查，包括共聚焦顯微鏡檢查或利用流式細胞術(FACS)、放射自顯影術(例如，用於放射性標記的試劑的檢測)、電子顯微鏡檢查、免疫染色、亞細胞分級分離等。在一個實施方案中，將放射性元素(例如，放射性胺基酸)直接摻入肽鏈；在另ー個實施方案中，螢光標記物通過生物素/杭生物素蛋白相互作用，與綴合有螢光素的抗體結合等來與肽結合。在一個實施方案中，將抗體的可檢測特異性結合伴侶添加至混合物中。例如，結合伴侶可以是可檢測第二抗體或結合第一抗體的其它結合劑(例如，蛋白Α、蛋白G、蛋白L)。該第二抗體或其它結合劑可以例如用放射性標記物、酶標記物、螢光標記物、發光標記物或其它可檢測標記物例如抗生物素蛋白/生物素系統來標記。在另ー個實施方案中，結合伴侶為本發明的肽，其可被直接或間接(例如通過生物素/抗生物素蛋白相互作用)綴合至酶例如辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶。在這類實施方案中，可通過添加產生可檢測信號的酶的底物例如生色底物、螢光生成底物或化學發光底物來產生可檢測信號。如本文中所用，用於檢測結合的肽的「檢測系統」可以包括可檢測結合伴侶，例如對肽具有特異性的抗體。在一個實施方案中，直接標記結合伴侶。在另ー個實施方案中，將結合伴侶連接至信號產生試劑例如酶，所述酶，在適當的底物存在的情況下，可產生可檢測信號。用於固定肽的表面可任選地伴隨檢測系統。在本發明的實施方案中，檢測方法包括目測抗體-肽複合物的顏色變化或檢查抗體-肽複合物的物理-化學變化。物理-化學變化可隨氧化還原反應或其它化學反應而發生。這些變化可通過眼睛，使用分光光度計等來檢測。特別有用的測定形式為側流免疫測定形式。針對人或動物(例如，狗、小鼠、鹿等)免疫球蛋白或葡萄球菌(staph)A、G或L蛋白的抗體可用信號產生物或報導分子(例如，膠體金)來標記，可在玻璃纖維墊(樣品施加墊或綴合墊)上乾燥和放置信號產生物或報導分子(例如，膠體金)。將診斷肽固定在膜例如硝酸纖維素或PVDF(聚偏氟こ烯)膜(例如，Immobilon 膜)上。當將樣品的溶液(血液、血清等)施用於樣品施加墊(或流過綴合墊)時，其可溶解標記報導分子，隨後所述報導分子結合樣品中的所有抗體。隨後所得的複合物通過毛細管作用轉運到下ー個膜(含有診斷肽的PVDF或硝酸纖維素)中。如果抗診斷肽抗體存在，那麼它們結合在膜成帶的診斷肽，從而產生信號(例如，可看到或觀察到的條帶)。特異於標記抗體或第二標記抗體的其它抗體可用於產生對照信號。作為該測定 形式的變型，可以以使樣品中的抗體能夠經過並且結合診斷條紋上的肽的方式將樣品施用至樣品施加墊，然後可將第二「顯影劑」溶液添加至樣品施加墊，其中顯影劑溶液包含標記報導分子(或例如，溶解存在於樣品施加墊或綴合墊中的標記報導分子)。隨後顯影劑溶液通過毛細管作用將標記報導分子運送至診斷條紋，在該處標記報導分子可結合與位於該診斷條紋上的肽結合的任何樣品抗體用於側流免疫測定的替代形式包括本發明的肽或組合物被綴合至配體(例如，生物素)和與標記的配體受體(例如，鏈黴抗生物素蛋白-膠體金)複合。可將標記肽複合物置於樣品施加墊或綴合墊上。杭-人IgG/IgM或抗-動物(例如，狗、小鼠、鹿)IgG/IgM抗體或本發明的其它多肽被固定在測試位置(例如，檢測線(test line))上的膜上，例如PVDF的硝酸纖維素。當將樣品添加至樣品施加墊時，樣品中的抗體與標記的肽複合物反應，使得結合本發明的肽的抗體被間接標記。樣品中的抗體隨後通過毛細管被轉運至下ー個膜(含有診斷肽的PVDF或硝酸纖維素)並且結合固定的抗-人IgG/IgM或抗-動物IgG/IgM抗體(或蛋白A、蛋白G、蛋白L或其組合)或固定的本發明的肽。如果樣品抗體的任何抗體結合本發明的標記肽，那麼可在測試位點看到或觀察到與所述肽結合的標記物。該類型的側流裝置的一個實施方案示於圖2中。其中本發明的肽可用作測試位點上的固定捕獲劑和與樣品中的抗體反應的可溶性標記複合物的該類型的側流裝置的另ー個實施方案示於圖3中。用於該測定的適當的對照可包括例如定位在樣品施加墊或綴合墊上的雞IgY-膠體金綴合物，和固定在靠近測試位點的對照位點上的抗-雞IgY抗體。還可修飾該形式以具有「顯影劑(developer) 」溶液。例如，顯影劑溶液可包含(或溶解)標記的配體受體。用於篩選血液產物或其它生理學或生物學液體的另ー種測定法是酶聯免疫吸附測定法，即ELISA。通常，在ELISA中，本發明的分離的肽或組合物被直接或通過捕獲基底(例如，抗體)吸附至微量滴定孔的表面。隨後用適當的試劑例如牛血清白蛋白(BSA)、熱滅活的正常山羊血清(NGS)或BLOTTO(也包含防腐劑、鹽和消泡劑的脫脂奶粉的緩衝溶液)封閉表面上的殘留的非特異性蛋白-結合位點。隨後用懷疑包含特異性杭-埃裡希體屬(例如，杭-恰菲埃裡希體或杭-犬埃裡希體)抗體的生物樣品溫育孔。可單純使用樣品，或更常見地將其通常稀釋在包含少量(按重量計O. 1-5. 0%)的蛋白質例如BSA、NGS或BLOTTO的緩衝液中。在溫育足夠長的時間以允許特異性結合發生後，洗滌孔以除去未結合的蛋白質，隨後與最佳濃度的適當的杭-免疫球蛋白抗體(例如，用於人受試者，來自另ー種動物例如狗、小鼠、牛等的抗-人免疫球蛋白(HuIg))，或通過標準方法綴合至酶或其它標記物並且溶解於封閉緩衝液中的本發明的另ー種肽一起溫育。標記物可選自多種酶包括辣根過氧化物酶(HRP)、β-半乳糖苷酶、鹼性磷酸酶、葡糖氧化酶等。進行足夠的時間以允許特異性結合再次發生，隨後再次洗滌孔以除去未結合的綴合物，然後添加酶的合適底物。進行顯色，通過視覺或通過儀器(在適當的波長上測量)測定孔的內容物的光密度。截斷OD值可定義為至少50個從個體(所述個體來自埃裡希體病不是地方性的地區)收集的血清祥品平均0D+3個標準差(SD)或通過其它這類常規定義來定義。在非常具體的測定的情況下，0D+2SD可用作截斷值。在ELISA的一個實施方案中，本發明的肽被固定在表面上，例如96孔ELISA板或 或等同的固相，所述板或固相用鏈黴抗生物素蛋白或等同的生物素-結合化合物例如抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白以在鹼性塗覆緩衝液中的最佳濃度進行塗覆並且在4°C下溫育過夜。在用標準洗滌緩衝液洗滌適當的次數後，將溶解在常規封閉緩衝液中的最佳濃度的本發明的肽或組合物的生物素化形式用於每ー個孔。隨後加入樣品，如上進行測定。用於進行ELISA測定的條件在本領域是熟知的。用於ELISA測定的替代形式表徵了連接(例如，融合)至適當的酶例如HRP的本發明的肽。用於進行這樣的ELISA的步驟包括用抗-狗或杭-人IgG/IgM塗覆板的孔；將懷疑包含針對本發明的肽的抗體的樣品與固定的抗-種IgG/IgM —起溫育；除去未反應的樣品，用適當的洗滌緩衝液洗滌孔；施加酶-偶聯的(例如，HRP-偶聯的)本發明的肽，使其與任何捕獲的杭-埃裡希體屬抗體反應；和通過應用適當的酶底物(例如，TMB)來使酶-偶聯的肽可視。在另ー個實施方案中，所述方法包括凝集測定法。例如，在某些實施方案中，將膠粒(例如，膠體金等)或膠乳珠粒綴至本發明的肽或組合物。隨後，將生物液體與珠粒/肽綴合物一起溫育，從而形成反應混合物。然後分析反應混合物以確定抗體的存在。在某些實施方案中，凝集測定法包括使用第二顆粒群例如膠粒(例如，膠體金等或膠乳珠粒，所述顆粒綴合至(I)特異於本發明的肽的抗體(在競爭性測定的情況下)或(2)能夠檢測樣品抗體(例如，抗-人IgG或I gM抗體、抗-狗IgG或IgM抗體等)的抗體(在夾心測定的情況下)。適當的凝集法可包括離心作為評估凝集的程度的手段。在其它實施方案中，本發明的肽或組合物被電印跡或斑點印跡到硝酸纖維素紙上。隨後，將樣品例如生物液體(例如，血清或血漿)與印跡的抗原一起溫育，使生物液體中的抗體與所述抗原結合。結合的抗體隨後可以例如通過標準免疫酶促法或通過使用偶聯至第二抗體或其它抗體結合劑例如蛋白A、蛋白G、蛋白L或其組合的膠體納米顆粒的可視化來進行檢測。本領域技術人員應當理解，可設計許多常規蛋白質測定形式，特別是免疫測定形式來利用本發明的分離的肽檢測受試者中的埃裡希體屬抗體和由病原性埃裡希體屬(例如，恰菲埃裡希體或犬埃裡希體引起的感染。因此本發明不受特定測定形式的選擇限制，並且被認為包括本領域技術人員已知的測試形式。
在某些實施方案中，用於所述方法的樣品為體液例如血液、血清、腦脊髓液、尿或唾液。在其它實施方案中，樣品是組織(例如，組織勻漿物)或細胞裂解物。在某些實施方案中，樣品來自野生動物(例如，鹿或嚙齒類動物，例如小鼠、金花鼠、松鼠等)。在其它實施方案中，樣品來自實驗室動物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴、靈長類動物等)。在其它實施方案中，樣品來自馴養動物或野化家畜(例如，狗、貓、馬)。在其它實施方案中，樣品來自人。許多前述討論涉及抗病原性埃裡希體屬的檢測。然而，應理解，所述討論還用於體外或體內檢測已接觸抗原的T細胞。預期產生細胞介導的免疫反應(例如，T-輔助細胞反應)，因為產生了 IgG。因此預期可能測定已接觸抗原的T細胞與本發明的肽之間的免疫反應性。在體外，這可通過用本發明的肽溫育從受試者分離的T細胞，然後測量免疫反應性(例如通過測量隨後T細胞的増殖或通過測量細胞因子例如IFN-Y從T細胞的釋放)來進行。這類方法在本領域是熟知的。
當在體內進行本發明的方法時，可使用許多種常規測定法。例如，可以以皮試的形式，例如通過在受試者中皮內注射本發明的肽來進行測定。在注射位置上的陽性皮膚反應表明受試者已暴露於並且感染了能夠引起單核細胞埃裡希體病的病原性埃裡希體屬，在注射位置上的陰性皮膚反應表明受試者未經歷這樣的暴露/感染。這樣的測試或其它體內測試依賴於受試者的T細胞反應的檢測。在另ー個方面，本發明提供了診斷受試者的單核細胞埃裡希體病方法。受試者可以是懷疑具有抗單核細胞埃裡希體病的病原體的抗體的受試者。診斷方法對於診斷表現出單核細胞埃裡希體病的臨床症狀的受試者是有用的。在某些實施方案中，所述方法包括將來自受試者的樣品與本發明的肽接觸，然後檢測包含所述肽的抗體-肽複合物的形成，其中所述複合物的形成表明受試者患有埃裡希體病。在某些實施方案中，所述方法包括將樣品與本發明的2、3、4或更多種(例如，5、6、7、
8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、400、500 或更多種)不同的肽的混合物接觸。在某些實施方案中，所述方法包括將樣品與一種或多種本發明的肽和ー種或多種其它肽(例如，埃裡希體屬肽，或其抗原性片段或表位，例如來自埃裡希體屬表面蛋白或埃裡希體屬 0MP-1、p38、p43、pl20、pl40、pl53、pl56、p200、gpl9、gp36、gp47、gp200或HGE-3蛋白的)的混合物接觸。在某些實施方案中，肽或混合物中的每ー種肽是分離的(例如，合成和/或純化的)肽。在某些實施方案中，肽或不同肽的混合物被連接至或固定在基底(例如，固體或半固體支持物)上。例如，在某些實施方案中，基底是珠粒(例如，膠體或其它類型的顆粒或納米顆粒)、側流免疫測定裝置中的流動通道(例如，多孔膜)、分析轉頭中的流動通道或管或孔(例如，在適用於ELISA測定的板中)。存在許多不同的用於檢測包含本發明的肽的抗體-肽複合物的形成的常規測定法。例如，檢測步驟可包括進行ELISA測定，進行側流免疫測定，進行凝集測定和在分析轉頭中分析樣品，或利用電化學、光學或光電傳感器分析樣品。這樣不同的測定法已在上文中進行了描述和/或對於本領域技術人員而言是熟知的。在某些實施方案中，樣品為體液例如血液、血清、腦脊髓液、尿或唾液。在其它實施方案中，樣品為組織(例如，組織勻漿物)或細胞裂解物。在某些實施方案中，樣品為野生動物(例如，鹿或嚙齒類動物例如小鼠、金花鼠、松鼠等)。在其它實施方案中，受試者是實驗室動物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴、靈長類動物等)。在其它實施方案中，受試者是馴養動物或野化家畜(例如，狗、貓、馬)。在其它實施方案中，受試者為人。試劑盒
在另ー個方面，本發明提供了試劑盒。在某些實施方案中，試劑盒包括本發明的肽。在某些實施方案中，試劑盒包括2、3、4或更多種不同的本發明的肽。肽可包含SEQ IDNOiUSEQ ID N0:59或SEQ ID NO:92的序列。在某些實施方案中，肽可被連接至或固定在固體支持物上。例如，在某些實施方案中，固體支持物是珠粒(例如，膠粒或納米顆粒)、側流免疫測定裝置中的流動通道、分析轉頭中的流動通道或管或孔(例如，在板中)。還可在本發明的試劑盒中提供用於特定類型的測定的試劑。因此，試劑盒可包括珠粒群(例如，適用於凝集測定或側流測定)或板(例如，適用於ELISA測定的板)。在其它實施方案中，試劑盒包括裝置例如側流免疫測定裝置、分析轉頭或電化學、光學或光電傳感器。珠粒、板和裝置的群體用於進行免疫測定。例如，它們可用於檢測包含來自樣品的抗體和本發明的肽的抗體-肽複合物的形成。在某些實施方案中，本發明的肽、不同肽的混合物或本發明的肽組合物被連接至或固定在珠粒、板或裝置上。此外，試劑盒可包括各種稀釋劑和緩衝劑、標記綴合物或用於檢測特異性結合的抗原或抗體的其它試劑以及其它信號產生試劑，例如酶底物、輔因子和色原。試劑盒的其它組分可由本領域技術人員容易地確定。這類組分可包括包衣試劑、特異於本發明的肽的多克隆或單克隆捕獲抗體，或兩種或更多種抗體的混合物、作為標準的這類抗原的純化或半純化的提取物、單克隆抗體檢測器抗體、杭-小鼠、抗-狗、杭-雞或杭-人抗體(具有綴合至其的指示劑分子)、用於比色法比較的指示劑圖表、一次性手套、浄化說明書(,aecontamination instruction；、敷藥棒或·#^!、樣品帝!J備利、-(,sample preparatory cup)等。在一個實施方案中，試劑盒包括適用於構建允許肽-抗體複合物的形成的反應培養基的緩衝液或其它試劑。這類試劑盒為臨床實驗室提供了診斷由病原性埃裡希體屬例如恰菲埃裡希體或犬埃裡希體引起的感染的方便高效的方法。因此，在某些實施方案中，試劑盒還包括說明書。例如，在某些實施方案中，試劑盒包括顯示如何使用本發明的肽檢測針對埃裡希體屬抗原的抗體或診斷單核細胞埃裡希體病的說明書。在某些實施方案中，試劑盒包括顯示如何使用珠粒群、板或裝置(例如，包括本發明的肽或不同肽的混合物)來檢測針對埃裡希體屬抗原的抗體或或診斷單核細胞埃裡希體病的說明書。本發明的肽、包含所述肽的組合物和裝置、試劑盒和方法提供了許多優點。例如，它們允許單核細胞埃裡希體病的簡單、便宜、快速、靈敏和精確的檢測並且避免與具有相似症狀的其它病況的血清學交叉反應性。這允許準確的診斷。此外，本發明的診斷測試(例如，ELISA測試、側流免疫測定或凝集測定)在包含杭-0MP-1抗體或響應基於埃裡希體屬的外表面蛋白的疫苗而產生的其它抗體的血清樣品中是有用的。下列實施例說明本發明的不同方面。當然，這些實施例應當理解為僅說明本發明的僅某些實施方案並且不構成對本發明的範圍的限制。實施例實施例I使用已知對於埃裡希體屬呈陽性或陰性的血清樣品進行浸潰片測試。浸潰片由2mm寬的HF180硝酸纖維素(具有17mm CF6上影線和包含連接至硝酸纖維素膜的AIRM-2肽的捕獲線)組成。AIRM-2肽是各自具有SEQ ID NO: I的序列的生物素化的肽的混合物，其通過鏈黴抗生物素蛋白被連接至膜。浸潰片的下半區用PBS、l%BSA、l%Triton X-100, pH7. 4的溶液封閉。最初，連接至浸潰片的AIRM-2肽的量在O. lmg/ml、0. 5mg/ml和I. Omg/ml之間變化，對於每一種肽濃度，肽鏈黴抗生物素蛋白的比率進ー步在1:1、1:4和1:8之間變化。測試由如下步驟組成將每ー張浸潰片置於包含40 μ I TBS的孔中，使孔傾空(洗滌步驟)；將 μ I的樣品斑滴在每ー張浸潰片的封閉的下半區上；將每ー張浸潰片置於包含40μ I的綴合物的孔中，使孔傾空；讀取每ー張浸潰片的捕獲線上的任何信號。綴合物由·
埃裡希體屬陽性樣品(R09266_007(BH19))的結果示於表I和2中表I
ODl 綴合物+0·1 my/mi Γ ODl 綴合#;;-0.5 "ば⑷ I ODl 綴合翁+1.0 mg/m 裡 Λ iRM-2Ai RM-2ΛIRM-2
SA 比率(OpI)SA 比率(OpI)SA 比率(Opl)
_1:1__8__1:1__9__1:1__Il _
_ 1:4__9__1:4__11__1:4__11 _
_1:8__9__1:8__11__1:8__11 _表2
0D2 級合物 + 0.1 mg/ml OD2 綴合物 + 0.5 mg/ml OD2 綴合物 +1,0 mg/ml
AIRM-2Λ iRM-2AIRM-2'
_SA 比率__(OpI)__SA Λ率__(OpI)__SA 比率__(Opl) _
1:1101:181:1II
r _1:441:4111:411------
1:8」 111:811_ 1:85埃裡希體屬陰性樣品(R09266-008)的對應結果全部為O。雖然示於表I和2中的關於埃裡希體屬陽性樣品的所有結果在捕獲線上產生陽性信號，但具有1:4或1:8比率的肽鏈黴抗生物素蛋白的O. 5mg/mlAIRM-2肽似乎提供了用於進ー步測試的最佳捕獲條件。實施例2按照實施例I的方法利用O. 5mg/ml AIRM-2肽、1:4的肽鏈黴抗生物素蛋白比
率和ODl綴合物進行浸潰片測試，測試一組埃裡希體屬陽性和陰性血清樣品。結果示於表3中。表權利要求
1.一種包含式 SEQ ID NO: I 的序列 XfXfXfXfXs-Xg-XY-Xg-T-Xnj-Xn-Xu-XfG-L-K-Q-X18-W-X20-G-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36-X37-X38-X39-X40 (SEQ IDNO: I)的分離的多肽，其中X1 - X6和X27 - X40的每一個為任意胺基酸，X7為選自N和Q的胺基酸，X8為選自T和P的胺基酸，Xltl為選自T和V的胺基酸，X11為選自G和A的胺基酸，X12為選自L和V的胺基酸，X13為選自Y和F的胺基酸，X18為選自D和N的胺基酸，X20為選自D和N的胺基酸，X22為選自S和V的胺基酸，X23為選自A、S和T的胺基酸，X24為選自A和I的胺基酸，X25為選自S、T和P的胺基酸，以及X26為選自S、N和K的胺基酸。
2.根據權利要求I所述的分離的肽，其中X7為Q，並且X25為選自T和P的胺基酸。
3.根據權利要求I所述的分離的肽，其中X1為選自S和K的胺基酸，X2為選自A、V和R胺基酸，X3為選自K和D的胺基酸，X4為E，X5為選自E、D和N的胺基酸，X6為選自K和Q的胺基酸。
4.根據權利要求I所述的分離的肽，其中X1為S，X2為選自A和V的胺基酸，X3為K，X4為E，X5為選自E和D的胺基酸，並且X6為K。
5.根據權利要求I所述的分離的肽，其中X27-X4tl具有選自Q-R-K-N-D-P-S-E-T-S-P-G-Q-E (SEQ ID NO: 3)、M-A-P-F-H-E-L-D-V-N-N-H-P-N(SEQ ID NO:4)、 S-L-N-V-S-F-L-I-D-P-M-A-P-F (SEQ ID NO:5)和Q-D-S-N-L-Y-S-S-I-F-F-V-P-Q(SEQ ID NO:6)的序列。
6.根據權利要求I所述的分離的肽，其包含額外的N末端肽序列，其中所述額外的N末端肽序列為天然OMP-I序列或非-0MP-1埃裡希體屬抗原。
7.根據權利要求I所述的分離的肽，其包含額外的C末端肽序列，其中所述額外的C末端肽序列為天然0MP-1序列或非-0MP-1埃裡希體屬抗原。
8.根據權利要求6或7所述的分離的多肽，其中所述非-0MP-1埃裡希體屬抗原選自埃裡希體屬 p38、p43、pl20、pl40、pl53、pl56、p200、gpl9、gp36、gp47、gp200 或 HGE-3 蛋白。
9.根據權利要求I所述的分離的肽，其包含至少30、35、40、45、50或60個胺基酸。
10.根據權利要求I所述的分離的肽，其中所述分離的肽被綴合至配體。
11.根據權利要求I所述的分離的肽，其中所述分離的肽被生物素化。
12.根據權利要求I所述的分離的肽，其中所述分離的肽被綴合至抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白、中性抗生物素蛋白或HRP或其膠體金綴合物。
13.根據權利要求I所述的分離的肽，其被連接至或固定至固體支持物。
14.根據權利要求I所述的分離的肽，其被連接至或固定至珠粒、側流免疫測定裝置中的流動通道、微量滴定板中的孔、或轉頭中的流動通道。
15.根據權利要求I所述的分離的肽，其中所述肽包含選自SEQID N0:7-22和SEQ IDNO :27-58的序列。
16.一種包含第一分離肽和第二分離肽的分離的肽的混合物，其中所述第一分離肽與所述第二分離肽不同，並且其中所述第一和第二分離肽各自包含SEQ ID N0:1的序列，X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-T-X10-X11-X12-X13-G-L-K-Q-X18-W-X20-G-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X3O-X3I-X32-X33-X34-X35-X36-X37-X38-X39-X4O(SEQ ID NOI), 其中X1 - X6和X27 - X40的每一個為任意胺基酸，X7為選自N和Q的胺基酸，X8為選自T和P的胺基酸，X10為選自T和V的胺基酸，X11為選自G和A的胺基酸，X12為選自L和V的胺基酸，X13為選自Y和F的胺基酸，X18為選自D和N的胺基酸，X2tl為選自D和N的胺基酸，X22為選自S和V的胺基酸，X23為選自A、S和T的胺基酸，X24為選自A和I的胺基酸，X25為選自S、T和P的胺基酸，以及X26為選自S、N和K的胺基酸。
17.—種包含三種或更多種不同的分離的肽的分離的肽的混合物，其中每一種分離的肽包含SEQ ID NO: I的序列，X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-T-X10-X11-X12-X13-G-L-K-Q-X18-W-X20-G-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X3O-X3I-X32-X33-X34-X35-X36-X37-X38-X39-X4O(SEQ ID NO I) 其中X1 - X6和X27 - X40的每一個為任意胺基酸，X7為選自N和Q的胺基酸，X8為選自T和P的胺基酸，X10為選自T和V的胺基酸，X11為選自G和A的胺基酸，X12為選自L和V的胺基酸，X13為選自Y和F的胺基酸，X18為選自D和N的胺基酸，X2tl為選自D和N的胺基酸，X22為選自S和V的胺基酸，X23為選自A、S和T的胺基酸，X24為選自A和I的胺基酸，X25為選自S、T和P的胺基酸，以及X26為選自S、N和K的胺基酸。
18.根據權利要求16或17所述的混合物，其中每一種分離的肽被綴合至配體。
19.根據權利要求16或17所述的混合物，其中所述分離的肽的一種或多種被生物素化。
20.根據權利要求16或17所述的混合物，其中所述分離的肽的一種或多種被綴合至抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白。
21.根據權利要求16或17所述的混合物，其中每一種分離的肽被固定至固體支持物。
22.一種用於檢測樣品中的針對埃裡希體屬抗原的表位的抗體的方法，所述方法包括 將樣品與權利要求I所述的分離的肽接觸；和 檢測包含所述分離的肽的抗體-肽複合物的形成， 其中所述複合物的形成表明針對埃裡希體屬抗原的表位的抗體存在於所述樣品中。
23.根據權利要求22所述的方法，其中所述埃裡希體屬抗原來自恰菲埃裡希體或犬埃裡希體物種。
24.根據權利要求22所述的方法，其中所述分離的肽被固定至固體支持物。
25.根據權利要求24所述的方法，其中所述固體支持物是珠粒、側流免疫測定裝置中的流動通道、微量滴定板中的孔、或轉頭中的流動通道。
26.根據權利要求22所述的方法，其中所述檢測步驟包括(i)進行ELISA測定，(ii)進行側流測定，(iii)進行凝集測定或(iv)通過分析轉頭運行所述樣品。
27.根據權利要求22所述的方法，其中所述樣品來自人或犬受試者。
28.根據權利要求22所述的方法，其中所述樣品為血液、血清、腦脊髓液、尿或唾液樣品O
29.根據權利要求22所述的方法，其包括將所述樣品與權利要求I所述的一種或多種樣品接觸。
30.一種用於診斷受試者的單核細胞埃裡希體病的方法，所述方法包括 將來自所述受試者的樣品與權利要求I所述的分離的肽接觸；和 檢測包含所述肽的抗體-肽複合物的形成， 其中所述複合物的形成表明所述受試者患有單核細胞埃裡希體病。
31.一種試劑盒，其包括權利要求I所述的一種或多種分離的肽和能夠結合識別所述一種或多種分離的肽的表位的抗體的標記試劑。
32.根據權利要求31所述的試劑盒，其中所述一種或多種分離的肽被連接至固體支持物。
33.根據權利要求31所述的試劑盒，其中所述一種或多種分離的肽被連接至珠粒、管或孔、側流測定裝置或分析轉頭。
34.根據權利要求31所述的試劑盒，其中所述標記試劑為綴合至可檢測標記物的抗-人或抗-犬IgG抗體。
35.根據權利要求34所述的試劑盒，其中所述可檢測標記物為膠體金顆粒。
36.一種包含式SEQ ID NO: 59 的序列F-S-A-K-X5-X6-X7-A-E-T-X11-X12-T-F-G-X16-X17-Xi8_Xi9_X2(rD-G-A-X24-X25-X26-X27-N-X29-V-X31-N-X33-F-T-I-S-N(SEQ ID NO:59)的分尚的妝，其中X5為選自E和Q的胺基酸，X6為選自E和Q的胺基酸，X7為任意胺基酸，X11為選自K和R的胺基酸，X12為任意胺基酸，X16為選自L和I的胺基酸，X17為任意胺基酸，X18為選自R和K的胺基酸，X19為選自Q和N的胺基酸，X20為為選自Y和T的胺基酸，X24為任意胺基酸，X25為選自I和L的胺基酸，X26為任意胺基酸，X27為選自E和E的胺基酸，X29為選自E和Q的胺基酸，X31為選自E和Q的胺基酸，以及X33為選自K和R的胺基酸。
37.根據權利要求36所述的分離的肽，其中X5為E、X6為E、X16為UX18為K、X2tl為Y、X25 為 I、X29 為 Q、X31 為 Q 以及 X33 為 K。
38.根據權利要求36所述的分離的肽，其中X7為K，X12為選自K和R的胺基酸，X17為選自E和D的胺基酸，X24為選自K和D的胺基酸，以及X26為選自E和T的胺基酸。
39.一種包含式 SEQ ID NO: 92 的序列 G-X2-F-S-A-K-X7-X8-K-Xltl-A-D-T-R-X15-T-F-G-L_X2(I_K_Q_T_D_G_A_X27_I_X29_E_N_X32_V_X34_N_X36_F_T_I_S_N(SEQ ID NO: 92)的分尚的妝，其中X2為選自D和N的胺基酸，X7為選自E和Q的胺基酸，X8為選自E和Q的胺基酸，Xiq為任意胺基酸，X15為任意胺基酸，X20為任意胺基酸，X27為任意胺基酸，X29為任意胺基酸，X32為選自E和Q的胺基酸，X34為選自E和Q的胺基酸，以及X36為選自K和R的胺基酸。
40.根據權利要求39所述的分離的肽，其中X2為N，X7為E，X8為E，X32為Q，X34為Q以及X36為K。
41.根據權利要求36或39所述的分離的肽，其被連接至或固定至固體支持物。
42.根據權利要求41所述的分離的肽，其被連接或固定至珠粒、側流免疫測定裝置中的流動通道、微量滴定板的孔或轉頭中的流動通道。
全文摘要
本發明提供了用於檢測結合埃裡希體屬抗原的抗體的組合物(例如，肽組合物)。肽組合物包含基於埃裡希體屬外膜蛋白1(OMP-1)蛋白的免疫原性片段的多肽序列。本發明還提供了包含這類肽組合物和用於檢測結合埃裡希體屬抗原的抗體和診斷單核細胞埃裡希體病的裝置、方法和試劑盒。
文檔編號G01N33/53GK102834411SQ201080061669
公開日2012年12月19日 申請日期2010年11月19日 優先權日2009年11月20日
發明者R·K·梅拉, K·P·阿倫, D·M·布萊利 申請人:愛貝斯股份有限公司