一種藥物組合物注射液的質量檢測方法

2023-09-18 12:41:05 2

專利名稱：：一種藥物組合物注射液的質量檢測方法
技術領域：
：本發明涉及一種注射液的質量檢測方法，特別涉及本發明藥物組合物注射液的指紋圖譜質量檢測方法及其注射液中總皂苷和9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法。
背景技術：
：本發明藥物組合物注射液是由黃芪、人參、苦參素3味藥物組成、採用現代提取分離技術精製而成的中藥注射劑，具有益氣扶正，增強機體免疫功能的功效，在臨床上用於原發性肝癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科腫瘤以及各種原因引起的白細胞低下及減少症和慢性B型肝炎的治療。高效液相色譜(HPLC)技術是構建中藥指紋圖譜主要的方法，在中藥的質量控制中發揮著重要的作用；但目前中藥指紋圖譜研究尚處於研究階段，還存在一些問題需要不斷探索，如指紋圖譜研究的規範化、標準化有待加強，由於受所用儀器、色譜柱等影響，指紋圖譜的重現性問題尚需提高，指紋圖譜分析評價方法還有待完善等。超高效液相色譜(UltraPerformanceLiquidChromatography,UPLC)色譜理論認為提高色譜柱的效能(efficiency)就能增加儀器的解析度(resolution),而運用粒徑低於2μπι的小顆粒無疑是增加效能的好方法；但減小固定相的粒度以增加色譜柱效能一直的色譜儀器科學的瓶頸，因為小顆粒不僅要求系統能承受高於目前極限壓力(比如6000psi/400bar)，需要更小的系統體積(死體積)，並且需要能適應可能只有幾秒峰寬的高速檢測器；與傳統的高效液相色譜(HPLC)相比，UPLC具有高分離度(ultraresolution)、高速度(ultraspeed)、靈敏度(sensitivity)等優勢；目前，UPLC多應用於代謝組學分析及其他一些生化領域，在天然產物的分析方面運用也逐漸興起，因為在這些領域深入研究需要更高的分析精度。
發明內容本發明目的在於提供一種注射液的質量檢測方法。本發明目的是通過如下技術方案實現:本發明藥物組合物注射液的質量檢測方法，包括如下含量測定和/或指紋圖譜檢測方法:A藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測定方法為:對照品溶液製備，精密稱取人參皂苷Rgl標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.981.1Omg/ml的人參皂苷儲備溶液；精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成1.01.2mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液，將以上兩種儲備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，製成濃度為1.01.lmg/ml對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液23ml，注入活化後的C18SPE柱，依次採用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸乾，取甲醇適量定容於2ml容量瓶，製成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；B藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，稱取9,10-二甲氧基紫植燒-3-0-β-D-匍萄糖苷對照品，配製為15.016.5μg/ml的對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗分離，以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾,進樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測波長207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；C藥物組合物注射液指紋圖譜檢測方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，檢測波長205nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min，理論板數按人參皂苷Rf峰計算應不低於200000，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min)，70%A(65min),70%A(85min);質譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi；毛細管電壓(Vcap):4000V;四級杆-飛行時間串聯質譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級杆的射頻電壓(OCTIRFVpp)750V;供試品溶液製備:精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗)分離，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然後以8%12%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以75%85%甲醇18ml溶液洗脫，收集75%85%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μI分析；對10%和100%甲醇洗脫液進行HPLC分析，在對應的保留時間沒有皂苷類和黃酮類色譜峰；本發明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個指紋峰，共有指紋峰的相對保留時間分別為:0.712±0.071，0.740±0.074，0.749±0.075，0.769±0.077，0.834±0.083，1.000±0.000，1.019±0.102，1.031±0.103，1.038±0.104，1.045±0.105，1.059±0.106，1.072±0.107，1.173±0.117，1.191±0.119，1.204±0.120;相對保留峰面積分別為:1.616±0.161,2.631±0.263,2.036±0.204，12.671±1.267,3.346±0.335，1.000+0.000,0.868+0.087,0.428+0.043,0.566+0.057,0.854+0.085,0.633±0.063,0.402±0.040,0.417±0.042,0.295±0.030,0.461±0.046。本發明藥物組合物注射液的質量檢測方法，優選如下含量測定和/或指紋圖譜檢測方法:A藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測定方法為:對照品溶液製備，精密稱取人參皂苷Rgl標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.999mg/ml的人參皂苷儲備溶液；精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成1.1OOmg/ml的黃芪甲苷儲備溶液，將以上兩種儲備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，製成濃度為1.050mg/ml對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml，注入活化後的C18SPE柱，依次採用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸乾，取甲醇適量定容於2ml容量瓶，製成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml,高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；B藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，稱取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對照品，配製為15.9μg/ml的對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾,進樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測波長207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml,高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；C藥物組合物注射液指紋圖譜的質量檢測方法為，色譜條件:分析色譜柱:AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，檢測波長:205nm，柱溫:30°C，流速:0.8ml/min，理論板數按人參皂苷Rf峰計算應不低於200000，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:0分鐘15%A，20分鐘19%A，36分鐘25.5%A，50分鐘50%A，65分鐘70%A，85分鐘70%A;質譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細管電壓(Vcap)4000V;四級杆-飛行時間串聯質譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor)175V;截取錐電壓(Skimmer)65V;第一重八級杆的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液製備:精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入1%冰醋酸水溶液2ml使溶解,上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗)分離，先以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μI分析；對10%和100%甲醇洗脫液進行HPLC分析，在對應的保留時間沒有皂苷類和黃酮類色譜峰；本發明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個指紋峰，共有指紋峰的相對保留時間分別為:0.712，0.740，0.749，0.769，0.834，1.000，1.019，1.031，1.038，1.045，1.059，1.072，1.173，1.191，1.204;相對保留峰面積分別為:1.616,2.631,2.036，12.671,3.346，1.000,0.868,0.428,0.566,0.854,0.633,0.402，0.417,0.295,0.461。本發明藥物組合物注射液的質量檢測方法，優選如下含量測定和/或指紋圖譜檢測方法:A藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測定方法為:對照品溶液製備，精密稱取人參皂苷Rgl標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.981.1Omg/ml的人參皂苷儲備溶液；精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成1.0mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液，將以上兩種儲備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，製成濃度為1.0mg/ml對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液2.1ml，注入活化後的C18SPE柱，依次採用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸乾，取甲醇適量定容於2ml容量瓶，製成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻Imin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；B藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，稱取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對照品，配製為15.2μg/ml的對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測波長207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；C藥物組合物注射液指紋圖譜檢測方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，檢測波長205nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min，理論板數按人參皂苷Rf峰計算應不低於200000，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min)，70%A(65min),70%A(85min);質譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細管電壓(Vcap):4000V;四級杆-飛行時間串聯質譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級杆的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液製備:精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加ΛI%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗)分離，先以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然後以9%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以78%甲醇18ml溶液洗脫，收集78%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μI分析；對10%和100%甲醇洗脫液進行HPLC分析，在對應的保留時間沒有皂苷類和黃酮類色譜峰；本發明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個指紋峰，共有指紋峰的相對保留時間分別為:0.781,0.791,0.810,0.830,0.91,1.000，1.119，1.131，1.138，1.145，1159，1.172，1.273，1.291，1.304;相對保留峰面積分別為:1.776,2.891,2.236，13.671,3.676，1.000,0.948,0.471,0.616,0.939,0.696,0.442，0.459,0.325,0.507。本發明藥物組合物注射液的質量檢測方法，優選如下含量測定和/或指紋圖譜檢測方法:A藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測定方法為:對照品溶液製備，精密稱取人參皂苷Rgl標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.981.1Omg/ml的人參皂苷儲備溶液；精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成1.18mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液，將以上兩種儲備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，製成濃度為1.09mg/ml對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液3ml，注入活化後的C18SPE柱，依次採用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸乾，取甲醇適量定容於2ml容量瓶，製成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml,高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；B藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，稱取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對照品，配製為16.3μg/ml的對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液3ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測波長207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；C藥物組合物注射液指紋圖譜檢測方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，檢測波長205nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min，理論板數按人參皂苷Rf峰計算應不低於200000，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min)，70%A(65min),70%A(85min);質譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細管電壓(Vcap):4000V;四級杆-飛行時間串聯質譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級杆的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液製備:精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗)分離，先以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然後以11%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以82%甲醇18ml溶液洗脫，收集82%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μI分析；對10%和100%甲醇洗脫液進行HPLC分析，在對應的保留時間沒有皂苷類和黃酮類色譜峰；本發明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個指紋峰，共有指紋峰的相對保留時間分別為:0.642,0.670,0.679,0.700,0.75，1.000，1.009，1.008，1.008，1.005，1.009，1.007，1156，1.072，1.084;相對保留峰面積分別為:1.455,2.368，1.832，11.404,3.311，1.000,0.781,0.385,0.509,0.769,0.570,0.362，0.375,0.265,0.415。上述本發明藥物組合物注射液的原料藥組成為:黃芪25-35重量份、人參8_12重量份、苦參素0.5-1.5重量份；本發明藥物組合物注射液的製備方法為:以上三味藥,人參用60-80%的乙醇，回流提取1-3次，每次1-2小時，合併提取液，減壓濃縮至相對密度為650C1.101.20的清膏，備用；黃芪加水煎煮1-3次，每次1-3小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為65°C1.101.20的清膏，與人參清膏合併，加乙醇使含醇量達75%，用氫氧化鈉調PH值至67，靜置10-18小時，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為650C1.101.15的清膏；再加乙醇使含醇量達85%，用氫氧化鈉調值PH至67，靜置，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加注射用水到400ml，用氫氧化鈉調PH值至67，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾；用氫氧化鈉調PH值至67，加活性炭適量，攪勻，煮沸15分鐘，濾過，濾液備用；另取苦參素溶解，用稀鹽酸調PH值至67，100—120°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾，與脫炭後的藥液合併，混勻，加注射用水至規定量，濾過，灌裝，即得。上述本發明藥物組合物注射液的原料藥組成為:黃芪30重量份、人參10重量份、苦參素I重量份；本發明藥物組合物注射液的製備方法為:以上三味藥，人參用75%的乙醇，回流提取三次，每次2小時，合併提取液，減壓濃縮至相對密度為1.101.20(65°C)的清膏，備用；黃芪加水煎煮二次，每次2小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為1.101.20(65°C)的清膏，與人參清膏合併，加乙醇使含醇量達75%，用氫氧化鈉調PH值至67，靜置12小時，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.101.15(650C)的清膏；再加乙醇使含醇量達85%，用氫氧化鈉調值PH至67，靜置，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加注射用水到400ml，用氫氧化鈉調PH值至67，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾；用氫氧化鈉調PH值至67，加活性炭適量，攪勻，煮沸15分鐘，濾過，濾液備用；另取苦參素溶解，用稀鹽酸調PH值至67，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾，與脫炭後的藥液合併，混勻，加注射用水至規定量，濾過，灌裝，即得。與現有技術相比，本發明具有以下有益效果:本發明藥物組合物注射液含量測定方法，更加明確了產品的有效成分及其含量測定方法，能更好的控制產品質量，保證產品更安全、有效；本發明使用指紋圖譜技術有效的控制了本發明藥物組合物注射液的質量；通過實驗證明本發明指紋圖譜測定方法精密度良好，重現性較好，供試品溶液在24h內穩定性良好;本發明通過高分辨質譜對化學成分的鑑定，實驗依據更加充分和考靠；所鑑定的色譜峰經過該色譜峰(TIC)保留時間區域的質譜圖比較，證明該色譜峰顯示了單一的化合物；本發明藥物組合物注射液色譜指紋圖譜(除苦參素外)中共鑑定了16個化學成分，以上化學成分進一步經過高分辨質譜進行了結構確認；四個化學成分來源於藥材黃苗，分別為(6aR,IlaR)-3-hydroxy-9,lO-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-sambubioside,9,10_二甲氧基紫植燒-3-0-β-D-匍萄糖昔、2』-輕基-3』，4』-二甲氧基異黃烷-7-0-β-D-葡萄糖苷和黃芪甲苷；十二個化學成分來源於藥材人參，其中8個化學成分(人參皂苷Re，Rgl，Rf，RbI，Re，Rg2，Rb2和Rd)來源於人參藥材中的原型成分，4個化學成分來源於人參藥材中含量高的原型成分在生產和製劑工藝中(藥材提取溶液的酸性環境、較高溫度加熱80度，製劑滅菌100度加熱)特定工藝條件下分解產生的次級人參皂苷，但本身也是活性化學成分。附圖:1.未進行固相萃取處理的本發明藥物組合物注射液供試品2.氧化苦參鹼的ESI(+)MS的質譜圖3.氧化苦參鹼為UV205nm檢測I4.氧化苦參鹼為UV205nm檢測25.本發明藥物組合物注射液中化學成分低分辨LC-MS鑑定6.本發明藥物組合物注射液中化學成分低分辨LC-MS鑑定人參皂苷Rgl7.本發明藥物組合物注射液中化學成分低分辨LC-MS鑑定人參皂苷Re8.9,10-_■甲氧基紫植燒-3-0-β-D-甸萄糖昔(N0.4)9.2』-羥基-3』，4』-二甲氧基異黃烷-7-0-β-D-葡萄糖苷(N0.5)10.人參皂苷Rf(N0.6)11.人參皂苷Rbl(N0.7)12.人參皂苷Re(N0.8)13.人參皂苷Rg2(N0.9)14.人參皂苷Rb2(N0.10)15.人參皂苷Rhl(N0.11)16.黃芪甲苷(N0.12)17.人參皂苷Rd(N0.13)18.人參皂苷Rg5，Rg6,RKl，F419.人參皂苷Rh4或Rk3(N0.15)20.人參皂苷Rk3或Rh4(N0.16)21-1.ESI(-)負離子的總離子流圖(TIC)21_2.0六0檢測器圖譜(205.)22.本發明藥物組合物注射液組分高分辨LC-MS鑑定(N0.1)23.人參皂苷Rgl(N0.2)24.人參皂苷Re(N0.3)25.9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷(N0.4)26.2』-羥基-3』，4』-二甲氧基異黃烷-7-0-β-D-葡萄糖苷(N0.5)27.人參皂苷Rf(N0.6)28.人參皂苷Rbl(N0.7)29.人參皂苷Re(N0.8)30.人參皂苷Rg2(N0.9)31.人參皂苷Rb2(N0.10)32.人參皂苷Rhl(N0.11)33.黃芪甲苷(N0.12)34.人參皂苷Rd(N0.13)35.人參皂苷Rg5、F4、Rkl或Rg6(N0.14)36.人參皂苷Rh4或Rk3(N0.15)37.人參皂苷Rk3或Rh4(N0.16)38.本發明藥物組合物注射液150min圖譜39.空白梯度圖譜40.本發明藥物組合物注射液指紋圖譜下述實驗例和實施例用於進一步說明但不限於本發明；本發明實驗例中藥物組合物注射液均由實施例1方法製備。實驗例IHPLC-ES1-1ontrap分析鑑定本發明藥物組合物注射液中的化學成分I儀器與色譜質譜條件1.1儀器與材料高效液相色譜-質譜聯用儀:高效液相:Agilent1200series;質譜:BrukerHCT1ntrap(三維離子講質譜儀)色譜純乙臆(Acetonitrile):HPLCgrade,FisherScientific色譜純甲醇(Methanol):HPLCgrade,TianjinJizhunChemicals超純水(Water):ultra-purewater固相萃取柱(SPE):TianjinShuangjichromatographyscientific1.2色譜條件分析色譜柱:AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm檢測波長:205nm,柱溫:30°C,流速:0.8ml/min理論板數按人參皂苷Rf峰計算應不低於200000Timetable:Time(min)Acetonitrile-water(V/V)015:852019:813625.5:74.55050:506570:308570:301.3質譜條件ESIconditions:GasTemp:350°CDryingGas:8L/minNebulizer:30psiVcap:4000V`MS1ntrapconditions:CapillaryExit:145VSkimmer:40V1.4工作站BrukerESICompass1.3forHCT/EsquireDataAnalysisversion4.02供試品溶液製備`2.1樣品前處理本發明藥物組合物注射液中(實施例1製備)含有大量的苦參素(10mg/mL)，而苦參素是氧化苦參鹼(Oxymatrine)與極少量氧化槐果鹼(Oxysophocarpine)的混合鹼,本實驗以液質聯用(LC-MS)方法鑑定了大量氧化苦參鹼的存在；HPLC-ES1-MS分析:在色譜指紋圖譜開始2-5min出現一很大的色譜峰(圖1)，經HPLC-ES1-MS鑑定為苦參素；氧化苦參鹼的分子量為264.4，質譜圖中的265.1為氧化苦參鹼的[M+H]+峰，529.2為氧化苦參鹼的[2M+H]+峰(圖2);為了避免大量苦參素的存在對人參和黃芪化學成分分析的幹擾，我們採用固相萃取方法除去大量的苦參素。2.2樣品前處理實驗步驟:精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg;活化步驟:使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗)分離，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μI分析；備註:利用薄層色譜法(TLC)鑑定酸水洗脫液、水洗脫液含有大量苦參素，10%甲醇洗脫液中含有極少量的苦參素，80%甲醇洗脫液未見苦參素斑點，而顯示紫紅色皂苷的斑點；100%甲醇洗脫液未見明顯斑點；進一步對10%和100%甲醇洗脫液進行HPLC分析，在對應的保留時間沒有皂苷類和黃酮類色譜峰。權利要求1.一種藥物組合物注射液的質量檢測方法，其特徵在於該方法包括如下含量測定、鑑別和/或指紋圖譜檢測方法:A、藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測定方法為:對照品溶液製備，精密稱取人參皂苷Rgl標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.98·1.10mg/ml的人參皂苷儲備溶液；精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成1.0·1.2mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液，將以上兩種儲備溶液按照1:1V/V的比例混合，製成濃度為1.01.lmg/ml對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液23ml，注入活化後的C18SPE柱，依次採用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水IOml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸乾，取甲醇適量定容於2ml容量瓶，製成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；B、藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，稱取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對照品，配製為·15.016.5μg/ml的對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C-·18，500mg固相萃取柱，使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾,進樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18:150X4.6mm,5μm,流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:0分鐘:15%A，30分鐘:25%A，40分鐘:40%A，檢測波長207nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛·0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；C、藥物組合物注射液指紋圖譜檢測方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18:·150X4.6mm,5μm,檢測波長205nm，柱溫30°C，流速·0.8ml/min,理論板數按人參皂苷Rf峰計算應不低於200000，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:0分鐘:15%A，20分鐘:19%A，36分鐘:25.5%A,50分鐘:50%A，65分鐘:70%A，85分鐘:70%A;質譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細管電壓(Vcap):4000V;四級杆-飛行時間串聯質譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級杆的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液製備:精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入1%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗分離，以·15mlI%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然後以8%12%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以75%85%甲醇18ml溶液洗脫，收集75%85%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用·0.45μπι微孔濾膜過濾，進樣10μI分析；對10%和100%甲醇洗脫液進行HPLC分析，在對應的保留時間沒有皂苷類和黃酮類色譜峰；藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個指紋峰，共有指紋峰的相對保留時間分別為:0.712±0.071,0.740±0.074,0.749±0.075,0.769±0.077,0.834±0.083，1.000±0.000，1.019±0.102，1.031±0.103，1.038±0.104，1.045±0.105，1.059±0.106，1.072±0.107，1.173±0.117，1.191±0.119，1.204±0.120;相對保留峰面積分別為:1.616±0.161,2.631±0.263,2.036±0.204，12.671±1.267,3.346±0.335，1.000±0.000，0.868±0.087，0.428±0.043，0.566±0.057，0.854±0.085，0.633±0.063,0.402±0.040,0.417±0.042,0.295±0.030,0.461±0.046；藥物組合物注射液由如下方法製成:黃苗25-35重量份、人參8-12重量份、苦參素0.5-1.5重量份以上三味藥，人參用60-80%的乙醇，回流提取1-3次，每次1_2小時，合併提取液，減壓濃縮至相對密度為65°C1.101.20的清膏，備用；黃芪加水煎煮1-3次，每次1-3小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為65°C1.101.20的清膏，與人參清膏合併，加乙醇使含醇量達75%，用氫氧化鈉調PH值至67，靜置10-18小時，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為65°C1.101.15的清膏；再加乙醇使含醇量達85%，用氫氧化鈉調值PH至67,靜置,濾過,濾液回收乙醇至無醇味,加注射用水到400ml,用氫氧化鈉調PH值至67，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾；用氫氧化鈉調PH值至67，加活性炭適量，攪勻，煮沸15分鐘，濾過，濾液備用；另取苦參素溶解，用稀鹽酸調PH值至67，100--120°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾，與脫炭後的藥液合併，混勻，加注射用水至規定量，濾過，灌裝，即得。2.如權利要求1所述的藥物組合物注射液的質量檢測方法，其特徵在於該方法包括如下含量測定、鑑別和/或指紋圖譜檢測方法:A、藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測定方法為:對照品溶液製備，精密稱取人參皂苷Rgl標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.999mg/ml的人參皂苷儲備溶液；精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成1.100mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液，將以上兩種儲備溶液按照1:1V/V的比例混合，製成濃度為1.050mg/ml對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml，注入活化後的C18SPE柱，依次採用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸乾，取甲醇適量定容於2ml容量瓶，製成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；B、藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，稱取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對照品，配製為15.9μg/ml的對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μL分析;液相條件=AgilentEclipseXDB-C18:.150X4.6mm，5μm，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:0分鐘:.15%A，30分鐘:25%A,40分鐘:40%A，檢測波長207nm,柱溫30V，流速0.8ml/min;精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；C、藥物組合物注射液指紋圖譜的質量檢測方法為，色譜條件:分析色譜柱=AgilentXDB-C18:150Χ4.6_，5μπι，檢測波長:205nm，柱溫:30°C，流速:0.8ml/min，理論板數按人參皂苷Rf峰計算應不低於200000，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:0分鐘15%A,20分鐘19%A,36分鐘25.5%A,50分鐘50%A,65分鐘70%A,85分鐘70%A;質譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細管電壓(Vcap)4000V；四級杆-飛行時間串聯質譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor)175V；截取錐電壓(Skimmer)65V;第一重八級杆的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液製備:精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入1%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗分離，以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫,然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μI分析；對10%和100%甲醇洗脫液進行HPLC分析，在對應的保留時間沒有皂苷類和黃酮類色譜峰；藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個指紋峰，共有指紋峰的相對保留時間分別為:0.712,0.740,0.749,0.769,0.834，1.000，1.019，1.031，1.038，1.045，1.059，1.072，.1.173，1.191，1.204;相對保留峰面積分別為:1.616,2.631,2.036，12.671,3.346，1.000，.0.868,0.428,0.566,0.854,0.633,0.402,0.417,0.295,0.461。3.如權利要求1所述的藥物組合物注射液的質量檢測方法，其特徵在於該方法包括如下含量測定、鑑別和/或指紋圖譜檢測方法:Α、藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測定方法為:對照品溶液製備，精密稱取人參皂苷Rgl標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.981.10mg/ml的人參皂苷儲備溶液；精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成1.0mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液，將以上兩種儲備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，製成濃度為1.0mg/ml對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液2.1ml，注入活化後的C18SPE柱，依次採用水IOml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水IOml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸乾，取甲醇適量定容於2ml容量瓶，製成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；B、藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，稱取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對照品，配製為15.2μg/ml的對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾,進樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測波長207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；C、藥物組合物注射液指紋圖譜檢測方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm,檢測波長205nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min,理論板數按人參皂苷Rf峰計算應不低於200000，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min),70%A(65min),70%A(85min)；質譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細管電壓(Vcap):4000V;四級杆-飛行時間串聯質譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級杆的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液製備:精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入1%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗)分離，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然後以9%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以78%甲醇18ml溶液洗脫，收集78%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μI分析；對10%和100%甲醇洗脫液進行HPLC分析，在對應的保留時間沒有皂苷類和黃酮類色譜峰；本發明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個指紋峰，共有指紋峰的相對保留時間分別為:0.781,0.791,0.810,0.830,0.91，1.000，1.119，1.131，1.138，1.145，1.159，1.172，1.273，1.2911.304;相對保留峰面積分別為:1.776,2.891,2.236，13.671，3.676，1.000,0.948,0.471,0.616,0.939,0.696,0.442,0.459,0.325,0.507。4.如權利要求1所述的藥物組合物注射液的質量檢測方法，其特徵在於該方法包括如下含量測定、鑑別和/或指紋圖譜檢測方法:Α、藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測定方法為:對照品溶液製備，精密稱取人參皂苷Rgl標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.981.1Omg/ml的人參皂苷儲備溶液；精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成1.1Smg/ml的黃芪甲苷儲備溶液，將以上兩種儲備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，製成濃度為1.09mg/ml對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液3ml，注入活化後的C18SPE柱，依次採用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸乾，取甲醇適量定容於2ml容量瓶，製成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；B、藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-Ο-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，稱取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-Ο-β-D-葡萄糖苷對照品，配製為16.3μg/ml的對照品溶液；供試品溶液製備，精密量取本發明藥物組合物注射液.10ml，水浴蒸乾，殘渣加入I%冰醋酸水溶液3ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以.1Oml水洗脫，然後以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測波長207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置於試管中，氮氣吹乾，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長下，測定吸光度，代入標準曲線計算總皂苷的量，即得；C、藥物組合物注射液指紋圖譜檢測方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18.150X4.6mm5μm,檢測波長205nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min,理論板數按人參皂苷Rf峰計算應不低於200000，流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min),70%A(65min),70%A(85min)；質譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細管電壓(Vcap):4000V;四級杆-飛行時間串聯質譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級杆的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液製備:精密量取本發明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸乾，殘渣加入1%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水衝洗)分離，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然後以11%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以82%甲醇18ml溶液洗脫，收集82%甲醇洗脫液，水浴蒸乾，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μπι微孔濾膜過濾，進樣10μI分析；對10%和100%甲醇洗脫液進行HPLC分析，在對應的保留時間沒有皂苷類和黃酮類色譜峰；本發明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個指紋峰，共有指紋峰的相對保留時間分別為:0.642,0.670,0.679,0.700,0.75，1.000，1.009，1.008，1.008，1.005，.1.009，1.007，1.156，1.072，1.084;相對保留峰面積分別為:1.455,2.368，1.832，11.404，.3.311，1.000,0.781,0.385,0.509,0.769,0.570,0.362,0.375,0.265,0.415。全文摘要本發明公開一種藥物組合物注射液的質量檢測方法；其中色譜指紋圖譜質量檢測方法用分析色譜柱AgilentXDB-C18150×4.6mm5μm，檢測波長205nm，柱溫30℃，流速0.8ml/min；供試品溶液製備，取藥物組合物注射液，水浴蒸乾，殘渣加入冰醋酸水溶液溶解，上固相萃取柱分離，梯度洗脫，殘渣加甲醇溶解並轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣10μl分析，供試品指紋圖譜(見附圖40)；本發明還提供該藥物組合物注射液中總皂苷和9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法。文檔編號G01N21/31GK103105371SQ20111035496公開日2013年5月15日申請日期2011年11月10日優先權日2011年11月10日發明者段宏泉,翁紅,張子安,李穎,楊玲申請人:長白山製藥股份有限公司