新型調節劑及使用方法

2023-06-01 08:06:31

新型調節劑及使用方法
【專利摘要】本發明提供新型調節劑，包括抗體及其衍生物在內，以及使用這類調節劑治療過度增殖障礙的方法。
【專利說明】新型調節劑及使用方法
[0001]交叉參考的專利申請
[0002]本專利申請根據35U.S.C.119(e)要求於2010年9月3日提交的系列號為N0.61/380, 181的美國臨時專利申請的權益，將該專利申請以引用的方式全文併入本文。
【技術領域】
[0003]本申請案整體涉及組合物及其用於治療或改善過度增殖障礙、它們的擴張、再發、復發或轉移的方法。在一個廣泛的方面，本發明涉及CD46調節劑(包括CD46拮抗劑和融合構建體)用於治療或預防贅生性障礙的用途。在特別優選的實施例中，本發明提供抗CD46抗體用於對惡性腫瘤進行免疫治療的用途，包括降低腫瘤起始細胞(tumor initiatingcell)出現率。
[0004]發明背景
[0005]幹細胞和祖細胞分化及細胞增殖為一致發揮作用以支持器官發生期間的組織生長以及所有活生物體壽命期間大部分組織的細胞替換及修復的正常進程。分化和增殖決定通常受多種因素和信號控制，這些因素和信號達成平衡以維持細胞命運決定和組織架構。作為細胞對調節細胞分裂和組織成熟的微環境暗示作出響應的結果，正常組織架構得以維持。因此，細胞增殖和分化通常僅為替換受損或死亡細胞或為生長所需要而進行。遺憾的是，細胞增殖和/或分化的破壞可由多種因素引起，包括例如多種信號傳導化學物質不足或過多、存在微環境改變、基因突變或它們的某種組合。當正常細胞增殖和/或分化受到擾亂或某種破壞時，其可引起多種疾病或障礙，包括癌症。
[0006]常規的癌症治療包括化學療法、放射療法、手術、免疫療法(例如生物響應修飾劑、疫苗或靶向治療劑)或它們的組合。遺憾的是，太多癌症對這類常規治療無響應或響應極小，從而留給患者極少的選擇。例如，一些患者亞群表現出使他們無響應的基因突變(例如KRAS)，儘管某些療法具有普遍有效性。此外，取決於癌症的類型，一些可用的治療(如手術)可能並非可行的備選方案。當試圖護理先前已進行治療而隨後復發的患者時，當前的護理標準治療劑所固有的局限性尤為明顯。在這類情形中，失敗的治療方案和所導致的患者惡化可造成難治性腫瘤，其通常自身表現為更具侵襲性的疾病，最終證明不能治癒。儘管多年來癌症的診斷和治療已有很大改進，但由於現有療法無法預防復發、腫瘤再發和轉移，許多實體瘤的總存活率仍基本保持不變。因此，開發更多靶向的且有效的療法仍是一個挑戰。
[0007]—個有前景的研究領域涉及使用靶向治療劑來追逐似乎造成許多癌症的致瘤「種子」細胞。為此，現已知大部分實體組織含有組織固有的成人幹細胞群體，其產生佔該組織的大部分的分化細胞類型。在這些組織中產生的腫瘤類似地由也從幹細胞產生、但其總體增殖和組織化明顯不同的異源細胞群體組成。雖然日益認識到大多數腫瘤細胞具有有限的增殖能力，但少數癌細胞群體(通常稱為癌症幹細胞或CSc)具有專有的廣泛自我更新能力，由此能使它們具有腫瘤重新起始能力。更具體地講，癌症幹細胞假說認為，每一腫瘤中存在獨特的細胞子集(即CSC)(約0.1-10% )，其能夠無限自我更新並產生由於它們分化為腫瘤祖細胞且隨後分化為最終分化的腫瘤細胞而複製能力逐漸受限的腫瘤細胞。
[0008]近年來，已變得更加明顯的是，這些CSC (也稱為腫瘤永續細胞(tumorperpetuating cell)或TPC)可能對傳統的化學治療劑或放射具有更大的抗性，因而在護理標準臨床療法後繼續存在，隨後刺激復發性腫瘤、繼發性腫瘤和轉移瘤的生長。此外，越來越多的證據表明，調節器官發生和/或正常組織固有幹細胞自我更新的途徑在CSC中失調或改變，從而導致自我更新癌細胞不斷擴張和腫瘤形成。一般參見Al-Hajj等人，2004，PMID:15378087 ;和Dalerba等人，2007，PMID:17548814 ;將這些參考文獻的每一者以引用的方式全文併入本文。因此，傳統的以及較新的靶向治療方法的有效性顯然受抗性癌細胞的存在和/或出現所限制，這類抗性癌細胞即使面對這些各式各樣的治療方法仍能夠延續癌症。Huff 等人,European Journal of Cancer (《歐洲癌症雜誌》)42:1293-1297 (2006)以及Zhou等人,Nature Reviews Drug Discovery (《自然評論:藥物發現》)8:806-823 (2009),將這些參考文獻每一者以引用的方式全文併入本文。這些觀察結果由當患有實體腫瘤時傳統減積劑(debulking agent) 一直無法實質上提高患者存活率以及對腫瘤如何生長、復發和轉移的了解逐漸深入得到證實。因此，治療贅生性障礙的最新策略已認識到消除、消耗、沉默腫瘤永續細胞或促進其分化以降低腫瘤再發、轉移或患者復發的可能性的重要性。
[0009]開發這類策略的努力已整合了涉及非傳統異種移植(NTX)模型的最新工作，在所述模型中將原發性人實體腫瘤樣本專門植入免疫功能降低的小鼠中並進行繼代。這類技術證實存在具有產生異源腫瘤並無限刺激其生長的獨特能力的細胞亞群。如先前所假設，在NTX模型中進行的工作已證實，所鑑別的腫瘤細胞CSC亞群表現出對諸如化學療法和放射治療的減積方案具有更大的抗性，這潛在地解釋臨床響應率與總存活率之間的不一致。此外，在CSC研究中使用NTX模型已引起了藥物發現及候選藥物臨床前評價的根本變化，這個變化可產生對腫瘤再發和轉移具有重大影響從而改善患者存活率的CSC靶向療法。雖然已取得了進展，但與處理原發性和/或異種移植腫瘤組織相關的固有技術困難以及表徵CSC特徵及分化潛力的實驗平臺的缺乏構成重大的挑戰。因此，仍十分需要選擇性地靶向癌症幹細胞並開發可用於治療、預防和/或管理過度增殖障礙的診斷性、預防性或治療性化合物或方法。.
【發明內容】

[0010]這些及其他目標由本發明提供，本發明在廣泛意義上涉及可用於治療⑶46相關障礙(例如過度增殖障礙或贅生性障礙)的方法、化合物、組合物和製品。為此，本發明提供有效靶向癌症幹細胞且可用於治療患有各種惡性腫瘤的患者的新型CD46調節劑。在某些實施例中，所公開的CD46調節劑可包含任何識別CD46多肽、其配體或其基因、與它們競爭、對它們進行激動、拮抗、與它們相互作用、與它們結合或與它們締合，並調節、調整、改動、改變或改善CD46蛋白對一個或多個生理學途徑的影響的化合物。在本發明的所選的實施例中，CD46調節劑可包含CD46自身或其片段，所述CD46自身或其片段呈分離形式或與其他部分融合或締合(例如Fc-CD46、PEG-CD46或與靶向部分締合的CD46)。在其他所選的實施例中，CD46調節劑可包含CD46拮抗劑，出於本申請案的目的，CD46拮抗劑應視為意指任何識別CD46、與其競爭、與其相互作用、與其結合或與其締合，並中和、消除、減少、敏化、重新程序化贅生性細胞(包括腫瘤起始細胞)、抑制或控制所述細胞生長的構建體或化合物。在優選的實施例中，本發明的CD46調節劑包含抗CD46抗體或其片段或衍生物，意外地發現其可沉默、中和、減少、降低、消耗、緩和、減弱、重新程序化、消除腫瘤起始細胞或者抑制其繁殖、維持、擴張、增殖贅生性細胞或以別的方式促進贅生性細胞存活、再發、再生和/或轉移的能力。
[0011]在一個實施例中，⑶46調節劑可包含人源化抗體，其中所述抗體包含SEQ ID NO:199中所示的重鏈可變區胺基酸序列和SEQ ID NO:201中所示的輕鏈可變區胺基酸序列。在其他優選的實施例中，本發明將為包含hSCl.N71抗體和可藥用載體的組合物的形式。在另一個優選的實施例中，CD46調節劑可包含人源化抗體，其中所述抗體包含SEQ ID NO:203中所示的重鏈可變區胺基酸序列和SEQ ID NO:205中所示的輕鏈可變區胺基酸序列。在其他優選的實施例中，本發明將為包含hSCl.N149抗體和可藥用載體的組合物的形式。
[0012]在某些其他實施例中，本發明將包含在施用給受試者後降低腫瘤起始細胞出現率的CD46調節劑。優選地，出現率的降低將使用體外或體內有限稀釋分析來測定。在特別優選的實施例中，該分析可用體外有限稀釋分析來進行，其包括將活人腫瘤細胞移植進免疫功能降低的小鼠中。或者，有限稀釋分析可使用體外限制稀釋分析來進行，其包括將活人腫瘤細胞限制稀釋沉積於體外集落支持條件中。在任一種情況下，出現率降低的分析、計算或定量將優選包括使用泊松分布統計來提供精確計算。應當理解，雖然這類定量方法是優選的，但諸如流式細胞術或免疫組織化學之類的其他勞動密集度較小的方法也可用於提供所需的值，因此將它們明確地設想為處於本發明的範圍內。在這類情況下，出現率的降低可使用流式細胞檢測分析或對已知用於富集腫瘤起始細胞的腫瘤細胞表面標記物的免疫組織化學檢測來測定。
[0013]因此，在本發明的另一個優選的實施例中，包含治療CD46相關障礙的方法，該方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的CD46調節劑，由此降低腫瘤起始細胞的出現率。此外，腫瘤起始細胞出現率的降低將優選使用體外或體內有限稀釋分析來測定。
[0014]就此而言，應當理解本發明至少部分基於如下發現:⑶46多肽與涉及多種瘤形成(neoplasia)的病因的腫瘤 永續細胞(即癌症幹細胞)締合。更具體地講，本專利申請意外地證明，施用多種例示性CD46調節劑可減少、抑制或消除腫瘤起始細胞的致瘤信號傳導(即降低腫瘤起始細胞出現率)。這種信號傳導減少，無論是通過減少或消除或重新程序化或沉默腫瘤起始細胞還是通過修飾腫瘤細胞形態(例如，誘導的分化、小生境破壞)實現，均繼而通過抑制致瘤、腫瘤維持、擴張和/或轉移和再發而更有效地治療CD46相關障礙。在其他實施例中，所公開的調節劑可幹擾、抑制或以其他方式延緩CD46介導的可刺激腫瘤生長的信號傳導。另外，如下文更詳細論述的，CD46多肽密切涉及補體途徑。使用本文所述的新型CD46調節劑幹預該途徑，可通過不止一種機制(即腫瘤起始細胞減少和補體破壞)進一步改善所述障礙以提供附加效應或協同增強效應。
[0015]因此，本發明的另一個優選的實施例包括治療有需要的受試者中的CD46介導的障礙的方法，所述方法包括向該受試者施用CD46調節劑的步驟。在尤其優選的實施例中，⑶46調節劑將與抗癌劑締合(例如綴合)。此外，受試者腫瘤組織與正常的相鄰組織相比較，無論是表現出CD46水平升高還是CD46水平降低或受到抑制，都可實現這種破壞和附帶有益效果。
[0016]還應當理解，可以對本發明的⑶46調節劑進行加工和選擇以與⑶46分子的單種異型物(isoform)或所選的一些異型物(即剪接變體)反應，或者相反，可包括泛CD46調節劑，所述泛CD46調節劑可與CD46異型物中的一些或全部反應或締合。更具體地講，如本文所公開的以及下面實例中所述的，可生成優選的調節劑如抗體並對其進行選擇，使得它們可與單種剪接變體展現的結構域(例如，在特定的外顯子接合點處)反應，或與多種或全部⑶46異型物中保守的結構域(例如外顯子1-6)反應。這對於本發明是重要的，因為如以下實例5中所示，某些剪接變體已被發現優選在TIC上表達，且可充當可提供致瘤細胞出現率的選擇性降低和/或癌症幹細胞群體的消耗的治療標靶。
[0017]因此，在一個所選的實施例中，本發明包括泛CD46調節劑。在其他所選的實施例中，本發明包括可免疫特異性地與一種或多種剪接變體締合的CD46調節劑。優選的是，所述剪接變體可選自⑶46D、⑶46F和⑶46J。因此，在另外其他實施例中，本發明包括治療有需要的受試者的方法，該方法包括施用治療有效量的泛CD46調節劑。再其他的實施例包括治療有需要的受試者的方法，該方法包括施用治療有效量的可與一或多種剪接變體免疫特異性締合的CD46調節劑。
[0018]本發明的其他方面利用到所公開的調節劑潛在破壞多個致癌存活途徑而同時沉默腫瘤起始細胞的能力。這類多活性CD46調節劑(例如CD46拮抗劑)當與護理標準抗癌劑或減積劑組合使用時可證明尤其有效。另外，根據本發明教導，可組合使用兩種或更多種CD46拮抗劑(例如特異性結合CD46上的兩個分立表位的抗體)。此外，如下文相當詳細論述的，本發明的CD46調節劑可在綴合或未綴合狀態下且任選作為致敏劑與多種化學或生物學抗癌劑組合使用。
[0019]因此，本發明的另一優選的實施例包括敏化受試者的腫瘤以用抗癌劑進行治療的方法，該方法包括向該受試者施用CD46調節劑的步驟。在本發明的一個特別優選的方面，CD46調節劑將特異性地引起腫瘤起始細胞出現率降低，如使用體外或體內有限稀釋分析所測定的。
[0020]類似地，因為本發明的化合物可通過多種生理學機制發揮治療有益效果，所以本發明還涉及所選的經特定加工以利用某些細胞過程的效應劑或調節劑。例如，在某些實施例中，可對優選的調節劑進行工程改造以與腫瘤起始細胞表面上或附近的CD46締合併刺激受試者的免疫應答。在其它實施例中，調節劑可包含針對這樣的表位的抗體，該表位可中和CD46活性並增加腫瘤微環境中可影響信號傳導的CD46底物的濃度。在另外其他實施例中，所公開的調節劑可通過消耗或消除CD46相關細胞而起作用。因此，重要的是認識到，本發明並不限於任何特定作用模式，而是涵蓋任何能實現所需結果的方法或CD46調節劑。
[0021]在該框架內，所公開的實施例的優選實施例是涉及治療患有贅生性障礙的受試者的方法，該方法包括施用治療有效量的至少一種中和性CD46調節劑的步驟。
[0022]其他實施例涉及治療患有CD46相關障礙的受試者的方法，該方法包括施用治療有效量的至少一種消耗性CD46調節劑的步驟。
[0023]在又另一個實施例中，本發明提供維持療法的方法，其中在設計用於移除至少一部分腫瘤塊的初始程序(例如化療、放療或手術)後施用所公開的效應劑一段時間。這類治療方案可施用數周的時間、數月的時間或甚至數年的時間，其中CD46調節劑可預防性地起作用以抑制轉移和/或腫瘤再發。在另外其他實施例中，所公開的調節劑可與已知的減積方案配合施用以預防或延緩轉移。[0024]除上述治療性用途外，還應當理解本發明的調節劑可用於診斷CD46相關障礙，尤其是過度增殖障礙。因此，一個優選的實施例包括診斷有需要的受試者中的過度增殖障礙的方法，該方法包括如下步驟:
[0025]a.從所述受試者獲得組織樣品；
[0026]b.使該組織樣品與至少一種⑶46調節劑接觸；以及
[0027]c.檢測或定量與樣品締合的⑶46調節劑。
[0028]結合本申請案可容易領悟這類方法，且容易使用諸如自動讀板儀、專用報告系統等之類的一般可用的商業技術來進行這類方法。在其他優選的實施例中，該檢測或定量步驟將包括腫瘤起始細胞出現率的降低以及對其的檢測。此外，有限稀釋分析可如先前上文所提及進行，且將優選使用泊松分布統計來提供關於出現率降低的精確計算。
[0029]類似地，本發明還提供可用於診斷和監測諸如癌症之類的⑶46相關障礙的試劑盒。為此，本發明優選提供可用於診斷或治療CD46相關障礙的製品，該製品包括含有CD46調節劑的容器和關於使用所述CD46調節劑治療或診斷該CD46相關障礙的說明書。
[0030]本發明的其他優選的實施例也利用所公開的調節劑的性質，作為可用於通過諸如突光激活細胞分選(FACS)或雷射介導的分區(laser mediated sectioning)之類的方法對腫瘤起始細胞的群體或亞群進行鑑別、分離、分區或富集的手段。
[0031]因此，本發明的另一個優選的實施例涉及對腫瘤起始細胞群體進行鑑別、分離、分區或富集的方法，該方法包括使所述腫瘤起始細胞與CD46調節劑接觸的步驟。
[0032]上文為概述，因此必然簡化、概括和省略細節；因此，本領域技術人員應了解，該概述僅是示例性的而並非意圖以任何方式限制。本文所述的方法、組合物和/或裝置和/或其他主體的其他方面、特徵和 優點將在本文所述的教導中變得顯而易見。提供該概述來以簡化形式介紹下文在「【具體實施方式】」中進一步描述的一系列概念。該概述既無意於確定要求保護的主題的關鍵特徵或基本特徵，也無意於用於輔助判定要求保護的主題的範圍。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0033]圖1A和IB分別繪出了來自直腸結腸癌患者、乳腺癌患者或非小細胞肺癌患者的實體瘤樣本上的CD46表達的流式細胞術數據(圖1A)和來自結腸直腸癌細胞、胰腺癌細胞、乳腺癌細胞、非小細胞肺癌細胞、骨髓癌細胞、卵巢癌細胞和頭頸部癌細胞的源於患者的非傳統異種移植腫瘤樣本上的CD46表達的流式細胞術數據(圖1B)。
[0034]圖2提供了散點圖，示出了使用細胞表面標記⑶46、上皮表面抗原(ESA)、⑶66c和CD324對腫瘤起始細胞的流式細胞術富集；
[0035]圖3A-C示出了流式細胞術和螢光激活細胞分選(FACS)數據，通過在非傳統異種移植模型中進行系列繼代證明了 CD46hi細胞的腫瘤永續能力；
[0036]圖4A-C圖示了伊立替康對CD46hi腫瘤永續細胞在結腸直腸癌中的出現率的影響；
[0037]圖5A-C示出了結腸直腸癌腫瘤永續細胞、腫瘤祖細胞和非致瘤細胞中的CD46剪接變體異型物表達；
[0038]圖6示出了定量實時PCR數據，其說明了本體結腸直腸腫瘤細胞群體中的CD46外顯子用法；[0039]圖7A-C是分別顯示結腸直腸正常相鄰細胞和腫瘤細胞中的CD46蛋白的表達(圖7A)、神經內分泌亞型和非神經內分泌亞型的胰腺正常相鄰細胞和腫瘤細胞中的⑶46蛋白的表達(圖7B)以及卵巢正常相鄰細胞和腫瘤細胞中的CD46蛋白的表達(圖7C);
[0040]圖8A-C是示出了含有外顯子10的⑶46剪接變體分別在如下細胞中的表達的示意圖:結腸直腸正常相鄰細胞和腫瘤細胞(圖8A)、神經內分泌亞型和非神經內分泌亞型的胰腺正常相鄰細胞和腫瘤細胞(圖8B)以及卵巢正常相鄰細胞和腫瘤細胞(圖8C);
[0041]圖9A和9B示意圖說明了⑶46抗體內化進K562細胞中(圖9A)並通過能夠內化與阜草素毒素綴合的抗小鼠二抗的小鼠單克隆抗CD46抗體殺滅K562細胞(圖9B);
[0042]圖10A-R提供了十八種分立的抗CD46抗體的重鏈和輕鏈可變區的核酸和胺基酸序列，所述抗CD46抗體如本文實例中所描述進行分離和克隆；
[0043]圖1lA和IlB是表格形式的圖示，分別示出了如本文實例中描述分離和克隆的十八種分立CD46調節劑的遺傳排列方式及如Chothia等人定義的重鏈和輕鏈CDR序列；
[0044]圖12A 和 12B 圖示了 ELISA 數據，顯示了抗 CD46 抗體 SC1.N122 和 SC1.N29 與 CD46的各區域的結合(圖12A)以及抗⑶46抗體SC1.N29與各⑶46外顯子的結合(圖12B)；
[0045]圖13A和13B分別示出了 hSCl.N71的重鏈可變區的核酸和胺基酸序列(SEQ IDNO:198和SEQ ID NO:199)和輕鏈可變區的核酸和胺基酸序列(SEQ ID NO:200和SEQ IDNO:201)(圖13A)以及hSCl.N149的重鏈可變區的核酸和胺基酸序列(SEQ ID NO:202和SEQ ID NO:203)和輕鏈可變區的核酸和胺基酸序列(SEQ ID NO:204和SEQ ID NO:205)，其中如Kabat等人定義的CDR序列標有下劃線；
[0046]圖14以表格形式提供了十二種分立⑶46調節劑的免疫化學特性；
[0047]圖15A-15C示出了鼠抗體SC1.N71 (圖15A)和人源化抗體衍生物hSCl.N71 (圖15B)對四個不同濃度的抗原的親和力測量結果，並提供了表格形式的總結，包括測量值(圖 15C)；
[0048]圖16A和16B分別示出了使用所公開的調節劑產生的標準曲線和在從健康受試者和患有各種瘤形成的患者獲得的樣品中測量並從標準曲線外推得到的可溶性CD46的血漿濃度；
[0049]圖17是描繪所公開的CD46調節劑充當靶向劑的能力的圖示，其通過使用與皂草素綴合的鏈黴親和素介導細胞死亡。
[0050]圖18A和18B示出了所公開的⑶46調節劑與細胞表面上表達的⑶46締合的能力(圖18A)以及介導0046*^細胞的細胞死亡的能力，同時慢病毒誘導的CD46_A°相對免疫(圖18B)；
[0051]圖19A和19B顯示本發明的⑶46調節劑可介導鏈黴親和素-ZAP綴合物的受體依賴的攝入和內化，其中在不存在調節劑時觀察到相對低的殺滅(圖19A)，並且顯示所公開的調節劑有效介導在不同腫瘤類型中的殺滅(圖19B);以及
[0052]圖20A和20B示出了 CD46調節劑使癌症幹細胞化學致敏的能力，其中圖20A示出了所公開的調節劑與對照相比的效果，圖20B證明與單獨的化學療法相比CD46調節劑可延緩腫瘤再發以及延長無進展生存期。
【具體實施方式】[0053]1.引言
[0054]在廣泛意義上，本發明的實施例涉及新型CD46調節劑及其在治療、管理、改善過度增殖障礙(包括癌症)或預防過度增殖障礙(包括癌症)的發生中的用途。不希望受任何特定理論的束縛，已發現所公開的調節劑可有效減少或延緩腫瘤生長以及消除或中和致瘤細胞以及改變這類細胞對抗癌劑的敏感性。另外，還令人驚奇地發現，所選的腫瘤永續細胞(TPC)與稱為⑶46的蛋白質之間還存在迄今未知的表型關聯。就這一點而言，已經發現，當與正常組織比較時以及當與一起構成實體瘤的大部分的腫瘤祖細胞(TProg)和非致瘤(NTG)細胞比較時，所選的TPC (即癌症幹細胞或CSc)可表達升高水平的CD46，包括特異性剪接變體。因而，在所選的實施例中，⑶46包含腫瘤相關標記物(或抗原)且已發現可提供這樣的物質，該物質能有效用於檢測、敏化和/或抑制TPC以及由與所選的細胞的表面相關的或腫瘤微環境中的該蛋白質水平升高所引起的相關瘤形成。更具體地講，甚至更出人意料地，鑑於⑶46被明顯分泌(至少在一定程度上)，已進一步發現⑶46調節劑(包括FC-CD46構建體和免疫反應性拮抗劑(如該蛋白質的抗體))可用於在患者中消耗、敏化、消除、減少、重新程序化這些腫瘤永續細胞、促進其分化或以別的方式阻止或限制其擴散和/或繼續刺激腫瘤生長或再發的能力。
[0055]在優選的實施例中，本發明的CD46調節劑將包含核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、肽或多肽。如上文提及和下文更詳細論述的，本文公開的所選的實施例將包含CD46的綴合或非綴合形式的抗體。CD46調節劑的其他實施例將優選包含CD46或其形式、變體、衍生物或片段，包括例如⑶46融合構建體(如⑶46-Fc、⑶46-靶向部分等)或⑶46-綴合物(如CD46-PEG、CD46-細胞毒性劑等)。在另外其他實施例中，調節劑可在遺傳水平上起作用且可包含如反義構建體、siRNA、miRNA等之類的化合物。上述⑶46調節劑可通過競爭機理、激動或拮抗所選的途徑或者消除或消耗特定細胞(包括非TPC支持細胞)來削弱腫瘤永續細胞的生長、增殖或存活和/或相關瘤形成，這例如取決於CD46的形式或者給藥形式(dosing)及遞送方法。
[0056]根據這些發現，本領.域的技術人員將理解，本發明特別優選的實施例很大程度上涉及CD46調節劑及它們在降低腫瘤起始細胞出現率中的用途。如本文中將充分論述的，與本發明相容的CD46調節劑廣泛包括任何與CD46締合、結合、複合或以別的方式反應或競爭且任選地導致腫瘤永續細胞出現率降低的化合物。本文所公開的例示性調節劑包含核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、肽或多肽。在某些優選的實施例中，所選的調節劑將包含CD46的抗體或其免疫反應性片段或衍生物。這種抗體可以是本質上是拮抗性的或激動性的。在其他優選的實施例中，與本發明相容的效應劑將包含CD46構建體，該構建體包含CD46本身或其反應性片段。應了解，這類⑶46構建體可包含融合蛋白且可包括來自其他多肽(例如免疫球蛋白、釘肽(stapled peptide)或生物應答修飾劑)的反應性結構域。在另外其他的優選方面，CD46效應劑或調節劑將包含在基因組水平上發揮所需效應的核酸組件。與本發明教導相容的另外其他調節劑將在下文詳細論述。
[0057]在一個相關方面，下文的論述是關於⑶46調節劑、⑶46拮抗劑和抗⑶46抗體。雖然下文提供每個術語的更詳細定義，但應當理解，這些術語對於本公開的目的在很大程度上是可互換的，而不應當狹義地解釋，除非上下文中指明。例如，如果對⑶46拮抗劑表達一種看法，則其也適用於本發明的那些恰巧是拮抗性的抗體。相似地，術語⑶46調節劑明確包括所公開的CD46拮抗劑和抗CD46抗體，且對後者的提及也適用於調節劑，除非上下文排除這個適用。
[0058]I1.CD46
[0059]⑶46也稱為膜輔因子蛋白或MCP。它是廣泛表達的I型跨膜蛋白，但由於選擇性外顯子剪接和糖基化而具有多種異型物。最近Karosi等人，Laryngoscope (《喉鏡》)118:1669-1676 (2008年9月)報導檢測了該分子的十四種異型物，將該文獻以引用的方式全文併入本文。從位於染色體lq32的單個基因轉錄出mRNA並經歷廣泛的選擇性剪接而產生編碼多種蛋白質異型物的多個轉錄物。構成該基因的14個外顯子中，看起來外顯子1-6是所有CD46蛋白異型物中保守的，而外顯子7至9編碼以不同程度被利用的富含絲氨酸-蘇氨酸-脯氨酸(「STP」)的區域，從而引起這些蛋白質異型物中的主要超可變性。外顯子11和12編碼CD46的跨膜區，而外顯子13和14編碼該蛋白質的胞質內尾部。最長的mRNA轉錄物即變體A(NM_002389)含有來自該基因全部十四個外顯子的序列。據信外顯子7、8、9和13的可變剪接產生CD46的十四種異型物中的大多數，其中主要觀察到的66和56kDa的蛋白質異型物因選擇性包括或不包括外顯子8而形成。選擇性地包括/不包括外顯子13可導致該分子的胞質內尾部的編碼序列的改變，這提示這些改變會影響該蛋白質的亞細胞運輸、穩定性以及信號傳導性質。
[0060]如Karosi等人中所述，CD46mRNA異型物D包含CD46基因的外顯子1_6、8_12和14 (等同於序列NM_153826，其編碼蛋白質NP_722548)，異型物F包含外顯子1_6、9_12和14 (等同於序列NM_172353，其編碼NP_758863)，異型物J包含外顯子1_6、8、10-12和14 (等同於序列NM_172356，其編碼NP_758866)。更具體地講，⑶46分子包含四個N末端短共有重複序列(SCR)模塊(「Sushi」結構域:4個半胱氨酸，呈1-3，2-4鍵拓撲結構)，其中這些SCR結構域由該基因的前六 個外顯子編碼。SCR2、3和4模塊具有C3b/C4b結合和調節活性(下文中論述)，而SCRl模塊和SCR4末端序列對於補體調節功能不是必需的。由選擇性利用的外顯子7-9以及外顯子10編碼的近膜的細胞外序列被大量糖基化，主要通過O-連接碳水化合物糖基化。
[0061]為了本公開的目的，術語「CD46」應視為意指上文剛說明的任何蛋白質，包括任何剪接變體或其免疫反應性片段以及任何編碼這類蛋白質、剪接變體或片段的核酸序列，除非上下文另外指出。因而，如本文中所論述的，「CD46標記物」應廣泛地包括任何構成或編碼CD46的可檢測的蛋白質、肽或核酸序列。在優選的實施例中，CD46標記物將包含全長糖蛋白(變體a)或其剪接變體或免疫反應性片段。甚至更優選地，⑶46蛋白標記物將存在於所選的致瘤細胞群體的細胞表面。在其他優選的實施例中，CD46標記物將包含編碼全長CD46、其剪接變體或片段的核酸序列(如DNA或mRNa)。
[0062]就上述變體而言，還應當理解，可以對本發明的⑶46調節劑進行加工和選擇以與CD46分子的單種異型物(即剪接變體)或所選的一些異型物反應，或者相反，可包括泛⑶46調節劑，所述泛⑶46調節劑可與⑶46異型物中的一些或全部反應或締合。更具體地講，如本文所公開的以及下面實例中所述的，可生成所公開的調節劑如抗體並對其進行選擇，使得它們與單種剪接變體展現的結構域(例如，在特定的外顯子接合點處)反應或與多種或全部⑶46異型物中保守的結構域(例如外顯子1-6)反應。這對於本發明是重要的，因為如以下實例5中所示，某些剪接變體已被發現優選在TIC上表達，且可充當可提供致瘤細胞出現率的選擇性降低和/或癌症幹細胞群體的消耗的治療標靶。
[0063]在任何情況下，已將多種生物學功能歸因於CD46，其中許多涉及免疫系統的調節。CD46的一個主要免疫調節功能涉及調節補體以保護宿主細胞免受作為高等真核生物先天性免疫應答的一部分的補體蛋白的損害。具體地講，CD46是因子I所介導的補體蛋白C3b和C4b的蛋白水解切割的輔因子。已證實其可活化C3轉化酶(將C3b切割成無活性片段的分子)，從而防止不當的補體活化。除了其在先天性免疫中的作用外，CD46還調節獲得性免疫應答。通過CD46進行的信號傳導會引起T細胞的增殖，以及向特定類別的調節性T細胞(稱為Trl)的分化，以產生大量的IL-10 (—種抗炎細胞因子)為特徵。此外，由於精子表達高水平的CD46，已提出CD46參與繁殖，也許是參與精子與卵母細胞的融合。CD46還似乎在胎盤中高度表達，且可起到保護胎兒免受母體的免疫排斥的作用。
[0064]還進一步證實⑶46在大多數正常人細胞上遍在表達，紅細胞例外。例如，有報導稱在上皮細胞中強表達，在淋巴細胞和內皮細胞中適度表達，在其他細胞如破骨細胞、骨細胞、間質細胞和肌肉細胞中弱表達。由於其普遍表達,多種人病原體已進化出策略來利用CD46作為受體或共受體用於與細胞結合作為感染的前體。這些病原體包括人皰疫病毒6、麻疹病毒、腺病毒的一些血清型和來自奈瑟氏菌屬(Neisseria)家族的共生菌的致病種。某些逆轉錄病毒據信可通過在其表面上帶有CD46模擬物來規避補體介導的免疫(Stoiber等人，Molecular Immunology (《分子免疫學》)2005 ;Saifuddin 等人,J Gen Virol (《普通病毒學雜誌》)，1997) ο
[0065]還已將⑶46與多種疾病相關聯，包括自體免疫障礙如多發性硬化症(MS)。MS是一種慢性炎性疾病，其中自體免疫應答攻擊隔離神經元軸突的髓鞘蛋白，導致髓鞘脫失和隨後這些細胞傳導受損，結果是神經紊亂和缺陷。MS會導致腦和脊髓的白質的結疤(硬化)。它是一種複雜的疾病，病因錯綜複雜，由免疫、遺傳和環境因素構成，儘管已探索了數種機理，但對MS發病機制的理解還遠未完成。由於CD46在調節T細胞免疫和炎症中的作用，因此據信其參與MS發病機制。更具體地講，最近的數據已證實，CD46在多發性硬化症中欠缺或受損，在這些患者中IL-1O的產生受到嚴重削弱。這個L-1O的產生的缺少可能參與在多發性硬化症患者中觀察到的炎症(A.L.Astier, Immunology (《免疫學》)，2008年6月；124⑵:149-154，將其以引用的方式併入本文)。在一些情形中，有可能是自身反應性抗CD46抗體在損害該分子的正常功能。在這些抗體充當調節劑(如本發明描述的那些調節劑)的意義上，它們在本發明的範圍內並因此可以使用。
[0066]⑶46除了存在於正常細胞上以外，其在某些癌症中的表達水平可能升高。例如，已報導在如下癌症中CD46表達升高:乳腺癌(Thorsteinsson等人，APMIS106 =869-78(1998)；Hofman 等人,Breast Cancer Res.Treat.(《乳腺的研究和治療》)32:213-9 (1994));結腸/結腸直腸癌(Andrew等人，Cancer Res.(《癌症研究》)50:5225-30 (1990) ;Koretz等人，Br.J.Cancer (《英國癌症雜誌》)68:926-31 (1993) ; Juhl 等人，J.Surg.0ncol.(《外科腫瘤學雜誌》)64:222-30 (1997) ;Bjorge 等人，Cancer Immunol.1mmunother.(《癌症免疫學及免疫療法》)42:185-92(1996));肺癌(Varsano等人，Clin.Exp.1mmunol.(《臨床和實驗免疫學》)113:173-82(1998) ;Varsano 等人，Am.J.Respir.Cell.Mol.Bio1.(《美國呼吸系統細胞和分子生物學雜誌》)19:522-9(1998));卵巢癌(Bjorge等人，Int.J.Cancer (《國際癌症雜誌》)70:14-25(1997));腎癌(Blok等人，Lab.1nvest.(《實驗室研究》)80:335-44(2000) ;Gorter 等人，Lab.1nvest.(《實驗室研究》)74:1039-49 (1996))；胰腺癌(Juhl等人，J.Surg.0ncol.(《外科腫瘤學雜誌》)64:222-30 (1997));和前列腺癌(Jarvis等人，J.Allergy Clin.1mmunol (《過敏症與臨床免疫學雜誌》)99 (N0.1,PART2):S215(1997) ；Liu, Cancer Res.(《癌症研究》)60:3429-3434 (2000));還可參見 PCTW002/18948 ；PCT W001/88537。
[0067]自從對該蛋白首次描述時，就已生產了⑶46的多種抗體。這些抗體包括:E4.3 (CD46-SCR1), Sparrow 等人，Hum Tmmunol (《人類免疫學》)1983 7:I ;M177(CD46-SCR2)，Seya 等人，J Immunol (《免疫學雜誌》)1990 145:238;J4/48 (CD46-SCR1)，Pesando 等人，J Immunol (《免疫學雜誌》)1986 137:3689;GB24 (CD46-SCR3/4), Hsi 等人，Am J Reprod Tmmunol Microbiol (《美國生殖免疫學和微生物學雜誌》)198818:21 ；H316 (CD46-SCR1)，Stem 等人，J Immunol (《免疫學雜誌》)1986137:1604 ；MH61 (CD46-SCR3)，Okabe 等人，Fertil Steril (《生育與不育》)199054:1121 ；TRA-2-10(CD46-SCRl)，Cho 等人，Clin Exp Immunol (《臨床和實驗免疫學》)1991 83:257;MCI20.6(CD46-SCR1)，Naniche 等人，J Virol(《病毒學雜誌》)199367:6025 ; 158.2A5，Vilella等人；197.2B1, Vilella等人；和MPA7，美國專利N0.7，744，878，將上述參考文獻每一者以引用方式併入本文。一般參見Loveland等人，Prot Rev,網址為:http://prow.nc1.nih.gov/guide/2027814670g.htm。對於上述列表中的許多抗體,提供了反應性短共同重複結構域(SCR)。
[0068]II1.腫瘤起始細朐
[0069]與現有技術的任何教導形成對比的是，本發明提供尤其可用於靶向腫瘤起始細胞以及特別是腫瘤永續細胞，從而有利於治療、管理或預防贅生性障礙的CD46調節劑。更具體而言，如先前所指出，已意外地發現，特定腫瘤細胞亞群表達CD46且很可能修改對癌症幹細胞自我更新及細胞存活很重要的形態發生素信號傳導的局部協調(localizedcoordination)。因此,在優選.的實施例中，根據本發明的教導⑶46的調節劑可用於降低腫瘤起始細胞出現率，從而有利於治療或管理過度增殖性疾病。
[0070]如本文中所使用，術語腫瘤起始細胞(TIC)涵蓋腫瘤永續細胞(TPC ;即癌症幹細胞或CSC)與高度增殖性腫瘤祖細胞(稱為TProg) 二者，其通常一起構成本體腫瘤或腫塊的獨特亞群(即0.1-40% )。出於本發明的目的，術語腫瘤永續細胞和癌症幹細胞是等同的且可在本文中互換使用。另一方面，TPC與TProg不同，因為其可完全重演存在於腫瘤內的腫瘤細胞的組成，且如通過連續移植(經由小鼠繼代兩次或兩次以上)低數目的分離細胞所證實的，具有無限制自我更新能力。如下文將更詳細論述的，使用適當細胞表面標記物的螢光活化細胞分選(FACS)為一種分離高度富集細胞亞群(> 99.5%純度)的可靠方法，其至少部分歸因於其區分單細胞與細胞團(即成對細胞等)的能力。使用這類技術已證實，當將低細胞數目的高度純化TProg細胞移植進免疫功能降低小鼠中時，其可刺激初次移植物中腫瘤生長。然而,不同於經純化的TPC亞群，TProg產生的腫瘤並不完全反映親本腫瘤的表型細胞異質性且在重新起始後續移植物中的連續致瘤方面明確無效。相比的下，TPC亞群完全重構親本腫瘤的細胞異質性且當連續分離和移植時可有效起始腫瘤。因此，本領域技術人員會認識到，儘管TPC與TProg 二者均可在初次移植物中產生腫瘤，但二者之間的明確差異在於TPC具有在以低細胞數目連續移植後持久刺激異源腫瘤生長的獨特能力。表徵TPC的其他常見方法涉及形態、細胞表面標記物的檢查、轉錄譜和藥物反應，不過標記物表達可隨培養條件和體外細胞系繼代而變。 [0071]因此，出於本發明的目的，像支持正常組織中的細胞層次的正常幹細胞一樣，腫瘤永續細胞優選由其無限自我更新而同時維持多譜系分化潛能的能力來限定。因此，腫瘤永續細胞能夠產生致瘤子代(即腫瘤起始細胞=TP(^PTPiOg)和非致瘤(NGT)子代二者。如本文所使用，非致瘤細胞(NGT)是指由腫瘤起始細胞產生、但自身不能自我更新或產生構成腫瘤的腫瘤細胞異質譜系的腫瘤細胞。在實驗上，NTG細胞不能在小鼠中可再現地形成腫瘤，即使是在以過量細胞數目移植時也不能。
[0072]如所指出，TProg由於其有限的在小鼠中產生腫瘤的能力而被歸類為腫瘤起始細胞(或Tic)。TProg為TPC的子代且通常能夠進行有限次數的非自我更新細胞分裂。此外，TProg細胞可進一步分裂成早期腫瘤祖細胞(ETP)和晚期腫瘤祖細胞(LTP)，其每一者均可由表型(例如細胞表面標記物)和重演腫瘤細胞架構的不同能力來區分。儘管存在這類技術性差異，但ETP和LTP 二者在功能上也與TPC不同，因為它們當以低細胞數目移植時其一般不太能夠連續重構腫瘤，且它們通常不反映親本腫瘤的異質性。雖然存在上述區別，但也已證實各種TProg群體在極少數情況下可獲得通常歸於幹細胞的自我更新能力且自身變成TPC (或CSC)。在任何情況下，兩種類型的腫瘤起始細胞均很可能在單個患者的典型腫瘤塊中呈現，且用如本文所公開的調節劑進行治療。也就是說，不管在腫瘤中所呈現的特定實施例或混合體(mix)如何，所公開的組合物一般可有效降低這類CD46陽性腫瘤起始細胞的出現率或改變其化學敏感性。
[0073]在本發明的上下文中，與構成腫瘤本體的TProg (ETP和LTP 二者)、NTG細胞和浸潤腫瘤的非TPC來源細胞(例如成纖維細胞/基質細胞、內皮細胞和造血細胞)相比，TPC更具致瘤性，相對更靜止且通常更具化學抗性。鑑於常規療法和方案在很大程度上已被設計成既使腫瘤減積又攻擊快速增殖的細胞，TPC很可能比增殖較快的TProg和其他本體腫瘤細胞群體對常規療法和方案更具抗性。此外，TPC常常表達使其對常規療法具有相對化學抗性的其他特徵，例如多重抗藥性轉運蛋白的表達增加、DNA修復機制增強和抗凋亡蛋白增強。這些性質(每一者均有助於TPC的耐藥性)構成標準腫瘤學治療方案無法確保大部分晚期瘤形成患者長期受益的關鍵原因；即無法充分地靶向以及去除那些刺激持續腫瘤生長和再發的細胞(即TPC或CSc)。
[0074]不同於許多上述現有技術的治療方案，不管所選的調節劑的形式或特異性標靶(例如遺傳物質、CD46或CD46配體)如何，本發明的新型組合物優選在施用給受試者後都降低腫瘤起始細胞的出現率。如上文所述，腫瘤起始細胞出現率的降低可因如下原因而發生:a)消除、消耗、敏化、沉默或抑制腫瘤起始細胞；b)控制腫瘤起始細胞的生長、擴張或再發；c)中斷腫瘤起始細胞的起始、繁殖、維持或增殖；或d)以其他方式阻礙致瘤細胞的存活、再生和/或轉移。在一些實施例中，腫瘤起始細胞出現率的降低因一個或多個生理學途徑的變化而發生。途徑的變化，無論是通過減少或消除腫瘤起始細胞還是通過修改其潛力(例如誘導的分化、小生境破壞)或以其他方式幹擾其對腫瘤環境或其他細胞發揮影響的能力來實現的，均繼而使得可以通過抑制致瘤、腫瘤維持和/或轉移和再發而更有效地治療⑶46相關障礙。
[0075]可用於評估這種腫瘤起始細胞出現率降低的方法包括體外或體內有限稀釋分析，優選隨後使用泊松分布統計進行計算，或評估預定的明確事件(例如能否在體內產生腫瘤)的出現率。雖然這種有限稀釋分析是計算腫瘤起始細胞出現率降低的優選方法，但其他要求較低的方法儘管精確度略小也可用於有效測定所需值，且完全與本文教導相符。因此，如本領域技術人員將理解的，通過熟知的流式細胞計數手段或免疫組織化學手段測定出現率值的降低也是可能的。對於所有上述方法，參見例如Dylla等人，2008，PMCID:PMC2413402&Hoey等人，2009，PMID =19664991 ;將上述參考文獻每一者以引用方式全文併入本文。
[0076]關於有限稀釋分析，腫瘤起始細胞出現率的體外計算可通過將分級分離或未分級分離的人腫瘤細胞(例如分別來自經處理和未經處理的腫瘤)沉積進能促進集落形成的體外生長條件中來完成。以此方式，集落形成細胞可通過對集落進行簡單計數和表徵來計算，或通過由例如將人類腫瘤細胞的連續稀釋物沉積於板中並在平板接種後至少10天評定各孔是集落形成陽性還是陰性所組成的分析來計算。體內有限稀釋實驗或分析(一般而言其測定腫瘤起始細胞出現率的能力更精確)涵蓋例如將來自未經處理的對照或經處理的條件的人腫瘤細胞的連續稀釋物移植於免疫功能降低小鼠中，隨後在移植後至少60天評定各小鼠是腫瘤形成陽性還是陰性。通過體外或體內有限稀釋分析推導細胞出現率值，優選是通過將泊松分布統計應用於陽性和陰性事件的已知出現率，從而得出滿足陽性事件(在這個情況下分別為集落或腫瘤形成)定義的事件的出現率來進行。
[0077]關於與本發明相容的可用於計算腫瘤起始細胞出現率的其他方法，最常見方法包括可定量流式細胞計數技術和免疫組織化學染色程序。儘管不如上文剛剛描述的有限稀釋分析技術精確，但這些程序的勞動密集度小得多且可在相對短的時間範圍內提供合理的值。因此，應當理解，技術人員可使用利用一或多種抗體或試劑的流式細胞術細胞表面標記物譜測定，從而測量多種樣品的TIC水平，所述抗體或試劑可結合本領域公認的已知用於富集腫瘤起始細胞的細胞表面蛋白(例如下文實例I中所述的潛在相容的標記物)。在又一個相容的方法中，本領域技術人員可通過免疫組織化學計算原位(例如組織切片中)TIC出現率，其中所述免疫組織化學使用一種或多種能夠結合據信可區分這些細胞的細胞表面蛋白的抗體或試劑。
[0078]使用任一上文提及的方法於是有可能對根據本文教導由所公開的CD46調節劑提供的TIC(或其中的TPC)出現率的降低進行定量。在一些情況下，本發明的化合物可使TIC出現率降低(通過上文所述的多種機制，包括消除、誘導的分化、小生境破壞、沉默等)1 %、15 %、20 %、25 %、30 %或甚至35 %。在其他實施例中，TIC出現率的降低可為約40 %、45 %、50 %、55 %、60 %或65 %。在某些實施例中，所公開的化合物可使TIC的出現率降低70%、75%、80%、85%、90%或甚至95%。當然，應當理解TIC出現率的任何降低很可能會導致瘤形成(neoplasia)的致瘤性、持續性、再發性和侵襲性相應降低。
[0079]IV.CD46 調節劑
[0080]在任何情況下，本發明涉及CD46調節劑(包括CD46拮抗劑)用於診斷、治療和/或預防多種CD46相關惡性腫瘤中的任一者的用途。所公開的調節劑可單獨使用或與多種抗癌化合物(例如化學治療劑或免疫治療劑或生物響應修飾劑)結合使用。在其他所選的實施例中，可將兩種或更多種分立的CD46調節劑組合使用以提供增強的抗贅生性作用或可用於製造多特異性構建體。[0081]在某些實施例中，本發明的CD46調節劑將包含核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、肽或多肽。甚至更優選地，調節劑將包含可溶性CD46(sCD46)或其形式、變體、衍生物或片段，包括例如⑶46融合構建體(如⑶46-Fc、⑶46靶向部分等)或⑶46-綴合物(如⑶46-PEG、⑶46-細胞毒性劑、⑶46-brm等)。還應當理解，在其他實施例中，⑶46調節劑包含抗體(如抗CD46單克隆抗體)或其免疫反應性片段或衍生物。在尤其優選的實施例中，本發明的調節劑將包含中和抗體或其衍生物或片段。在其他實施例中，CD46調節劑可包含內化抗體。在另外其他實施例中，CD46調節劑可包含消耗性抗體。此外，與上述融合構建體一樣，這些抗體調節劑可與所選的細胞毒性劑、聚合物、生物響應修飾劑(BRM)或其類似物綴合、鍵聯或以其他方式締合以，提供具有各種(以及任選多種)作用機制的定向免疫療法。在另外其他實施例中，調節劑可在遺傳水平上起作用且可包含如反義構建體、siRNA、微RNA等諸如此類的化合物。
[0082]還應當理解，所公開的CD46調節劑可通過多種機制消耗或消除或抑制腫瘤細胞(尤其是TPC)的生長、繁殖或存活和/或相關瘤形成，包括激動或拮抗所選的途徑或消除特定細胞，這取決於例如CD46調節劑的形式、任何相關的有效負載或劑量和遞送方法。因此，雖然本文所公開的優選的實施例涉及消耗、抑制或沉默特定腫瘤細胞亞群(例如腫瘤永續細胞)，但必須強調這類實施例僅為示例性的而不在任何意義上具有限制性。相反，如隨附權利要求書中所述的，本發明廣義地涉及CD46調節劑及其用於治療、管理或預防多種CD46介導的過度增殖性障礙的用途，不管任何具體機制或靶標腫瘤細胞群體。
[0083]在相同意義上，本發明所公開的實施例可包含一種或多種⑶46拮抗劑。為此，應當理解，本發明的CD46拮抗劑可包含能識別CD46蛋白或其片段、與它們反應、與它們結合、與它們組合、與它們競爭、與它們締合或以其他方式與它們相互作用，且消除、沉默、減少腫瘤起始細胞或其他贅生性細胞(包括本體腫瘤或NTG細胞)、抑制、阻礙、制止或控制它們的生長的任何配體、多肽、肽、融合蛋白、抗體或其免疫活性片段或衍生物。在所選的實施例中，⑶46調節劑包含⑶46拮抗劑。
[0084]如本文中所使用的，拮抗劑是指這樣的分子，其能夠中和、阻斷、抑制、去除、降低或幹擾特定或指定蛋白質的活性，包括受體與配體的結合或酶與底物的相互作用。更一般而言，本發明的拮抗劑可包含抗體及其抗原結合片段或衍生物、蛋白質、肽、糖蛋白、糖肽、糖脂、多糖、寡糖、核酸、反義構建體、siRNA、miRNA、生物有機分子、肽模擬物、藥劑以及它們的代謝物、轉錄和翻譯控制序列等等。拮抗劑也可包括小分子抑制劑、融合蛋白、受體分子及衍生物(它們特異性結合至蛋白質，從而隔離其與其底物標靶的結合)、蛋白質的拮抗性變體、針對蛋白質的反義分子、RNA適體以及針對蛋白質的核糖酶。
[0085]在本文所用且應用於兩個或更多個分子或化合物的術語「識別」或「特異性識別」應認為意指分子的共價或非共價反應、結合、特異性結合、組合、締合、相互作用、連接、鍵聯、聯合、聚結、合併或接合，從而一個分子對另一個分子施加影響。
[0086]此外，如本文實例中所證明的，人⑶46的一些調節劑可在某些情況下與來自非人物種(如鼠類)的CD46發生交叉反應。在其他情況下，例示性的調節劑可對人CD46的一種或多種異型物具有特異性且不會表現出與來自其他物種的CD46直向同源物的交叉反應性。
[0087]在任何情況下，本領域的技術人員將理解，所公開的調節劑可以綴合或未綴合的形式使用。也就是說，調節劑可與藥物活性化合物、生物響應修飾劑、細胞毒性劑或細胞生長抑制劑、診斷部分或生物相容修飾劑締合或與它們綴合(例如以共價或非共價形式)。就此而言，應當理解這類綴合物可包含肽、多肽、蛋白質、融合蛋白、核酸分子、小分子、模擬劑、合成藥物、無機分子、有機分子和放射性同位素。此外，如上文所指出的，所選的綴合物可以各種摩爾比共價或非共價鍵聯至⑶46調節劑，這至少部分取決於用來實現綴合的方法。
[0088]V.杭體
[0089]a.概沭
[0090]如先前所提及的，本發明的尤其優選的實施例包括抗體形式的CD46調節劑。本文中的術語「抗體」以最廣泛意義使用且具體涵蓋合成抗體、單克隆抗體、寡克隆或多克隆抗體(polyclonal antibody)、多克隆抗體(multiclonal antibody)、重組產生的抗體、胞內抗體、多特異性抗體、雙特異性抗體、單價抗體、多價抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、靈長源化抗體、Fab片段、F (ab')片段、單鏈FvFc (ScFvFc)、單鏈Fv (scFv)、抗獨特型(抗-1d)抗體和任何其他免疫活性抗體片段，只要它們表現出所需生物活性(即CD46締合或結合)即可。在更廣泛意義上，本發明的抗體包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性片段，即含有抗原結合位點的分子，其中這些片段可與或不與另一免疫球蛋白結構域(包括但不限於Fe區或其片段)融合。此外，如本文更詳細地敘述的，術語「抗體」具體包括如下文所述的Fe變體，包括全長抗體和包含Fe區的變體Fe融合物或其片段，任選包含至少一個胺基酸殘基修飾且與免疫球蛋白的免疫活性片段融合。
[0091]如下文將更詳細論述的，通用術語「抗體」或「免疫球蛋白」包含五種不同類別的抗體，它們可以生物化學方法進行區分，且根據它們的重鏈恆定域的胺基酸序列可容易歸類為適當類別。出於歷史原因，完整抗體的主要類別稱為IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在人中，根據結構和某些生化性 質，IgG類別和IgA類別可進一步分為公認的亞類(同種型)，即IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。應當理解，人中的IgG同種型按照其在血清中的豐度順序來命名，其中IgGl最豐富。
[0092]雖然所有五種類別的抗體(即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)和所有同種型(即IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)以及其變異形式均在本發明的範圍內，但將僅出於示例的目的相當詳細地論述包含IgG類免疫球蛋白的優選實施例。然而應當理解，該公開內容僅說明例示性組合物和實施本發明的方法，而不以任何方式限制本發明或隨附權利要求書的範圍。
[0093]就此而言，人IgG免疫球蛋白包含兩條分子量為大約23，000道爾頓的相同多肽輕鏈和兩條分子量為53，000-70，000 (取決於同種型)的相同重鏈。對應於不同類別抗體的重鏈恆定域分別由相應小寫希臘字母α、δ、ε、Y及μ表示。來自任何脊椎動物物種的抗體的輕鏈可根據其恆定域的胺基酸序列而歸屬於被稱為K和λ的兩種明顯不同類型之一。本領域技術人員應當理解，不同類別免疫球蛋白的亞基結構和三維構型是眾所周知的。
[0094]該四條鏈以Y構型通過二硫鍵接合，其中輕鏈括住重鏈，重鏈在Y的開口開始且貫穿可變區到達Y的兩個末端。每條輕鏈通過一個共價二硫鍵鍵與重鏈連接，而鉸鏈區中的兩個二硫鍵接合重鏈。各個重鏈和輕鏈也具有規則間隔的鏈內二硫橋，其數目可根據IgG的同種型而變。[0095]每條重鏈在一端具有可變域(Vh)，隨後是多個恆定域。每條輕鏈在一端具有可變域(\)且在其另一端具有恆定域；輕鏈恆定域與重鏈的第一恆定域對齊，且輕鏈可變域與重鏈可變域對齊。就此而言，應當理解，輕鏈部分的可變域(\)和重鏈部分的可變域(Vh)二者決定抗原識別和特異性。相反，輕鏈恆定域(Q)和重鏈恆定域(Ch1、Ch2*Ch3)賦予並調節重要的生物學性質，如分泌、經胎盤運動性(transplacental mobility)、循環半衰期、補體結合等等。按照慣例，恆定區結構域的編號隨著其逐漸遠離抗體的抗原結合位點或氨基末端而增加。因此，抗體的氨基末端或N端構成可變區，羧基末端或C端構成恆定區。因此，Ch3域和Q域實際上分別包含重鏈和輕鏈的羧基末端。[0096]術語「可變」是指這樣的事實:在各種免疫球蛋白當中，可變域的某些部分在序列上相差很大，並且這些熱點(hot spot)在很大程度上限定了特定抗體的結合和特異性特徵。這些高變位點自身表現於分別在輕鏈和重鏈可變域二者中的三個稱為互補決定區(CDR)的區段中。在CDR旁側的可變域的更高保守性部分稱為構架區(FR)。更具體地講，在天然存在的單體IgG抗體中，抗體每個臂上存在的六個CDR為短的非鄰接胺基酸序列，這些胺基酸在抗體在含水環境中呈現其三維構型時經專門定位而形成抗原結合位點。
[0097]構成重鏈和輕鏈可變域的其餘部分的構架區在胺基酸序列方面顯示較小的分子間可變性。相反，構架區主要採取β片層(β-sheet)構象，且⑶R形成連接β片層結構並在一些情況下構成β片層結構的一部分的環(loop)。因此，這些構架區起到形成可使六個CDR通過鏈間非共價相互作用以正確取向進行定位的骨架(scaffold)的作用。由經定位的CDR形成的抗原結合位點限定與免疫反應性抗原(即CD46)上的表位互補的表面。這個互補表面能促進抗體與免疫反應性抗原表位的非共價結合。應當理解，CDR的位置可容易由本領域普通技術人員鑑別。
[0098]如下文更詳細論述的，重鏈和輕鏈可變區的全部或部分可使用標準的重組和表達技術進行重組或工程改造以提供有效的抗體。也就是說，來自第一抗體的重鏈或輕鏈可變區(或其任何部分)可與來自第二抗體的重鏈或輕鏈可變區的任何選定部分混合和匹配。例如，在一個實施例中，包含第一抗體的三個輕鏈⑶R的整個輕鏈可變區可與包含第二抗體的三個重鏈⑶R的整個重鏈可變區配對以提供有效抗體(operative antibody)。此外，在其他實施例中，可將來源於各種抗體的單獨重鏈和輕鏈CDR混合和匹配以提供具有優化的特徵的所需抗體。因此，例示性抗體可包含來自第一抗體的三個輕鏈CDR、來源於第二抗體的兩個重鏈⑶R和來自第三抗體的第三重鏈⑶R。
[0099]更具體地講，在本發明的內容中，應當理解可根據本發明教導將圖1lB中所公開的重鏈和輕鏈CDR中的任一者以這個方式重新排列以提供優化的抗CD46 (如抗CD46)抗體。
[0100]在任何情況下，互補決定區殘基編號可定義為Kabat等人(1991，NIH出版號91-3242，維吉尼亞州斯普林菲爾德的美國國家技術信息服務局(National TechnicalInformation Service, Springfield, Va.))的那些編號，具體而言，輕鏈可變域中為殘基24-34 (CDRl)、50-56 (CDR2)和 89-97 (CDR3)，重鏈可變域中為 31-35 (CDRl)、50-65 (CDR2)和95-102(⑶R3)。注意，各⑶R在抗體之間差別很大(且根據定義不會表現出與Kabat共有序列具有同源性)。構架殘基的最大比對通常需要在編號系統中插入間隔殘基才能用於Fv區。另外，任何給定的Kabat位點編號處的某些單獨殘基的種類(identity)可因物種間或等位基因分歧而在抗體鏈之間有差異。另參見Chothia等人，J.Mol.Biol.(《分子生物學雜誌》)196:901-917(1987)以及MacCallum等人，J.Mol.Biol.(《分子生物學雜誌》)262:732-745(1996)，其中定義包括彼此比較時胺基酸殘基的重疊或子集。上述參考文獻中的每一者以引用的方式全文併入本文中，並且示出涵蓋上面所引用的參考文獻每一者所定義的⑶R的胺基酸殘基以供比較。
[0101]CDR 定 SI
[0102]
【權利要求】
1.一種分離的⑶46調節劑。
2.根據權利要求1所述的分離的CD46調節劑，其中所述CD46調節劑包含CD46拮抗劑。
3.根據權利要求1所述的分離的CD46調節劑，其中所述CD46調節劑包含抗體或其免疫反應性片段。
4.根據權利要求3所述的分離的CD46調節劑，其中所述抗體或其免疫反應性片段包含單克隆抗體。
5.根據權利要求4所述的分離的CD46調節劑，其中所述單克隆抗體選自嵌合抗體、人源化抗體和人抗體。
6.根據權利要求4所述的分離的CD46調節劑，其中所述單克隆抗體包含具有三個互補決定區的輕鏈可變區和具有三個互補決定區的重鏈可變區，其中所述重鏈和輕鏈互補決定區包含圖1lB中所示的互補決定區。
7.根據權利要求6所述的分離的CD46調節劑，其中所述單克隆抗體是人源化抗體。
8.根據權利要求4所述的分離的CD46調節劑，其中所述單克隆抗體包含輕鏈可變區和重鏈可變區，其中所述輕鏈可變區包含與選自SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:49、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69、SEQID NO:73,SEQ ID NO:77、SEQ ID N0:81和SEQ ID NO:85中所示胺基酸序列的胺基酸序列具有至少60%同一性的氨 基酸序列，並且其中所述重鏈可變區包含與選自SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:19, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO:3USEQ ID NO: 35, SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:59、SEQ IDNO:63, SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:71、SEQID NO:75, SEQ ID NO:79 和 SEQ ID NO:83 中所示胺基酸序列的胺基酸序列具有自身60%同一性的胺基酸序列。
9.一種核酸，所述核酸編碼根據權利要求8所述的胺基酸重鏈可變區或胺基酸輕鏈可變區。
10.一種載體,所述載體包含根據權利要求9所述的核酸。
11.一種人源化抗體，所述抗體衍生自根據權利要求8所述的單克隆抗體。
12.根據權利要求1所述的分離的CD46調節劑，所述調節劑包含來自CD46變體A的胺基酸序列或其片段。
13.根據權利要求12所述的分離的CD46調節劑，其中所述CD46調節劑還包含免疫球蛋白恆定區的至少一部分。
14.根據權利要求1所述的分離的CD46調節劑，其中所述調節劑在施用給受試者後降低腫瘤起始細胞的出現率。
15.根據權利要求14所述的分離的CD46調節劑，其中所述出現率的降低是使用對已知用於富集腫瘤起始細胞的腫瘤細胞表面標記物的流式細胞術分析或對已知用於富集腫瘤起始細胞的腫瘤細胞表面標記物的免疫化學檢測來測定。
16.根據權利要求14所述的分離的CD46調節劑，其中所述出現率的降低是使用體外或體內有限稀釋分析來測定。
17.根據權利要求16所述的分離的CD46調節劑，其中所述出現率的降低是使用體內有限稀釋分析來測定的，所述體內有限稀釋分析包括將活的人腫瘤細胞移植進免疫能力降低的小鼠中。
18.根據權利要求17所述的分離的CD46調節劑，其中所述出現率的降低是使用體內有限稀釋分析來測定的，所述體內有限稀釋分析包括用泊松分布統計對腫瘤起始細胞出現率進行定量。
19.根據權利要求16所述的分離的CD46調節劑，其中所述出現率的降低是使用體外有限稀釋分析來測定的，所述體外有限稀釋分析包括將活的人腫瘤細胞有限稀釋沉積進體外集落支持條件中。
20.根據權利要求19所述的分離的CD46調節劑，其中所述出現率的降低是使用體外有限稀釋分析來測定的，所述體外有限稀釋分析包括用泊松分布統計對腫瘤起始細胞出現率進行定量。
21.根據權利要求14所述的分離的CD46調節劑，其中所述腫瘤起始細胞包含腫瘤永續細胞。
22.—種治療CD46相關障礙的方法，所述方法包括施用治療有效量的CD46調節劑給有需要的受試者。
23.根據權利要求22所述的方法，其中所述CD46調節劑包含CD46拮抗劑。
24.根據權利要求22所述的方法，其中所述CD46調節劑包含抗體或其免疫反應性片段。
25.根據權利要求24所述的方法，其中所述抗體或其免疫反應性片段包含單克隆抗體。
26.根據權利要求25所述的方法，其中所述單克隆抗體選自嵌合抗體、人源化抗體和人抗體。
27.根據權利要求25所述的方法，其中所述單克隆抗體包含具有三個互補決定區的輕鏈可變區和具有三個互補決定區的重鏈可變區，其中所述重鏈和輕鏈互補決定區包含圖1lB中所示的互補決定區。
28.根據權利要求25所述的方法，其中所述單克隆抗體包含輕鏈可變區和重鏈可變區，其中所述輕鏈可變區包含與選自SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:25,SEQ IDNO:29, SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:49、SEQID NO:53、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85中所示胺基酸序列的胺基酸序列具有至少60%同一性的胺基酸序列，並且其中所述重鏈可變區包含與選自SEQ ID NO: 15, SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:39、SEQID NO:43、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:7U SEQ ID NO:75, SEQ IDNO:79 和 SEQ ID NO:83 中所示胺基酸序列的胺基酸序列具有自身60 %同一性的胺基酸序列。
29.根據權利要求25所述的方法，其中所述單克隆抗體包含泛CD46抗體。
30.根據權利要求25所述的方法，其中所述單克隆抗體與一種或多種CD46剪接變體免疫特異性締合。
31.根據權利要求30所述的方法，其中所述一種或多種CD46剪接變體包含選自CD46D、CD46F和CD46J的剪接變體。
32.根據權利要求22所述的方法，其中所述過度增殖障礙包含贅生性障礙。
33.根據權利要求32所述的方法，其中所述贅生性障礙包含實體瘤。
34.根據權利要求32所述的方法，其中所述贅生性障礙包含腎上腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、腎癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、結腸直腸癌、胰腺癌、前列腺癌或乳腺癌。
35.根據權利要求22所述的方法，所述方法還包括降低腫瘤起始細胞在所述受試者中的出現率的步驟。
36.根據權利要求35所述的方法，其中所述出現率的降低是使用對已知用於富集腫瘤起始細胞的腫瘤細胞表面標記物的流式細胞術分析來測定的。
37.根據權利要求35所述的方法，其中所述出現率的降低是使用對已知用於富集腫瘤起始細胞的腫瘤細胞表面標記物的免疫化學檢測來測定。
38.根據權利要求35所述的方法，其中所述出現率的降低是使用體外或體內有限稀釋分析來測定。
39.根據權利要求38所述的方法，其中所述出現率的降低是使用體內有限稀釋分析來測定的，所述體內有限稀釋分析包括將活的人腫瘤細胞移植進免疫能力降低的小鼠中。
40.根據權利要求39所述的方法，其中所述出現率的降低是使用體內有限稀釋分析來測定的，所述體內有限稀釋分析包括用泊松分布統計對腫瘤起始細胞出現率進行定量。
41.根據權利要求38所述的方法，其中所述出現率的降低是使用體外有限稀釋分析來測定的，所述體外有限稀釋分析 包括將活的人腫瘤細胞有限稀釋沉積進體外集落支持條件中。
42.根據權利要求41所述的方法，其中所述出現率的降低是使用體外有限稀釋分析來測定的，所述體外有限稀釋分析包括用泊松分布統計對腫瘤起始細胞出現率進行定量。
43.根據權利要求22所述的方法，所述方法還包括施用抗癌劑的步驟。
44.根據權利要求22所述的方法，其中所述CD46調節劑包含CD46變體A或其片段。
45.根據權利要求44所述的方法，其中所述CD46調節劑還包含免疫球蛋白恆定區或其片段。
46.根據權利要求45所述的方法，其中所述CD46調節劑包含融合蛋白。
47.根據權利要求22所述的方法，所述方法還包含施用第二CD46調節劑的步驟，其中所述第二⑶46調節劑與所述⑶46調節劑不同。
48.一種在有需要的受試者中降低腫瘤起始細胞的出現率的方法，所述方法包括施用CD46調節劑給所述受試者的步驟。
49.根據權利要求48所述的方法，其中所述腫瘤起始細胞包含腫瘤永續細胞。
50.根據權利要求49所述的方法，其中所述腫瘤永續細胞包含一種或多種標記物。
51.根據權利要求48所述的方法，其中所述CD46調節劑包含CD46拮抗劑。
52.根據權利要求48所述的方法，其中所述CD46調節劑包含抗體。
53.根據權利要求52所述的方法，其中所述抗體包含單克隆抗體。
54.根據權利要求48所述的方法，其中所述受試者患有選自腎上腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、腎癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、結腸直腸癌、胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌的贅生性障礙。
55.根據權利要求48所述的方法，其中所述腫瘤起始細胞的出現率降低至少10%。
56.根據權利要求48所述的方法，其中所述出現率的降低是使用對已知用於富集腫瘤起始細胞的腫瘤細胞表面標記物的流式細胞術分析來測定的。
57.根據權利要求48所述的方法，其中所述出現率的降低是使用對已知用於富集腫瘤起始細胞的腫瘤細胞表面標記物的免疫化學檢測來測定。
58.根據權利要求48所述的方法，其中所述出現率的降低是使用體外或體內有限稀釋分析來測定。
59.根據權利要求58所述的方法，其中所述出現率的降低是使用體內有限稀釋分析來測定的，所述體內有限稀釋分析包括將活的人腫瘤細胞移植進免疫能力降低的小鼠中。
60.根據權利要求59所述的方法，其中所述出現率的降低是使用體內有限稀釋分析來測定的，所述體內有限稀釋分析包括用泊松分布統計對腫瘤起始細胞出現率進行定量。
61.根據權利要求58所述的方法，其中所述出現率的降低是使用體外有限稀釋分析來測定的，所述體外有限稀釋分析包括將活的人腫瘤細胞有限稀釋沉積進體外集落支持條件中。
62.根據權利要求61所述的方法，其中所述出現率的降低是使用體外有限稀釋分析來測定的，所述體外有限稀釋分析包括用泊松分布統計對腫瘤起始細胞出現率進行定量。
63.一種敏化受試者中的腫瘤以便用抗癌劑治療的方法，所述方法包括施用CD46調節劑給所述受試者的步驟。
64.根據權利要求63所述的方法，其中所述CD46調節劑是抗體。
65.根據權利要求63 所述的方法，其中所述腫瘤是實體瘤。
66.根據權利要求63所述的方法，其中所述抗癌劑包含化學治療劑。
67.根據權利要求63所述的方法，其中所述抗癌劑包含生物劑。
68.一種在有需要的受試者中診斷過度增殖障礙的方法，所述方法包括如下步驟: 從所述受試者獲得組織樣品； 使所述組織樣品與至少一種CD46調節劑接觸；以及 檢測或定量與所述樣品締合的所述CD46調節劑。
69.根據權利要求68所述的方法，其中所述CD46調節劑包含單克隆抗體。
70.根據權利要求69所述的方法，其中所述抗體與報告分子有效締合。
71.一種可用於診斷或治療CD46相關障礙的製品，所述製品包括含有CD46調節劑的容器和關於使用所述CD46調節劑治療或診斷所述CD46相關障礙的說明書。
72.根據權利要求71所述的製品，其中所述CD46調節劑是單克隆抗體。
73.根據權利要求72所述的製品，其中所述容器包含可讀板。
74.一種治療患有包含實體瘤的贅生性障礙的受試者的方法，其中所述方法包括施用治療有效量的與一種或多種CD46剪接變體免疫特異性締合的CD46調節劑的步驟。
75.根據權利要求74所述的方法，其中所述一種或多種CD46剪接變體包含選自CD46D、CD46F和CD46J的剪接變體。
76.根據權利要求74所述的方法，其中所述CD46調節劑包含拮抗劑。
77.根據權利要求74所述的方法，其中所述CD46調節劑包含抗體。
78.根據權利要求77所述的方法，其中所述抗體包含單克隆抗體。
79.根據權利要求74所述的方法，其中所述贅生性障礙選自腎上腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、腎癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、結腸直腸癌、胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌。
80.一種治療患有贅生性障礙的受試者的方法，所述方法包括施用治療有效量的至少一種與細胞毒性劑締合的CD46調節劑。
81.根據權利要求80所述的方法，其中所述CD46調節劑與所述細胞毒性劑綴合。
82.根據權利要求81所述的方法，其中所述CD46調節劑包含抗體。
83.根據權利要求82所述的方法，其中所述抗體包含單克隆抗體。
84.根據權利要求80所述的方法，其中所述贅生性障礙選自腎上腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、腎癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、結腸直腸癌、胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌。
85.一種對腫瘤起始細胞群體進行鑑別、分離、分區或富集的方法，所述方法包括使所述腫瘤起始細胞與CD46調節劑接觸的步驟。
86.根據權利要求82所述的方法，其中所述CD46調節劑包含抗體。
87.根據權利要求83所述的方法，其中所述抗體包含單克隆抗體。
88.根據權利要求82所述的方法，所述方法還包括將所述腫瘤起始細胞進行流式細胞術分析的步驟。
89.根據權利要求85所述的方法，其中所述流式細胞術分析包括FACS。
90.一種耗盡患有過度增殖障礙的患者中的腫瘤起始細胞的方法，所述方法包括施用⑶46調節劑的步驟。
91.根據權利要求90所述的方法，其中所述CD46調節劑包含單克隆抗體。
92.根據權利要求91所述的方法，其中所述單克隆抗體與細胞毒性劑締合。
93.根據權利要求92所述的方法，其中所述單克隆抗體是泛CD46抗體。
94.根據權利要求92所述的方法，其中所述單克隆抗體與單種CD46剪接變體免疫特異性締合。
95.根據權利要求94所述的方法，其中所述單種CD46剪接變體包含選自CD46D、CD46F和⑶46J的剪接變體。
96.一種包含人源化抗體的⑶46調節劑，其中所述抗體包含實質上如SEQ ID NO:199中所示的重鏈可變區胺基酸序列和實質上如SEQ ID NO:201中所示的輕鏈可變區胺基酸序列。
97.一種組合物，所述組合物包含hSCl.N71抗體和可藥用載體。
98.一種包含人源化抗體的⑶46調節劑，其中所述抗體包含實質上如SEQ ID NO:203中所示的重鏈可變區胺基酸序列和實質上如SEQ ID NO:205中所示的輕鏈可變區胺基酸序列。
99.一種組合物，所述組合物包含hSCl.N149抗體和可藥用載體。
100.一種在有需要的受試者中抑制或預防轉移的方法，所述方法包括施用藥學有效量的CD46調節劑的步驟。
101.根據權利要求100所述的方法，其中所述受試者在施用所述CD46調節劑之前或之後進行減積手術。
102.根據權利要求101所述的方法，其中所述減積手術包括施用至少一種抗癌劑。
103.根據權利要求100所述的方法，其中所述受試者在施用CD46調節劑時處於好轉期。
104.一種在有需要的受試者中進行維持療法的方法，所述方法包括施用藥學有效量的⑶46調節劑的步驟。
105.根據權利要求104所述的方法，其中所述受試者在施用CD46調節劑之前受過贅生性障礙治療。
106.根據權利要求104所述的方法，其中所述受試者在施用所述CD46調節劑時無所述贅生性障礙的症狀。
107.根據權利要求105所述的方法，其中所述CD46調節劑在所述受試者受過所述贅生性障礙治療之後超過六個月施用。
108.根據權利要 求105所述的方法，其中所述CD46調節劑包含單克隆抗體。
【文檔編號】C07K16/40GK103476429SQ201180053061
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2011年9月2日 優先權日:2010年9月3日
【發明者】S.J.戴拉, O.富爾德, R.A.斯圖爾, W.C.安德森, S.奧施馬 申請人:斯坦申特雷克斯公司