Ws7622a單硫酸酯或二硫酸酯、其製備方法和應用的製作方法

2023-09-17 17:21:00 2

專利名稱：Ws7622a單硫酸酯或二硫酸酯、其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及新的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯。
更具體地說，本發明涉及具有人白細胞彈性蛋白酶抑制活性的新的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯及其可藥用鹽、其製備方法、含有這些化合物的藥物組合物及其使用方法。
本發明的發明人以前曾用在營養培養基中培養拒黴素鏈黴菌(Streptomyces resistomycificus)7622菌株的方法，製備出了在本發明中作為原料使用的WS7622A物質，並在許多國家提交了涉及該物質的專利申請(參見歐洲專利申請90104500.5)。拒黴素鏈黴菌7622已保藏在中國典型培養物保藏中心(中國武漢武漢大學校內)，登記號為CCTCC M90005(保藏日1990年2月13日)。
但是，WS7622A物質不溶於水，所以本發明的發明人研究了如何提高WS7622A物質的水溶性，這樣，通過使WS7622A物質硫酸化，他們成功地提高了WS7622A物質的水溶性。
本發明的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯及其可藥用鹽，可以通過使WS7622A物質或其鹽硫酸化來製備。
作為原料的WS7622A物質是新化合物，具有下列物化性質。
WS7622A物質的物化性質外觀無色稜晶物質本性酸性顏色反應陽性硫酸鈰、碘蒸氣陰性茚三酮、莫利施試劑溶解性溶於甲醇、乙醇、正丁醇微溶於氯仿、丙酮、乙酸乙酯不溶於水、正己烷薄層層析(TLC)氯仿-甲醇(5∶1;V/V) Rf0.51丙酮-甲醇(10∶1) 0.62(Kiesel gel 60 F254矽膠板，Merck)熔點250-252℃(分解)旋光率[α]23D+36°(C＝1.0，甲醇)紫外光譜λMeOHmax287nm(ε＝3600)λMeOH-HClmax287nmλMeOH-NaOHmax298nm分子式C47H63N9O13元素分析計算值(C47H63N9O13·2H2O)C 56.56，H 6.77，N 12.63%實測值C 56.65，H 6.62，N 12.27%
分子量FAB-MS m/z 984(M+Na)+紅外吸收光譜νKBrmax3400，3300，3060，2980，2940，1735，1710，1690，1670，1660，1640，1540，1520，1470，1380，1330，1300，1260，1220，1200，1160，1130，1090，1000，980，940，920cm-11H核磁共振譜(400MHz，CD3OD)δ7.22-7.09 (3H，m)6.88-6.77 (3H，m)6.74 (1H，s)6.46 (1H，s)5.46 (1H，m)5.18 (1H，s)4.85 (1H，s)4.77 (1H，m)4.65 (1H，m)4.50 (1H，m)3.96 (1H，m)3.91 (1H，d，J＝9Hz)3.60-3.47 (2H，m)3.03 (1H，m)2.90 (3H，s)2.86 (1H，m)2.59-2.49 (2H，m)2.39 (1H，m)
2.29-2.16 (2H，m)2.00 (1H，m)1.84 (1H，m)1.74 (3H，d，J＝6Hz)1.72-1.53 (4H，m)1.44 (3H，d，J＝6Hz)1.12 (1H，m)1.10 (6H，d，J＝6Hz)0.99 (3H，d，J＝6Hz)0.94 (3H，d，J＝6Hz)13C核磁共振譜(100MHz，CD3OD)δ179.7 (s)176.3 (s)174.7 (s)173.3 (s)172.4 (s)171.4 (s)170.3 (s)165.8 (s)160.2 (s)145.7 (s)145.6 (s)137.5 (s)134.0 (d)131.4 (s)130.6 (d) x 2129.8 (s)129.1 (d) x 2129.1 (s)127.6 (d)119.1 (d)118.0 (d)76.0 (d)
73.4 (d)63.1 (d)61.4 (d)57.1 (d)53.6 (d)52.7 (d)50.5 (d)39.9 (t)36.1 (t)35.8 (d)31.8 (q)31.0 (t)30.8 (d)29.9 (t)29.7 (t)25.2 (t)22.3 (t)20.2 (q)20.0 (q) x 219.7 (q)19.5 (q)13.3 (q)胺基酸分析取WS7622A(1mg)，用6N HCl(1ml)在110℃下水解20小時，然後將該混合物蒸發至幹。所得混合物在日立835型自動胺基酸分析儀上進行分析。用胺基酸標準溶液[採用H型(Wako Chemicals 013-08391)和B型(Wako Chemicals 016-08641)]作參比。
結果檢測出蘇氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、NH3和對茚三酮呈陽性的一些未知組分。
提出WS7622A的部分化學結構如下
WS7622A的鹽可包括與無機或有機鹼形成的鹽，例如鹼金屬鹽(例如鈉鹽、鉀鹽等)、鹼土金屬鹽(例如鈣鹽等)、銨鹽、乙醇胺鹽、三乙胺鹽、二環己胺鹽等。
用於製備本發明的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯及其可藥用鹽的合適硫酸化試劑有氯磺酸、氨基磺酸、二環己基碳二亞胺和硫酸的混合物、二環己基碳二亞胺和硫酸氫四丁銨的混合物、三氧化硫加合物(例如三氧化硫吡啶配合物、三氧化硫三甲胺配合物、三氧化硫三乙胺配合物、三氧化硫二噁烷配合物、三氧化硫二甲基苯胺配合物)等。
該反應通常在常規溶劑中進行，例如二氯甲烷、氯仿、苯、甲苯、吡啶、乙醚、二噁烷、四氫呋喃、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲醯胺，或者對反應沒有不利影響的任何其它有機溶劑。
反應溫度並不關鍵，反應可在冷卻、環境溫度或加熱條件下進行。
該反應最好在鹼存在下進行。合適的鹼可以是無機鹼，例如鹼金屬或鹼土金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣等)、鹼金屬碳酸氫鹽(例如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等)、鹼金屬或鹼土金屬碳酸鹽(例如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鈣等)、鹼金屬磷酸鹽(例如磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀等);也可以是有機鹼，例如鹼金屬醇鹽(例如甲醇鈉、乙醇鉀等)、胺(例如三乙胺、吡啶、二甲基吡啶等)。
WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯及其可藥用鹽是新化合物，其中，WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽和WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽分別具有下列物化性質。
WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽外觀無色晶體溶解性溶於水、甲醇不溶於氯仿、正己烷熔點257-263℃(分解)旋光率[α]23D+37.5°(C＝1.0，甲醇)分子式C47H61N9O19S2Na2元素分析(C47H61N9O19S2Na2·6H2O)計算值C 44.30，H 5.77，N 9.89，S 5.03，Na 3.61%實測值C 44.98，H 5.90，N10.06，S 5.00，Na 3.98%分子量FAB-MS m/z 1188(M+Na)+
薄層層析固定相 展開劑 Rf值矽膠 CHCl3-CH3OH-H2O 0.11(Merck Art 5715) (65∶25∶4)正丁醇-乙酸-水 0.29(4∶2∶1)紅外吸收光譜(附

圖1)νKBrmax3360，2960，1735，1660，1640，1530，1500，1380，1250，1200，1060，1030，940，890cm-11H核磁共振譜(附圖2)(400MHz，D2O)δ7.50 (1H，s)7.27 (1H，s)7.33-7.24 (3H，m)6.94 (1H，q，J＝7Hz)6.85 (2H，br d，J＝8Hz)5.53 (1H，m)5.37 (1H，m)4.80 (1H，br s)4.63-4.57 (2H，m)4.53 (1H，m)4.06 (1H，m)
3.99 (1H，d，J＝10Hz)3.56 (1H，br d，J＝14Hz)3.46 (1H，m)2.97 (3H，s)2.97-2.88 (2H，m)2.72 (1H，m)2.59 (1H，m)2.51-2.38 (2H，m)2.09-1.91 (4H，m)1.82-1.60 (3H，m)1.77 (3H，d，J＝7Hz)1.50 (3H，d，J＝6.5Hz)1.40 (1H，m)1.11 (6H，d，J＝7Hz)0.99 (3H，d，J＝6.5Hz)0.97 (3H，d，J＝6.5Hz)13C核磁共振譜(附圖3)(100MHz，D2O)δ183.6 (s)177.9 (s)177.7 (s)174.8 (s)173.8 (s)173.3 (s)172.4 (s)167.8 (s)161.5 (s)145.5 (s)144.9 (s)139.6 (d)139.0 (s)137.0 (s)
136.0 (s)132.3 (d) x 2131.0 (d) x 2129.6 (d)127.4 (d)125.9 (d)77.4 (d)75.1 (d)63.8 (d)62.7 (d)59.1 (d)55.9 (d)54.9 (d)51.9 (d)41.9 (t)37.2 (d)36.9 (t)34.1 (q)32.3 (d)31.9 (t)31.8 (t)31.2 (t)27.5 (t)23.7 (t)21.7 (q)21.4 (q) x 221.3 (q)21.1 (q)15.5 (q)胺基酸分析取WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽(1mg)，用6N HCl(1ml)在110℃下水解20小時，將該混合物蒸發至幹。所得混合物用日立835型自動胺基酸分析儀進行分析。用胺基酸標準溶液[採用H型(Wako Chemicals 013-08391)和B型(Wako Chemicals 016-08641)]作參比。
結果檢測出蘇氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、NH3和對茚三酮呈陽性的一些未知組分。
提出WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽的部分化學結構如下
WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽外觀無色無定形粉末溶解性溶於水、甲醇不溶於氯仿、正己烷熔點230-237℃(分解)旋光率[α]23D+34°(C＝1.0，甲醇)分子式C47H61N9O19S2K2
元素分析計算值(C47H61N9O19S2K2·6H2O)C 43.21，H 5.63，N 9.65，S 4.91，K 5.99%實測值C 43.96，H 5.44，N 9.97，S 5.09，K 4.49%分子量FAB-MS m/z 1236(M+K)+薄層層析固定相 展開劑 Rf值矽膠 CHCl3-CH3OH-H2O 0.13(Merck Art 5715) (65∶25∶4)紅外吸收光譜(附圖4)νKBrmax3360，2960，1735，1660，1640，1530，1500，1405，1380，1250，1200，1050，1030，940，890cm-11H核磁共振譜(附圖5)(400MHz，D2O)δ7.52 (1H，s)7.28 (1H，s)7.34-7.25 (3H，m)6.96 (1H，q，J＝7Hz)6.87 (2H，br d，J＝8Hz)5.56 (1H，m)
5.40 (1H，m)4.84 (1H，br s)4.70-4.55 (3H，m)4.10 (1H，m)4.03 (1H，m)3.60 (1H，br d，J＝14Hz)3.50 (1H，m)3.00 (3H，s)3.00-2.85 (2H，m)2.76 (1H，m)2.62 (1H，m)2.55-2.40 (2H，m)2.12-1.95 (4H，m)1.90-1.65 (3H，m)1.79 (3H，d，J＝7Hz)1.53 (3H，d，J＝6.5Hz)1.45 (1H，m)1.14 (6H，d，J＝7Hz)1.02 (3H，d，J＝6.5Hz)1.00 (3H，d，J＝6.5Hz)胺基酸分析取WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽(1mg)，用6N HCl(1ml)於110℃下水解20小時，將該混合物蒸發至幹。所得混合物用日立835型自動胺基酸分析儀進行分析。用胺基酸標準溶液[採用H型(Wako Chemicals 013-08391)和B型(Wako Chemicals 016-08641)]作參比。
結果檢測出蘇氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、NH3及對茚三酮呈陽性的一些未知組分。
提出WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽的部分化學結構如下
WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯的可藥用鹽，可以包括與無機鹼或有機鹼形成的單鹽或二鹽，例如鹼金屬鹽(例如鈉鹽、鉀鹽等)、鹼土金屬鹽(例如鈣鹽等)、銨鹽、乙醇胺鹽、三乙胺鹽、二環己胺鹽、吡啶鹽等。
WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯及其可藥用鹽，具有人白細胞彈性蛋白酶抑制活性，可作為人白細胞彈性蛋白酶抑制劑用於治療或預防變性疾病，例如肺氣腫、動脈粥樣硬化、風溼性關節炎、骨關節炎、牛皮癬、胰腺炎、成人呼吸窘迫綜合症、囊性纖維變性、慢性支氣管炎、支氣管擴張等，進一步可用於治療或預防哮喘、移植排拆、腎炎和膿毒病。
為說明WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯及其可藥用鹽的有用性，下面給出其藥理試驗數據。
1.蛋白酶抑制作用測定(1)方法整個測定中所使用的緩衝液為含0.5M NaCl的0.1MHEPES(N-(2-羥乙基)哌嗪-N′-(2-乙磺酸))，pH7.5。在96孔微量滴定板的各小孔中使25μl 2mM甲氧基琥珀醯基-(Ala)2-Pro-Val-對硝基苯胺(用緩衝液稀釋100mM二甲亞碸溶液)和50μl樣品(用緩衝液將有機溶劑中的10μl樣品稀釋5倍)混合。用微量滴定板讀數器(Corona Electric Co.，Ibaraki，Japan)測量該混合物在415nm波長處的吸收。測量後，加入25μl6μg/ml人痰彈性蛋白酶(HSE)，並在室溫下放置30分鐘。然後測量415nm處的光吸收。用100X(1-有抑制劑時的「r」/無抑制劑時的「r」)計算藥物抑制百分比，其中「r」為保溫30分鐘後的光吸收減去加酶前的光吸收。類似地測定抑制劑對其它蛋白酶的效果，用N-琥珀醯基-(Ala)3-對硝基苯胺測定豬胰彈性蛋白酶(Ⅳ型，終濃度5μg/ml)，用N-α-苯甲醯基-Arg-對硝基苯胺測定牛胰胰蛋白酶(Ⅰ型，終濃度16μg/ml)，用甲氧基琥珀醯基-(Ala)2-Pro-Met-對硝基苯胺測定牛胰糜蛋白酶(Ⅱ型，終濃度1.5μg/ml)。HSE從Elastin Products公司(MO，U.S.A)得到。其它所有底物和蛋白酶都購自Sigma化學品公司。
(2)結果WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽和WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽對幾種絲氨酸蛋白酶活性的抑制效果
IC50(M)物質 人痰彈性 豬胰彈性 胰蛋白酶 糜蛋白酶(M) 蛋白酶 蛋白酶 (牛) (牛)WS7622A二硫酸酯的 3.5×10-84.9×10-81.8×10-42.0×10-7二鈉鹽WS7622A二硫酸酯的 5.9×10-84.9×10-82.9×10-42.0×10-7二鉀鹽各結果均以50%抑制濃度(IC50)表示2.彈性蛋白酶誘導的肺損傷作用中活性的測定(1)方法使用受戊巴比妥麻醉的倉鼠。用帶27號針頭的1ml注射器，通過頸腹側的小切口將生理鹽水或含人痰彈性蛋白酶的生理鹽水滴入氣管內。3小時後，用CO2窒息法處死動物，再暴露出每隻動物的氣管。用2.5ml等份生理鹽水灌洗各只倉鼠的肺，然後吸出生理鹽水，每隻動物吸出終體積約為1.5ml的支氣管肺泡灌洗(BAL)液。
離心收集支氣管肺泡灌洗液中的細胞，然後用蒸餾水稀釋使細胞破碎，用分光光度法在541nm處測定血紅蛋白含量。
將試驗藥物溶於生理鹽水中，並以與滴注彈性蛋白酶所用方式相同的方式滴入氣管內，5分鐘後開始滴注彈性蛋白酶。
(2)結果對彈性蛋白酶誘導的肺出血的抑制效果試驗化合物 5分鐘前預劑量 出血 %抑制(μg/部位) (OD 541 nm)正常 - 0.31±0.12 -對照 - 29.35±2.9 -WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽 1 19.06±1.40＊35.410 9.75±4.82＊67.5100 0.28±0.05＊＊＊100.1WS7622A二硫酸 1 19.71±1.20＊33.2酯的二鉀鹽 10 10.73±1.20＊＊64.1100 0.35±0.16＊＊＊99.9與對照組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001(「學生」t檢驗)。
本發明的藥物組合物可以以常規藥物劑型使用，例如注射劑、吸入劑、粉劑、細粒劑、粒劑、片劑、糖錠劑、微囊劑、膠囊劑、栓劑、溶液、懸浮劑、乳液糖漿劑等。如果需要，可在所述組合物中配入稀釋劑或崩解劑(如蔗糖、乳糖、澱粉、結晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、合成矽酸鋁等)、粘合劑(如纖維素、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、阿拉伯樹膠、聚乙二醇等)、著色劑、甜味劑、潤滑劑(如硬脂酸鎂等)等。
所述本發明組合物的劑量取決於患者的年齡、體重、身體狀況等，口服日劑量按目的化合物或其可藥用鹽計算一般為100mg-10g，優選1g-5g，以每日1-3次的間隔服用。典型的單位劑量可以是50mg、100mg、200mg、500mg、1g等，當然這些只是舉例，並不是限定性的。
給出下列實施例以說明本發明。
實施例1在300ml三頸燒瓶中裝入三氧化硫三甲胺配合物(13.9g，Aldrich)、無水碳酸鉀(6.9g)和WS7622A物質(10g)，並加入無水二甲基甲醯胺(50ml)，將該混合物在室溫下劇烈攪拌過夜。
將混合物減壓蒸發至幹，殘餘物溶於冰水(300ml)中，並加到HP200ss柱(9.6×25cm)上。用水(10升)洗柱，用MeOH-H2O(4∶6)(2升)洗脫。收集產物部分並蒸發至幹，得到粉末狀物。將該粉末溶於水(70ml)中，使其通過AG50W-X4柱(Na+型，4×32cm，Bio-Rad Laboratories)，並蒸發至幹。所得粉末(11.2g)用熱乙醇(50ml)重結晶，得到10.6gWS7622A二硫酸酯的二鈉鹽，為無色晶體。
實施例2在300ml三頸燒瓶中裝入三氧化硫三甲胺配合物(13.9g，Aldrich)、無水碳酸鉀(6.9g)和WS7622A物質(10g)，並向其中加入無水二甲基甲醯胺(50ml)，將該混合物在室溫下劇烈攪拌過夜。
將該混合物減壓蒸發至幹，殘餘物溶於冰水(300ml)中，並加到HP20ss柱(9.6×25cm)上。用水(10升)洗柱並用MeOH-H2O(4∶6)(2升)洗脫。收集產物部分並蒸發至幹，得到11.8gWS7622A二硫酸酯的二鉀鹽，為無色粉末。
權利要求
1.WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯及其可藥用鹽，其中WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽和WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽具有下列物化性質WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽外觀無色晶體溶解性溶於水、甲醇不溶於氯仿、正己烷熔點257-263℃(分解)旋光率 [α]23D+37.5°(C=1.0，甲醇)分子式 C47H51N9O19S2Na2元素分析計算值(C47H51N9O19S2Na2·6H2O)∶C44.30，H5.77，N9.89，S5.03，Na3.61%實測值C44.98，H5.90，N10.06，S5.00，Na3.98%分子量FAB-MSm/z1188(M+Na)+薄層層析:(固定)/(矽 膠) (展開劑)/(CHCl3-CH3 OH-H2O) (Rf值)/0.11(Merck Art 5715)，(65∶25∶4)正丁醇-乙酸-水 0.29(4∶2∶1)紅外吸收光譜(附圖1)KBrv 3360，2960，1735，1660，1640，1530，max1500，1380，1250，1200，1060，1030，940，890cm-11H核磁共振譜(附圖2)(400MHz，D2O)δ7.50 (1H，s)7.27 (1H，s)7.33-7.24 (3H，m)6.94 (1H，q，J=7Hz)6.85 (2H，brd，J=8Hz)5.53 (1H，m)5.37 (1H，m)4.80 (1H，br s)4.63-4.57 (2H，m)4.53 (1H，m)4.06 (1H，m)3.99 (1H，d，J=10Hz)3.56 (1H，br d，J=14Hz)3.46 (1H，m)2.97 (3H，s)2.97-2.88 (2H，m)2.72 (1H，m)2.59 (1H，m)2.51-2.38 (2H，m)2.09-1.91 (4H，m)1.82-1.60 (3H，m)1.77 (3H，d，J=7Hz)1.50 (3H，d，J=6.5Hz)1.40 (1H，m)1.11 (6H，d，J=7Hz)0.99 (3H，d，J=6.5Hz)0.97 (3H，d，J=6.5Hz)13C核磁共振譜(附圖3)(100MHz，D2O)δ183.6 (s)177.9 (s)177.7 (s)174.8 (s)173.8 (s)173.3 (s)172.4 (s)167.8 (s)161.5 (s)145.5 (s)144.9 (s)139.6 (d)139.0 (s)137.0 (s)136.0 (s)132.3 (d) x 2131.0 (d) x 2129.6 (d)127.4 (d)125.9 (d)77.4(d)75.1(d)63.8(d)62.7(d)59.1(d)55.9(d)54.9(d)51.9(d)41.9(t)37.2(d)36.9(t)34.1(q)32.3(d)31.9(t)31.8(t)31.2(t)27.5(t)23.7(t)21.7(q)21.4(q) x 221.3(q)21.1(q)15.5(q)胺基酸分析取WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽(1mg)，用6N HCl(1ml)在110℃下水解20小時，將該混合物蒸發至幹。所得混合物用日立835型自動胺基酸分析儀進行分析。用胺基酸標準溶液[採用H型(Wako Chemicals 013-08391)和B型(Wako Chemicals 016-08641)]作參比。結果檢測出蘇氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、NH3和對茚三酮呈陽性的一些未知組分。WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽外觀無色無定形粉末溶解性 溶於水、甲醇不溶於氯仿、正已烷熔點230-237℃(分解)旋光率 [α]23D+34°(C=1.0，甲醇)分子式 C47H61N9O19S2K2元素分析計算值 (C47H61N9O19S2K2·6H2O)∶C43.21，H5.63，N9.65，S4.91，K5.99%實測值C43.96，H5.44，N9.97，S5.09，K4.49%分子量FAB-MSm/z1236(M+K)+薄層層析(固定)/(矽 膠) (展開劑)/(CHCl3-CH3OH-H2O) (Rf值)/0.13(Merck Art 5715) (65∶25∶4)紅外吸收光譜(附圖4)KBrv3360，2960，1735，1660，1640，1530，max1500，1405，1380，1250，1200，1050，1030，940，890cm-11H核磁共振譜(附圖)5(400MHz，D2O)δ7.52 (1H，s)7.28 (1H，s)7.34-7.25 (3H，m)6.96 (1H，q，J=7Hz)6.87 (2H，brd，J=8Hz)5.56 (1H，m)5.40 (1H，m)4.84 (1H，br s)4.70-4.55 (3H，m)4.10 (1H，m)4.03 (1H，m)3.60 (1H，br d，J=14Hz)3.50 (1H，m)3.00 (3H，s)3.00-2.85 (2H，m)2.76 (1H，m)2.62 (1H，m)2.55-2.40 (2H，m)2.12-1.95 (4H，m)1.90-1.65 (3H，m)1.79 (3H，d，J=7Hz)1.53 (3H，d，J=6.5Hz)1.45 (1H，m)1.14 (6H，d，J=7Hz)1.02 (3H，d，J=6.5Hz)1.00 (3H，d，J=6.5Hz)胺基酸分析取WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽(1mg)，用6N HCl(1ml)在110℃下水解20小時，將該混合物蒸發至幹。所得混合物用日立835型自動胺基酸分析儀進行分析。用胺基酸標準溶液[採用H型(Wako Chemicals 013-08391)和B型(Wako Chemicals 016-08641)]作參比。結果檢測出蘇氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、NH3和對茚三酮呈陽性的一些未知組分。
2.根據權利要求1的化合物，其中該化合物為WS7622A二硫酸酯的二鹼金屬鹽。
3.根據權利要求2的化合物，其中該化合物為WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽。
4.一種製備WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯或其鹽的方法，該方法包括在有或沒有鹼存在下，使WS7622A或其鹽硫酸化，得到WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯或其鹽，其中WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽和WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽具有下列物化性質WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽外觀無色晶體溶解性溶於水、甲醇不溶於氯仿、正己烷熔點257-263℃(分解)旋光率[α]23D+37.5°(C＝1.0，甲醇)分子式C47H61N9O19S2Na2元素分析計算值(C47H61N9O19S2Na2·6H2O)C 44.30，H 5.77，N 9.89，S 5.03，Na 3.61%實測值C 44.98，H 5.90，N10.06，S 5.00，Na 3.98%分子量FAB-MS m/z 1188(M+Na)+薄層層析固定相 展開劑 Rf值矽膠 CHCl3-CH3OH-H2O 0.11(Merck Art 5715) (65∶25∶4)正丁醇-乙酸-水 0.29(4∶2∶1)紅外吸收光譜(附圖1)νKBrmax3360，2960，1735，1660，1640，1530，1500，1380，1250，1200，1060，1030，940，890cm-11H 核磁共振譜(附圖2)(400MHz，D2O)δ7.50 (1H，s)7.27 (1H，s)7.33-7.24 (3H，m)6.94 (1H，q，J＝7Hz)6.85 (2H，br d，J＝8Hz)5.53 (1H，m)5.37 (1H，m)4.80 (1H，br s)4.63-4.57 (2H，m)4.53 (1H，m)4.06 (1H，m)3.99 (1H，d，J＝10Hz)3.56 (1H，br d，J＝14Hz)3.46 (1H，m)2.97 (3H，s)2.97-2.88 (2H，m)2.72 (1H，m)2.59 (1H，m)2.51-2.38 (2H，m)2.09-1.91 (4H，m)1.82-1.60 (3H，m)1.77 (3H，d，J＝7Hz)1.50 (3H，d，J＝6.5Hz)1.40 (1H，m)1.11 (6H，d，J＝7Hz)0.99 (3H，d，J＝6.5Hz)0.97 (3H，d，J＝6.5Hz)13C核磁共振譜(附圖3)(100MHz，D2O)δ183.6 (s)177.9 (s)177.7 (s)174.8 (s)173.8 (s)173.3 (s)172.4 (s)167.8 (s)161.5 (s)145.5 (s)144.9 (s)139.6 (d)139.0 (s)137.0 (s)136.0 (s)132.3 (d) x 2131.0 (d) x 2129.6 (d)127.4 (d)125.9 (d)77.4 (d)75.1 (d)63.8 (d)62.7 (d)59.1 (d)55.9 (d)54.9 (d)51.9 (d)41.9 (t)37.2 (d)36.9 (t)34.1 (q)32.3 (d)31.9 (t)31.8 (t)31.2 (t)27.5 (t)23.7 (t)21.7 (q)21.4 (q) x 221.3 (q)21.1 (q)15.5 (q)胺基酸分析取WS7622A二硫酸酯的二鈉鹽(1mg)，用6N HCl(1ml)在110℃下水解20小時，將該混合物蒸發至幹。所得混合物用日立835型自動胺基酸分析儀進行分析。用胺基酸標準溶液[採用H型(Wako Chemicals 013-08391)和B型(Wako Chemicals 016-08641)]作參比。結果檢測出蘇氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、NH3和對茚三酮呈陽性的一些未知組分。WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽外觀無色無定形粉末溶解性溶於水、甲醇不溶於氯仿、正己烷熔點230-237℃(分解)旋光率[α]23D+34°(C＝1.0，甲醇)分子式C47H61N9O19S2K2元素分析計算值(C47H61N9O19S2K2·6H2O)C 43.21，H 5.63，N 9.65，S 4.91，K 5.99%實測值C 43.96，H 5.44，N 9.97，S 5.09，K 4.49%分子量FAB-MS m/z 1236(M+K)+薄層層析固定相 展開劑 Rf值矽膠 CHCl3-CH3OH-H2O 0.13(Merck Art 5715) (65∶25∶4)紅外吸收光譜(附圖4)νKBrmax3360，2960，1735，1660，1640，1530，1500，1405，1380，1250，1200，1050，1030，940，890cm-11H 核磁共振譜(附圖5)(400MHz，D2O)δ7.52 (1H，s)7.28 (1H，s)7.34-7.25 (3H，m)6.96 (1H，q，J＝7Hz)6.87 (2H，br d，J＝8Hz)5.56 (1H，m)5.40 (1H，m)4.84 (1H，br s)4.70-4.55 (3H，m)4.10 (1H，m)4.03 (1H，m)3.60 (1H，br d，J＝14Hz)3.50 (1H，m)3.00 (3H，s)3.00-2.85 (2H，m)2.76 (1H，m)2.62 (1H，m)2.55-2.40 (2H，m)2.12-1.95 (4H，m)1.90-1.65 (3H，m)1.79 (3H，d，J＝7Hz)1.53 (3H，d，J＝6.5Hz)1.45 (1H，m)1.14 (6H，d，J＝7Hz)1.02 (3H，d，J＝6.5Hz)1.00 (3H，d，J＝6.5Hz)胺基酸分析取WS7622A二硫酸酯的二鉀鹽(1mg)，用6N HCl(1ml)在110℃下水解20小時，然後將該混合物蒸發至幹。所得混合物用日立835型自動胺基酸分析儀進行分析。用胺基酸標準溶液[採用H型(Wako Chemicals 013-08391)和B型(Wako Chemicals 016-08641)]作參比。結果檢測出蘇氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、NH3和對茚三酮呈陽性的一些未知組分。
5.根據權利要求4的方法，該方法包括，在鹼存在下使WS7622A或其鹽硫酸化，得到WS7622A二硫酸酯的二鹼金屬鹽。
6.根據權利要求5的方法，其中WS7622A二硫酸酯的二鹼金屬鹽為二鈉鹽。
7.一種藥物組合物，該組合物包含作為有效成分的如權利要求1所限定的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯或其可藥用鹽，以及可藥用載體或賦形劑。
8.一種人白細胞彈性蛋白酶抑制劑，該抑制劑包含作為有效成分的如權利要求1所限定的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯或其可藥用鹽，以及可藥用載體或賦形劑。
9.一種用於治療或預防諸如肺氣腫、動脈粥樣硬化、風溼性關節炎、骨關節炎、牛皮癬、胰腺炎及成人呼吸窘迫綜合症等變性疾病的藥物組合物，該組合物包含作為有效成分的如權利要求1所限定的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯或其可藥用鹽，以及可藥用載體或賦形劑。
10.一種用於治療或預防移植排斥的藥物組合物，該組合物包含作為有效成分的如權利要求1所限定的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯或其可藥用鹽，以及可藥用載體或賦形劑。
11.一種用於治療或預防腎炎、膿毒病或哮喘的藥物組合物，該組合物包含作為有效成分的如權利要求1所限定的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯或其可藥用鹽，以及可藥用載體或賦形劑。
12.一種治療或預防諸如肺氣腫、動脈粥樣硬化、風溼性關節炎、骨關節炎、牛皮癬、胰腺炎及成人呼吸窘迫綜合症等變性疾病的方法，該方法包括，給予患者有效量的如權利要求1所限定的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯或其可藥用鹽。
13.一種治療或預防移植排斥的方法，該方法包括，給予患者有效量的權利要求1所限定的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯或其可藥用鹽。
14.一種治療或預防腎炎、膿毒病或哮喘的方法，該方法包括，給予患者有效量的如權利要求1所限定的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯或其可藥用鹽。
15.權利要求1-6中任一項的化合物及其可藥用鹽在製備一種藥物中的應用，所述藥物用於治療或預防某些變性疾病，例如肺氣腫、動脈粥樣硬化、風溼性關節炎、骨關節炎、牛皮癬、胰腺炎和成人呼吸窘迫綜合症，以及腎炎、膿毒症、哮喘或移植排斥。
全文摘要
本發明涉及具有人白細胞彈性蛋白酶抑制活性的新的WS7622A單硫酸酯或二硫酸酯及其可藥用鹽、其製備方法、含有這些化合物的藥物組合物及其使用方法。
文檔編號A61P11/00GK1057655SQ9110432
公開日1992年1月8日 申請日期1991年6月28日 優先權日1990年6月29日
發明者高瀨茂弘, 畑中洋, 江崎正美, 辻井榮作, 岡本正則, 重松伸治, 奧原正國 申請人:藤澤藥品工業株式會社