新的治療藥物傳遞系統的製作方法

2023-06-25 09:42:01

專利名稱：：新的治療藥物傳遞系統的製作方法相關申請本申請是下列兩件與此有關的美國專利申請書的部分繼續，它們於1991年6月18日提出申請，申請號各為716,899和717,084。並且這兩件美國專利申請是1990年8月20日申請的申請號為569,828的美國專利申請的部分繼續，而申請號為569,828的美國專利申請則系1989年12月22日申請的申請號為455,707的美國專利申請的部分繼續。所有這些申請均可併入本文作為參考。
背景技術：
：發明領域本發明涉及治療藥物傳遞領域，更準確地講，是有關包含治療化合物的充氣微球體。本發明進一步涉及使用這種微球體作為治療藥物傳遞系統的方法。發明背景由於藥物毒性的問題，靶定位藥物傳遞方式就顯得格外重要。特定的藥物傳遞方法能降低毒性副作用，降低所需要的劑量，並能降低病人治病所需的費用。本發明的目的在於尋找這些和/或其它藥物釋放領域中的重要需要。現有技術中向活細胞內導入遺傳物質的方法和材料是有限的並且效果不好。迄今已設計出幾種不同的將遺傳物質傳送到活細胞內的機制。這些機制包括方法如磷酸鈣沉澱和電微孔(electroporation)，以及載體如陽離子聚合物和注水脂質體。這些方法在體內均為相對無效且對細胞培養轉染僅有有限的用途。這些方法中無論哪一種均不能使遺傳物質更有效地局部釋放，傳遞以及整合於靶細胞中。需要更好的傳遞治療用物質如遺傳物質的方式來治療人及動物的各種疾病。在表徵遺傳疾病和了解蛋白質轉錄方面雖已取得較大進展，但在向用於治療人和動物疾病的細胞中傳遞遺傳材料方面只取得相對較小的進展。主要困難是遺傳物質從細胞外區向細胞內區的傳遞或甚至在選定的細胞膜表面如何有效定位遺傳物質。在體內已嘗試了多種方法但均沒有取得較大進展。例如，病毒如腺病毒和逆轉錄病毒曾被用作載體向細胞中傳遞遺傳物質。全病毒曾被使用過，但遺傳物質的數量則是有限的並可能存在著可能由活病毒引起的危險性相互作用，其中所述遺傳物質可以置於病毒膠囊內。病毒膠囊的主要組分可以被分離並可用於向選擇細胞內傳送遺傳物質。然而，傳送賦形劑在體內不僅必須識別某些細胞而且還必須被傳送到這些細胞。儘管對病毒載體已進行了廣泛研究，但仍難以開發出成功的在體內可傳送遺傳物質的靶向病毒傳遞載體。常規包含液體的脂質體在細胞培養中業已被用於向細胞傳送遺傳物質，但在體內一般不適合遺傳物質的細胞傳送。例如，陽離子脂質體轉變感染技術在體內不能有效進行。因而需要更有效的手段來改進治療物質如遺傳物質的細胞傳送。本發明的概述本發明提供了利用充氣微球體特定位點傳遞治療藥物的治療藥物傳遞系統。一旦這種微球體被導入病人體內，治療化合物則通過使用聲能被靶定位到特定組織上，該聲能指向靶區並使微球體破裂，釋放出治療化合物。更準確地講，本發明提供了靶定位治療藥物傳遞系統，該系統包含含有治療化合物的充氣微球體。本發明還提供了治療化合物受控傳遞到病人病灶區的方法，該方法包括(i)對病人給用包含治療化合物的充氣微球體給藥；(ii)使用超聲波監控微球體以確定微球體在病灶區內的存在；以及(iii)使用超聲波破裂微球體而使治療化合物在病灶區內釋出。此外，本發明也提供了製備適於用作藥物傳遞劑的充氣脂質體的方法和裝置。優選的本發明方法在製備包含有治療化合物的充氣微球過程中提供了簡便以及可能的資金節約等優點。充氣脂質體特別適合用作藥物載體。不同於現有技術中具有僅適合包囊水溶性藥物的液態內腔的脂質體，根據本發明製得的充氣脂質體特別適合於包囊親脂藥物。而且，藥物的親脂衍生物可迅速滲合到類脂層內，如烷基化的金屬茂二滷化物的衍生物，Kuo等，J.Am.Chem.Soc.，1991，113，9027—9045。據認為本發明的優點之一包括微球體內的氣體吸收超聲波能量，微球體一旦破裂造成膜流動性局部增加，因而可增加治療化合物的細胞攝取量。本發明的各種特點及優點將在下列附圖和說明中更詳細地描述如下。附圖的簡要說明附圖1為包含有治療藥物的充氣脂質體，該藥物嵌入在脂質體微球體的壁之間，當施加超聲波時治療藥物的接續釋放過程的圖形表示。附圖2為包含有治療藥物的充氣脂質體，其中所述藥物嵌入在脂質體微球體的壁的內層之內且曝露在充氣內腔中，當施加超聲波作用時治療藥物的接續釋放過程的圖形描繪。附圖3圖解說明了包含有治療藥物的充氣脂質體，其中所述藥物嵌入在脂質體微球體壁的外層之內且曝露在充氣內腔中，通過施加超聲波作用使治療藥物的接續釋放過程。附圖4圖解表示了包含治療藥物的充氣脂質體微球體，其中所述藥物嵌入在脂質體微球體壁的內外層之間且既曝露在充氣內腔之中又曝露在外部環境中，通過施加超聲波作用治療藥物接續釋放的過程。附圖5圖解說明了包含有連結在脂質體內部上的治療藥物的充氣脂質體微球體通過施加超聲波而使治療藥物接續釋放的過程。附圖6圖解說明了包含有連結在脂質體外壁上的治療藥物的充氣脂質體微球體通過施加超聲波作用而使治療藥物接續釋放的過程。附圖7圖解說明了包含有治療藥物的充氣脂質體微球體，通過施加超聲作用使治療藥物接續釋放的過程，其中所述治療藥物如負電荷藥物(A)或正電荷藥物(B)連結在脂質體微球體的內外壁上。附圖8圖解說明了包含有包囊在充氣內腔之內的治療化合物的充氣脂質體微球體通過施加超聲波作用而使治療藥物接續釋放的過程。附圖9為製備本發明包含治療藥物的充氣脂質體微球體的優選設備的切面示意圖，部分為簡圖。附圖10示出了過濾和/或分配本發明包含治療藥物的充氣脂質體微球體的優選設備。附圖11畫出了過濾和/分散本發明包含治療物的充氣脂質體微球體的優選設備。附圖12為附圖11中設備的部分展示圖。附圖13示出了其內部基本上無液體且其中未包囊有任何藥物的充氣脂質體的dB反射曲線圖，其中所述脂質體通過真空乾燥氣體滴注法製備。數據是在TM5200型成象掃描器(AcousticImaging，Phoenix，Arizona)上利用7.5兆赫轉換器掃描得到並通過採用系統測試軟體測量反射比而形成。該系統在各試驗之前用已知聲阻抗的模型校準。附圖14示出了製備包含在真空乾燥氣體滴注脂質體內的藥物的優選設備，並且包含在其內部基本上無液體的充氣脂質體內的藥物通過真空乾燥氣體滴注法製備。附圖15為顯微攝影照片，該照片示出了本發明充氣脂質體在過濾之前(A)和過濾之後(B)的粒度大小。附圖16圖解描繪了本發明充氣脂質體在過濾之前(A)和過濾之後(B)的大小分布。附圖17為類脂懸浮液通過濾器壓出之前(A)和之後(B)的顯微攝影。附圖18為在過濾和壓熱壓出類脂質懸浮液後形成的充氣脂質體的顯微攝影，所述顯微攝影攝於過濾篩分充氣脂質體之前(A)和之後(B)。發明的詳細描述本發明提供了靶定位藥物傳遞系統，該系統包含含有治療化合物的充氣微球體。微球體被定義為具有內腔且相對為球形的結構。根據需要，治療化合物可被嵌入在微球體的壁內，也可包囊在微球體內和/或連接在微球體上。本申請中所用的與治療化合物的位置有關的術語「連接」或其變化是指治療化合物通過某些方式連接在微球體壁的內部和/或外部上，如通過共價或離子鍵，或其它化學或電化學連接或相互作用的方式連接，例如如上所示的附圖5，6和7所述。本申請中所用的與治療化合物的位置有關的術語「包囊」或其變化是指治療化合物位於微球體的內腔中，例如如上附圖8所示。所用的與治療化合物位置有關的術語「嵌入」或其變化表示治療化合物位於微球體壁之內，例如如上附圖1，2，3和4所示。術語「含有治療藥物」表示在微球體中的所有不同類型的治療化合物。因此，治療化合物可以不定地被定位，例如包裹在充氣微球的內腔內，定位在充氣微球體的氣體和內壁之間，結合在充氣微球體的外表面和/或嚙合在微球體結構本身之內。本專業人員一旦了解了本申請的公開內容還應理解當微球體包含類脂時，其壁可以含有多於一個類脂雙層。本發明微球體可以在體外或體內用於靶定位治療藥物傳遞。優選的是有超聲波作用時每個單一微球體能傳遞出基本上所有治療化合物。術語「基本上所有」是指至少的80％，優選至少90％，最優選約100％。在某些方案中，所有治療化合物從全部微球體中的釋出是快速的；而在其它方案中，傳遞則是逐步的。本專業人員一理了解了本申請的內容應當理解優選的釋放速率將隨應用的治療劑的類型而改變。在一些優選的方案中，例如，治療化合物封裝在微球體內，因此當微球體破裂時幾乎所有治療化合物能從微球體內快速釋出。進一步，本專業人員掌握了本申請公開內容之後還應理解，通過改變施加的超聲波的頻率和作用時間可以得到需要的治療化合物的釋出速率。因此，如上所述，被傳遞的治療劑可以封裝包裹在充氣微球體之內，這些化合物可以是各種治療劑；可以溶合在充氣微球體的表面，如用負電荷DNA塗層在陽離子類脂上或將正電荷藥物塗在陰離子類脂上，和/或嵌入在充氣微球體的壁內，這種藥物如親脂治療劑。微球體可以以包含有治療劑的微球體形式製得，或者微球體以不包含治療劑的形式製得而治療劑在使用之前加到充氣微球體中。對於後一種情況，治療劑可通過例如加到含有充氣微球體的水溶性介質中並振蕩以便治療劑塗布微球體。本文中所用的「充氣的」是指微球體含有內腔，該內腔內至少有10％氣體，優選至少有約25％氣體，較優送有至少約50％氣體，更優選至少有約75％氣體，最優選至少有約90％氣體。本領域專業人員在掌握了本申請內容之後應當理解也可以使用氣體前體，隨後活化形成氣體。各種生物可容性氣體均可用於本發明的充氣微球體內。這類氣體包括空氣，氮氣、二氧化碳、氧氣、氬氣、氟、氙氣、氖氣、氦氣或任何所有這些氣體的組合。其它適宜氣體對於掌握了本申請內容的專業人員而言是顯而易見的。本發明的微球體優選由不透性材料組成。不透性材料是指在典型的貯藏條件下或在超聲波誘導釋放發生之前的使用過程中不允許基本量微球體內含物滲出的材料。典型的貯藏條件例如為在4℃維持48小時的未脫氣的0.9NaCl水溶性溶液。所用的與不透性有關的術語「基本量」被定義為大於約50％內含物，內含物既包括氣體也包括治療劑。貯藏期間優選不超過約25％的氣體和治療藥物被釋放。貯藏溫度優選為低於形成微球體的材料的相變溫度。至少已部分發現充氣脂質體的氣體不透性與其凝膠態至液晶態的相變溫度有關。「凝膠態至液晶態的相變溫度」是指類脂雙層從凝膠態轉變成液晶態溫度。例如可參見Chap-man等，J.Biol.Chem.1974，249，2512—2521。一般認為凝膠態至液晶態的相變溫度越高，在給定溫度下則脂質體的氣體不透性越好。參見下表I和DerekMarsh，CRCHand-bookofLipidBilayers(CRCPress，BocaRaton，FL1990)，P139，給出了飽和二醯基—sn—甘油基—3—膽鹼磷酸的主鏈熔點轉變。然而，還值得注意的是從由具有較低凝膠態至液晶態相變溫度的類脂組成的充氣脂質體中釋出治療化合物一般只用較低能量。表I飽和二醯基—sn—甘油基—3—膽鹼磷酸主鏈凝膠態至液晶態相變溫度各種類脂的凝膠態至液晶態的相變溫度對本專業人員而言顯然是顯而易見的，並且這些溫度在如Gregoriadis編輯的LiposomeTechnology，VolI，1—18(CPCPress，1984)中被描述。在某些優選方案中，形成微球體的材料的相變溫度大於欲給藥病人的體內溫度。例如，相變溫度大於37℃的微球體優選用於人類給用。在優選的方案中，本發明微球體是穩定的，穩定性被定義為從微球體形成至施加超聲波作用的時間內的抗破裂性。根據穩定性可選擇如類脂類材料製造微球體。例如，由DSPC(二硬脂醯磷脂醯膽鹼)組成的充氣脂質體比由DPPC(二棕櫚醯磷脂醯膽鹼)組成的充氣脂質體更加穩定，並且這兩種脂質體也比卵磷脂醯膽鹼(EPC)組成的充氣脂質體更穩定。優選從形成至施加超聲波作用這段時間內微球體的破裂不超過50％，較優選微球體的破裂不超過約25％，更優選微球體的破裂不超過10％，最優選不超過1％微球體。此外，業已發現向任何脂質體膜內加入至少少量帶負電荷的類脂，儘管這是非必要的，但有助於得到無相互融合破裂傾向的脂質體。「至少少量」是指總類脂量的百分之一摩爾。適宜的負電類脂對本領域技術人員是十分顯然的，包括例如磷醋醯絲氨酸和脂肪酸。具有最優選的施加共振頻率超聲波作用時的破裂能力，echogencity和穩定性的脂質體是由二棕櫚醯磷脂醯膽鹼製成的脂質體。進一步，本發明微球體最好在脈管系統內要足夠穩定以便它們經受起再循環。充氣微球體可被塗層以使網狀內皮系統的吸入降至最低程度。有用的塗漬物包括例如神經節苷脂，葡糖醛酸酯，半乳糖酸酯，guluronate，聚乙二醇，聚丙二醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇、葡聚糖、澱粉，磷酸化和磺酸化的單—，二—，三—，寡—和多—糖類以及清蛋白。出於如避免被免疫系統識別的目的，也可將微球體塗層。在優選方案中，由於微球體的不透性，在它們到達需要治療病人的靶定位內部病區和施加超聲波作用之前，至少約50％，優選至少約75％，較優選至少約90％且最優選約100％微球體的治療劑和氣體內含物仍保留在微球體內。另外，用於構成微球體的物質應當是生物相容的，生物相容物質被定義為在所給用的量下它們對病人是無毒的，優選不會產生疾病，最優選是無害的。用於構成微球體的物質還優選為柔性的。在本申請中充氣微球體的柔性被定義為其結構改變其形狀通過大小小於微球體的孔洞的能力。由於脂質體非常適合用於截留氣體，因此它們構成了本發明的優選方案。另外，由於它們的生物相容性以及容易接納親脂性治療化合物的能力，故優選充氣微球體，其中所述治療化合物在脂質體破裂之後很容易穿過細胞膜。掌握了本申請內容的專業技術人員將會認識到根據預期用途可選擇特殊的脂質。倘如微球體的循環半衰期足夠長，則當微球體進人體內的一般會通過靶組織。通過使聲波誘導的破裂聚集在所選擇的欲處理的組織上，治療劑將在靶組織上局部釋放。作為靶定位的另一幫助也可將抗體，肽，糖肽，糖脂以及外源凝集素摻和到微球體的表面內。當類脂物質用於製備微球體時，例如形成脂質體，各種類脂均可在微球體的建造中應用。可在脂質體製備中應用的物質包括任何本領域專業人員已知的適合脂質體製備的物質或它們的組合。所用的類脂可以是天然的或合成的。選擇特定的類脂以便優選適合血清最好穩定性的理想性質如短血漿半衰期與長血漿半衰期的比值。充氣脂質體中的類脂可以是單層雙層型或多層雙層型，優選多層型。用於形成脂質體微球體的類脂包括但不局限於類脂如脂肪酸，血溶類脂類(lysolipids)，具有飽和不飽和類脂的磷脂醯膽鹼，它包括二油醯磷脂醯膽鹼；二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼；二(十五烷醯)磷脂醯膽鹼；二月桂醯磷脂醯膽鹼；二棕櫚醯磷脂醯膽鹼；二硬脂醯磷脂醯膽鹼；磷脂醯乙醇胺類如二油醯磷脂醯乙醇胺；磷脂醯絲氨酸；磷脂醯甘油；磷脂醯肌醇，神經鞘脂類如神經鞘磷脂；糖脂如神經節苷脂GM1和GM2；糖脂；硫苷脂；糖神經鞘脂類；磷脂酸；棕櫚酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；載有聚合物的類脂，所述聚合物如聚乙二醇，幾丁質，透明質酸或聚乙烯吡咯烷酮；載有磺化的單—，二—，寡—或聚糖的類脂；膽甾醇，膽甾醇硫酸酯以及膽甾醇半琥珀酸酯；維生素E半琥珀酸酯，含有通過醚和酯連結的脂肪酸的類脂，聚合類脂，二乙醯基磷酸酯，硬脂醯胺，心磷脂，含有鏈長為6—8個碳原子的短鏈脂肪酸的磷脂，具有不對稱醯基鏈的合成磷脂(如一條為6個碳原子醯基鏈而另一條為12碳原子醯基鏈的合成磷脂)，6—(5—膽甾烯—3β—基氧基)—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，二半糖二甘油酯，6—(5—膽甾烯—3β—基氧基)己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，6—(5—膽甾烯—3β—基氧基)己基—6—氨基—6—脫氧—1—硫代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)—十八烷酸；N—[12—(((7′—二乙基氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八烷醯基]—2—氨基棕櫚酸；4′—三甲銨基丁酸膽甾烯酯；N—琥珀醯二油醯磷脂醯乙醇胺；1，2—二油醯—sn—甘油；1，2—二棕櫚醯—sn—3—琥珀醯甘油；1，3—二棕櫚醯—2—琥珀醯甘油；1—十六烷基—2—棕櫚醯甘油磷醯乙醇胺以及棕櫚醯高半胱氨酸，和/或它們的結合。如果需要，可使用各種陽離子脂質如DOTMA，N—[1—(2，3—二油醯氧基)丙基]—N，N，N—三甲基氯化銨；DOTAP，1，2—二油醯氧基—3—(三甲銨基)丙烷；以及DOTB，1，2—二油醯基—3—(4′—三甲銨基)丁醯基—sn—甘油。通常脂質體中陽離子類脂與非陽離子類脂的摩爾比例如可以是1∶1000，1∶100，優選在2∶1至1∶10之間，較優選在1∶1至1∶2.5的範圍內且最優選1∶1(陽離子摩爾量與非陽離子摩爾量的比率，如DPPC)。當陽離子類脂用於建造微球體時，各種各樣的類脂可以包含非陽離子類脂。這種非陽離子類脂優選二棕櫚醯磷脂醯膽鹼，二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺，或二油醯磷脂醯乙醇胺。代替上述陽離子類脂，載有陽離子聚合物如多熔素或聚精氨酸的類脂也可被用於構成微球體並能提供負電荷治療劑如遺傳物質與微球體表面的結合。其它在本發明精神之內的且對本領域專業人員是顯而易見的有用類脂或其組合物也包括本發明範圍之內。例如，載有糖類的類脂也可用於體內靶定位，如美國專利4,310,505所述，該專利的內容本身可併入本申請中作為參考。最優選的類脂類為磷脂類，其中優選DPPC和DSPC，最優選DPPC。可用於產生充氣微球體的飽和和不飽和脂肪酸包括但不限於具有12碳原子到22個碳原子之間的直鏈或支鏈形式分子。可使用的飽和脂肪酸實例包括但不限於月桂酸，肉豆蔻酸，棕櫚酸和硬脂酸。可使用的不飽和脂肪酸的實例包括但不限於月桂烯酸，抹香鯨酸，肉豆蔻腦酸，棕櫚油酸，巖芹酸和油酸。可使用的支鏈脂肪酸的實例包括但不限於異月桂酸，異肉豆蔻酸，異棕櫚酸以及異硬脂酸和類異戊二烯。類脂或充氣類脂體的溶液可通過例如加入各種粘度調節劑穩定化，所述粘度調節劑包括但不限於糖類及其磷酸化和磺化的衍生物；聚醚類，優選分子量為400至800的聚醚；二—和三羥基烷烴及其聚合物，優選分子量為800至8000的聚合物。乳化劑和/或加溶劑也可與類脂或類脂體一同使用。這些試劑包括但不限於阿拉伯膠，膽甾醇，二乙醇胺，單硬脂酸甘油酯，羊毛脂醇，卵磷脂，單—和二—甘油酯，單乙醇胺，油酸，油醇，poloxamer，硬脂酸50聚氧乙烯基酯，蓖麻油36聚烴氧基酯，聚烴氧基10油基醚，聚烴氧基20鯨蠟硬脂醯醚，硬脂酸40聚烴氧基酯，聚山梨酸酯20，聚山梨酸酯40，聚山梨酸酯60，聚山梨酸酯80，丙二醇二乙酸酯，丙二醇一硬脂酸酯，十二烷基硫酸鈉，硬脂酸鈉，脫水山梨糖醇一月桂酸酯，脫水山梨糖醇一油酸酯，脫水山梨糖醇一棕櫚酸酯，脫水山梨糖醇一硬脂酸酯，硬脂酸，三乙醇胺，以及乳化蠟。可以與類脂或脂質體溶液一同使用的懸浮劑和/或增粘劑包括但不限於阿拉伯膠，瓊脂，藻酸，一硬脂酸鋁，膨潤土，糖糊，carbomer934P，羧甲基纖維素，鈣和鈉及鈉12，角叉膠(carrageenan)，纖維素，葡聚糖，明膠，瓜耳膠，羥乙基纖維素，羥丙基甲基纖維素，矽酸鋁鎂，甲基纖維素，果膠，聚環氧乙烷，聚乙烯醇，聚烯吡酮，丙二醇藻酸酯，二氧化矽，藻酸鈉，黃蓍膠，以及黃原膠。各種治療劑的任何一種均可密封在微球體內。在文中所用的「治療劑」是指對病人具有有益作用的藥劑。本文中所用術語「治療劑」與術語「藥物」同義。適宜的治療劑包括但不限於抗腫瘤藥，如鉑化合物(如螺鉑，順氯氨鉑，以及carboplatin)，氨甲蝶呤，阿黴素，絲裂雷素，柄型菌素，博來黴素，阿糖胞苷，阿糖腺苷，巰基多溶素，長春新鹼，馬利蘭，苯丁酸氮芥，苯丙氨酸氮芥(如PAM，L—PAM或左旋苯丙氨酸氮芥)，巰嘌呤，鄰氯苯對氯苯二氯乙烷，鹽酸甲苄肼更生黴素(放線菌素D)，鹽酸柔黴素，鹽酸阿黴素，紫杉酚，絲裂黴素，光輝黴素，氨基導眠能，雌二醇氮芥磷酸酯鈉，氟硝丁醯胺，leuprolideacetate，甲地孕酮，枸櫞酸三苯氧胺，睪內酯，trilostane，胺苯吖啶(m—AMSA)，左旋天冬醯胺酶，Erwina左旋天冬醯胺酶，鬼臼乙叉甙(VP—16)，α—2a幹擾素，鬼臼噻吩甙(VM—26)，硫酸長春鹼(VLB)，硫酸長春新鹼，博來黴素，硫酸博來黴素，甲氨蝶呤，阿黴素以及阿糖苷類(arabinosyl)；血製品如胃腸外鐵劑，氯化血紅素，血卟啉及其衍生物；生物應籤調節劑如胞壁醯二肽，胞壁醯三肽，微生物細胞壁組分，淋巴細胞活素(如細菌內毒素象脂多糖，巨噬細胞活化因子)，細菌的亞單位(如分子桿菌，棒狀桿菌)，合成二肽N—乙醯基—胞壁醯基—L—丙氨醯—D—異穀氨醯胺；殺真菌劑如酮康唑，制黴菌素，灰黃黴素，氟胞嘧啶(5—fc)，雙氯苯咪唑，兩性黴素B，蓖麻毒蛋白，以及β—內醯胺抗生素(如Sulfazecin)；激素如生長激素，促黑激素，雌二醇，二丙酸氯地米松，倍他米松，醋酸倍他米松以及倍他米松磷酸醋鈉，維他粘松磷酸二鈉(Vetamethasonedisodiumphosphate)，維他米松磷酸鈉，醋酸可的松，地塞米松，醋酸地塞米松，地塞米松磷酸鈉，9—去氟膚清松，氫化可的松，醋酸氫化可的松，氫化可的松環戊丙酸酯，氫可松磷酯鈉，琥鈉氫可松，甲強龍，酯酸甲強龍，琥鈉甲強龍，醋酸，對氟米松，強的松龍，醋酸強的松龍，強的松龍磷酸鈉，強的松龍叔丁乙酯，強的松，去炎松，丙炎松，雙醋去炎松，已酸丙炎松以及醋酸氟氫可的松；維生素如維生素B12neinoicacid，視黃酸類極衍生物如棕櫚酸維生素A，以及α—生育酚；肽類如二氧化錳歧化酶；酶如鹼性磷酸酶；抗變應性藥物如amelexanox；抗凝血劑如苯丙香豆素和肝素；促進循環的藥物如萘心安；代謝增效劑如穀胱甘肽；抗結核藥如對氨水楊酸，異煙肼，硫酸捲曲黴素環絲氨酸，鹽酸乙胺丁醇乙硫異煙胺，吡嗪醯胺，利福平和硫酸鏈黴素；抗病毒藥如無環鳥苷，amantadineazidothymidine(AZT或zidovudine)，三唑核苷和阿糖腺苷一水合物(阿糖腺苷，ara—A)；抗心絞痛藥如硫氮草酮，利心平，異博定，四硝赤醇，硝異梨醇，硝酸甘油(三硝酸甘油酯)以及硝酸季戊四醇酯；抗凝血劑如苯丙香豆素，肝素，抗菌素如氨苯碸，氯黴素，新黴素，頭孢氯，頭孢羥氨苄，頭孢氨苄，頭孢環己烯紅黴素，氯潔黴素，潔黴素，羥氨苄青黴素，氨苄青黴素，氨苄青黴素碳酯，羧苄青黴素，雙氯青黴素，環青黴素，picloxalcillin，海池西林，甲氧苯青黴素，新青黴素III，苯唑青黴素，青黴素G，青黴素V，羧噻吩青黴素利福平和四環素；消炎藥如二氟苯水楊酸，布洛芬，消炎痛，撲溼痛，萘普生，羥基保泰松，炎痛喜康，蘇靈大，甲苯醯吡酸，阿斯匹靈和水楊酸酯；抗原生動物劑如氯喹，羥氯喹，滅滴靈，奎寧，以及銻酸葡胺；抗風溼藥如青黴胺；麻醉藥如複方樟腦酊；鴉片製劑如可待因，海洛因，非那酮，嗎啡和鴉片；強心苷如去乙醯毛花甙C，洋地黃毒甙，地高辛，洋地黃甙和洋地黃；神經肌肉阻斷劑如a-tracuriummesylate，三碘季銨酚，溴化己芴銨，碘甲筒箭毒，巴夫龍，氯化琥珀膽鹼，氯化筒箭毒鹼和vecuroniumbro-mide；鎮靜藥(安眠藥)如異戊巴比妥，異戊巴比妥鈉，烯丙那裡丙巴比妥，仲丁巴比妥鈉，水合氯醛，乙氯戊烯炔醇，瓦爾米，鹽酸氟胺安定，導眠能，鹽酸甲氧異丁嗪，甲乙哌啶酮，鹽酸咪唑二氮草，三聚乙醛，戊巴比妥，戊巴比妥鈉，苯巴比妥鈉，司可巴比妥鈉，另丁烯丙巴比妥，羥基安定和三唑苯二氮草；局部麻醉藥如鹽酸布比卡因，鹽酸氯普魯卡因，鹽酸衣鐵卡因，鹽酸利多卡因，鹽酸甲派可因，鹽酸普魯卡因和鹽酸丁卡因；全身麻醉劑如達哌啶醇，甲苄咪酯，含有達哌啶醇的棕檬酸芬太尼，鹽酸氯胺酮，甲己炔巴比妥鈉和硫噴妥鈉；以及放射性顆粒或離子如鍶，碘化錸和釔。在一些優選方案中，治療劑為單克隆抗體，如能與黑瘤抗體結合的單克隆抗體。其它優選的治療劑包括遺傳物質如核酸，RNA和DNA，它們或是天然的或者是合成的，包括重組RNA和DNA以及反義RNA和DNA。可使用的遺傳物質的類型包括如載在表達載體如質粒，噬菌體質粒嵌合體，粘粒，酵母人工染色體(YACs)以及缺損病毒或輔助病毒內的基因，抗原核酸，單鏈和雙股RNA和DNA及它們的類似物，如硫代磷酸酯和二硫代磷酸寡脫氧核苷酸。另外，遺傳物質可以與蛋白質或其它聚合物結合。使用本發明微球體時可施用的遺傳治療劑的實例包括編碼有至少部分HLA基因的DNA，編碼有至少部分營養障礙的DNA，編碼有至少部分IL—2的DNA，編碼有至少部分TNF的DNA，能結合編碼有至少Ras的DNA的反義寡核苷酸。編碼有某些蛋白質的DNA的可用於治療多種不同類型疾病。例如腺苷脫氨酶被用於治療ADA缺損；腫瘤壞死因子和/或白介素—2被用於治療肝病；胸苷激酶被用於治療卵巢癌，腦瘤，或HIV感染；HLA—B7被用於治療惡性黑瘤；白介素—2可被用於治療成神經細胞瘤，惡性黑瘤，或腎癌；白介素—4可被用於治療癌症；HIVenv被用於治療肺癌；以及VIII因子被用於治療血友病B。例如參見Science258，744…746。如果需要，使用微球體可施用多種治療劑。例如，單一微球體可包含有多於一種治療劑或者含有不同治療劑的微球體可以一同給用。例如能與黑瘤抗原結合的單克隆抗體和編碼有至少部分IL—2的低聚核苷酸可以同時給用。本申請中所用的術語「至少部分」是指整個基因不必用低聚核苷酸表示，只要部分所表示的基因能提供有效的基因表達阻斷即可。同樣地，前藥也可包裹密封在微球體內，並且它們包括在本申請中所用的術語「治療劑」的範圍內。所述前藥為本專業已知的並包括非活性藥物前體，這些非活性藥物前體當在氧氣或其它氣體存在下受到高溫，代謝酶，氣蝕和/或加壓作用時或者當從微球體內釋出時將形成活性藥物。這類前藥在本發明的方法中通過向含有前藥的微球體施加超聲波作用完成氣蝕，加熱，加壓，和/或從微球體中釋出的步驟而被活化。合適的前藥對本專業人員而言是顯而易見的，例如見Sinkula等人的J.Pharm.Sci.，1975，64，181—210中的描述，該文獻本身可列入本文內作為參考。前藥、例如，可包括活性藥物的非活性形式，其中在藥物前體上存在使藥物為非活性和/或賦予其溶解性或一些其它性質的化學基團。在此形式中，藥物前體通常是非活性的，但一旦化學基團通過加熱，氣蝕，加壓，和/或被周圍環境作用等從藥物前體裂解，就產生活性藥物。這樣的藥物前體在本領域中被充分地描述過，並包括多種通過化學鍵連接於化學基團的藥物如短，中或長鏈脂肪族碳酸酯類，有機磷酸，焦磷酸，硫酸的半酯，醯胺類，胺基酸，偶氮鍵，氨基甲酸酯，磷醯胺，葡糖苷酸酯，N—乙醯基葡糖氨和β—葡糖苷。藥物與母體分子和可逆變體或鍵的例子如下鈴蘭毒甙與縮酮，妥因與烷基酯，氨甲酸氯酚甘油醚酯與甘油或丙氨酸酯，撲熱息痛與咖啡因複合物，乙醯水楊酸與THAM鹽，乙醯水楊酸與乙醯氨基苯基酯，烯丙基嗎啡酮與硫酸酯，15—甲基前列腺素F2a與甲基酯，普魯卡因與聚乙二醇，紅黴素與烷基酯，氯林可黴素與烷基酯或磷酸酯，四環素與甜菜鹼鹽，7—醯氨基頭孢菌素與環—取代的醯氧苄基酯，諾龍與苯基丙酸癸酸酯，雌二醇與烯醇醚乙縮醛，甲基強的松龍與乙酸乙酯，睪酮與n—乙醯基氨基葡糖苷葡糖苷酸酯(三甲基甲矽烷基)醚，氫化可的松或強的龍松或地塞米松與21磷酸酯。藥物前體也可設計為可逆藥物並用作改性劑以促進藥物傳送到特定部位組織。影響傳送到特定部位組織並促進治療效果的母體分子與可逆變體或鍵的例子包括異氰酸酯與滷代烷基亞硝基脲，睪酮與丙酸酯，甲氨蝶呤(3，5′—二氯甲氨蝶呤)與二烷基酯，胞嘧啶阿糖苷與5′—醯化物，氮芥(2，2′—二氯—N—甲基二乙基胺)，氮芥與氨基甲基四環素，氮芥與膽甾醇或雌二醇或去氫表雄酮酯和氮芥與偶氮苯。如本領域專業技術人員承認的，修飾給定藥物的特定化學基團可被選擇以影響藥物部分進入膜內或微球的內部空間。選作將化學基團連到藥物上的化學鍵可選擇具有所需代謝速度的鍵，例如，在酯鍵的情況下，從充氣微球中釋放之後，在血清酯酶存在下水解。另外，特定的化學基團可選擇影響用於實施微球發明的充氣藥物的藥物生物分布的基團，例如，用於卵巢腺癌的N，N—二(2—氯乙基)—二氨基磷酸與環磷醯胺。另外，用於充氣微球中的藥物前體可被設計成含有可逆衍生物，它可用作活性持續的改進劑以提供，延長或儲存作用效果。例如，煙酸可用葡聚糖和羧甲基葡聚糖酯修飾，鏈黴素用藻酸鹽，二氫鏈黴素用雙羥萘酸鹽，阿糖胞苷(ara—C)用5′—金剛烷酸酯，阿糖腺苷(ara—A)用5—棕櫚酸酯和5′—苯甲酸酯，兩性黴素B用甲基酯，睪酮用17—β—烷基酯，雌二醇用甲酸酯，前列腺素用2—(4—咪唑基)乙胺鹽，多巴胺用胺基酸醯胺，氯黴素用一和二(三甲基甲矽烷基)醚，和環氯胍用雙羥萘酸鹽。在此形式中，長期作用的藥物的倉庫或貯存器在體內從帶有微球的充氣藥物前體釋放出來。另外，一般熱不穩定的化合物可被用於產生毒性自由基。帶有在高溫分解的偶氮鍵，過氧和二硫鍵的化合物是優選的。對於此形式的藥物前體，含偶氮，過氧，二硫鍵的化合物通過氣蝕和/或由高能聲波相互作用產生的加熱而活化，充氣的微球從這些由此被截留的藥物前體產生自由基串。許多藥物或化學品可組成這些藥物前體，如偶氮化合物，這類化合物的一般結構是R—N＝N—R，其中R是烷鏈，其中兩個氮原子間的雙鍵可以反應在體內產生游離基產品。可被用於產生游離基產物的例子性藥物或化合物包括含偶氮的化合物如偶氮苯，2，2′—偶氮二異丁腈，偶氮二甲醯胺，石蕊精，氮黴素，氯唑噻磺胺，偶氮磺醯胺，氧化偶氮苯，aztreqnam，蘇丹III，偶氮磺胺，偶氮磺胺和柳氮磺胺吡啶，含二硫鍵的化合物如雙苯硫酮，硫胺二硫化物，硫藤黃菌素，二硫四甲秋蘭姆，含過氧的化合物如過氧化氫和苯甲醯基過氧化物，2，2′—偶氮二異丁腈，2，2′—偶氮二(2—氨基丙烷)二鹽酸鹽，和2，2′—偶氮二(2，4—二甲基戊腈)。用氧氣填充的充氣微球用氣蝕將產生充足的自由基。而且，過渡系列的金屬離子，尤其是錳，鐵和銅可增加從氧形成反應活性氧中間體的速度。通過將金屬離子包裹在微球內，體內自由基的形成可被增加。這些金屬離子可以游離的鹽，配合物，例如，與EDTA、DTPA、DOTA或去鐵胺的配合物，或以金屬離子的配合物連接到微球體上。另外，衍生的金屬離子的配合物可連接到類脂的主基團上，或例如親脂的離子配合物可被摻入脂質雙層中。當暴露於熱刺激時，例如氣蝕，這些金屬離子將增加反應活性氧中間體的形成速度。進一步地，如甲硝噠唑和醚醇硝唑之類的放射致敏劑可被摻入充氣的微球內由熱刺激產生自由基。通過藥物前體使用的例子，醯化的化學基團可以通過在體內由血清中酶作用容易斷裂的酯鍵連接到藥物上。醯化的藥物前體被摻入本發明的充氣微球內。當充氣微球被超聲波打擊時，被微球包裹的藥物前體將暴露給血清。然後酯鍵被血清中的酯酶斷裂，然後產生藥物。類似地，超聲波不僅被用於破裂充氣微球，而且也引起熱效應，它增加化學斷裂速度和活性藥物從藥物前體中的釋放。微球也可被設計成藥物在微球的內面和外面對稱或不對稱分布。治療劑的特定化學結構可被選擇或修飾以達到所需的溶解性，這樣，治療劑既可包裹在充氣微球的內部空間，附屬於微球，也可被網捕於微球內。表面連接的治療劑可帶有一個或多個醯基鏈，這樣的話，當微球被打擊或加熱或通過氣蝕破裂時，醯化的治療劑將離開表面和/或治療劑將從醯基鏈化學基團斷裂。類似地，其它治療劑可與在結構上為芳香性或甾醇的疏水基團配製，摻入微球表面。除類脂外，其它可用於形成微球的物質包括，例如，清蛋白之類的蛋白質，聚穀氨酸之類的合成肽，半乳糖，葡糖和其它己糖的直鏈和支鏈低聚物和聚合物和從磷醯化和磺醯化的戊糖和己糖和糖醇衍生的聚合物。碳水化合物聚合物如藻酸，葡聚糖，澱粉和HETA澱粉也可被應用。其它天然聚合物，如透明質酸，可被應用。合成聚合物如聚乙二醇，聚乙烯基吡咯烷酮，聚交酯，聚乙烯亞胺(直鏈和支鏈)，聚紫羅烯或聚亞氨基羧酸也可被應用。當被微球包裹的治療劑帶負電時，諸如基因物質，陽離子型類脂類或帶陽離子型的全氟烷基化基可被用於連接帶負電的治療劑。例如，陽離子類兩親性全氟烷基化聯吡啶，如GarelliandVierling，Biochim.BiophysActa，1992，1127，41—48中所述，該文全文在此引作參考，可被使用。一般地，負電性治療劑如基因物質可連接到混合膠束成分，例如，非陽離子型類脂與陽離子型類脂，例如，DOTMA或十八烷基胺或取代的烷基如三甲基十八烷基胺的親水性首基上。有用混合膠束化合物包括但不限於溴化(月桂基三甲基)銨(十二烷基)，溴化(鯨蠟基三甲基)銨(十六烷基)，溴化(肉豆蔻基三甲基)銨(十四烷基)，氯化(烷基二甲基苄基)銨(烷基＝C12，C14，C16，溴化/氯化(苄基二甲基十二烷基)銨，溴化/氯化(苄基二甲基十六烷基)銨，溴化/氯化(苄基二甲基十四烷基)銨，溴化/氯化(鯨蠟基二甲基乙基)銨，或溴化/氯化鯨蠟基吡啶鎓。含藥物脂質體的大小如果需要可通過多種操作包括壓出，過濾，聲化，均化，應用導入到液體不混溶鞘中的液體芯的層狀流，壓出經過固定大小的孔，和類似方法而調節，以調節產生的脂質體的生物分布和間隙。前述技術及其它，在下述文獻中討論，例如U.S.PatentNo.4,728,578；U.K.PatentApplicationGB2193095A；U.S.PatentNo.4,728,575；U.S.PatentNo.4,737,323；InternationalAp-plicationPCT/US85/01161；Mayeretal.，BiochimicaetBiophysicaActa，Vol.858，pp.161—168(1986)；Hopeetal.，BiochimicaetBiophysicaActa，Vol.812，pp.55—65(1985)；U.S.PatentNo.4,533,254；Mayhewetal.，MethodsinEnzymology，Vol.149，pp.64—77(1987)；Mayhewetal.，biochimicaetBiophysicaActa，vol755，pp.169—74(1984)；Chengetal，InvestigativeRadiolo-gy，Vol.22，pp.47—55(1987)；PCT/US89/05040，U.S.PatentNo.4,162,282；U.S.PatentNo.4,310,505；U.S.PatentVol.I，pp.29—31，51—67and79—108(CRCPressInc.，BocaRaton，FL1984)。上述專利，公開物和專利申請的全文在此引作參考。本發明微球的大小取決於其用途。由於微球大小影響生物分布，不同大小的微球可被選用於不同目的。對於較小微球，共振頻率超聲波一般比較大微球的高。例如，對血管內應用，優選的大小範圍是平均外徑在約30納米至約10微米之間。優選的平均外徑為約5微米。更特別地，對血管內應用，微球大小優選地外徑約10μm或更小，優選地小於約7μm，更優選地於約5μm。優選地，微球外徑不小於約30納米。對於將治療劑輸送到肝類器官和使正常組織變異為腫瘤，較小的微球，平均外徑在約30納米和約100納米之間，是優選的。對於腎或肺類組織的栓塞，微球平均外徑優選地小於200微米。對於鼻內，直腸內或局部給藥，微球平均外徑優選地小於約100微米。大微球，例如，大小為1至10微米之間，一般將被限制在血管空間內直到它們被管內襯吞噬細胞元素，如巨噬細胞和Kuppfer細胞內襯毛細竇狀隙，所清除。為了通過遠離竇狀隙的細胞，較小微球，例如，直徑小於1微米，例如大小小於約300納米的，可被運用。在優選的方案中，微球獨立地給藥，而不是，例如，包埋於基質中。一般地，本發明的治療劑傳遞系統以如在水或食鹽溶液(例如，磷酸緩衝鹽水)中的含水懸浮液形式給藥。優選地，水是經滅菌的。而且，優選地，鹽水溶液是等滲鹽水溶液，儘管，如果需要，鹽水溶液可以是低滲的(例如，約0.3至約0.5％NaCl)。如果需要，溶液也可是緩衝的，以提供pH範圍約5至7.4。另外，葡萄糖可優選地包含於介質中。其它可用於充氣脂質體給藥的溶液包括，但不限於，杏仁油，玉米油，棉籽油，油酸乙酯，肉豆蔻酸異丙酯，棕櫚酸異丙酯，礦物油，肉豆蔻醇，辛基—十二烷醇，橄欖油，花生油，桃仁油，芝麻油，黃豆油，和角鯊烯。對於使用前的儲存，本發明的微球可懸浮於水溶液，如鹽水溶液(例如，磷酸緩衝的鹽水溶液)，或簡單的水，並且優選地在約2℃至10℃之間的溫度下，優選地約4℃。優選地，水是經滅菌的。最優選地，微球儲存在等滲鹽水溶液中，儘管，如果需要，鹽水認可以是低滲鹽水溶液(例如，約0.3至0.5％NaCl)。如果需要，溶液也可是緩衝的，提供pH範圍約pH5至約pH7.4。合適的用於儲存介質中的緩衝液包括，但不限於，乙酸鹽，檸檬酸鹽，磷酸鹽和碳酸氫鹽緩衝液。抑菌劑也可包括在微球內以防止儲存時細菌降解。合適的抑菌劑包括但不限於殺藻銨，氯苄乙銨，苯甲酸，苄醇，尼泊金丁酯，氯化鯨蠟基吡啶鎓，氯丁醇，氯甲苯酚，尼泊金甲酯，苯酚，苯甲酸鉀，山梨酸鉀，苯甲酸鈉和山梨酸。一種或多種抗氧化劑也可包括在充氣脂質體中以防止類脂氧化。合適的抗氧化劑包括生育酚，抗壞血酸和抗壞血酸基棕櫚酸酯。治療化合物被控制地輸送到患者的病區的方法包括如下步驟(I)對患者給藥含治療化合物的充氣微球；(II)用超聲波監測微球以測定微球在病區的存在；和(III)用超聲波破裂微球在病區釋放化合物。用本發明的充氣微球，超聲波能量與氣體相互作用，爆裂微球，並使治療劑諸如，例如，基因物質被釋放並傳送到細胞中。當超聲波能遭遇到組織或流體介質內的氣體分界面時，超聲波能向熱和動能的局部轉化被大大加強。治療物質因而從微球中釋放並使人驚奇地輸送到細胞內。儘管不受任何特定的操作理論的束縛，我們相信在細胞位置產生的熱能和動能促進治療劑的細胞吸收。微球的給藥途徑將取決於其應用。如本專業技術人員認識到的，本發明治療劑傳遞系統的給藥以多種方式進行，如血管內，淋巴內，腸胃外，皮下，肌內，鼻內，直腸內，腹膜內，間質的，經噴霧器進入氣道，高壓的，口服，表皮，或腫瘤內，用多種劑型給藥。一種優選的給藥途徑是血管內。對於血管內應用，治療劑傳遞系統一般被靜脈注射，但也可動脈內注射。本發明的微球也可問質注射或注入任何體腔。用超聲波的本發明微球治療劑輸送最好對具有良好的透過超聲波能量的透聲窗口的組織完成。這是對身體中大部分組織的情況，如肌肉，心臟，肝和大部分其它生命結構。在腦中，為了使超聲波能量通過骨，一個外科窗口將是必需的。給藥的有用劑量和給藥模式將取決於將要治療動物的年齡，體重，和類型，以及特定的治療應用。典型地，劑量以低水平開始，並增加直到達到所需的治療效果。對於體外應用，如細胞培養應用，充氣微球可被加到培養基內的細胞中然後培育。然後可將超聲波能施加到含細胞和微球的培養介質中。本發明可被用於治療劑被控制地輸送到患者的區域，其中患者使用本發明含微球的治療劑，微球用超聲波監測以確定微球在區域的存在，然後用超聲波破裂微球在區域中釋放治療劑。患者可以是任何類型的動物，但優選地是脊椎動物，更優選地是哺乳動物，而最優選地是人類。患者的區域，意指整個患者，或患者的特定區域或部分。例如，通過用本發明的方法，治療劑輸送可在患者的心臟，和患者的血管內(即靜脈或動脈系統)。本發明也對輸送治療劑到患者的左心室，一個此前由治療劑輸送不易達到的區域。治療劑用本方法也可容易地輸送到患者的肝臟，脾臟和腎臟，以及其它部位。另外，本發明對於輸送治療劑到患者的肺部特別有用。本發明的充氣微球輕於，例如，普通液體填充脂質體，後者一般沉澱於中心鄰近氣道而不是達到肺部的外周。因而可以相信本發明的充氣微球可改進治療化合物輸送到肺部外周，包括氣管末端和肺泡。應用於肺部時，充氣微球可通過例如噴霧進行。在應用如肺目標，它由類脂內襯，治療劑可由於充氣類脂微球與在襯裡的靶組織的聚集而釋放。另外，充氣類脂微球在給藥後不需用超聲波就破裂。因此，在上述給藥類型中，超聲波不需用於釋放藥物。而且，本發明的充氣微球對於可在含水介質中降解或暴露於氧氣和/或大氣的治療劑特別有用。例如，用於不穩定治療化合物時，微球可用惰性氣體如氮氣或氬氣填充。另外，充氣微球可用惰性氣體填充並用於包裹用於患者的部位正常地使治療劑暴露於大氣的治療劑，如皮膚的和眼用。充氣微球也對皮下輸送，如局部(patch)傳遞系統特別有用。破裂超聲波的使用將增加治療化合物的皮下輸送。進一步地，機械結構可被用於監測和調節藥物輸送。例如，診斷超聲波可被用於監視充氣微球的破裂並調節藥物的輸送和/或水聽器可被有於檢測充氣微球的爆裂聲並調節藥物輸送。微球的回波和在峰共振頻率的破裂可能性用超聲波允許通過在對病人給藥後監測微球以測定在所需部位微球的存在將治療劑受控制地輸送到患者的部倍，並用超聲波破裂微球在部位釋放治療劑。優選地，本發明的微球具有大於2dB的反射(性)，優選地在約4dB至約20dB之間。在此範圍內，本發明微球的最高反射性由更大的微球，更高的微球濃度，和/或當更高的超聲波頻率被使用時顯現。優選地，本發明的微球具有在約0.5MHz至約10MHz之間的峰共振頻率。當然，本發明充氣微球的峰共振頻率將隨微球的直徑，且在某種程度上，微球的彈性或柔韌性而變化，較大的和更有彈性或柔韌性的球比較小的和較小彈性或柔韌性的微球具有較低的共振頻率。微球給藥後或另外到達部分後，含治療劑的本發明微球破裂通過給患者需要治療的部位施以某些頻率的超聲波而出人意料地容易實現。特別地，意外地發現當用相當於含充氣微球的治療劑的峰共振頻率的超聲時，微球將爆裂並釋放其成分。峰共振頻率即可體內也可體外測定，但優選體內，通過將微球暴露於超聲波，接收反射共振頻率信號並分析接收的信號譜以確定峰(用普通手段)。這樣測定的峰對應於峰共振頻率(或有時稱之為二次諧波)。充氣微球當暴露於更高強度(瓦特)和時間(時間)的非峰共振頻率的超聲波時也破裂。然而，這一更高能量會產生不想要的大量增加熱量。通過調節能量峰以匹配峰共振頻率，破裂的效率和治療劑釋放被改善，可感覺到的組織發熱一般不發生(一般升溫不超過約2℃)，需要更少的總能量。因此，峰共振頻率超聲波的應用，在不需要時，是最優選的。任何類型的診斷性超聲波成象儀都可用於本發明的實施，特殊類型或型號的儀器對本發明的方法不是關鍵。同樣合適的是設計用於給藥的超聲波高溫治療儀，如在USP4620546，4658828和4586512中所述的儀器，這些文獻在此全部引作參考。優選地，儀器應用共振頻(RF)譜分析器。變頻探針可用於外部或植入。超聲波以較低的強度和時間開始，優選地以峰共振頻率，然後強度，時間，和/或共振頻率增加直至微球破裂。由於各種原理的應用對於專業人員已經顯而易見，一旦用本公開武裝，通過一般引導，對於平均外徑約1.5至約10微米的充氣微球，共振頻率一般在約1至約10MHz的範圍內。通過調節焦點區至靶組織(例如腫瘤)的中心，由於它們在目標組織內的積累，充氣微球在實際時間超聲波下成為可見的。用7.5MHz曲陣(Curvedarray)變頻器作為例子，將送到變頻器的動力調至最大並將焦點區調至靶組織中，立體峰瞬時平均(SPTA)動力在水中將為最大約5.31mW/cm2。這一動力將導致治療劑從充氣微球內部分釋放，但更大的釋放可用更高動力完成。通過將變頻器切換到都卜勒狀態，可以得到更高的動力輸出，從相同的變頻器達2.5W/cm2。機器在都卜勒狀態操作，動力可輸送到靶組織內的選定焦點區而使充氣微球釋放其治療劑。選擇變頻器匹配充氣微球的共振頻率將使這一治療劑釋放法更有效。對於較大直徑的充氣微球，例如平均外徑大於3微米，較低頻率的變頻器在完成治療劑釋放方面更有效。例如，3.5MHz的較低頻率變頻器(20mm曲陣型)可被選用於對應於充氣微球的共振頻率。用此變頻器，101.6mW/cm2可被輸送到焦點，切換到都卜勒狀態將輸出動力(SPTA)增加至1.02W/cm2。為了用氣蝕現象釋放和/或活化充氣微球內的藥物/藥物前體，較低頻率的能量可被使用，因為氣蝕在較低頻率更為有效。用以更高電壓(高達300V)驅動的0.757MHz變頻器，充氣微球溶液的氣蝕將在約5.2atm的臨界值發生。表II示出了從常用儀器如PiconicsInc.(Tyngshoro，MA)的診斷超聲波傳送到組織的能量範圍，Portascan一般目的掃描儀，接收器脈衝器1966型號661Picker(Cleve-land，OH)EchoviewLScanner包括80CSystem或Medisonics(MountainView，CA)ModelD—9VersatoneBidirectionalDoppler。一般地，這些用脈衝重複的能量範圍可用於監測充氣微球但不足以破裂本發明的充氣微球。表II由診斷儀產生的動力和強度**從Carsonetal.，UltrasoundinMed.Biol.19783，341—350，得到的值，該文在此引作參考。較高能量的超聲波如常用於治療超聲波儀的對於充氣微球的活化是優選的。一般地，治療超聲波機根據要被超聲波加熱的組織面積用多達50％至100％負載環。具有較大量肌肉塊(即，背部，股部)和高度血管化的組織如心臟區域需要較大的負載環，例如，100％。在用於監測充氣微球的位置的診斷超聲波中，一種或幾種聲波脈衝被使用而機器在脈衝間暫停以接收反射的聲波信號。在診斷超聲波中所用有限值的脈衝限制被輸送到被成象的組織的有效能量。在治療超聲波中，連續波超聲波被用於輸送更高能量。在使用本發明的微球時，聲能可以是脈衝的，但連續波超聲波是優選的。如果用脈衝，聲波將優選地以一次至少約8而優選地至少約20脈衝的回聲列長度脈衝。固定頻率或調節頻率超聲波都可使用。固定頻率被定義為在全部時間聲波的頻率是常數。調節頻率是在全部時間內波頻變化的，例如，從高到低(PRICH)或從低到高(CHIRP)。例如，具有聲波能10MHz起始頻率的脈衝PRICH掃至1MHz，增加動力從1至5W。聚焦的，頻率調節的，高能超聲波將增加微球內局部氣體膨脹並破裂以提供治療劑的局部輸送。所用聲波頻率可從約0.025至約100MHz變化，頻率範圍在約0.75和3MHz之間是優選的，而頻率在約1至約2之間是最優選的。常用約0.75至約1.5MHz的治療頻率可以使用。常用約3至7.5MHz的診斷頻率也可使用。對於很小的微球，例如，低於0.5微米直徑，更高的聲波頻率是優選的，因為這些較小微球將在較高的聲頻更有效地吸收聲能。當用很高頻率如高於10MHz時，聲能將一般有限深度地穿透到流體和組織。外部應用對皮膚和其它表面組織是優選的，但是對於深層結構，通過間質探針或血管內超聲波導管的聲能應用是優選的。在最優選的方案中，本發明提供新穎的脂質體藥物傳遞系統。一旦用本公開武裝，各種含本發明微球的充氣治療劑的製備方法對於本專業熟練技術人員會顯而易見。優選的製備微球的方法在下面聯繫優選的脂質體藥物傳遞系統討論。具體地，在優選的方案中，製備含本發明的充氣脂質體的靶定位藥物傳遞系統的方法包括在氣體存在下在低於類脂的凝膠態向液晶態相變溫度下振蕩含類脂的水溶液以形成充氣脂質體，並加入治療化合物。在其它優選方案中，製備含本發明充氣脂質體的靶定位藥物傳遞系統的方法包括在氣體存在下在低於類脂由凝膠態向液晶態相變溫度的溫度下振蕩含類脂和治療化合物水溶液的步驟。在其它方案中，製備含充氣脂質體的靶治療藥物傳遞系統的方法包括在氣體存在下振蕩含類脂和治療化合物的水溶液，和分離所得充氣脂質體的步驟。由前述方法製備的脂質體此處指由膠態振蕩氣體裝入法製備的並含有治療化合物的充氣脂質體，或指含凝膠態振蕩氣體注入脂質體的治療劑。因此，本發明優選的方法是在氣體存在下振蕩含類脂和治療化合物的水溶液。振蕩，如此處所用的，被定義為搖動水溶液以使氣體從當地周圍環境進入水溶液的運動。任何類型的搖動水溶液並導致氣體的引入的運動都可用作振蕩。振蕩必需有足夠力度在一段時間後形成泡沫。優選地，振蕩是足夠力度使短時間，如30分鐘內，優選20分鐘，最優選10分鐘內形成泡沫。振蕩可以是旋動(如渦旋)，從一側到另一側，或上下運動。而且，不同類型的運動可以結合。而且，振蕩可通過振蕩裝有含水類脂溶液的容器，或通過振蕩容器內的水溶液而不搖動容器本身而進行。而且，振蕩可以手動或機動。可用的機械振蕩器包括，例如，振蕩臺如VWRScientific(Cerritos，CA)振蕩臺和機械塗料混合器，及其它已知機器。產生振蕩的其它手段包括在高速和高壓下氣體散發作用。也應該懂得，優選地，對於較大體積的水溶液，總力量應相應增加。劇烈振蕩被定義為至少每分鐘約60次振蕩運動，並是優選的。劇烈振蕩的一個例子，至少每分鐘1000轉的渦旋，是更優選的。每分鐘1800轉的渦旋是最優選的。基于振蕩的充氣脂質體形成可通過水溶液頂端泡沫的存在檢測。它與由於泡沫形成而水溶液體積的減小相聯繫。優選地，泡沫的最終體積為含水類脂溶液的最初體積的至少兩倍；更優選地，泡沫的最終體積是水溶液最初體積的至少約三倍；再更優選地，泡沫的最終體積是水溶液最初體積的至少約4倍；最優選地，所有含水類脂溶液都轉化為泡沫。所需的振蕩時間可通過檢測泡沫的形成而確定。例如，在50ml離心管內的10ml類脂溶液被渦旋約15—20分鐘或直到充氣脂質體的粘度變得足夠稠，它在旋動時不再附於側壁上。此時，泡沫使含充氣脂質體的溶液升至30至35ml水平。需要形成優選的泡沫水平的類脂濃度隨所用類脂的類型而變化，一旦用本公開武裝，本專業熟練的技術人員很容易確定它。例如，在優選的方案中，根據本發明的方法用於形成充氣脂質體的1，2—二棕櫚醯基—磷脂醯膽鹼(DPPC)的濃度是約20mg/ml至約30mg/m1鹽水溶液。用於優選方案中的二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)的濃度是約5mg/ml至約10mg/ml鹽水溶液。具體地，濃度為20mg/ml至30mg/ml的DPPC，經振蕩，產生總懸浮液而捕獲的氣體體積比單獨的懸浮液體積大四倍。濃度為10mg/ml的DSPC，經振蕩，產生完全不合任何液體懸浮體積的總體積並含全部泡沫。一旦用本公開武裝，本專業熟練的技術人員將懂得，類脂類或脂質體可先處理並隨後用於本發明的方法。例如，類脂可水合然後凍幹，通過冷凍和解凍循環，或簡單水合。在優選的方案中，形成充氣脂質體之前，類脂被水合然後凍幹，或水化，然後進行冷凍和解凍循環然後凍幹。在最優選的方案中，類脂被水合併振蕩，接著至少一次液氮中冷凍和解凍循環，然後接著凍幹。在最終形成充氣脂質體之前這些處理的優點包括類脂轉化為具有更大表面積的固體，因而經水合更好地溶解隨後更高產率地產生充氣脂質體。根據本發明優選的方案，氣體的存在由當地周圍大氣提供。當地周圍大氣可以是密閉容器內的大氣，或在非密封容器內，可以是外部環境。另外，例如，氣體可被注入或其它方式加入類脂水溶液的容器內或類脂水溶液本身內以提供非空氣的氣體。不比空氣重的氣體可被加入密封的容器內而比空氣重的氣體可被加入密封或非密封容器中。前述本發明的優選方法優選地在低於所用類脂凝膠態向液晶態相變溫度的溫度下進行。「凝膠態向液晶態相變溫度」意指脂類雙層將從凝膠態向液晶態轉化的溫度。參見，例如，Chapmanetal.，J.Biol.Chem.1974，249，2512—2521.各種類脂的凝膠態向液晶態相變溫度對於熟悉本專業的人員將是容易知道的，並且描述在，例如，Gregoriadis，ed.，LiposomeTechnology，Vol.I，1—18(CRCPress，1984)和DerekMarsh，CRCHandbookofLipidBilayers(CRCPress，BocaRaton，FL1990)，P。139中。也參見前面的表I。當所用類脂的凝膠態向液晶態相變溫度高於室溫時，容器的溫度可被，例如，通過用致冷機冷卻裝有類脂溶液的容器而調節。一般地，充水脂質體在高於類脂的凝膠態向液晶態相變溫度的溫度下常規形成，因為它們更柔韌因而以液晶態用於生物體系中。參見，例如，SzokaandPapahadjopoulos，Proc.Natl.Acad.Sci.1978，75，4194—4198。相比之下，根據本發明方法的優選方案製造的脂質體是充氣的，它產生更大的柔韌性因為氣體更可壓縮並比水溶液更順從。因此，充氣脂質體當在低於類脂相變溫度形成時可被用於生物體系，儘管凝膠相更具剛性。優選的用於用凝膠態振蕩氣體裝入法生產含治療劑的充氣脂質體的設備示於附圖9中。類脂和水溶性介質的混合物在氣體裝入工序中被劇烈攪動，無論是分批還是連續加料，以產生充氣脂質體。對於附圖9，乾燥的類脂51從類脂供應管50通過導管59以連續流或間歇團被加到混合器66中。如果用分批工藝，混合器66可包含相對較小的容器如注射器，試管，瓶子或圓底燒瓶，或大容器。如果用連續加料工藝，混合器優選地是大容器，如大桶。治療化合物可被加入，例如，在氣體裝入工序之前。對於附圖9，治療化合物從治療化合物供應器40通過導管42加到混合器66中。另外，治療化合物可在氣體裝入工序之後加入，如脂質體的外層用治療化合物包塗。除了類脂51和治療化合物41外，還需通過管道61往容器66中加入來自水溶性介質供應器52的水溶性介質53，如鹽溶液。類脂51和水溶介質53聯合形成水溶性類脂溶液74，另外在乾性類脂51引入混合容器66之前可水合以使類脂被導入水溶液。在製備脂質體方法的較優選實施方案中，起先裝入的溶液74應使該溶液僅佔混合容器66容積的一部分。而且，在下續步驟中，應控制水溶性類脂溶液74加入的速率以及除去所產生充氣脂質體的速率以確保類脂溶液74的體積不超過混合容器66容積的預定百分比。通過向水溶性類脂溶液74中直接導入高速噴射的加壓氣體可進行振蕩，另外，或人工地或通過機器以機械振蕩水溶液也可進行振蕩。這種機械振蕩通過振蕩混合容器66或直接振蕩水溶液74而無需振蕩混合容器自身來起作用。如圖9所示，在較優選的實施方案中，機械振蕩器75與混合容器66相連接，振蕩的強度應足夠強以使一段時間後含有充氣脂質體的泡沫73可如圖9所示在水溶液74的表層形成。對泡沫73形成的觀察可用作控制振蕩持續時間的手段；也即，不是振蕩預定的一段時間，而應持續振蕩直至已產生預定體積的泡沫。在所使用類脂的凝膠態向液晶態相變溫度低於室溫的製備充氣脂質體設備的較優選實施方案中，提供了冷卻水性脂溶液74的裝置。在如圖9所示的實施方案中，可通過在混合容器66周圍配置外套64以在容器四周形成環形管來進行冷卻。如圖9所示，冷卻液體63分別通過外套入口和出口62和63被推動流過此環形管。通過調節冷卻液體62的溫度和流速，可將類脂水溶液74的溫度維持在所需溫度。如圖9所示，可將氣體55與水溶液74一起導入混合容器66，此氣體55可為空氣或其它氣體，如氮氣或氬氣。可通過使用一敞口混合容器以使水溶液持續暴露於大氣之中來引入空氣。在分批工序中，通過密封混合容器66可引入確定已充滿的當地周圍的空氣。如果使用的氣體比空氣重，容器則無需密封。然而，如引入的氣體比空氣輕，混合容器必需密封，如圖9所示使用蓋65。無論氣體55是空氣還是其它氣體，都可在混合容器66中被加壓，例如圖9所示，可通過管道57將混合容器與加壓氣體供應罐54相連接。振蕩完畢後，從混合容器66中提取含充氣脂質體的泡沫73。如圖10所示，將注射器100的針頭102插入泡沫73中經上提柱塞106將預定量的泡沫抽進針筒104中進行泡沫提取。如下文進一步要討論的，可利用針頭102的末端放入泡沫73中的位置來控制所提取充氣脂質體的大小。另外，如圖9所示，也可通過將提取管67插入混合容器66中來進行提取。如果混合容器66如前所述已經被加壓，則可利用氣體55的壓力來推動充氣脂質體77通過管道70從混合容器66中流到提取容器76中。在混合容器66未被加壓的情況下，則如圖9所示，則可通過管道78將提取容器76與如真空泵的真空源58相連接以產生足夠的負壓將泡沫73吸入提取容器76中。從提取容器76中將充氣脂質體77導入小瓶82中以運送至最終的使用者。可在提取容器76上連接一加壓氣體源56作為輔助物以噴射出充氣脂質體。由於負壓會導致充氣脂質體變大，故優選用正壓提取充氣脂質體。優選進行過濾以得到大小基本均一的充氣脂質體。在某些較優選實施方案中，過濾裝配含有一個以上的濾器和優選地如圖12所示，濾器互相之間並不緊密相鄰。過濾前，充氣脂質體大小範圍在約1微米至大於60微米之間變化(圖15A和16A)。通過單一濾器過濾後，充氣脂質體通常不小於10微米，但仍保留有大小為25微米的顆粒。通過兩個濾器(10微米濾器再接8微米濾器)過濾後，幾乎所有脂質體都小於10微米，大多數為5至7微米(圖15B和16B)。如圖9所示，可將過濾元件72直接結合到提取管67的末端以使只有低於預定大小的充氣脂質體可從混合容器66中提取出來，以此進行過濾。另外，如圖9所示，除了提取管濾器72外，也可將濾器80與從提取容器76中將充氣脂質體77引入小瓶82的管道79結合以進行充氣脂質體的大小篩分。如圖12所示，濾器80可含有串聯的濾器裝配124。如圖12所示的串聯過濾裝配124包含兩個連續的濾器116和120，濾器120裝配在濾器116的上方。在較優選的實施方案中，上遊方的濾器120是「NUCLEPORE」10μm濾器，下遊方的濾器116是「NUCLEPORE」8μm濾器。優選在濾器116的任一側裝配兩個0.15mm的金屬制篩盤115。在較優選的實施方案中，濾器116和120通過TeflonTMO—環，118隔開的最小距離為150μm。除過濾以外，也可利用充氣脂質體依據大小的浮力來進行大小篩分。所幸的是充氣脂質體的密度比水小，因此可浮在混合容器66的表層。由於最大的脂質體其密度最小，它們會最快浮到表層，最小的脂質體通常最後升至表層，非充氣性脂質部分則會沉入底部。此現象可有利地用於通過差異浮選法從混合容器66中移去充氣脂質體來將之篩分。因此，提取管67在混合容器66中垂直位置的放置可以控制所提取充氣脂質體的大小。管越高所提取的充氣脂質體越大。而且通過周期性地或持續地調節提取管67在混合容器66中的垂直位置，可在不斷進行的基礎之上控制所提取充氣脂質體的大小。結合裝置68可使提取更方便，此裝置為附著在提取管67上的與穿透筒72配合的穿透環71，它可使提取管67在提取容器66中的垂直位置準確被調節。凝膠狀態振蕩氣體裝入方法本身也可用來改善以充氣脂質為基礎的微球體的大小篩分。通常，振蕩能量的強度越大，所得充氣脂質體越小。本發明也包括製備含藥物的充氣脂質體以分發給最終使用者的新方法。一旦形成了充氣脂質體，不能在可導致其破裂的溫度下加熱滅菌。因此必須用已滅菌成分形成充氣脂質體並儘可能少地進行隨後的操作以避免汙染的危險。根據本發明可達到此目的，例如如圖10所示，可通過在振蕩前將含有類脂和水溶液的混合容器滅菌，通過提取容器76從混合容器66中將充氣脂質體77直接發送到滅菌注射器100的針筒104中，而不需進一步加工或處理，也即無需接著滅菌。充滿充氣脂質體77並被適當包裝的注射器100可被分發給最終使用者。此後，此產品不需要進一步的操作以將充氣脂質體給患者施用，除了從其包裝中取出注射器，除去注射器針頭102上的保護套(未標出)並將針頭插入患者體內或插入導液管中。而且當注射器柱塞106壓針筒104時產生的壓力會導致最大充氣脂質體的破裂，因此不經過濾即可得到一定程度的大小篩分。如圖10所示，接近使用時，需要過濾充氣脂質體之處，如由於未經過濾即從提取容器76中提取出來或由於仍需進一步過濾，注射器100可裝配有其自身濾器108。當注射充氣脂質體時，通過柱塞106的作用使充氣脂質體從濾器108中擠壓出來，藉此可進行充氣脂質體按大小篩分。充氣脂質體可一次性地被篩分並注射進患者體內。如圖11所示，可在注射器112上直接裝配串聯濾器套110，它可允許使用時的串聯過濾。如圖12所示，濾器套110包含先前討論過的串聯濾器裝配124，它結合於具有陽螺紋的較低環122和具有陰性螺紋的較高環114之間。較低環122裝配有Luer鎖以使之對注射器112很容易保險，較高的環114裝配有針頭102。在優選的實施方案中，類脂溶液通過濾器被壓出來，在振蕩前先將類脂溶液加熱滅菌。一旦形成了充氣脂質體，可按上文所述過濾篩分。形成充氣脂質體之前的這些步驟可提供優點，例如，減少未水合類脂的量因此提供顯著高產量的充氣脂質體，並可提供無菌充氣脂質體以預備給患者施用。例如，如小瓶或注射器的混合容器可充滿經過濾的類脂懸浮液，然後可在此混合容器中，通過例如高壓滅菌器來將此溶液滅菌。通過振蕩滅菌容器將氣體滴注到類脂懸浮液中以形成充氣脂質體。優選地，在滅菌容器的適當位置裝配濾器以使充氣脂質體在接觸患者之前先通過濾器。此優選方法的第一步即通過濾器壓出類脂溶液，它可通過分散乾性類脂並暴露更大的水合表面積來減少未水合類脂的量。優選地，濾器孔徑約為0.1至5μm，更優選地，約為0.1至4μm，甚至更優選地約為0.1至2μm，最優選地為1μm。如圖17所示，當類脂懸浮液已經過濾時(圖17B)，未水合類脂的量與未經預過濾的類脂懸浮液(圖17A)相比有所降低。未水合的類脂表現為不均一大小的無定形團塊，它是不需要的。第二步滅菌提供了可容易施用給患者的組合物，優選地可通過加熱滅菌來進行滅菌，優選地，可通過在至少約為100℃的溫度之下高壓滅菌此溶液，更優選地，可通過在約為100℃至約為130℃下，再優選地，在約110℃到約130℃下，甚至更優選地，在約為120℃至約130℃下，最優選地在約為130℃的溫度下高壓滅菌。優選地，加熱持續至少約1分鐘，更優選地約為1至30分鐘，甚至更優選地約為10至20分鐘，最優選地約為15分鐘。當用除了在可導致充氣脂質體破裂的溫度之下熱滅菌以外的方法進行滅菌時，可在充氣脂質體形成之後進行滅菌，此方法是優選的。例如在充氣脂質體形成之前和/或之後可使用了γ放射。圖18闡明了130℃下高壓滅菌15分鐘，再經渦旋10分鐘後，成功地形成充氣脂質體的能力。另外，在壓出和滅菌步驟後，振蕩步驟產生了具有很少至沒有殘留的無水類脂相的充氣脂質體。圖18A所示為高壓滅菌後過濾前所產生的充氣脂質體，因此產生大量充氣脂質體大於10μm。圖18B所示為通過10μm「NUCLEPORE」濾器過濾後的充氣脂質體，它產生了約為10μm的均一大小。本發明的某些實施方案針對的是藥物傳遞系統，它包括通過真空乾燥氣體滴注法製備的充氣脂質體並在其中包囊治療劑(即含有藥物)，這種脂質體在本文中時是指含有藥物真空乾燥氣體滴注的脂質體。本發明進一步針對的藥物傳遞系統包括含有藥物的充氣脂質體，此脂質體的內部實際上不含液體。製備本發明脂質體的方法包括(I)將包囊有藥物的脂質體置於負壓下；(II)在負壓下將脂質體溫育足夠一段時間以從脂質體中除去幾乎所有液體；和(III)將經選擇的氣體滴注到脂質體中直至達到周圍的氣壓。使用上述步驟的方法本文指的是製備含藥物脂質體的真空乾燥氣體滴注法。還提供了使用真空乾燥氣體滴注法製備本發明脂質體的設備，所說設備包括(I)含有已包裹了藥物的脂質體的容器；(II)給容器提供負壓以從脂質體中除去所含液體的裝置；(III)連接負壓裝置與容器的管道，此管道引導所說液流；和(IV)將氣體引入容器中脂質體的裝置。用以製備真空乾燥氣體滴注法製備的本發明充氣脂質體以及基本除去內部液體的充氣脂質體的真空乾燥氣體滴注法有望具有下列步驟。首先，按照此方法，將含藥物的脂質體置於負壓之下(即減壓或真空條件下)，接著在負壓下將脂質體溫育足夠一段時間以從脂質體中除去幾乎所有液體，因此形成實已乾燥的脂質體。本文所用的那些語句「上除去幾乎所有液體」和「基本上乾燥的脂質體」指的是至少約除去90％液體的脂質體，優選至少除去約95％液體，最優選除去約100％液體。儘管液體被除去，但較高分子量的藥物被保留下來並被包裹於脂質體中。最終通過向脂質體中提供氣體直至達到周圍氣壓以用經選擇的氣體滴注脂質體，因此形成含有目的藥物的本發明真空乾燥氣體滴注而得的脂質體以及含有藥物且基本上已除去內部液體的本發明充氣脂質體。本文所用的實際上已除去內部液體指的是內部至少已除去約90％液體的脂質體，優選至少除去約95％的液體，最優選除去約100％液體。意外地，根據本發明方法製備的含藥物脂質體擁有大量令人驚奇但很有利的特徵。本發明脂質體對超聲顯示出強烈反應，使用峰共振頻率的超聲(以及其它足夠強度和寬度的振蕩頻率)可使之破裂，它對壓力很穩定，和/或通常乾燥貯存時或懸浮於液體介質中時貯藏壽命較長。充氣脂質體還有如下優點，例如穩定的顆粒大小，低毒性和柔韌的膜。據信充氣脂質體柔韌的膜可用來輔助這些脂質體積累於或靶定位於如腫瘤的組織。另一個意外是脂質體在真空乾燥氣體滴注方法中可被氣體充滿並恢復其原始圓形而不是不可逆地崩潰成杯狀的能力。在峰共振頻率下使用超聲脂質體作出的反應以及使脂質體破裂的能力使得藥物對患者某區域的輸送得到控制，這是通過允許施用於患者後可監測脂質體以確定脂質體存在於所要區域，以及使用超聲使脂質體破裂以將藥物在該區域釋放來實現的。優選地，本發明脂質體具有的反射性超過2dB，優選為在約4dB和約20dB之間。在這些範圍內，本發明脂質體最高的反射性是較大脂質體，較高濃度的脂質體，和/或當使用較高超聲頻率時顯示出的。圖13是通過真空乾燥氣體滴注法製備的其中未包裹任何藥物，其內部基本不含液體的充氣脂質體dB反射性的圖示。優選地，本發明脂質體峰共振頻率約在0.5MHz和10MHz之間，當然，本發明充氣脂質體的峰共振頻率將依據脂質體的直徑，在某些情況下隨彈性而改變，較大和彈性較高的脂質體與較小和彈性較高的脂質體相比，前者的共振頻率較低。本發明脂質體的穩定性在實踐中也很重要。本發明脂質體比通過如加壓或其它技術的已知方法產生的其它充氣脂質體具有更大的貯藏期穩定性。例如形成72小時後，常規製備的含氣脂質體通常基本上不合氣體，氣體已從脂質體中擴散出來和/或脂質體已經破裂和/或熔化，隨之導致了反射性的損失。作為對比，本發明含藥物的充氣脂質體通常具有的貨架壽命的穩定性超過約3周，優選地，貨架壽命的穩定性超過約4周，更優選地，貨架壽命的穩定性超過約5周，甚至更優選地貨架壽命的穩定性超過約3個月，通常貨架壽命的穩定性甚至更長，如超過6個月，12個月或甚至2年。同樣出乎意料地是在真空乾燥氣體滴注方法中，脂質體被氣體充滿可恢復其原有的形狀而不是崩破成杯狀結構，而以前的技術則會導致後者。例見Croweetal.，ArchivesofBiochemistryandBiophysics，Vol.242，pp.240—247(1985)；Croweetal.，ArchivesofBiochemistryandBio-physics，Vol.220，pp.477—484(1983)；Fukudaetal.，J.Am.Chem，soc.，Vol.108，pp.2321—2327(1986)；Re-genetal.，J.Am.Chem.Sto.，Vol.102，pp.6638—6640(1980)。經受本發明真空乾燥氣體滴注法的含藥物脂質體可使用對本領域熟練人員顯而易見的種種常規脂質體製備技術中的任何一種來製備。儘管可使用大量不同技術中的任何一種，但優選通過微乳化技術來製備含有藥物的脂質體，通過不同常規方法製備的脂質體可用於本發明的真空乾燥氣體滴注法以產生本發明的含藥物脂質體。用於製備本發明真空乾燥氣體滴注法所使用的脂質體的原料包括本領域熟練人員熟知的適於脂質體構建的任何原料或它們的給合。在氣體置入之前，可使用對本領域熟練人員顯而易見的多種常規脂質體製備技術中的任何一種來製備脂質體，這些技術包括冷凍解凍。以及超聲處理，螫合劑透析、勻漿、溶劑浸制、微乳化，自發形成，溶劑蒸發，French壓力細胞技術、受控的去汙劑透析及其它技術，每種技術都包括在含有所需治療劑的溶液中製備不同的形式的脂質體以使治療劑被包裹於，纏繞於或吸附於所得脂質體中。另外，還可使用本領域熟練人員認為對於在特殊PH下蛋白質化或脫蛋白質化的治療劑尤其適用的PH梯度技術將治療劑裝入脂質體中，例見Maddenetal.，ChemistryandPhysicsofLipids，199053，37—46，此公開全部列入本文參考文獻。為了製備真空乾燥氣體滴注所用的含藥物脂質體，根據一般教導的方法，製備二棕櫚醯基卵磷脂脂質體可通過將二棕櫚醯基卵磷脂類脂懸浮於磷酸鹽緩衝鹽水或含有欲包裹藥物的水中，並將類脂加熱後約50℃來實現，需要略高於41℃的溫度是為了將二棕櫚醯基卵磷脂類脂從凝膠狀態轉變成液晶狀態從而形成含藥物的脂質體。為了製備不均—大小分布於約2微米的多層載體，可將脂質體溶液保持在約50℃的溫度之下，同時用手工緩慢混合，然後將溫度降低至室溫，脂質體保持完整。如有必要可通過限定大小的聚碳酸酯濾器壓出二棕櫚醯基卵磷脂脂質體以使得脂質體大小分布更均勻。用於此技術的裝置是配備有熱筒的壓出機裝置(ExtruderDeviceTM，LipexBiomem-branes，Vancouver，Canada)，熱筒可使在溫度高於類脂的凝膠狀態向液晶狀態相變溫度時，壓出可更方便地進行。對於少量溶於水介質的親脂性藥物，在形成脂質體之前可將此藥物與類脂自身混合，例如，兩性黴素可與乾性脂質一起懸浮(例如於氯仿中的摩爾比為8∶2的蛋卵磷脂和膽固醇，與脂質混合)，然後蒸發氯仿(需指出也可使用其它適當的有機溶劑，如乙醇或乙醚)，再將含有親脂悸藥物混合物的乾性脂質懸浮於如無菌水或生理鹽水的水介質中。此方法適用於如皮質類固醇的多種親脂性藥物以將親脂性藥物結合到脂質體膜內，然後乾燥所得脂質體，再經受如上所述的真空氣體滴注法。另外再通過一般指導的方法，可使用常規冷凍解凍步驟產生寡層或單層二棕櫚醯基卵磷脂脂質體，冷凍解凍步驟過後，可對脂質體進行上述的壓出步驟。然後使向由此製得的含藥物脂質體經受本發明的真空乾燥氣體滴注過程以產生本發明的含藥物真空乾燥氣體滴注脂質體以及含藥物的其內部實際不含液體的充氣脂質體。根據本發明方法，將含藥物後脂質體置於適於使脂質體經受負壓(即減壓或真空條件下)的容器中，然後將負壓供應是夠長的一段時間以從脂質體中除去幾乎所有液體，從而得到實已乾燥的脂質體，本領域熟練人員可認為一旦裝備有本發明，即可使用不同的負壓，重要的參數是從脂質體中除去幾乎所有的液體的參數。通常至少約為700mmHg，優選為在約700mmHg和約760mmHg(標準氣壓)之間的負壓被提供約24至約72小時即足以從脂質體中除去幾乎所有液體。根據本文的公開，共它適當的壓力和時間長短對本領域熟練人員來說是顯而易見的。最後，對脂質體提供經選擇的氣體以用氣體滴注脂質體直至達到周圍大氣壓力，因此可得到本發明含有藥物的真空乾燥氣體滴注脂質體以及其內部實已不含液體的含藥物的充氣脂質體。優選地，氣體滴注應緩慢進行，即在超過至少約為4小時的期間內，最優選地在超過約為4到約為8小時的期間內進行。可使用不同的生物兼容氣體，這些氣體包括空氣、氮氣、二氧化碳、氧氣、氬氣、氙氣、氖氣、氦氣或它們中的任何幾種和所有的組合。其它適當的氣體對於本領域熟練人員是顯而易見的，所選擇的氣體僅受建議使用的脂質體的限制。製備脂質體的上述方法在下文中指的是真空乾燥氣體滴注法。如有必要，在脂質體經受負壓之前應先冷卻，這種冷卻是優選的。優選地，脂質體經受負壓之前先被冷卻後0℃以下，更優選地約為-10℃和-20℃之間，最優選冷卻後-10℃。在達到所需負壓時，可優選地將脂質體溫度升高至0℃以上，更優選地約為10℃和20℃之間。最優選升到10℃，直至實際上已從脂質本中除去所有液體，此時不必再持續負壓，溫度也可回復至室溫。如果脂質體被冷卻至0℃以下，則優選對在冷凍保護劑存在下最初製備的脂質體或者對在進行本發明真空乾燥氣體滴注法之前已加入冷凍保護劑的脂質體進行真空乾燥氣體滴注法。這種冷凍保護劑不必強行加入，但它可幫助維持脂質體膜在低溫下的完整性，也可增加膜的最終穩定性，優選地冷凍保護劑是海藻糖、甘油、聚乙二醇(尤其是分子量為400的聚乙二醇)、棉子糖、蔗糖和山梨醇，特別優選地是海藻糖。令人驚奇的是發現了本發明脂質體對壓力的變化非常穩定，由於此特徵，可使必要時能在真空乾燥氣體滴注之後，將脂質體穿過預定孔徑的濾器進行擠壓以產生相對均勻並限定孔徑的脂質體。本發明另一方面也提供了有用的設備，可用以製備本發明含有藥物的真空乾燥氣體滴注脂質體以及其內部實已不含液體的含有藥物的脂質體。特別是圖14是顯示了真空下乾燥脂質體並將氣體滴注進乾燥脂質體的優選設備，此設備內包含含有藥物脂質體19的容器8組成，如有必要，此設備可包括裝有乾冰17、圍繞容器8的冰浴5。冰浴5和乾冰17使脂質體被冷至低於0℃。真空泵1通過導管15連接到容器8以施加持續的負壓。在優選的方案中，泵1可施加至少約700mmHg的負壓，且優選地負壓在約700mmHg到約760mmHg(標準壓力)。加力計6連接導管15監測施加到容器8的負壓。為了防止從脂質體除去的液體進入泵1，一系列的阱被連到導管15以幫助收集從脂質體吸出的液體(和液體蒸汽，統稱為液體)。作為優選的方案，兩個阱被應用。第一個阱優選地包含配有帶乾冰17的冰浴4的燒瓶7。第二個阱優選地包含柱3，圍繞柱3管道16螺旋形環繞。柱3的頂端連接導管15而底端連接管道16。管道16的另一端連接導管15。如附圖14所示，帶乾冰17的冰浴2包圍柱3和管道16。如果需要，乾冰17可用液氮，液化空氣或其它低溫學物質代替。冰浴2和4幫助收集任何液體並冷凝任何從脂質體中吸出的液體蒸汽以收集在阱內。在本發明優選的方案中冰阱2和4各自保持在低於約-70℃的溫度。管塞14裝在容器8的上遊導管15中以選擇氣從氣瓶18被導入容器8和進入脂質體19中。將含脂質體19的藥物置於本發明設備的容器8中。優選地，使用乾冰17將冰浴5中的脂質體的溫度降低至0℃以下，更優選在約-10℃到-20℃之間，最優選-10℃。關閉管塞14和9，啟動真空泵1。隨後小心地打開管塞10，11，12和13，使真空泵1對容器8抽真空。利用壓力計6測量壓力，直到負壓達到約700mmHg以下，優選範圍為約700mmHg和760mmHg(表壓)之間。在本發明容器7的優選方案中，由使用乾冰17的冰浴4冷卻的容器7以及使用乾冰17的冰浴2冷卻的柱3和盤管16，共同或單獨地從脂質體中冷凝液體蒸氣並收集液滴，以防止液體和液體蒸汽進入真空泵1。在優選的本發明方案中，阱2和4的溫度各保持在約-70℃以下。所需的負壓通常至少保持24小時，以便從容器8中的脂質體19和在容器3和7中的冷凍除去液體及液體蒸氣。系統的壓力由壓力計6來測量，通常保持約24到72小時，在此時間內，基本上所有的液體都已從脂質體中除去。這時，慢慢關閉管塞10並關閉真空泵1。隨後，逐漸打開管塞14，使氣體從氣瓶18通過管塞14經導管15慢慢地導入系統，使氣體滴入容器8中的含藥物脂質體19中。優選地，氣體進入的時間至少為約4小時，更優選約4到8小時，直到系統的壓力達到環境壓力。本發明含藥物的真空乾燥氣體滴注的脂質體和含藥物充氣的脂質體實際上可避免液體進入其內部，具有作為藥物輸送載體的優越特徵。根據本發明的方法製備的充氣的脂質體在某些方面，在物理性質和功能方面，不同於現有技術中的脂質體。例如，本發明的脂質體實際上避免了液體進入其內部。確切地講，現有技術中的脂質體存在水介質。例如，Dorland′sillustratedMedicalDictionary，P.946，27thed.(W.B.SaundersCompany，Philadelphia1988)。進一步，本發明脂質體令人驚奇地對超聲波具有強列的回波發生特性，在該脂質體峰值共振頻率易受超聲波影響而破裂，並且有長的保存期限，特別有利於使用該脂質體作為藥物傳遞系統。因此，本發明設計的控制向患者區域輸送藥物的方法包括(i)對患者使用通過真空乾燥氣體滴注法製備並在其中密封著藥物的充氣脂質體，和/或實際上在其內部避免液體存在的並在其中密封著藥物的充氣脂質體；(ii)使用超聲波監測脂質體以測定該區域脂質體的存在；以及(iii)使用超聲波裂破脂質體，使藥物在該部位釋放。除這裡詳述的用途外，本發明的脂質體還有各種不同的用途。例如，包括作為超聲波熱增效劑和作超聲波反射照影劑的用途。這些另外的用途和其他有關的物質在申請日均為1991年7月18日的本申請人的專利申請，U.S.SerialNo.716，793和U.S.SerialNo.717，084中被描述並作為權利要求而提出，這裡將其所公開的內容作為一個整體收編為參考文獻。在下列實施例中將進一步描述本發明。實施例1為描述含治療劑的充氣微球體的製備，試驗和使用的實施例。實施例2—10為描述含治療劑的充氣微球體的製備，試驗和使用的預示的實施例。實施例11—20為描述含有藥物的，真空乾燥氣體滴注的脂質體，在其內部實示上避免任何液體存在的充氣脂質體的製備，試驗和使用的預示實施例。實施例21—28為說明通過在氣體存區下搖動包會一種液體的水溶液而製備的充氣脂質體的製備和使用的實際的實施例。實施例29—36是說明通過過濾和壓熱一種類脂懸浮液，接著振蕩該類脂溶液而製備的充氣脂質體及篩分的實際實施例。下列實施例不應被認為是所附權利要求的範圍的限制。實施例實施例1下面描述的方法說明治療劑如DNA可被截留在充氣微球體中，以及超聲波可被用來從充氣微球體中釋放治療劑。如下所示，在接受相同能量的超聲波輻射後，截留有水和DNA的脂質體不能釋放該遺傳物質。在微球體中存在氣體有效地俘獲超聲波的能量，因而可被用來傳遞治療劑如遺傳物質。充氣的微球體被下述合成將純的二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)，AvantiPloarLipids，AlabasterAta.懸浮於普通的鹽水中，然後使用ExtruderDevice(lipexBiomem-branes，Voncourer，Canada)在800p.s.i.通過2微米聚碳酸酯濾器(Nuclepore，Costar，Pleasanton，CA)擠壓五次。然後按U.S.SerialNumber716，899，申請於6/18/91所述將所得脂質體減壓乾燥，該文獻作為一個整體在此收編為參考文獻。徹底乾燥後將乾燥的脂質體按U.S.SerialNum-ber716，899所述慢慢地充進氮氣。與大氣壓平衡後，將所得脂質體懸浮於鹽水中(0.9％NaCl)並劇烈搖動。CoulterCounter(Bedfordshire，England)試驗所得充氣脂質體的大小。按該CoulterCounter提供的參考手冊所述的校準程序校準儀器。將充氣脂質體溶液用同中素II(IsoterII)稀釋並放置在玻璃容器中，在CoulterSamplingStand3位攪拌。首先使用100μm孔徑管。用該孔徑管將500毫升溶液在各選擇的大小範圍試驗一次，接著使用的是30μm孔徑管。用該管可將微球體由大到小地排列到1μm，充氣微球體的直徑可經其中檢測。將50毫升溶液試驗一次，將微球體在各選擇的大小範圍計數。於CoulterCounterModelZM和CoulterCounterChannelyzer256收集數據。準彈性光散射(QEL)和光顯微術也被使用。預定大小的乳液小球被用來校準目鏡的柵格。這些柵格以10X，40X，100X，400X和1000X的倍率被校準。然後將充氣微球體置於玻璃載片並在不同倍率下觀察。該技術不僅可以得到充氣脂質體的大小，也可以得到類脂微粒的大小。使用AcousticImagingModel5200臨床超聲波設備(AcoustinImayingTechnologiesCorp.，Phoenix，AZ)和定製的組合半敞開的聲波能掃描充氣的脂質體。半敞開聲學實驗室由LecroyCorporationCorporateHeadquarters，ChestnutRidge，NY)，Panametricsmodel5052PRPulser/Receiver(Panametrics，Inc.，Waltham，Mass)，具有2.25，3.5，5.0，7.5，和10.0MHz頻率的Panametrics浸沒式變送器(Panametrics，Inc.，Waltham，Mass)，和Testech，Inc.的校正系統(Testech，Inc.，Exton，PA)組成。一種參考標準，系列模擬模型(tissuemimickingphan-tom)被用於建立延時補償(time—gaincompensation)(TGC)並以此方式得到平均振幅。該系列摸擬模型由Radi-ationMeasurements，Inc.(Middleton，W])製造。如表III所示，在試驗頻率範圍充氣脂質體的反射率保持在這些實驗使用的脈衝聲波的最高能量。特別地，儘管掃描持續60分鐘，充氣脂質體的dB反射率保持在4.5—8.4mW範圍的經受量以及3.25mW/cm2的聲波強度(AcousticImagingAI5200臨床超聲波機可產生的脈衝波的最高能量用Rich—MarTherepeuticultrasoundapparatusmod-elRM—25(Rich—MarCorp.，Inola，Ok)提供的超聲波能(表IV)持續照射充氣脂質體溶液。表(IV)顯示了使用持續的超聲波產生的功率。結果發現持續的超聲波能導致充氣脂質體內部的氣體從脂質體中逃逸，從而破裂了脂質體。在5瓦特功率及1MHz時，完全破壞鹽水溶液中的充氣脂質體需要大約20～30分鐘。在10瓦特及1MHz時，完全破壞充氣脂質體大約需要5分鐘。在提供高能量前後通過光顯微術檢測充氣脂質體，發現在照射後球形充氣脂質體消失。功率輸出和持續超聲波強度以系列實驗試驗充氣微粒體輸送DNA的能力。按上述由DPPC製備脂質體，只是在乾燥DPPC再懸浮時加入1CC生理鹽水中的，在7000bp質粒上的2μgDNA(pCH10PharmaciaLKBBiotechnology，Piscataway，NJ)。然後按上述製備充氣脂質體。在充氣脂質體再懸浮後，外面的未截留的DNA可通過親合色譜法除去。將充氣脂質體和DNA的懸浮液上柱(DNAspecificSephadexp)用蠕動泵(E-comopunp，Bio—RadLaboratories.Hercules，CA)洗脫。DNA親合基質粘合併保留了未截留的DNA。充氣微球體洗脫出去。也可按上述截留DNA的方法製備充水的脂質體，只是省略了乾燥空氣滴注的步驟。未截留的DNA經層析而除去。然後將充氣脂質體按上述進行超聲波掃描。含DNA的充氣脂質體對上述脈衝超聲波具有相似的回波反應。用上述持續的超聲波掃描後，微粒體失去了其回波反應性。用持續的超聲波處理後，通過碘化(Propidium)二聚物法檢定游離DNA(例如，充氣脂質體之外的DNA)並將其與含DNA的充氣脂質體(例如，未用持續的超聲波處理)的對照組比較。首先，將2ml充氣微球體的等分試樣加入一支試管中。然後加入2mlPBS(磷酸鹽緩衝鹽水)，並將該試管用帕拉膠膜密封。使試管倒置數次並放置約5分鐘，接著分離微球體。然後用巴斯德吸移管從試管中除去底部水層。將此程序重複三次以洗滌微球體。接著，將2m10.05mg/mlDNA等分試樣加入微球體中，密封試管並倒置混合。放置約5分鐘後，用巴斯德吸移管抽提底部水層。然後加入2mlPBS等分試樣並重複洗滌未束敷的DNA。將此程序重複共五次，並將水層進行掃描分析。然後用2mlPBS稀釋微球體，並使用超聲波，直到觀察不到充氣微球體的存在。在使用超聲波檢測釋放的DNA後，將14ml濃度為2×10-5M的DMSO中的碘化Propidium二聚物(POPO—3iodide，MolecularProbes，Inc.Eugene，OR)作為對照，將14ml碘化Propidium加入單一的PBS，以及0.025μg/ml的PBS中的DNA。在SpexFluorolog2Spectrophotometer中使用534nm的激發頻率測量樣品的螢光。記錄558nm的螢光發射，如下表V所示。通過基於對照的由PBS中的碘化Propidium二聚物組成的PBS樣品的推斷，而測定各樣品中的DNA量的百分比。表V洗滌過程可除去未束敷的DNA。如表V所示，在五次洗滌後，充氣微粒體仍含約21％的質粒DNA。因為碘化Propidium二聚物的螢光無明顯增強，未暴露在高能量超聲波下的含DNA的充氣微球體保持了大量的其內部的DNA。但是，持續的超聲波照射後，Propidium碘化物的螢光顯著增強顯示持續的超聲波能導致了充氣微球體的DNA的大量釋放。因此，在使用超聲波前，DNA保留在微球體中。由於使用超聲波，截留的DAN被釋放。實施例2將一種陽離子脂質類，如DOTMA按1∶3體積摩爾比與DPPC混合。混合物溶於氯仿並通過旋轉蒸發除去氯仿。在此乾燥的材料中加入水並使用ExtruderDevice(LipexBiomembranes，Inc.，Vancouuer，BC)將此混合物壓濾過2μm濾器。然後按照公開於6/18/91的U.S.SerialNo.717,084的方法製備帶正電荷的充氣脂質體，該文獻作為整體在此收編為參考文獻。通過加PBS，鹽水或其他合適的緩衝溶液(如HEPES緩衝液)將所得的乾燥的，帶正電荷的充氣脂質體再水合；一種渦旋器可被用於保證混合的均勻。加入DNA並再次振蕩混合物。由於DNA結合在陽離子充氣脂質體表面，所以通過過濾或選擇性層析可除去未結合的DNA。到陽離子脂質類被飽和為止，所有DNA實際上都結合上去。選擇性地，DAN可於在前的壓濾步驟中被加入，接著進行上述步驟。然後將所得的DAN塗漬的脂質體乾燥並注入氣體產生含DNA的充氣脂質體。然後將所得脂質體暴露於持續的超聲波，並通過對超聲波的反射係數和吸收度試驗脂質體的破裂。不論DNA被束敷在充氣脂質體的裡面還是外部，都可用聲波釋放遺傳物質。在充氣微球體外部的DNA的結合可允許微球體內部有更大的空間以填充氣體。由於有效地增大了直徑，通常可更有效地使用超聲波能量從微球體中釋放遺傳物質。可以相信，結合DNA的陽離子脂質類具有優越性，例如，當聲能使脂質體膜破裂時，疏水基幫助DNA併入細胞，有助於通過細胞膜和亞細胞層。上述陽離子脂質類有具有中和DNA陰電荷及兩親性的優點。當這些陽離子脂質類從脂質體中釋放時，由於脂質類為兩親的而細胞膜是可溶的，它們有助於促進DNA進入細胞以及亞細胞層。實施例3製備由1∶2摩爾比的DOTMA和DPPC的脂質體並用編碼為HLA(主要的組織相容性複合體)基因，HLA—B7的DNA塗漬。將塗漬DNA的脂質體靜脈注射給患軟組織遷移性黑素瘤的病人。將1.0兆赫的持續超聲波照射核軟組織，使LHA—B7DNA在腫瘤上累積。可以相信某些腫瘤細胞將被HLA—B7基因轉染，結果可刺激病人T細胞排斥腫瘤的免疫反應。實施例4對碎片腫瘤基因的抗過敏低聚核苷酸被截留在由聚乙二醇二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺組成的脂質體內。將該脂質體靜脈注射給轉移結腸癌患者。對轉移瘤提供1.0兆赫的持續超聲波能。實施例5按上述使用卵磷脂酸膽鹼和DOTMA，氯化N—[1—(2，3—二油醯氧)丙基]—N，N，N—三乙基銨則備充氣脂質體，結合載有營養不良基用的YAC表面媒介物。將鎂微球體靜脈注射給Duchoinne′sMuscularDystrophy(orBeck-er′sMD)患者。對患者肌肉組織提供1.0兆赫持續的超聲波能量，可使肌肉的力量和質量增加。實施例6將YAC表面媒介物上的CFTR(囊纖維化轉移膜調節器)基團截留在截留有氬氣的由1∶1摩爾比的陽離子脂質類和DPPC組成的微球體的微膠粒製劑。給囊纖維化患者靜脈注射該微球體並提供超聲波能量影響組織(例如，肺、胰，等)。患者肺粘液蓄積減少，基他受影響的器官的功能也有提高。實施例7給轉移性腎癌患者注射含轉錄白細胞介素—2(IL—2)基因的DNA的陽離子微球體。用超聲波掃描病人腹部癌瘤。如微球體在腫瘤部位蓄積，來自腫瘤的反向散射及超聲波反射的頻譜諧波倍量將有增加。增強超聲波能量，脈衝持續時向及脈衝重複頻率直到充氣微球體頻譜超聲波倍量從腫瘤上消失。通過仔細控制能量，如用水聽器檢測，控制成腔。該處理的結果是IL—基因轉染了一些腫瘤細胞。隨後T細胞淋巴細胞可對胞質和浸潤物反應，推毀腫瘤。實施例8給轉移性腎癌者注射含轉錄腫瘤壞死因子(TNA)基因的DNA的陽離子微球體。用超聲波掃描病人腹部腫瘤。如微球體在在腫瘤部位蓄積，來自腫瘤的反向散射及超聲波反射的頻譜諧波信號將有增加。增強超聲波能量，脈衝持續時間及脈衝重複頻率直到充氣微球體頻譜超聲波信號從腫瘤上消失。通過仔細地控制能量，如用水聽器檢測，控制成腔。該處理的結果是TNF基因轉染了一些腫瘤細胞。隨後腫瘤開始固定地產生TNF，並可導致大量的凝固性壞死。實施例9用抗腫瘤的單克隆抗體製備由二棕櫚醯磷膽鹼和結合DNA的陽離子脂質類組成的微球體。給轉移性黑素瘤患者靜脈注射塗漬抗黑素瘤抗原的單克隆抗體和含白細胞介素—2的微球體。用診斷超聲波掃描患者。軟組織中的腫瘤沉積物被充氣微球體反射為強光。當用診斷超聲波檢測這些結時，將超聲波能量增加到5瓦特並聚焦於含腫瘤的轉移性沉積物。當釋放傳遞時，檢測腫瘤的超聲波圖譜。當反射由微球體定位的腫瘤的所有高頻譜信號消失時，將超聲波能量聚焦於具有指標微球體的聲譜信號的新的腫瘤區。實施例10按照上述合成具有三種類型的表面結合反義DNA的陽離子充氣脂質體。反義DNA為轉錄c—myc，c—myb，平滑肌生長因子，和肉皮細胞生長因子的基因的靶。將充氣脂質體以動脈內給藥的形式輸送到血管成形部位。可以相信由於微球體破裂而釋放反義DNA將改善內皮功能，減少凝固傾向。實施例11將二棕櫚醯磷醯膽鹼(1克)懸浮於10ml含阿黴素的磷酸鹽緩衝的鹽水中，將該混懸液加熱至50℃，然後用手在圓底燒瓶中迴蕩約30分鐘。除去熱源，將混懸液再迴蕩2小時，迴蕩時使混懸液冷卻至室溫，以形成含藥物的脂質體。將製得的脂質體放入與圖14相似的設備的容器中，冷卻至約-10℃，然後對其抽真空。將脂質體的溫度升至1約10℃。高真空被保持48小時。48小時後，在四小時內將氧氣逐步注入該容器，4小時後，將壓力恢復到大氣壓。結果得到含藥物的真空乾燥氣體滴注的脂質體，該充氣脂質體在其內部基本上避免了液體的存在，然後將該脂質體懸浮在100CC磷酸鹽緩衝的鹽水中，並渦旋10分鐘，然後在約4℃儲存約三個月。實施例12為試驗實施例11的脂質體的超聲波回聲，將250mg脂質體樣品懸浮於300CC非脫氣的磷酸鹽緩衝的鹽水中。使用AcousticImagingModel5200掃描儀(AccousticImag-ing，Phoenix，AZ)並應用測量dB反射率的系統試驗程序用7.5mHz發射器，以各種時間間隔掃描玻璃器中的脂質體。在試驗脂質體前已知聲阻抗模型校準該系統。該脂質體顯示良好的dB反射率。實施例13將二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(1克)和防凍海藻糖(Cryopro-tectanttrehalose)(1克)懸浮於10ml含兩性黴素—β藥物的磷酸鹽緩衝的鹽水，將此混懸液加熱至約50℃，然後用手在圓底燒瓶中迴蕩約30分鐘。除去熱源，將混懸液再迴蕩2小時，迴蕩時使混懸液冷卻至室溫，以形成脂質體。將製得的脂質體真空乾燥並注入氣體，大體上按實施例11所示的步驟進行，得到含藥物的，真空乾燥的，氣體滴注的脂質體，該脂質體在其內部基本上避免了液體的存區。然後將該脂質體懸浮在10CC磷酸鹽緩衝的鹽水中並渦旋，然後在4℃儲存約數星期。使用前，通過具有附加在中心軸上的濾器的濾管注射而將充氣脂質體擠壓過10μm聚碳酸酯濾器(Nuclepore，Costar，Pleasanton，CA)。實施例14基本上按照實施例12的步驟試驗實施例13脂質體的超聲波回聲。該脂質體顯示良好的dB反射率。實施例15將二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(1克)懸浮於10ml含阿糖胞苷藥物的磷酸鹽緩衝的鹽水中，將該混懸液加熱至50℃，然後用於在圓底燒瓶中迴蕩約30分鐘。通過具有加熱套筒的擠壓設備(ExtruderDeviceTM，LipexBiomembranes，Vancou-ver，Canada)將混懸液擠壓五個周期，擠壓前可進行或不進行常規的凍熔處理，擠壓期間保持約50℃的溫度。除去熱源，將混懸液再迴蕩2小時，迴蕩時使混懸液冷卻至室溫，以形成脂質體。基本上按照實施例11所示的步驟，將所製備的脂質體真空乾燥氣體滴注，得到含藥物的，真空乾燥的，氣體滴注的脂質體，該充氣脂質體在其內部基本上避免了液體的存在。然後將該脂質體懸浮在10CC磷酸鹽緩衝的鹽水中，在約4℃儲存數周。實施例16基本上按照實施例12的步驟試驗實施例15的超聲波回聲。該脂質體顯示良好的dB反射率。實施例17為了試驗本發明含藥物脂質體的穩定性，用手將實施例11的脂質體混懸液通過如圖10所示的注射管中的10微米聚碳酸酯濾器。擠壓處理後，按實施例12所述研究脂質體的超聲波回波。令人驚奇地，本發明脂質體在擠壓後仍基本上保持其回波產生。實施例18使用振子頻率為3到7.5mHz的超聲波掃描實施例11的脂質體。結果顯示，在超聲波的高頻，回波產生更迅速地減弱，反映了相對高的共振頻率以及與較高頻率有關的較高能量。實施例19給癌症患者靜脈注射包含於真空乾燥的充氣脂質體的藥物，該脂質體基本上避免了其內部的液體。含於脂質體的藥物是阿黴素。靜脈注射時，通過自動程序對腫瘤進行超聲波掃描，並測定脂質體的共振頻率。然後在脂質體峰共振頻率將超聲波能量聚焦於腫瘤。超聲波能量不足以導致明顯的組織熱(即，無大於2℃的溫度變化)，但該超聲波能量是以導致腫瘤部位的脂質體破裂並釋放阿黴素。這樣，使用脂質體與超聲波完成了局部藥物輸送。實施例20給嚴重的局部真菌感染的病人靜脈注射包含藥物的真空乾燥的氣體滴注的脂質體，該充氣脂質體基本上避免了其內部的液體，以基本上與實施例19所述相似的方式使用超聲波完成局部藥物輸送。含於脂質體的藥物兩性黴素—B被有效地輸送到感染部位。實施例21為了製備充氣脂質體，將50mg1，2—棕櫚醯—Sn—甘油基—3—膽鹼磷酸(MW734.05，粉末LotNo.160pc—183)(Avanti—PolarLipids，Alabaster，AL)稱重並用5.0ml鹽水(0.9％NaCl)或磷酸鹽緩衝的鹽水(0.8％氯化鈉，0.02％氯化鉀，0.115％磷酸二鈉和0.02％磷酸一鉀，PH調節到7.4)在離心管中水合。然後，將水合混懸液置於渦旋機(ScientificIndustries，Bohemia，NY)中，在儀器6.5檔搖動10分鐘。然後記下12ml的總體積。鹽水溶液由5.0ml減少到約4ml。然後通過光學顯微鏡測量經這種新方法製備的充氣微球體的大小。發現最大的脂質體約50到約60μm，而最小的約8μm。平均大小範圍為約15到約20μm。然後通過10或12μm「NUCLEPORE」膜，使用Swin—LokFilterHolder，(「NUCLEPORE」FiltrationProducts，CostarCorp.，Cambridge，MA)和20CC注射管(BectonDickinsinCo.，Rutherford，NJ)過濾該充氣脂質體。濾膜為10或12μm「NUCLEPORE」膜(NucleporeFiltrationProducts，CostarCorp.，Cambrige，MA)。將10.0μm濾膜安裝在Swin—LokFilterHolder，並安且地將蓋上緊。將脂質體溶液搖動並經18號針(gaugeneedle)移入20CC注射管。大約12ml脂質體溶液被置於注射管中，並將注射管按到Swin—LokFilterHolder上。顛倒注射管和濾器支持物，以使較大的充氣脂質體囊升至頂部。慢慢地推上注射管，以這種方式過濾充氣脂質體。通過10.0μm濾器擠壓後充氣脂質體的殘存率(擠壓過程後保存的充氣脂質體的量)約為83—92％。擠壓前，泡沫狀物的體積的約為12ml而水溶液的體積約4ml。擠壓後，泡沫狀物的體積為10—11ml而水溶液的體積約為4ml。再用光學顯微鏡檢測擠壓後充氣脂質體大小的分配。檢測範圍為為約25到約30μm的最大脂質體和約5μm的最小脂質體。平均大小的範圍為約8到約15μm。已發現過濾後，90％以上的充氣脂質體小於15μm。實施倒22將50mg1，2—二棕櫚醯—sn—甘油基—3—膽鹼磷酸(MW734.05，粉末)(Avanti—PolarLipids，Alabaster，AL)稱重並放入離心管中。然後用5.0ml鹽水溶液(9％NaCl)水合該脂質。將該脂質在儀器6.5擋渦旋10分鐘。渦旋後，將全部溶液在液氮中冷卻。然後將樣品放在冷凍乾燥器中冷凍乾燥。樣品在冷凍乾燥中放置18小時。以冷凍乾燥器中取出乾燥的脂質並在5ml鹽水溶液中再水合，在6.5檔渦旋十分鐘。將該溶液的少量樣品移在載玻片上並在顯微鏡下觀察該溶液。然後測量充氣脂質體的大小。檢測到最大的脂質體約60μm而最小的約20μm。平均大小範圍約30到約40μm。實施例23將50mg1，2—二棕櫚醯—Sn—甘油基—3—膽鹼磷酸(MW734.05，粉末)(Avanti—PolarLipids，Alabastar，AL)稱重並放入離心管中。以盤卷的方式將大約兩英尺的膠管(0.25in內徑)繞在圓錐形離心管上。然後用絕緣膠布將膠管固定在離心管上。將膠管與恆溫循環浴(VWRScientif-icModel1131)連接。該浴的溫度固定於60℃，循環水在管內高速循環。在脂質溶液中放入溫度計，測得溫度在42°和50℃之間，這是脂質的相轉變溫度。將該脂質溶液在渦旋儀6.5檔渦旋10分鐘。顯然，很少脂質(相轉變溫度＝40℃)的泡沫未明顯地形成充氣脂質體。光學顯微鏡中可明顯地看到溶液中的大量脂質微粒。在此溫度下形成的充氣脂質體的數量比在低於相轉變溫度的溫度下形成的數量少3％。將該溶液放置15分鐘直到溶液溫度與室溫(12℃)平衡。然後將溶液渦旋10分鐘。10分鐘後，充氣脂質體明顯地形成。實施例24將50mg1，2—二棕櫚醯—Sn—甘油基—3—膽鹼磷酸(MW734.05，粉末)(Avanti—PolarLipids，Alabaster，AL)稱重並放入離心管中。然後用5.0ml的9％NaCl水合該類脂。將脂質水溶液在渦旋器6.5擋渦旋10分鐘。渦旋後，將全部溶液在液氮中冷卻。然後將其在室溫(25℃)的水浴熔化。將冷凍熔化步驟重複八次。將水合的混懸液在渦旋儀6.5擋渦旋10分鐘。然後按實施例21所述方法檢測充氣脂質體。實施例25準備兩隻離心管，各裝有50mgDPPC。將1mol％(～0.2mgofDuponolClotNo.2832)十二烷基硫酸鈉，一種乳化劑，加入一隻離心管中，在另一隻離心管中加入10mol％(2.0mgofDuponolClotNo.2832)。在兩隻離心管中各加入5ml9％NaCl。將兩隻離心管都在液氮中冷卻並冷凍乾燥大約16小時。從冷凍乾燥器中取出兩個樣品並各加5ml鹽水。在6.5擋將兩隻離心管渦旋10分鐘。經測定，加1mol％十二烷基硫酸鈉形成的最大的充氣脂質體約為75μm，而最小的約為6μm。平均大小範圍為約15至約40μm。加10mol％十二烷基硫酸鈉形成的最大充氣脂質體約為90μm，而最小的約為6μm。平均大小的範圍為約15到約35μm。含加入1mol％十二烷基硫酸鈉形成的充氣脂質體的溶液的泡沫體積約為15ml，而水溶液體積約為3—4ml。含加入10mol％十二烷基硫酸鈉形成的充氣脂質體的溶液的泡沫的體積也約為15ml，而水溶液的體積也約為3—4ml。實施例26這個實施例測定是否可用聲能來製備充氣脂質體。將50mg脂質，1，2—二棕櫚醯—Sn—甘油基—3—膽鹼磷酸(Avanti—PolarLipids，Alabasten，AL)稱重並用5ml9％NaCl水合。使用HeatSystemsSonicatorUltrasonicPro-cessorXL(HeatSystems，Inc.Farmingdale，NY)ModelXL2020向該水溶液發射聲能以代替渦旋。調節鈕位於4檔的聲波發生器發射出頻率為20KHz的連續聲波。使用一個微型末端(microtip)進行聲波掃描10分鐘。聲波掃描後，在光學顯微鏡下觀察該溶液。未見充氣脂質體已被製備。接著除去聲波發生器的微型末端放回聲波發生器的端套中。製備另一種溶液(每5ml鹽水50mg脂質)並用該末端進行聲波掃描。10分鐘後，在顯微鏡下觀察溶液。也未發現充氣脂質體。實施例27這個實施例測定是否有中止充氣脂質體產生的脂質的低濃度限度。將10mg1，2—二棕櫚—Sn—甘油基—3—膽鹼磷酸(Avanti—PolarLipids，Alabaster，AL)加入10ml鹽水溶液(0.9％W∶VNaCl)中。在6.5檔將脂質/鹽水溶液渦旋10分鐘。在按大小分類的光學顯微鏡下觀察溶液。測定的最大脂質體的大小的範圍為約30到約45μm而最小脂質體的大小為約7μm。平均大小範圍為約30到約45μm。顯然，由於該充氣脂質體更易破裂，因此它們比前述的脂質體更易碎。因此，脂質的濃度顯然是充氣脂質體產生和穩定性的一個同類。實施例28將未過濾的充氣脂質體倒入50ml注射管中並通過串聯的，間距最小的150μm的如圖11和12所示的「NUCLE-PORE」10μm濾器和8μm濾器。兩者挑一地，例如，樣品也可通過相互緊密重迭的10μm和8μm濾器過濾。充氣脂質體在使流速為2.0mlmin-1的壓力下通過濾器。然後測量隨後過濾的充氣脂質體的產量，結果已過濾的充氣類微球體的體積為未過濾的體積的80—90％。以四種不同的方法篩分所得充氣脂質體以測量其大小和分布。篩分是在ParticleSizingSystemsModel770光學篩分儀，與UniversalImaging製造的圖形處理軟體聯接的ZeissAxiplan光學顯微鏡，和CoulterCounter(CoulterElectvonilsLimited，Luton，Beds.，England)上完成的。如圖15和16所示，該充氣脂質體的大小比未過濾的脂質體更一致地分布在8—10μm。因此，經過濾的充氣脂質體具有更一致的大小。實施例29將250mgDPPC(二棕櫚醯磷脂醯膽鹼)和10ml0.9％NaCl加入一隻50mlFalcon離心管(Becton—Dickinson，Lincolnpark，NJ)中並保持室溫(大約20℃)。然後在氮氣壓力下將混懸液擠壓通過1μm「NUCLEPORE」(Costar，Pleasonton，CA)聚碳酸酯膜。將所得混懸液用ParticleSiz-ingSystems(SantaBarbara，CA)Model37。雷射散射篩分儀篩分。所有脂質微粒的外徑為1μm或小於1μm。另外在18,000P.s.i.的壓力下將相同的量的DPPC混懸液通過MicrofluidicsTM(MicrofluidicsCorporation，Nem-ton，MA)微流化器五次。將變得明亮的混懸液用ParticleSizingSystems(SantaBarbara，CA)SubPartideSizerMod-el370激發散射篩分儀篩分，發現其大小均小於1μm。已知流化的混懸液的微粒大小可保持穩定達六個月。實施例30將100mgDSPC(二硬脂醯磷脂醯膽鹼)和10ml0.9％NaCl加入50mlFalcon離心管(Becton—Dickinson，Lin-colnPark，NJ)中。在300—800p.s.i的氮氣壓下將混懸液擠壓通過1μm「NUCLEPORE」(Costar，Pleasanton，CA)聚碳酸酯膜。將所得混懸液用ParticleSizingSystems(SantaBarbara，CA)SubMicronParticleSizerModel370雷射散射篩分儀篩分。發現所有微粒均小於1μm。另外，在18,000p.s.i.的壓力下將相同量的DPPC混懸液通過MicrofluidicsTM(MicrofluidicsCorporation，New-ton，MA)微流化器(Microfluidizer)五次。將變得明亮的混懸液用SubMicronParticleSizerSystemModlel370雷射散射篩分儀篩分，發現其大小均小於1μm。實施例31將實施例29和30的先篩分的混懸液在BarnsteadModel(57835)壓熱器(Barnstead/Thernoyen，Dubuque，IA)中壓熱。與室溫平衡後，無菌的混懸液用於氣體的注入。實施體32將預先被擠壓通過1μm濾器並壓熱二十分鐘的10ml25mg/ml的1，2—二棕櫚磷脂醯膽鹼在0.9％NaCl中的溶液加入FalconSoml離心管(Becton—Dickinson，LincolnPark，NewJersey)中。脂質混懸液與室溫(大約20℃)平衡後，將此液體在VWRGenie—2(120V，o.Samp，60Hz.)(ScientificIndustries，Inc.，BohemiaNY)渦旋10分鐘，直到充氣脂質體的總體積至少為原來脂質水溶體積的二或三倍。管底的溶液幾乎完全沒有無水脂質微粒，得到大量含充氣脂質體的泡沫。因此，預先壓熱不影響脂質混懸液形成充氣脂質體的能力。壓熱不改變脂質體的大小，不降低脂質混懸液形成充分脂質體的能力。實施例33將預先被擠壓通過1μm濾器並壓熱二十分鐘的10ml25mg/ml的1，2—十棕櫚醯磷脂醯膽鹼在0.5％NaCl中的溶液加入Falcon50ml離心管中(Becton—Dickinson，LincolnPark，MJ)。脂質混懸液與室溫(大約20℃)平衡後，將離心管垂直放入VWRScientificOrbital搖動器(VWRScientific，Cerritos，CA)中以300r.p.m檔搖動30分鐘。在搖動器臺上攪拌得到充氣脂質體。實施例34將預先被擠壓通過1μm濾器並壓熱二十分鐘的10ml25mg/ml的1，2—二棕櫚醯磷醯膽鹼在0.9％NaCl中的溶液加入Falcon50ml離心管(Becton—Dickinson，Lincolnpark，NJ)中。脂質混懸液與室溫(大約20℃)平衡後，將離心管固定在1加侖空的家用噴塗器中，隨後放在手工噴塗混合器中做15分鐘的旋轉。渦旋混合後，取出離心管，顯然，充氣脂質體已形成。實施例35將預先被擠壓通過1μm濾器並壓熱二十分鐘的10ml25mg/ml的1，2—二棕櫚醯磷脂醯膽鹼在0.9％NaCl中的溶液加入Falcon離心管(Becton—Dickinson，LincolnPark，NJ)中。脂質類混懸液與室溫(大約20℃)平衡後，用手將離心管用力搖動十分鐘。搖動停止後，充氣脂質體形成。實施例36按實施例32所述製備充氣脂質體。將所得未過濾的脂質體倒入50ml注射器並壓過由「NUCLEPORE」(Costar，PleasantonCA)10μm濾器以150μm的間隔聯著8μm濾器的串聯過濾系統。另外，對分離的樣品使用相互重選10μm和8μm濾器。充氣脂質體在使其過濾速度為2.0ml/min的壓力下通過濾器。過濾過的充氣脂質體的體積為未過濾的體積的80—90％。以四種不同的方法篩分所得充氣脂質體以測量其大小分布。篩分是在ParticleSizingSystems(SantaBarbara，CA)Model770光學篩分儀，與UniversalImaging(Vniver-salImaging，WestChester，PA)製造的圖形處理軟體聯接的ZeissAxiplan光學顯微鏡和CoulterCounter(CoulterElectronicsLimited，Luton，Beds.，England)上完成的。如圖18所示，該充氣脂質體的大小比未過濾的脂質體更一致地分布在8—10μm。除這裡顯示和描述的以外的本發明的各種修改，對於本領域熟練的技術人員來說，可由上述顯而易見。這樣的修改也落入附加的權利要求的範圍。權利要求1.一種靶定位治療劑傳遞系統，該系統包含充氣微球體，其中所述氣微球體包含有治療化合物。2.權利要求1所述的治療劑傳遞系統，其中所述微球體含有相變溫度大於20℃的材料。3.權利要求1所述的治療劑傳遞系統，其中所述微球體的外直徑小於100μm。4.權利要求3所述的治療劑傳遞系統，其中所述微球體的外直徑小於10μm。5.權利要求1所述的治療劑傳遞系統，其中所述微球體含有類脂物質。6.權利要求1所述的治療劑傳遞系統，其中所述治療化合物包括遺傳物質。7.權利要求6所述的治療劑傳遞系統，其中所述遺傳物質為脫氧核糖核酸。8.權利要求6所述的治療劑傳遞系統，其中所述遺傳物質為核糖核酸。9.權利要求6所述的治療劑傳遞系統，該系統包含反義核糖核酸或反義脫氧核糖核酸。10.權利要求6所述的治療劑傳遞系統，其中所述微球體包含陽離子類脂物質。11.權利要求10所述的治療劑傳遞系統，其中所述陽離子類脂包括N-[1-(2，3-二油醯氧基)丙基]-N，N，N-三甲基氯化銨。12.權利要求5所述的治療劑傳遞系統，其中所述類脂選自二硬脂醯磷脂醯膽鹼，二棕櫚醯磷脂醯膽鹼和卵磷脂醯膽鹼。13.權利要求7所述的治療劑傳遞系統，其中所述治療化合物包括編碼有至少部分選自下述基因的脫氧核糖核酸人主要組織相容性基因，營養障礙，cysticFibrosis跨膜傳導調節因子，白介素-2和腫瘤壞死因子。14.權利要求9所述的治療劑傳遞系統，其中所述治療化合物包括能結合至少部分編碼有Ras的脫氧核苷酸的反義寡核苷酸。15.權利要求1所述的治療劑傳遞系統，其中所述治療劑包括單克隆抗體。16.權利要求15所述的治療劑傳遞系統，其中所述單克隆抗體能結合黑瘤抗原。17.權利要求1所述的治療劑傳遞系統，其中所述微球體包括其內部其本上無液體但其中封裝有治療化合物的充氣脂質體。18.權利要求1所述的治療劑傳遞系統，其中所述微球體包括通過真空乾燥氣體滴注法製備的且其中封裝有治療化合物的充氣脂質體。19.權利要求1所述的治療劑傳遞系統，其中所述微球體包括通過凝膠態振蕩氣體滴注法製備的充氣脂質體。20.控制釋放治療化合物到患者病灶區的方法，該方法包括(i)對患者給用包含治療化合物的充氣微球體；(ii)利用超聲波監控微球體以確定微球體在病灶區內的存在；和(iii)使用超聲波破裂微球體使治療化合物在病灶區釋出。21.權利要求20所述的方法，其中微球體經靜脈內給藥。22.權利要求20所述的方法，其中所述微球體由二棕櫚醯磷酯醯膽鹼組成。23.權利要求20所述的方法，其中所述微球體填充有選自空氣、氮氣二氧化碳、氧氣、氬氣、氙氣、氦氣以及氖氣的氣體。24.權利要求23所述的方法，其中所述微球體填充有氮氣。25.權利要求20所述的方法，其中所述類脂體懸浮在水介質中貯存。26.權利要求20所述的方法，其中所述微球體的反射係數在2dB和20dB之間。27.權利要求20所述的方法，其中所述微球體包括其內部基本上無液體但其中封裝有治療化合物的充氣脂質體。28.權利要求20所述的方法，其中所述微球體包括通過真空乾燥氣體滴注法製備的且其中封裝有治療化合物的充氣脂質體。29.權利要求20所述的方法，其中所述微球體包括通過凝膠振蕩氣體滴注法製備的充氣脂質體。30.製備包含充氣脂質體的靶定位治療劑傳遞系統的方法，所述方法包括在氣體存在下，於低於類脂的凝膠態至液晶態的相變溫度下振蕩包含有類脂和治療化合物的水溶液的步驟。31.如權利要求30所述的方法，其中所述振蕩步驟包括渦旋。32.如權利要求30所述的方法，該方法進一步包括過濾和加熱滅菌所述類脂水溶液的步驟。33.如權利要求30所述的方法，該方法進一步包括將所述充氣脂質體通過至少一個選定孔徑大小的濾器壓出。34.如權利要求33所述的方法，其中所述孔徑大小約為10μm或更小。35.如權利要求30所述的方法，進一步包括水合乾燥類脂形成包含類脂的水溶液。36.製備包含充氣脂質體的靶定位治療劑傳遞系統的方法，所述方法包括下列步驟在氣體存在下，於低於類脂的凝膠態至液晶態的相變溫度下振蕩包含類脂的水溶液形成充氣脂質體；以及向所述類脂體中加入治療化合物。37.如權利要求36所述的方法，其中所述振蕩步驟包括渦旋。38.如權利要求36所述的方法，該方法進一步包括過濾和加熱滅菌所述脂質水溶液步驟。39.如權利要求36所述的方法，該方法進一步包括通過至少一個選定孔徑大小的濾器壓出所述脂質體。40.如權利要求39所述的方法，其中所述孔徑大小約為10μm或更小。41.如權利要求36所述的方法，該方法進一步包括水合乾燥類脂形成包含類脂的水溶液。42.製備包含充氣脂質體的靶定位治療劑傳遞系統的方法，所述方法包括下列步驟在氣體存在下振蕩包含類脂和治療化合物的水溶液；以及分離所形成的充氣脂質體供治療使用。43.製備包含充氣脂質體的靶定位治療劑傳遞系統的方法，所述方法包括下列步驟在氣體存在下，於低於類脂的凝膠態至液晶態的相變溫度下振蕩包含類脂的水溶液形成充氣脂質體；加入治療化合物；以及分離所形成的充氣脂質體供治療使用。44.製備包含治療劑的充氣脂質體微球體的方法，該方法包括下列步驟a)將包含類脂和治療化合物的水溶液引入容器內；b)將氣體引入所述容器內；c)在所述氣體存在下，充分劇烈振蕩所述類脂水溶液以便滴注至少部分所述氣體到所述水溶液內，在所述水溶液的上面產生包含充氣脂質體的泡沫；以及d)從所述容器內分離至少部分所述包含充氣脂質體的泡沫。45.根據權利要求44的方法，該方法進一步包括冷卻所述水溶液的步驟。46.根據權利要求45的方法，其中所述冷卻所述水溶液的步驟包括在低於所述水溶液內的類脂的凝膠態至液晶態的相變溫度下冷卻所述水溶液。47.根據權利要求44的方法，該方法進一步包括對所述容器加壓。48.根據權利要求44的方法，進一步包括篩分所述充氣脂質體的步驟。49.根據權利要求48的方法，其中篩分所述充氣脂質體的步驟包括控制從所述容器中提取的所述充氣脂質體的大小。50.根據權利要求49的方法，其中從所述容器中提取的所述充氣脂質體的大小是通過濾器提取所述充脂質體進行控制。51.根據權利要求49的方法，其中從所述容器中提取的所述充氣脂質體的大小是通過在所述容器內部調整充氣脂質體的位置進行控制，其中所述容器是指提取充氣脂質體的容器。52.根據權利要求49的方法，其中從所述容器中提取的所述充氣脂質體的大小是在從所述容器中提取所述充氣脂質體在所述容器內的位置進行控制，其中所述容器是提取充氣脂質體的容器。53.根據權利要求48的方法，其中篩分所述充氣脂質體的步驟包括通過濾器壓出所述提取的充氣脂質體。54.根據權利要求48的方法，其中所述篩分所述充氣脂質體的步驟包括控制所述振蕩的強度。55.根據權利要求44的方法，該方法進一步包括將從所述容器中提取的所述充氣脂質體不需進一步處理直接注入到注射器內的步驟。56.根據權利要求44的方法，其中所述振蕩所述水溶液的步驟包括以每分鐘至少60次振蕩頻率振蕩的步驟。57.根據權利要求44的方法，其中所述的振蕩所述水溶液的步驟包括渦旋所述水溶液的步驟。58.根據權利要求44的方法，其中所述的振蕩所述水溶液的步驟包括振蕩所述容器的步驟。59.根據權利要求44的方法，其中所述的振蕩所述水溶液的步驟包括在少於30分鐘內充分劇烈振蕩所述水溶液產生所述包含充氣脂質體的泡沫。60.根據權利要求44的方法，其中所述的振蕩所述水溶液的步驟包括根據對所述包含充氣脂質體的泡沫的檢測，控制所述振蕩時間的步驟。61.根據權利要求60的方法，其中基於對包含充氣脂質體的泡沫的檢測控制所述振蕩時間的步驟包括振蕩至檢測到預定體積量所述泡沫為止。62.製備包含治療劑的充氣脂質體的設備，包括a)容器b)將包含脂質和治療化合物的水溶液導入到所述容器內的裝置；c)將氣體導入到所述容器內的裝置；和d)將所述氣體滴注到處於所述容器內的所述水溶液中，由此在所述容器內產生包含充氣脂質體的泡沫所用的裝置。63.根據權利要求62的設備，其中所述的導入類脂水溶液所用的裝置包括導入乾燥類脂的裝置，導入治療化合物的裝置，以及導入水介質到所述容器內所用的裝置。64.根據權利要求62的設備，其中所述的滴注所述氣體到所述水溶液內所用的裝置包括振蕩所述水溶液的裝置。65.根據權利要求64的設備，其中所述的振蕩所述水溶液的裝置包括振蕩所述容器的裝置。66.根據權利要求64的設備，其中所述的振蕩所述水溶液的裝置包括渦旋所述水溶液的裝置。67.根據權利要求62的設備，進一步包括冷卻所述水溶液的裝置。68.根據權利要求62的設備，進一步包括從所述容器提取所述泡沫的裝置。69.根據權利要求68的設備，其中所述的從所述容器內提取所述泡沫的裝置包括調整從所述容器中提取所述泡沫的垂直位置的裝置。70.根據權利要求68的設備，進一步包括通過濾器裝配流出所述所提取的充氣脂質體的裝置。71.根據權利要求70的設備，其中所述的濾器裝配包括間隔為預定距離的第一和第二濾器。72.根據權利要求62的設備，進一步包括篩分所述充氣脂質體的裝置。73.根據權利要求62的設備，進一步包括與所述容器流體相連的濾器。74.根據權利要求62的設備，進一步包括對所述容器進行加壓的裝置。75.根據權利要求62的設備，進一步包括將從所述容器中產生的所述充氣脂質體基本上不經進一步處理直接注入到注射器內的裝置。76.根據權利要求46的方法，該方法進一步包括對所述容器施加壓力的步驟。77.根據權利要求67的設備，其中所述的冷卻所述水溶液的裝置包括在低於所述水溶液內的類脂的凝膠態至液晶態的相變溫度下冷卻所述水溶液的裝置。78.根據權利要求77的設備，進一步包括對所述容器加壓的裝置。79.權利要求5的治療劑傳遞系統，其中所述類脂材料包括至少一種選自如下的類脂二棕櫚醯磷脂醯膽鹼，二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺，和磷脂酸，並且所述脂質體進一步包括聚乙二醇。80.權利要求5的治療劑傳遞系統，其中所述類脂材料包括至少一種二棕櫚醯類脂。81.權利要求1的治療劑傳遞系統，其中所述治療劑選自碳水化合物類、肽類、糖肽、糖脂和外源凝集素，所述的治療劑滲合在所述微球體的表面。82.權利要求44的方法，其中所述容器為注射器的套管，所述注射器還包含至少一個濾器和針頭；所述提取步驟包括通過從所述套管內，壓出所述脂質體通過所述濾器篩分所述充氣脂質體。83.權利要求44的方法，其中所述注射器包括注射器的套管。84.權利要求83的方法，其中所述注射器還包含至少一個濾器和針頭；所述提取步驟包括通過從所述套管內壓出所述脂質體通過所述濾器篩分所述充氣脂質體。85.權利要求53的方法，包括將所述脂質體吸入到注射器內，所述注射器包括套管，至少一個濾器和針頭；由此，當吸入所述脂質體到管內時，濾器篩分所述脂質體。86.權利要求44的方法，包括壓出所述脂質體到注射器的套管內，所述注射器還包括至少一個濾器和針頭，由此當從所述套管內壓出所述脂質體時，濾器篩分所述脂質體。87.權利要求44的方法，其中所述提取步驟包括將所述含充氣脂質體的泡沫吸入到注射器內，所述注射器包含管子，至少一個濾器和針頭；由此篩分所述脂質體。88.權利要求68的設備，其中所述容器為注射器的套管，所述注射器還包括至少一個濾器和針頭；所述提取裝置包括通過從所述套管內壓出所述脂質體通過所述濾器篩分所述充氣脂質體的裝置。89.權利要求68的設備，其中所述容器包括注射器的套管。90.權利要求89的設備，其中所述注射器還包括至少一個濾器和針頭；所述提取裝置包括通過從所述套管內壓出所述脂質體通過所述濾器篩分所述充氣脂質體的裝置。91.權利要求62的設備，其中所述容器為注射器的套管，所述注射器還包括至少一個濾器和針頭；當所述脂質體吸入到套管內時所述濾器為篩分所述脂質體的裝置。92.權利要求62的設備，其中所述容器注射器的套管，所述注射器還包括至少一個濾器和針頭；當從所述套管內壓出所述脂體時所述濾器為篩分所述脂質體的裝置。93.權利要求68的設備，其中所述提取裝置包括吸入所述包含充氣脂質體的泡沫到注射器內所用的裝置，所述注射器包括套管，至少一個濾器，以及針頭；由此篩分所述脂質體。94.靶定位治療劑傳遞設備，該設備包括具有套管，濾器裝配，和針頭的注射器，所述濾器裝配安裝在所述套管和針頭之間且包括至少一個濾器，所述套管內包含有包含充氣微球體的靶定位治療劑傳遞系統，其中所述充氣微球體包含有治療化合物。95.權利要求94的設備，其中所述濾器裝置為階式濾器裝置，該裝置包括具有正對針頭的面和正對套管的面的第一濾器，以及第二濾器，在所述第一濾器的正對針頭和正對管子的面上依次有第一和第二金屬網隔膜，在第二金屬網隔膜和第二濾器之間有O形環，並且其中所述第二濾器與第一濾器的正對管子的面的間隔約為150μm。96.權利要求95的設備，所述第一濾器和第二濾器都具有微孔，所述第二濾器的微孔大小約為10μm並且第一濾器的微孔大小約為8μm。97.權利要求94的設備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔的大小約30nm至20微米之間。98.權利要求94的設備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔的大小約為8μm。99.權利要求91的設備，該設備裝有第一濾器和第二濾器，所述第一個濾器和第二濾器具有微孔，所述第一濾器的微孔大小約為10μm並且第二濾器的微孔大小約為8μm。100.權利要求91的設備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔的大小約在30nm至20微米之間。101.權利要求91的設備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔的大小約為8μm。102.權利要求92的設備，該設備裝有第一個濾器和第二濾器，所述第一濾器和第二濾器均具有微孔，所述第一濾器的微孔大小約為10μm且第二濾器的微孔大小約為8μm。103.權利要求92的設備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔的大小在30nm至20微米之間。104.權利要求92的設備，其中所述濾器具有微孔，所述微孔的大小為8μm。105.權利要求20的方法，其中所述微球體通過噴霧器給藥。106.權利要求105的方法，其中所述微球體靶定位給藥到肺部。107.權利要求106的方法，其中所述治療劑為反義ras/p53。108.權利要求30的方法在高於環境壓力的壓力下進行。109.權利要求36的方法在高於環境壓力的壓力下進行。110.權利要求42的方法在高於環境壓力的壓力下進行。111.權利要求46的方法在高於環境壓力的壓力下進行。全文摘要本發明描述了包含充氣微球體的治療劑傳遞系統，其中所述微球體中包含有治療劑。還提供了這類微球體在治療藥物傳遞應用中的使用方法。優選包含其中封裝有藥物的充氣脂質體的藥物傳遞系統。還公開了製備這類脂質體的方法和設備以及在藥物傳遞應用中使用這類脂質體的方法。文檔編號A61K49/22GK1125394SQ94192404公開日1996年6月26日申請日期1994年5月1日優先權日1993年6月11日發明者艾文C·安格爾,託馬斯A·弗裡茲,特裡·馬斯安納格,瓦瑞德瑞簡·拉馬斯瓦米,大衛·耶柔赫爾,吳冠禮申請人:ImaRx藥物公司