微粒吸附沉降免疫法的製作方法

2023-09-13 17:07:50 2

專利名稱：微粒吸附沉降免疫法的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種免疫學檢測法,特別是用致敏膠乳(或其他免疫微粒)與待 測物結合或與待測物競爭形成微粒免疫複合物，用致敏血球(或其他更易使其沉降的 免疫微粒)與微粒免疫複合物結合併沉降，再檢測上層液中的濁度、微粒計數或其他 顯示值的免疫檢測法。
背景技術：
免疫微粒技術特指用適宜材料製成一定粒度大小的微粒作為載體,包被上 免疫活性物,使其成為致敏免疫微粒(包括致敏的血球、膠乳微粒、金黃色葡萄球菌 和其他微粒等)，用於免疫學檢測。己知的凝集試驗(比如血球凝集和膠乳凝集)主 要通過觀察致敏免疫微粒與待測物反應或競爭反應發生的凝集現象，做定性或半定量 檢測膠乳凝集試驗中的濁度法和計數法可以定量，但需較昂貴的儀器。這些凝集試 驗均未將凝集顆粒和未凝集顆粒分開，也未引入標記物來顯示或放大結果，故只能用 計數法或濁度法來定量。現有的微粒固相免疫法的原理是以微粒為載體，在液相中捕 獲待測物。比如用特異性抗IgE抗體包被的免疫微粒吸附待測標本中的可溶性抗原 IgE，再加入螢光素(標記物)標記抗IgE抗體與微粒上免疫複合物中的抗原IgE結 合。除去多餘的螢光抗休後，通過螢光儀測定，測得的螢光強度顯示值與標本中待測 物濃度成正相關；但該法需離心洗滌以除去游離的螢光抗體。本發明的目的是用免疫微粒(標記或未標記)與待測物結合或與待測物競爭形成 微粒免疫複合物，另用免疫微粒使微粒免疫複合物沉降，再檢測上層液(或沉澱)中 未被結合(或己被結合)的免疫微粒(可用多種常用儀器測定顯示值、濁度或計數微 粒)；建立一種適用範圍更大、可定量，可不用離心洗滌的簡便免疫檢測法。本發明的目的是這樣實現的，綜合現有的凝集試驗(血球、膠乳、金葡萄球菌等)、 微粒固相吸附等方法，主要改進之點l.用包被物致敏的免疫微粒(膠乳等)與待測 物結合或與待測物競爭形成微粒免疫複合物；包被物或免疫微粒可用標記物(酶、熒 光素、化學發光物或同位素等)標記2.用包被物致敏的更易使其沉降的免疫微粒(血 球、磁性微粒等)與膠乳微粒免疫複合物結合，加速後者沉降；再檢測上層液中反映 剩餘膠乳微粒(可帶標記物)的濁度、顯示值或計數。本法主要過程如下(l)用致
敏膠乳微粒與待測物結合或與待測物競爭形成膠乳微粒免疫複合物；(2)加入致敏血 球(或其他更易使其沉降的微粒)使其與膠乳微粒免疫複合物上的抗原或抗體結合，加 速微粒沉降；以上兩步也可合為一步；(3)待反應液中血球自行沉降(或經磁場、離 心沉降)，使結合的膠乳微粒免疫複合物也沉降，檢測上層液中剩餘的膠乳微粒(可 帶標記物)的濁度或其他顯示值或計數，再從反應標準曲線查出標本中待測物濃度。 本法的原理是致敏血球等微粒的沉降速率大於膠乳微粒，故血球等與膠乳微粒結合可 加速後者沉降，使結合的膠乳微粒免疫複合物與未結合的膠乳微粒得以分離。也可測 沉澱中標記物顯示值。或用包被物自身作微粒載休(使載休和免疫活性物成同一物)， 這樣有利於保持某些物質(比如雙鏈DNA)的自然構象。本發明的特點是膠乳微粒(或其他微粒)數量多，表面吸附面積大，在液相中抗 原抗體易碰撞，反應快速，敏感性高；另用血球(或其他更易使其沉降的微粒)加速 膠乳微粒沉降可縮短反應時間，提高敏感性檢測上層液中剩餘的膠乳微粒(可帶標 記物)濁度、計數或其他顯示值，無需洗滌，簡化了操作，並進一步提高了敏感性。下面結合實施例對本發明進一步說明，以下所說致敏膠乳、致敏血球和磁性微粒 均用通常材料和方法製成。實施例(一)用微粒吸附沉降免疫法測血淸中抗雙鏈DNA抗休 將雙鏈DNA製成DNA微粒(粒徑約5 n ml 20 n ra); (2)加入酶標記金葡萄 球菌菌體試劑和待測標本，混勻反應，使標本中的IgG、抗雙鏈DNA抗體(屬於IgG) 和金葡萄球菌上的SPA蛋白結合形成複合物I ， (3)加入DNA微粒；使DNA微粒和復 合物I上的抗雙鏈DNA抗體UgG)結合形成複合物II; (2) (3)可合為一步；(4) 待覆合物II自行沉降，吸取適量上層液於另一微孔板中，檢測濁度、計數，或加入顯 色液、終止液，測定吸光度，測得的吸光度與標本中複合物I或抗雙鏈DNA抗體濃度 成反相關；(5)再從反應標準曲線查出標本中抗雙鏈DNA抗體含量。實施例(二)用競爭微粒吸附沉降免疫法檢測抗雙鏈DNA抗休 (])加入雙鏈DNA、待測標本和已包被酶標抗雙鏈DNA抗休的膠乳(粒徑約O. 1 Ura 2tim),混勻反應(2)加入已包被抗雙鏈DNA抗體的血球，待血球自行沉降； (1) (2)可合為一步(3)檢測上層液的濁度、計數或其他顯示值，再從反應標準 曲線査出標本中抗雙鏈DNA抗體含量。實施例(三)用競爭微粒吸附沉降免疫法檢測甲胎蛋白
(1)加入待測標本、己包被甲胎蛋白的膠乳(用辣根過氧化酶標記，粒徑約O. 1 Pm 2pm)和抗甲胎蛋白抗體(兔抗人)，混勻反應-，(2)加入已包被羊抗兔IgG的 血球，待血球自行沉降；(1) (2)可合為一步；(3)檢測上層液的濁度、計數，或加 入顯色液、終止液，測定吸光度；(4)再從反應標準曲線査出標本中甲胎蛋白含量。 實施例(四)用微粒吸附沉降免疫法檢測IgE (])加入已包被酶標抗:!gE抗體的膠乳(粒徑約0, 1 u m 2 P m)和待測標本， 混勻反應(2)再加入過量的己包被抗IgE抗體的血球，待血球自行沉降；(3)吸取 適量上層液於另一微孔板中，加入顯色液、終止液，測定吸光度，測得的吸光度與標 本中IgE濃度成反相關；再從反應標準曲線査出標本中IgE含量。實施例(五)用競爭微粒吸附沉降法檢測尿微量白蛋白 (l)加入待測尿液、膠乳(粒徑約O. 1 um 2um，用螢光素標記的人白蛋白致敏) 和兔抗人白蛋白抗體,混勻反應；(2)加入血球(用羊抗兔IgG致敏)，待血球自行沉 降；吸取適量上層液於微孔板中，通過螢光儀測定，測得的螢光強度與尿中白蛋白濃 度成反相關；再從反應標準曲線査出標本中白蛋白含量。實施例(六)用競爭微粒吸附沉降免疫法檢測促甲狀腺素(1)加入待測標本、已包被促甲狀腺素的膠乳(用辣根過氧化酶標記，粒徑約 0. l!im 2um)和抗促甲狀腺素抗休(兔抗人)，混勻反應(2)加入已包被羊抗兔 IgG的磁性微粒，反應後置磁場中使磁性微粒膠乳微粒複合物沉降；(1) (2)可合 為一步(3)檢測上層液的濁度、計數，或加入顯色液、終止液，測定吸光度；(4) 再從反應標準曲線查出標本中含量。
權利要求
1一種免疫學檢測法和相應試劑盒，其特點是用免疫微粒與待測物結合或與待測物競爭形成微粒免疫複合物；另用免疫微粒使微粒免疫複合物沉降；檢測上層液中剩餘的免疫微粒的數量或顯示值變化，查出待測物含量。
全文摘要
一種免疫學檢測法和相應試劑盒，綜合現有的凝集試驗、微粒固相吸附等方法，其主要過程如下(1)用致敏膠乳微粒(可帶標記物)與待測物結合或與待測物競爭形成膠乳微粒免疫複合物；(2)加入致敏血球(或其他更易使其沉降的微粒)使其與膠乳微粒免疫複合物結合，以使膠乳微粒免疫複合物沉降，使結合的膠乳微粒免疫複合物與未結合的膠乳微粒得以分離；(3)待反應液中血球或磁性微粒等沉降，再吸取適量上層液於微孔板中，檢測上層液剩餘膠乳微粒的濁度或其他顯示值變化，從而定量檢測。
文檔編號G01N33/546GK101153873SQ20061014175
公開日2008年4月2日 申請日期2006年9月30日 優先權日2006年9月30日
發明者徐伊犁 申請人:徐伊犁