臂板蛋白-4d結合分子用於調節血腦屏障滲透性的用途
2023-09-18 17:58:10 1
臂板蛋白-4d結合分子用於調節血腦屏障滲透性的用途
【專利摘要】本文提供了用於降低患神經炎性疾病的受試者的血腦屏障滲透性的方法，包括將有效量的與臂板蛋白-4D(SEMA4D)或其高親和性神經叢蛋白-B1受體特異性結合的分離的結合分子施用於受試者。
【專利說明】臂板蛋白-4D結合分子用於調節血腦屏障滲透性的用途
[0001]電子提交的序列表的引用
[0002]與本申請一起提交的ASCII文本文件(文件名:「1843_068PC03_SequenceListing_asci1.txt」,大小:33，807 字節；以及創建日期:2012 年 10 月 10 曰)中電子提交的序列表的內容按引用全部併入本文中。
[0003]發明背景
[0004]臂板蛋白(Semaphorin) 4D(SEMA4D)，也稱為CD100，是屬於臂板蛋白基因家族的跨膜蛋白(例如，SEQ ID N0:1(人)；SEQ ID N0:2(鼠))。SEMA4D在細胞表面上表達為同型二聚體，但在細胞激活時，SEMA4D可以經由蛋白水解分裂從細胞表面釋放以產生sSEMA4D,蛋白質的可溶形式，其也是生物活性的。參見Suzuki等，Nature Rev.1mmunol.3:159-167 (2003) ;Kikutani 等，Nature Immunol.9:17-23 (2008)。
[0005]SEMA4D在包括脾臟、胸腺和淋巴結的淋巴器官以及如腦、心臟和腎臟的非淋巴器官中高水平地表達。在淋巴器官中，SEMA4D在靜息T細胞上大量表達，但在靜息B細胞和抗原呈遞細胞(APC)(如，樹突細胞(DC))上只是弱表達。然而，通過各種免疫刺激激活後，這些細胞中的SEMA4D表達上調。通過細胞激活也提高了可溶性SEMA4D從免疫細胞的釋放。
[0006]SEMA4D涉及神經退行性疾病、自體免疫疾病、脫髓鞘疾病和特定癌症的發生。儘管SEMA4D通過其受體(例如，神經叢蛋白(Plexin)-Bl)的信號傳導對血管生成的作用是公認的，但SEMA4D信號傳導對血腦屏障(BBB)的作用仍然不清楚。這是重要的，因為BBB滲透性的改變對腦組織和功能具有深遠的影響。因此，對用於由BBB破壞導致的神經炎性疾病的治療仍然存在需求，並且特別是對抑制、阻止、防止、逆轉或減緩BBB破壞的治療劑的需求。
[0007]發明簡述
[0008]本文中公開了使用臂板蛋白-4d結合分子調節血腦屏障滲透性的方法。呈現了證明SEAM4D可以損害BBB的完整性從而提高其滲透性的證據。根據本文中說明的本發明的方面，提供了一種用於降低患有神經炎性疾病的受試者的血腦屏障滲透性的方法，包括將有效量的與臂板蛋白_4D(SEMA4D)特異性結合的分離的結合分子施用於受試者，由此降低受試者的血腦屏障滲透性。
[0009]根據本文中說明的方面，提供了一種維持或提高患有神經炎性疾病的受試者中閉合蛋白(Claudin)-5的表達的方法，包括將有效量的與臂板蛋白_4D(SEMA4D)特異性結合的分離的結合分子施用於受試者，其中該結合分子維持或提高受試者的閉合蛋白-5的表達。
[0010]根據本文中說明的方面，提供了一種降低患有神經炎性疾病的受試者的血腦屏障滲透性的方法，包括將有效量的特異性抑制臂板蛋白_4D(SEMA4D)與SEMA4D受體相互作用的分離的結合分子施用於受試者，由此降低受試者的血腦屏障滲透性。
[0011 ] 根據本文中說明的方面，提供了一種治療患有神經炎性疾病的受試者的方法，包括將有效量的特異性抑制臂板蛋白-4D(SEMA4D)與SEMA4D受體相互作用的分離的結合分子施用於受試者，其中該結合分子降低血腦屏障的滲透性，由此治療受試者。
[0012]根據本文中說明的方面，提供了一種降低患有神經炎性疾病的受試者中血腦屏障滲透性的方法，包括將有效量的與SEMA4D特異性結合的分離的結合分子施用於受試者，其中結合分子競爭性地抑制選自VX15/2503或67的參照單克隆抗體與SEMA4D的特異性結八口 ο
[0013]根據本文中說明的方面，提供了一種治療患有神經炎性疾病的受試者的方法，包括將有效量的與臂板蛋白_4D(SEMA4D)特異性結合的分離的結合分子和與神經叢蛋白-BI特異性結合的分離的結合分子施用於受試者，其中SEMA4D和神經叢蛋白-BI結合分子降低血腦屏障的滲透性，由此治療受試者。
[0014]根據本文中說明的方面，提供了一種治療患有神經炎性疾病的受試者的方法，包括將有效量的臂板蛋白4D(SEMA4D)與SEMA4D受體相互作用的抑制劑施用於受試者，其中所述抑制劑降低血腦屏障的滲透性，由此治療受試者。
[0015]附圖簡述
[0016]圖1:實施例中描述的動態體外BBB( 「DIV-BBB」)實驗方案的示意圖。
[0017]圖2:體外 DIV-BBB 模型，顯示出在重組 SEMA4D(0.05,0.5、5 或 50 μ g/mL)和VX15/2503抗體(「VX15」)的存在下，以跨內皮電阻(TEER)反映的BBB完整性的測量。
[0018]圖3:體外 DIV-BBB 模型，顯示出在 BBB 形成、重組 SEMA4D(0.05、0.5、5*50yg/mL)存在下的BBB破壞以及VX15/2503抗體(「VX15」)存在下，但不存在同種型對照(「Iso」)的情況下的BBB恢復過程中，以跨內皮電阻(TEER)反映的BBB完整性的測量。
[0019]圖4:體外DIV-BBB模型，顯示出在BBB形成，0.25、2.5或25 μ g/mL對照C35抗原(「CTRL」)或50 μ g/mL重組SEMA4D存在下的BBB破壞以及VX15/2503抗體(「VX15」)存在下的BBB恢復過程中，以跨內皮電阻(TEER)反映的BBB完整性的測量。
[0020]圖5:體外DIV-BBB模型，顯示出在BBB形成、重組SEMA4D (50 μ g/mL)存在下的BBB破壞以及VX15/2503抗體(「VX15」)、抗-神經叢蛋白-BI抗體(「抗-PLXNB1」)存在下，但不存在同種型對照(「Iso」)的情況下BBB恢復過程中，以跨內皮電阻(TEER)反映的BBB完整性的測量。
[0021]圖6:體外DIV-BBB模型，顯示出在BBB形成、在激活的PBMC(1fVml)存在下和流動停止情況下的BBB破壞以及在VX15/2503抗體或同種型對照IgG存在下的BBB恢復過程中，以跨內皮電阻(TEER)反映的BBB完整性的測量。
[0022]圖7A-C:來自體內EAE模型的結果，顯示出用VX15/2503抗體(「抗-SEMA4D」)或同種型對照(「對照IgG」)處理後，通過纖維蛋白原(「Fib.+」)滲透至腦組織中的免疫染色反映的BBB完整性或其損失(7A左圖和7B中的定量)以及通過紅色染料檢測的閉合蛋白-5( 「CLN5+」)表達。
[0023]圖8:免疫印跡結果，顯示出在原代小鼠中樞神經系統(CNS)內皮培養物中，與VEGF-A陽性對照相比，遞增濃度的重組SEMA4D(lng/ml、10ng/ml和100ng/ml)對關鍵內皮緊密連接蛋白閉合蛋白_5( 「CLN-5」)表達的作用。
[0024]發明詳述
[0025]1.定義
[0026]注意，術語「一」或「一個」實體是指一個或多個所述實體；例如，「一個抗-SEMA4D抗體」理解為表示一個或多個抗-SEMA4D抗體。因此，術語「一」(或「一個」)、「一個或多個」和「至少一個」在本文中可以互換使用。
[0027]應當注意到術語「血腦屏障」和「BBB」可以互換使用。
[0028]如本文中所用的，關於BBB的術語「破壞」或「破裂」，如「血腦屏障破壞」、「血腦屏障破裂」、「血腦屏障的破壞」或「血腦屏障的破裂」，是指血腦屏障滲透性的提高，或在「DIV-BBB」(人的動態體外BBB模型)的情況中，是指跨內皮電阻(TEER)的降低。McCallister 等，Brain Res.904: 20-30 (2001) ；Santaguida 等，BrainRes.1109:1-13(2006)和 Cucullo 等，Epil印sia48:505-16 (2007)已經表明在 DIV-BBB 中，在TEER和滲透性之間存在直接(逆)相關性。此外，血腦屏障滲透性的提高或電阻的降低可以是BBB上存在的內皮細胞的數量、密度和/或濃度降低的結果；或者是形成BBB的內皮細胞或星形細胞之中或內皮細胞和星形細胞之間的形態學或相互作用變化的結果。
[0029]如本文中所用的，關於BBB的術語「恢復」，如「血腦屏障恢復」或「血腦屏障的恢復」，是指血腦屏障滲透性的降低，或者在DIV-BBB (人的動態體外BBB模型)的情況中，是指跨內皮電阻的提聞。
[0030]如本文中所用的，術語「神經炎性疾病」是指中樞神經系統(CNS)炎性疾病、神經退行性疾病、中樞神經系統的自體免疫疾病、髓磷脂疾病或影響少突細胞的疾病，或者中樞神經系統的創傷後髓磷脂疾病。應當注意，神經炎性疾病常常也是神經退行性疾病。然而，也可能有在不存在明顯神經炎症的情況下的神經退行性疾病。例如，在晚期繼發性進行性多發性硬化中就是這種情況。
[0031]術語「治療有效量」是指能有效「治療」受試者或哺乳動物的疾病或失調的抗體、多肽、多核苷酸、小有機分子或其他藥物的量。在神經炎性疾病的情況中，治療有效量的藥物可以降低BBB的滲透性；減少、延遲或停止BBB滲透性的提高；抑制，例如，阻止、延遲、防止、停止或逆轉提高的BBB滲透性；提高BBB上存在的內皮細胞的數量、密度和/或濃度；改變內皮細胞的形態或功能；或改變形成BBB的內皮細胞或星形細胞中或內皮細胞和星形細胞之間的相互作用；一定程度上減輕一種或多種與提高的BBB滲透性相關的症狀(例如，神經炎性疾病)；降低發病率和死亡率；提高生活質量；或這些作用的組合。
[0032]如「治療」或「處理」或「待治療」或「減輕」或「待減輕」是指I)治癒、減緩、減輕所診斷的病理狀況或失調的症狀，逆轉和/或停止所診斷的病理狀況或失調的進展的治療性措施和2)防止和/或減緩目標病理狀況或失調的發展的預防性或防止性措施。因此，需要的治療對象包括已經患有疾病的那些；傾向於患有疾病的那些；和待預防該疾病的那些。有益或所需的臨床結果包括，但不限於，症狀的緩和、疾病程度的減輕、穩定的(即，沒有惡化)疾病狀態、延遲或減緩疾病進展、疾病狀態的改善或減輕及好轉(不管是部分的或是全部的)，無論是可檢測的或不可檢測的。「治療」還可以表示與未接受治療的情況下預期的存活相比延長的存活。需要治療的對象包括已經具有病症或失調的那些以及傾向於具有病症或失調的那些或待防止病症或失調的那些。
[0033]「受試者」或「個體」或「動物」或「患者」或「哺乳動物」表示其需要診斷、預後或治療的任何受試者，特別是哺乳動物受試者。哺乳動物受試者包括人、家畜、農畜和動物園、運動或寵物動物，如狗、貓、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛、奶牛、熊等。
[0034]如本文中所用的，如「將受益於抗-SEMA4D抗體施用的受試者」和「需要治療的動物」的短語包括受益於抗-SEMA4D抗體或用於例如檢測SEMA4D多肽(例如，用於診斷程序)的其他SEMA4D結合分子的施用和/或受益於用抗-SEMA4D抗體或其他SEMA4D結合分子的治療(即，疾病的減輕或預防)的受試者，如哺乳動物受試者。
[0035]本發明的「結合分子」或「抗原結合分子」以其最寬的含義來表示特異性結合抗原決定簇的分子。在一個實施方案中，結合分子特異性結合SEMA4D，例如，結合約150kDa的跨膜SEMA4D多肽或約120kDa的可溶性SEMA4D多肽(通常稱為sSEMA4D)。在另一個實施方案中，本發明的結合分子是抗體或其抗原結合片段。在另一個實施方案中，本發明的結合分子包括抗體分子的至少一個重鏈或輕鏈CDR。在另一個實施方案中，本發明的結合分子包括來自一個或多個抗體分子的至少兩個CDR。在另一個實施方案中，本發明的結合分子包括來自一個或多個抗體分子的至少三個CDR。在另一個實施方案中，本發明的結合分子包括來自一個或多個抗體分子的至少四個CDR。在另一個實施方案中，本發明的結合分子包括來自一個或多個抗體分子的至少五個CDR。在另一個實施方案中，本發明的結合分子包括來自一個或多個抗體分子的至少六個CDR。
[0036]本申請涉及一種降低患有神經炎性疾病(例如，多發性硬化、肌萎縮性側索硬化、癲癇、阿爾茨海默病、帕金森病、腦膜炎、腦水腫、腦創傷和中風)的受試者的血腦屏障滲透性的方法，包括將抗-SEMA4D結合分子、抗-神經叢蛋白BI結合分子或其組合施用於受試者。
[0037]如本文中所用的，「抗-SEMA4D結合分子」或「抗_神經叢蛋白BI結合分子」是指抗體，或其抗原結合片段、變體或衍生物。除非特別指示完整抗體，如自然產生的抗體，否則術語「抗-SEMA4D抗體」或「抗-神經叢蛋白BI抗體」包括完整抗體以及這樣的抗體的抗原結合片段、變體、類似物或衍生物，例如，天然產生的抗體或免疫球蛋白分子或者工程化的抗體分子或以與抗體分子相似的方式結合抗原的片段。
[0038]如本文中所用的，「SEMA4D與SEMA4D受體相互作用的抑制劑」是指「抗-SEMA4D結合分子」、「抗-神經叢蛋白BI結合分子」以及SEMA4D或SEMA4D受體的小分子抑制劑。
[0039]如本文中所用的，「人」或「完全人」抗體包括具有人免疫球蛋白的胺基酸序列的抗體，並且包括分離自人免疫球蛋白文庫的抗體或分離自對一種或多種人免疫球蛋白是轉基因的並且不表達內源性免疫球蛋白的動物的抗體,如下文所述,並且例如Kucherlapati等的U.S.專利N0.5，939，598中所述。「人」或「完全人」抗體還包括含至少重鏈可變結構域或至少重鏈和輕鏈可變結構域的抗體，其中所述可變結構域具有人免疫球蛋白可變結構域的胺基酸序列。
[0040]「人」或「完全人」抗體還包括包含本文中所述的抗體分子的變體(包括衍生物)(例如，VH區和/或VL區)的如上所述的「人」或「完全人」抗體、基本上由本文中所述的抗體分子的變體(包括衍生物)(例如，VH區和/或VL區)組成的如上所述的「人」或「完全人」抗體或由本文中所述的抗體分子的變體(包括衍生物)(例如，VH區和/或VL區)組成的如上所述的「人」或「完全人」抗體，該抗體或其片段免疫特異性地結合SEMA4D多肽或者其片段或變體。可以使用本領域技術人員已知的標準技術在編碼人抗SEMA4D抗體的核苷酸序列中引入突變，所述技術包括但不限於，導致胺基酸置換的定點誘變和PCR介導的誘變。優選地,相對於參照 VH 區、VHCDRl、VHCDR2、VHCDR3、VL 區、VLCDRl、VLCDR2 或 VLCDR3，該變體(包括衍生物)編碼少於50個胺基酸置換、少於40個胺基酸置換、少於30個胺基酸置換、少於25個胺基酸置換、少於20個胺基酸置換、少於15個胺基酸置換、少於10個胺基酸置換、少於5個胺基酸置換、少於4個胺基酸置換、少於3個胺基酸置換或少於2個胺基酸置換。
[0041]在特定的實施方案中，胺基酸置換是保守性胺基酸置換，如以下進一步討論的。或者，可以沿著全部或部分編碼序列隨機引入突變，如通過飽和誘變，並且篩選所得到的突變體的生物活性以鑑定出保持活性(例如，結合SEMA4D多肽的能力，例如，人、鼠或人和鼠兩者的SEMA4D)的突變體。這樣的「人」或「完全人」抗體的變體(或其衍生物)也可以稱為「優化的」或「針對抗原結合優化的」人或完全人抗體並且包括具有提高的抗原親和性的抗體。
[0042]術語「抗體」和「免疫球蛋白」在本文中可以互換使用。抗體或免疫球蛋白包含至少重鏈可變結構域，並且通常包含至少重鏈和輕鏈的可變結構域。脊椎動物系統中的基本免疫球蛋白結構是相對了解充分的。參見，例如，Harlow等(1988)Antibodies:A LaboratoryManual (抗體:實驗室手冊)(第 2 版；Cold Spring Harbor Laboratory Press)。
[0043]如本文中所用的，術語「免疫球蛋白」包括可以生化區分的各種寬泛類型的多肽。本領域技術人員將認識到，重鏈分類為gamma、mu、alpha、delta或epsilon( Y、μ、α、δ、ε)，其中還有一些亞類(例如，Y1-Y4)。該鏈的性質決定抗體「類別」分別為IgG、IgM、IgA、IgG或IgE0免疫球蛋白亞類(同種型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl等已經得到充分表徵，且已知造成功能特化。根據本文公開內容，本領域技術人員不難區分這些類別和同種型中各種的修飾形式，且因此，它們涵蓋在本發明範圍內。所有免疫球蛋白類別明顯屬於本發明的範圍，以下討論總體針對免疫球蛋白分子的IgG類。關於IgG，標準的免疫球蛋白分子包括分子量約為23，000道爾頓的兩個相同輕鏈多肽和分子量為53，000-70, 000的兩個相同重鏈多肽。這四條鏈通常以「Y」構型通過二硫鍵連接起來，其中輕鏈從「Y」形的口部開始並延續通過可變區而與重鏈合在一起。
[0044]輕鏈分類為kappa或lambda( K、λ)。各重鏈類別可與任一 κ或λ輕鏈結合。通常，在免疫球蛋白由雜交瘤、B細胞或遺傳工程宿主細胞產生時，輕鏈和重鏈互相共價結合，且兩條重鏈的「尾」部通過共價二硫鍵或非共價連接互相結合。在重鏈中，胺基酸序列從位於Y構型的分叉末端的N端延伸到各條鏈底部的C端。
[0045]輕鏈和重鏈都可以分成結構和功能同源的區域。術語「恆定」和「可變」從功能意義使用。在這方面，應理解輕鏈(VL或VK)和重鏈(VH)部分的可變結構域決定抗原識別和特異性。相反，輕鏈(CL)和重鏈(CH1、CH2或CH3)的恆定結構域賦予重要的生物學特性，如分泌、跨胎盤移動、Fe受體結合、補體結合等。通常，隨著離抗體的抗原結合位點或氨基末端越遠，恆定區結構域的編號增大。N-端部分是可變區，C-端部分是恆定區；CH3和CL結構域實際上分別包括重鏈和輕鏈的羧基端。
[0046]如上所示，可變區允許抗體選擇性地識別和特異性地結合抗原上的表位。也就是說，抗體的VL結構域和VH結構域，或這些可變結構域內互補決定區(OTR)的子集組合形成限定三維抗原結合位點的可變區。這種四元抗體結構形成在Y形的每條臂末端存在的抗原結合位點。更具體地，所述抗原結合位點由各VH和VL鏈上的三個⑶R確定。在一些情況下，例如，在源自駱駝種類或基於駱駝免疫球蛋白工程改造的某些免疫球蛋白分子中，完整的免疫球蛋白分子可以僅由重鏈構成而不含輕鏈。參見,例如,Hamers-Casterman等，Nature363:446-448(1993)。
[0047]在天然產生的抗體中，各個抗原結合結構域上存在的六個「互補決定區」或「CDR」是短的非連續的胺基酸序列，隨著抗體在水性環境中確定其三維構型時，它們特別地定位以形成抗原結合結構域。抗原結合結構域中的其餘胺基酸(稱為「框架」區)顯示出較小的分子間變異性。框架區主要採取β_摺疊片構象，且⑶R形成連接β_摺疊片結構的，並且在某些情況下，形成稱為β_摺疊片結構的部分的環。因此，框架區作用在於通過鏈間非共價相互作用提供CDR沿正確方向定位的支架。通過定位的CDR形成的抗原結合結構域限定與免疫反應性抗原上的表位互補的表面。這種互補表面促進了抗體與其關聯表位的非共價結合。分別構成CDR和框架區的胺基酸可以由本領域普通技術人員對於任何給定的重鏈或輕鏈可變結構域容易地確定，因為它們已被精確定義(參見下文)。
[0048]除非明確陳述是相反的，否則在本領域內所使用和/或接受的某一術語有兩種或多種定義的情況下，本文所用的該術語定義應包括所有這些含義。具體實例是術語「互補決定區」(「CDR」)用於描述在重鏈和輕鏈多肽的可變區內發現的非連續抗原結合位點。這一特定區域由Kabat等(1983),美國衛生與公眾服務部(U.S.Dept, of Health and HumanServices) ,「Sequences of Proteins of Immunological Interest (具有免疫學意義的蛋白質的序列)」以及Chothia和Lesk，J.Mol.B1l.196:901-917(1987)描述，按引用將其併入本文中，其中所述定義在互相比較時包括重疊的胺基酸殘基或胺基酸殘基的子集。儘管如此，任一定義用於表示抗體或其變體的CDR的應用均應落入本文所定義和使用的術語範圍內。包括上文引用的各參考文獻中定義的CDR的合適胺基酸殘基列於以下表1中以作比較。包括特定CDR的準確殘基編號將根據CDR的序列和大小而變化。考慮到抗體的可變區胺基酸序列，本領域技術人員可以常規地確定哪些殘基特定的⑶R。
[0049]表1.CDR 定義1
[0050]
【權利要求】
1.一種降低患有神經炎性疾病的受試者中血腦屏障滲透性的方法，包括將有效量的與臂板蛋白-4D(SEMA4D)特異性結合的分離的結合分子施用於該受試者，由此降低所述受試者的血腦屏障滲透性。
2.一種維持或提高患有神經炎性疾病的受試者中閉合蛋白-5表達的方法，包括將有效量的與臂板蛋白_4D(SEMA4D)特異性結合的分離的結合分子施用於該受試者，其中所述結合分子維持或提高所述受試者的閉合蛋白-5表達。
3.權利要求1或2的方法，其中所述結合分子抑制SEMA4D與神經叢蛋白-BI的相互作用。
4.一種降低患有神經炎性疾病的受試者中血腦屏障滲透性的方法，包括將有效量的特異性地抑制臂板蛋白4D (SEMA4D)與SEMA4D受體相互作用的分離的結合分子施用於該受試者，由此降低所述受試者的血腦屏障滲透性。
5.一種治療患有神經炎性疾病的受試者的方法，包括將有效量的特異性地抑制臂板蛋白4D(SEMA4D)與SEMA4D受體相互作用的分離的結合分子施用於該受試者，其中所述結合分子降低血腦屏障的滲透性，由此治療所述受試者。
6.權利要求4或5的方法，其中所述SEMA4D受體是神經叢蛋白-BI。
7.權利要求4-6任一項的方法，其中所述結合分子特異性地結合SEMA4D或神經叢蛋白-BI。
8.權利要求1-7任一項的方法，其中所述結合分子競爭性地抑制選自VX15/2503或67的參照單克隆抗體與SEMA4D的特異性結合。
9.一種降低患有神經炎性疾病的受試者中血腦屏障滲透性的方法，包括將有效量的與SEMA4D特異性結合的分離的結合分子施用於該受試者，其中所述結合分子競爭性地抑制選自VX15/2503或67的參照單克隆抗體與SEMA4D的特異性結合，由此降低所述受試者的血腦屏障滲透性。
10.權利要求1-9任一項的方法，其中所述結合分子特異性地結合與選自VX15/2503或67的參照單克隆抗體相同的SEMA4D表位。
11.權利要求ι-?ο任一項的方法，其中所述結合分子包括抗體或其抗原結合片段。
12.權利要求11的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包括可變重鏈(VH)和可變輕鏈(VL)，所述可變重鏈包括分別包含SEQ ID NO:6、7和8的VHCDR1-3，且所述可變輕鏈包括分別包含 SEQ ID NO: 14、15 和 16 的 VLCDR1-3。
13.權利要求12的方法，其中所述抗體或其抗原結合片段是單克隆抗體VX15/2503或67。
14.權利要求7的方法，其中所述結合分子特異性地結合神經叢蛋白-BI。
15.權利要求14的方法，其中所述結合分子競爭性地抑制SEMA4D與神經叢蛋白-BI的彡口 口 ?
16.權利要求14或15的方法，其中所述結合分子是抗神經叢蛋白-BI抗體或其抗原結合片段。
17.一種治療患有神經炎性疾病的受試者的方法，包括將有效量的與臂板蛋白-4D(SEMA4D)特異性結合的分離的結合分子和與神經叢蛋白-BI特異性結合的分離的結合分子施用於該受試者，其中所述SEMA4D和神經叢蛋白-BI結合分子降低血腦屏障的滲透性，由此治療所述受試者。
18.一種治療患有神經炎性疾病的受試者的方法，包括將有效量的臂板蛋白4D(SEMA4D)與SEMA4D受體相互作用的抑制劑施用於該受試者，其中所述抑制劑降低血腦屏障的滲透性，由此治療所述受試者。
19.權利要求18的方法，其中所述抑制劑選自抗SEMA4D結合分子、抗神經叢蛋白BI結合分子、SEMA4D的小分子抑制劑或SEMA4D受體的小分子抑制劑。
20.權利要求1-19任一項的方法，其中所述神經炎性疾病選自多發性硬化、肌萎縮性側索硬化、癲癇、阿爾茨海默病、帕金森病、腦膜炎、腦水腫和腦創傷。
【文檔編號】A61P25/00GK104168956SQ201280059376
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2012年10月11日 優先權日:2011年10月11日
【發明者】E·S·史密斯, M·佐德勒 申請人:瓦西尼斯公司