作為光學診斷用造影劑的短鏈肽－染料結合物的製作方法

2023-09-19 09:39:25

專利名稱：作為光學診斷用造影劑的短鏈肽－染料結合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於腫瘤診斷的化合物，該化合物由染料與短鏈肽的結合物組成，而所述肽是由血管活性腸肽、促生長素抑制素或神經降壓肽衍生的。本發明還涉及這些化合物作為光學診斷劑的應用以及包含這些化合物的診斷劑。
在細胞水平上，疾病誘導的變化通常表現為與正常狀態相比已發生變化的受體分布或表達。這些差異可以是定量型的(如增殖細胞中的轉鐵蛋白的量)或者也可以是定性型的(如血管內皮生長因子VEGF的表達)。以前主要是在放射診斷中注意研究病理受體表達或分布的顯象，這是因為檢測方法所需要的靈敏度。
七螺旋(heptahelical)受體是許多藥理活性成分(如β-阻斷劑、H2-酸阻斷劑、抗組胺藥)的目標分子。除治療應用外，這些受體的主要經放射標記的激動劑配體在診斷中用於所謂的受體閃爍法，以體內檢測並定位腫瘤。在此情況下，受體介導的細胞攝粒作用的機理例如被促生長素抑制素受體使用，該促生長素抑制素受體在神經內分泌腫瘤中被更強烈地表達。促生長素抑制素類似物111In-DTPA-pentetreotide(Octreoscan)在臨床上已被批准用於常規的閃爍診斷；文獻J.SteroidBiochem.Mol.Biol.37，1079-82，1990；J.Nucl.Med.32，1184-9，1991；J.Nucl.Med.33，652-8，1992；Digestion 3，54-9，1994；J.Clin.Invest.93，1321-5，1994；Metabolism 45，21-3，1996。
其他藥物包括使用經放射標記的結合VIP受體的VIP及VIP類似物。寬譜腫瘤(如腺癌)都更強烈地表達VIP受體。
WO 96/30055描述了放射診斷和放射治療劑，特殊的VIP受體結合肽，其是經放射標記的，而且可用於放射診斷和放射治療。可用Tc-99m標記用於閃爍法的VIP受體結合肽被描述是特別有利的。其他的文獻Cancer Research 54，690-700，1994；Endocrinology 136，2662-80，1994；J.Nucl.Med.40，353-361，1999。
上述所有基於促生長素抑制素受體和VIP受體的診斷劑都是放射診斷藥(閃爍法，用123I、125I、111In、99mTc標記的肽)。
文獻EP 588754、US 5650134、US 5620675、US 5225180、WO96/23527；J.Steroid Biochem.Mo.Biol.37，1083-87，1990；Lancet 242-4，1989；J.Nucl.Med.39，1913-17，1998。
然而，目前尚未知曉螢光標記的與染料結合的肽，其使得體內螢光檢測腫瘤成為可能(Photochem.Photobiol.68，603-632，1998)。
本發明的目的是提供新的化合物，該化合物使得用受體特異性結合目標組織的化合物通過檢測螢光輻射來靈敏診斷腫瘤成為可能。在此情況下，偶聯至生物分子上的特殊染料分子將產生高度靈敏的、可檢測的螢光信號。
該目的是通過包含螢光染料的化合物來實現的，其中螢光染料共價鍵地結合在短鏈肽上。這些結合物對七螺旋受體、特別是促生長素抑制素受體、VIP受體(血管活性腸肽)以及神經降壓肽受體具有高的結合親和性，而且它們任選地通過受體介導的細胞攝粒作用在細胞內被吸收。因此，根據本發明的化合物適合用於對腫瘤細胞和腫瘤組織進行技術上簡單、無害的光學診斷，所述腫瘤細胞或腫瘤組織與健康的細胞相比更多地表達促生長素抑制素受體、VIP受體或神經降壓肽受體。本發明的化合物特別適合用於螢光診斷，對於中空器官中螢光內窺鏡診斷是特別有利的，例如食管、結腸、子宮頸、以及支氣管的各種腫瘤，如腺癌、神經內分泌腫瘤或者胰管腫瘤。
特別優選的染料具有以下特徵它們滿足某些光物理和化學要求。從光物理角度看，染料必須具有高的吸收係數和高的螢光量子產量，以便即使在最小的組織濃度時仍能提供有效的信號。最大吸收必須以可自由選擇的方式重疊寬的光譜範圍。因此，為檢測更低的組織層(低於表面幾釐米)，600-900nm的光譜範圍是必須的，而對於表面檢測，400-600nm的吸收波長就已足夠。從化學角度看，染料必須具有高的光穩定性，而且在激發過程中必須沒有分解信號(光漂白)。染料在固相合成肽時必須可用作合成成分，而且因此在常規合成條件下是穩定的，使得在染料和肽之間確保簡單而且有利地產生結構明確並有固體化學計量比的染料-肽結合物。多亞甲基染料，特別是菁、部花菁、氧雜菁和squarilium染料，可以最好地滿足這些要求。
因此，本發明的主題是通式(I)的肽-多亞甲基染料結合物及其生理相容鹽A1-(X)m-A2(I)其中X代表具有D或L構型的α-、β-或Y-胺基酸；m代表5-30的數，其中所產生的胺基酸序列(X)m可為直鏈或者通過兩個半胱氨酸或高半胱氨酸之間的二硫鍵或者在N-和C-端之間的醯胺化而環化，並代表血管活性腸肽(VIP)、促生長素抑制素或神經降壓肽的胺基酸序列，或者代表VIP、促生長素抑制素或神經降壓肽的片段、部分序列、衍生物或類似物；A1代表氫原子、具有最多10個碳原子的醯基或烷基，它們可任選地被1-3個羧基和/或l-6個羥基取代，或者代表具有2-30個-CH2CH2O-單元的聚(氧乙烯)基團，或者代表選自於多亞甲基染料的染料分子，該染料在380-1200nm的範圍內具有至少一個最大吸收；A2代表羥基、氨基或者選自於多亞甲基染料的染料分子，該染料在380-1200nm的範圍內具有至少一個最大吸收；其條件是A1或A2基團中至少一個代表選自於多亞甲基染料的染料分子，而且該染料在380-1200nm的範圍內具有至少一個最大吸收，其中如果A1和/或A2代表選自於多亞甲基染料的染料分子，而且該染料在380-1200nm的範圍內具有至少一個最大吸收，則A1連接在N-端氨基上，而A2連接在胺基酸序列(X)m中任意位置處的胺基酸賴氨酸的氨基或者胺基酸絲氨酸的羥基上。
上述肽的片段、部分序列、衍生物或類似物代表例如縮短的胺基酸序列、單個或所有胺基酸與相應的D-胺基酸的交換物、單個胺基酸與其他胺基酸的交換物、反向序列以及上述特徵的組合。
上述肽的片段、部分序列、衍生物或類似物也可包含非天然的胺基酸，如萘丙氨酸(naphthalanine)、環己基丙氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、α-氨基己二酸、α-氨基丁酸、β-丙氨酸、β-環己基丙氨酸、鳥氨酸、肌氨酸或δ-羥基賴氨酸。
本發明特別優選的實施方案是具有以下特徵的通式I化合物染料分子A1和/或A2代表菁、squarilium、croconium、部花菁或氧雜菁染料。這些染料屬於多亞甲基染料類，而且具有如上所述的優點。
其他優選的根據本發明的通式I化合物具有以下特徵染料分子A1和/或A2代表以下通式II的菁染料或squarilium染料 其中D代表相應於以下通式III-VI的片段，其中用星號標記的位置表示與B的連接位 B代表相應於以下通式VII-XII的片段 R1和R2代表E1，R3代表氟、氯、溴或碘原子或者硝基或者基團-COOE1、-CONE1E2、-NHCOE1、-NHCONHE1、-NE1E2、-OE1、-OSO3E1、-SO3E1、-SO2NHE1、-E1，其中E1和E2相互獨立地代表氫原子、C1-C4磺基烷基、飽和或不飽和、直鏈或支鏈C1-C50烷基鏈，其中該鏈或其一部分可任選地形成一個或多個芳香或飽和環C5-C6單元或者二環C10單元，而且C1-C50烷基鏈中可插入0-15個氧原子和/或0-3個羰基和/或被0-5個羥基取代，R4代表氫原子、氟、氯、溴、碘原子或者支鏈或直鏈C1-C10烷基鏈，b代表2或3的數，X和Y相互獨立地代表O、S、Se、-CH＝CH-或者C(CH3)2，L代表以下式的基團 其中n代表1-10的數。
(在上述式中，分子部分中在左側畫的實線表示與染料骨架相連的鍵，而分子部分中在右側畫的虛線表示與肽相連的鍵。)在多亞甲基染料中，菁染料，例如以吲哚結構為基礎的茚炭(indocarbo)菁、茚二炭(indodicarbo)菁和茚三炭(indotricarbo)菁，是特別有利的。這些結構的特徵在於具有高度化學和光化學穩定性。通過有利的合成法，可製得以任何所希望的方式在400-1000nm之間吸收並發螢光的衍生物，其可用合適的連接基和官能團、優選羧基通過取代反應偶聯在肽上，而且特別是由於磺酸基而具有高度的水溶性。與文獻中已知的菁染料相反，根據本發明使用的化合物僅具有一個活性基團，這使得作為結合物的樹脂合成的一部分化學計量比確定地偶聯在肽上成為可能。
因此，根據本發明的通式I化合物的特別優選的實施方案具有以下特徵——染料分子A1和/或A2代表茚炭菁染料、茚二炭菁染料或茚三炭菁染料；——染料分子A1和/或A2代表以下通式XIII或XIV的茚炭菁染料、茚二炭菁染料或茚三炭菁染料 其中p代表1、2或3，n代表1、2、3、4或10的數，R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基、3-磺基丙基、2-磺基乙基、3-甲基-3-磺基丙基、甲基、乙基、或丙基，而R3代表氫、氯、溴或碘原子或者硝基或者基團-COOE1、-CONE1E2、-NHCOE1、-NHCONHE1、-NE1E2、-OE1、-OSO3E1、-SO3E1、-SO2NHE1，其中E1和E2相互獨立地代表氫原子、或者代表甲基或乙基或者C3-C6烷基，該烷基可插入0-2個氧原子和/或0-1個羰基，和/或被0-5個羥基取代，或者E1和E2代表具有2-30個-CH2CH2O-單元的聚(氧乙烯)二醇基團；——染料分子A1和/或A2代表以下通式XIII或XIV的茚炭菁染料、茚二炭菁染料或茚三炭菁染料 其中p代表1、2或3，n代表1、2或4，R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基或3-磺基丙基，而R3代表氫、或者基團-COOE1或-CONHE1，其中E1和E2相互獨立地代表氫原子、或者代表甲基或乙基或者C3-C6烷基，該烷基可插入0-2個氧原子和/或0-1個羰基，和/或被0-5個羥基取代；——染料分子A1和/或A2代表以下通式XV或XVI的茚三炭菁染料 其中n代表2或3，R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基、3-磺基丙基或2-磺基乙基，R3代表基團-CONH-肽、-CONH-(CH2)m-CONH-肽、-CONH-(CH2)n-NH-CS-NH-肽或者-CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-肽，其中m＝1-10，而n＝2或3，或者R3代表以下基團 R4和R5相互獨立地代表氫原子、甲基或羥基化烷基，如2-羥基乙基、3-羥基丙基、2，3-二羥基丙基、1，3-二羥基-2-丙基、2，3，4-三羥基丁基、1，3，4-三羥基-2-丁基、2，3，4，5，6-五羥基己基，R6代表以下基團之一-(CH2)m-CONH-肽其中m＝0-2，-(CH2)m-NH-CS-NH-肽其中m＝0-2，而X代表氧原子或硫原子；——染料分子A1和/或A2代表以下通式XVII的茚三炭菁染料 其中R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基或3-磺基丙基，R3代表基團-CONH-肽、-CONH-(CH2)m-CONH-肽、-CONH-(CH2)n-NH-CS-NH-肽或者-CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-肽，其中m＝1-10，而n＝2或3，或者R3代表以下基團 R4和R5相互獨立地代表氫原子、甲基或羥基化烷基，如2-羥基乙基、3-羥基丙基、2，3-二羥基丙基、1，3-二羥基-2-丙基、2，3，4-三羥基丁基、1，3，4-三羥基-2-丁基、2，3，4，5，6-五羥基己基。
使用經染料標記的抗體檢測腫瘤在文獻中是已知的(J.Cell.Pharmacol.3，141-145，1992；Cancer Immunol.Immunother.41，257-63，1995；Cancer Research 54，2643-9，1994；Biotechnol.Prog.13，649-658，1997)。
相反地，根據本發明的化合物包含對抗體具有優勢的低分子量肽和肽衍生物作為生物分子，所述肽或肽衍生物例如對目標結構具有高結合性，其診斷潛力不會由於不利的藥代動力學而受到限制(長的血液半衰期，過敏性副作用(免疫原性))。
因此，對肽序列的生物及藥理學要求是當在目標組織中快速增加時具有足夠的血漿穩定性，並同時從身體的其他部分、優選通過腎排洩途徑消除。
現在足以令人驚奇地發現，包含至少5個VIA序列之C-端側胺基酸而且在其上偶聯用於螢光診斷的染料的肽序列，與天然VIP相比，能夠在腫瘤細胞中顯影。另外還發現，摻入至少一個D-胺基酸或者用至少一個D-胺基酸交換，可顯著增加血漿穩定性。例如在結合VIP的染料-肽結合物中，所有L-胺基酸被D-胺基酸完全交換，則顯示結合性質及細胞顯影沒有變化。
其他特別優選的根據本發明的通式I化合物具有以下特徵——(X)m代表天然的人血管活性腸肽的序列，其相應於以下序列HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN或者由5-30個胺基酸組成的血管活性腸肽的片段、部分序列、衍生物或者類似物；——(X)m代表促生長素抑制素的胺基酸序列，其相應於以下序列 或者由5-20個胺基酸組成的促生長素抑制素的片段、部分序列、衍生物或者類似物；
——(X)m代表神經降壓肽的胺基酸序列，其相應於以下序列焦穀氨酸-LYENKPRRPYIL或者由5-20個胺基酸組成的神經降壓肽的片段、部分序列、衍生物或者類似物；——作為血管活性腸肽(VIP)的片段、部分序列、衍生物或者類似物，選擇以下胺基酸序列RLRKQMAVKKYLNSILN RLRKQMAVKKYLNSIL RLRKQMAVKKYLNSILRKQMAVKKYLNSILNLRKQMAVKKYLNSILLRKQMAVKKYLNSIRKQMAVKKYLNSILN RKQMAVKKYLNSIL RKQMAVKKYLNSIKQMAVKKYLNSILN KQMAVKKYLNSIL KQMAVKKYLNSIQMAVKKYLNSILN QMAVKKYLNSIL QMAVKKYLNSIMAVKKYLNSILNMAVKKYLNSILMAVKKYLNSIAVKKYLNSILN AVKKYLNSIL AVKKYLNSIRLRKQMAVKKYLNS RLRKQMAVKKYLN RLRKQMAVKKYLLRKQMAVKKYLNS LRKQMAVKKYLN LRKQMAVKKYLRKQMAVKKYLNSRKQMAVKKYLNRKQMAVKKYLKQMAVKKYLNS KQMAVKKYLN KQMAVKKYLQMAVKKYLNS QMAVKKYLN QMAVKKYLMAVKKYLNS MAVKKYLN MAVKKYLAVKKYLNSAVKKYLN AVKKYL，——作為VIP序列的類似物，選擇以下胺基酸序列FSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNISDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNLSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHFDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHHDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHIDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHLDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHMDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHQDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHTDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHVDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHWDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHYDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSAAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSEAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSFAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSHAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSIAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSLAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSMAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSWAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDFVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDGVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDMVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDQVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDSVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDWVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDYVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAFFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAIFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDALFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAMFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDATFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAWFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAYFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVKTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFVDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFWDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNW TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRRRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRWRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRFQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRLQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRMQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRRQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKAMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKFMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKIMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKKMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKLMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKMMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKRMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKVMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKWMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKYMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQFAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQIAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQKAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQLAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQQAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQRAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQWAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMFVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMIVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMKVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMLVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMMVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMQVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMRVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMVVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMWVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMYVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAAK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAIK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMALK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVR KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK RYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK WYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KFLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KWLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLASILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLFSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLISILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLMSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLSSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLVSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLWSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNNILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNRILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNWILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNYILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSLLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSSLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSWLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSYLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIFNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIINHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIWNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILW——作為VIP的類似物，選擇根據以下式的化合物HSDAVFTX1X2Y X3RLRKQMAVK KYLNSILN，其中X1、X2和X3可代表任何胺基酸，——2-m個胺基酸可相互獨立地用它們相應的D-胺基酸或者其他L-或D-胺基酸交換，其中m與上述定義相同，
——至少一個胺基酸(X)m相互獨立地用其他非天然的胺基酸或者胺基酸衍生物交換，——至少一個胺基酸(X)m相互獨立地用其他非天然的胺基酸或者胺基酸衍生物交換，例如萘丙氨酸、環己基丙氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、α-氨基己二酸、α-氨基丁酸、β-丙氨酸、β-環己基丙氨酸、鳥氨酸、肌氨酸或δ-羥基賴氨酸，——作為VIP的類似物，選擇以下式的化合物X1SDAVX2TDNX3TRLRKQMAVKKX4LNSILN，其中X1、X2、X3和X4可代表非天然的胺基酸或胺基酸衍生物，例如萘丙氨酸、環己基丙氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、α-氨基己二酸、α-氨基丁酸、β-丙氨酸、β-環己基丙氨酸、鳥氨酸、肌氨酸或δ-羥基賴氨酸，——所有胺基酸(X)m用它們相應的D-胺基酸交換，——選擇逆合成胺基酸序列作為血管活性腸肽的片段、部分序列、衍生物或類似物，——選擇其中2-m個胺基酸用相應的D-胺基酸交換的逆合成胺基酸序列作為血管活性腸肽序列的片段、部分序列、衍生物或類似物，其中m與上述定義相同，——選擇以下胺基酸序列作為血管活性腸肽的片段、部分序列、衍生物或類似物rlrkqmavkkylnsiln rlrkqmavkkylnsil rlrkqmavkkylnsilrkqmavkkylnsiln lrkqmavkkylnsil lrkqmavkkylnsirkqmavkkylnsilnrkqmavkkylnsilrkqmavkkylnsikqmavkkylnsiln kqmavkkylnsil kqmavkkylnsiqmavkkylnsiln qmavkkylnsil qmavkkylnsimavkkylnsiln mavkkylnsil mavkkylnsiavkkylnsilnavkkylnsilavkkylnsiRLRKQMAvKKyLNSILN RLRKQMAvKKyLNSIL RLRKQMAvKKyLNSILRKQMAvKKyLNSILN LRKQMAvKKyLNSIL LRKQMAvKKyLNSIRKQMAvKKyLNSILNRKQMAvKKyLNSILRKQMAvKKyLNSIKQMAvKKyLNSILN KQMAvKKyLNSIL KQMAvKKyLNSIQMAvKKyLNSILN QMAvKKyLNSIL QMAvKKyLNSIMAvKKyLNSILN MAvKKyLNSIL MAvKKyLNSIAvKKyLNSILNAvKKyLNSILAvKKyLNSI——選擇以下胺基酸序列作為促生長素抑制素的片段、部分序列、衍生物或類似物
——選擇以下胺基酸序列作為神經降壓肽的片段、部分序列、衍生物或類似物pGlu-LYQNKPRRPFIL pGlu-LYENKPRRPYIpGlu-LYENKPRRPyIL pGlu-LYQNKPRRPfIL pGlu-LYENKPRRPYpGlu-LYQNKPRRPYIL pGlu-LYENKPRRPWIL pGlu-LYENKPRRPpGlu-LYQNKPRRPyIL pGlu-LYENKPRRPwIL pGlu-LYENKPRRpGlu-LYENKPRRPFIL pGlu-LYQNKPRRPWIL pGlu-LYENKPRpGlu-LYENKPRRPfIL pGlu-LYQNKPRRPwIL pGlu-LYENKPNKPRRPYIL NKPRRPyIL NKPRRPfIL NKPRRPwILKPRRPYIL KPRRPyIL KPRRPfIL KPRRPwILPRRPYIL PRRPyIL PRRPfIL PRRPwILRRPYILRRPyILRRPfILRRPwIL通式I的術語包括胺基酸序列的常規語言。N-端總是在左側，而C-端總是在右側(根據H-(X)m-OH未被取代，或者為醯胺時，H-(X)m-NH2)。所用胺基酸的單個字母縮寫參見M.Bodanszky，PeptideChemistry-A Practical Textbook，第2版，Springer-Verlag Heidelberg 1993，第3頁。大寫字母表示具有L-構型的胺基酸(天然胺基酸)，小寫字母代表D-胺基酸，二硫鍵(環肽)用相應字母之間的連線表示(C＝半胱氨酸或高半胱氨酸)。逆合成的序列是表示，在合成中，與給定的天然序列相比胺基酸的序列被顛倒，也就是說，合成由原始N-端胺基酸開始，並產生直至原始C-端胺基酸的序列。
VIP的類似物使用取代分析來測定(見實施例43)。特別優選的VIP類似物是以下化合物His-Trp-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO1)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Phe-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO2)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Lys-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO3)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Gln-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO4)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Arg-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO5)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Trp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO6)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Arg-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO7)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Arg-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO8)。
與放射標記的物質相比，根據本發明的物質具有各種優點。螢光染料可隨時按需要激發以發射螢光。不存在連續的信號，其使用具有相應半衰期的分解作用作為基礎。因此，可隨時根據需要選擇診斷時間，並可經常根據需要重複，而且不會受到同位素半衰期的限制。患者不暴露於任何離子輻射中，而且所使用的光輻射在所用劑量下是無害的。光學檢測技術使得檢測達到幾個光子的高靈敏度，而且因此在靈敏度方面可與放射診斷相媲美。
已有人描述了使用染料生物分子結合物通過近紅外輻射(NIR輻射)進行診斷的方法(WO 96/17628)。己證明本發明特別有利的是用自動固相合成法能夠以有利的產率和高純度製備肽結合物。足以令人驚奇地發現，可使用各種攜帶羧基的茚菁化合物作為胺基酸類似物，而且賴氨酸的N-端基團和氨基都可偶聯在固相(樹脂)上。在斷裂樹脂並進行色譜純制後，所得的染料-肽結合物具有大於95％的純度。新的偶聯方法能夠使滷代醯基染料偶聯在胺基酸半胱氨酸或高半胱氨酸上，它們可替換天然VIP序列的任何胺基酸。
在使用用於激發螢光的光時，基礎問題是光的有限穿透深度，其在VIS時低於幾毫米，但是在NIR時可為數釐米。對於穿透深度，在表面組織疾病以及軟組織時，檢測法沒有任何問題。因此，本發明的主題是乳房X射線照相法，其中使用根據本發明的化合物通過檢測螢光或者未吸收的輻射診斷患病組織。本發明更具體的主題是根據本發明的化合物在內窺鏡檢查法中的應用，所述內窺鏡檢查法例如是結腸鏡、支氣管鏡、食管內窺鏡，其中診斷接近表面的組織中的變化。在內窺鏡診斷中通常使用白光進行直接肉眼觀察。根據本發明的化合物通過產生組織特異性的信號，特別是在診斷早熟但不可肉眼檢測的組織變化(如結腸發育異常)時，對診斷方法具有決定性的改善。
現已發現，在患有化學誘導的發育異常及結腸癌的大鼠的腸道中霧化根據本發明的偶聯染料的化合物後，隨後衝洗並實施內窺鏡螢光診斷(激發740nm，在760nm以上檢測)，使得可以檢測結腸中螢光增加的組織區域。
因此，本發明的主題還在於使用根據本發明的化合物進行內窺鏡螢光診斷的方法，特別是用於診斷胃腸道。在此情況下，優選靜脈、或者通過霧化局部地向組織輸送一種或多種物質，並照射相應光譜範圍的光以電子激發所用的染料。記錄反射的螢光輻射或者由染料發射出的螢光輻射。優選的方法是，在大的表面範圍照射組織，並通過CCD照相機成像局部解析螢光輻射，或者用光導纖維對待成像的組織區域進行光柵掃描，然後用計算機處理所得的信號並處理成合成圖象。在此情況下，光譜和/或相選擇性以及以靜態和/或時間分辨方式檢測並評估螢光。所得的螢光圖象可與白光圖象同時產生，而且在一個圖中相互疊加產生用於數據評估。
根據本發明的化合物的合成可類似於文獻中已知的方法進行。在聚合物樹脂中以固相合成法製備肽。具體細節對於本領域技術人員是已知的。文獻Peptide Chemistry-A Practical Textbook(M.Bodanszky)，第2版，Springer-Verlag Heidelberg 1993；Anti-Cancer Drug Design 12，145-167，1997；J.Am.Chem.Soc.117，11821-2，1995。
染料是單獨製備的，然後作為肽的固相合成的一部分，將染料偶聯在肽上，接著從樹脂上斷裂並純制，由此得到根據本發明的化合物。優選的是那些包含羧基的染料，其在用常規試劑活化後偶聯在肽的氨基上，特別是賴氨酸的ε-氨基或者N-端肽氨基。另外，含有滷烷基或滷醯基的染料優選偶聯在肽的硫醇基上，特別是胺基酸半胱氨酸或高半胱氨酸。
合成多亞甲基染料的文獻Bioconjugate Chem.4，105-111，1993；Bioconjugate Chem.7，356-62，1996；Bioconjugate Chem.8，751-56，1997；Cytometry 10，11-19，1989和11，418-30，1990；J.Heterocycl.Chem.33，1871-6，1996；J.Org.Chem.60，2391-5，1995；Dyes and Pigments 17，19-27，1991；Dyes and Pigments 21，227-34，1993；J.Fluoresc.3，153-55，1993；Anal.Biochem.217，197-204，1994；US 4981977；US 5688966；US 5808044；WO 97/42976；WO 97/42978；WO 98/22146；WO 98/26077；EP 0800831。
僅包含一個羧基的染料特別適合於在固相中偶聯在肽上，特別有利的是通式XVIII的菁染料 其中p代表1、2或3，n代表1、2、3、4或10，R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基、3-磺基丙基、2-磺基乙基、3-甲基-3-磺基丙基、甲基、乙基、或丙基，而R3代表氫或者基團-COOE1、-CONE1E2、-NHCOE1、-NHCONHE1、-NE1E2、-OE1、-OSO3E1、-SO3E1、-SO2NHE1，其中E1和E2相互獨立地代表氫原子、或者代表甲基或乙基或者C3-C6烷基，該烷基可插入0-2個氧原子和/或0-1個羰基，和/或被0-5個羥基取代；或者通式XIX或XX的菁染料 其中n代表2或3，R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基、3-磺基丙基或2-磺基乙基，R3代表-COOH基團或者以下基團中的一種-CONH-(CH2)n-COOH，其中n＝2或3，-CONH-(CH2)n-NCS，其中n＝2或3，-CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-X1，其中n＝2或3，而X1＝Cl、Br、I， R4和R5相互獨立地代表氫原子、甲基或羥基化烷基，如2-羥基乙基、3-羥基丙基、2，3-二羥基丙基、1，3-二羥基-2-丙基、2，3，4-三羥基丁基、1，3，4-三羥基-2-丁基、2，3，4，5，6-五羥基己基，R6代表以下基團中的一種-(CH2)m-COOH，其中m＝0-2，-(CH2)m-NCS，其中m＝0-2，而X代表氧原子或硫原子；或者通式XXI的菁染料 其中R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基、3-磺基丙基或2-磺基乙基，R3代表-COOH基團或者以下基團中的一種-CONH-(CH2)n-COOH，其中n＝2或3，-CONH-(CH2)n-NCS，其中n＝2或3，-CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-X1，其中n＝2或3，而X1＝Cl、Br、I， R4和R5相互獨立地代表氫原子、甲基或羥基化烷基，如2-羥基乙基、3-羥基丙基、2，3-二羥基丙基、1，3-二羥基-2-丙基、2，3，4-三羥基丁基、1，3，4-三羥基-2-丁基、2，3，4，5，6-五羥基己基。
僅一個可活化基團如羧基或者已經活化的基團如異硫氰酸酯、滷烷基或滷醯基的優點在於，可進行化學上均勻的偶聯。滷醯基具有特別的優點，即、能夠化學均勻地偶聯在半胱氨酸或高半胱氨酸的巰基上。該偶聯可在溶液中實施在已脫除保護基且未鍵合的肽上。通過活化基團，在偶聯於肽上時有可能不發生副反應。為增加水溶解度，染料中的肽-染料結合物具有更多的羥基數量。通過在染料的吲哚系統中定位連接基，另外在吲哚系統的氮原子上還可通過包含磺酸基的基團產生足夠的親水性。其結果是，可用肽進行結構均勻的偶聯反應(見實施例4-38和44-49)。
本發明的另一個主題是用於體內診斷患病組織區域的光診斷劑，其特徵在於包含至少一個通式I的化合物以及常規輔劑和/或載體及稀釋劑。
以下實施例用於解釋本發明。實施例1-3合成用於固相合成偶聯於肽的氨基(N-端或ζ-賴氨酸)上的茚菁(indocyanine)染料1-3該合成總地是由1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基-3H-假吲哚和1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基-5-羧基-3H-假吲哚起始(Cytometry10，11-19，1989；Talanta 39，505-510，1992)。實施例1合成1，1′-二(4-磺基丁基)茚炭菁-5-羧酸鈉鹽(1)將0.8g(4.0mmol)的N，N-二苯基甲脒引入至15ml乙酸酐中，並在室溫下分批地與1.4g(4.2mmol)的1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基-5-羧基-3H-假吲哚混合，在120℃下攪拌30分鐘，然後用水浴冷卻至室溫。接著添加1.2g(4.1mmol)的1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基-3H-假吲哚、1.2g(14.6mmol)的無水乙酸鈉、15ml的乙酸酐和6ml的乙酸。反應混合物加熱1小時至120℃，然後冷卻暗紅色的溶液，並與100ml的乙醚混合。抽濾出沉澱固體。在RP矽膠EUROPREP 60-30 C18，60A，20-45m上進行色譜純制(洗脫劑水/MeOH，0-70％MeOH的梯度)。在旋轉蒸發器中從包含產物的部分中除去甲醇，然後將該部分凍幹，產量1.5g(58％)，紅色凍乾物。實施例2合成1，1′-二(4-磺基丁基)茚二炭菁-5-羧酸鈉鹽(2)1.2g(4.1mmol)的1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基-3H-假吲哚和1.0g(3.9mmol)的丙二醛-二苯基亞胺鹽酸鹽在15ml的乙酸酐中於120℃下攪拌30分鐘，然後用水浴冷卻至室溫。接著添加1.4g(4.2mmol)的1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基-5-羧基-3H-假吲哚、1.2g(14.6mmol)的無水乙酸鈉、15ml的乙酸酐和6ml的乙酸。反應混合物加熱1小時至120℃，然後冷卻藍色的溶液，並與100ml的乙醚混合。如實施例1進行處理及純制。產量1.8g(66％)，藍色凍乾物。實施例3合成1，1＇-二(4-磺基丁基)茚三炭菁-5-羧酸鈉鹽(3)1.2g(4.1mmol)的1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基-3H-假吲哚和1.1g(3.9mmol)的戊烯二醛-二縮苯胺鹽酸鹽在15ml的乙酸酐中於120℃下攪拌30分鐘，然後用水浴冷卻至室溫。接著添加1.4g(4.2mmol)的1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基-5-羧基-3H-假吲哚、1.2g(14.6mmol)的無水乙酸鈉、15ml的乙酸酐和6ml的乙酸。反應混合物加熱1小時至120℃，然後冷卻藍色的溶液，並與100ml的乙醚混合。如實施例1進行處理及純制。產量1.8g(60％)，藍色凍乾物。
實施例1-3的化合物的結構繪製在

圖1中。實施例4-6合成用於固相合成偶聯於肽的氨基(N-端或ζ-賴氨酸)上的茚菁染料4-6
該合成是如下進行的用β-丙氨酸-叔丁基酯使染料1-3醯胺化，然後斷裂叔丁基酯基。
0.5mmol的染料1-3和0.1g(1.0mmol)的三乙胺在20ml二甲基甲醯胺中的溶液在0℃下與0.5mmol的TBTU於10ml二甲基甲醯胺中的溶液混合，然後在0℃下攪拌15分鐘。接著滴加0.11g(0.6mmol)的β-丙氨酸-叔丁基酯鹽酸鹽和0.6mmol的三乙胺在5ml二甲基甲醯胺中的溶液，並在室溫下攪拌反應混合物2小時。添加100ml的乙醚，然後抽濾沉澱的固體，溶解在20ml的二氯甲烷中，與10ml的三氟乙酸混合，並在室溫下攪拌24小時。真空蒸發濃縮混合物，然後如實施例1對殘留物進行色譜純制和凍幹，產量0.21g(58％)的4，0.29g(76％)的5，0.28g(72％)的6。實施例7-9由1-3合成用於固相合成偶聯於肽的氨基(N-端或ζ-賴氨酸)上的茚菁染料7-9製備方法類似於實施例4-6，其中使用0.1g(0.6mmol)的甘氨酸-叔丁基酯鹽酸鹽，產量0.25g(68％)的4，0.30g(80％)的5，0.32g(83％)的6。實施例10-12由1-3合成用於通過偶聯在半胱氨酸的巰基上而固相合成偶聯於肽上的茚菁染料10-12該合成是如下進行的用3-氨基丙醇使染料1-3醯胺化，然後將醇基轉化為溴化物。
在0℃下使0.5mmol染料1-3和0.1g(1.0mmol)三乙胺在20ml二甲基甲醯胺中的溶液與0.5mmol的TBTU在10ml二甲基甲醯胺中的溶液混合，然後在0℃下攪拌15分鐘。接著滴加850mg(1.2mmol)3-氨基丙醇和1.2mmol三乙胺在5ml二甲基甲醯胺中的溶液，並在室溫下攪拌反應混合物6小時。添加100ml的乙醚，然後如實施例1所述過濾出沉澱固體，進行色譜純制並凍幹。
在4℃下於4ml二甲基甲醯胺和4ml二氯甲烷的混合物中攪拌0.3mmol中間產物與55mg(0.5mmol)的N-溴代琥珀醯亞胺和130mg(0.5mmol)三苯基膦混合，由此進行形成溴化物10-12的反應。添加3ml的乙醚，沉澱出產物，過濾，並用作肽偶聯反應中的粗產物。實施例14-16和18-27樹脂合成VIP-受體結合肽與染料1-9和13的肽結合物a)固相肽合成根據Fmoc策略並類似於標準Fmoc機器方案(Pept.Res.，36(1990)225)，在50μmol的TentaGel-Sram樹脂(Rapp Polymers，Tuebingen)中合成肽，其中使用偶聯劑PyBOP(苯並三唑-1-基氧基-三吡咯烷基六氟磷酸鱗)和N-甲基嗎啉。使用以下側鏈保護基對於Cys、His、Asn和Gln用三苯甲基；對於Asp、Glu、Ser和Thr用叔丁基；對於Lys和Trp用叔丁氧基羰基；而對於Arg用五甲基苯並二氫吡喃磺醯基。
用正交保護基方法實現偶聯於賴氨酸的ζ-氨基上(實施例24)。作為賴氨酸組分，使用Fmoc-賴氨酸(Dde-OH)，而肽如上所述進行合成。在使N-端醯化後，用3％肼水合物選擇性地斷裂Dde-保護基。b)染料偶聯染料連接在N-端部分中或者仍為固相鍵合的肽中的賴氨酸上。在此方面，在600μl二甲基甲醯胺中溶解75μmol的各染料1-9和13(1.5eq)，然後與83μmol的TBTU(2-(1H-苯並三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基四氟硼酸尿)及150μmol的N，N-二異丙基乙基胺混合。2分鐘後，將該反應混合物添加在攜帶各種肽的樹脂中，並反應過夜。用二甲基甲醯胺洗滌樹脂5次，並用二氯甲烷洗滌3次，然後在空氣中乾燥。c)保護基斷裂以及脫掉染料-肽結合物將1.5ml由750mg苯酚、250μl乙烷二硫醇、500μl硫代苯甲醚和500μl水在10ml三氟乙酸中組成的混合物分別添加在攜帶肽-結合物的樹脂中，並反應4小時。染料-肽結合物用冷的叔丁基甲基醚沉澱，用冷的乙醚洗滌6次，溶解在5％乙酸中，然後凍幹。在Vydac-C18柱中用RP-HPLC進行結合物的純度分析及純制(梯度水+0.05％TFA/乙腈，5％-60％乙腈，20分鐘，檢測214和750nm)。
所合成的染料-肽結合物的結構如下所示。與VIP-受體結合肽I的染料結合物實施例14-16染料1-3與VIP(1-28)的結合物 n＝1茚炭菁-VIP(1-28)結合物14n＝2茚二炭菁-VIP(1-28)結合物15n＝3茚三炭菁-VIP(1-28)結合物16實施例17染料12與Cys17-VIP(1-28)的結合物 茚三炭菁-Cys17-VIP(1-28)結合物17實施例18-20染料1-3與VIP(14-28)的結合物 n＝1茚炭菁-VIP(14-28)結合物18n＝2茚二炭菁-VIP(14-28)結合物19n＝3茚三炭菁-VIP(14-28)結合物20實施例21-23染料4-6與VIP(14-24)的結合物 n＝1茚炭菁-β-丙氨酸-VIP(14-24)結合物21n＝2茚二炭菁-β-丙氨酸-VIP(14-24)結合物22n＝3茚三炭菁-β-丙氨酸-VIP(14-24)結合物23實施例17樹脂合成由VIP-受體結合肽與染料10-22組成的肽結合物為通過硫醚鍵將攜帶溴化物的染料10-22化學選擇性地連接在肽上，必須在肽中插入具有正交保護基的半胱氨酸或者高半胱氨酸。如實施例14-16/18-27所述進行固相肽合成，並使用成分Fmoc-cys(Mmt)-OH。在二氯甲烷中用1％TFA/5％三異丙基矽烷可斷裂單甲氧基三苯甲基(Mmt)，同時得到其他側鏈保護基。在此方面，用1ml上述溶液分別與樹脂溫育10分鐘，共三次。用二氯甲烷(3×)、DMF(5×)和乙醇(3×)洗滌樹脂後，樹脂與20％碳酸銫溶液(1ml)溫育2分鐘，用水(2×)、乙醇(2×)和DMF(2×)洗滌。將75μmol的各染料10-22(1.5eq)溶解在600μl二甲基甲醯胺中，然後添加在各樹脂中，並重複該步驟30分鐘。樹脂用二甲基甲醯胺(5×)和二氯甲烷(2×)洗滌5次。在空氣中乾燥樹脂後，如上所述斷裂保護基並脫掉載體。
其他合成的染料-肽結合物的結構都如下所示。與VIP-受體結合肽II的染料結合物實施例24染料6與Lys25-VIP(14-25)的結合物 (ε-氨基-茚三炭菁)-Lys25-VIP(14-25)結合物24實施例25染料3與D-VIP(14-24)的結合物 茚三炭菁-D-VIP(14-24)結合物25實施例26染料13與D-VIP(14-24)的結合物 茚三炭菁-5-羧酸葡糖醯胺-D-VIP(14-24)結合物26實施例27染料13與逆-D-VIP(14-24)的結合物 茚三炭菁-5-羧酸葡糖醯胺-逆-D-VIP(14-24)結合物27實施例28-32樹脂合成由促生長素抑制素-受體結合肽與染料1-9及13組成的肽結合物總的指示在500mg的TCP-Thr(But)-fmoc-樹脂(Pepchem TuebingenCompany)上進行合成，該樹脂的濃度為0.49mmol/g。使用以下臨時保護基「逐步」合成肽對於Thr和Ser用叔丁基，對於Cys和Asp用三苯甲基，對於Trp和Lys用Boc。作為縮合試劑，可使用HBTU。
斷裂N-端Fmoc保護基後，在特殊的合成步驟中縮合染料1-9、13。為此目的，將255mg的樹脂懸浮於約2ml的DMF中，並與0.5mmol的染料、0.5mmol的HBTU和0.17ml的DIEA混合。在室溫下攪拌18小時，抽濾樹脂，用二氯甲烷洗滌，然後乾燥。用95％三氟乙酸以及三異丙基矽烷，並隨後由10％乙酸中凍幹，由此從樹脂上斷裂染料-肽結合物。粗產物用活性炭環化，並進行色譜純制(50×300mm VYDACRP-18，梯度水/乙腈)。
所合成的染料-肽結合物的結構如下所示。染料與促生長素抑制素-受體結合肽的結合物實施例28-30染料1-3與pentetreotide的結合物 n＝1茚炭菁-pentetreotide 28n＝2茚二炭菁-pentetreotide 29n＝3茚三炭菁-pentetreotide 30實施例31染料3與促生長素抑制素-14的結合物 茚三炭菁-促生長素抑制素-14結合物31實施例32染料13與促生長素抑制素-14的結合物 茚三炭菁-5-羧酸-葡糖醯胺-促生長素抑制素-14結合物32實施例33-38合成由神經降壓肽與染料3組成的肽結合物類似於實施例14-27中描述的總方案進行所述物質的合成。
所合成的染料-肽結合物的結構如下所示。染料與神經降壓肽-受體結合肽的結合物實施例33-35染料7-9與D-Tyr11-神經降壓肽(7-13)的結合物 n＝1茚炭菁-D-Tyr11-神經降壓肽(7-13)結合物33n＝2茚二炭菁-D-Tyr11-神經降壓肽(7-13)結合物34n＝3茚三炭菁-D-Tyr11-神經降壓肽(7-13)結合物35實施例36染料2與D-Tyr11-神經降壓肽的結合物 (ε-氨基-Lys6-茚二炭菁)-D-Tyr11-神經降壓肽結合物36實施例37-38染料10-11與D-Tyr11-神經降壓肽(5-13)-Cys的結合物 n＝1茚炭菁-D-Tyr11-神經降壓肽(5-13)-Cys結合物37n＝2茚二炭菁-D-Tyr11-神經降壓肽(5-13)-Cys結合物38實施例39所合成的染料-肽結合物的吸收及螢光性質在PBS和牛血漿(Perkin Elmer Lambda 2)中測定最大吸收和消光係數。在PBS中通過在短鏈側激發得到螢光發射光譜(距最大吸收為約40nm)。
吸收及螢光數據總結於圖4中。在圖5中，以實施例的方式給出了典型的吸收及螢光發射光譜。實施例40使用螢光顯微鏡測定細胞成像在人腫瘤細胞中於體外研究根據本發明的化合物的結合及成像，並表達血管活性腸肽和/或促生長素抑制素和/或神經降壓肽的受體。為此目的，在1.5ml包含測試物質的培養基中培養5×105個細胞腫瘤。使用不同濃度的物質(10nM-10μM)，而且培養時間也是變化的(1分鐘-24小時)。培養後，使細胞沉降，並製備顯微鏡製劑。在Zeiss Axiovert135-螢光顯微鏡上進行評估，該螢光顯微鏡裝備有Cy7-(激發器HQ710/70nm，發射器810/90nm，分光器750nm LP)、Cy5-(激發器575-625nm，發射器660-710nm BP，分光器645nm)和Cy3-濾光器(激發器546/12nm，發射器590nm LP，分光器580nm)。所有製劑中，用CCD-照相機(Visitron RTE/CCD-576)記錄白光和螢光圖象並進行數字儲存。
如下描述所選擇的結果與10μM茚三炭菁-VIP(1-28)結合物16培養30分鐘後建立HT29細胞的顯微鏡白光和螢光圖象(Cy7-濾光器)。在螢光圖象中，檢測到在所有細胞上分散非常均勻的螢光。另外，信號增加的區域是可見的，這有可能是與血管腔有關。螢光圖象中的細胞在它們的空間擴展方面與白光圖象是相關聯的。
用以下化合物，通過類似的方法得到白光和螢光圖象(Cy7-濾光器)茚三炭菁-VIP(14-28)結合物20，10μM，HT29細胞。螢光均勻地分散在細胞上，與白光圖象良好關聯。
茚三炭菁-逆-D-VIP(24-14)結合物25，10μM，HT29細胞。螢光均勻地分散在細胞上，與白光圖象良好關聯。
茚三炭菁-pentetreotide結合物30，10μM，RIN38-VIP1細胞。在細胞的膜區域中螢光具有血管圖形，與白光圖象良好關聯。
另外，用以下化合物通過類似的方法得到螢光圖象(-氨基-茚三炭菁)-Lyrs25-VIP(14-25)結合物24，10μM，RIN38-VIP1細胞，Cy7-濾光器。螢光圖象是均勻的、細胞內近核螢光。
茚二炭菁-VIP(1-28)結合物15，10μM，RIN38-VIP1細胞，Cy5-濾光器。螢光圖象顯示細胞內螢光區域，在細胞的膜區域中具有血管圖形。
茚炭菁-VIP(1-28)結合物14，10μM，RIN38-VIP1細胞，Cy3-濾光器。螢光圖象顯示細胞內螢光區域，在細胞的膜區域中具有血管圖形。實施例41使用體內螢光成像在攜帶腫瘤的小鼠中研究腫瘤濃度在攜帶腫瘤的裸鼠中注射後體內研究根據本發明的化合物的成像性質。為此目的，靜脈注射0.1-2μmol/kg的測試物質，然後在0-48小時的時間段中觀察腫瘤區域中的濃度。用波長為640nm(茚二炭菁)或740nm(茚三炭菁)的近紅外光照射動物，由此激發物質的螢光，所述近紅外光是由NdYAG雷射產生的。用增強型CCD照相機在大於700nm但小於800nm的波長範圍內檢測螢光輻射，並數字儲存螢光圖象。
如下描述結果在攜帶腫瘤的裸鼠(右後肋中的HT29腫瘤)中，在給藥0.1μmol/kg的茚三炭精-VIP(14-28)結合物20之前以及之後1小時記錄整個身體的螢光圖象。給藥前的螢光強度是可以忽略的(低自體螢光)。給藥1小時後，在螢光發射中，相對於對側肋在腫瘤中產生強度增加約2倍的信號，而此等發射則均勻地分散在身體的其餘部分中。
在攜帶腫瘤的裸鼠(右後肋中的RIN38-SSTR2腫瘤)中，在給藥0.1μmol/kg的茚三炭精-pentetreotide結合物30之前以及之後1小時記錄整個身體的螢光圖象。給藥前的螢光強度是可以忽略的(低自體螢光)。給藥1小時後，在螢光發射中，相對於對側肋在腫瘤中產生強度增加約3倍的信號，而此等發射則均勻地分散在身體的其餘部分中。
在攜帶腫瘤的裸鼠(右後肋中的HT29腫瘤)中，在給藥0.1μmol/kg的(ε-氨基-茚三炭精)-Lys25-VIP(14-25)結合物24之前以及之後1小時記錄整個受體的螢光圖象。給藥前的螢光強度是可以忽略的(低自體螢光)。給藥1小時後，在螢光發射中，相對於對側肋在腫瘤中產生強度增加約1.5倍的信號。另外，在腎臟中檢測到增強的螢光信號。
在攜帶腫瘤的裸鼠(右後肋中的HT29腫瘤)中，在給藥0.2μmol/kg的茚二炭精-VIP(1-28)結合物15之前以及之後5分鐘記錄整個受體的螢光圖象。給藥前的螢光強度是可以忽略的(低自體螢光)。給藥1小時後，在螢光發射中，相對於對側肋在腫瘤中產生強度增加約1.4倍的信號。另外，在腎臟中檢測到增強的螢光信號。實施例42染料-肽結合物在牛血漿中的穩定性研究使用HPLC研究根據本發明的化合物隨時間在血漿中的化學穩定性。為此目的，用移液管量取1mM的肽PBS溶液在牛血漿(GraeberCompany，冷凍，用於肝素分析)中，同時得到30μM的濃度，然後在37℃溫育該溶液。
在各種時間(0.5、1、2、4、6、24小時)處，1ml血漿溶液用1ml甲醇混合，由此對樣品進行處理，然後離心沉澱的蛋白。
使用HPLC分析上清液，其中在750nm處測定相對於0℃下溫育1分鐘後的含量(對照)的含量。
HPLCBeckmann，二極體陣列檢測器TIDAS(J M Company)，350-1000nm；柱Chromasil5μ，250mm×4.5mm；流動溶劑A90％水(+0.5％TFA)/10％甲醇B10％水(+0.5％TFA)/90％甲醇梯度10％B-100％B，20分鐘內實施例總結於圖6中。實施例43使用斑點合成進行VIP的取代分析1、在纖維素上合成肽在纖維素上合成肽(斑點合成)首次由R.Frank和R.Doering於1988年公開，其細節描述在R.Frank1(1992)中。在此，使用AGSchneider-Mergener確立的方法2。
纖維素膜進行化學改性，以對隨後的肽合成形成合適的錨定功能。在此情況下，在氨基官能化的纖維素膜(CAPE膜)3中插入巰基4。溴丙基酯形式的第一個胺基酸可偶聯在該巰基上。接著，根據Fmoc策略可順序地構建肽的所有胺基酸。最後，在肽的N-端位置上連接茚二炭菁染料，並脫除所有的側鏈保護基。
為能夠研究用於受體結合的肽，肽必須從纖維素上脫掉。在此方面，所研製的方法是首先從纖維素上斷裂具有真正C-端的肽。1a、纖維素膜的改性·20×30nm纖維素膜(Whatman 50)與甲醇/1.2％全氯乙酸溫育2分鐘，然後凍幹。
·在二惡烷/1.2％全氯乙酸中與10％表溴醇溫育3小時後，與甲醇反應30分鐘，並用甲醇洗滌2次。
·用二甲基甲醯胺(DMF)洗滌3次，然後與50％的1，3-二氨基丙烷(v/v)在DMF中溫育過夜。接著，如下進行洗滌3×DMF，2×乙醇，2×蒸餾水，2×乙醇，15分鐘5M甲醇鈉，3×甲醇，4×蒸餾水，3×乙醇，1×乙醚。1b、斑點的限定·對於斑點限定，在15分鐘的反應時間處，在纖維素膜的某些點上用自動斑點機器人(auto-spot robot)222 XL(Abimed，Laugenfeld)雙滴定1.3μl的0.6M Fmoc-β-丙氨酸-Opfp溶液。
·膜用2％乙酸酐溶液醯化2分鐘，用20％乙酸酐/10％二異丙基乙基胺醯化30分鐘。
·在斷裂Fmoc保護基時，膜用3×DMF洗滌，與20％哌啶溶液溫育10分鐘共2次，然後用5×DMF和1×乙醇洗滌。用溴酚藍可使游離氨基為可見的。用乙醇重複洗滌後，乾燥膜。1c、Mmt-巰基丙酸與溴丙基酯的偶聯·0.6M的巰基丙酸在15分鐘的反應時間處雙滴定於限定的斑點中。然後用3×DMF和3×二氯甲烷(DCM)洗滌。
·與10％二氯乙酸/0.5％三氟乙酸溫育2分鐘，然後與10％二氯乙酸/0.5％三氟乙酸/5％三異丁基矽烷溫育5分鐘共3次，由此斷裂Mmt保護基。進行以下洗滌步驟1×DCM，2×乙醇，1×蒸餾水，用10％碳酸銫1-2分鐘，1×蒸餾水，2×乙醇，1×乙醚。
·在0.6M的濃度和15分鐘的反應時間，偶聯相應的Fmoc-溴丙基-胺基酸酯。如1b所述斷裂Fmoc保護基。1d、胺基酸的偶聯·在N-甲基吡咯烷酮中重複移入0.6M的胺基酸溶液，並隨後斷裂Fmoc保護基，由此構建肽。1e、茚二炭菁染料的偶聯·0.3M的茚二炭菁染料溶液用0.3M的TBTU和0.6M的二異丙基乙基胺活化，然後在15分鐘的反應時間處分4次移液至斑點上。1f、側鏈保護基的斷裂·隨後如下處理膜以斷裂側鏈保護基90％三氟乙酸/3％三異丙基矽烷/2％蒸餾水/1％苯酚共30分鐘，然後50％三氟乙酸/3％三異丙基矽烷/2％蒸餾水/1％苯酚共2.5小時。然後用4×二氯甲烷、3×DMF、1×乙醇洗滌。2、從纖維素膜上斷裂肽·衝壓掉斑點，用甲醇洗滌。為進行斷裂，與7mM的甲醇鈉甲醇溶液溫育30分鐘。添加37％乙酸，可校正pH。然後在快速真空中乾燥肽。
·乾燥後，將肽放入蒸餾水中，然後使用反相HPLC和MALDI-TOF進行分析。3、細胞分析及連續流動細胞計量·通過染料用光度計測定VIP衍生物的濃度。在細胞分析中，所用肽的最終濃度為150mM。在此情況下，1×105個RIN38(VAPC1)細胞與VIP衍生物在37℃下於結合緩衝液(50mM的tris/HCl，pH7.5，5nM的氯化鎂，1mM的氯化鈣，100mM的氯化鈉，4％BSA)中溫育1小時。
·細胞用2×PBS洗滌，移入FACS管中，然後在377g下離心5分鐘。細胞沉澱物重新懸浮在300μl的Cellfix中，然後在FACS-Calibur(Becton Dickinson)用FL4-透鏡系統測定。4、評估·將在連續流動的細胞計量中測定的天然人VIP肽的螢光強度設定為100％。28個天然VIP肽的標準偏差為11％。其他VIP衍生物對此調節為100％。
圖7顯示了RIN38 VPAC1細胞在有150nM染料標記的肽存在時於37℃下溫育1小時後的相對螢光強度。百分數的數據為相對於相應系列的天然肽。
斑點合成中的文獻1、Frank，R.(1992)Spot SynthesisAn Easy Technique for thePositionally Addressable，Parallel Chemical Synthesis on a MembraneSupport.Tetrahedron 48，9217-9232.
2、Kramer，A.；Schneider-Mergener，J.(1998)Synthesis and Screeningof Peptide Libraries on Continuous Cellulose Membrane Support.Methods inMolecular Biology 87，25-39.
3、Volkmer-Engert，R.；Hoffman，B.；Schneider-Mergener，J.(1997)Tetrahedron Lett.38，1029-1032.
4、Licha，K.；Bhargava，S.；Rheinlaender，C.；Becker，A.；Schneider-Mergener，J；Volkmer-Engert，R.(印刷中)Highly Parallel Nano-Synthesis ofCleavable Peptide-Dye Conjugates on Cellulose Membrane.TetrahedronLett.實施例44a)5-N-(2，3-二羥基丙基)氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚將0.9g(2.6mmol)的5-羧基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚(Anal.Biochem.217，197，1994)引入至30ml無水N，N-二甲基甲醯胺和3ml吡啶中，然後與1.35g(5.3mmol)的二琥珀醯亞胺基碳酸酯混合。3小時後，添加0.965g(10.6mmol)的2，3-二羥基丙基胺。在室溫下攪拌過夜，將反應物蒸發至幹，然後殘留物用乙醚進行吸附性沉澱。抽濾出固體，並在RP材料上進行色譜純制。
產量0.82g(理論值的76％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C55.32 H6.84 N6.79 S7.77 O23.27實測C55.39 H6.95 N6.57 S7.58b)4-[2-[4-氯-7-[5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉在氬氣中使360mg(1mmol)的N-[5-苯胺基-3-氯-2，4-(丙烷-1，3-二基)-2，4-戊二烯-1-亞基]氯化苯銨、825mg(2mmol)5-N-(2，3-二羥基丙基)氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚(實施例44a)和330mg(4mmol)無水乙酸鈉在30ml乙醇中的溶液回流2小時。蒸餾出乙醇，殘留物進行色譜純制。
產量0.58g(理論值的59％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C56.17 H6.15 Cl3.60 N6.79 S7.77 O23.27 Na2.34實測C55.99 H6.30 Cl3.41 N6.87 S7.64 Na2.17c)4-[2-[4-(4-(2-羧基乙基)苯基氧基)-7-[5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉，N-羥基琥珀醯亞胺酯在保護氣體中將225mg(1.4mmol)的3-(4-羥基苯基)丙酸溶解在10ml的無水N，N-二甲基甲醯胺中，然後與65mg(2.7mmol)的氫化鈉(60％，在油中)混合。30分鐘後，添加138mg(0.14mmol)的4-[2-[4-氯-7-[5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉(實施例44b)，並攪拌30分鐘。反應混合物用乾冰淬滅，並蒸發至幹。殘留物通過製備性HPLC純制。在製備活性酯時，將14mg(120μmol)的N-羥基琥珀醯亞胺和2mg(2.4μmol)的羧酸溶解在200μl的N，N-二甲基甲醯胺中。10分鐘後，添加24mg(120μmol)的二環己基碳化二亞胺，並在室溫下攪拌過夜。活性酯未經純制即用於下一步反應中。
類似於實施例14-16以及18-27a(固相肽合成)的合成方法，在固相中合成VIP類似物HSDAVFWDNY TRLRKQMAVKKYLNSILN。染料4-[2-[4-(4-(2-羧基乙基)苯基氧基)-7-[5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉根據實施例14-16以及18-27b偶聯在肽上(染料偶聯)，然後根據實施例14-16和18-27c(保護基斷裂以及脫掉染料-肽結合物)分離並純制該結合物。d)4-[2-[4-(4-(2-異硫氰酸基乙基)苯基氧基)-7-[5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉於0℃下將在2ml的N，N-二甲基甲醯胺中的116mg(0.6mmol)的2-(4-羥基苯基)乙基異硫氰酸酯添加在28mg(0.6mmol)氫化鈉(60％，在油中)於4ml無水N，N-二甲基甲醯胺中的懸浮液內。30分鐘後，將如此製得的溶液添加在138mg(0.14mmol)的4-[2-[4-氯-7-[5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉(實施例44b)中。在室溫下攪拌過夜，然後用乾冰淬滅。在旋轉蒸發器中蒸發至幹，殘留物用製備性HPLC純制。
產量85mg(理論值的54％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C58.65 H6.09 N6.22 S8.54 O18.47 Na2.04實測C58.53 H6.17 N6.11 S8.63 Na1.83類似於實施例14-16以及18-27a(固相肽合成)的合成方法，在固相中合成VIP類似物HSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILN。染料4-[2-[4-(4-(2-異硫氰酸基乙基)苯基氧基)-7-[5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉偶聯在肽的N-端位置上，然後根據實施例14-16和18-27c(保護基斷裂以及脫掉染料-肽結合物)分離並純制該結合物。
類似地，可由以下成分合成其他對稱的親水性染料具有羥基烷基取代基的親水性假吲哚衍生物(根據實施例44a製備)a)5-N-(2，3-二羥基丙基)-N-甲基氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚b)5-N-(羥基乙基)-氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚
c)5-N-(2，3-二羥基丙基)-N-(羥基乙基)氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚d)5-N，N-二(羥基乙基)-氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚e)5-N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚f)5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-N-甲基氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚實施例45a)5-N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚將0.6g(1.8mmol)的5-羧基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚(Anal.Biochem.217，197，1994)引入至20ml無水N，N-二甲基甲醯胺和2ml吡啶中，然後與0.95g(3.6mmol)的二琥珀醯亞胺基碳酸酯混合。2小時後，添加1.4ml(10mmol)的三乙胺和322mg(1.8mmol)的葡糖胺。在室溫下攪拌過夜，將反應物蒸發至幹，然後殘留物用乙醚進行吸附性沉澱。抽濾出固體，並在RP材料上進行色譜純制。
產量0.67g(理論值的74％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C52.58 H6.82 N5.57 S6.38 O28.65實測C52.47 H6.91 N5.39 S6.44b)4-[2-[4-氯-7-[5-N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-[N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)氨基羰基](3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉在氬氣中使180mg(0.5mmol)的N-[5-苯胺基-3-氯-2，4-(丙烷-1，3-二基)-2，4-戊二烯-1-亞基]氯化苯銨、503mg(1mmol)5-N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚(實施例45a)和165mg(2mmol)無水乙酸鈉在30ml乙醇中的溶液回流2小時。蒸餾出乙醇，殘留物進行色譜純制。
產量0.31g(理論值的53％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C54.05 H6.33 Cl3.01 N4.76 S5.44 O24.45 Na1.95實測C53.89 H6.20 Cl2.87 N4.83 S5.29 Na1.72c)4-[2-[4-(4-異硫氰酸基硫代苯基氧基)-7-[5-N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-[N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)氨基羰基](3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉於氬氣下將54mg(0.4mmol)的4-氨基苯硫酚溶解在10ml的無水N，N-二甲基甲醯胺中，然後在室溫下與165mg(0.14mmol)的4-[2-[4-氯-7-[5-N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-[N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)氨基羰基](3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉(實施例45b)中。10分鐘後，反應混合物用乾冰淬滅，並添加210mg(1mmol)的硫代羰基二咪唑。45分鐘後，用乙醚沉澱染料，並通過離心分離固體。純制時，在RP材料上進行色譜分離。
產量78mg(理論值的43％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C55.07 H6.01 N5.35 S9.80 O22.01 Na1.76實測C54.89 H6.20 N5.24 S9.58 Na1.54類似於實施例14-16以及18-27a(固相肽合成)的合成方法，在固相中合成VIP類似物HSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILN。染料4-[2-[4-(4-異硫氰酸基硫代苯基氧基)-7-[5-N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-[N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)氨基羰基](3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉偶聯在肽的N-端位置上，然後根據實施例14-16和18-27c(保護基斷裂以及脫掉染料-肽結合物)分離並純制該結合物。
類似地，可由以下成分合成其他對稱的親水性染料具有羥基烷基取代基的親水性假吲哚衍生物(根據實施例44a製備)a)5-N-(2，3-二羥基丙基)-N-甲基氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚b)5-N-(羥基乙基)-氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚c)5-N-(2，3-二羥基丙基)-N-(羥基乙基)氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚d)5-N，N-二(羥基乙基)-氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚e)5-N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚f)5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-N-甲基氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚實施例467-[5-N-(2，3-二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-羧基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉在120℃下使2.35g(5.71mmol)的5-N-(2，3-二羥基丙基)氨基羰基-1-(4-磺酸基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚(實施例44a)和1.57g(5.5mmol)的戊烯二醛二苯胺鹽酸鹽在25ml乙酸酐中的溶液攪拌30分鐘。接著添加2.4g(7.1mmol)的5-羧基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚、1.71g的乙酸鈉、22ml的乙酸酐和8.6ml的乙酸。反應混合物在120℃下攪拌1小時，然後冷卻至室溫，並用乙醚沉澱產物。粗產物在RP材料上進行色譜分離。
產量1.9g(理論值的40％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C54.47 H6.03 N5.03 S7.67 O21.05 Na2.75實測C54.26 H6.12 N5.00 S7.49Na2.48類似於實施例14-16以及18-27a(固相肽合成)的合成方法，在固相中合成VIP類似物HSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILN。染料7-[5-N-(2，3-二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-羧基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉根據實施例14-16以及18-27b(染料偶聯)偶聯在肽的N-端位置上，然後根據實施例14-16和18-27c(保護基斷裂以及脫掉染料-肽結合物)分離並純制該結合物。
類似地，可由以下成分合成其他非對稱的親水性染料具有羥基烷基取代基的親水性假吲哚衍生物(根據實施例44a製備)a)5-N-(2，3-二羥基丙基)-N-甲基氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚b)5-N-(羥基乙基)-氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚c)5-N-(2，3-二羥基丙基)-N-(羥基乙基)氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚d)5-N，N-二(羥基乙基)-氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚e)5-N-(2，3，4，5，6-五羥基己基)-氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚f)5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-N-甲基氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚具有羧基的假吲哚衍生物a)5-羧基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚b)5-羧甲基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚
c)5-羧基-1-(3-磺基丙基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚d)5-羧甲基-1-(3-磺基丙基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚e)5-羧基-1-(2-磺基乙基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚f)5-羧甲基-1-(2-磺基乙基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚用於與上述假吲哚反應形成單、二或三羰菁的雙苯胺衍生物a)戊烯二醛二苯胺鹽酸鹽b)丙二醛-二苯基亞胺鹽酸鹽c)N，N-二苯基甲脒d)N-[5-苯胺基-2，4-(丙烷-1，3-二基)-2，4-戊二烯-1-亞基]氯化苯銨e)N-[5-苯胺基-2，4-(乙烷-1，2-二基)-2，4-戊二烯-1-亞基]氯化苯銨f)N-[5-苯胺基-3-氯-2，4-(丙烷-1，3-二基)-2，4-戊二烯-1-亞基]氯化苯銨g)N-[5-苯胺基-3-氯-2，4-(乙烷-1，2-二基)-2，4-戊二烯-1-亞基]氯化苯銨實施例477-[5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(2-羧基丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉，N-羥基琥珀醯亞胺酯a)4-[2-[4-氯-7-[5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-[2-(甲氧基羰基)丙烷-1，3-二基]-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-[N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基](3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉於0℃下將5.5ml(10mmol)磷醯氯和6ml的N，N-二甲基甲醯胺添加在0.8g(5mmol)4-(甲氧基羰基)-環己酮於5ml二氯甲烷中的溶液內。然後回流1小時。蒸餾出二氯甲烷，在不超過5℃的溫度下添加4ml苯胺於10ml甲醇中的溶液。將反應混合物傾倒在冰上，添加5ml的濃鹽酸，然後在0℃下使中間產物結晶5小時。抽濾出晶體，而且未進一步純制即用於下一步的反應中。為此目的，將晶體溶解在無水乙醇中，然後添加4.4g(10mmol)的5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-N-甲基氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚(見實施例45)和0.8g的無水乙酸鈉。回流1小時，過濾固體，並蒸發濾液至幹。殘留物進行色譜純制。
產量3.25g(理論值的58％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C54.90 H6.14 Cl3.18 N5.02 S5.75 O22.94 Na2.06實測C54.76 H6.03 Cl2.99 N4.91 S5.60 Na1.83b)7-[5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(2-羧基丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉於氮氣、室溫下使10mg(0.4mmol)氫化鈉和80mg(1.3mmol)乙硫醇在10ml無水N，N二甲基甲醯胺中的混合物攪拌30分鐘。然後與112mg(0.1mmol)的4-[2-[4-氯-7-[5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-[2-(甲氧基羰基)丙烷-1，3-二基]-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉(實施例47a)在3ml的N，N-二甲基甲醯胺中混合。反應混合物加熱至100℃共2小時，然後冷卻至室溫，並用二氧化碳淬滅。在旋轉蒸發器中蒸發至幹，殘留物用熱乙醇萃取。蒸發萃取液，粗產物進行色譜純制。
產量75mg(理論值的67％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C56.27 H6.33 N5.25 S6.01 O23.99 Na2.15實測C56.13 H6.46 N5.12 S5.87 Na1.88c)7-[5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(2-羧基丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基(3H)-indolio]-丁烷磺酸-N-羥基琥珀醯亞胺酯，鈉鹽為製備活性酯，將14mg(0.12mmol)的N-羥基琥珀醯亞胺和64mg(0.06mmol)的羧酸溶解在2ml的N，N-二甲基甲醯胺中。15分鐘後，添加25mg(0.12mmol)的二環己基碳化二亞胺，並在室溫下攪拌過夜。使用製備性HPLC純制活性酯。
產量60mg(理論值的86％)分析(相對於無溶劑的物質)
計算C55.71 H6.06 N6.02 S5.51 O24.73 Na1.97實測C55.59 H6.21 N5.93 S5.37 Na1.75類似於實施例14-16以及18-27a(固相肽合成)的合成方法，在固相中合成VIP類似物HSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILN。染料7-[5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(2-羧基丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉根據實施例14-16以及18-27b(染料偶聯)偶聯在肽的N-端位置上，然後根據實施例14-16和18-27c(保護基斷裂以及脫掉染料-肽結合物)分離並純制該結合物。實施例487-[5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(2-羧基丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉a)5-N-(11-氨基十一烷基)氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚將340mg(1mmol)的5-羧基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚(Anal.Biochem.217，197，1994)引入至5ml無水N，N-二甲基甲醯胺和1ml吡啶中，然後與0.5g(2mmol)的碳酸二琥珀醯亞胺基酯混合。3小時後，添加0.805g(4mmol)的11-氨基十一烷酸。在室溫下攪拌過夜，蒸發反應物至幹，殘留物用乙醚進行吸附沉澱。抽濾固體，並在RP材料上進行色譜純制。
產量0.37g(理論值的71％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C62.04 H8.10 N5.36 S6.13 O18.37實測C61.88 H8.23 N5.17 S6.02b)7-[5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(2-羧基丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉0.35g(0.67mmol)5-N-(11-氨基十一烷基)氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚(實施例48a)和0.18g(0.645mmol)戊烯二醛二縮苯胺在3ml乙酸酐中的溶液在110℃下攪拌20分鐘。添加344mg(0.83mmol)的5-N-(2，3-二羥基丙基)-氨基羰基-1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基(3H)假吲哚(44a)、0.2g的乙酸鈉、3ml的乙酸酐和1ml的乙酸。反應混合物在110℃下攪拌2小時，冷卻至室溫，然後用乙醚沉澱產物。粗產物在RP材料上進行色譜純制。
產量0.41g(理論值的60％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C60.10 H7.02 N5.50 S6.29 O18.84 Na2.26實測C59.96 H7.14 N5.33 S6.15 Na2.11類似於實施例14-16以及18-27a(固相肽合成)的合成方法，在固相中合成VIP類似物HSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILN。染料7-[5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(2-羧基丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-3，3-二甲基-5-N-(1，3，4-三羥基丁-2-基)-氨基羰基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉根據實施例14-16以及18-27b(染料偶聯)偶聯在肽的N-端位置上，然後根據實施例14-16和18-27c(保護基斷裂以及脫掉染料-肽結合物)分離並純制該結合物。
根據實施例44a和b可製備根據本發明的其他染料，其中可使用以下胺基酸替代實施例48a中的11-氨基十一烷酸，實施例46中提到的假吲哚衍生物具有以下羥基烷基取代基a)-f)i.甘氨酸ii.丙氨酸iii.β-丙氨酸iv.4-氨基丁酸v.6-氨基己酸vi.H2N-(CH2CH2O)3CH2COOH(TH 53，20，6977)vii.H2N-(CH2CH2O)4CH2COOH(JOC 63，5，1728，1998)viii.H2N-CH2CH2COO(CH2CH2O)4-CO-CH2COOH(Lett.Pept.Sci.6，135，1999)ix.HCl*H2N-PEG-COOH(MW 4300g/mol；Schearwater PolymersInc.，USA)實施例494-[2-[4-(4-(N-(4-氮雜-6-溴-5-氧代己基)氨基羰基-乙基)苯基氧基)-7-[5-N-(二羥基丙基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉a)[3-[N-(叔丁氧基羰基)氨基]丙基]-N＇-(溴乙醯基)-醯胺將2.5g(14.4mmol)的[3-[N-(叔丁氧基羰基)氨基]丙基]胺溶解在15ml的二惡烷中，然後在0℃下添加4.4ml的三乙胺，並與3.2g(16mmol)的溴乙醯基溴混合。在室溫下攪拌過夜，然後再添加320mg的溴乙醯基溴。在室溫下2小時後，抽濾出沉澱物，蒸發濃縮溶液，殘留物在乙酸乙酯中處理。用水洗滌，然後在硫酸鈉上乾燥有機相。
產量3.2g(理論值的75％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C40.69 H6.49 Br27.07 N9.49 O16.26實測C40.50 H6.37 Br26.89 N9.58b)[3-[N-(溴乙醯基)氨基]丙基]胺鹽酸鹽在室溫下於乙酸乙酯中使3.1g(10.5mmol)的[3-[N-(叔丁氧基羰基)氨基]丙基]-N′-(溴乙醯基)-醯胺(實施例49a)與50mmol的1M鹽酸攪拌5小時。抽濾出產物，然後用乙酸乙酯重新洗滌固體。
產量2.3g(理論值的95％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C25.94 H5.22 Cl15.31 Br34.51 N12.10 O18.84實測C25.76 H5.41 Cl15.55 Br34.34 N11.97c)4-[2-[4-(4-(N-(4-氮雜-6-溴-5-氧代己基)氨基羰基-乙基)苯基氧基)-7-[5-N-(二羥基丙基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉將121mg(0.1mmol)的4-[2-[4-(4-(2-羧基乙基)苯基氧基)-7-[5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉，N-羥基琥珀醯亞胺酯(實施例44c)溶解在0.5ml的N，N-二甲基甲醯胺中，然後與0.06ml的三乙胺和70mg(0.3mmol)的[3-[N-(溴乙醯基)氨基]丙基]胺鹽酸鹽(實施例49b)混合。
在60℃下攪拌4小時，然後冷卻至室溫，並用乙醚沉澱產物。抽濾固體，並用乙醚洗滌。
產量0.11mg(理論值的80％)分析(相對於無溶劑的物質)計算C56.17 H6.18 Br6.13 N6.44 S4.92 Na1.76 O18.40實測C55.96 H6.26 Br6.01 N6.27 S4.81 Na1.53類似於實施例14-16以及18-27a(固相肽合成)的合成方法，在固相中合成VIP類似物HSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILN。染料4-[2-[4-(4-(N-(4-氮雜-6-溴-5-氧代己基)氨基羰基-乙基)苯基氧基)-7-[5-N-(二羥基丙基)-氨基羰基-3，3-二甲基-1-(4-磺酸基丁基)二氫亞吲哚-2-基]-3，5-(丙烷-1，3-二基)-1，3，5-庚三烯-1-基]-5-N-(二羥基丙基)氨基羰基-3，3-二甲基(3H)-indolio]-丁烷磺酸鈉根據實施例17偶聯在肽的N-端位置上，然後根據實施例14-16和18-27c(保護基斷裂以及脫掉染料-肽結合物)分離並純制該結合物。
序列表(1)一般信息(i)申請人(A)名稱柏林自由大學診斷研究所有限公司(B)街道Spandauer Damm 130(C)城市柏林(E)國家德國(F)郵政編碼(ZIP)D-14050(G)電話(030)-30390412(H)傳真(030)-30390499(ii)發明名稱作為光學診斷用造影劑的短鏈肽-染料結合物(iii)序列數量8(iv)計算機可讀形式(A)介質類型軟盤(B)計算機IBM PC compatible(C)作業系統PC-DOS/MS-DOS(D)軟體Patentln Release#1.0，Version#1.25(EPO)(v) 目前申請數據申請號(vi)在先申請數據(A)申請號(B)申請日(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特徵
(A)長度28個胺基酸(B)類型肽(C)鏈性單鏈(D)拓撲學(ii)分子類型肽(iii)假說否(vi)原始來源合成(xi)序列描述SEQ ID NO1His-Trp-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(3)SEQ ID NO2的信息(i)序列特徵(A)長度28個胺基酸(B)類型肽(C)鏈性單鏈(D)拓撲學(ii)分子類型肽(iii)假說否(vi)原始來源合成(xi)序列描述SEQ ID NO2His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Phe-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(4)SEQ ID NO3的信息(i)序列特徵
(A)長度28個胺基酸(B)類型肽(C)鏈性單鏈(D)拓撲學(ii)分子類型肽(iii)假說否(vi)原始來源合成(xi)序列描述SEQ ID NO3His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Lys-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(5)SEQ ID NO4的信息(i)序列特徵(A)長度28個胺基酸(B)類型肽(C)鏈性單鏈(D)拓撲學(ii)分子類型肽(iii)假說否(vi)原始來源合成(xi)序列描述SEQ ID NO4His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Gln-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-GlnMet-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(6)SEQ ID NO5的信息(i)序列特徵
(A)長度28個胺基酸(B)類型肽(C)鏈性單鏈(D)拓撲學(ii)分子類型肽(iii)假說否(vi)原始來源合成(xi)序列描述SEQ ID NO5His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Arg-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(7)SEQ ID NO6的信息(i)序列特徵(A)長度28個胺基酸(B)類型肽(C)鏈性單鏈(D)拓撲學(ii)分子類型肽(iii)假說否(vi)原始來源合成(xi)序列描述SEQ ID NO6His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Trp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(8)SEQ ID NO7的信息(i)序列特徵
(A)長度28個胺基酸(B)類型肽(C)鏈性單鏈(D)拓撲學(ii)分子類型肽(iii)假說否(vi)原始來源合成(xi)序列描述SEQ ID NO7His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Arg-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(9)SEQ ID NO8的信息(i)序列特徵(A)長度28個胺基酸(B)類型肽(C)鏈性單鏈(D)拓撲學(ii)分子類型肽(iii)假說否(vi)原始來源合成(xi)序列描述SEQ ID NO8His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Arg-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn
權利要求
1.通式(I)的肽-多亞甲基染料結合物及其生理相容鹽A1-(X)m-A2(I)其中X代表具有D或L構型的α-、β-或γ-胺基酸；m代表5-30的數，其中所產生的胺基酸序列(X)m可為直鏈或者通過兩個半胱氨酸或高半胱氨酸之間的二硫鍵或者在N-和C-端之間的醯胺化而環化，並代表血管活性腸肽(VIP)、促生長素抑制素或神經降壓肽的胺基酸序列，或者代表VIP、促生長素抑制素或神經降壓肽的片段、部分序列、衍生物或類似物；A1代表氫原子、乙醯基或具有最多10個碳原子的烷基，該烷基可任選地被1-3個羧基和/或1-6個羥基取代，或者代表具有2-30個-CH2CH2O-單元的聚(氧乙烯)基團，或者代表選自於多亞甲基染料的染料分子，該染料在380-1200nm的範圍內具有至少一個最大吸收；A2代表羥基、氨基或者選自於多亞甲基染料的染料分子，該染料在380-1200nm的範圍內具有至少一個最大吸收；其條件是A1或A2基團中至少一個代表選自於多亞甲基染料的染料分子，而且該染料在380-1200nm的範圍內具有至少一個最大吸收，其中如果A1和/或A2代表選自於多亞甲基染料的染料分子，而且該染料在380-1200nm的範圍內具有至少一個最大吸收，則A1連接在N-端氨基上，而A2連接在胺基酸序列(X)m中任意位置處的胺基酸賴氨酸的氨基或者胺基酸絲氨酸的羥基上。
2.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，染料分子A1和/或A2代表菁、squarilium、croconium、部花菁或氧雜菁染料。
3.如權利要求1或2所述的化合物，其特徵在於，染料分子A1和/或A2代表以下通式II的菁染料或squarilium染料 其中D代表相應於以下通式III-VI的片段，其中用星號標記的位置表示與B的連接位 B代表相應於以下通式VII-XII的片段 R1和R2代表E1，R3代表氟、氯、溴或碘原子或者硝基或者基團-COOE1、-CONE1E2、-NHCOE1、-NHCONHE1、-NE1E2、-OE1、-OSO3E1、-SO3E1、-SO2NHE1、-E1，其中E1和E2相互獨立地代表氫原子、C1-C4磺基烷基、飽和或不飽和、直鏈或支鏈C1-C50烷基鏈，其中該鏈或其一部分可任選地形成一個或多個芳香或飽和環C5-C6單元或者二環C10單元，而且C1-C50烷基鏈中可插入0-15個氧原子和/或0-3個羰基和/或被0-5個羥基取代，R4代表氫原子、氟、氯、溴、碘原子或者支鏈或直鏈C1-C10烷基鏈，b代表2或3的數，X和Y相互獨立地代表O、S、Se、-CH＝CH-或者C(CH3)2，L代表以下式的基團 其中n代表1-10的數。
4.如權利要求1-3之一所述的化合物，其特徵在於，染料分子A1和/或A2代表茚炭菁、茚二炭菁和茚三炭菁染料。
5.如權利要求4所述的化合物，其特徵在於，染料分子A1和/或A2代表以下通式XIII或XIV的茚炭菁染料、茚二炭菁染料或茚三炭菁染料 其中p代表1、2或3，n代表1、2、3、4或10，R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基、3-磺基丙基、2-磺基乙基、3-甲基-3-磺基丙基、甲基、乙基、或丙基，而R3代表氫、氯、溴或碘原子或者硝基或者基團-COOE1、-CONE1E2、-NHCOE1、-NHCONHE1、-NE1E2、-OE1、-OSO3E1、-SO3E1、-SO2NHE1，其中E1和E2相互獨立地代表氫原子、或者代表甲基、乙基或者C3-C6烷基，這些烷基可插入0-2個氧原子和/或0-1個羰基，和/或被0-5個羥基取代，或者E1和E2代表具有2-30個-CH2CH2O-單元的聚(氧乙烯)二醇基團。
6.如權利要求4所述的化合物，其特徵在於，染料分子A1和/或A2代表以下通式XIII或XIV的茚炭菁染料、茚二炭菁染料或茚三炭菁染料 其中p代表1、2或3，n代表1、2或4，R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基或3-磺基丙基，而R3代表氫、或者基團-COOE1或-CONHE1，其中E1相互獨立地代表氫原子、或者代表甲基、乙基或者C3-C6烷基，這些烷基可插入0-2個氧原子和/或0-1個羰基，和/或被0-5個羥基取代。
7.如權利要求4所述的化合物，其特徵在於，染料分子A1和/或A2代表以下通式XV或XVI的茚三炭菁染料 其中n代表2或3，R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基、3-磺基丙基或2-磺基乙基，R3代表基團-CONH-肽、-CONH-(CH2)m-CONH-肽、-CONH-(CH2)n-NH-CS-NH-肽或者-CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-肽，其中m＝1-10，而n＝2或3，或者R3代表以下基團 R4和R5相互獨立地代表氫原子、甲基或羥基化烷基，R6代表以下基團之一-(CH2)m-CONH-肽其中m＝0-2，-(CH2)m-NH-CS-NH-肽其中m＝0-2，而X代表氧原子或硫原子。
8.如權利要求4所述的化合物，其特徵在於，染料分子A1和/或A2代表以下通式XVII的茚三炭菁染料 其中R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基、3-磺基丙基或2-磺基乙基，R3代表基團-CONH-肽、-NH-CS-NH-肽或者-CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-肽，其中n＝2或3，或者R3代表以下基團 R4和R5相互獨立地代表氫原子、甲基或羥基化烷基。
9.如權利要求7或8所述的化合物，其特徵在於，所述羥基化烷基為2-羥基乙基、3-羥基丙基、2，3-二羥基丙基、1，3-二羥基-2-丙基、2，3，4-三羥基丁基、1，3，4-三羥基-2-丁基、2，3，4，5，6-五羥基己基。
10.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，(X)m代表天然的人血管活性腸肽的序列，其相應於以下序列HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN或者由5-30個胺基酸組成的血管活性腸肽的片段、部分序列、衍生物或者類似物。
11.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，(X)m代表促生長素抑制素的胺基酸序列，其相應於以下序列 或者由5-20個胺基酸組成的促生長素抑制素的片段、部分序列、衍生物或者類似物。
12.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，(X)m代表神經降壓肽的胺基酸序列，其相應於以下序列焦穀氨酸-LYENKPRRPYIL或者由5-20個胺基酸組成的神經降壓肽的片段、部分序列、衍生物或者類似物。
13.如權利要求10所述的化合物，其特徵在於，血管活性腸肽的片段、部分序列、衍生物或者類似物是選自於以下胺基酸序列RLRKQMAVKKYLNSILN RLRKQMAVKKYLNSIL RLRKQMAVKKYLNSILRKQMAVKKYLNSILNLRKQMAVKKYLNSIL LRKQMAVKKYLNSIRKQMAVKKYLNSILN RKQMAVKKYLNSILRKQMAVKKYLNSIKQMAVKKYLNSILN KQMAVKKYLNSIL KQMAVKKYLNSIQMAVKKYLNSILN QMAVKKYLNSIL QMAVKKYLNSIMAVKKYLNSILNMAVKKYLNSIL MAVKKYLNSIAVKKYLNSILN AVKKYLNSILAVKKYLNSIRLRKQMAVKKYLNS RLRKQMAVKKYLN RLRKQMAVKKYLLRKQMAVKKYLNS LRKQMAVKKYLN LRKQMAVKKYLRKQMAVKKYLNSRKQMAVKKYLN RKQMAVKKYLKQMAVKKYLNS KQMAVKKYLNKQMAVKKYLQMAVKKYLNS QMAVKKYLN QMAVKKYLMAVKKYLNS MAVKKYLN MAVKKYLAVKKYLNSAVKKYLN AVKKYL
14.如權利要求10所述的化合物，其特徵在於，VIP肽的類似物是選自於以下胺基酸序列FSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNISDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNLSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHFDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHHDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHIDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHLDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHMDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHQDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHTDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHVDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHWDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHYDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSAAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSEAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSFAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSHAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSIAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSLAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSMAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSWAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDFVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDGVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDMVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDQVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDSVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDWVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDYVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAFFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAIFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDALFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAMFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDATFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAWFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAYFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVKTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFVDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFWDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNW TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRRRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRWRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRFQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRLQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRMQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRRQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKAMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKFMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKIMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKKMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKLMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKMMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKRMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKVMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKWMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKYMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQFAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQIAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQKAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQLAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQQAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQRAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQWAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMFVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMIVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMKVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMLVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMMVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMQVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMRVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMVVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMWVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMYVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAAK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAIK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMALK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVR KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK RYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK WYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KFLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KWLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLASILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLFSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLISILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLMSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLSSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLVSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLWSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNNILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYINRILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNWILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNYILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSLLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSSLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSWLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSYLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIFNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIINHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIWNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILW
15.如權利要求10所述的化合物，其特徵在於，VIP的類似物是選自於根據以下式的化合物HSDAVFTX1X2YX3RLRKQMAVKKYLNSILN，其中X1、X2和X3可代表任何胺基酸。
16.如前述任一權利要求所述的化合物，其特徵在於，2-m個胺基酸可相互獨立地用它們相應的D-胺基酸或者其他L-或D-胺基酸交換，其中m與上述定義相同。
17.如前述任一權利要求所述的化合物，其特徵在於，至少一個胺基酸(X)m相互獨立地用其他非天然的胺基酸或者胺基酸衍生物交換。
18.如權利要求17所述的化合物，其特徵在於，所述非天然的胺基酸或者胺基酸衍生物選自於以下組中萘丙氨酸、環己基丙氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、α-氨基己二酸、α-氨基丁酸、β-丙氨酸、β-環己基丙氨酸、鳥氨酸、肌氨酸或δ-羥基賴氨酸。
19.如前述任一權利要求所述的化合物，其特徵在於，VIP的類似物選自於以下式的化合物X1SDAVX2TDNX3TRLRKQMAVKKX4LNSILN，其中X1、X2、X3和X4可代表非天然的胺基酸或胺基酸衍生物。
20.如權利要求19所述的化合物，其特徵在於，所述非天然的胺基酸或胺基酸衍生物選自於以下組中萘丙氨酸、環己基丙氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、α-氨基己二酸、α-氨基丁酸、β-丙氨酸、β-環己基丙氨酸、鳥氨酸、肌氨酸或δ-羥基賴氨酸。
21.如前述任一權利要求所述的化合物，其特徵在於，所有胺基酸(X)m用它們相應的D-胺基酸交換。
22.如前述任一權利要求所述的化合物，其特徵在於，血管活性腸肽的片段、部分序列、衍生物或類似物選自於逆合成胺基酸序列。
23.如前述任一權利要求所述的化合物，其特徵在於，血管活性腸肽序列的片段、部分序列、衍生物或類似物選自於其中2-m個胺基酸用相應的D-胺基酸交換的逆合成胺基酸序列，其中m與上述定義相同。
24.如權利要求10所述的化合物，其特徵在於，血管活性腸肽的片段、部分序列、衍生物或類似物選自於以下胺基酸序列rlrkqmavkkylnsiln rlrkqmavkkylnsil rlrkqmavkkylnsilrkqmavkkylnsilnlrkqmavkkylnsil lrkqmavkkylnsirkqmavkkylnsiln rkqmavkkylnsil rkqmavkkylnsikqmavkkylnsiln kqmavkkylnsilkqmavkkylnsiqmavkkylnsiln qmavkkylnsil qmavkkylnsimavkkylnsilnmavkkylnsil mavkkylnsiavkkylnsiln avkkylnsil avkkylnsiRLRKQMAvKKyLNSILN RLRKQMAvKKyLNSIL RLRKQMAvKKyLNSILRKQMAvKKyLNSILN LRKQMAvKKyLNSIL LRKQMAvKKyLNSIRKQMAvKKyLNSILNRKQMAvKKyLNSILRKQMAvKKyLNSIKQMAvKKyLNSILN KQMAvKKyLNSIL KQMAvKKyLNSIQMAvKKyLNSILN QMAvKKyLNSIL QMAvKKyLNSIMAvKKyLNSILN MAvKKyLNSIL MAvKKyLNSIAvKKyLNSILNAvKKyLNSILAvKKyLNSI
25.如權利要求11所述的化合物，其特徵在於，促生長素抑制素的片段、部分序列、衍生物或類似物選自於以下胺基酸序列
26.如權利要求12所述的化合物，其特徵在於，神經降壓肽的片段、部分序列、衍生物或類似物選自於以下胺基酸序列pGlu-LYQNKPRRPFIL pGlu-LYENKPRRPYIpGlu-LYENKPRRPyIL pGlu-LYQNKPRRPfIL pGlu-LYENKPRRPYpGlu-LYQNKPRRPYIL pGlu-LYENKPRRPWIL pGlu-LYENKPRRPpGlu-LYQNKPRRPyIL pGlu-LYENKPRRPwIL pGlu-LYENKPRRpGlu-LYENKPRRPFIL pGlu-LYQNKPRRPWIL pGlu-LYENKPRpGlu-LYENKPRRPfIL pGlu-LYQNKPRRPwIL pGlu-LYENKPNKPRRPYIL NKPRRPyIL NKPRRPfIL NKPRRPwILKPRRPYIL KPRRPyIL KPRRPfIL KPRRPwILPRRPYIL PRRPyIL PRRPfIL PRRPwILRRPYILRRPyILRRPfILRRPwIL
27.如前述權利要求之一所述的化合物在以下方面的應用使用光學檢測法體內診斷腫瘤、其他患病組織區域或者腺癌，或者使用內窺鏡在胃腸道、食管、支氣管、膀胱或子宮頸中體內螢光診斷腫瘤、腫瘤細胞和/或炎症組織，或者使用光學乳房X射線攝影術(乳房的透照或光學體層攝影)體內螢光診斷和/或吸附診斷乳腺癌。
28.使用如權利要求1所述的化合物進行內窺鏡體內螢光診斷的方法，其中通過靜脈或者通過霧化在胃腸道、食管、膀胱中向患者給藥所述化合物，或者通過吸入將所述化合物送入支氣管中，在霧化時，通過衝洗除去未結合的、過量部分的化合物，而內窺鏡研究是如下進行的用選自於380-1200nm光譜範圍的激發光進行局部激發，然後位置依賴性地檢測染料所發射的特殊螢光輻射。
29.用於體內診斷患病組織區域的光學診斷劑，其包含至少一種如權利要求1所述的化合物以及常規輔劑和/或載體和稀釋劑。
30.通式XVIII的菁染料 其中p代表1、2或3，n代表1、2、3、4或10，R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基、3-磺基丙基、2-磺基乙基、3-甲基-3-磺基丙基、甲基、乙基、或丙基，而R3代表氫或者基團-COOE1、-CONE1E2、-NHCOE1、-NHCONHE1、-NE1E2、-OE1、-OSO3E1、-SO3E1、-SO2NHE1，其中E1和E2相互獨立地代表氫原子、或者代表甲基、乙基或者C3-C6烷基，這些烷基可插入0-2個氧原子和/或0-1個羰基，和/或被0-5個羥基取代。
31.通式XIX或XX的菁染料 其中n代表2或3，R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基、3-磺基丙基或2-磺基乙基，R3代表-COOH基團或者以下基團中的一種-CONH-(CH2)n-COOH，其中n＝2或3，-CONH-(CH2)n-NCS，其中n＝2或3，-CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-X1，其中n＝2或3，而X1＝Cl、Br、I， R4和R5相互獨立地代表氫原子、甲基或羥基化烷基，如2-羥基乙基、3-羥基丙基、2，3-二羥基丙基、1，3-二羥基-2-丙基、2，3，4-三羥基丁基、1，3，4-三羥基-2-丁基、2，3，4，5，6-五羥基己基，R6代表以下基團中的一種-(CH2)m-COOH，其中m＝0-2，-(CH2)m-NCS，其中m＝0-2，-(CH2)m-CONH-肽，其中m＝0-2，-(CH2)m-NH-CS-NH-肽，其中m＝0-2，而X代表氧原子或硫原子。
32.通式XXI的菁染料 其中R1和R2相互獨立地代表4-磺基丁基或3-磺基丙基，R3代表-COOH基團或者以下基團中的一種-CONH-(CH2)n-COOH，其中n＝2或3，-CONH-(CH2)n-NCS，其中n＝2或3，-CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-X1，其中n＝2或3，而X1＝Cl、 R4和R5相互獨立地代表氫原子、甲基或羥基化烷基，如2-羥基乙基、3-羥基丙基、2，3-二羥基丙基、1，3-二羥基-2-丙基、2，3，4-三羥基丁基、1，3，4-三羥基-2-丁基、2，3，4，5，6-五羥基己基。
33.VIP的類似物，其特徵在於具有以下序列His-Trp-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO1)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Phe-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO2)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Lys-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO3)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Gln-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO4)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Arg-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO5)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Trp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO6)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Arg-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO7)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Arg-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID NO8)。
全文摘要
本發明涉及用於腫瘤診斷的化合物,該化合物由染料與短鏈肽的結合物組成,而所述肽是由血管活性腸肽、促生長素抑制素或神經降壓肽衍生的。本發明還涉及這些化合物作為光學診斷劑的應用以及包含這些化合物的診斷劑。
文檔編號C07K7/08GK1351505SQ00806087
公開日2002年5月29日 申請日期2000年3月28日 優先權日1999年4月9日
發明者凱·利夏, 安德烈亞斯·貝克爾, 沃爾夫哈德·澤姆勒, 貝爾特拉·維登曼, 卡斯滕·黑森紐斯, 魯道夫·沃爾克默－恩格特, 延斯·施奈德－默根納, 薩拉·巴爾加瓦 申請人:柏林自由大學診斷研究所有限公司