L-賴氨酸的生產方法

2023-09-15 17:00:45

專利名稱：：L-賴氨酸的生產方法
技術領域：
：本發明涉及使用大腸桿菌的L-賴氨酸生產方法。L-賴氨酸是一種必需胺基酸，並被用作藥物或者動物用飼料添加物等營養混合物的組分。
背景技術：
：L-賴氨酸等L-胺基酸是使用具有生產這些L-胺基酸的能力的棒狀桿菌型細菌或埃希氏菌屬細菌等胺基酸生產菌，採用發酵方法來工業生產的。作為這些胺基酸生產菌，為了提高生產力，人們使用了從自然界分離出來的菌株或該菌株的人工突變株或者通過基因重組而增強了L-胺基酸生物合成酶活性的重組體等。L-賴氨酸的生產方法包括例如專利文獻14中所述的方法。作為提高L-賴氨酸等胺基酸的生產能力的方法，除了有增加目的胺基酸的固有生物合成途徑的酶的表達量的方法以外，還開發了通過修飾呼吸鏈途徑來改善能量效率的方法(專利文獻5)、通過擴增煙醯胺核苷酸轉氫酶基因來提高煙醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸生產能力的方法(專利文獻6)。此外，作為對各種胺基酸的生物合成的共有途徑進行修飾的方法，已知有補給途徑經過修飾的L-胺基酸生產菌，如增加了丙酮酸羧化酶活性的棒狀桿菌型細菌L-賴氨酸生產菌(專利文獻7)、缺損了丙酮酸激酶的埃希氏菌屬L-賴氨酸生產菌(專利文獻8)、缺損了蘋果酸醌氧化還原酶(malatequinineoxidoreductase)的棒狀桿菌型細菌L-賴氨酸生產菌(專利文獻9)等。作為L-賴氨酸的前體，有內消旋a，e-二氨基庚二酸(以下也稱"meso-DAP")。meso-DAP不但是L-賴氨酸的前體，而且同時作為細胞壁的構成成分，也是細菌生長所必需的物質。關於埃希氏菌屬(Escherichia)細菌的meso-DAP合成，已知meso-DAP是從其前體2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸(以下也稱"THDP")通過屬於meso-DAP合成途徑的四種酶的功能來合成的，這四種酶是2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶(以下也稱"D即D"，非專利文獻1)、琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶(以下也稱"D即C"，非專利文獻2)、琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶(以下也稱"D即E"，非專利文獻3)、以及二氨基庚二酸差向異構酶(以下也稱"D即F"，非專利文獻4)。已經清楚在棒狀桿菌型細菌中另外存在一條以THDP為前體的meso-DAP合成途徑，其使用meso-DAP脫氫酶(以下也稱"二氨基庚二酸脫氫酶"或"DDH")通過一步反應從THDP合成meso-DAP，而且還已知DDH表達對於meso-DAP的生產是有用的(專利文獻10)。此外，已經公開了如下內容在考察埃希氏菌屬細菌L-賴氨酸生物合成的限速步驟的過程中，將編碼棒狀桿菌型細菌DDH的基因導入埃希氏菌屬的L-賴氨酸生產菌中，作為增強屬於meso-DAP合成途徑的酶的活性的替代手段，來進行L-賴氨酸生產。然而，人們並未預想到，當在埃希氏菌屬細菌中表達DDH時，降低屬於meso-DAP合成途徑的酶的活性對L-賴氨酸生產是有效的。專利文獻1特開平10-165180號公報專利文獻2特開平11-192088號公報4專利文獻3特開2000-253879號公報專利文獻4特開2001-057896號公報專利文獻5特開2002-17363號公報專利文獻6特許第2817400號公報專利文獻7特表2002-508921號公報專利文獻8國際公開第W003/008600號小冊子專利文獻9美國專利申請公開第0044943號專利文獻10特開昭61-289887號公報專利文獻11國際公開第W02006/093322號公報專利文獻12美國專利申請公開第2006/0160191號公報專利文獻13美國專利6040160非專利文獻1Richaud，C.etal.，J.Biol.Chem.，259(23):14824-14828,1984非專利文獻2Heimberg，H.etal.，Gene.90(1):69-78，1990非專利文獻3Bouvier，J.etal.，J.Bacteriol.，174(16):5265-71，1992非專利文獻4Wiseman，J.S.etal.，J.Biol.Chem.，259(14):8907-14，198
發明內容發明所要解決的問題本發明的目的是提供L-賴氨酸生產能力提高的大腸桿菌以及使用該大腸桿菌來生產L-賴氨酸的方法。解決問題的方法本發明人等對上述問題進行了深入研究，結果發現通過對大腸桿菌進行修飾而降低屬於meso-DAP合成途徑的酶的活性，並且導入編碼二氨基庚二酸脫氫酶的基因，能夠提高L-賴氨酸生產能力，從而基於上述認識完成了本發明。SP，本發明如下所述。(1)—種具有L-賴氨酸生產能力的大腸桿菌，該大腸桿菌經過修飾而降低了內消旋a，e-二氨基庚二酸合成途徑的l種或2種以上的酶的活性，並且導入了編碼二氨基庚二酸脫氫酶的基因。(2)前述的大腸桿菌，其中，所述內消旋a，e-二氨基庚二酸合成途徑的酶選自2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶、琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶、琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶以及二氨基庚二酸差向異構酶。(3)前述的大腸桿菌，其中，所述2，3，4，5-四氫吡啶_2，6_二羧酸N_琥珀醯轉移酶、琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶、琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶以及二氨基庚二酸差向異構酶分別由d即D基因、d即C基因、d即E基因以及d即F基因編碼。(4)前述的大腸桿菌，其中，內消旋a，e-二氨基庚二酸合成途徑的酶的活性是通過降低所述基因的表達量或破壞所述基因而降低的。(5)前述的大腸桿菌，其經過修飾而至少降低了2，3，4，5-四氫吡啶_2，6_二羧酸N-琥珀醯轉移酶活性。(6)前述的大腸桿菌，其中，所述編碼二氨基庚二酸脫氫酶的基因是棒狀桿菌型細菌的ddh基因。(7)前述的大腸桿菌，其中，所述2，3，4，5_四氫吡啶_2，6_二羧酸N_琥珀醯轉移酶是下述(A)或(B)所述的蛋白質(A)具有SEQIDNO:2所示的胺基酸序列的蛋白質；(B)具有在SEQIDNO:2所示的胺基酸序列中包含1個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的胺基酸序列，且具有2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶活性的蛋白質。(8).前述的大腸桿菌，其中，所述琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶是下述(C)或(D)所述的蛋白質(C)具有SEQIDNO:4所示的胺基酸序列的蛋白質；(D)具有在SEQIDNO:4所示的胺基酸序列中包含1個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的胺基酸序列，且具有琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶活性的蛋白質。(9).前述的大腸桿菌，其中，所述琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶是下述(E)或(F)所述的蛋白質(E)具有SEQIDNO:6所示的胺基酸序列的蛋白質；(F)具有在SEQIDNO:6所示的胺基酸序列中包含1個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的胺基酸序列，且具有琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶活性的蛋白質。(10).前述的大腸桿菌，其中，所述二氨基庚二酸差向異構酶是下述(G)或(H)所述的蛋白質(G)具有SEQIDNO:8所示的胺基酸序列的蛋白質；(H)具有在SEQIDNO:8所示的胺基酸序列中包含1個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的胺基酸序列，且具有二氨基庚二酸差向異構酶活性的蛋白質。(11).前述的大腸桿菌，其中，所述d即D基因是下述(a)或(b)所述的DNA:(a)包含SEQIDNO:1的鹼基序列的DNA;或(b)與SEQIDNO:1的鹼基序列或能夠由該鹼基序列製備的探針在嚴格條件下雜交，且編碼具有2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶活性的蛋白質的DNA。(12).前述的大腸桿菌，其中所述d即C基因是下述(c)或(d)所述的DNA:(c)包含SEQIDNO:3的鹼基序列的DNA;或(d)與SEQIDNO:3的鹼基序列或能夠由該鹼基序列製備的探針在嚴格條件下雜交、且編碼具有琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶活性的蛋白質的DNA。(13).前述的大腸桿菌，其中所述d即E基因是下述(e)或(f)所述的DNA:(e)包含SEQIDNO:5的鹼基序列的DNA;或(f)與SEQIDNO:5的鹼基序列或能夠由該鹼基序列製備的探針在嚴格條件下雜交，且編碼具有琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶活性的蛋白質的DNA。(14).前述的大腸桿菌，其中所述d即F基因是下述(g)或(h)所述的DNA:(g)包含SEQIDNO:7的鹼基序列的DNA;或(h)與SEQIDNO:7的鹼基序列或能夠由該鹼基序列製備的探針在嚴格條件下雜交，且編碼具有二氨基庚二酸差向異構酶活性的蛋白質的DNA。(15).前述的大腸桿菌，其中，所述二氨基庚二酸脫氫酶是下述(I)或(J)所述的蛋白質(I)具有SEQIDNO:10、12、14、16或18所示的胺基酸序列的蛋白質;(J)具有在SEQIDN0:10、12、14、16或18所示的胺基酸序列中包含l個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的胺基酸序列，且具有二氨基庚二酸脫氫酶活性的蛋白質。(16).前述的大腸桿菌，其中所述ddh基因是下述(i)或(j)所述的DNA:(i)包含SEQIDNO:9、11、13、15或17的鹼基序列的DNA;或(j)與SEQIDNO:9、11、13、15或17的鹼基序列或能夠由該鹼基序列製備的探針在嚴格條件下雜交，且編碼具有二氨基庚二酸脫氫酶活性的蛋白質的DNA。(17).前述的大腸桿菌，該大腸桿菌還具有解除了由L-賴氨酸導致的反饋抑制的二氫吡啶二羧酸合酶，以及解除了由L-賴氨酸導致的反饋抑制的天冬氨酸激酶，並且該大腸桿菌的二氫吡啶二羧酸還原酶活性得到了增強。(18).—種生產L-賴氨酸的方法，其特徵在於，在培養基中培養權利要求117中任一項所述的大腸桿菌，並且從該培養基中收集L-賴氨酸。發明的具體實施例方式以下對本發明進行具體說明。〈1〉本發明的大腸桿菌本發明的大腸桿菌(以下也稱"本發明的細菌")是具有L-賴氨酸生產能力、經過修飾而降低了屬於meso-DAP合成途徑的酶的活性、而且導入了編碼二氨基庚二酸脫氫酶的基因的大腸桿菌。此外，本發明的優選的細菌，是除了具有上述性質外，還具有解除了由L-賴氨酸導致的反饋抑制的二氫吡啶二羧酸合酶以及解除了由L-賴氨酸導致的反饋抑制的天冬氨酸激酶，且二氫吡啶二羧酸還原酶活性得到了增強的細菌。本發明的細菌可以這樣獲得以具有L-賴氨酸生產能力的大腸桿菌作為親本株，對其進行修飾而使得其屬於meso-DAP合成途徑的酶的活性降低，進而向其中導入編碼二氨基庚二酸脫氫酶的基因。對於降低屬於meso-DAP合成途徑的酶的活性的修飾，和編碼二氨基庚二酸脫氫酶的基因的導入這兩者的順序而言，沒有特別限制。此外，L-賴氨酸生產的賦予可以在所述修飾和基因導入之間進行，還可以在最後進行。就為了獲得本發明的細菌而使用的大腸桿菌親本株而言，沒有特殊限制，具體地說可以利用Neidhardt等的著作(Neidhardt，F.C.etal.，EscherichiacoliandSalmonellaTyphimurium，AmericanSocietyforMicrobiology,WashingtonD.C.，1029table1)中列舉的微生物。具體而言，可以列舉出原型野生株K12株來源的大腸桿菌W3110(ATCC27325)、大腸桿菌MG1655(ATCC47076)等。這些菌株可以從例如美國典型培養物保藏中心(地址12301ParklawnDrive，Rockville，Maryland20852，UnitedStatesofAmerica)通過分售獲得。即，各菌株被給予了對應的登錄號，可以利用該登錄號通過分售獲得。對應於各菌株的登錄號見美國典型培養物保藏中心的目錄。〈1-1>L_賴氨酸生產能力的賦予以及具有L-賴氨酸生產能力的大腸桿菌7作為大腸桿菌中的L-賴氨酸生產菌的例子，可以列舉出對L-賴氨酸類似物具有抗性的突變株。L-賴氨酸類似物可抑制大腸桿菌的生長，但在培養基中有L-賴氨酸共同存在時，這種抑制會被完全或部分地解除。作為L-賴氨酸類似物的例子，可以列舉出氧代賴氨酸(oxalysine)、賴氨酸氧肟酸(lysinehydroxamate)、S_(2_氨基乙基)_L_半胱氨酸(AEC)、Y-甲基賴氨酸、a-氯己內醯胺等，但不限於此。對這些賴氨酸類似物具有抗性的突變株可以通過對大腸桿菌實施常規人工突變處理來獲得。作為可用於L-賴氨酸生產的細菌菌株的具體例子，可以列舉出大腸桿菌(E.coli)AJl1442(FERMBP-1543,NRRLB-12185;參照美國專利4，346，170)以及大腸桿菌VL611。在這些微生物中，L_賴氨酸對天冬氨酸激酶造成的反饋抑制已被解除。WC196株可以用作大腸桿菌中的L-賴氨酸生產菌。該菌株是通過對大腸桿菌K-12來源的W3110株賦予AEC抗性而選育獲得的。該菌株被命名為大腸桿菌AJ13069，於1994年12月6日保藏在工業技術院生命工學工業技術研究所(現為獨立行政法人產業技術綜合研究所專利生物保藏中心，〒305-8566日本國茨城縣筑波市東l丁目l番地l中央第6)，保藏號FERMP-14690，並於1995年9月29日轉為基於布達佩斯條約的國際保藏，保藏號FERMBP-5252(美國專利5，827，698)。作為用於衍生L-賴氨酸生產菌的親本株的例子，還可以列舉出1種或1種以上的編碼L-賴氨酸生物合成系統酶的基因的表達增加的菌株。作為這樣的基因的例子，可以列舉出編碼二氫吡啶二羧酸合酶(d即A)、天冬氨酸激酶(lysC)、二氫吡啶二羧酸還原酶(d即B)、二氨基庚二酸脫羧酶(lysA)、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(ppc)、天冬氨酸半醛脫氫酶(asd)以及天冬氨酸酶(aspA)(EP1253195A)的基因，但不限於此。此外，親本株中與能量效率相關的基因(cyo)(EP1170376A)、編碼煙醯胺核苷酸轉氫酶的基因(pntAB)(美國專利5，830，716)、ybjE基因(W02005/073390)、編碼穀氨酸脫氫酶的基因(gdhA)(Gene23:199-209(1983))或這些基因的組合表達水平增加也是可以的。括號內是所述基因的簡稱。大腸桿菌的lysC基因的鹼基序列如SEQIDNO:21所示，編碼的天冬氨酸激酶的胺基酸序列如SEQIDNO:22所示。大腸桿菌的dapA基因的鹼基序列如SEQIDNO:23所示，編碼的二氫吡啶二羧酸合酶的胺基酸序列如SEQIDN0:24所示。大腸桿菌的d即B基因的鹼基序列如SEQIDN0:25所示，編碼的二氫吡啶二羧酸還原酶的胺基酸序列如SEQIDNO:26所示。已知大腸桿菌來源的野生型二氫吡啶二羧酸合酶受到L-賴氨酸的反饋抑制，而大腸桿菌來源的野生型天冬氨酸激酶受到L-賴氨酸的阻遏和反饋抑制。因此，在使用d即A基因和lysC基因時，這些基因優選是編碼不受由L-賴氨酸導致的反饋抑制的突變型酶的突變型基因。作為編碼不受由L-賴氨酸導致的反饋抑制的突變型二氫吡啶二羧酸合酶的DNA，可以列舉編碼具有SEQIDN0:24的第118位的組氨酸殘基被酪氨酸殘基取代而得的序列的蛋白質的DNA。此外，作為編碼不受由L-賴氨酸導致的反饋抑制的突變型天冬氨酸激酶的DNA，可以列舉對具有SEQIDNO:22的第352位的蘇氨酸殘基被異亮氨酸殘基取代、第323位的甘氨酸殘基被天冬醯胺殘基取代、第318位的甲硫氨酸被異亮氨酸取代而成的序列的AKIII編碼的DNA(關於這些突變體，參照美國專利5661012以及6040160)。突變型DNA可以通過基於PCR等的定點突變法來獲得。已知的RSF1010來源的廣宿主域質粒RSFD80、pCABl、pCABD2(美國專利6040160)是包含編碼具有如上文所述的突變的大腸桿菌突變型二氫吡啶二羧酸合酶的突變型d即A以及編碼突變型天冬氨酸激酶的突變型lysC的質粒。經RSFD80轉化的大腸桿菌JM109株(美國專利6040160)被命名為AJ12396，該菌株於1993年10月28日被保藏於通產省工業技術院生命工學工業技術研究所(現為獨立行政法人產業技術綜合研究所專利生物保藏中心，〒305-8566日本國茨城縣筑波市東l丁目l番地l中央第6)，保藏號FERMP-13936,並於1994年11月1日轉為基於布達佩斯條約的國際保藏，保藏號FERMBP_4859。RSFD80可以從AJ12396株採用公知方法獲得。pCABl是在所述RSFD80中進一步插入大腸桿菌的d即B基因而製備的。此外，pCABD2是通過在該pCABl中進一步插入乳發酵短桿菌(穀氨酸棒桿菌)2256株(ATCC13869)的ddh基因而製備的(美國專利6040160)。作為L-賴氨酸生產菌或用於衍生L-賴氨酸生產菌的親本株的例子，可以列舉出催化從L-賴氨酸的生物合成途徑中改道而生成L-賴氨酸以外的化合物的反應的酶的活性降低或缺損的菌株。作為催化從L-賴氨酸的生物合成途徑中改道而生成L-賴氨酸以外的化合物的反應的酶的例子，可以列舉出高絲氨酸脫氫酶、賴氨酸脫羧酶(美國專利5，827，698)、以及蘋果酸酶(W02005/010175)。這裡，為了降低或缺損賴氨酸脫羧酶活性，優選降低編碼賴氨酸脫羧酶的cadA基因和ldcC基因這兩者的表達(國際公布第W02006/038695號小冊子)。為了提高甘油同化性，本發明中使用的細菌的glpR基因(EP1715056)的表達可以被弱化，或者其glpA、glpB、glpC、glpD、glpE、glpF、glpG、glpK、glpQ、glpT、glpX、tpiA、gldA、dhaK、dhaL、dhaM、dhaR、fsa以及talC基因等甘油代謝基因(EP1715055A)的表達可以被強化。〈1-2>本發明的大腸桿菌的構建接下來，對降低屬於meso-DAP合成途徑的酶的活性的修飾以及編碼二氨基庚二酸脫氫酶的基因的導入進行說明。大腸桿菌所具有的meso-DAP合成途徑是指從(S)_2，3，4，5_四氫吡啶_2，6_二羧酸((S)-2，3，4，5-四氫吡啶二羧酸)生成meso-DAP(內消旋-2，6-二氨基庚二酸、內消旋-a，e-二氨基庚二酸、或內消旋-二氨基庚二酸)的途徑，其由以下的4步反應催化。這些反應是可逆反應。在大腸桿菌中，meso-DAP合成途徑也稱為DapDCEF途徑。1)D即D(2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶)(EC2.3.1.117)琥珀醯-CoA+(S)-2，3，4，5-四氫吡啶_2，6_二羧酸+H20—CoA+N_琥珀醯-L-2-氨基_6_酮庚二酸(N-succinyl-L-2-咖ino-6-oxoh印tanedioate)D即D由d即D基因編碼。大腸桿菌的d即D基因的序列如SEQIDNO:1所示，D即D的胺基酸序列如SEQIDNO:2所示。D即D的酶活性可以參考S.A，Simms等的方法(J.Biol.Chem.，1984，Mar10;259(5):2734-2741)來測定。2)D即C(琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶)(也稱SDAP氨基轉移酶)(EC2.6.1.17)N-琥珀醯-LL-2，6_二氨基庚二酸+2-酮戊二酸一N_琥珀醯_L_2-氨基_6_酮庚二酸+L_穀氨酸D即C由dapC基因編碼。大腸桿菌的dapC基因的序列如SEQIDNO:3所示，氨基9酸序列如SEQIDNO:4所示。D即C的酶活性可以採用Thilo，M.等的方法(J.Bacteriol.，2000，Jul;182(13):3626-3631)來測定。3)D即E(琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶)(也稱SDAP脫琥珀醯化酶)(EC3.5.1.18)N-琥珀醯-LL-2,6-二氨基庚二酸+H20—琥珀酸+LL_2，6_二氨基庚二酸D即E由dapE基因編碼。大腸桿菌的dapE基因的序列如SEQIDNO:5所示，胺基酸序列如SEQIDNO:6所示。D即E的酶活性可以採用Lin，Y.K.等的方法(J.Biol.Chem.，1988，Feb5;263(4):1622-1627)來測定。4)D即F(二氨基庚二酸差向異構酶(EC5.1.1.7)LL-2，6-二氨基庚二酸一內消旋_2，6-二氨基庚二酸(meso-2，6-di咖inopimalate)D即F由dapF基因編碼。大腸桿菌的dapF基因的序列如SEQIDNO:7所示，胺基酸序列如SEQIDNO:8所示。D即F的酶活性可以參考Wiseman,J.S.等的方法(J.Biol.Chem.，1984，Jul25;259(14):8907-8914)來測定。此外，在本發明中，DDH(二氨基庚二酸脫氫酶)(EC1.4.1.16)是可逆地從內消旋-2，6-二氨基庚二酸生成(S)-2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸的酶，其催化以下的反應。內消旋-2，6-二氨基庚二酸+1120+脆0+—(S)_2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸+NH3+NADPH+H+DDH的酶活性可以參考Misono，H.等的方法(J.Biol.Chem.，255,10599-10605，1980)來測定。編碼DDH的ddh基因在埃希氏菌屬細菌中是不存在的，可以使用穀氨酸棒桿菌(SEQIDN0:9)、乳發酵短桿菌(SEQIDNO:11)、Corynebacteriumefficiens(SEQIDNO:13)等棒狀桿菌型細菌的ddh基因。穀氨酸棒桿菌ATCC13032的ddh基因(NCgl2528)登錄於GenbankNP_601818.2GI:23308957，Corynebacteriumefficiens的ddh基因(CE2498)登錄於NP_739108.1GI:25029054。此夕卜，除了棒狀桿菌型細菌以外，還可以禾U用Herminiimonasarsenicoxydans的ddh基因(SEQIDNO:15)、多形擬桿菌(Bacteroidesthetaiotaomicron)的ddh基因(SEQIDNO:17)。Herminiimonasarsenicoxydans的ddh基因登錄於GenbankYP_001100730.1GI:134095655，多形擬桿菌的ddh基因登錄於NP—810892.1GI:29347389。上述各基因以及所述的L-賴氨酸生物合成系統酶基因不僅限於具有上述基因信息的基因或者具有公知序列的基因，也可以是這些基因的同源物、人工修飾體等具有保守突變的基因，只要無損於所編碼的蛋白質的功能即可。也就是說，可以是編碼具有在公知的蛋白質的胺基酸序列中包含1個或者數個位置上的1個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加等而成的序列的蛋白質的基因。這裡，"l個或者數個"因胺基酸殘基在蛋白質立體結構中的位置或胺基酸殘基的種類而異，具體地說優選為120個、更優選110個、更優選15個。保守突變的代表是保守取代。所謂保守取代，當取代位點是芳香族胺基酸時為Phe、Trp和Tyr之間，當取代位點是疏水胺基酸時為Leu、Ile和Val之間，是極性胺基酸時為Gln和Asn之間，是鹼性胺基酸時為Lys、Arg和His之間，當是酸性胺基酸時為Asp和Glu之間，是具有羥基的胺基酸時為Ser和Thr之間的相互取代的突變。視為保守取代的取代具體包括例如用Ser或Thr取代Ala;用Gln、His或Lys取代Arg;用Glu、Gln、Lys、His或Asp取代Asn;用Asn、Glu或Gin取代Asp;用Ser或Ala取代Cys;用Asn、Glu、Lys、His、Asp或Arg取代Gin;用Gly、Asn、Gln、Lys或Asp取代Glu;用Pro取代Gly;用Asn、Lys、Gln、Arg或Tyr取代His;用Leu、Met、Val或Phe取代Ile;用Ile、Met、Val或Phe取代Leu;用Asn、Glu、Gln、His或Arg取代Lys;用Ile、Leu、Val或Phe取代Met;用Trp、Tyr、Met、Ile或Leu取代Phe;用Thr或Ala取代Ser;用Ser或Ala取代Thr;用Phe或Tyr取代Trp;用His、Phe或Trp取代Tyr;和用Met、Ile或Leu取代Val。此外，這樣的胺基酸的取代、缺失、插入、添加或倒位等還包括因基於提供所述基因的微生物的個體差異、種間差異等情形而天然發生的突變(mutant或variant)而產生的那些取代、缺失、插入、添加或倒位。這樣的基因可以通過對公知基因的鹼基序列進行修飾，例如採用定點突變法使得所編碼的蛋白質的特定部位的胺基酸殘基包含取代、缺失、插入或添加來獲得。而且，具有如上所述的保守突變的基因可以是編碼這樣的蛋白質的基因，所述蛋白質相對於編碼的胺基酸序列整體具有80%以上、優選90%以上、更優選95%以上、特別優選97%以上的同源性，且具有與野生型蛋白質等同的功能。而且，在本說明書中，"同源性"(homology)"有時指"同一性"(identity)。此外，可以將基因的序列中的各密碼子分別替換成易於在基因所導入的宿主中使用的密碼子。具有保守突變的基因可以通過突變劑處理等用於常規突變處理的方法來獲得。此外，基因還可以是這樣的DNA:其在嚴格條件下與能夠從公知的基因序列製備的探針、例如上文所述基因序列或其互補序列雜交，且編碼具有與公知的基因產物等同的功能的蛋白質。這裡，"嚴格條件"是指形成所謂特異性雜交體而不形成非特異性雜交體的條件。舉一實例，有這樣的條件在該條件下，具有高同源性的DNA之間，例如具有80X以上，優選90%以上，更優選95%以上，特別優選具有97%以上同源性的DNA之間相互雜交，而同源性較之為低的DNA之間則不發生雜交；或者是這樣的條件在與常規Southern雜交的洗滌條件即60°C，1XSSC、0.1%SDS，優選0.1XSSC、0.1%SDS，更優選68°C，0.1XSSC、0.1%SDS相當的鹽濃度和溫度下，洗滌一次，更優選兩次至三次的條件。作為探針，也可以使用基因的互補序列的一部分。這樣的探針可以使用基於公知基因序列製作的寡核苷酸作為引物，以包含這些鹼基序列的DNA片段為模板進行PCR來製作。例如，當使用300bp左右長度的DNA片段作為探針時，雜交的洗滌條件可以是例如5(TC、2XSSC、0.1%SDS。"經過修飾而降低了meso-DAP合成途徑的酶活性"是指經過了修飾而使得屬於meso-DAP合成途徑(以下也稱"DapDCEF途徑")的酶、具體地是DapD、DapC、DapE以及DapF這4種酶中的至少一種的活性完全消失，或者與大腸桿菌的非修飾株例如野生株相比活性降低。被降低活性的酶可以是D即D、D即C、D即E以及D即F中的任何酶，並且可以是1種或2種以上。優選D即DCEF途徑的上遊側的酶的活性，特別優選的是進行修飾而至少降低DapD的活性。所謂降低了D即DCEF途徑的酶活性，優選是指，例如，D即DCEF途徑的各種酶活性與非修飾株例如野生株相比，每個菌體降低至50%以下、優選30%以下，更優選10%以下。此處，作為對照的大腸桿菌包括例如作為野生株的原型野生株K12株來源的大腸桿菌W3110(ATCC27325)、大腸桿菌MG1655(ATCC47076)等。關於使得D即DCEF途徑的酶活性降低的修飾，具體地說可以這樣來實現缺損染色體上的編碼DapDCEF途徑的酶的基因，具體地是dapD、dapC、dapE或dapF基因的編碼區域的一部分或全部，或者對啟動子、ShineDargarno(SD)序列等表達調節序列進行修飾等。此外，通過對表達調節序列以外的非翻譯區域進行修飾也能夠降低基因的表達量。而且，還可以缺失整個基因，包括染色體上的基因上下遊序列。此外，還可以通過採用基因重組在染色體上的編碼酶的區域中導入胺基酸取代(錯義突變)、或者導入終止密碼子(無義突變)、或者導入一二個鹼基的添加或缺失的移框突變來實現(JournalofBiologicalChemistry272:8611-8617(1997)ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,USA955511-5515(1998)，JournalofBiologicalChemistry266,20833-20839(1991))。在本發明中，優選利用同源重組，通過缺損染色體上的基因的表達調節序列例如啟動子區域、或編碼區域、或非編碼區域的一部分或全部，或者通過在這些區域中插入其它序列，來降低細胞內的酶活性。然而，還可以通過照射X射線或紫外線，或通過使用N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍等突變劑進行的常規突變處理來進行修飾，只要該修飾使得DapDCEF途徑的酶活性降低即可。表達調節序列的修飾優選為1個鹼基以上、更優選2個鹼基以上、特別優選3個鹼基以上。此外，當缺失編碼區域時，發生缺失的區域可以是N末端區域、內部區域、C末端區域中的任何區域，也可以是編碼區域整體，只要產生的酶蛋白質的功能降低或缺失即可。通常，缺失的區域越長，越能夠切實地使基因失活。此外，優選的是，要缺失的區域的上遊和下遊的閱讀框不一致。當在編碼區域中插入其它序列的場合，基因的任何區域都可以插入，且插入的序列越長，越能夠切實地使編碼酶的基因失活。優選的是插入部位的上下遊序列的閱讀框不一致。作為所述其它序列，沒有特殊限制，只要其能夠降低或缺損酶蛋白質的功能即可，包括例如攜帶抗生素抗性基因或對L-賴氨酸生產有用的基因的轉座子等。為了對染色體上的基因進行諸如所述的修飾，例如可以這樣來實現製作經過修飾而缺失了基因的部分序列、不產生正常發揮功能的酶蛋白質的缺失型基因，用包含該基因的DNA轉化細菌，使缺失型基因與染色體上的基因之間發生同源重組，從而將染色體上的基因替換成缺失型基因。缺失型基因所編碼的酶蛋白質即使產生也具有與野生型酶蛋白質不同的立體結構，其功能降低或消失。基於利用如上所述的同源重組的基因取代的基因破壞已經確立，包括下述方法稱為"Red驅動整合(Red-drivenintegration)"的方法(Datsenko，K.A，andWa騰r，B.LProc.Natl.Acad.Sci.USA.97:6640-6645(2000))、Red驅動整合法與A噬菌體來源的切出系統(Cho，E.H.，Gumport，R.I.，Gardner,J.F.J.Bacteriol.184:5200-5203(2002))相結合的方法(參照W02005/010175號)等使用線性DNA的方法，或者使用含有溫度敏感複製起點的質粒、可接合轉移的質粒的方法，利用在宿主內不具有複製起點的自殺載體的方法，等等(美國專利6303383、或特開平05-007491號)。基因轉錄量的降低可以通過將從該基因轉錄的mRNA的量與野生株或非修飾株進行比較來確認。評價mRNA量的方法包括例如Northern雜交、RT-PCR等(Molecularcloning(ColdspringHarborLaboratoryPress,ColdspringHarbor(USA)，2001))。基因所編碼的蛋白質的量降低可以通過使用抗體進行western印跡來確認(Molecularcloning(ColdspringHarborLaboratoryPress,ColdspringHarbor(USA)，2001))。為了在大腸桿菌中導入編碼DDH的基因(ddh)，例如，可以利用質粒、噬菌體等載體用ddh基因轉化大腸桿菌。這樣的載體包括例如pUC19、pUC18、pBR322、pHSG299、pHSG298、pHSG399、pHSG398、RSF1010、p麗119、p麗118、p麗219、p麗218等。DDH基因可以使用該基因固有的啟動子，也可以使用在大腸桿菌中高效發揮功能的啟動子，只要DDH基因能在大腸桿菌中表達即可。這樣的啟動子包括例如lac啟動子、trp啟動子、trc啟動子、tac啟動子、A噬菌體的PR啟動子、PL啟動子、tet啟動子等。此夕卜，ddh基因也可以通過利用轉導、轉座子(Berg，D.E.andBerg，C.M.，Bio/Technol.，1，417(1983))、Mu噬菌體(特開平2-109985)或同源性重組(ExperimentsinMolecularGenetics,ColdSpringHarborLab.(1972))的方法整合到大腸桿菌的染色體上。而且，還可以使整合到染色體上的ddh基因發生轉移，來提高拷貝數。ddh基因導入的確認可以通過例如Southern雜交來進行。此外，導入ddh基因的大腸桿菌具有DDH活性，可以通過例如採用味園春雄，發酵與工業(発酵i工業)45，964(1987)中記載的方法測定DDH活性來確認。此外，也可以使用抗體通過的western印跡檢測DDH。〈2〉L-賴氨酸的生產方法本發明的L-賴氨酸生產方法用培養基培養本發明的細菌，在該培養基中或菌體內生成並蓄積L-賴氨酸，並從該培養基或菌體收集L-賴氨酸。作為所使用的培養基，可以使用在利用微生物的L-賴氨酸發酵生產中傳統上使用的培養基。即，可以使用含有碳源、氮源、無機離子以及視需要而定的其它有機成分的常規培養基。這裡，作為碳源，可以使用葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、果糖、澱粉水解物等糖類，甘油、山梨醇等醇類，富馬酸、檸檬酸、琥珀酸等有機酸類。作為氮源，可以使用硫酸銨、氯化銨、磷酸銨等無機銨鹽，大豆水解物等有機氮、氨氣、氨氣水等。作為有機微量營養源，理想的是摻入適量的維生素B1、L-高絲氨酸等要求的物質或酵母提取物等。除此之外，還可以視需要少量添加磷酸鉀、硫酸鎂、鐵離子、錳離子等。而且，本發明中使用的培養基可以是天然培養基，也可以是合成培養基，只要是包含碳源、氮源、無機離子以及視需要而定的其它有機微量成分的培養基即可。特別地，在本發明中優選使用甘油作為碳源。甘油可以是作為試劑的甘油，但理想的是使用工業生產的含雜質的甘油。例如，理想的是使用通過用於生物柴油燃料生產的酯化反應來工業生產的甘油(MuY，etal，BiotechnolLett.，28,1755-91759(2006)，HaasMJ，etal;BioresourTechnol.97，4，671-8678(2006))。本發明的培養基中所含的甘油可以作為單獨的碳源，也可以使用除甘油之外還添加了其它碳源的混合培養基。作為其它碳源，優選葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、廢糖蜜、澱粉水解物以及生物質水解而得到的糖液等糖類，乙醇等醇類，富馬酸、檸檬酸、琥珀酸等有機酸類。當使用混合培養基時，優選甘油相對於培養基中的總碳源的比率為50%以上、60%以上、理想的是70%以上、更理想的是80%以上、特別理想的是90%以上。培養可以在好氧條件下實施17天，培養溫度可以是24°C37"，培養中的pH可以是59。而且，pH調整可以使用無機或者有機的酸性或者鹼性物質，還可以使用氨氣等。從發酵液中回收L-賴氨酸可以通過組合使用常規的離子交換樹脂法、沉澱法及其它公知方法來實施。而且，當L-賴氨酸在菌體內蓄積時，可以例如利用超聲波等破碎菌體，再離心分離除去菌體而得到上清，然後用離子交換樹脂法等回收L-賴氨酸。而且，還可以通過採用下述方法進行發酵，並回收賴氨酸的方法來進行生產，所述方法中控制培養中的pH為6.59.0、培養結束時培養基的pH為7.29.0，並且控制發酵中發酵罐內壓力為正，或者，向培養基中供給二氧化碳或含有二氧化碳的混合氣體，使得存在培養基中的碳酸氫根離子和/或碳酸根離子為至少2g/L以上的培養期，並且以所述碳酸氫根離子和/或碳酸根離子作為以鹼性胺基酸為主的陽離子的反荷離子(參照特開2002-065287號，美國專利申請公開2002025564)。實施例以下，通過實施例更具體地說明本發明。〔實施例1〕d即D被破壞的L-賴氨酸生產菌的構建〈l-l〉d即D基因破壞株的構建首先，使用大腸桿菌野生型株MG1655株進行d即D破壞株的構建。以p麗118(AattL-Knf-AattR)(參照國際公布第W02006093322號公報)質粒為模板，以SEQIDNO:19以及20所示的、在引物3'末端具有對應於A噬菌體附著位點的序列attL和attR的兩端的序列、在引物5'末端具有對應於作為目的基因的d即D基因的一部分的序列的合成寡核苷酸為引物進行PCR，採用美國專利申請公開第2006/0160191號公報以及W02005/010175所述的A-red法構建了MG1655Ad即D::att-Km株。A-red法中Km抗性重組體的獲得是通過於37t:在含Km(卡那黴素)(50mg/L)的L-瓊脂培養基上進行平板培養，並選擇Km抗性重組體來進行的。〈1-2>用Ad即D::att-kan轉化L-賴氨酸生產菌WC196LC/pCABD2株從〈1-1>中所得的MG1655AdapD::att-Km株按常規方法獲得Pl溶胞產物，以採用美國專利申請公開第2006/0160191號公報所述的方法構建的L-賴氨酸生產菌WC196AcadAAldcC/pCABD2株作為宿主，採用Pl轉化法構建了WC196AcadAAIdcCAdapD::att_Km/pCABD2株。WC196AcadAAldc株是採用將Red驅動整合法(Datsenko，K.A.andWa騰r，B.L，2000.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97:6640-6645)與入噬菌體來源的切出系統(Cho，E.H.，Gumport，R.I.，Gardner,J.F.J.Bacteriol.184:5200-5203(2002))相結合的方法(參照W02005/010175號)破壞了大腸桿菌WC196的賴氨酸脫羧酶基因cadA和ldc而得到的菌株。在該菌株中導入pCABD2而得的菌株為14WC196AcadAAldcC/pCABD2。目標轉化株可以通過於37。C在含Km(卡那黴素)(50mg/L)和Sm(鏈黴素)(20mg/L)的L-瓊脂培養基上進行平板培養，並選擇Km抗性且Sm抗性的重組體來獲得。此外，將這些菌株於37t:在含20mg/L鏈黴素的L培養基中進行培養至終0D600"0.6，然後加入與培養液等量的40%甘油溶液並攪拌，再以適當的量進行分裝，於-8(TC保存。這稱作甘油保存液。〔實施例2〕d即D被破壞的L-賴氨酸生產菌的L-賴氨酸生產能力評價融解實施例1中所得菌株的甘油保存液，取100iiL均勻塗布在含20mg/L鏈黴素的L平板上，於37t:培養24小時。將所得平板上的約l/8量的菌體懸浮在0.5mL的生理鹽水中，用分光光度計U-2000(日立)測定波長600nm的濁度。將所得包含菌體的懸濁液接種在500mL坂口燒瓶中的含20mg/L鏈黴素的發酵培養基(MS培養基，組成如下述)20mL中，其中接種的液量使得波長600nm的濁度為0.15，用往復式振蕩培養裝置在攪拌速度114rpm、溫度37。C的條件下培養約24小時。培養後，使用BiotecAnalyzerAS210(SAKURA精機)測定培養基中蓄積的L-賴氨酸的量，以及殘存的葡萄糖。此外，使用BiotecAnalyzerBF-5(王子計測機器)測定培養基中蓄積的甘油。〔發酵培養基組成，g/L〕葡萄糖或甘油40(NH4)2S0424K2HP0411.0MgS047H201.0FeS047H200.01MnS045H200.01酵母提取物2.0用K0H調整至pH7.O，於115"高壓滅菌10分鐘(但葡萄糖或甘油以及MgS04*7H20另行滅菌)後，加入符合藥典的CaC0330g/L(18(TC，乾熱滅菌2小時)。添加20mg/L的鏈黴素。結果如表1所示(0D表示26倍稀釋後於吸光度660nm測定而得的菌體量，Lys(g/L)表示燒瓶中蓄積的L-賴氨酸蓄積量，葡萄糖(g/L)、甘油(g/L)表示培養基中殘存的葡萄糖、甘油的量，收率(％)表示從基質收穫的L-賴氨酸的收率)。由表l可知，與d即D基因未缺損的WC196AcadAAldcC/pCABD2株相比，WC196AcadAAldcCAd即D::att-Km/pCABD2株蓄積了更多量的L-賴氨酸。表lMS葡萄糖培養基菌株名0.D.(x26)Lys(g/L)葡萄糖(g/L)收率(％)WC196AcadAAldcC/pCABD2株0.3618.2818.6738.82WC196AcadAAldcCAdapD::att-Km/pCABD2株0.3778.7518.1340.0115MS甘油培養基tableseeoriginaldocumentpage16序列表的說明〕SEQIDNO:1:大腸桿菌d即D的鹼基序列SEQIDNO:2:大腸桿菌DapD的胺基酸序列SEQIDNO:3:大腸桿菌dapC的鹼基序列SEQIDNO:4:大腸桿菌DapC的胺基酸序列SEQIDNO:5:大腸桿菌dapE的鹼基序列SEQIDNO:6:大腸桿菌DapE的胺基酸序列SEQIDNO:7:大腸桿菌dapF的鹼基序列SEQIDNO:8:大腸桿菌DapF的胺基酸序列SEQIDNO:9:穀氨酸棒桿菌(C.glutamicum)的ddh基因的鹼基序列SEQIDNO:10:穀氨酸棒桿菌的DDH的胺基酸序列SEQIDNO:11:乳發酵短桿菌(B.lactofermentum)的ddh基因的鹼基序列SEQIDNO:12:乳發酵短桿菌的DDH的胺基酸序列SEQIDNO:13:C.efficiens的ddh基因的鹼基序列SEQIDNO:14:C.efficiens的DDH的胺基酸序列SEQIDNO:15:H.arsenicoxydans的ddh基因的鹼基序列SEQIDNO:16:H.arsenicoxydans的DDH的胺基酸序列SEQIDNO:17:多形擬桿菌(B.thetaiotaomicron)的ddh基因的鹼基序列SEQIDNO:18:多形擬桿菌的DDH的胺基酸序列SEQIDNO:19:d即D基因缺失用引物SEQIDNO:20:d即D基因缺失用引物SEQIDNO:21:大腸桿菌lysC的鹼基序列SEQIDNO:22:大腸桿菌LysC的胺基酸序列SEQIDNO:23:大腸桿菌dapA的鹼基序列SEQIDNO:24:大腸桿菌DapA的胺基酸序列SEQIDNO:25:大腸桿菌dapB的鹼基序列SEQIDNO:26:大腸桿菌DapB的胺基酸序列工業實用件根據本發明，在依照使用大腸桿菌的發酵方法進行L-賴氨酸的生產中，能夠提高L-賴氨酸的生產量和/或發酵收率。此外，本發明能夠用於大腸桿菌的L-賴氨酸生產菌的權利要求一種具有L-賴氨酸生產能力的大腸桿菌，其特徵在於該大腸桿菌經過修飾而降低了內消旋α，ε-二氨基庚二酸合成途徑的1種或2種以上的酶的活性，並且導入了編碼二氨基庚二酸脫氫酶的基因。2.根據權利要求l所述的大腸桿菌，其中，所述內消旋a，e-二氨基庚二酸合成途徑的酶選自2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶、琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶、琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶以及二氨基庚二酸差向異構酶。3.根據權利要求2所述的大腸桿菌，其中，所述2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸N_琥珀醯轉移酶、琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶、琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶以及二氨基庚二酸差向異構酶分別由d即D基因、d即C基因、d即E基因以及d即F基因編碼。4.根據權利要求3所述的大腸桿菌，其中，所述內消旋a，e-二氨基庚二酸合成途徑的酶的活性是通過降低所述基因的表達量或破壞所述基因而降低的。5.根據權利要求24中任一項所述的大腸桿菌，其經過修飾而至少降低了2，3，4，5_四氫吡啶_2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶活性。6.根據權利要求15中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述編碼二氨基庚二酸脫氫酶的基因是棒狀桿菌型細菌的ddh基因。7.根據權利要求26中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述2，3，4，5-四氫吡啶_2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶是下述(A)或(B)所述的蛋白質(A)具有SEQIDNO:2所示的胺基酸序列的蛋白質；(B)具有在SEQIDN0:2所示的胺基酸序列中包含l個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的胺基酸序列，且具有2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶活性的蛋白質。8.根據權利要求27中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶是下述(C)或(D)所述的蛋白質(C)具有SEQIDNO:4所示的胺基酸序列的蛋白質；(D)具有在SEQIDN0:4所示的胺基酸序列中包含l個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的胺基酸序列，且具有琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶活性的蛋白質。9.根據權利要求28中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶是下述(E)或(F)所述的蛋白質(E)具有SEQIDNO:6所示的胺基酸序列的蛋白質；(F)具有在SEQIDN0:6所示的胺基酸序列中包含l個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的胺基酸序列，且具有琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶活性的蛋白質。10.根據權利要求29中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述二氨基庚二酸差向異構酶是下述(G)或(H)所述的蛋白質(G)具有SEQIDNO:8所示的胺基酸序列的蛋白質；(H)具有在SEQIDN0:8所示的胺基酸序列中包含l個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的胺基酸序列，且具有二氨基庚二酸差向異構酶活性的蛋白質。11.根據權利要求310中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述d即D基因是下述(a)或(b)所述的DNA:(a)包含SEQIDNO:1的鹼基序列的DNA;或(b)與SEQIDN0:1的鹼基序列或能夠由該鹼基序列製備的探針在嚴格條件下雜交，並且編碼具有2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶活性的蛋白質的DNA。12.根據權利要求311中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述d即C基因是下述(c)或(d)所述的DNA:(c)包含SEQIDNO:3的鹼基序列的DNA;或(d)與SEQIDNO:3的鹼基序列或能夠由該鹼基序列製備的探針在嚴格條件下雜交，並且編碼具有琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶活性的蛋白質的DNA。13.根據權利要求312中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述d即E基因是下述(e)或(f)所述的DNA:(e)包含SEQIDNO:5的鹼基序列的DNA;或(f)與SEQIDN0:5的鹼基序列或能夠由該鹼基序列製備的探針在嚴格條件下雜交，且編碼具有琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶活性的蛋白質的DNA。14.根據權利要求313中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述d即F基因是下述(g)或(h)所述的DNA:(g)包含SEQIDNO:7的鹼基序列的DNA;或(h)與SEQIDN0:7的鹼基序列或能夠由該鹼基序列製備的探針在嚴格條件下雜交，且編碼具有二氨基庚二酸差向異構酶活性的蛋白質的DNA。15.根據權利要求114中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述二氨基庚二酸脫氫酶是下述(I)或(J)所述的蛋白質(I)具有SEQIDNO:10、12、14、16或18所示的胺基酸序列的蛋白質;(J)具有在SEQIDNO:10、12、14、16或18所示的胺基酸序列中包含1個或數個胺基酸的取代、缺失、插入或添加而得到的胺基酸序列，且具有二氨基庚二酸脫氫酶活性的蛋白質。16.根據權利要求613中任一項所述的大腸桿菌，其中，所述ddh基因是下述(i)或(j)所述的DNA:(i)包含SEQIDNO:9、11、13、15或17的鹼基序列的DNA;或(j)與SEQIDN0:9、ll、13、15或17的鹼基序列或能夠由該鹼基序列製備的探針在嚴格條件下雜交，且編碼具有二氨基庚二酸脫氫酶活性的蛋白質的DNA。17.根據權利要求116中任一項所述的大腸桿菌，該大腸桿菌還具有解除了由L-賴氨酸導致的反饋抑制的二氫吡啶二羧酸合酶以及解除了由L-賴氨酸導致的反饋抑制的天冬氨酸激酶，並且該大腸桿菌的二氫吡啶二羧酸還原酶活性得到了增強。18.—種生產L-賴氨酸的方法，其特徵在於，在培養基中培養權利要求117中任一項所述的大腸桿菌，並且從該培養基中收集L-賴氨酸。全文摘要通過在培養基中培養下述具有L-賴氨酸生產能力的大腸桿菌，並從該培養基收集L-賴氨酸，來生產L-賴氨酸，所述大腸桿菌經過修飾而降低了內消旋α，ε-二氨基庚二酸合成途徑的1種或2種以上的酶，例如2，3，4，5-四氫吡啶-2，6-二羧酸N-琥珀醯轉移酶、琥珀醯二氨基庚二酸轉氨酶、琥珀醯二氨基庚二酸脫琥珀醯基酶或二氨基庚二酸差向異構酶的活性，並且其中導入了編碼二氨基庚二酸脫氫酶的基因。文檔編號C12P13/00GK101765659SQ20088010022公開日2010年6月30日申請日期2008年7月22日優先權日2007年7月23日發明者土井秀高,植田拓嗣申請人:味之素株式會社