作為彈性蛋白酶抑制劑前藥的醯化烯醇衍生物的製作方法

2023-06-01 10:39:31

專利名稱：作為彈性蛋白酶抑制劑前藥的醯化烯醇衍生物的製作方法
技術領域：
本發明涉及作為彈性蛋白酶抑制劑或彈性蛋白酶抑制劑前藥的化合物，它們具有許多生理應用和臨床應用。
人中性白細胞彈性蛋白酶已被認為是在幾種炎性疾病中參與組織破壞的物質，例如慢性支氣管炎、細胞纖維變性和類風溼性關節炎。J.L.Malech和J.I.Gallin，New Engl.J.Med.，317(11)，687(1987)。彈性蛋白酶對許多結締組織大分子具有廣譜的蛋白水解活性，包括對彈性蛋白、纖連蛋白、膠原和蛋白聚糖。彈性蛋白酶的存在可能是這些疾病的病因之一。
正常血漿含有大量的蛋白酶抑制劑，它們控制著結締組織轉變和發炎中有關的多種酶。例如，α-1-蛋白酶抑制劑(α-1-PI)是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，它阻斷彈性蛋白酶的活性。α-1-PI已受到人們的重視，因為其血漿水平降至正常水平的15％以下與氣腫的早期形成有關。
除血漿蛋白酶抑制劑以外，包括支氣管粘液、鼻粘液、宮頸粘液和精液的分泌液中也含有內源性蛋白酶抑制劑，稱為分泌性亮蛋白酶抑制劑(SLPI)，它能滅活彈性蛋白酶，據信它在炎性細胞蛋白酶存在下維持上皮的完整性中起重要作用。在某些病理狀態下，α-1-PI和SLPI被中性白細胞氧化機制所滅活，使中性白細胞蛋白酶在基本無抑制劑的環境中起作用。例如，已發現成人呼吸窘迫綜合症(ARDS)病人的支氣管灌洗液中含有活性彈性蛋白酶和被氧化滅活的α-1-PI。
除氧化機制外，中性白細胞還有逃避抗蛋白酶抑制的非氧化機制。慢性肉芽腫病病人的中性白細胞在過量α-1-PI存在下能夠降解內皮細胞基質。有大量體外證據說明受激中性白細胞能與其底物緊密結合，將血清抗蛋白酶有效地排除在細胞-底物緊密接觸的微環境之外。炎性位點流入大量中性白細胞會由於在此發生的蛋白水解作用而造成相當的組織損傷。
本申請人通過測定中性白細胞溶胞產物、純化彈性蛋白酶、和受激中性白細胞降解軟骨基質蛋白聚糖的能力，確定了彈性蛋白酶是參與軟骨基質降解的主要中性白細胞蛋白酶之一。而且本申請人以前已發現肽衍生物可作為彈性蛋白酶抑制劑，顯示有用的藥理活性。例如，作為彈性蛋白酶抑制劑的以下肽衍生物公開在申請日為1993年3月3日發明人為Peet等的歐洲專利申請OPI No.0529568中，其中羧基端羧基被五氟乙基羰基(-C(O)C2F5)取代，氨基端胺基酸被各種含雜環基團如4-嗎啉羰基所保護。申請人最近發現了如歐洲專利申請OPI No.0529568中公開的已知彈性蛋白酶抑制劑的醯化烯醇衍生物，它們可作為已知衍生物的前藥或其本身就是彈性蛋白酶抑制劑。
本發明涉及具有下式1的化合物或其水合物、電子等排體或藥學上可接受的鹽K-P4-P3-P2-EAC1(SEQ.ID NO.1)其中EAC為下式基團 其中R1為-CH3，-CH(CH3)2，-CH2CH2CH3，-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3；R2為-H，或為(C1-8)烷基，(C3-12)環烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；R3為-H或-F；R3為-H，-F，-CF3，-CF2CF3，-CF2CF2CF3，-C(O)OR5或-C(O)NR5R6或為(C1-8)烷基，(C3-12)環烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；R5和R6各自獨立地為-H，或(C1-8)烷基，(C3-12)環烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；P2為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met，Nle，Gly，Phe，Tyr，Trp，或Nal(1)，其中α氨基的氮可被R基團取代，R為(C1-8)烷基，(C3-12)環烷基，(C3-12)環烷基(C1-6)烷基，(C4-11)雙環烷基，(C4-11)雙環烷基(C1-6)烷基，(C6-10)芳基，(C6-10)芳基(C1-6)烷基；(C3-7)雜環烷基，(C3-7)雜環烷基(C1-6)烷基，(C5-9)雜芳基，(C5-9)雜芳基(C1-6)烷基，稠合(C6-10)芳基-(C3-12)環烷基，稠合(C6-10)芳基(C3-12)環烷基-(C1-6)烷基，稠合(C5-9)雜芳基(C3 -8)環烷基，或稠合(C5-9)雜芳基(C3-12)環烷基-(C1-6)烷基，或P2為Pro，Ind，Tic，Pip，Tca，Pro(4-OBzl)，Aze，Pro(4-OAc)，Pro(4-OH)；P3為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或N-甲基衍生物，Pro，Ind，Tic，或Tca，或ε氨基上用嗎啉-B-基團取代的Lys或δ氨基上用嗎啉-B-基團取代的Orn；P4為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或一鍵；K為氫、甲醯基、乙醯基、琥珀醯基、苯甲醯基、叔丁氧羰基、苄氧羰基、甲苯磺醯基、丹醯、異戊醯、甲氧基琥珀醯基、1-金剛烷磺醯基、1-金剛烷乙醯基、2-羧基苯甲醯基、苯乙醯基、叔丁基乙醯基、雙((1-萘基)甲基)乙醯基、-C(O)N-(CH3)2， -A-Rz，其中A為 Rz為破1-3個獨立地選自下組的取代基適當取代的含6、10和12個碳的芳基氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含1-6個碳的烷基、含1-6個碳的烷氧基、羧基、烷基部分含1-6個碳的烷基羰基氨基、5-四唑基、和含1-15個碳的醯基磺醯氨基，條件是當醯基磺醯氨基含有芳基時，該芳基可進一步被選自氟、氯、溴、碘和硝基的基團取代；及與其功能相當的其他末端氨基保護基，或 其中Z為N或CH，及B為下式基團 (波浪線表示與分子其餘部分的連接處，即不是與Z相連)且R』，為氫或(C1-6)烷基，它們可作為已知彈性蛋白酶抑制劑的前藥或其本身抑制彈性蛋白酶。因而式1化合物顯示抗炎作用，用於治療氣腫、細胞纖維變性、成人呼吸窘迫綜合症、敗血症、瀰漫性血管內凝血、痛風、類風溼性關節炎、慢性支氣管炎和腸炎；或者是顯示這種效應之化合物的前藥。


圖1顯示用MDL103，279和各種對照物在60分鐘時間範圍內的人中性白細胞彈性蛋白酶試驗(如本文實施例9中所述)的時間曲線的比較。橫坐標(x-軸)代表由於彈性蛋白酶反應產物的形成而產生的吸光度。縱坐標(y-軸)代表以秒測量的反應時間。吸光度隨時間的增加代表彈性蛋白酶反應的速率。各個時間曲線說明如下。
1 彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物2 彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+酯酶3 彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+DML103，2794 彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+酯酶+DML103，279圖2顯示利用本文實施例9所述人中性白細胞彈性蛋白酶試驗，MDL105，457、MDL104，226、MDL105，658、對照和對照+酯酶與ML103，279的時間曲線的比較。橫坐標和縱坐標的定義與圖1中相同。各時間曲線的說明如下。
1 對照2 對照+酯酶3 66nm MDL105，457+酯酶4 66nm MDL103，279-02+酯酶5 66nm MDL104，226+酯酶6 66nm MDL105，658+酯酶式1化合物的電子等排體包括以下化合物其中(a)P2-P4取代基的一個或多個α氨基殘基呈其非天然構型(當存在天然構型時)，或(b)當正常的肽醯胺鍵[-C(＝O)NH-]被修飾時，例如變成-CH2NH-(被還原)、-COCH2-(酮)、-CH(OH)CH2-(羥基)、-CH(NH2)CH2-(氨基)、-CH2CH2-(烴)、-CH＝CH-(烯)。本發明化合物優選不呈電子等排體形式；尤其優選不存在修飾的肽醯胺基團，但如果有則優選保持這種電子等排修飾為最小。
本文所用術語(C1-8)烷基指1-8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、正戊基、仲戊基、異戊基、正己基、庚基和辛基。類似地，術語(C1-6)烷基指1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、正戊基、仲戊基、異戊基和正己基。術語(C3-12)環烷基指由3-12個環成員組成的環狀烷基，它可以被低級烷基取代，例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、4-甲基環己基、4-乙基環己基、環庚基和環辛基。術語(C3-12)環烷基(C1-6)烷基指被(C3-12)環烷基取代的(C1-6)烷基，如環己基甲基或環戊基乙基。術語(C4-11)雙環烷基指含一對橋頭碳原子的烷基，如2-雙環[1.1.0]丁基、2-雙環[2.2.1]己基和1-雙環[2.2.2]辛烷。術語(C4-11)雙環烷基(C1-6)烷基指被(C4-11)雙環烷基取代的(C1-6)烷基，如2-雙環己基甲基。術語(C6-10)芳基指共軛碳原子的環狀芳香集合，例如苯基、1-萘基和2-萘基。術語(C6-10)芳基(C1-6)烷基指被(C6-10)芳基取代的(C1-6)烷基，如苄基、苯乙基和1-萘基甲基。術語(C3-7)雜環烷基指含1-3個選自氧、氮和硫的雜原子的非芳香含碳環狀基團，例如嗎啉基和哌啶基。術語(C3-7)雜環烷基(C1-6)烷基指被(C3-7)雜環烷基取代的(C1-6)烷基，如嗎啉代甲基。術語(C5-9)雜芳基指共軛碳原子和1-3個氮、氧和硫原子的環狀或雙環芳香集合，例如吡啶基、2-喹喔啉基和喹啉基。術語(C5-9)雜芳基(C1-6)烷基指被(C5-9)雜芳基取代的(C1-6)烷基，如3-喹啉基甲基。術語稠合(C6-10)芳基(C3-12)環烷基指與(C6-10)芳基共享一個或多個邊的(C3-12)環烷基，例如可包括苯與環戊烷稠合的衍生基團，即2-茚基。術語稠合(C6-10)芳基(C3-12)環烷基(C1-6)烷基指被(C6-10)芳基(C3-12)環烷基取代的(C1-6)烷基。術語稠合(C5-9)雜芳基(C3-8)環烷基指與(C3-8)環烷基共享一個或多個邊的(C5-9)雜芳基，例如可包括環己烷和吡啶稠合而衍生的基團，即四氫喹啉。最後，術語稠合(C5-9)雜芳基(C3-8)環烷基(C1-6)烷基指被(C5-9)雜芳基(C3-8)環烷基取代的(C1-6)烷基。
每個α胺基酸具有一個特徵的「R-基團」，R-基團是與α胺基酸的α碳原子連接的側鏈或殘基。例如，甘氨酸的R-基團側鏈是氫，丙氨酸的是甲基，纈氨酸的是異丙基。α胺基酸的特異R-基團或側鏈見A.L.Lehninger的生物化學課本。
除非另有說明，這些肽酶底物類似物的α胺基酸優選為L-構型，但申請人認為式1化合物的胺基酸可以是D-或L-構型或者是D和L異構體的混合物，包括外消旋混合物。α胺基酸的縮寫列於下表I中。
本發明化合物中優選的是以下式1化合物，其中R1為-CH(CH3)2或-CH2CH2CH3；優選-CH(CH3)2；R2為-H，(C1-8)烷基，(C3-12)環烷基或(C6-10)芳基；優選氫、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、環戊基、環己基、環己基甲基、苯基或苄基；R3為-F；R4為-H，-F，-CF3，-C(O)OR5，-C(O)NR5R6，(C1-8)烷基，環戊基，環己基，苯基或苄基；R5和R6各自獨立地為-H，(C1-8)烷基，環戊基，環己基，苯基或苄基；P2為Pro，Pip，Aze，或Pro(4-OBzl)；P3為Ile，Val或Ala；P4為Ala或一鍵；K為苯甲醯基，叔丁氧羰基，苄氧羰基，異戊醯基，-C(O)N(CH3)2；
或 其中Z為N及B為下式基團 其中R』為氫或C1-6烷基。
優選化合物的具體實例包括(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(2-甲基-1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨醯-L-丙氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺；(SEQ.ID.NO.2)(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-[(4-氯苯基)磺醯氨基羰基]苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(Z)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基磺醯基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[3-(3-吡啶基)丙醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(Z)-N-[3-(3-吡啶基)丙醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-正纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-正纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-丙氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-丙氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-2-氮雜環丁烷羧酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-2-氮雜環丁烷羧酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-D，L-2-哌啶羧酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-D，L-2-哌啶羧酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-羥基脯氨酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-羥基脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-乙醯氧基脯氨酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-乙醯氧基脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-苄氧基脯氨酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-反-4-苄氧基脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-D，L-1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-D，L-1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-4-噻唑烷羧酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-4-噻唑烷羧酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-丙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-丙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3-氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3-氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3-二氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3-二氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺；一般，式1化合物可以用類似與本領域已知方法的標準化學反應來製備，如方案A中所示。
方案A 一般而言，式1a和1b的醯化烯醇可通過式4肽與適當的對稱酸酐2或適當的混合酸酐3(其中R2』和R2不同，但兩個R2均如上所定義)在胺鹼存在下反應來形成，其中鹼例如為叔胺如三乙胺和N-甲基嗎啉，或芳香胺如4-二甲氨基吡啶以及甲基吡啶、二甲基吡啶和吡啶。這些反應物可以在適當的有機溶劑中接觸，如乙腈、二氯甲烷等。典型反應是在約-40℃到約85℃下進行約30分鐘到約48小時。一般，溫度低於0℃時產生1a/1b的高比例，可用色譜或重結晶方法分離出純的1a。一般，溫度高於0℃時1b/1a的比例升高，可用色譜或重結晶方法分離出1b。
或者，式1a和1b的醯化烯醇可通過式4肽與式R2-C(＝O)X(X＝F，Cl，Br，I)在弱鹼性胺如甲基吡啶、二甲基吡啶或吡啶存在下反應來形成。
歐洲專利申請0529568A1公開了式4化合物，其中K為 Z為N或CH；B為下式基團 其中R』為氫或C1-6烷基；R3為-F；R4為-CF3；R1為胺基酸Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met，Nle，Gly的R-基團，或N-甲基衍生物；P2為Ala，bAla，Llu，Ile，Val，Nva，bVal，Met，Nle，Gly，Phe，Tyr，Trp，或Nal(1)，其中α氨基的氮可被R基團取代，R為(C1-6)烷基，(C3-12)環烷基，(C3-12)環烷基(C1-6)烷基，(C4-11)雙環烷基，(C4-11)雙環烷基(C1-6)烷基，(C6-10)芳基，(C6-10)芳基(C1-6)烷基；(C3-7)雜環烷基，(C3-7)雜環烷基(C1-6)烷基，(C5-9)雜芳基，(C5-9)雜芳基(C1-6)烷基，稠合(C6-10)芳基-(C3-12)環烷基，稠合(C6-10)芳基(C3-12)環烷基-(C1-6)烷基，稠合(C5-9)雜芳基(C3 -12)環烷基，或稠合(C5-9)雜芳基(C3-12)環烷基-(C1-6)烷基，或P2為Pro，1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸(Tic)，噻唑烷-4-羧酸(Tca)，或Ind；P3為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或N-甲基衍生物，Pro，Ind，Tic，或Tca，或ε氨基(定義為「omega」基團)上用嗎啉-B-基團取代的Lys或δ氨基(定義為「omega」基團)上用嗎啉-B-基團取代的Orn；P4為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或N-甲基衍生物或一鍵。歐洲專利申請0529568A1全部引入本文作為參考。
在歐洲專利申請0529568中沒有公開的本文所定義的那些式4化合物，可以用下述本領域普通技術人員熟知的合成步驟來製備。
一般而言，所有的式4化合物都可以用本領域已知的類似標準化學反應來製備，如方案B中所示。
方案B K-P4-P3-P2-HN-CH(R1)-C(＝O)-CR3R44(SEQ.ID NO.5)方案B提供了一種製備式4化合物的一般合成方案。
基團P2，P3和K-P4可與式5胺基酸衍生物的游離氨基相連。注意，式5代表其中游離羧基已被以上定義的「CR3R4」殘基取代的P1部分。可用熟知的肽偶聯技術將P2，P3和K-P4連接到未保護的游離氨基化合物(P1CR3R4)上。而且P1，P2，P3和K-P4基團可以任意順序連接，只要最終產物為K-P4-P3-P2-P1-CR3R4。例如，K-P4與P3連接生成K-P4-P3，後者再與P2-P1-CR3R4連接；或者K-P4與P3-P2連接，然後連接到C末端適當保護的P1上，再將C末端保護基轉化為CR3R4。
肽的延長一般是將N-末端殘基的α氨基脫保護，並用所述方法通過肽連接來偶聯下一個N-保護胺基酸。重複這一脫保護和偶聯步驟直到獲得理想的序列。可以按方案B所示用組成胺基酸逐步進行偶聯，或者縮合片段(兩個到數個胺基酸)，或將兩者結合起來，或通過固相肽合成方法進行，後者在Merrifield，J.Am.Chem.Soc.，1963，85，2149-2154中有一般描述，該公開內容引入本文作為參考。當用固相肽合成方法時，C末端羧酸連接到不溶性載體上(通常為聚苯乙烯)。這些不溶性載體含有與羧酸反應的基團，反應形成的鍵要在肽延伸條件下穩定，但隨後又容易裂解。其實例有氯甲基或溴甲基樹脂，羥甲基樹脂和氨甲基樹脂。這些樹脂中許多都是已帶有適當C末端胺基酸的商品。
或者，本發明化合物可以用自動肽合成儀來合成。除此之外，在下列文獻中描述了肽合成Stewart和Young，「Solid Phase PeptideSynthesis」2nd ed.，Pierce Chemical Co.，Rockford，IL(1984)；Gross，Meienhofer，Udenfriend，Eds.，「The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology」Vol 1，2，3，5和9，Academic Press，New York，1980-1987；Bodanszky，「Peptide ChemistryA Practical Textbook」Springer-Verlag，New York(1988)和Bodanszky等，「The Practice of PeptideSynthesis」Sptinger-Verlag，New York(1984)，這些文獻的公開內容引入本文作為參考。
兩個胺基酸之間、胺基酸和肽之間或肽片段之間的偶聯可用標準的偶聯技術進行，例如疊氮化物法、混合碳酸-羧酸酐法(氯甲酸異丁酯)、碳化二亞胺法(二環己基碳化二亞胺、二異丙基碳化二亞胺或水溶性碳化二亞胺)、活性酯法(對硝基苯酯、N-羥基琥珀酸醯亞胺酯)、Woodward K試劑法、羰基二咪唑法、磷試劑法如BOP-Cl、或氧化還原法。這些方法中有些(特別是碳化二亞胺法)可以通過加入1-羥基苯並三唑來增強。這些偶聯反應可以在溶劑中(液相)或在固相中進行。
在偶聯過程中必須保護組成胺基酸的功能團，以避免形成不必要的鍵。可使用的保護基列在以下文獻中Greene 「Protective Groups inOrganic Chemistry」，John WileySons，New York(1981)和「ThePeptidesAnelysis，Synthesis，Biology」Vol.3，Acadmic Press，NewYork(1981)，其公開內容引入本文作為參考。
C末端殘基的α-羧基通常(但不是必須)通過酯保護，該酯可被裂解為羧酸。可使用的保護基包括1)烷基酯如甲酯和叔丁酯，2)芳基酯如苄酯和取代苄酯，或3)可經弱鹼或溫和還原方法裂解的酯如三氯乙基酯和苯乙酮酯。
待偶聯到肽鏈上的胺基酸的α氨基必須保護。可使用本領域中已知的任何保護基。實例包括1)醯基型如甲醯基、三氟乙醯基、鄰苯二甲醯和對甲苯磺醯基；2)芳香甲氨酸酯型如苄氧羰基(Cbz或Z)和取代的苄氧羰基、1-(對聯苯基)-1-甲基乙氧基-羰基、和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；3)脂肪甲氨酸酯型如叔丁氧羰基(Boc)、乙氧羰基、二異丙基甲氧羰基、和烯丙氧基羰基；4)甲氨酸環烷酯型如環戊氧基羰基和金剛烷氧羧基；5)烷基型如三苯甲基和苄基；6)三烷基甲矽烷如三甲基甲矽烷；和7)含硫醇類如苯硫基羰基和二硫雜琥珀醯基。優選的α氨基保護基是Boc或Fmoc，優選Boc。許多用於肽合成的適當保護的胺基酸衍生物是有商業供應的。
新增胺基酸殘基的α氨基保護基在偶聯下一個胺基酸之前要去除。當使用Boc時，選用的方法是純的或二氯甲烷中的三氟乙酸，或二噁烷或乙酸乙酯中的HCl。生成的銨鹽隨後用鹼溶液如緩衝液或二氯甲烷或二甲基甲醯胺中的叔胺在偶聯前或偶聯過程中進行中和。當使用Fmoc時，選用的試劑是二甲基甲醯胺中的哌啶或取代哌啶，但也可以使用仲胺或鹼水溶液。脫保護反應是在0℃到室溫的溫度下進行的。
任何帶有側鏈官能團的胺基酸在製備肽過程中必須用上述方法進行保護。本領域技術人員會認識到對這些側鏈官能團保護基的選擇和使用取決於該胺基酸和肽中其他保護基的存在。選擇這種保護基重要的是在該α胺基酸的脫保護和偶聯過程中不被去除。
例如，當Boc用作α氨基保護基時，下列保護基是適合的對甲苯磺醯基可用於保護諸如Lys和Arg胺基酸的氨基側鏈；對甲基苄基、乙醯氨基甲基、苄基或叔丁基磺醯基可用於保護諸如半胱胺酸等胺基酸的含硫醚側鏈；苄基可用於保護諸如Ser或Thr等胺基酸的含羥基側鏈。
當選用Fmoc保護α氨基時，基於叔丁基的保護基通常是可以接受的。例如可用Boc保護賴氨酸，叔丁基醚保護絲氨酸和蘇氨酸，叔丁基酯保護穀氨酸。
肽延伸完成後除去所有的保護基。當用液相合成時，使用保護基的選擇所決定的任何方法除去保護基。這些方法是本領域中所熟知的。
當使用固相合成時，一般隨著保護基的去除同時將肽從樹脂上裂解下來。當合成中使用Boc保護方案時，用含無水HF的添加劑如二甲硫醚、茴香醚、硫代茴香醚或對甲苯酚處理是從樹脂上裂解肽的優選方法。肽的裂解也可以用其他酸性試劑完成，如三氟甲磺酸/三氟乙酸混合物。如果使用Fmoc保護方法，用前文所述試劑去除N-末端的Fmoc基團。再用三氟乙酸溶液和各種添加劑如茴香醚等除去其他保護基並將肽從樹脂上解下。
或者，可以用如方案C所示的本領域已知的類似標準化學反應來製備式4化合物。
方案C 方案C提供了製備式4化合物的一種替代的一般合成方法。可以如前述方案B中的方法將P2、P3和K-P4連接到式6氨基醇衍生物的游離氨基上，生成式7的肽醇。
式7肽醇的醇官能團然後用本領域普通技術人員已知的技術和方法氧化生成式4化合物，如使用草醯氯和二甲基亞碸的Swern氧化。
用於方案B和方案C的起始物是本領域普通技術人員易於得到的。例如，胺基酸P2、P3和K-P4(其中K為氫)有商品供應。另外以下氨基保護基K及功能與其相當的其他末端氨基保護基在歐洲專利申請OPINo.0363284(1990年4月11日)中有描述，其中K為乙醯，琥珀醯基，苯甲醯，叔丁氧羰基，苄氧羰基，對甲苯磺醯基，丹醯、異戊醯、甲氧基琥珀醯基、1-金剛烷磺醯基、1-金剛烷乙醯基、2-羧基苯甲醯基、苯乙醯基、叔丁基乙醯基、雙((1-萘基)甲基)乙醯基、或-A-Rz，其中 Rz為被1-3個獨立地選自下組的取代基適當取代的含6、10或12個碳的芳基氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含1-6個碳的烷基、含1-6個碳的烷氧基、羧基、烷基部分含1-6個碳的烷基羰基氨基、5-四唑基、和含1-15個碳的醯基磺醯氨基(即醯氨基磺醯基和磺醯氨基羰基)，條件是當醯基磺醯氨基含有芳基時，該芳基可進一步被選自氟、氯、溴、碘和硝基的基團取代。另外，二甲基氨基甲醯氯有商品供應，對其中K為-C(O)N-(CH3)2或 的式1化合物， 可通過文獻製備來得到。所述化合物轉化為K-P4取代基的合成方法是本領域普通技術人員熟知的。
式5起始氨基化合物是本領域普通技術人員易得的。例如在歐洲專利申請0195212(發明人Michel等，
公開日為1986年9月24日)中描述了一些式5保護的氨基化合物，其中CFR3R4為-CF3，-CHF2，-CF2C(＝O)NHR6』或-CF2C(O)OR6』(其中R6』為C1-4直鏈或支鏈烷基、苯基、環己基、環己基甲基或苄基)。另外，歐洲專利申請OPI No.0503203(1992年9月16日)描述了其中CFR3R4為-CF3，-CF2(CH2)tCH3(其中t＝2、3或4)或-CF2CF3的式5氨基化合物。Biochem.J.(1987)，241，871-5，Biochem.J.(1986)，239，633-40和美國專利NO.4,518,528(1985年5月21日)中公開了其中CFR3R4為-CFH2的式5氨基化合物。歐洲專利申請0410411(發明人Bey等，
公開日為1991年1月30日)以及歐洲專利申請0529568(發明人Peet等，
公開日為1993年3月3日)描述了其中其中CFR3R4為-CF2CF3的式5氨基化合物。與此相似，1991年12月20日遞交的專利申請PCT/US91/09741(發明人Daniel Schirlin等)中公開了其中CFR3R4為CF2C(＝O)NHR6』(其中R6』為C1-6烷基、芳基或芳基烷基)的式5氨基化合物。以上文獻全文併入這裡作為參考。
另外，用於方案B和方案C的其他起始物可通過以下本領域普通技術人員熟知的合成方法來製備。
式K-P4取代胺基酸，其中K為 其中Z為N或CH，B為下式 其中R』為氫或C1-6烷基，它們可用本領域熟知的類似標準化學反應來製備。
製備其中K為 其中B為-C(＝O)-的取代胺基酸K-P4的方法示於方案D中，其中P4和Z如前所定義或為這些基團的功能等價物。
方案D 具體講，其中K為 其中B為-C(＝O)-的取代胺基酸K-P4，通過其中K為氫的胺基酸K-P4在1-4摩爾當量的能作為滷化氫接受體的適當胺存在下與式8醯滷偶聯而製得。作為滷化氫接受體的適當胺是有機叔胺如三(低級烷基)胺，例如三乙胺；或芳香胺如甲基吡啶、二甲基吡啶或吡啶。當使用吡啶、甲基吡啶或二甲基吡啶時，可以大大過量地使用它們，因而作為反應溶劑。尤其適合於該反應的是N-甲基嗎啉(「NMM」)。偶聯反應可按如下進行向其中K為氫的胺基酸K-P4溶液中加入過量如過量1-5倍(優選4倍)的胺，然後加入式8的醯氯。溶劑可以是任何適當的溶劑，例如石油醚，氯代烴如四氯化碳、二氯乙烷、二氯甲烷或氯仿；氯代芳烴如1，2，4-三氯苯或鄰二氯苯；二硫化碳；醚類溶劑如乙醚、四氫呋喃或1，4-二噁烷；或芳烴溶劑如苯、甲苯或二甲苯。二氯甲烷是這種偶聯反應的優選溶劑。反應可進行15分鐘到6小時，這取決於反應物、溶劑、濃度、和其他因素，如溫度，它可以在約0-60℃，常為室溫左右，即25℃。其中K為 其中B為-C(＝O)-的N-保護胺基酸K-P4可用任何適當技術如矽膠層析從反應混合物中分離得到。
其中K為 其中B不為-C(＝O)-的N-保護胺基酸K-P4可按類似方法製備，只是用適當的中間體 其中B不為-C(＝O)-及A為Cl或OH(相應的酸、醯氯或磺醯氯)代替方案D中的式8化合物。
式8醯氯和下式適當中間體 其中B不為-C(＝O)-及A為Cl或OH(相應的酸、醯氯或磺醯氯)有商業供應，並且用本領域普通技術人員熟知的技術和方法易於製得。
例如，下式的適當中間體 可如方案E中所示製備，其中所有取代基如前所定義。
方案E
方案E提供了一種製備下式適當中間體的一般合成方法 其中Z如前所定義。
步驟a中，適當的2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯10(Nippon KagakuZasshi 1967，88，563)用本領域普通技術人員已知的技術和方法如亞硫醯氯轉化為其醯氯，生成相應的6-甲氧羰基煙醯氯11。
步驟b中，醯氯11用本領域普通技術人員熟知的技術和方法與嗎啉12醯胺化，生成相應的5-(嗎啉-4-羰基)-2-吡啶羧酸甲酯13。
步驟c中，13的甲酯功能團用本領域普通技術人員熟知的技術和方法水解，例如用甲醇中的氫氧化鋰，得到5-(嗎啉-4-羰基)-2-吡啶羧酸14。
另外，下式的適當中間體 可如方案F中所示製備，其中所有取代基如前所定義。
方案F
方案F提供了一種製備下式適當中間體的一般合成方法 其中Z如前所定義。
步驟a中，2，5-吡啶二羧酸2-甲酯10(Nippon Kagaku Zasshi1967，88，563)的游離羧酸功能團用本領域普通技術人員熟知的技術和方法如二環己基碳化二亞胺叔丁醇加合物(Synthesis，1979，570)轉化為其叔丁基酯，生成相應的2，5-吡啶二羧酸2-甲酯5-叔丁基酯15。
例如，將2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯和過量1摩爾的二環己基碳化二亞胺叔丁醇加合物在適當的有機溶劑如二氯甲烷中混合。該反應一般在0℃到室溫下進行2-24小時。用本領域中的標準提取方法從反應混合物中分離2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯5-叔丁基酯15，並經結晶方法純化。
在步驟b中，15的甲基酯功能團用嗎啉12醯胺化，得到相應的6-(嗎啉-4-羰基)煙酸叔丁基酯16。
例如，2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯5-叔丁基酯15在適當的有機溶劑如四氫呋喃中與過量1摩爾的嗎啉接觸。該反應一般在室溫到回流溫度下進行5小時到3天。用本領域中的標準提取方法從反應混合物中分離6-(嗎啉-4-羰基)煙酸叔丁基酯16，並經結晶方法純化。
在步驟c中，6-(嗎啉-4-羰基)煙酸叔丁基酯16用例如HCl/硝基甲烷水解，得到相應的6-(嗎啉-4-羰基)煙酸17。
-般而言，式4化合物可以用本領域已知的類似標準化學反應製備。對於其中CFR3R4為-CFH2，-CFH2或-CF3的式4化合物，用於標準肽偶聯技術的中間體是其中X』為CFR3R4的式IIa和IIb化合物，其中CFR3R4為-CFH2，-CFH2或-CF3，R1如前所定義。 類似地，在前述方案中的指稱P2、P3、P4和K如前所定義，只是其下屬分類或修飾用具體指稱這種修飾的輔助符號表示。注意方案G中「X』」用於代表CFR3R4基團的下屬修飾。這些化合物的製備和應用示於方案G中。
方案G 其中R6為苯基或其他相當的殘基，X』為-CF2H或-CF3。H_A』_表示酸。除非另有說明，所有的取代基均如前所定義。試劑和起始物是本領域普通技術人員易於得到的。
一般，取代的吖內酯19是從N-保護胺基酸18在標準反應條件下製得的，即胺基酸衍生物18在酸酐存在下加熱。所生成的吖內酯19與二氟乙酸酐或三氟乙酸酐或醯滷反應，得到的氟代中間體(分離或不分離)用無水草酸處理生成N-保護的氟代酮20，再經化學還原成為醯胺醇21。醯胺21在標準酸性條件下裂解生成其胺的酸鹽[例如，其鹽酸鹽22]。中和後，醇IIa可與KP4P3P2OH用標準肽化學技術偶聯，生成的化合物23進行Swern氧化得到目標產物24a和24b(分別為酮或水合物)。或者，醇IIa可被氧化成IIb，或者用標準肽化學技術與KP4P3P2OH偶聯。當使用這種替換途徑時，氨基先用Boc保護基保護，OH功能團經Swern氧化方法氧化為酮，然後除去Boc保護基，生成的化合物IIb再與KP4P3P2OH偶聯。
方案G也適用於製備其中CFR3R4為-CF2R4』的式4化合物，其中R4』為(C1-8)烷基、(C3-12)環烷基、(C6-10)芳基或(C6-10)芳基(C1-6)烷基，取代的吖內酯19在鹼如三乙胺存在下用醯滷處理，然後用4-二甲氨基吡啶處理(Tetrhedron Letters，1986，4437-4440)。
類似地，方案G也適用於製備其中CFR3R4為-CF2F3的式4化合物，取代的吖內酯19用五氟丙酸酐或醯滷處理。
製備其中CFR3R4為-CF2F3的式4化合物的另一途徑示於方案H中。
方案H
所需起始物化合物25或有商業供應或應用已知方法和技術易於得到。術語「Pg」指如前文詳細定義的適當保護基。
方案H步驟a中，保護的胺基酸25被轉化為異羥肟酸酯26。這種醯胺化可以利用保護胺基酸25和N-烷基O-烷基羥基胺之間類似兩個胺基酸的偶聯反應來進行。該標準偶聯反應可用前文所述兩個胺基酸之間的標準偶聯方法進行，生成異羥肟酸酯26。
在步驟b中，保護的異羥肟酸酯26被轉化為保護的五氟酮28[或29]。該反應可以利用以下文獻中描述的此類反應來進行N.P.Peet，Tetrahedron Letters，33(1992)，3265-3268。
在步驟c中，異羥肟酸酯26在本領域熟知的條件下脫保護，生成脫保護的異羥肟酸酯，如T.H.Geen 「Protection Groups in OrganicSynthesis」，Jhon Wiley and SONS，1981，第7章中所述。用方案G中的前述方法與下一個適當保護的胺基酸偶聯進行肽連接、或經片段縮合或結合兩種方法，脫保護的異羥肟酸被延長，得到延長的肽27。
在步驟d中，酮28在前述條件下脫保護。用方案G中的前述方法與下一個適當保護的胺基酸偶聯進行肽連接、或經片段縮合或結合兩種方法，脫保護的酮28被延長，得到延長的酮29。
或者，25的相應保護胺基酸酯[即PgNH-CH(R1)OR4』，26a，其中R4』如前所定義]可以代替異羥肟酸26。25的相應保護胺基酸酯有商業供應或用本領域普通技術人員熟知的方法易於從25合成。步驟b中，胺基酸酯26a用直接類似於相應異羥肟酸所有方法的方法轉化為保護的五氟酮28[或29]。步驟c和d與使用異羥肟酸26時的相同。
方案H也適用於製備其中CFR3R4為-CF2CF2CF3或-CF2CF2CF2CF3的式4化合物，胺基酸酯26a在4-8當量MeLi/LiBr存在下在適當的無水溶劑如乙醚、THF或甲苯中用4-8當量的全氟丙基碘或全氟丁基碘烷基化；反應在-100℃到0℃，優選-30℃到-80℃的溫度下進行，分別生成保護的全氟丙基氨基酮和保護的全氟丁基氨基酮。步驟c和d與使用異羥肟酸26時的相同。
為製備其中CFR3R4為CF2C(＝O)-NR5R6的式4化合物，可使用方案I的方法，其中R5和R6如式1中所定義。
方案I
在實施方案I的步驟時優選從醛30開始，其中保護基是氨基甲酸酯，優選其中Pg為苄氧羰基(CBZ)。如此保護的醛在鋅存在下與溴二氟乙酸酯(優選乙基酯)進行縮合反應。該反應優選在無水非質子溶劑中在氮氣氛進行，溶劑如為四氫呋喃、乙醚、二甲氧基乙烷等。將反應混合物在回流溫度下，優選約60℃下溫和加熱約1-12小時。方案I中的酯31通過用相應的伯胺35在無水條件下處理，優選使用溶劑如THF，轉化為仲胺或叔醯胺32。該醯胺化反應在0℃或室溫下引發，可將反應混合物加熱至回流以使反應完全。
步驟c中，這樣形成的醯胺32在本領域熟知的條件下脫保護，生成脫保護的醯胺32，如T.H.Geen 「Protection Groups in OrganicSynthesis」，Jhon Wiley and SONS，1981，第7章中所述。用方案B中的前述方法與下一個適當保護的胺基酸偶聯進行肽連接、或經片段縮合或結合兩種方法，脫保護的醯胺被延長，得到延長的肽33。
步驟d中，式33醇的醇官能團用本領域普通技術人員已知的技術和方法氧化生成式34化合物，如使用草醯氯和二甲基亞碸的Swern氧化。
為製備其中CFR3R4為CF2C(＝O)-OR5的式4化合物，可使用方案J的方法，其中R5如式1中所定義。
方案J
步驟a與方案I相似，步驟a可以適用於R5的所有定義。類似地，方案J步驟b與方案I步驟c中所用方法相同或相似，方案J步驟c與方案I步驟d中所用方法相同或相似。
式1化合物的合成中使用的所有胺基酸或有商品供應或易於合成。例如，P2中定義的胺基酸衍生物Pro(4-OAc)可通過用本領域普通技術人員熟知的技術酯化Pro殘基而製得。
另外，其中CFR3R4為-CHFR4』，其中R4』為(C1-8)烷基、(C3-12)環烷基、(C6-10)芳基或(C6-10)芳基(C1-6)烷基的式4化合物可按方案K中所述方法製備，其中所有取代基如前所定義。注意所有氨基用叔丁氧羰基保護，本領域技術人員可以用其他適當氨基保護基代替。
方案K
步驟a中，式39的適當酸按本領域普通技術人員熟知的技術和方法用N-甲基-N-甲氧基胺醯胺化，如使用1，3-二環己基碳化二亞胺(DCC)和1-羥基苯並三唑(HOBT)的偶聯反應，得到相應的式40的醯胺。
步驟b中，適當的式40醯胺用適當的烷基金屬化合物41烷基化，得到相應的式42的酮化合物。
例如，適當的式40醯胺在適當的非質子無水有機溶劑如四氫呋喃或乙醚中用式41的烷基金屬化合物處理。該反應一般在-78℃到-40℃的溫度下進行30分鐘到5小時。用本領域已知的萃取方法從反應區中回收相應的式42酮化合物，並可通過層析純化。
步驟c中，式42的適當酮化合物用N-氟磺醯胺化合物43或可替換的氟化試劑44、45或46氟化，生成式47氨基保護化合物，它是其中末端氨基被Boc取代且CFR3R4為-CHFR4』的式5氨基化合物。
例如，適當的式42酮化合物在適當的無水非質子有機溶劑如四氫呋喃中在-78℃到-40℃下，用適當的非親核鹼如二異丙基氨基鋰處理5分鐘到2小時。然後反應混合物用N-氟磺醯胺化合物42處理，該反應在-78℃到-40℃下進行30分鐘到10小時。用本領域中已知的萃取方法從反應區中回收其中CFR3R4為-CHFR4』的N-t-Boc保護的式5氨基化合物，並可通過層析純化。
下列實施例提供了典型的合成實例。這些實施例僅用於說明本發明，而絕無意限制本發明的範圍。本文所用術語的含義如下「g」指克；「mmol」指毫摩爾；「mL」指毫升；「bp」指沸點；「℃」指攝氏度；「mmHg」指毫米汞柱；「μL」指微升；「μg」指微克；「μM」指微摩爾；「Et3N」指三乙胺；「CH2Cl2」指二氯甲烷；「EtOAc」指乙酸乙酯；「NMM」指N-甲基嗎啉；「IBCF」指氯甲酸異丁基酯；「DMF」指N，N-二甲基甲醯胺。燃燒分析結果落在計算值的±0.4％之內。除非另有說明，NMR譜是在CDCl3中獲得的。1H和13CNM信號是以低場於四甲基甲矽烷的ppm數報導的，19FNMR信號是以低場於CFCl3的ppm數報導的。偶合常數以赫茲(Hz)表示。
實施例1製備(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺 MDL 103，279將N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-脯氨酸醯胺(2.00g，3.16mmol，歐洲專利申請0529568Al)、Et3N(0.66mL，4.74mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.77g，6.32mmol)在二氯甲烷中的溶液在攪拌下氮氣氛下冷卻到-20℃(乾冰-CCl4浴)，5分鐘內向其中滴加乙酸酐(0.89mL，9.48mmol)。-20℃下1.5小時後用二氯甲烷(70mL)稀釋反應混合物，並用0.5N的鹽酸水溶液(2×50mL)、再用50mL的0.5N鹽酸水溶液-鹽水(1∶9)洗滌該有機溶液。乾燥(MgSO4)並濃縮得到粗產物。該粗產物可用乙酸乙酯-己烷重結晶得到白色固體結晶標題化合物(MDL103，279；2.25g，收率85％，兩次)，mp127-137(分解)。TLC Rf0.34(1∶9 丙酮-EtOAc).1HNMR δ 8.02(brs，1H，NHC＝C)，7.88-7.84(m，2H，1/2芳基)，7.51-7.46(m，2H，1/2芳基)，6.85(brd，1H，J＝8.9Hz，NH)，4.87(dd，1H，J＝6.3，8.8Hz，CH)，4.65(dd，1H，J＝2.6，8.0Hz，CH)，3.92-3.54(m，8H)，3.39(brs，2H)，2.73(七重峰 1H，J＝6.9Hz，CHC＝C)，2.52-2.42(m，1H)，2.24(s，3H，COCH3)，2.25-1.85(m，4H)，1.08(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.07(d，3H，J＝6.7Hz，CH3)，1.05(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.01(d，3H，J＝6.8Hz，CH3).19FNMR δ-83.55(s，CF3)，-116.50(brs，CF2).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)675(MH+，25)，359(100)，317(75)，262(28)，230(40)，210(22)，70(52).元素分析(C31H39F5N4O7)C，H，N.
實施例2製備(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺 按實施例1中所用的相同方法，用丙酸酐處理N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-脯氨酸醯胺，粗產物在乙酸乙酯中重結晶，得到白色固體MDL104，226。產率69％，mp138-144℃(分解)。TLC Rf0.35(1∶9丙酮-EtOAc).1HNMRδ8.00(brs，1H，NHC＝C)，7.88-7.84(m，2H，1/2 aryl)，7.52-7.46(m，2H，1/2 aryl)，6.85(brd，1H，J＝8.8Hz，NH)，4.87(dd，1H，J＝6.3，8.8Hz，CH)，4.65(dd，1H，J＝2.6，8.0Hz，CH)，3.92-3.53(m，8H)，3.40(brs，2H)，2.71(七重峰，1H，J＝6.9Hz，CHC＝C)，2.52(q，2H，J＝7.5Hz，COCH2)，2.50-2.40(m，1H)，2.24-1.85(m，4H)，1.22(t，3H，J＝7.5Hz，CH3)，1.08(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.07(d，3H，J＝6.5Hz，CH3)，1.05(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.01(d，3H，J＝6.7Hz，CH3).19FNMRδ-83.57(s，CF3)，-116.27和-116.55(AB四重峰J＝280Hz，CF2).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)689(MH+，17)，414(20)，373(100)，317(22)，77(54)，75(23)，70(20).元素分析(C32H41F5N4O7)C，H，N.實施例3製備(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(2-甲基-1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺 MDL105，658按實施例1中所用的相同方法，用異丁酸酐處理N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-脯氨酸醯胺，粗產物在乙酸乙酯中重結晶，得到白色固體MDL105，658。產率54％，mp135-142℃(分解)。
TLC Rf0.34(1∶9丙酮-乙酸乙酯)。1HNMRδ7.98(brs，1H，NHC＝C)，7.89-7.84(m，2H，1/2芳基)，7.51-7.46(m，2H，1/2芳基)，6.87(brd，1H，J＝8.8Hz，NH)，4.87(dd，1H，J＝6.3，8.8Hz，CH)，4.65(dd，1H，J＝2.6，8.1Hz，CH)，3.94-3.55(m，8H)，3.40(brs，2H)，2.74(七重峰1H，J＝7.0Hz，COCH)，2.68(七重峰，1H，J＝6.9Hz，CHC＝C)，2.50-2.40(m，1H)，2.25-1.86(m，4H)，1.26(d，6H，J＝7.0Hz，2x CH3)，1.09(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.07(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.05(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.01(d，3H，J)6.7Hz，CH3).19FNMRδ-83.68(s，CF3)，-116.16 and-116.66(AB四重峰，J＝282Hz，CF2).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)703(MH+，20)，387(56)，317(78)，290(28)，230(35)，91(100)，89(80)，71(90)，70(80).元素分析C33H43F5N4O7)C，H，N.
實施例4製備(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺 MDL105，457將N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丁基]-L-脯氨酸醯胺(0.50g，0.79mmol)、Et3N(0.16mL，1.19mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.19g，1.58mmol)在二氨甲烷(2mL)中的溶液攪拌下在氮氣氛下加熱至回流，向其中滴加乙酸酐(0.22mL，2.37mmol)。回流30分鐘後，冷卻反應混合物，用二氯甲烷(45mL)稀釋反應混合物，並用0.5N的鹽酸水溶液(2×35mL)、再用25mL的0.5N鹽酸水溶液-鹽水(1∶9)洗滌該有機溶液。用乙酸乙酯洗脫，進行快速層析(5×17cm矽膠柱)，然後在乙醚中重結晶，得到白色固體MDL105，457；收率49mg(9％)。TLC Rf＝0.17(EtOAc).1HNMRδ7.96(brs，1H，NHC＝C)，7.89-7.83(m，2H，1/2芳基)，7.53-7.46(m，2H，1/2芳基)，6.78(brd，1H，J＝8.7Hz，NH)，4.84(dd，1H，J＝6.6，8.8Hz，CH)，4.61(dd，1H，J＝2.6，8.0Hz，CH)，3.97-3.53(m，8H)，3.41(brs，2H)，3.13(七重峰 1H，J＝6.7Hz，CHC＝C)，2.50-2.39(m，1H)，2.20-2.03和2.01-1.87(prm，4H)，2.13(s，3H，COCH3)，1.11(d，6H，J＝6.7Hz，2x CH3)，1.06(d，3H，J＝6.7Hz，CH3)，1.02(d，3H，J＝6.7Hz，CH3).19FNMRδ-84.73(t，J＝3Hz，CF3)，-113.63(brs，CF2).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)675(MH+，17)，635(16)，385(100)，121(30).
實施例5製備(E)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨醯-L-丙氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺(SEQ-ID.NO.2) MDL45，037方法A將N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨醯-L-丙氨醯-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸醯胺(1.00g，1.97mmol，歐洲專利申請0195212)在乙腈(5ML)中的溶液在氮氣氛下攪拌並冷卻到-20℃(乾冰-CCl4浴)，向其中加入乙酸酐(0.56mL，5.90mmol)，然後立即加入4-二甲氨基吡啶(480mg，3.93mmol)。-20℃下2小時後用二氯甲烷(75mL)稀釋反應混合物，並用0.5N的鹽酸水溶液(2×50mL)、再用50mL的0.5N鹽酸水溶液-鹽水(1∶9)洗滌該有機溶液。乾燥(MgSO4)並濃縮得到粗產物。該粗產物用乙酸乙酯-己烷(85∶15)洗脫進行快速層析(6×17cm矽膠柱)，得到白色固體MDL45，037
-L-丙氨醯-L-丙氨醯-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸醯胺(254mg，0.50mmol，歐洲專利申請0195212)在吡啶(1.25mL)中的溶液在氮氣氛下攪拌並用乾冰-水浴冷卻，向其中滴加乙酸酐(0.47mL，5.0mmol)。26小時後用二氯甲烷(45mL)稀釋反應混合物，並用0.5N的鹽酸水溶液(2×30mL)、再用40mL的0.5N鹽酸水溶液-鹽水(1∶9)洗滌該有機溶液。乾燥(MgSO4)並濃縮得到粗產物
。用乙酸乙酯-己烷(4∶1)洗脫進行快速層析(3×16cm矽膠柱)，得到MDL45，037。
其中CFR3R4取代基為-CF3的實施例6-8標題化合物的中間體都可用方案L的方法合成。
方案L
方案L(續)
實施例6製備(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺 步驟aN-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨醯-N-[3，3，3-三氟-2-羥基-1-(1-甲基乙基)-丙基]-L-脯氨酸醯胺(49)將Boc-L-Val-L-Pro-OH(2.00g，6.36mmol)在乙腈(85mL)的溶液在氮氣氛下攪拌並冷卻至-18℃，向其中加入NMM(0.70mL，6.36mmol)，然後加入IBCF(0.83mL，6.36mmol)。15分鐘後加入48(只有一對對映體，1.78g，6.36mmol)和NMM(0.70mL，6.36mmol)在乙腈(25mL)中的稀懸浮液。攪拌3小時，然後讓反應混合物溫熱至室溫。濃縮反應混合物，並將殘餘物在二氯甲烷(400mL)和0.5N鹽酸水溶液(200mL)之間分配。酸性水層用另外的100mL二氯甲烷萃取，合併有機萃取物，用0.5N鹽酸、碳酸氫鈉飽和水溶液(2×200mL)和鹽水(125mL)洗滌。乾燥(MgSO4)並濃縮，得到粗品49。用乙醚-己烷研製，過濾得到49(2.41g(81％)，兩個非對映異構體的混合物，比率≈1∶1)，灰白色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ7.70(brd，0.5H，NH)，7.39(brd，0.5H，NH)，6.77(brd，0.5H，NH)，6.71(brd，0.5H，NH)，6.39(d，0.5H，OH)，6.36(d，0.5H，OH)，4.40-4.26(m，1H，CH)，4.09-3.94(m，2H)，3.94-3.46(m，3H)，2.20-1.60(m，6H)，1.37(s，9H，tBu)，0.98-0.72(m，12H，4x CH3).19FNMRδ-74.04(d，J＝6.8Hz，CF3，非對映異構體A)，-74.14(d，J＝6.8Hz，CF3，非對映異構體B).MS(DCI，CH4)m/z(相對密度)468(MH+，40)，412(92)，368(100).
元素分析(C21H36F3N3O5)C，H，N.
步驟bN-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-纈氨醯-N-[3，3，3-三氟-2-羥基-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸醯胺(50)攪拌下向冷卻到-60℃的草醯氯(0.31mL，3.56mmol)二氯甲烷(30mL)溶液中滴加DMSO(0.51mL，7.12mmol)。6分鐘後加入49(1.11g，2.37mL)在二氯甲烷(5mL)和DMSO(3mL)混合物中的溶液，再過20分鐘加入三乙胺(1.99mL，14.25mmol)。讓反應混合物溫熱至室溫，用二氯甲烷(100mL)稀釋，用0.5N鹽酸水溶液(2×150mL)、碳酸氫鈉半飽和水溶液(2×100mL)和鹽水(75mL)洗滌。乾燥(MgSO4)並濃縮得到白色泡沫狀化合物50(1.06g，96％，兩個非對映異構體的混合物，比率≈1∶1)。
1HNMRδ7.98(brd，0.5H，NH)，7.61(brd，0.5H，NH)，5.23(d，1H，NH)，4.87-4.79(m，1H，CH)，4.74(dd，0.5H，CH)，4.64(dd，0.5H，CH)，4.36-4.24(m，1H，CH)，3.82-3.68和3.65-3.54(prm，2H，CH2N)，2.57-1.76(m，6H，CH2CH2和2xCH)，1.42(s，9H，tBu)，1.10-0.87(m，12H，4x CH3).
19FNMR δ-76.94(s，CF3，非對映異構體A)，-77.00(s，CF3，非對映異構體B).
MS(DCI，CH4)m/z(相對密度)466(MH+，58)，410(100)，390(17)，366(17).
HRMS(C21H35F3N3O5)(MH+)計算466.2529，實測466.2507.
步驟cN-L-纈氨醯-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸醯胺鹽酸鹽(51)將攪拌後的化合物50(1.19g，2.56mmol)的溶液冷卻至0℃，並用HCl處理直到飽和。將混合物在0℃下攪拌30分鐘，真空除去溶液，得到白色固體化合物51(1.0g，97％，兩個酮式非對映異構體和兩個水合物形式非對映異構體的混合物，非對映異構體的比率為3∶1，水合物與酮的比率為4∶1)。1HNMR(DMSO-d6)δ8.80(d，J＝7.15Hz，0.1H，NH)，8.73(d，J＝7.15Hz，0.2H，NH)，8.14(bs，5H)，7.69(d，J＝10.2Hz，1H，NH)，7.52(d，J＝10.2Hz，0.2H，NH)，6.93(s，0.3H，OH)，6.90(s，0.7H，NH)，6.84(s，0.7H，NH)，6.79(s，0.3H，NH)，4.75(多個m，2H)，4.04-3.91(多個m，3H)，3.73(m，2H)，3.47(m，2H)，2.34-1.66(多個m，6H，2x β-CH Val和CH2CH2)，1.06-0.77(m，12H，4x CH3).19FNMR(DMSO-d6)δ-74.84(s，COCF3)，-74.98(s，COCF3)，-80.88[s，C(OH)2CF3]，-81.10[s，C(OH)2CF3].IR(KBr壓片)3431，2970，1647，1595，1506，1471，1172cm-1.MS(DCI，CH4)m/z(相對密度)366(MH+，100)，267(48)，197(20)，169(25).HRMS(C16H27F3N3O3)(MH+游離胺)計算366.2005，實測366.1995.
步驟dN-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙烯基]-L-脯氨酸醯胺(52)向攪拌後的4-(4-嗎啉基羰基)苯甲酸(1.10g，4.68mmol)在1，2-二氯乙烷(10mL)中的懸浮液中加入苄基三乙基氯化銨(5mg)和亞硫醯氯(4.80mmol，0.35mL)，並將混合物加熱回流。2小時後冷卻反應溶液至室溫，真空濃縮得到醯氯。將該醯氯溶解在二氯甲烷(10ml)中，並加入到51(1.00g，2.49mmol)和NMM(0.82mL，7.50mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中。攪拌3小時後，用二氯甲烷(50mL)稀釋，用0.5N鹽酸水溶液(2×40mL)、碳酸氫鈉飽和水溶液(2×40mL)和鹽水(25mL)洗滌。乾燥(MgSO4)並濃縮得到粗品52。快速層析純化得到白色泡沫狀52(2∶1∷LLL∶LLD)。產率＝1.20g(82％)。1HNMRδ7.85(d，J＝8.0Hz，2H，芳基)，7.76(d，J＝7.0Hz，0.33H，NH)，7.47(d，J＝8.0Hz，2H，芳基)，7.34(d，J＝7.5Hz，0.66H，NH)，6.80(d，J＝8.6Hz，1H，NH)，4.86(m，2H)，4.70(dd，J＝8.0，2.13Hz，0.33H，CH of Pro)，4.61(dd，J＝8.3，3.1Hz，0.66H，CH of Pro)，3.91-3.35(m，10H)，2.53-1.80(多個m，6H，2x β-CH Val和CH2CH2)，1.12-0.88(m，12H，4x CH3).19FNMRδ-76.89(s，CF3)，-76.96(s，CF3).MS(DCI，CH4)m/z(相對密度)583(MH+，20)，317(10)，267(100).HRMS(C28H38F3N4O6)(MH+)計算583.2793，實測583.2765.
步驟e(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺(MDL103，467)按實施例5方法A的一般步驟用乙酸酐處理52，然後快速層析(用丙酮-乙酸乙酯(1∶9)洗脫)並在乙酸乙酯-己烷中重結晶，得到白色細針狀的DML103，467(產率38％，mp121-129℃)。TLC Rf0.34(15∶85丙酮-EtOAc).1HNMRδ8.01(brs，1H，NHC＝C)，7.89-7.84(m，2H，1/2 aryl)，7.51-7.46(m，2H，1/2 aryl)，6.83(brd，1H，J＝8.8Hz，NH)，4.87(dd，1H，J＝6.3，8.7Hz，CH)，4.67(dd，1H，J＝2.4，8.0Hz，CH)，3.93-3.52(m，8H)，3.40(brs，2H)，2.72(septet，1H，J＝6.9Hz，CHC＝C)，2.55-2.45(m，1H)，2.25(s，3H，COCH3)，2.23-2.02(m，3H)，1.99-1.85(m，1H)，1.07(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.06(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.05(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.01(d，3H，J＝6.7Hz，CH3).19FNMRδ-67.30(s，CF3).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)625(MH+，90)，414(17)，309(100)，86(35)，85(38).元素分析(C30H39F3N4O7)C，H，N.
實施例7製備(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺 步驟aN-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨醯-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸醯胺(53)攪拌下向氨氣下的化合物51(430mg，1.07mmol)的二氯甲烷(35mL)溶液中加入NMM(0.24mL，2.14mmol)，然後立即加入4-嗎啉羰基氯(0.50mL，4.28mmol)。2.5小時後，濃縮反應混合物，得到53粗品。快速層析(20∶80∷丙酮∶乙酸乙酯)純化得到白色固體53(240mg，47％，兩個酮式非對映異構體和兩個水合物形式非對映異構體的混合物，比率分別≈9∶9∶1∶1)。19FNMRδ-76.94(s，COCF3)，-77.01(s，COCF3)，-82.51[s，C(OH)2CF3]，-83.04[s，C(OH)2CF3].MS(DCI，CH4)m/2(相對密度)479(MH+，62)，267(43)，213(100)，185(22).HRMS(C21H33F3N4O5)(M+)實測478.2403，計算478.2401.
步驟b(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺(DML105，070)按實施例5方法A的一般步驟用乙酸酐處理53，然後快速層析(用丙酮-乙酸乙酯(1∶9)洗脫)純化，得到白色固體DML105，070(產率6％)。TLC Rf0.33(15∶85 丙酮-EtOAc).1HNMRδ8.12(brs，1H，NHC＝C)，5.12(brd，1H，J＝8.5Hz，NH)，4.68(dd，1H，J＝1.6，7.7Hz，CH)，4.52(dd，1H，J＝6.5，8.5Hz，NH)，3.92-3.79(m，1H，1/2 CH2N)，3.75-3.59(m，5H，1/2 CH2N和CH2OCH2)，3.49-3.31(m，4H，CH2NCH2)，2.71(七重峰1H，J＝6.9Hz，CHC＝C)，2.55-2.43(m，1H)，2.25(s，3H，COCH3)，2.16-1.81(m，4H)，1.05(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.04(d，3H，J＝7.0Hz，CH3)，1.01(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，0.96(d，3H，J＝6.6Hz，CH3).19FNMRδ-67.33(s，CF3).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)521(MH+，59)，501(10)，461(17)，337(10)，309(68)，213(100)，185(22)，114(10)，85(10)，84(15)，70(12).HRMS(C23H36F3N4O6)(MH+)計算521.2587，實測521.2603.
實施例8製備(E)-N-[4-[(4-氯苯基)磺醯氨基羰基]苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺 萬法A；步驟aN-[4-[(4-氯苯基)磺醯氨基羰基]苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基]-L-脯氨酸醯胺(54)攪拌下向氨氣下的4-[4-[(4-氯苯基)磺醯氨基羰基]苯甲酸(0.68g，2.02mmol；歐洲專利申請0189305Bl)在二氯甲烷(18mL)和DMF(2mL)中的稀懸浮液中，滴加草醯氯(0.18mL，2.02mmol)。50分鐘後加入51(0.81g，2.02mmol)和NMM(1.00mL，9.07mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液。攪拌3小時後將反應混合物傾入水(75Ml)中，分離各層。水層用乙酸乙酯(2×35mL)萃取，合併有機萃取物，用1當量鹽酸水溶液(2×30mL)再用鹽水(30mL)洗滌。乾燥(MgSO4)並濃縮得到54粗品。快速層析[乙酸乙酯對含1％乙酸的己烷的梯度(54-74％)]純化得到白色泡沫狀的54
。1HNMRδ10.40(brs，1H，SO2NH)，8.11-8.03和7.79-7.71和7.68-7.60和7.56-7.49(4m，8H，2xAr)，7.28-7.13(m，2H，2x NH)，4.97-4.84(m，2H，2x CH)，4.67(dd，0.5H，α-CH)，4.59(dd，0.5H，α-CH)，3.99-3.86和3.77-3.61(prm，2H，CH2N)，2.47-1.83(m，6H)，1.14-0.81(m，12H，4x CH3).19FNMRδ-76.89(s，CF3，非對映異構體A)，-76.97(s，CF3，非對映異構體B).MS(DCI，CH4)m/z(相對密度)687(MH+，38)，267(100)，249(45)，247(58).HRMS(C30H35ClF3N4O7S)(MH+)計算687.1867，實測687.1841.
步驟b(E)-N-[4-[(4-氯苯基)磺醯氨基羰基]苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺(MDL105，928)按實施例5方法A的一般步驟用乙酸酐處理54，然後快速層析(用乙酸乙酯中的乙酸梯度(0-0.5％)洗脫)純化，得到實施例8的標題化合物。
方法B按實施例5方法B的另一一般步驟用乙酸酐處理54，然後快速層析(用乙酸乙酯中的乙酸梯度(0-0.5％)洗脫)純化，得到收率49％的實施例8的標題化合物。TLC Rf0.38(0.5∶99.5乙酸-EtOAc)1HNMRδ10.08(brs，1H，NHSO2)，8.06(d，2H，J＝8.0Hz，芳基)，7.87(brs，1H，NHC＝C)，7.77(d，2H，J＝7.8Hz，芳基)，7.65(d，2H，J＝7.8Hz，芳基)，7.51(d，2H，J＝8.0Hz，芳基)，7.05(brd，1H，J＝7.3Hz，NH)，4.92(dd，1H，J＝6.7，7.8Hz，CH)，4.65(dd，1H，J＝1.8，7.3Hz，CH)，3.96-3.83(m，1H，1/2 CH2N)，3.76-3.65(m，1H，1/2 CH2N)，2.71(七重峰1H，J＝6.8Hz，CHC＝C)，2.46-2.34(m，1H)，2.25(s，3H，COCH3)，2.25-1.89(m)，1.07(d，3H，J＝6.7Hz，CH3)，1.03(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.01(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，0.99(d，3H，J＝6.9Hz，CH3).19FNMRδ-67.00(s，CF3).MS(CI，CH4)m/z(相對密度)729(MH+，100)，709(10)，669(13)，518(25)，309(100)，212(10)，70(28).元素分析(C32H36ClF3N4O8S·1H2O)C，H，N.
實施例9製備Boc-Val-CF2CF3的替代方法 MDL101，286將288.0g(1.11mol)Boc-Val N-甲基-O-甲基異羥肟酸和4.7L無水乙醚的混合物加到一12-L的三頸瓶中，該燒瓶裝有攪拌器、溫度計、乾冰冷凝器、氣體擴散管和連續的氮氣吹洗。將形成的溶液冷卻至-60℃到-65℃。通過氣體擴散管在30分鐘內向Boc-Val N-甲基-O-甲基異羥肟酸溶液中加入總量為885.2g(3.60mol)的C2F5I，同時保持溫度為約-65℃。加完氣體後立即在1小時內加入總量為2.39L的1.5M CH3Li·LiBr乙醚(3.59mol)溶液，同時保持反應溫度為-52℃到-58℃。加入約1/3的CH3Li·LiBr後形成沉澱，但加完後形成完全的溶液。形成的溶液在-52℃到-58℃下攪拌1小時。通過氣相色譜監測反應(MDL101，286的Rt＝1.3分，Boc-Val N-甲基-O-甲基異羥肟酸的Rt＝5.1分)，發現含有7.2％的Boc-Val N-甲基-O-甲基異羥肟酸。保持反應溫度在-52℃到-58℃，15分鐘內加入總量255mL(3.47mol)的丙酮，將形成的混合物攪拌10分鐘。將該混合物傾入含有4.7L 0.75M KHSO4並已冷卻到約0℃的一22L燒瓶中淬滅。分出有機層並用3L水洗。用500g MgSO4乾燥有機層，過濾除去乾燥劑。在40℃/100託下濃縮濾液至半固體，重409g。將此粗品溶解在1.2L 45℃己烷中，在30分鐘內慢慢冷卻至-25℃到-30℃。濾出結晶的固體，-30℃下用250mL己烷洗滌。真空乾燥(25℃/100託)MDL101，286得176.7g。將濾液在35℃/100託下濃縮成殘餘物，重153.5g。將此品放在Kugelrohr蒸餾儀中，收集前邊的流份至40℃/0.6託。更換接收瓶，在40℃/0.6託下收集總量為100.5g的MDL101,286粗品。將此粗產物溶解在500mL 50℃己烷中。將形成的溶液冷卻至-30℃。濾出結晶的固體，並用100mL冷己烷(-30℃)洗滌。在50℃/100託下真空乾燥該產品，又得到68.0g MDL101，286，總產率為244.7g(收率70％)，GC測定其純度為99.9％。元素分析.計算C12H18F5NO3(319.28)C，45.14，H，5.68，N，4.39；實測C，45.30，45.49，H，5.50，5.58，N，4.26，4.35.
在另一實施方案中，本發明提供一種治療患有中性白細胞相關炎性疾病之患者的方法，其中包括給其服用治療有效量的式I化合物。術語「中性白細胞相關炎性疾病」指以中性白細胞遷移到炎症部位及其參與生物基質蛋白降解為特徵的病狀。用式I化合物治療將特別有用的中性白細胞相關炎性疾病包括氣腫、細胞纖維變性、成人呼吸窘迫綜合症、敗血症、彌散性血管內凝血、痛風、類風溼性關節炎、支氣管炎和腸炎疾病。特別優選用於治療中性白細胞相關炎性疾病的式I化合物包括(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(2-甲基-1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺(E)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨醯-L-丙氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺(E)-N-[4-[(4-氯苯基)磺醯氨基羰基]苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺本文所用術語「患者」指患有具體炎性疾病的溫血動物如哺乳動物。應理解豚鼠、狗、貓、大鼠、小鼠、馬、牛、羊和人在這一術語的意義範圍內。
術語「治療有效量」指當以單一劑量或多劑量給患者服用時，對緩解中性白細胞相關炎性疾病症狀有效的劑量。本文所用術語「緩解症狀」指與無治療時相比減小疾病的嚴重性，不一定指完全消除或治癒該疾病。在確定治療有效量或劑量時，主治醫師要考慮許多因素，包括但不限於哺乳動物種類；其大小、年齡、和體質；所涉及的具體疾病；累計程度或疾病的嚴重性；個體患者的反應；服用的具體化合物；給藥方式；所用製劑的生物利用度特徵；選自的給藥方案；聯合用藥；和其他相關狀況。
式I化合物的治療有效量可望在約0.1毫克每千克體重每天(mg/kg/天)到約100mg/kg/天之間變化。優選的量可望為約0.5到約10mg/kg/天。
本發明化合物是彈性蛋白酶特別是人中性白細胞彈性蛋白酶高效抑制劑的前藥，或者其本身為彈性蛋白酶抑制劑。相信本發明化合物通過抑制彈性蛋白酶而起作用，從而緩解彈性蛋白酶介導的疾病，包括但不限於氣腫、細胞纖維變性、成人呼吸窘迫綜合症、敗血症、彌散性血管內凝血、痛風、類風溼性關節炎、支氣管炎和腸炎疾病。但應認識到不限於用任何理論或機制來解釋其最終應用的有效性。
在對患有上述疾病的患者進行治療時，式I化合物可用任何能提供有效量的可生物利用化合物的形式或方式給藥，包括口服、氣溶膠和胃腸外途徑。例如，式I化合物可通過口服、氣溶膠、皮下、肌肉內、靜脈內、經皮、鼻內、直腸內、表皮等途徑給藥。一般優選口服和氣溶膠給藥。製劑領域的技術人員根據所選化合物的具體特徵、待治療的病狀、疾病的階段和其他相關因素易於選擇適當的給藥形式和方式。Remington’sParmaceutical Sciences，第18版，Mack出版公司(1990)。
式I化合物I可以單獨給藥或與藥學上可接受的載體或賦形劑組成藥物組合物，載體或賦形劑的比例和性質由所選化合物的溶解度和化學性質、選擇的給藥途徑和標準的藥物實際來決定。本發明化合物本身有效時，可以其藥學上可接受的鹽如酸加成鹽來配製和給藥，以便提高穩定性、方便結晶和提高溶解度等。在另一實施方案中，本發明提供含有與一種或多種惰性載體混合或以其他方式結合的式I化合物的組合物。這些組合物可用作檢測標準、大量運輸的工具或作為藥物組合物。式I化合物的可檢測量是用本領域技術人員熟知的標準檢測方法和技術易於測定的量。式I化合物的可檢測量一般為組合物重的約0.001％到約75％。惰性載體可以是不降解或以其他方式與式I化合物共價反應的任何物質。適當的惰性載體的實例是水、緩衝水溶液如一般用於高效液相色譜分析的那些；有機溶劑如乙腈、乙酸乙酯、己烷等；藥學上可接受的載體或賦形劑。
用藥學領域中熟知的方式製備這些藥物組合物。載體或賦形劑可以是可作為活性成分載體或介質的固體、半固體或液態物質。適當載體或賦形劑是本領域中熟知的。可製備藥物組合物使其適於口服、胃腸外給藥或表皮使用，可以片劑、膠囊、栓劑、溶液、懸浮液等形式給患者服用。本發明化合物例如可與惰性稀釋劑或可食載體一起口服給藥。可將它們裝入膠囊或壓成片劑。用於口服治療給藥，本發明化合物可與賦形劑結合，以片劑、錠劑、膠囊、酏劑、懸液、糖漿、糯米紙囊劑、橡皮糖等形式使用。這些製劑應含有至少4％的本發明化合物(活性成分)，但可以根據具體的形式在單位劑量重的4％到70％之間變化。組合物中存在的化合物的量應使得獲得適當的劑量。本發明的優選組合物和製劑是含有5.0-300毫克本發明化合物的口服單位劑量形式。
片劑、丸劑、膠囊、錠劑等還可以含有一種或多種下列佐劑粘合劑如微晶纖維素、黃耆膠或明膠；賦形劑如澱粉或乳糖；崩解劑如藻酸、Primogel、穀物澱粉等；潤滑劑如硬脂酸鎂或Sterotex；滑動劑如膠態二氧化矽；和甜味劑如蔗糖或糖精；調味劑如薄荷、水楊酸甲酯或有機香料。當劑量單位形式是膠囊時，除以上類型物質外還含有液態載體如聚乙烯醇或脂肪油。其他劑量單位形式可以含有其他各種改變劑量單位的物理形式的材料，如包衣材料。例如，片劑或丸劑可用蔗糖、紫膠、或其他腸衣試劑來包衣。除本發明化合物外，糖漿可含有蔗糖作為甜味劑，還可以含有防腐劑、染料和著色劑和香料。用於製備這些組合物的材料應該是藥學純的，或在使用量下無毒。
用於胃腸外治療給藥，可將本發明化合物製成溶液或懸液。這些製劑至少應該含有0.1％的本發明化合物，但可以在其重量的0.1-50％之間變化。本發明化合物在這種組合物中的量應使得獲得適當的劑量。本發明的優選組合物和製劑是含有5.0-300毫克本發明化合物的胃腸外單位劑量形式。
本發明的式I化合物還可以氣溶膠的形式給藥。氣溶膠這一術語用於指具有膠體性質的各種系統到含有加壓包裝的系統。化合物的輸送由液化或壓縮氣體進行或通過適當的分送活性成分的泵系來完成。為了輸送活性成分，本發明式1化合物的氣溶膠可以單相、雙相或三相形式輸送。氣溶膠的輸送系統包括必要的容器、活化器、閥門、分容器等。本領域技術人員能夠確定優選的氣溶膠。
本發明式I化合物還可以表皮給藥，當如此使用時，適當的載體可包括溶液、軟膏或凝膠基質。例如該基質可包括一種或多種下列物質凡士林、亞油精、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、稀釋劑如水和醇、乳化劑和穩定劑。表皮製劑可含有約0.1-10％w/v(每單位體積的重量)濃度的式1化合物或其藥物鹽。
美國專利3,742,951、3,797,494、3,996,934和4,031,894中公開了一些適當的透皮吸收裝置。這些裝置一般含有構成一個表面的背襯元件、構成另一表面的活性劑可以透過的粘性層、和含有活性劑並夾在兩表面之間的至少一個儲囊。或者，活性劑可以被包含在分布在整個粘性層上的多個微膠囊中。無論那一種情況，活性劑都是從儲囊或微膠囊通過一個膜持續輸送到活性劑可穿透的粘合層，粘合層與患者的皮膚或黏膜接觸。如果活性劑通過皮膚被吸收，則可以給患者輸以受控的和預定的活性劑物流。使用微膠囊時，包囊劑還可以用作膜。
在經皮投送本發明化合物的另一裝置中，藥物活性化合物含於基質中，從中以理想的逐步、恆定和受控的速率釋放。化合物可以通過擴散或微孔流動穿透基質而釋放。釋放速率可以控制。這種不需要膜的系統描述在美國專利3,921,636中。這些系統中至少有兩種可能的釋放類型。當基質是非多孔性時發生擴散釋放。藥物活性化合物溶解在基質中並通過基質本身擴散。當藥物有效化合物通過液相在基質的微孔中輸送時，則發生微孔流釋放。
溶液或懸液還可以含於一種或多種下列佐劑無菌稀釋劑如注射用水、鹽水溶液、固化油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；絡合劑如乙二胺四乙酸；緩衝劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；和滲透壓調節劑如氯化鈉或葡萄糖。胃腸外製劑可以包封在安瓿中、一次性注射器中或由玻璃或塑料製成的多劑量小瓶中。
相信式1化合物在體內被酯酶轉化為已知有人彈性蛋白酶抑制劑活性的化合物。例如，式1化合物被轉化為下列文獻中公開的化合物歐洲專利申請OPI No.0410411，1991年1月30日公開；歐洲專利申請OPI No.0195212，1986年9月24日公開；歐洲專利申請OPI No.0529568，1993年3月3日公開；所述文獻全文引入這裡作為參考。下列實施例說明選擇的式1化合物對彈性蛋白酶的抑制程度。
實施例10在MDL103，279和豬肝酯酶存在下的人中性白細胞彈性蛋白酶的體外試驗用N-MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-對硝基苯胺醯胺(有商品供應)作為底物對人中性白細胞彈性蛋白酶進行體外測定。試驗技術與Mehdi等在Biochemical and Biophysical Research Communication，166，595(1990)中描述的方法相似。試驗混合物由0.1M HEPES(pH7.5)，0.5M NaCl，10％DMSO和0.1％Brij 35中的部分純化的彈性蛋白酶和底物(0.2mM)組成。反應(3.0mL，塑料比色杯中)保持在37℃，在66nM的MDL103，279和12.5單位的豬肝酯酶(Sigma Chmical Co.，目錄號E-3128)存在下進行底物水解。酶是從人痰中分離到的，儘管最近已有商品供應。反應時間持續60分鐘。彈性蛋白酶的抑制程度隨著時間持續增加，半衰期約為10分鐘。從最後速率計算出了最後一種抑制劑的Ki值為25nM，推定為MDL101，146(如歐洲專利申請OPI No.0529568中所述，1993年3月3日公開)。這與獨立地從DML101，146獲得的Ki值一致。從起始速率估算前藥MDL103，279的Ki值大於2μM。為了排除酯酶對彈性蛋白酶試驗的幹擾或MDL103，279的顯著性自發水解(即非酶水解)，如圖1中所示，進行了下列對照試驗(A)彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物；(B)彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+豬肝酯酶；(C)彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+MDL103，279；及(D)彈性蛋白酶+彈性蛋白酶底物+酯酶+MDL103，279。
實施例11在MDL104，226和豬肝酯酶存在下的人中性白細胞彈性蛋白酶的體外試驗在MDL104，226存在下體外測定人中性白細胞彈性蛋白酶，技術和方法如實施例10中所述。如圖2中曲線4所示，用MDL104，226產生了相同的時間曲線，最終Ki值為25nM。
實施例12在MDL105，658和豬肝酯酶存在下的人中性白細胞彈性蛋白酶的體外試驗在MDL105，658存在下體外測定人中性白細胞彈性蛋白酶，技術和方法如實施例10中所述。如圖2中曲線6所示，用MDL105，658產生了相同的時間曲線，最終Ki值(Ki＝25nM)如上述對MDL103，279的Ki。
實施例13在MDL105，457和豬肝酯酶存在下的人中性白細胞彈性蛋白酶的體外試驗在MDL105，457存在下體外測定人中性白細胞彈性蛋白酶，技術和方法如實施例10中所述。如圖2中曲線3所示，用MDL105，457產生的彈性蛋白酶抑制程度顯著低於在MDL103，279中觀察到的抑制程度。
實施例14在MDL103，467和豬肝酯酶存在下的人中性白細胞彈性蛋白酶的體外試驗用133nM的MDL103，467體外測定人中性白細胞彈性蛋白酶，技術和方法如實施例10中所述。水解結束後從最終速率測得Ki值為16nM[比較本藥N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基)]-L-脯氨酸醯胺52的Ki值為12nM，獨立測定]。
實施例15在MDL105，070和豬肝酯酶存在下的人中性白細胞彈性蛋白酶的體外試驗用1.67μM的MDL105，070體外測定人中性白細胞彈性蛋白酶，技術和方法如實施例10中所述。水解結束後從最終速率測得Ki值為150nM[比較本藥N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨醯-N-[3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-2-氧代丙基)]-L-脯氨酸醯胺53的Ki值為190nM，獨立測定]。
序列表(1)一般信息(i)申請人(A)名稱MERRELL DOW PHAMACEUTICALSINC.
(B)街道2110 E GALBRAITH ROAD(C)城市CINCINNATI(D)州OHIO(E)國家美國(F)郵政編碼45215(G)電話513-948-7960(H)傳真513-948-7961(I)電傳214320(ii)發明名稱作為彈性蛋白酶抑制劑的醯化烯醇衍生物(iii)序列數 15(iv)計算機可讀形式(A)媒介類型軟盤(B)計算機IBM PC兼容機(C)作業系統PC-DOS/MS-DOS(D)軟體PatentIn Release#1.0，#1.30版(EPO)(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO1Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO2的信息(i)序列特徵(A)長度3個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(ix)特徵(A)名稱/關鍵詞修飾位點(B)位置1(D)其他信息/note＝「叔丁氧羰基保護」(ix)特徵(A)名稱/關鍵詞修飾位點(B)位置3(D)其他信息/note＝「末端OH被修飾的纈氨酸類似物取代」(xi)序列描述SEQ ID NO2Xaa Ala Xaa1(2)SEQ ID NO3的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO3Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO4的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO4Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO5的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO5Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO6的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO6Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO7的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO7Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO8的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO8Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO9的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO9Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO10的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO10Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO11的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO11Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO12的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO12Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO13的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO13Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO14的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO14Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)SEQ ID NO15的信息(i)序列特徵(A)長度4個胺基酸(B)類型胺基酸
(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO15Xaa Xaa Xaa Xaa權利要求
1.下式1的化合物或其水合物、電子等排體或藥學上可接受的鹽K-P4-P3-P2-EAC(SEQ.ID NO.1)其中EAC為下式基團 其中R1為-CH3，-CH(CH3)2，-CH2CH2CH3，-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3；R2為-H，或為(C1-8)烷基，(C3-12)環烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；R3為-H或-F；R3為-H，-F，-CF3，-CF2CF3，-CF2CF2CF3，-C(O)OR5或-C(O)NR5R6或為(C1-8)烷基，(C3-12)環烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；R5和R6各自獨立地為-H，或(C1-8)烷基，(C3-12)環烷基，(C6-10)芳基，或(C6-10)芳基(C1-6)烷基；P2為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met，Nle，Gly，Phe，Tyr，Trp，或Nal(1)，其中α氨基的氮可被R基團取代，R為(C1-8)烷基，(C3-12)環烷基，(C3-12)環烷基(C1-6)烷基，(C4-11)雙環烷基，(C4-11)雙環烷基(C1-6)烷基，(C6-10)芳基，(C6-10)芳基(C1-6)烷基；(C3-7)雜環烷基，(C3-7)雜環烷基(C1-6)烷基，(C5-9)雜芳基，(C5-9)雜芳基(C1-6)烷基，稠合(C6-10)芳基-(C3-12)環烷基，稠合(C6-10)芳基(C3-12)環烷基-(C1-6)烷基，稠合(C5-9)雜芳基(C3-8)環烷基，或稠合(C5-9)雜芳基(C3-12)環烷基-(C1-6)烷基，或P2為Pro，Ind，Tic，Pip，Tca，Pro(4-OBzl)，Aze，Pro(4-OAc)，Pro(4-OH)；P3為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或N-甲基衍生物，Pro，Ind，Tic，或Tca，或ε氨基上用嗎啉-B-基團取代的Lys或δ氨基上用嗎啉-B-基團取代的Orn；P4為Ala，bAla，Leu，Ile，Val，Nva，bVal，Met或Nle或一鍵；K為氫、甲醯基、乙醯基、琥珀醯基、苯甲醯基、叔丁氧羰基、苄氧羰基、甲苯磺醯基、丹醯、異戊醯、甲氧基琥珀醯基、1-金剛烷磺醯基、1-金剛烷乙醯基、2-羧基苯甲醯基、苯基乙醯基、叔丁基乙醯基、雙((1-萘基)甲基)乙醯基、-C(O)N-(CH3)2， -A-Rz，其中A為 Rz為被1-3個獨立地選自下組的取代基適當取代的含6、10和12個碳的芳基氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羥基、含1-6個碳的烷基、含1-6個碳的烷氧基、羧基、烷基部分含1-6個碳的烷基羰基氨基、5-四唑基、和含1-15個碳的醯基磺醯氨基，條件是當醯基磺醯氨基含有芳基時，該芳基可進一步被選自氟、氯、溴、碘和硝基的基團取代；及與其功能相當的其他末端氨基保護基，或 其中Z為N或CH，及B為下式基團 且R』為氫或(C1-6)烷基。
2.權利要求1的化合物，其中R1為-CH(CH3)2或-CH2CH2CH3；R2為-H，(C1-8)烷基，(C3-12)環烷基或(C6-10)芳基；R3為-F；R4為-H，-F，-CF3，-C(O)OR5，-C(O)NR5R6，(C1-8)烷基，環戊基，環己基，苯基或苄基；R5和R6各自獨立地為-H，(C1-8)烷基，環戊基，環己基，苯基或苄基；P2為Pro，Pip，Aze，或Pro(4-OBzl)；P3為Ile，Val或Ala；P4為Ala或一鍵；K為苯甲醯基，叔丁氧羰基，苄氧羰基，異戊醯基，-C(O)N(CH3)2； 或 其中Z為N及B為下式基團其中R』為氫或C1-6烷基。
3.權利要求2的化合物，其中R2為-H，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，環戊基，環己基，環己基甲基，苯基或苄基；R4為-H，-F，-CF3，-C(O)OR5，-C(O)NR5R6，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，環戊基，環己基，苯基，苄基；R5和R6各自獨立地為-H，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，環戊基，環己基，苯基或苄基。
4.權利要求2的化合物，其中K為叔丁氧羰基， 或 其中Z為NB為下式基團 及其中R』為異丙基。
5.權利要求4的化合物，其中R2為-H，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，環戊基，環己基，環己基甲基，苯基或苄基；R4為-H，-F，-CF3，-C(O)OR5，-C(O)NR5R6，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，環戊基，環己基，苯基，苄基；R5和R6各自獨立地為-H，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，環戊基，環己基，苯基或苄基。
6.權利要求1的化合物，其中R1是-CH(CH3)2；R2為-H，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，環戊基，環己基，環己基甲基，苯基或苄基；R3為-F；R4為-F或-CF3；P2為Pro；P3為Ile、Val和Ala；P4為Ala或一鍵；K為 或 其中Z為N，B為下式基團 及其中R』為異丙基。
7.權利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺。
8.權利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺。
9.權利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-2-(2-甲基-1-氧代丙氧基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺。
10.權利要求1的化合物，其中所述化合物為(Z)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，4，4，4-五氟-1-(1-甲基乙基)-1-丁烯基]-L-脯氨酸醯胺。
11.權利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨醯-L-丙氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺(SEQ ID NO.2)。
12.權利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[4-(4-嗎啉基羰基)苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺。
13.權利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-(4-嗎啉基羰基)-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺。
14.權利要求1的化合物，其中所述化合物為(E)-N-[4-[(4-氯苯基)磺醯氨基羰基]苯甲醯基]-L-纈氨醯-N-[2-(乙醯氧基)-3，3，3-三氟-1-(1-甲基乙基)-1-丙烯基]-L-脯氨酸醯胺。
15.含有權利要求1的化合物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。
16.含有權利要求1的化合物和載體的組合物。
17.一種在需要治療的患者身上治療中性白細胞相關炎性疾病的方法，其包括給患者服用抗炎有效量的權利要求1的化合物。
18.一種在需要治療的患者身上治療氣腫病的方法，其包括給患者服用抗炎有效量的權利要求1的化合物。
19.一種在需要治療的患者身上治療細胞纖維變性的方法，其包括給患者服用抗炎有效量的權利要求1的化合物。
20.一種在需要治療的患者身上治療慢性支氣管炎的方法，其包括給患者服用抗炎有效量的權利要求1的化合物。
21.一種在需要治療的患者身上治療腸炎的方法，其包括給患者服用抗炎有效量的權利要求1的化合物。
全文摘要
本發明涉及已知彈性蛋白酶抑制劑的醯化烯醇衍生物。這些化合物可用於治療各種炎性疾病，包括細胞纖維變性和氣腫，或作為可用於治療所述疾病之化合物的前藥。
文檔編號C07K5/08GK1149833SQ9519337
公開日1997年5月14日 申請日期1995年5月8日 優先權日1994年6月2日
發明者N·P·皮特, J·P·布克哈特, S·米德 申請人:默裡爾藥物公司