用於治療流感的組合物和試劑盒的製作方法

2023-06-15 02:22:21 2

專利名稱：：用於治療流感的組合物和試劑盒的製作方法用於治療流感的組合物和試劑盒
背景技術：
：本發明的領域是抗病毒組合以及它們用於治療或預防患者中的流感的應用。目前有4種由FDA核准的抗病毒藥物用於治療急性、非並發性的(uncomplicated)流感。M2抑制劑鹽酸金剛烷胺(SYMMETREL)和金剛乙胺(FLUMADINE)被核准用於治療和預防A型流感。金剛烷胺和金剛乙胺二者以IOOmg片劑和50mg/ml糖漿提供用於口服施用。對於兩種藥物，通常的成年人劑量是200mg，以每天兩次分開的劑量(BID)。在年齡為1-9歲的患者中，金剛烷胺的兒科劑量是4.4-8.8mg/kg/天，不超過150mg/天；對於金剛乙胺，劑量是5mg/kg，每天施用一次(QD)，不超過150mg/天。神經氨酸酶抑制劑扎那米韋(RELENZA)和磷酸奧塞米韋(TAMIFLU)核准用於治療和預防A型和B型流感。提供扎那米韋用於口腔吸入，僅與吸入裝置一起使用。推薦的用於流感預防和治療的扎那米韋的劑量分別是IOmg/天QD和20mg/天BID。磷酸奧塞米韋磷酸可作為包含75mg奧塞米韋的用於口服應用的膠囊獲得，並且作為用於口服混懸液的粉劑獲得，其在按指示用水構建時包含12mg/ml奧塞米韋。對於超過13歲的患者，推薦的用於流感預防和治療的奧塞米韋劑量分別是75mg/天QD和150mgBID。已經提議了多種抗病毒藥物組合用於治療流感。美國專利號5，866，601公開了將神經氨酸酶抑制劑組合物和抗病毒藥(諸如金剛烷胺，金剛乙胺和利巴韋林)組合。已經報導了關於各種藥物二重組合抗流感效果的體外和體內動物模型研究(參見，例如，包括利巴韋林與金剛烷胺(Wilson等，AntimicrobAgentsChemother(抗微生物藥劑化學治療)(1980)17642-648；Hayden等，AntimicrobAgentsChemother(抗微生物藥劑化學治療)(1980)18536-41；和Burlington等，J.AntimicrobChemother(抗微生物藥化學治療雜誌)(1983)11:7_14)，金剛乙胺(Hayden等，同前所述；Galegov等，Experientia(1977)33905-906；和Madren等，AntivirChemChemother(抗病毒化學和化學治療)(1995)6109-113)，peramavir(Smee等，Chemotherapy(化學治療)(2002)48:88_93)，和奧塞米韋(Smee等，AntiviralChemChemother(抗病毒化學和化學治療)(2OO6)I7185-92)組合；以及奧塞米韋與金剛烷胺(Ilyushina等，AntiviralRes.(抗病毒研究)(2006)70121-31)和金剛乙胺(Govorkova等，AntimicrobAgentsChemother(抗微生物藥劑化學治療)(2004)484855-4863；Galabov等，AntivirChemChemother(抗病毒化學和化學治療)(2006)17251-8；和Leneva等，AntiviralRes(抗病毒研究)(2000)48101-15)的組合。這些論文中的一些報導利巴韋林和金剛烷胺的組合，與用單一所述藥物治療相比，具有對抗流感病毒的協同作用的附加作用(參見，例如，Wilson等，同前所述；Hayden等，同前所述；和Burlington等，同前所述)。在這些研究中的一些中，據報導，與單一治療法治療相比，組合治療具有不利的結果。例如，據報導，奧塞米韋和金剛乙胺每種藥物以低濃度組合導致針對A型流感病毒的拮抗相互作用(Govorkova等，同前所述)。Smee等(2006)報導用奧塞米韋加利巴韋林的組合治療A型流感病毒-感染的小鼠不比單獨使用利巴韋林更好，且當所述治療在感染後3-4天起始時，用所述組合治療的組比僅用利巴韋林治療的動物具有更少的存活者。在治療過程中，針對M2抑制劑金剛乙胺和金剛烷胺的病毒抗性可以快速形成，原因在於在M2蛋白中的某些單點突變可以賦予針對金剛烷胺和金剛乙胺二者的抗性。在2006年1月，⑶C檢測揭示在美國流通的大部分A型流感病毒耐受金剛烷胺和金剛乙胺，這引起⑶C推薦反對這些藥物用於流感的治療和預防的應用(⑶CHealthAlert(⑶C健康警告)，2006年1月14日)。目前，認為奧塞米韋是用於A型流感病毒的一線治療。然而，已經報導了奧塞米韋-耐受性毒株(deJong等，NEnglJMed.(新英格蘭醫學雜誌)(2005)3532667-72；EuroSurvei11.(2005)10(10):E051020.2)，這引起對可傳遞的、病原抗性毒株可能減少抗病毒應用在流行病控制中的益處的關注(Lipsitch等，PLoSMed(2007)Jan23；4(1):el5[電子公布先於書面公布])。此外，奧塞米韋治療已經與嚴重的精神病治療事件、尤其是兒科患者相關(參見PrescrireInt.(2006)15:182-3)。考慮到前述，本發明的一個目的是提供用於流感、特別是流行性流感和/或耐受M2抑制劑和/或神經氨酸酶抑制劑的流感毒株的治療或預防的提高的療法。本發明的另一個目的是提供用於流感的治療或預防的提高的療法，其防止在患者或群體內產生耐藥性毒株。本發明的另一個目的是提供用於流感的治療或預防的改進療法，其與目前的單一療法相比具有顯著更少或沒有不利事件或毒性作用。發明概述本發明的一個方面是用於治療或預防患者中的流感的組合物，所述組合物包括10-60重量百分比(wt.%)，25-50wt%，或50-75wt%金剛烷胺或金剛乙胺；和30-80wt.%,50-75wt.%，或25_50wt.%利巴韋林或viramidine，其中所述重量百分比是基於所述組合物中活性劑的總重。在具體實施方案中，所述組合物還包括0.5-30wt.%的奧塞米韋ο在一個實施方案中，所述組合物採用適於口服或胃施用的製劑，諸如液體、糖漿、混懸液、片劑、膠囊、膠囊中的珠、或香囊劑中的珠。在具體實施方案中，所述組合物採用用於口服施用的單位劑型，其包括25-125mg金剛烷胺或金剛乙胺和50_200mg利巴韋林或Viramidine0在具體實施方案中，所述單位劑型包括至少125mg處於延長釋放形式的金剛烷胺，和少於200mg的利巴韋林。在另一個實施方案中，所述單位劑型包括25-125mg金剛烷胺和50-200mg利巴韋林。在另一個實施方案中，所述組合物採用適於腸胃外施用的形式，諸如凍幹的粉劑，其在施用前重構，或在小瓶中的無菌液體。本發明的另一方面是用於治療或預防患者中的流感的試劑盒，其包括金剛烷胺或金剛乙胺，和利巴韋林或viramidine，且任選神經氨酸酶抑制劑如奧塞米韋、扎那米韋，或peramivir。在具體實施方案中，提供用於口服治療或預防患者中的流感的試劑盒，其包括多個劑型，所述多個組成一個或多個劑量，每個劑量包括治療或預防有效量的利巴韋林和金剛烷胺的組合。金剛烷胺和利巴韋林可以配製為獨立的劑型或共同配製為單一劑型。金剛烷胺可以採用延長釋放的形式。在具體實施方案中，金剛烷胺和利巴韋林配製為獨立的劑型，每個金剛烷胺劑型包括75-250mg金剛烷胺，且每個利巴韋林劑型包括50-200或100-400mg利巴韋林。在不同實施方案中，試劑盒包括處於選自80mg、180mg、和330mg的劑量強度的金剛烷胺劑型，和處於選自由115mg、330mg和660mg組成的組的劑量強度的利巴韋林劑型。在一個實施方案中，每個劑量還包括奧塞米韋。在另一個實施方案中，提供用於腸胃外治療人患者中的流感的試劑盒，其包括處於適於腸胃外施用的形式的金剛烷胺；和處於適於腸胃外施用的形式的利巴韋林。金剛烷胺可以包含在多個第一小瓶中，且利巴韋林包含在多個第二小瓶中。備選地，金剛烷胺和利巴韋林共同配製且包含在多個小瓶中。試劑盒還可以包括處於適於腸胃外施用的形式的奧塞米韋、peramivir、或扎那米韋。本發明的另一個方面是用於治療或預防患者中的流感的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的三種不同抗病毒藥劑的組合，所述三種抗病毒藥劑具有相應的三種不同的作用機制，選自由流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感-特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑組成的組中。在具體實施方案中，所述方法包括向患者施用有效量的第一、第二和第三抗病毒藥劑的組合，其包括a)選自由金剛乙胺和金剛烷胺組成的組的M2抑制劑；b)選自由利巴韋林和viramidine組成的組的RNA聚合酶抑制劑；和c)選自由奧塞米韋、扎那米韋、和peramivir組成的組的神經氨酸酶抑制劑(NAi)。在優選實施方案中，第一和第二抗病毒藥劑以這樣的量施用，相對於用作單一治療時流感病毒對所述第三抗病毒藥劑的敏感性，所述量增加流感病毒對所述第三抗病毒藥劑的敏感性至少2倍。在一個具體的這樣的實施方案中，第一和第二抗病毒藥劑是利巴韋林和奧塞米韋，且第三抗病毒藥劑是金剛烷胺。在所述方法的一個實施方案中，通過選自由口服、腸胃外、吸入、以及它們的組合組成的組的方法將抗病毒藥劑施用給患者。在具體實施方案中，以維持血漿濃度在0.l-3.0yg/ml,0.l-1.5yg/ml,或0.3-1.5μg/ml持續至少48小時的量向患者施用金剛烷胺或金剛乙胺。在另一個實施方案中，所述患者以5-500mg/天，20_250mg/天，100_800mg/天，100-600mg/天，200-700mg/天，或200_500mg/天的量腸胃外或口服施用金剛烷胺或金剛乙胺。當口服施用時，金剛烷胺任選地採用延長釋放的形式。在另一個實施方案中，患者通過靜脈內輸注以l_50mg/小時，3_40mg/小時，或5-30mg/小時的速率持續至少48小時施用金剛烷胺。在一個實施方案中，患者以維持血漿濃度在0.1-10.0μg/ml,0.5-8μg/ml,0·5-5.0μg/ml，1-6μg/ml,1-4μg/ml,2-6μg/ml,2-4μg/ml，0·01-2μg/ml,或0.2-2μg/ml持續至少48小時的量施用利巴韋林或viramidine。患者以50_2000mg/天，50-1600mg/天，100-1200mg/天，400_800mg/天，50_600mg/天，75_500mg/天，或75_200mg/天的量腸胃外或口服施用利巴韋林。在具體實施方案中，患者通過靜脈內輸注以5_200mg/小時，10_150mg/小時，15-100，或20-80mg/小時的速率持續至少48小時施用利巴韋林。在具體實施方案中，其中向施用患者處於上述具體量中的一種的金剛烷胺或金剛乙胺以及處於上述具體量中的一種的利巴韋林或viramidine，還向患者施用處於維持神經氨酸酶抑制劑的血漿濃度在0.001-5μg/ml,0.02-5μg/ml,0.1-3μg/ml,0.1-1μg/ml,0.3-3μg/ml，或0.3-1μg/ml持續至少48小時的量施用選自由下列各項組成的組的神經氨酸酶抑制劑奧塞米韋，奧塞米韋羧酸鹽，扎那米韋，和peramivir。在具體實施方案中，患者通過靜脈內輸注以0.I-IOmg/小時，0.4_7mg/小時，或l-5mg/小時的速率持續至少48小時施用扎那米韋。在另一個實施方案中，患者通過靜脈內輸注以0.l-20mg/小時，0.4_7mg/小時，l-7mg/小時，l-5mg/小時，或2_7mg/小時的速率持續至少48小時施用奧塞米韋。在不同實施方案中，患者可以以10-150mg/天，10_50mg/天，50_100mg/天，75-150mg/天，150-300mg/天，100-500mg/天，或l_50mg/天的量腸胃外或口服施用奧塞米韋。本發明提供用於同時獨立或順序施用的第一抗病毒藥劑、第二抗病毒藥劑和第三抗病毒藥劑，其中所述三種藥劑具有相對應的三種不同的作用機制，選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感-特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑。本發明還提供在治療中組合使用的第一抗病毒藥劑、第二抗病毒藥劑和第三抗病毒藥劑，其中所述三種抗病毒藥劑具有相對應的三種不同的作用機制，選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶製劑，RNA聚合酶抑制劑，流感-特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑。本發明還提供在治療和/或預防流感傳染中組合使用的第一抗病毒藥劑、第二抗病毒藥劑和第三抗病毒藥劑，其中所述三種抗病毒藥劑具有相對應的三種不同的作用機制，選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感_特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑。本發明還提供第一抗病毒藥劑、第二抗病毒藥劑和第三抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防流感傳染的藥物中的應用，其中所述三種抗病毒藥劑具有相對應的三種不同的作用機制，選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶抑制齊!J，RNA聚合酶抑制劑，流感-特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑。如下文所述，所述三種藥劑可以彼此獨立或兩兩或三種組合施用。本發明還提供抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防流感傳染的藥物中的應用，其中所述抗病毒藥劑選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感_特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑，並且其中製備所述藥物用於與兩種其他抗病毒藥劑組合施用(或被施用)給患者，其中所述三種抗病毒藥劑具有不同的作用機制，選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制齊IJ，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感-特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑。本發明還提供第一抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防流感感染的藥物中的應用，其中製備所述藥物用於與第二抗病毒藥劑和第三抗病毒藥劑組合施用(或被施用)給患者，其中a)所述第一抗病毒藥劑選自由流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑組成的組；b)所述第二抗病毒藥劑選自由IMP脫氫酶抑制劑，和RNA聚合酶抑制劑組成的組；並且c)所述第三抗病毒藥劑選自由幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑組成的組。本發明還提供第二抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防流感感染的藥物中的應用，其中製備所述藥物用於與第一抗病毒藥劑和第三抗病毒藥劑組合施用(或被施用)給患者，其中a)所述第一抗病毒藥劑選自由流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑組成的組；b)所述第二抗病毒藥劑選自由IMP脫氫酶抑制劑，和RNA聚合酶抑制劑組成的組；並且c)所述第三抗病毒藥劑選自由幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑組成的組。本發明還提供第三抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防流感感染的藥物中的應用，其中製備所述藥物用於與第一抗病毒藥劑和第二抗病毒藥劑組合施用(或被施用)給患者，其中a)所述第一抗病毒藥劑選自由流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑組成的組；b)所述第二抗病毒藥劑選自由IMP脫氫酶抑制劑，和RNA聚合酶抑制劑組成的組；並且c)所述第三抗病毒藥劑選自由幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑組成的組。本發明還提供第一和第二抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防流感感染的藥物中的應用，其中製備所述藥物用於與第三抗病毒藥劑組合施用(或被施用)給患者，其中a)所述第一抗病毒藥劑選自由流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑組成的組；b)所述第二抗病毒藥劑選自由IMP脫氫酶抑制劑，和RNA聚合酶抑制劑組成的組；並且c)所述第三抗病毒藥劑選自由幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑組成的組。本發明還提供一種或多種抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防流感傳染的藥物中的應用，其中所述抗病毒藥劑具有不同的作用機制，選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感-特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑，並且其中製備所述藥物用於與一種或多種其他抗病毒藥劑組合施用(或被施用)給患者，以便患者接受具有選自所述組的不同作用機制的三種抗病毒藥劑。本發明還提供抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防患者流感傳染的藥物中的應用，其中所述抗病毒藥劑選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感-特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑，並且其中患者先前已用至少兩種其他抗病毒藥劑治療過，其中所述抗病毒藥劑具有不同的作用機制，所述不同的作用機制選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制齊IJ，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感-特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑。本發明還提供第一抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防患者中的流感傳染的藥物中的應用，其中所述患者先前已用第二抗病毒藥劑、任選地第三抗病毒藥劑治療過，其中a)所述第一抗病毒藥劑選自由流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑組成的組；b)所述第二抗病毒藥劑選自由IMP脫氫酶抑制劑，和RNA聚合酶抑制劑組成的組；並且c)所述第三抗病毒藥劑選自由幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑組成的組。本發明還提供第二抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防患者中的流感傳染的藥物中的應用，其中所述患者先前已用第一抗病毒藥劑、任選地第三抗病毒藥劑治療過，其中a)所述第一抗病毒藥劑選自由流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑組成的組；b)所述第二抗病毒藥劑選自由IMP脫氫酶抑制劑，和RNA聚合酶抑制劑組成的組；並且c)所述第三抗病毒藥劑選自由幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑組成的組。本發明還提供第三抗病毒藥劑在製備用於治療和/或預防患者中的流感傳染的藥物中的應用，其中所述患者先前已用第一抗病毒藥劑和第二抗病毒藥劑治療過，其中a)所述第一抗病毒藥劑選自由流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑組成的組；b)所述第二抗病毒藥劑選自由IMP脫氫酶抑制劑，和RNA聚合酶抑制劑組成的組；並且c)所述第三抗病毒藥劑選自由幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑組成的組。在這些應用中，在施用所述藥物之前，患者先前的治療將典型地不多於7天(例如，在先前的7，6，5，4，3，2天，或在先前的24小時)。本發明還提供用於治療和/或預防流感傳染的抗病毒藥劑，其中所述抗病毒藥劑選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感_特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑，且其中所述抗病毒藥劑與至少一種其他抗病毒藥劑一起施用(或製備用於施用)，其中所述抗病毒藥劑具有不同的作用機制，所述不同的作用機制選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感-特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑。本發明還提供用於治療和/或預防流感傳染的第一抗病毒藥劑，其中所述第一抗病毒藥劑與第二抗病毒藥劑、任選地第三抗病毒藥劑一起施用(或製備用於施用)，其中a)所述第一抗病毒藥劑選自由流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑組成的組；b)所述第二抗病毒藥劑選自由IMP脫氫酶抑制劑，和RNA聚合酶抑制劑組成的組；並且c)所述第三抗病毒藥劑選自由幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑組成的組。本發明還提供用於治療和/或預防流感傳染的第二抗病毒藥劑，其中所述第二抗病毒藥劑與第一抗病毒藥劑、任選地第三抗病毒藥劑一起施用(或製備用於施用)，其中a)所述第一抗病毒藥劑選自由流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑組成的組；b)所述第二抗病毒藥劑選自由IMP脫氫酶抑制劑，和RNA聚合酶抑制劑組成的組；並且c)所述第三抗病毒藥劑選自由幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑組成的組。本發明還提供用於治療和/或預防流感傳染的第三抗病毒藥劑，其中所述第三抗病毒藥劑與第一抗病毒藥劑和第二抗病毒藥劑一起施用(或製備用於施用)，其中a)所述第一抗病毒藥劑選自由流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑組成的組；b)所述第二抗病毒藥劑選自由IMP脫氫酶抑制劑，和RNA聚合酶抑制劑組成的組；並且c)所述第三抗病毒藥劑選自由幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑組成的組。附圖簡述圖1A-4是6種包括按照本發明的不同實施方案的劑型的不同各個泡眼包裝(blisterpacks)的平面圖。圖5是由實施例IB所述的實驗產生的數據的協同體積圖。發明詳述本發明提供用於治療患有流感病毒傳染或懷疑感染了或處於暴露於流感病毒的危險的人患者的方法、應用、組合物、和試劑盒。本發明可以用來防止或減少產生耐藥性毒株的可能性，以治療懷疑感染了或處於暴露於耐藥性流感病毒的人患者，且將與單一治療相關的副作用和毒性最小化。本發明的一個方面是用於治療或預防患者中的流感從而減少或預防與流感病毒傳染相關的症狀的方法。所述患者可以是對流感傳染敏感的人或任何其他動物(例如，家畜，如貓和狗；家畜和農場動物，如馬、牛、豬、雞等)。應用醫學護理標準來確定患者可能感染了流感病毒或處於暴露於流感病毒的危險中。流感病毒可以是A或B型病毒。在具體實施方案中，病毒是A型流感病毒(例如，HlNl，H1N2,H2N2,H3N2,H5N1,H7N7,H9N2，等.)。所述方法包括向患者施用三種不同抗病毒藥劑的組合(本文稱為「三聯組合(triplecombination)」)，所述三種不同抗病毒藥劑具有相對應的三種不同的作用機制，其選自由下列各項組成的組流感病毒吸附抑制劑，M2抑制劑，IMP脫氫酶抑制劑，RNA聚合酶抑制劑，流感-特異性幹擾寡核苷酸，和神經氨酸酶抑制劑。一種或多種另外的抗病毒藥劑可以添加到該三聯組合中(例如，第四抗病毒藥劑，其具有與該三聯組合的三種機制不同的或與三聯組合機制之一相同的作用機制)。本文引用具體的抗病毒藥劑(例如，金剛烷胺，奧塞米韋，等等)意欲包括該抗病毒藥劑的藥用鹽(例如，鹽酸金剛烷胺，磷酸奧塞米韋，等等)。所述抗病毒藥劑優選地以這樣的相對比例和劑量施用，其表現出關於病毒負荷、症狀、疾病持續時間的減少，防止耐藥性毒株等的相加或協同作用。協同作用是組合的功效大於該組合中的每一種藥物作為單一藥劑的累加功效(Prichard和Shipman，AntiviralRes.(抗病毒研究)(1990)14:181-206)。測量抗病毒藥劑的藥物協同作用的方法描述在下述實施例中，並且通常是本領域中所知的(參見，例如，Schinazi等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物藥劑化學治療)(I982)22499-507；和Prichard與Shipman，同前所述；和Prichard等，AntibicrobAgentsChemother(1993)37540-545；每一篇通過引用結合於此)。圖5描述由下述實施例IB所述的實驗獲得的數據的三維協同圖；分析使用記述在Prichard等(1993)，同前所述.中的方法進行。與在目前的單一治療中所用的相比，使用協同量的抗病毒藥劑提供更高的功效和/或允許更低量的一種或多種所用藥物，由此導致對患者更少的副作用，且允許由有限量的大體積藥物(bulkdrug)產生更多的治療劑量。在具體實施方案中，與當用作單一治療時病毒對藥物的敏感性相比，所述組合將流感病毒的一種或多種毒株對至少一種抗病毒藥劑的敏感性增加至少2-倍，5-倍，10-倍，20-倍，50-倍，或100-倍。例如，當藥物在用作單一治療時通過體外檢測確定具有1.Oμg/ml針對流感病毒的EC5tl，且在於兩種其他抗病毒藥劑組合使用時具有0.01μg/ml或更低的EC5tl時，據說所述組合將所述流感病毒針對該藥物的敏感性增加至少100-倍。優選地，該組合中的兩種或所有三種藥物的敏感性提高至少2-倍，5-倍，10-倍，20-倍，50-倍，或100-倍。下述實施例IB描述了一種體外測定法，其用於確定使用H3N2流感毒株可以確定藥物敏感性增加多少。相同的測定法可以用來測量藥物針對其他流感毒株的敏感性。在不存在協同作用時，由於在該組合內的每種藥物的附加貢獻和該組合的整體功效，無附加的毒性，所以抗病毒藥組合可以仍舊是有益的。與先前的單一治療相比，使用三聯組合顯著減少產生耐藥毒株的可能性。這在治療以流行性或局部爆發的流感中特別有利。此外，三聯組合可以用來治療感染或出於暴露於耐藥流感病毒的危險的人患者。由於快速的病毒基因分型在實時基礎上對於臨床醫生不總是可行，允許基於抗性模式選擇合理的藥物，本發明提供甚至在沒有這些數據的情形中提供寬泛和有效的抗病毒範圍。在具體實施方案中，耐藥流感病毒耐受所用的組合中的一種藥物。令人驚訝地，與除了排除作為單一治療時病毒耐受性的藥物的相同治療相比，用該三聯組合治療提供更高的針對該耐藥病毒的抗_流感作用。使用標準醫學方法來評估患者感染或處於暴露於耐藥病毒的可能性(例如，通過⑶C健康警告(⑶CHealthAlerts)等的指導)。優選地，在該組合中的每種藥物在流感病毒生命周期的不同時期有活性。例如，流感病毒吸附抑制劑和M2抑制劑在生命周期的開始有活性；IMP脫氫酶抑制劑和RNA聚合酶抑制劑在生命周期的中期有活性；且幹擾寡核苷酸和神經氨酸酶抑制劑在生命周期的末期有活性。流感病毒吸附抑制劑的實例包括血凝素-特異性單克隆抗體(參見，例如Palladino等，JVirol.(病毒學雜誌)(1995)692075-81)，polyoxometalates(參見，例如Shigeta等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物藥劑化學治療)(1997)411423-7)，硫酸化的多糖，唾液酸酶融合蛋白(例如Fludase)，和唾液酸的0-糖苷(參見例如Guo等，Glycobiology(糖生物學)(2002)12183-90)0這些和其他流感吸附抑制劑在本領域中是己知的(參見，例如，CombatingtheThreatOfPandemicInfuenzaDrugDiscoveryApproaches(同流行性流感的威脅作戰藥物發現方法)，Ed.PaulF.Torrence，JohnWiley和SonsLtd(2007)，其通過引用結合於此)。M2抑制劑的實例包括氨基金剛烷化合物，如金剛烷胺(1-氨基_金剛烷)，金剛乙胺(1-(1-氨基乙基)金剛烷)，螺[環丙烷-1，2'-金剛烷]_2—胺，螺[吡咯烷-2，2『-金剛烷]，螺[哌啶-2，2『-金剛烷]，2-(2-金剛烷基)哌啶，3-(2-金剛烷基)吡咯烷，2-(1_金剛烷基)哌啶，2-(1_金剛烷基)吡咯烷，和2-(1_金剛烷基)-2_甲基-吡咯燒；和M2-特異性單克隆抗體(參見,例如US20050170334；和Zebedee和Lamb，JVirol.(病毒學雜誌)(1988)62:2762-72)。在優選實施方案中，在所述三聯組合中的一種抗病毒藥劑是金剛烷胺或金剛乙胺。IMP脫氫酶抑制劑的實例包括利巴韋林，viramidine(利巴韋林的前藥)，和美泊地布(merimepodib)(VX-497；參見例如Markland等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物藥劑化學治療)(2000)44859-66)。當用於本文時，術語RNA聚合酶抑制劑是指抑制聚合酶、蛋白酶、和/或病毒RNA聚合酶複合物或其一個亞基(即，PBl，PB2和PA)的內切核酸酶活性的抗病毒藥劑。示例性的RNA聚合酶抑制劑包括抗病毒核苷類似物如利巴韋林，viramidine,6-氟-3-羥基-2-吡嗪醯胺(Τ_705)，2'-脫氧-2'-氟鳥苷，吡唑呋林，3-脫氮雜鳥嘌呤，卡波啶(參見，例如Shannon等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物藥劑化學治療)(1981)20769-76)，和環penenyl胞嘧啶(參見，例如Shigeta等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物藥劑化學治療)(1988)32906-11)；和內切核酸酶抑制劑fIutimide(參見，例如Tomassini等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物藥劑化學治療)(1"6)401189-93)。在優選實施方案中，三聯組合中的一種抗病毒藥劑是利巴韋林或viramidine。流感-特異性幹擾寡核苷酸的實例包括siRNAs(參見，例如Zhou等，AntiviralRes.(抗病毒研究)(2007)76:186-93)，反義寡核苷酸，磷硫醯寡核苷酸，核酶(參見，例如Draper的美國專利號6，258，585)，嗎啉代寡聚體和肽核酸(參見，例如Schubert和Kurreck,HandbExpPharmacol.(2006)173:261—87)。神經氨酸酶抑制劑的實例包括奧塞米韋，奧塞米韋羧酸鹽(GS4071；參見，例如Eisenberg等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物藥劑化學治療)(1"7)411949-52)，扎那米韋，peramivir(RWJ-27021；BXC-1812，BioCryst)，2，3-二脫氫-2-脫氧-N-乙醯基神經氨酸(DANA)，2-脫氧-2，3-脫氫-N-三氟乙醯基神經氨酸(FANA)，A-322278，和A-315675(參見Maring等的美國專利號6，455，571，和Kati等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物藥劑化學治療)(2002)46:1014_21)。在優選實施方案中，三聯組合中的一種抗病毒藥劑是奧塞米韋，peramivir,或扎那米韋。在一個實施方案中，第一抗病毒藥劑是M2抑制劑，優選金剛烷胺；第二抗病毒藥劑是抗病毒核苷類似物，優選是利巴韋林或viramidine；且第三抗病毒藥劑是神經氨酸酶抑制劑，優選是奧塞米韋或扎那米韋。在另一實施方案中，第一抗病毒藥劑是金剛烷胺或金剛乙胺；第二抗病毒藥劑是利巴韋林或viramidine，且第三抗病毒藥劑是奧塞米韋，奧塞米韋羧酸鹽，peramivir或扎那米韋。利用適合特定藥劑的一種或多種施用途徑(例如，口服，腸胃外，通過吸入，經皮，鼻內，胃施用(例如，通過G-，NG-,J-，等飼管)，等等)施用所述組合的每種抗病毒藥劑。在不同實施方案中，製備所述抗病毒藥劑用於口服施用和/或胃施用(例如，通過飼管)，作為液體、糖漿、混懸液、片劑、膠囊、膠囊中的珠、或香囊劑中的珠。在一些實施方案中，至少一種抗病毒藥劑通過一種施用途徑(例如，腸胃外)施用，且至少一種抗病毒藥劑通過備選的施用途徑(例如，口服或通過吸入)進行施用。在口服給藥實施方案中，一種或多種抗病毒藥劑可以以立即釋放(IR)或延長釋放(ER)形式提供。ER劑型(在本領域中還稱為"控釋"，"緩釋"，和"改進釋放"劑型)的製備是公知的。適當的M2抑制劑ER劑型記述在USSN11/285，905和USSN11/399,879中，二者皆授予Went等，其內容通過引用結合於此。抗病毒藥劑可以作為獨立的製劑、同時、或順序地施用。備選地，兩種或多種抗病毒藥劑可以提供為單一劑型的組合組合物。當治療表現出嘔吐和/或腹瀉症狀的患者中的確定的流感病毒感染時，特別優選腸胃外施用，因為口服施用在迅速獲得需要的抗病毒藥劑血漿濃度方面可能不是有效的。優選地，腸胃外施用選自靜脈內輸注，靜脈內注射，或肌內注射。最優選靜脈內輸注。用於腸胃外施用的優選的試劑盒包括M2抑制劑(金剛烷胺或金剛乙胺)，抗病毒核苷類似物(利巴韋林或viramidine)，和任選地神經氨酸酶抑制劑(奧塞米韋，奧塞米韋羧酸鹽，或扎那米韋)，其與處於單一藥物組合物中的藥用載體一起腸胃外施用。在其他實施方案中，M2抑制劑，抗病毒核苷類似物，和任選的神經氨酸酶抑制劑，作為獨立的劑型腸胃外施用。在一些實施方案中，M2抑制劑、抗病毒核苷類似物、和神經氨酸酶抑制劑(如果存在)中的至少一種，最初以凍幹組合物形式提供，其在腸胃外施用之前用藥用載體重構。在一些實施方案中，M2抑制劑，抗病毒核苷類似物、和神經氨酸酶抑制劑(如果存在)，每一種最初提供在獨立的容器中，且此後在腸胃外施用之前與藥用載體組合。在一些實施方案中，一種所述抗病毒藥劑可以以凍幹形式提供，其通過其他抗病毒藥劑中的一種的液體製劑重構。所述三聯組合中每種藥物的血漿濃度優選維持在需要的Cmin和Cmax之間連續至少24，48，72，96，120，144，或168小時。利用常規臨床試驗來確定不同給藥方案的患者群體的平均Cmin，Cmax,和Cmean血漿濃度。該治療法的持續時間典型治療5_10天，或直到病毒已從患者清除。對於預防，抗病毒藥劑的日常劑量典型地是治療所用的50%，且在兩或更多周的療程中施用，典型地多至約6周或更多周，直到感染的危險降低。本發明還在下文關於下述進行例證特定抗病毒藥劑和抗病毒藥劑組合的使用，和它們所用的劑量和濃度。下文未進一步例證的其他抗病毒藥劑合適的劑量和濃度可以利用參考文獻中可用的信息或通過常規實驗，諸如在下述實施例中所述的和在本領域中通常是已知的，進行確定。在本發明的具體實施方案中，所述三聯組合的第一抗病毒藥劑是金剛烷胺或金剛乙胺，其以維持金剛烷胺或金剛乙胺的血漿濃度在0.05μg/ml(Cmin)-5.0μg/ml(Cmax)，優選0.1-3.0μg/ml,更優選0.1-1.5μg/ml，且最優選0.3-1.5μg/ml持續至少48小時的量施用給患者。可以通過以5-500mg/天，20-250mg/天，100-800mg/天，100-600mg/天，200-700mg/天，或200-500mg/天的量腸胃外或口服施用金剛烷胺或金剛乙胺而獲得需要的血漿濃度。金剛乙胺特別優選的日常口服劑量在約50-400mg/天，75-300mg/天，100-250mg/天，或100-200mg/天的範圍內。在一些實施方案中，示例性的金剛烷胺和金剛乙胺口服劑型包含至少約25，50，75，100，125，150，175或200mg/劑型且多至約75，100，125，150，175，200，225，250，275，300，350，或400mg/劑型。對於預防或治療，每天可以施用一個、兩個、三個或四個所述劑型一或兩次。得到的日常劑量可以為至少25，50，75，100，125，150，175或200mg/天且多至約和多至約75，100，125，150，175，200，225，250，275，300，325，350，400，450，500，550，600，650，700，750或80011^/天。在一個示例性治療中，患者每12小時(即BID)自我施用兩個125mg的金剛烷胺ER單位劑型(例如，膠囊或片劑)，總共約500mg/天金剛烷胺，典型地如下述與利巴韋林組合攝取。還在該實施例中，預防劑量是一個125mgER劑型BID。對於200mg/天或更多的金剛烷胺或金剛乙胺的口服施用，優選ER製劑，因為他們允許更低的Cmax/Cmin比例，由此最優化M2抑制劑濃度保持高於ED5tl的時間，同時最小化毒性。在優選的ER劑型中，金剛烷胺或金剛乙胺具有1小時內小於約70wt.%，2小時內小於約90wt.%,6小時內大於約40wt.%且12小時內大於約85wt.%的體外溶解模式，如使用USP2型(攪拌器)溶解系統以50rpm，在溫度37士0.5°C用500ml水作為溶解介質測量的。進一步優選的是金剛烷胺或金剛乙胺的ER製劑，其具有如上述測量的1小時內小於20wt%，2小時內小於約50%，6小時內大於約40%，且12小時內大於約90%的體外溶解模式。溶解的這種減少可以有利地減少在活性劑的血漿濃度方面劑量之間的可變性或提高活性劑的耐受性，特別是當施用是BID或QD時。在某些實施方案中，金剛烷胺或金剛乙胺處於口服劑型中，且具有至少4,5,6,7,8,9,10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，或20小時的Tmax0在具體實施方案中，患者通過靜脈內輸注以l_50mg/小時，3_40mg/小時，或5-30mg/小時的速率連續至少48，72，或96小時施用金剛烷胺。在本發明的一個實施方案中，所述三聯組合的第二抗病毒藥劑是利巴韋林或Viramidine0在優選實施方案中，利巴韋林或viramidine與以上文提及的量的金剛烷胺或金剛乙胺一起施用。利巴韋林或viramidine以這樣的量施用給患者，所述量獲得0.1μg/ml(Cmin)-10.0μg/ml(Cmax),0.5-8μg/ml,0.5-5μg/ml,1-6μg/ml,1-4μg/ml,2-6μg/ml，2-4μg/ml，0·01-2μg/ml，或0·2-2.0μg/ml的血漿濃度連續至少48，72，或96小時。需要的血漿濃度可以通過以50-2400mg/天，50_2000mg/天，50_1600mg/天，100-1200mg/天，400-800mg/天，50-600mg/天，75_500mg/天，或75_200mg/天的量腸胃外或口服施用利巴韋林獲得。在優選實施方案中，利巴韋林或viramidine以低日常劑量施用，所述劑量在與金剛烷胺或金剛乙胺和神經氨酸酶抑制劑如奧塞米韋、peramivir、或扎那米韋組合施用時具有相加的或協同作用。所述低劑量典型地為約10-800mg/天，25-600mg/天，50_600mg/天，且優選約75-500mg/天。在一個示例性治療中，患者自我施用一個160mg利巴韋林單位劑型BID，總共320mg/天利巴韋林。在具體實施方案中，利巴韋林或viramidine以至少約10，25，30，40，50，75，100，125，150，175或200mg/劑型和多至約150，175，200，250，300，350，400，450或500mg/劑型的量口服施用。對於預防或治療，一個、兩個、三個或四個所述劑型可以每天施用一次或兩次。得到的日常劑量可以為至少10，25，30，40，50，75，100，125，150，175或200mg/天和多至約100，125，150，175,200,225,250,275,300,325,350,400,450,500,550,600,650,700,750,800,1200，1600，或2000mg/天。在一個示例性的治療中，患者自我施用2X200mg劑型BID，總共約800mg/天。此外，在該實施例中，預防劑量是1X200mg劑型BID。利巴韋林或viramidine(和任選地所述其他抗病毒藥劑中的一種或兩種)可以在開始時以負載劑量的量施用，且此後以日常維持劑量的量施用，其中所述負載劑量的量是所述日常維持劑量的量的約1.5-約3倍。所述負載劑量可以通過與隨後的維持劑量相同或不同的途徑施用。所述負載劑量優選地通過腸胃外或口服施用，且最優選通過腸胃外施用。優選地，所述負載劑量作為靜脈內輸注、靜脈內注射、或肌內注射施用。利用靜脈內輸注，所述負載劑量可以通過在輸注給患者的第一靜脈內包中使用更高濃度的抗病毒藥劑獲得。備選地，初始靜脈內輸注包可以與隨後的靜脈內包具有相同濃度的活性劑，但是以增加的輸注速率(例如，3-6小時相比於8小時)施用。在具體實施方案中，患者通過靜脈內輸注以5_200mg/小時，10_150mg/小時，15-100，或20-80mg/小時的速率連續至少48，72，或96小時施用利巴韋林或viramidine。在本發明的一個特定的實施方案中，在耐受金剛烷胺或奧塞米韋單一治療的流感病毒治療中，利巴韋林或viramidine與金剛烷胺和奧塞米韋一起施用。在本發明的一個實施方案中，所述三聯組合的第三抗病毒藥劑是神經氨酸酶抑制齊U，其選自由下列各項組成的組奧塞米韋，奧塞米韋羧酸鹽，扎那米韋，和peramivir。奧塞米韋和扎那米韋是特別優選的。所述神經氨酸酶抑制劑，優選奧塞米韋或扎那米韋，以這樣的量施用給患者，所述量獲得0.001-5μg/ml，0·02μg/ml-5μg/ml0.1-3μg/ml，0.1-1μg/ml，0·3-3μg/ml,0.3-1μg/ml，0·001-0.1μg/ml,或0.0001-0.01μg/ml的血漿濃度連續至少48，72，或96小時。需要的血漿濃度可以通過以10-150mg/天，10-50mg/天，50-100mg/天，75-150mg/天，150_300mg/天，或100_500mg/天的量腸胃外或口服施用奧塞米韋獲得。扎那米韋典型地以25-150mg/天，優選40-100mg/天的量施用。在優選實施方案中，所述神經氨酸酶抑制劑以低日常劑量施用，所述劑量在與金剛烷胺和利巴韋林或viramidine組合施用時具有相加的或協同作用。在具體實施方案中，當在患者中維持血漿濃度為0.15-1.5μg/ml金剛烷胺，0.0001-0.01μg/ml奧塞米韋，和0.6-6μg/ml利巴韋林持續至少48，72，或96小時時獲得協同作用。獲得這些血漿濃度的具體劑量利用常規計算確定且通過臨床試驗驗證。奧塞米韋的低劑量典型地為約l_50mg/天，優選約l_25mg/天，且更優選約2.5-10mg/天。在一個示例性的治療中，患者自我施用單位劑型的25mg奧塞米韋，以QD或BID攝入。在優選實施方案中，在任何上述劑量中的奧塞米韋與任何上述量的金剛烷胺和利巴韋林組合攝入。在具體實施方案中，25mg的奧塞米韋以QD或BID與160mg金剛烷胺和160mg利巴韋林(以獨立的單位劑型，或以組合的單位劑型)一起攝入，所述金剛烷胺和利巴韋林也以QD或BID攝入。在另一個具體的實施方案中，75mg奧塞米韋以QD或BID與IOOmg金剛烷胺QD或BID和600mg利巴韋林QD或BID攝入。在具體實施方案中，患者通過靜脈內輸注以0.l-20mg/小時，0.4_7mg/小時，l-7mg/小時，l-5mg/小時，或2_7mg/小時的速率連續至少48，72，或96小時施用奧塞米韋。需要的扎那米韋血漿濃度可以通過以5-250mg/天，10-200mg/天，或25_150mg/天的量腸胃外施用獲得。在具體實施方案中，患者通過靜脈內輸注以0.I-IOmg/小時，0.4-7mg/小時，或l_5mg/小時的速率持續至少48，72，或96小時施用扎那米韋。在具體實施方案中，患者以l_75mg/天，l-50mg/天，l-25mg/天，10-150mg/天，50-100mg/天，75-150mg/天，或150_300mg/天的量口服施用奧塞米韋。在不同的實施方案中，如果存在，按照本發明施用的奧塞米韋的量可以是至少約1，2，5，10，15，20，25，30，40，50,60,70,75,80,90,100，110，120，130，140或150mg/劑型和多至約75,80,90,100，110，120，130，140，150，160，170，180，190或200mg/劑型。對於預防或治療，一個、兩個、三個或四個所述劑型可以每天施用一次或兩次。得到的日常劑量可以為至少1，2，5，10，15，20，25，30，40，50，60，70，75，80，90，100，110，120，130，140或150mg/天和多至約75，100，120，140，150，160，180，200，220，240，250，260，280或300mg/天。在一個示例性的治療中，患者自我施用75mg劑型BID，總共約150mg/天；對於預防，劑量為75mg，每24小時攝入一次(QD)。除了三聯抗病毒治療，患者可以給予輔助治療，以加強天然抗病毒反應。示例性的輔助治療包括用下列各項的治療幹擾素、聚乙二醇化的幹擾素、維生素D(參見，例如，Cannell等，EpidemiolInfect.(2006)1341129-40)，香葉基香葉基丙酮(參見，例如，Unoshima等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物藥劑化學治療)(2OO3H72914-21)，聚ICLC(參見，例如，Wong等，AntimicrobAgentsChemother.(抗微生物藥劑化學治療)(1995)392574-6)，Ampligen,和CpG-寡脫氧核苷酸(參見，例如，Lopez等，VetImmunolImmunopatho1.2006年11月15日；114(1-2):103_10)。所述輔助治療可以特別有益於預防流感。然而，對於活性流感傳染的治療，可能需要避免某些輔助治療(例如，幹擾素治療)。相反，抗病毒藥劑可以與抗-免疫/抗-炎性治療諸如皮質類固醇(例如，甲潑尼龍，氫化可的松，等)或他汀(例如，阿託伐他汀，辛伐他汀，等)聯合使用，以減少「細胞因子爆發(cytokinestorm)」的可能性。本發明的另一個方面是一種組合物及其在治療或預防人患者的流感中的應用。在不同的實施方案中，製備組合物用於口服、腸胃外、或胃施用(例如，通過飼管)，作為液體、糖漿、混懸液、片劑、膠囊、膠囊中的珠、或香囊劑中的珠進行施用。在具體實施方案中，所述組合物在用於口服、胃、或腸胃外施用的單一劑型中包括金剛烷胺或金剛乙胺，和利巴韋林或viramidine，和任選地奧塞米韋。在具體實施方案中，單一劑型包括與處於任意上述指定量的利巴韋林(即，25，50，75...500mg)和任選地處於任意上述指定量(即，25，30，40...200mg)的奧塞米韋組合的處於任意上述指定量(即，25，50,75...300mg)的金剛烷胺。在一個實施方案中，所述組合物包括利巴韋林和ER金剛烷胺的組合，其優選地具有如上述的體外溶解模式和/或Tmax。在一個實施方案中，所述組合物包括10-60重量百分數(wt.%),25-50wt.%，或50-75wt.%的金剛烷胺或金剛乙胺；和30-80wt.%,50-75wt.%，或25_50wt.%的利巴韋林或viramidine，其中所述重量百分數是基於該組合物中活性劑的總重。所述組合物還可以包括0.5-30wt.%奧塞米韋。在優選實施方案中，所述組合物包含這樣的量的金剛烷胺和利巴韋林，其在與神經氨酸酶抑制劑如奧塞米韋，peramivir，或扎那米韋用於三聯組合中用於流感的治療或預防時表現出如上述的相加或協同作用。對於腸胃外施用，所述組合物可以採用包含在小瓶中的凍乾粉末或無菌液體形式。所述小瓶可以適配橡膠隔片，以允許注射器進入從而重構或吸出小瓶內容物。對於口服施用，所述組合物可以處於單位劑型中，諸如膠囊或片劑。用於口服施用的一個示例性的單位劑型在片劑或膠囊中包括任選地採用ER形式的25-125mg或150-300mg金剛烷胺，，和50-200mg利巴韋林。本發明的一種劑型包括160mgER金剛烷胺HCL和120mgIR利巴韋林。另一種示例性的劑型是包括160mg金剛烷胺和160mg利巴韋林，和75mg奧塞米韋的膠囊。本發明的另一個方面是一種試劑盒，其包括M2抑制劑(例如，金剛烷胺或金剛乙胺)，抗病毒核苷類似物(例如，利巴韋林或viramidine)和任選地神經氨酸酶抑制劑(例如，peramivir，扎那米韋，或奧塞米韋)。在所述試劑盒中的抗病毒藥劑可以以共同包裝在一起的獨立的劑型提供，因為這可以最大化可以將適當治療量施用給需要其的受試者的容易性。在具體實施方案中，試劑盒包括香囊劑，其包含一種或多種活性劑。所述香囊劑可以包含適於口服、腸、或胃施用(例如，通過G-，NG-，或J-管).的單位劑量的量的活性劑的珠。當提供為用於口服施用的試劑盒時，所述抗病毒藥劑可以提供在泡眼包裝(blisterpack)中。單個泡眼可以包含一種抗病毒藥劑，或兩種，或所有三種。當提供為泡眼包裝時，優選將以每一給藥時間間隔提供的抗病毒藥劑獨立標識，一一這可以這樣實現通過將用於每次劑量的所有劑型提供在單一泡眼中，或如果包裝在獨立的泡眼中，包含用於每次劑量的劑型的泡眼可以分組或標識為一組，例如，通過在泡眼周圍印刷。典型地，所述試劑盒包括使用說明。在一些實施方案中，所述試劑盒可以包括一個或多個在第一包裝中的M2抑制劑(例如，金剛烷胺)和抗病毒核苷類似物(例如，利巴韋林)的容器，和在第二獨立包裝中的神經氨酸酶抑制劑。例如，所述試劑盒可以包括共同包裝在第一泡眼包裝中的金剛烷胺和利巴韋林，和在第二泡眼包裝中的75mg奧塞米韋膠囊。所述試劑盒可以通過共同包裝丁AMIFLU泡眼包裝和包括利巴韋林和金剛烷胺的泡眼包裝而製備。在本發明的另一種試劑盒中，大量供應的TAMIFLU(例如，政府儲備)用作奧塞米韋的來源。TAMIFLU膠囊的內含物被倒空，任選地重新檢測保存期穩定性，然後以少於75mg/膠囊(例如，10，25，35，50mg)的量重新封裝，且與相加或協同量的利巴韋林和金剛烷胺共同包裝。延長奧塞米韋的保存期且減少治療或預防流感所需要的日常劑量具有極大擴充抗病毒治療流行性流感的政府儲備的益處。在一個實施方案中，試劑盒包括提供為多個獨立口服劑型的金剛烷胺和利巴韋林，其中每一金剛烷胺劑型包括75-250mg金剛烷胺，並且每一利巴韋林劑型包括50_400mg利巴韋林。在具體實施方案中，試劑盒可以包括一個或多個泡眼包裝，其包括包含處於延長釋放劑型中的125mg鹽酸金剛烷胺的一個或多個劑型，和包含200mg利巴韋林的一個或多個劑型。在所述包裝中的泡眼可以排列或市售，以便每種類型的劑型中的一種應該每天施用一次或兩次。備選地，在泡眼中的劑型可以這樣排列，以指示一個金剛烷胺劑型應該每天施用兩次，且一個利巴韋林劑型應該每天施用一次，或在泡眼中的劑型可以這樣排列，以指示兩個金剛烷胺劑型和一個利巴韋林劑型應該每天施用一次。任選地，泡眼包裝可以設置為包括一個或多個相似設置的包括75mg奧塞米韋的劑型，或市售以每天施用一次或兩次。附圖的圖1和2舉例說明代表性的構型。備選地，所述試劑盒可以這樣安排，以最優化其與商購神經氨酸酶抑制劑(例如，TAMIFLU)聯合使用的便利性。在另一個實施方案中，可以提供這樣的試劑盒，其包括一個或多個泡眼包裝，其中每個泡眼包裝包括一組或多組泡眼，且在每組泡眼內，一個泡眼包含包括60-300mg處於延長釋放製劑中的金剛烷胺的一個或兩個片劑或膠囊劑型，且一個泡眼包含一個或兩個包括25-200mg利巴韋林的片劑或膠囊劑型。在泡眼包裝內的組數或試劑盒內提供的組數可以在1-約5，7，10，14，15，20，21，28，30，40，42或60之間變化。任選地，所述試劑盒包括關於每天施用一次或兩次的使用說明。用於口服施用金剛烷胺與利巴韋林的另一種示例性的試劑盒包括處於立即釋放或延長釋放形式的80mg，180mg,或330mg金剛烷胺的單位劑型；和330mg或660mg利巴韋林的單位劑型。在一種示例性的治療中，給患者施用660-2400mgRBV和360_660mg金剛烷胺作為第一劑量(例如，第一天AM)；此後(例如，第二天AM-第十天)，給患者施用660-1320mgRBV和180-660mg金剛烷胺，每天一次(QD)。當提供為用於腸胃外治療的試劑盒時，所述組合中的兩種或多種抗病毒藥劑以適於腸胃外施用的形式提供。例如，抗病毒藥劑可以單獨配製或共同配製，且填充到適當的容器如注射器、安瓿、或小瓶中。活性劑可以以凍幹組合物的形式提供在容器中，且在腸胃外施用之前用藥用載體重構。在其他實施方案中，活性劑可以以液體形式提供在容器中，其可以不必稀釋而施用(例如，用於靜脈內或肌內推注施用(bolusadministration))，或備選地添加到靜脈內輸注包中。在一些實施方案中，一種抗病毒藥劑可以以凍幹形式提供，在施用給患者之前，將其用試劑盒中提供的液體形式的另一種抗病毒藥劑重構。在一些實施方案中，M2抑制劑(例如，金剛烷胺或金剛乙胺)，抗病毒核苷類似物(例如，利巴韋林或viramidine)，和神經氨酸酶抑制劑(例如，奧塞米韋，扎那米韋，或peramivir)，如果存在的話，每一種處於獨立的容器中，且此後在腸胃外施用之前與藥用載體組合所述活性劑。每一容器可以包含單位劑量的活性劑，且每個試劑盒可以具有充足數目的容器，以治療個體患者至少12，24，48，或72小時。試劑盒可以具有關於一種或多種活性劑的負載劑量的獨特標記的容器，具有指示所述獨特標記的容器是在開始患者治療時使用的第一個容器的說明書。或者，負載劑量可以分開包裝，且可以具有關於使用的獨立說明書。用於口服治療的示例性試劑盒在下述實施例5-9中進一步詳述。用於腸胃外施用的示範性試劑盒在下述實施例11中描述。實施例1A在燒瓶中培養的A/Albany/1/98(H3N2)感染的MDCK細胞中，單一的和二聯和三聯組合中的金剛烷胺、奧塞米韋、和利巴韋林的抗病毒活性的劑量響應研究我們進行這樣的實驗，其設計為評估金剛烷胺，奧塞米韋，和利巴韋林組合在抑制A/Albany/1/98(H3N2)病毒複製中的劑量響應抗病毒活性。實驗的目的是證明與沒有藥物相比的病毒負荷的減少、和與單一治療相比的二聯和三聯組合的協同作用。在使用每種藥物作為單一治療的劑量範圍研究中證明關於每種藥物的EC25，EC50,和EC75(此處，例如，EC5(1，是在72小時減少50%的病毒的藥物濃度)。簡言之，利用先前所說16的方法(Smee等，Chemotherapy(化學治療)(2002)48:88_93)，將處於不同劑量的化合物添加到在燒瓶中生長的MDCK細胞中。在加入藥物後30分鐘，向每個孔中加入處於0.001PFU/細胞的感染複數的病毒。在24-78小時後，去除每個孔的細胞外病毒介質，在3，200g離心5分鐘，且滴定病毒。結果提供在表1A中。表1Atableseeoriginaldocumentpage17檢測單一的和處於所有可能的二聯和三聯組合對於組織培養物中的病毒複製的相加和/或協同作用關於每種藥物的EC25，EC5(I，和EC75濃度，總共檢測了64種條件(S卩，無藥物，9種單一治療，27種二聯組合治療，和27種三聯組合治療)。簡言之，在燒瓶中生長MDCK細胞為單層，向培養物中加入藥物，且通過以0.001PFU/細胞的感染複數(M0I)(S卩，感染病毒顆粒與被感染的細胞數目的比例)引入A/Albany病毒而感染細胞。培養物維持48小時，或直到在單層中致細胞病變作用變得明顯。在離心後，將上清作為3X500yl等分試樣保存在"70°C，用於TCID50,PFU，和NA分析，和作為1X200yl用於QPCR。如果對病毒複製的實際抑制大於利用Prichard等(AntimicrobAgentsChemother(抗微生物藥劑化學治療)(1993)37540-545)所述的MacSynergyII軟體計算的抑制，則確定藥物組合是協同作用的。使用金剛烷胺與利巴韋林和金剛烷胺與奧塞米韋的二聯組合，在將在人中導致較低不利副作用的足夠低的濃度，觀察到強協同作用。另外，與處於EC2dPEC5(l的金剛烷胺的三聯組合在將最小化或避免副作用的濃度表現出強協同作用。實施例1B在A/Sydney/05/97H3N2感染的MDCK細胞中，金剛烷胺，奧塞米韋和利巴韋林組合的抗病毒活性劑量響應研究本研究的目的是證明與無藥物相比，金剛烷胺、奧塞米韋和利巴韋林的三聯組合減少病毒負荷，且與單一治療相比表現出協同作用。除了下述之外，所用的方法與實施例IA中所用的方法相同。MDCK細胞在96-孔板中生長為單層，且通過引入處於0.OlPFU/細胞的MOI的A/Sydney/05/97H3N2病毒進行感染。以216種可能的組合中的每一種以下述濃度加入藥物金剛烷胺，處於0,0.032,0.1,0.32，1.0，和3.2μg/ml；奧塞米韋，處於0,0.001,0.0032，0.01,0.032，和0.1μg/ml；和利巴韋林，處於0,0.032,0.1,0.32，1.0，禾口3.2μg/ml。利用Prichard禾ΠShipman(1990)，同前所述，和Prichard等(1993)，同前所述中所示的三維分析方法來顯現上述圖5中所示的數據。與利巴韋林或奧塞米韋二聯組合的金剛烷胺表現出協同作用，而奧塞米韋與利巴韋林的二聯組合沒有協同作用。在下述濃度範圍觀察到協同作用金剛烷胺，處於0.1-1μg/ml；利巴韋林，處於0.032-1.0μg/ml；和奧塞米韋，處於0.001-0.032μg/ml。這些濃度對應於約50_200mg金剛烷胺，200_600mg利巴韋林，和2.5-25mg奧塞米韋的人日常劑量。在高於1μg/ml的金剛烷胺濃度沒有表現出協同作用，這是由於檢測測定法的局限性(即，存在病毒負荷的完全抑制)。該實驗進一步證明三種藥物在組合使用時的協同相互作用。在三聯組合中使用時，與作為單一治療使用的每種藥物相比，病毒對每種藥物的敏感性提高10-至超過100-倍。例如，使用處於1μg/ml濃度的金剛烷胺的單一治療導致病毒負荷約60%的減少，而使用處於0.1μg/ml的金剛烷胺與0.01μg/ml奧塞米韋和0.32μg/ml利巴韋林組合獲得大約相同的病毒負荷減少，這證明對金剛烷胺的敏感性增加10-倍。使用處於0.Iyg/ml濃度的奧塞米韋的單一治療導致病毒負荷約50%的減少，而處於0.001μg/ml的奧塞米韋與0.32μg/ml金剛烷胺和0.32μg/ml利巴韋林組合導致病毒負荷約65%的減少，這證明對奧塞米韋敏感性增加超過100-倍。使用處於1μg/ml和3.2μg/ml濃度的利巴韋林的單一治療分別導致病毒負荷約10%和95%的減少，而處於0.032μg/ml的利巴韋林與0.32μg/ml金剛烷胺和0.01μg/ml奧塞米韋組合導致病毒負荷減少約95%，這證明對利巴韋林敏感性增加100-倍。實施例IC在體外動力學測定中確定單一和組合治療的功效的研究本研究的目的是在A型流感/Victoria/3/75(H3N2)病毒感染的體外動力學模型中評估金剛烷胺，奧塞米韋，和利巴韋林作為單一藥劑和組合的抗病毒功效。通過由CCID50和qPCR測量的病毒負荷的減少和由病毒檢查確定的對病毒致細胞病變作用(CPE)的抑制而評估功效。第二個目的是確定最佳感染劑量和對於作為單一藥劑和組合的每種藥物的適當的給藥範圍。治療組在表IC中列出。每組檢測兩次，且在MDCK和SIAT-I細胞系中進行。表IC研究設計tableseeoriginaldocumentpage18tableseeoriginaldocumentpage19a每組檢測兩次，且在MDCK和SIAT-I細胞系中進行。將MDCK和SIAT-I細胞以4X105細胞/mL的細胞密度接種在T25燒瓶中的生長培養基中，總共5mL。允許細胞附著在燒瓶上過夜，且次日檢查燒瓶以驗證細胞為70%匯合。用具有或不具有藥物的5mL感染培養基洗滌細胞一次。在T=0時，燒瓶用A/流感/3/75(H3N2)以li^CCIDSO/ml的感染劑量進行感染。2小時後，去除培養基，且將細胞用具有藥物的5mL感染培養基洗滌一次。棄掉洗滌培養基，加入5mL具有藥物的新鮮感染培養基。在24小時，將燒瓶從培養箱中移出，且視覺檢查CPE。CPE，為細胞存活力的指示，通過在0-4的等級計分燒瓶而進行定量評估，4為最大CPE。計分是％存活力的估算。100%死亡的燒瓶計分為4。75%死亡的燒瓶計分為3，50%=2，25%=1，和0%=0。然後，從燒瓶中完全去除培養基，取得整分試樣，且冷凍隨後用於通過CCID50分析進行的病毒負荷定量。細胞單層用具有或不具有藥物的5mL感染培養基洗滌兩次，且加入5mL具有或不具有藥物的新鮮感染培養基。然後將燒瓶放回培養箱。在T=48，72，96，120，144，和168小時，重複該步驟。進行CPE評估，其在每個時間點為每種方案收集用於病毒負荷定量的樣品。在最後的時間點，將所有病毒負荷樣品解凍，且通過CCID50分析確定關於每個時間點的病毒負荷。將MDCK細胞以4XIO5細胞/ml接種在384-孔板中，每孔體積為50mcL。允許細胞附著過夜。然後向板中加入50μ1連續稀釋的病毒，且將板放回到培養箱中。在第3和6天，從培養箱中移出板，視覺計分CPE。6天後，將板在-80°C冷凍準備用於桑格測序(Sangersequencing)。CCID50，其定義為50%的孔被感染的劑量，利用Karber算法(Karber，1931)進行計算，由下述方程給出logCCID50=L-d(S-0.5)，此處L=在檢測中所用的最低稀釋的對數；d=在對數稀釋步驟之間的差異；和S=「陽性」檢測的比例的總和(即，顯示CPE的培養物)。在不存在藥物時，安慰劑組在SIAT-I和MDCK細胞系中在感染後48小時產生峰值病毒滴度。對於SIAT-I和MDCK細胞系，峰值病毒滴度相似，SIAT-I細胞在感染後48小時測量時在24小時的期間內產生6.751og10CCID50/0.05mL,MDCK細胞產生6.251og10CCID50/0.05mL。病毒似乎在SIAT中比在MDCK細胞中複製更快；在感染後24小時，對於SIAT，病毒滴度為41og10CCID50/0.05mL,對於MDCK細胞為2.251og10CCID50/0.05mL。達到峰值後，在兩種細胞系中病毒生產下降。可能地，病毒滴度的下降是由於所有的細胞均已被感染且被所述感染殺死。在病毒負荷和細胞存活力之間存在良好的相關性，所有的細胞均在峰值病毒滴度的同時或之後不久死亡。例如，對於SIAT細胞，安慰劑組的峰值病毒負荷在48小時發生，且完全的細胞死亡(0%細胞存活力)在48小時時發生；對於MDCK細胞，峰值病毒負荷在48小時時發生，且完全的細胞死亡在72小時時發生。在SIAT和MDCK細胞中，使用作為單一藥劑的藥物治療在24小時給出劑量-依賴性的病毒負荷抑制。在24小時的時間點，與安慰劑組相比較，作為單一藥劑的每種藥物以高劑量在SIAT細胞中減少病毒負荷3-41ogs，在MDCK細胞中減少21ogs。對於作為單一藥劑的所有三種藥物，在24小時的時間點觀察到的抑制不是持續不變的，可以在以後的時間點檢測到高病毒滴度。因此，沒有任何一種單一藥劑治療方案成功地完全抑制病毒複製，儘管在所有情形中，與安慰劑相比較，單一藥劑治療將病毒生產的峰值延遲24-48小時。對於單一藥劑方案的細胞存活力數據與病毒負荷數據一致單一藥劑治療能夠延遲，但不抑制細胞死亡率。在SIAT細胞中，所有單一藥劑組在72小時具有完全的細胞死亡率，與安慰劑相比較，高劑量的每種藥物將細胞死亡延遲24小時。在MDCK細胞中，與安慰劑相比較，單一藥劑治療將細胞死亡延遲最大48-72小時。關於細胞存活力，最好的單一藥劑方案是0.5μg/mL劑量的金剛烷胺，其中直到感染後144小時才觀察到明顯的細胞死亡。組合方案也表現出對病毒複製的劑量依賴性抑制。在SIAT細胞中，與安慰劑相比較，低劑量組合組將峰值病毒生產延遲24小時，且中劑量組合組將峰值病毒生產延遲48小時。在兩組中，對於低和中劑量，病毒生產分別達到相對高的滴度6.1和4.91og10CCID50/0.05mL，儘管作為時間函數的病毒負荷在測量的所有時間協同性減少超過2_倍。然而，高劑量組合組，將病毒生產完全抑制到不可檢測的水平持續到在感染後168小時採集的最後時間點。與病毒生產的完全抑制一致，在高劑量組合組中的細胞還完全被保護免於細胞死亡，持續到在感染後168小時測量的最後時間點。給出這樣的事實，即，在該方案下，在整個研究過程中，SIAT和MDCK細胞均為100%存活，可以推論所有三種藥物的組合在測試的高劑量不是細胞毒性的，且對病毒生產的抑制是由於組合中藥物的協同抗病毒作用，而不是人為的細胞毒性的結果。低和中組合劑量在SIAT細胞中分別將細胞死亡延遲24和96小時，且在MDCK細胞中分別延遲72和96小時。此外，在這些低病毒複製速率下，三聯組合完全抑制耐藥性的形成。因此，三聯組合可以導致流感病毒生長和耐藥性的速率的協同性減少。更具體地，在使用M2抑制劑(例如，金剛烷胺)，神經氨酸酶抑制劑(例如，奧塞米韋，扎那米韋)和複製抑制劑(例如，利巴韋林)時，與金剛烷胺0.15-1.5μg/ml，奧塞米韋0.0001-0.Olyg/ml，和利巴韋林0.6-6μg/ml的濃度範圍相比，在生長速率中存在大於2-倍的協同性減少。實施例2金剛烷胺，奧塞米韋，和利巴韋林的三聯組合對空心纖維系統中的野生型H3N2流感的作用我們設計實驗以利用先前所述的方法(Drusano等，AntimicrobAgentsChemother(抗微生物藥劑化學治療)(2002)46:464_470)來檢測金剛烷胺，奧塞米韋，和利巴韋林的三聯組合對空心纖維模型中的病毒複製的作用。藥物，單一的和組合的，通過穩定狀態的連續的輸注以穩定狀態的濃度遞送168小時。簡言之，IO8MDCK細胞生長在空心纖維中，且通過引入IO2感染流感病毒的細胞進行感染，其通過塗布在處於雙重儲蓄庫空心纖維系統(dualreservoirhollowfibersystem)中的細胞培養基中進行。檢測了野生型A型/Albany(H3N2)毒株。維持培養物168小時。在T=感染後24，48，72，96，120，144，和168小時，從空心纖維中去除樣品，且進行滴定，以確定病毒滴度。在空心纖維的藥物一側，進行12個獨立的實驗，以檢測表2所示的藥物組合和濃度。表2tableseeoriginaldocumentpage21在不同時間點，將樣品從空心纖維去除，以確定感染的病毒的數目。還通過桑格方法測序來自不同時間點的病毒，以確定NA，HA，和M2基因的序列。與使用單一藥物治療相比較，使用組合治療時序列變化的減少表明三聯組合抑制針對任一種藥物的耐藥性突變株的產生。單獨的金剛烷胺在低劑量具有可以忽略的作用，在高劑量在48小時滴度具有2-31og減少；單獨的奧塞米韋在兩種劑量均具有Ilog減少；單獨的利巴韋林在低劑量具有可以忽略的作用，且在高劑量在48小時具有31og減少。所有三種藥物的組合在低劑量在48小時導致滴度Slog減少，病毒生長4-log協同減少。所有三種藥物的組合在高劑量在所有時間點導致協同性和完全的抑制(即，>Slogs)。因此，三聯組合在下述濃度表現出協同性金剛烷胺0.1-1μg/ml，奧塞米韋0.001-0.01μg/ml，和利巴韋林0.5-5μg/ml。這些濃度對應於約50-700mg金剛烷胺，200-2500mg利巴韋林，和2.5-lOmg奧塞米韋的人日常劑量。另外，關於金剛烷胺和奧塞米韋的單一治療組導致明顯的M2和NA耐藥性的形成，而三聯高劑量組不導致。實施例3A:金剛烷胺，奧塞米韋，和利巴韋林的三聯組合對治療小鼠中的流感的作用我們設計該實驗來確定金剛烷胺，奧塞米韋，和利巴韋林三聯組合在小鼠流感感染模型中的作用。將雌性小鼠(17-18g)通過腹膜內注射(i.P.)用氯胺酮(100mg/kg)麻醉。在病毒激發前約12小時，通過皮下途徑將包含金剛烷胺的Alzet滲透泵通過手術插入到小鼠的背部。在感染的時刻，將小鼠再用氯胺酮麻醉。它們用每隻小鼠處於90-μ1接種體積中的約2ΧIO4細胞培養物感染劑量(CCID5tl)的A/ViCtoria/3/75(H3N2)病毒鼻內(i.n.)感染。在感染前不久給予使用奧塞米韋和利巴韋林的第一口服治療(通過管飼)，然後每天一次持續7連續日(以12小時的間隔)。存在通過口腔管飼接受水的20隻安慰劑-處理的動物，和開始時每個藥物_處理組12隻小鼠。保持小鼠21天，以觀察死亡，且每隔一天作為一組稱重。金剛烷胺通過Alzet泵以3mg/ml或10mg/ml施用，以分別遞送4mg/kg/天或13mg/kg/天；奧塞米韋通過口腔管飼法以30mg/kg/天或10mg/kg/天施用；利巴韋林通過口腔管飼法以7mg/kg/天或21mg/kg/天施用。藥物作為單一治療或以六種可能的三聯組合施用。所有的單一治療在防止死亡中針對感染均是高度有效的，例外的是3mg/ml的金剛烷胺和7mg/kg/天的利巴韋林。死亡的時間在這些劑量顯著增加，且使用3mg/ml金剛烷胺27%的存活率(11隻中有3隻存活)顯著不同於安慰劑對照。所有的組合治療防止死亡率達90-100%。這是未曾預料到的，這是基於下述事實奧塞米韋單一治療本身在10和30mg/kg/天提供92-100%的存活益處，以這些有效劑量的奧塞米韋是所有組合的成分。10mg/ml劑量的金剛烷胺同樣是92%保護性的，因此使用該藥劑的組合將同樣是高度保護性的。3mg/ml的金剛烷胺和7mg/kg/天的利巴韋林使得這些組中的足夠多的小鼠死亡，以顯示不同於安慰劑對照的死亡延遲。其他劑量的每種化合物是高度保護性的。組合中所用的化合物表現出與兩種劑量的奧塞米韋或10mg/ml劑量的金剛烷胺相似的死亡模式。所有的三聯組合方案等價於或優於所有的單一治療方案的事實表明，三種藥物在組合中在測試的劑量不是拮抗性的。如果在該三種藥物的任一種之間存在顯著的拮抗性，預計三聯組合將產生低於單一治療的功效。綜上所述，存活數據對於評估通過使用組合的藥物獲得的益處沒有用。然而，證明體重數據對於評估組合的化合物的益處是有用的。感染引起安慰劑組的體重嚴重下降。感染過程中的體重減少在10mg/ml金剛烷胺組中最小，但是體重減少在其他5個單一治療組中(即，金剛烷胺3mg/ml，奧塞米韋10或30mg/kg/天，和利巴韋林7或21mg/kg/天)更明顯。使用動物研究的UK/EU死亡率標準(死亡=20%體重減少)，我們發現10mg/kg/天的奧塞米韋保護40%的小鼠，3mg/ml的金剛烷胺保護10%，且7mg/kg/天的利巴韋林保護0%。當以相同藥物濃度用作三聯組合時，100%的小鼠得到保護。因為10mg/ml的金剛烷胺作為單一治療時高度保護性的；在單一治療和該組合之間不存在體重方面的較大不同，但是仍然存在不同，這支持該組合是更優越的。三聯組中的耐藥性形成比在單一治療組中記錄的少得多(0相對於2%)。這些結果證明包含金剛烷胺、奧塞米韋、和利巴韋林的三聯組合在為感染A型流感(H3N2)病毒的小鼠提供功效和耐藥性益處中是有效的。實施例3B金剛烷胺、奧塞米韋、和利巴韋林的三聯組合對治療小鼠中流感的作用重複上述實驗，不同的是治療的起始直到小鼠感染病毒後24或48小時才開始，且使用下述藥物濃度金剛烷胺28mg/kg/天，奧塞米韋10mg/kg/天，和利巴韋林40mg/kg/天。在治療在感染後24小時起始的研究中，至感染後第9天，金剛烷胺單一治療和奧塞米韋單一治療組具有100%的死亡率(使用UK/EU死亡率標準)；利巴韋林單一治療組具有20%的存活；且三聯組合治療組具有90%的存活。在治療在感染後48小時起始的研究中，至第9天，所有組均具有超過20%的體重減輕。然而，三聯組合治療組具有約22%的最少量的體重減輕；利巴韋林單一治療組具有約26%的體重減輕；金剛烷胺單一治療和奧塞米韋單一治療組分別具有接近35%的體重減輕。至第13天，所有治療組已經開始增重，但是三聯組合治療組中的增重顯著更高在該組中的動物為約90%它們的初始體重。相比較，利巴韋林單一治療組中的動物為約80%它們的初始體重，奧塞米韋單一治療和金剛烷胺單一治療組中的動物不比未治療的對照更好(約65-70%它們的初始體重)。實施例4金剛烷胺，奧塞米韋和利巴韋林組合在燒瓶中培養的H5W感染的MDCK細胞中的抗病毒活性的劑量響應研究我們設計該實驗來評估金剛烷胺，奧塞米韋，和利巴韋林組合在抑制A/Indonesia/05/2005(H5N1)和A/Vietnam/1204/2004(H5N1)病毒複製和產生耐藥性突變體中的劑量響應抗病毒活性。本實驗的目的是證明與無藥物相比的病毒負荷的減少和與單一治療的組合的協同作用。MDCK細胞在96-孔板中生長為單層。在T=O時，向細胞中加入150μL20TCID50/mL的病毒。此後立即，向孔中加入50μL藥物，單獨的或組合的，以提高指示的終濃度。藥物以下述濃度在單一治療中進行檢測金剛烷胺，0.00032，0.001,0.0032,0.01,0.032,0.1,0.32，1,3.2，10,32和100μg/ml；奧塞米韋，0.0001，0.00032,0.001,0.0032，0.01，0.032,0.1，和0.32，1.0，3.2，10，32μg/ml；和利巴韋林，0.00032,0.001,0.0032,0.01,0.032,0.1,0.32，1,3.2，10,32和100μg/mlμg/ml。檢測每種藥物在組合中的六種劑量金剛烷胺，0，0.01，0.032,0.1,0.32，和1.0μg/ml；奧塞米韋，0，0·00032,0.001,0.0032,0.01,0.032μg/ml；和利巴韋林，0，0.032,0.1,0.32,1,和3.2μg/mlο在T=72小時，合併來自一式兩份樣品的每個孔的100μL上清，且冷凍用於TCID50分析。剩餘的細胞單層通過MTS染色測定細胞存活力。實施例5延長釋放的鹽酸金剛烷胺，利巴韋林和磷酸奧塞米韋的試劑盒參考圖1A，排列按照本發明的泡眼包裝(10)來提供多行(12)，每行(12)包括多個劑量(14)。在本實施例中，存在這樣的兩行(12)，每行包括7個劑量，儘管行或劑量的數目可以便利地進行改變。每個劑量包括多個不同種類的劑型，其按類型在每行中一起分組在獨立的泡眼(20)中，形成次行(18)。第一種劑型(A)包含金剛烷胺，第二種(B)包含利巴韋林，第三種(C)包含奧塞米韋。對於給定劑量的不同種劑型以這種方式分組在一起，以有利於遵守指示的給藥方案。在該實施例中，單一劑量包括兩個金剛烷胺膠囊(A)，兩個利巴韋林膠囊(B)和一個奧塞米韋膠囊(C)，儘管關於每種劑量的每種劑型的數目也可以按需要而改變。圖IA所示的泡眼包裝設置用於在7天的時間期間內便利的BID給藥每種活性劑。圖IB所示的泡眼包裝與圖IA所示的相同，不同的是奧塞米韋QD給藥。該實施例的金剛烷胺膠囊(A)分別包含125mg延長釋放形式的鹽酸金剛烷胺(例如，如按照USSN11/285，905所製備)，且排列在第一和第四次行(18)的每個泡眼(20)中，儘管每個膠囊可以按需要包含或多或少的金剛烷胺或不同的金剛烷胺鹽形式。該實施例的利巴韋林膠囊⑶分別包含200mg立即釋放形式的利巴韋林，例如，利巴韋林USP膠囊(Schering)，且排列在第二和第五次行(18)的每個泡眼(20)中，儘管每個膠囊可以按需要包含或多或少的利巴韋林。該實施例的奧塞米韋膠囊(C)分別包含75mg奧塞米韋，例如，TAMIFLU(RochePharmaceuticals(羅氏製藥))，且排列在第三和第六次行(18)的每個泡眼(20)中，儘管每個膠囊可以按需要包含或多或少的奧塞米韋。所示泡眼包裝還包括說明書，其指示兩種金剛烷胺膠囊、兩種利巴韋林膠囊和一種奧塞米韋膠囊每天兩次的典型的成人劑量。應該理解該實施例的泡眼包裝包含足以用於給藥一周的劑型，其包括28個包含125mg鹽酸金剛烷胺的膠囊，28個包含200mg利巴韋林的膠囊，和14個包含75mg磷酸奧塞米韋的膠囊。因此，每個日常劑量的每種活性劑的相對百分數為35wt.%鹽酸金剛烷胺，55wt.%利巴韋林和IOwt.%磷酸奧塞米韋。實施例6鹽酸金剛烷胺、利巴韋林和磷酸奧塞米韋的試劑盒設置與實施例5的泡眼包裝相似的泡眼包裝，以提供每行7個泡眼(20)的3個次行(18)的兩行(12)。將兩個片劑或膠囊的IOOmg立即釋放形式的鹽酸金剛烷胺(A)，例如，Symmetrel(EndoPharmaceuticals或Novartis)包裝在第一和第四次行(18)的每個泡眼(20)中。將兩個膠囊的200mg立即釋放形式的利巴韋林，例如，利巴韋林USP膠囊(Schering)包裝在第二和第五次行的每個泡眼(20)中。將一個膠囊的75mg奧塞米韋，例如，Tamiflu(RochePharmaceuticals(羅氏製藥))包裝在第三和第六次行的每個泡眼(20)中。所述泡眼包裝還包括說明書，指示兩個金剛烷胺片劑或膠囊、兩個利巴韋林膠囊和一個奧塞米韋膠囊每天兩次的典型成人劑量。所述泡眼包裝包含足以用於一周給藥的劑型。實施例7延長釋放的鹽酸金剛烷胺和利巴韋林的試劑盒參考圖2，按照本發明的不同的泡眼包裝(30)包括兩行(32)，每行中的兩個次行(38)的每個包含7個泡眼(40)，以提供每行兩排7個劑量(34)。每個劑量(34)包括兩種不同的活性劑，即金剛烷胺(A)和利巴韋林(B)，其分別包含在不同類型的劑型中。每種劑量(34)的每種劑型排列在獨立的泡眼(40)中。每種劑量(34)的金剛烷胺㈧和利巴韋林(B)劑型分組在一起，以有助於遵守給藥方案。在該實施例中，每種劑量(34)包括兩個金剛烷胺膠囊(A)和兩個利巴韋林膠囊(B)0將兩個膠囊(A)的125mg延長釋放形式的鹽酸金剛烷胺(按照USSN11/285，905製備)包裝在第一和第三次行(38)的每個泡眼(40)中。將兩個膠囊的200mg立即釋放形式的利巴韋林(B)，例如，利巴韋林USP膠囊(Schering)包裝在第二和第四次行(38)的每個泡眼(40)中。該泡眼包裝(30)還包括說明書，指示兩個金剛烷胺延長釋放膠囊(A)和兩個利巴韋林膠囊(B)每天兩次(BID)的典型的成人劑量(34)。所述泡眼包裝包含足以用於一周給藥的劑型。所述試劑盒可以與獨立包裝的神經氨酸酶抑制劑如奧塞米韋或扎那米韋聯合使用。因此，任選地，所述說明書可以包括進一步的指示，以共同施用與金剛烷胺和利巴韋林劑型聯合的一個膠囊的75mg奧塞米韋，例如，Tamiflu(RochePharmaceuticals(羅氏製藥))(未顯示)每天一次或兩次。任選地，向受試者獨立地提供來自該試劑盒的奧塞米韋或扎那米韋作為另外開的藥物。實施例8延長釋放的鹽酸金剛烷胺、利巴韋林和奧塞米韋的試劑盒參考圖3A，用於施用鹽酸金剛烷胺(amantadinechloride)、利巴韋林和奧塞米韋組合的另一種試劑盒包括泡眼包裝(50)，其限定兩行(52)泡眼，每行(52)包括兩個7個泡眼(60)的次行(58)，每個次行每行限定7個劑量(54)。行(52)作為將每個劑量(54)所需要的兩種不同類型的劑型(D，E)分組在一起。每個劑量(54)包括多個一種類型(D)的膠囊和一個另一種類型(E)的膠囊。在本實施例中，每個劑量存在3個一種類型(D)的膠囊，但是當需要時可以使用更少或更多的所述膠囊。所述一種類型(D)的膠囊包括利巴韋林和鹽酸金剛烷胺，其中鹽酸金剛烷胺提供為延長釋放製劑，且利巴韋林處於立即釋放製劑中，該兩種製劑共同包封。另一種類型(E)的膠囊包括奧塞米韋，且與金剛烷胺-利巴韋林膠囊⑶分組在一起，以有助於遵守指示的說明書。如果需要可以使用每個劑量(54)多於一個膠囊的另一種類型(E)。該實施例的泡眼包裝(50)因此設置用於在7天的時間期間內BID給藥活性成分。圖3B所示的泡眼包裝與圖3A所示的相同，不同的是奧塞米韋QD給藥。實施例9延長釋放的鹽酸金剛烷胺、利巴韋林和奧塞米韋的試劑盒圖4中顯示按照本發明的不同泡眼包裝(70)。所述泡眼包裝(70)以與上述實施例5-8相似的方式限定兩行(72)泡眼(80)。然而，在該實施例中，不存在次行，每行包括單排7個泡眼(80)，每個泡眼容納多個均為相同類型的劑型(F)，以便在每個泡眼內有足夠的劑型(F)形成單一劑量(74)。因此，每行(72)提供7個劑量(74)。在該實施例中的每個劑型(F)包括延長釋放形式的鹽酸金剛烷胺，利巴韋林和任選的奧塞米韋。因此，所述泡眼包裝(70)設置為在7天的時間期間內BID給藥每種活性劑。所述試劑盒可以單獨使用，特別是在所述劑型包括金剛烷胺，利巴韋林和奧塞米韋的情形中，或與獨立包裝的神經氨酸酶抑制劑，例如，奧塞米韋聯合使用。實施例10使用ER金剛烷胺，ER奧塞米韋，和IR利巴韋林組合在流感患者中的多劑量安全研究我們設計表4所述的臨床研究，以確定與IR利巴韋林共同施用的金剛烷胺和奧塞表4tableseeoriginaldocumentpage26劑量:選擇的劑量是基於先前的單一遞增劑量(SAD)研究例如，IOOmg金剛烷胺SR+75mg奧塞米韋+400mg利巴韋林，IOOmg金剛烷胺SR+75mg奧塞米韋+600mg利巴韋林，200mg金剛烷胺SR+75mg奧塞米韋+400mg利巴韋林，200mg金剛烷胺SR+75mg奧塞米韋+600mg利巴韋林，200mg金剛烷胺SR+150mg奧塞米韋+600mg利巴韋林，或200mg金剛烷胺SR+150mg奧塞米韋+800mg利巴韋林，QD，7天不利事件每天監測至少兩次，監測關於高劑量的金剛烷胺或奧塞米韋報導的行為、心血管、和腸胃作用(包括頭昏、頭痛、混亂、便秘、高血壓、咳嗽、噁心、腹瀉、嘔吐)。血液收集在研究期間的第一天通過導管，然後其餘的研究時間每天2-4次測定以測量金剛烷胺、奧塞米韋、利巴韋林和潛在的其他生理學參數，不利事件實施例11靜脈內三聯組合抗病毒藥物治療對於治療嚴重禽流感的安全性和功效的2期臨床試驗我們設計該研究來1)評估靜脈內三聯組合抗病毒藥物治療(TCAD)在治療患有嚴重禽流感的患者中的安全性和耐受性；2)評估在治療過程中TCAD的抗病毒功效的速率和程度，其通過負反轉錄酶-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測上呼吸道和下呼吸道的、胃腸道(糞便)，和血液(病毒血)，鼻和喉中的病毒核酸(RNA)而進行評估；和3)通過焦磷酸測序(或等價的)評估在治療過程中抗病毒藥物抗TCAD的速率和程度。研究大小12名患者包括標準1)年齡彡1歲；2)發燒彡38.0°C；3)至少一種呼吸症狀咳嗽，呼吸困難(呼吸短促)，和/或喉嚨疼痛；4)在最後7天開始的病態(發燒、呼吸症狀、或組成型症狀發作)；和5)在病態發作時間前14天內具有由滿足下述標準中的一種而定義的關於禽流感的流行性危險的跡象(a)在受試者的村落或周圍(在2km半徑內)存在死亡的或病的鳥類；(b)受試者具有直接的鳥類或家禽接觸(健康的或病的鳥類或家禽)；(c)受試者與患有已知的或懷疑的禽流感的人有面對面接觸；或(d)受試者可能在實驗室暴露於H5W病毒。排除標準1)對鹽酸金剛烷胺、扎那米韋、和/或利巴韋林，和或對這些藥物產品的任何成分的過敏性或嚴重不耐性的歷史(由研究者判斷)；和2)由研究者利用即用信息確定的對於患者臨床症狀的備選的解釋(即，排除流感)。篩選標準1)下述樣品通過定量RT-PCR檢測H5，然而，開始TCAD治療的決定不依賴於來自這些檢測的結果的接收鼻拭樣χ2;口咽(喉)拭樣χ2;鼻咽吸出物(NPA;因為NPA是對於某些受試者的強迫性檢測，故可以省略NPA或可以用鼻洗液替代NPA用於研究者的判斷)；支氣管小泡灌洗液(BAL)或氣管內管吸出物；血液樣品(對於病毒血，CBC,和血清化學)；和彡12歲女性的孕期尿液。TCAD給藥方案治療的持續時間最少5天，但是可以由醫師基於關於每名個體患者的益處/危險評估而確定延長。用於5天治療的試劑盒包括1)10小瓶包含4ml在具有或不具有緩衝劑的水中的100mg/ml金剛烷胺，2)10小瓶包含15ml在具有或不具有緩衝劑的水中的75mg/ml利巴韋林，和3)10小瓶包含7ml在具有或不具有緩衝劑的水中的10mg/ml扎那米韋，或者，作為扎那米韋的備選物，10小瓶凍幹的奧塞米韋。對於治療，將來自金剛烷胺小瓶的3.3ml吸取到注射器中，且注射到500ml0.9%或5%葡萄糖/0.45%鹽水的輸注包中，產生0.66mg/ml的金剛烷胺濃度；輸注體積速率設定為40ml/min，其導致26mg/小時(630mg/天)的輸注給藥速率。將來自利巴韋林小瓶的13.5ml吸取到注射器中，並且注射到500ml鹽水輸注包中，產生2.03mg/ml的利巴韋林濃度；輸注體積速率設定為40ml/min，其導致84.6mg/小時(2030mg/天)的輸注給藥速率。將6.5ml扎那米韋吸取到注射器中，且注射到500ml鹽水輸注包中，產生0.13mg/ml的扎那米韋濃度；輸注體積速率設定為40ml/min，其導致5.3mg/小時(127mg/天)的輸注給藥速率。作為扎那米韋的備選物，將5ml水吸取到注射器中，且注射到凍幹的奧塞米韋的小瓶中，以重構該無菌粉劑，產生46mg/ml磷酸奧塞米韋的濃度；輸注體積速率設定為40ml/min，其導致18.4mg/小時(442mg/天)的輸注給藥速率。在這些輸注速率，每12小時需要準備新的每種抗病毒藥劑包。安全性監測不利事件。使用分級成人和兒科不利事件嚴重性的AIDS表格的NIH部分(NIHDivisionofAIDSTableforGradingtheSeverityofAdultandPediatricAdverseEvents)(DAIDSAE分級表格)來評估不利事件的嚴重性。臨床評估臨床評估包括住院死亡率；在治療過程中臨床失敗的比率和程度[臨床失敗定義為死亡、嚴重呼吸急促(對於年齡>12歲的呼吸速率>30，對於年齡為6-12歲的速率彡40，對於年齡3-6歲的速率彡45，對於年齡為1-3歲的速率彡50)；嚴重呼吸困難(不能說出完整的句子，或使用輔助呼吸肌)；通過經皮方法在房間空氣動脈氧飽和<92%；需要機械通風或I⑶住院]；對於受試者28-天的死亡率；對於受試者180-天的死亡率；對於受試者任何時候使用機械通風；對於患有禽流感的受試者ICU住院的次數；對於受試者在任何時候發展急性呼吸窘迫症候群(ARDS)；對於受試者住院治療的持續時間；由不存在發燒，無或最少症狀，不需要減少藥物，和恢復正常活動所定義的症狀持續時間。病毒學終點病毒學評估包括治療過程中由負RT-PCR關於鼻和喉拭樣、血液、NAL和BAL樣品的病毒RNA評估的病毒負荷和釋放的速率和程度；由焦磷酸測序確定的出現金剛烷胺或扎那米韋抗病毒藥物耐藥性的速率和程度；和耐藥性變體的遺傳表徵。權利要求用於治療或預防人患者中的流感的組合物，所述組合物包括10-60重量百分比(wt.％)的金剛烷胺和30-80wt.％的利巴韋林，其中所述重量百分比是基於所述組合物中活性劑的總重。2.權利要求1的組合物，其還包括0.5-30wt.%的奧塞米韋。3.權利要求1的組合物，其採用用於口服施用的單位劑型。4.權利要求3的組合物，其包括25-125mg金剛烷胺和50_200mg利巴韋林。5.權利要求3的組合物，其包括至少125mg處於延長釋放形式的金剛烷胺，和少於200mg的利巴韋林。6.權利要求5的組合物，其中所述金剛烷胺處於延長釋放的形式。7.權利要求1的組合物，其採用在小瓶中的凍乾粉末形式。8.權利要求1的組合物，其採用在小瓶中的無菌液體形式。9.用於治療或預防患者中的流感的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的第一、第二和第三抗病毒藥劑組合，所述組合包括a)選自由金剛乙胺和金剛烷胺組成的組的M2抑制劑；b)選自由利巴韋林和viramidine組成的組的RNA聚合酶抑制劑；和c)選自由奧塞米韋、奧塞米韋羧酸鹽、扎那米韋、和peramivir組成的組的神經氨酸酶抑制劑(NAi)。10.權利要求9的方法，其中所述第一和第二抗病毒藥劑以這樣的量施用，相對於用作單一治療時流感病毒對所述第三抗病毒藥劑的敏感性，所述量增加流感病毒對組合中的第三抗病毒藥劑的敏感性至少2倍。11.權利要求9的方法，其中所述抗病毒藥劑通過選自由下列各項組成的組的方法施用給患者口服、腸胃外、吸入、以及它們的組合。12.權利要求1的方法，其中所述患者以維持血漿濃度在0.3-1.5ug/ml持續至少48小時的量施用金剛烷胺。13.權利要求1的方法，其中所述患者以200-500mg/天的量腸胃外或口服施用金剛烷胺。14.權利要求9的方法，其中所述患者口服施用處於延長釋放形式的金剛烷胺。15.權利要求9的方法，其中所述流感病毒耐受金剛烷胺或奧塞米韋單一治療。16.用於治療或預防患者中的流感的試劑盒，所述試劑盒包括金剛烷胺和利巴韋林。17.權利要求16的試劑盒，其用於口服治療或預防，所述試劑盒包括多種劑型，所述多種組成一個或多個劑量，每個劑量包括治療或預防有效量的利巴韋林和金剛烷胺組合。18.權利要求16的試劑盒，其中所述金剛烷胺和利巴韋林作為獨立的劑型配製。19.權利要求16的試劑盒，其中所述金剛烷胺和利巴韋林共同配製為單一劑型。20.權利要求16的試劑盒，其還包括奧塞米韋。全文摘要本發明提供了用於治療或預防流感的組合物、試劑盒和方法。文檔編號A61K31/7056GK101835503SQ200880015851公開日2010年9月15日申請日期2008年3月12日優先權日2007年3月13日發明者烏爾代亞·米基·S,伯克奧斯·特裡·L,保羅·斯彭斯,戴維·切爾諾夫,傑克·源,查普曼·羅恩,格雷戈裡·T·溫特,蒂莫西·J·富爾茨申請人:愛德摩斯藥品公司