冷凍乾燥的噻噸酮抗腫瘤劑的製作方法

2023-09-17 21:19:55 3

專利名稱：：冷凍乾燥的噻噸酮抗腫瘤劑的製作方法1.發明領域本發明是關於冷凍乾燥的抗腫瘤劑水性非胃腸給藥溶液。更具體地說，本發明是關於冷凍乾燥的噻噸酮(thioxanthenone)抗腫瘤水劑。2.已報告的進展許多以治療或診斷用途為目的的常規藥物和蛋白質，在水溶液中都不穩定，而需要轉變成固體產品。對於藥物產品，為了使之具有必需的穩定性，冷凍乾燥是最常用的處理方法之一。由於種種原因，生物活性劑很少以其純品形式被冷凍乾燥。為了某些特定目的，例如為了pH緩衝，提高穩定性或滲透壓平衡，通常需要加入其它化學成分。在設計冷凍乾燥程序時，主要由作為整體的製劑控制過程中的參數。因此，製劑中的任何改變，不僅是活性劑本身含量的改變，都將要求操作過程作進一步調整。除了出於上述原因加入的賦形劑之外，冷凍乾燥處理通常還需要摻入更多的添加劑，以便有助於冷凍乾燥過程本身，或者為了在以後的貯存和運輸過程中，使冷凍乾燥的填料能保持機械強度。這樣一些賦形劑被稱為lyoprotectants或穩定劑。穩定劑的用途將在下述參考文獻中作例證說明。國際申請No.PCT/US89/04099(WO90/03784)描述了一種冷凍乾燥的組合物，它包含一種多肽和一種具有使之穩定/增溶量的選自如下的環糊精β-和γ-環糊精的羥丙基衍生物，羥乙基衍生物，葡糖基衍生物，麥芽糖基衍生物和麥芽三糖基衍生物。美國專利No.4,983,586公開了一種用於減少非胃腸給藥時，親脂性藥物和/或水-不穩定性藥物在注射部位出現沉澱的發生率的方法，包括以含有大約20％-50％羥丙基-β-環糊精的藥物水溶液給藥。對多種藥物提出了權利要求，包括抗腫瘤藥，鎮靜劑，安定藥，抗驚厥藥，抗抑鬱藥，安眠藥，肌肉弛緩藥，解痙劑，抗炎症藥，抗凝劑，強心藥，血管擴張劑和抗心律不齊藥。美國專利No.5,298,410公開了幾種冷凍乾燥的生物活性物質製劑，其中的穩定劑是一種環糊精衍生物，以及一種如磷酸鈉，醋酸鈉和碳酸鈉的緩衝劑。此製劑還可任選地加入蔗糖或海藻糖。冷凍乾燥的起始物通常是一種不飽和的水溶液，而最後的產品是固體。整個過程包括除去99％以上的水分。在冷卻過程中，水溶液被冷凍濃縮，而水是以冰的形式被除去。整個過程包括幾次相轉變，例如液-固相轉變和固-氣相轉變，認為這種轉變對於確保有效的處理和形成穩固的產品是重要的。當溫度降低時，在冰晶核自發形成之前，溶液起初將被過冷(即冷卻至平衡狀態凍結溫度以下)。冰晶核形成和冰晶生長是一個複雜的過程，其速度取決於冷卻速度，溶液濃度和其它一些因素。過程的這個步驟將在很大程度上決定最後乾燥產品的質地。在凍結過程中，溶劑以越來越濃縮的形式遺留在殘存的液相中，濃縮程度可由相平衡狀態圖來確定。最後，溶液將成為飽和狀態，在此時，溶劑的固相也將形成。這樣，該系統將由冰晶和溶劑晶體的混合物組成。最初為了輔助冷凍乾燥而加入的賦形劑，通常只起了二種功能中的一種作用。填充劑是單純地用於增加整個固體的含量，以便得到機械性能更堅硬的乾燥產品。這些賦形劑在冷凍乾燥過程中，優選地是在冰凍階段必須能夠從溶液中結晶出來，因為它僅作為一種分散相，它們對產品的穩定性只有不確定的作用。而另一方面，穩定劑則在冷凍-濃縮過程中提供化學保護作用，並且有助於玻璃態的形成，它們還使乾燥的填料具有機械強度。玻璃態轉變溫度是全部固體物質化學成分的函數。儘管在以前的研究中、以物理-化學基本原理用於正確地配製冷凍乾燥產品的方法受到了相當廣泛的注意(參見例如Franks，F.冷凍乾燥物理學，化學，工程學和經濟學的綜合，Jap.J.FreeseDrying，38，5-16(1992))，但是，僅根據物理-化學原理還不足以使本領域的技術人員能研製出滿足理想目標的最終產品。顯然，正如本發明的結果所表明，艱苦的探索和/或意外的發現，仍然是可藉以產生適當產品的現實基礎。通過艱苦的探索我們現在已發現，可以將噻噸酮抗腫瘤化合物製成冷凍乾燥的藥物製劑，再溶解後則成為可注射的製劑，但當將這種化合物在通常的藥物賦形劑中給藥，例如以片劑和膠囊劑口服給藥，則不能完全符合一個有效產品的要求。並發現這種冷凍乾燥製劑是穩定的，在延長的貯存期內未發生降解/改變。發明概述根據本發明，在此提供了用於治療哺乳動物腫瘤的再溶解冷凍乾燥製劑，它含有a)下文所定義的噻噸酮抗腫瘤劑，大約1-50mg/ml，優選的是大約10-20mg/ml；b)選自甘露糖醇和蔗糖的穩定劑，大約10mg/ml-125mg/ml，優選的是大約30mg/ml-100mg/ml；c)大約0.025-0.25M乳酸鹽緩衝液，優選的是乳酸鈉緩衝液，該製劑具有大約3.0-4.5的pH。本發明優選的製劑含有抗腫瘤劑N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸(thioxanthene)-4-基]甲基]-甲磺醯胺，以及作為穩定劑的蔗糖。本發明的再配製冷凍乾燥製劑可對哺乳動物給藥，用於治療腫瘤。發明詳述本發明的冷凍乾燥製劑包含噻噸酮(thioxanthenone)抗腫瘤劑，以及水性賦形劑。抗腫瘤劑根據美國專利No.5,346,917，本發明的抗腫瘤劑具有如結構式(I)的結構，此專利在此被全部引入作為參考其中n是2或3，R1和R2獨立地是低級烷基，Q是一個選自如下的殘基CH2NHR3，CH2N(R4)SO2R7，CH2NHCHO，CH＝N-Ar，C(O)NR5R6，CH2N(R4)C(O)R7，CH2N(C2H5)CHO，CH2N(R4)P(O)(O-低級烷基)2，CH2N＝CH-N(R9)(R10)，CH2N(R4)C(O)CF3，和CH2N(R4)C(O)OR7，R3是H或低級烷基，R4是H，低級烷基，或Ar，R5是H，低級烷基，或Ar，R6是H或低級烷基，R7是低級烷基，或Ar，R8是H，低級烷基，低級烷氧基，或羥基，Ar是苯基，或者是被甲基，甲氧基，羥基，滷素或硝基取代的苯基，前提條件是當n是2，R1和R2是乙基，R8是H，以及Q是CH2NHSO2Ar時，此Ar基不能夠被甲基或滷素在第4位單基取代，R9和R10獨立地是低級烷基，或者其可藥用的酸加成鹽或溶劑化物。此化合物對治療哺乳動物的腫瘤是有效的。優選的抗腫瘤劑是結構式(II)代表的抗腫瘤劑其中n是2或3，R1和R2獨立地是低級烷基，Q是一個選自如下的殘基CH2NHR3，CH2NHCHO，CH＝N-Ar，C(O)NR5R6，CH2N(R4)C(O)R7，CH2N(C2H5)CHO，CH2N(R4)P(O)(O-低級烷基)2，CH2N＝CH-N(R9)(R10)，CH2N(R4)C(O)CF3和CH2N(R4)C(O)OR7，R3是H或低級烷基，R4是H，低級烷基或Ar，R5是H，低級烷基或Ar，R6是H或低級烷基，R7是低級烷基，或Ar，R8是H，低級烷基，低級烷氧基，或羥基，Ar是苯基，或者是被甲基，甲氧基，羥基，滷素或硝基取代的苯基，以及R9和R10獨立地是低級烷基，或者其可藥用的酸加成鹽或溶劑化物。代表性化合物將在下述實施例中說明實施例11-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(N-苯基甲亞氨醯基)噻噸-9-酮(IR1＝R2＝Et，Q＝CH＝N-C6H5，R8＝H，n＝2)將1-[[2-(二乙氨基)-乙基]氨基]-9-氧代-噻噸-4-甲醛17.7g(50mmol)和苯胺15.1g(150mmol)在100ml甲苯中的混合物，以迪安-斯達克榻分水器回流加熱8小時。以氯仿/己烷/異丙胺10∶l0∶2作流動相，在氧化鋁板上作薄板層析顯示出不完全反應。蒸餾除去甲苯，加入25ml苯胺，再將此混合物回流加熱4小時。加入50ml二甲苯，並將此反應物再回流加熱3小時。用真空法除去溶劑和剩餘的苯胺，殘餘物用苯重結晶，產生19.9g粗品。將此粗品用大約1.5L己烷重結晶，產生15.8g(86％)產品，熔點125-126°。實施例2N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHCHO，R8＝H，n＝2)將35.4g(0.1mol)1-[[2-(二乙氨基)-乙基]氨基]-9-氧代-噻噸-4-甲醛，420ml甲醯胺和50ml(1mol)甲酸的溶液在160°加熱1小時。冷卻後將反應物注入2L水中，並用約50ml35％氫氧化鈉溶液鹼化。過濾出膠質沉澱物，並作真空乾燥處理。將此乾燥的沉澱物溶解於大約1.5L熱乙酸乙酯中，用活性炭處理，並使之冷卻結晶。過濾出產品，用乙酸乙酯洗，然後乾燥，得到29.0g(75％)產品，熔點154-155°。實施例3N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基甲醯胺(IVR1＝R2＝Et，R4＝Me，R8＝H，n＝2)按照類似於實施例2的方法，從35.4g(0.1mol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代-噻噸-4-甲醛，394gN-甲基甲醯胺，和50ml甲酸製備出24.6g所述N-甲基甲醯胺。產品用150ml丙酮重結晶，熔點為127-130°。實施例44-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻噸-9-酮(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NH2，R8＝H，n＝2)將24.4g(64mmol)實施例2製備的甲醯胺在240ml2N鹽酸中的溶液，在蒸汽浴上加熱1小時。使反應物冷卻至室溫，用35％氫氧化鈉水溶液鹼化，並通過過濾收集生成的黃色沉澱。將該產品溶解於苯中，用活性炭處理，用硫酸鎂乾燥，過濾並共沸除去痕跡量水分。通過加入鹽酸乙醚液，使乾燥的殘留物從甲醇和異丙醇中結晶出。將生成的固體用甲醇重結晶幾次，得到10.6g作為二鹽酸鹽的產品，熔點270-272°。實施例51-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)-甲基]噻噸-9-酮(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHCH3，R8＝H，n＝2)按照與實施例4完全相似的方法，從14.6g(37mmol)實施例3製備的N-甲基甲醯胺和150ml2N鹽酸，得到了作為半水合二鹽酸化物的甲胺10.5g。此產品的熔點為241-243°。實施例6N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHSO2CH3，R8＝H，n＝2)將在實施例4所製備胺的游離鹼10.65g(30mmol)溶於100ml吡啶中，置於冰浴中冷卻，並一次加入4g(35mmol)甲基磺醯氯。將此混合物在室溫下攪拌2小時，並注入含有2g氫氧化鈉的750ml水中。過濾收集暗黃色的沉澱物，用水洗，並真空乾燥過夜。通過對濾液加入過量氫氧化鈉，再次得到產物，過濾出所形成的固體。乾燥後合併沉澱物，並用苯重結晶，得到6.4g所需甲磺醯胺，熔點169-170°。實施例71[[2′-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-甲醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CONH2，R8＝H，n＝2)將74g(0.23mol)1-[[2-(二乙氨基)-乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-甲醛和74g(1.06mol)羥胺鹽酸化物在400ml吡啶和400ml乙醇中的懸液回流加熱0.5小時，再加入70ml水，得到均質溶液。將此溶液再加熱2小時，然後在室溫下靜置14小時。生成的結晶肟被過濾出，達到一定量產率，熔點215-218°。將123g所述肟在180ml乙酸酐中，在蒸汽浴上作短暫加熱，形成溶液。將此溶液冷卻，加入100ml1.8MHCl的乙醚液，形成的懸液再以500ml乙醚稀釋。將此懸液在0°下靜置14小時，並過濾。使此殘留物(123g，熔點109-112°)在250ml二甲苯中作成淤漿狀，並回流加熱20分鐘。將此混合物冷卻，過濾得到71.3g腈，熔點265℃。取10g這種腈置於200ml濃H2SO4中，在室溫下攪拌3天。然後用濃NH4OH中和此反應物，並過濾出殘留物。將此殘留物在溫熱的EtOAc/EtOH中消化，再過濾，然後從冷卻液中結晶出產品，熔點241-243°。將產品溶解於乙醇中，並加入1NHCl乙醇溶液。得到6g鹽酸醯胺，熔點271-272°。實施例8N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸--基]甲基]N-甲基甲磺醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2N(CH3)SO2CH3，R8＝H，n＝2)將實施例6製備的甲磺醯胺1.5g(3.5mmol)溶於四氫呋喃(60ml)中，置於冰浴內冷卻至0℃，並加入NaH0.16g(4.0mmol)。使反應混合物溫熱至室溫，攪拌10分鐘，然後加入甲基碘0.25ml(4.0mmol)。再將反應混合物在室溫下攪拌24小時，然後真空除去溶劑。通過柱層析純化殘留物，在矽膠柱上，先用氯仿(100％)洗脫，然後用1％異丙胺/氯仿洗脫，得到1.15g(74％)N-甲基甲磺醯胺黃色粉末，熔點175-177℃。也可將此游離鹼在甲醇中用甲磺酸處理，得到其甲磺酸鹽，熔點194-195.5℃(此後被稱為實施例8a)。實施例9N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]苯磺醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHSO2Ph，R8＝H，n＝2)按照基本上類似於實施例6中所述的方法，通過在2.54g(7.15mmol)實施例4所製備胺的游離鹼，吡啶(50ml)和苯磺醯氯(1.1ml，8.62mmol)反應後，在甲醇中用甲磺酸處理得到了以甲磺酸鹽形式存在的該苯磺醯胺2.4g(57％)。再將此產品用乙醇重結晶。實施例10N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代-噻噸-4-基]甲基]乙醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHC(O)CH3，R8＝H，n＝2)按照基本上類似於實施例6中所述的方法，從4.15g(11.7mmol)實施例4所製備胺的游離鹼，吡啶(60ml)和乙醯氯(0.82ml，11.53mmol)，得到了2.3g(52％)該乙醯胺橙色固體。將此產品用丙酮重結晶，熔點182-183℃。實施例11N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]苯甲醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHC(O)Ph，R8＝H，n＝2)按照基本上類似於實施例6中所述的方法，從1.17g(3.29mmol)實施例4所製備胺的游離鹼，吡啶(25ml)和苯甲醯氯(0.42ml，3.62mmol)，得到了1.02g(68％)該苯甲醯胺黃色粉末。通過柱層析將該產品純化，在矽膠柱上，先以氯仿(100％)、然後以1％異丙胺/氯仿洗脫，隨後用乙酸乙酯重結晶。該產物熔點為161-163℃。實施例12N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]二乙基磷醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHP(O)(OEt)2，R8＝H，n＝2)將2.28g(6.41mmol)實施例4所製備胺的游離鹼，CH2Cl2(50ml)，和三乙基胺(2ml)的溶液，在0℃用氯代磷酸二乙基酯(1.0ml，6.9mmol)處理。此反應混合物先在0℃被攪拌2小時，然後在室溫下攪拌1小時。真空除去溶劑後，殘留物通過柱層析純化，在矽膠柱上，先用乙酸乙酯(100％)洗脫，然後用5％甲醇/乙酸乙酯洗脫，最後用甲醇/異丙胺/乙酸乙酯(5/5/90)洗脫，再以乙酸乙酯重結晶後得到2.28g(72％)該二乙基磷醯胺黃色固體，熔點108-110℃。實施例13N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-乙基甲醯胺(IVR1＝R2＝Et，R4＝Et，R8＝H，n＝2)將2.0g(5.6mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代-噻噸-4-甲醛，N-乙基甲醯胺(24.0ml)和甲酸(3.0ml，79.5mmol)的溶液，在170℃加熱4小時。使反應混合物冷卻之後，注入水中，並用10％氫氧化鈉鹼化。藉助於過濾收集，得到固體，並用水洗。在氯仿/水中提取該固體殘留物，分離出有機層，復蓋在Na2SO4上乾燥。真空除去溶劑後，殘留物通過徑向層析法純化，用異丙胺/甲醇/乙酸乙酯(0.5/1/98.5)洗脫，得到1.32g(57％)所述N-乙基甲醯胺橙色固體，熔點75-77℃。實施例141-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(乙氨基)-甲基]噻噸-9-酮(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHC2H5，R8＝H，n＝2)按照基本上類似於實施例4中所述的方法，從1.3g(3.2mmol)實施例13製備的N-乙基甲醯胺和10.8ml2N鹽酸，得到了作為二鹽酸化物的所需乙胺1.29g(92％)。將此產物用乙醇/四氫呋喃重結晶，此產物在160℃熔化(分解)。實施例151-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(二甲氨基亞甲基-氨甲基)-噻噸-9-酮三鹽酸化物(IR1＝R2＝Et；Q＝CH2N＝CHN(Me)2；R8＝H；n＝2)將N-[[1-[[2-(二乙氨基)]乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲醯胺(3g)用50ml2NHCl稀釋後，溶液在蒸汽浴上加熱90分鐘。將此混合物冷卻，用35％氫氧化鈉溶液鹼化至pH10，然後被萃取進入氯仿。分離出有機層，使之過濾通過K2CO3，再被真空濃縮，並使生成的粗製品在60℃與二甲基甲醯胺縮二甲醇反應過夜。真空除去過剩的二甲基甲醯胺縮二甲醇後，用快速層析法(矽膠，氯仿/iPrNH2/甲醇(98∶1∶1)純化該所需的標題化合物。將此產品溶解於2.5MHCl/乙醇(100ml)中，在冰浴中冷卻，過濾，並乾燥，得到2.38g1-[[2-(二乙氨基)]乙基]氨基]-4-(二甲氨基亞甲基氨甲基)-噻噸-9-酮三鹽酸化物橙色固體，熔點258-260℃。實施例16N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-三氟乙醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHC(O)CF3，R8＝H，n＝2)將4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]-氨基]噻噸-9-酮(2.91g，8.19mmol)溶於80ml二氯甲烷，在0℃用三氟乙醯氨(溶於甲苯的14.75ml0.61M溶液，9.0mmol)處理，然後將反應混合物在0℃攪拌90分鐘。將此混合物真空濃縮，殘留物用快速層析法純化(矽膠柱，先用EtOAc(100％)洗脫，然後用2％異丙胺/EtOAc洗脫)，然後用乙酸乙酯重結晶，得到2.52g(68％)該產品的游離鹼，熔點189-190℃(實施例16)。將此游離鹼溶解於甲醇中，用甲磺酸(0.55g，5.72mmol)處理，用丙酮重結晶後，得到其甲磺酸鹽，熔點152-154℃(實施例16a)。實施例17(a)將硫代水楊酸(50.14g，0.33mol)和乙酸銅(5.0g)在二甲基亞碸(500ml)中的混合物回流加熱，並一次加入碳酸鉀(54.3g)。然後藉助注射器加入3-溴氯苯(42ml，0.36mol)，並將此混合物回流加熱3小時。將反應混合物注入水中，用活性炭處理，並過濾通過硅藻土。濾液用濃HCl酸化，過濾收集生成的沉澱，用水洗沉澱，在60℃真空乾燥，得到75.01g(85％)2-[(3-氯苯基)硫代]苯甲酸。(b)在0℃，攪拌下，將2-[(3-氯苯基)硫代]苯甲酸(75.00g，0.28mol)加至濃H2SO4中，在超過1小時的時間內分幾批加入。將此混合物再攪拌2小時，注入濃NH4OH(500ml)的水(2.5L)溶液中，藉助過濾收集生成的沉澱物，用水洗，並在60℃真空乾燥，得到65.9g(95％)1-氯和3-氯噻噸-9-酮混合物。(c)將1-氯和3-氯噻噸-9-酮(14.01g，56.8mmol)，吡啶(20ml)，以及二乙氨基丙基胺(5.13g，39.4mmol)的混合回流加熱直至反應完成。撤除加熱，真空除去溶劑，殘留物用氯仿萃取，並通過柱層析純化，在矽膠柱上先用氯仿洗脫，除去未反應的3-氯異構體，然後用5％異丙胺/氯仿洗脫，得到5.10g(54％)1-[[3-(二乙氨基)丙基)]氨基]噻噸-9-酮橙色膠狀物。(d)將1-[[3-(二乙氨基)丙基]氨基]-噻噸-9-酮(5.10g，15.0mmol)，甲醛水溶液(160ml)和5N乙酸(0.8ml)的混合物，在90℃加熱16小時，再加入5N乙酸(0.20ml)，隨之加入甲醛水溶液(50ml)，然後將此混合物在90℃再加熱約57小時。用水將混合物稀釋，用5NNaOH鹼化，並用氯仿萃取。有機層復蓋在Na2SO4上乾燥，並使之通過矽膠柱，先用2％甲醇/氯仿洗脫，然後用異丙胺/甲醇/氯仿(2/2/96)洗脫，得到3.82g(69％)1-[[3-(二乙氨基)丙基]氨基]-4-(羥甲基)-噻噸-9-酮橙色/棕色膠狀物。(e)1-[[3-(二乙氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-甲醛(IIR1＝R2＝Et，R8＝H，n＝3)將1-[[3-(二乙氨基)丙基)]氨基]-4-(羥甲基)-噻噸-9-酮(3.82g)，甲苯(60ml)和二氧化錳(7.5g)的混合物回流加熱6.5小時。將混合物冷卻至室溫後，使之過濾通過硅藻土，真空濃縮濾液，得到3.3g(87％)1-[[3-(二乙氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-甲醛棕色油狀物。(f)1-[[3-(二乙氨基)丙基)]氨基]-4-(甲氨基甲基)噻噸-9-酮二鹽酸化物·3/2水合物(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHMe，R8＝H，n＝3)將1-[[3-(二乙氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-甲醛(3.3g，8.96mmol)和3g甲酸在50ml，N-甲基甲醯胺中的溶液回流加熱2小時。用5ml5N氫氧化鈉溶液鹼化此混合物，並在氯仿萃取(3次，每次150ml氯仿)。有機層用硫酸鈉乾燥，真空濃縮，粗製油狀物被溶解於3NHCl水溶液(50ml)中，並在蒸汽浴上加熱3小時。將上述混合物冷卻，用30ml35％NaOH鹼化，在氯仿(3×150ml)中萃取，有機層用硫酸鈉乾燥，真空濃縮後得到棕色油狀物。將此棕色油狀物用快速層析法純化(矽膠柱，先用5％三乙基胺/Et2O洗脫，然後用5％Et3N/EtOAc洗脫，再用三乙基胺/甲醇/EtOAc(5∶5∶90)洗脫)，得到1.1g1-[[3-(二乙氨基)-丙基]氨基]-4-(甲氨基甲基)噻噸-9-酮鮮橙色膠狀物。通過在乙醚中用6NHCl處理，將此膠狀物轉變成相應的二鹽酸化物，得到1.04g其二鹽酸化物3/2水合物黃色粉末，熔點222-224℃。實施例18(a)4-(氨甲基)-1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基-9-氧代噻噸-9-酮二鹽酸化物·1/2水合物(IR1＝R2＝Me，Q＝CH2NH2，R8＝H，n＝2)將N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲醯胺(6.2g)和2NHCl(52ml)的混合物，加熱至100℃，持續1.5-2小時。再將此反應混合物注入冰水中，用35％NaOH鹼化，並用氯仿萃取。有機層用水洗(二次)，然後用鹽水洗(1次)，用Na2SO4乾燥，並真空濃縮。殘留物通過柱層析純化，在矽膠柱上，先用乙酸乙酯洗脫，然後用0.5％三乙基胺/EtOAc洗脫，再用2％三乙基胺/EtOAc洗脫，再用CHCl3/1-2％異丙胺洗脫，最後用CHCl3/l-2％異丙胺/2％甲醇洗脫，得到3.3g(58％)該產品的游離鹼。將一部分這種游離鹼(1.25g)溶解於甲醇中，並在甲醇(6ml)中用濃HCl(3.3ml)處理，得到1.2g該產品的二鹽酸化物·1/2水合物，熔點213℃(分解)。(b)N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基)]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺甲磺酸鹽(IR1＝R2＝Me，Q＝CH2NHSO2Me，R8＝H，n＝2)將4-(氨甲基)-1-[[2-(二甲氨基)]乙基]氨基]-噻噸-9-酮(2g，6mmol)置於在氮氣下的30ml乾燥吡啶中，在室溫下攪拌直至完全溶解。使此溶液在冰浴中冷卻，滴加溶於冷吡啶中的甲磺醯氯0.52ml(6.7mmol)，並將此混合物在室溫下攪拌1小時。再將此反應混合物注入含有0.51g氫氧化鈉的500ml水中，用氯仿萃取，有機層用水(2次)和鹽水洗，並用無水硫酸鈉乾燥。將此混合物過濾，並真空濃縮。殘留物(2.5g)在乙醚中攪拌，過濾，乾燥後得到2gN-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺，熔點126-127℃。將此游離鹼溶於甲醇中，用甲磺酸(0.48g)處理，得到2.0g(67％)該產品的甲磺酸鹽，熔點168℃(分解)。(c)將1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-4-(羥甲基)-噻噸-9-酮(9.2g，0.028mol)在甲苯(322ml)中的混合物加熱至大約60℃，然後加入氧化錳(MnO2，16g)，再將此混合物在60℃加熱1小時。過濾此混合物，真空濃縮其濾液，得到7.9g(87％)1-[[2-(二甲氨基)-乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-甲醛(結構式IIR1＝R2＝Me，R8＝H，n＝2)。(d)N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲醯胺(IR1＝R2＝Me，Q＝CH2NHCHO，R8＝H，n＝2)將1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-甲醛(4.75g)，甲醯胺(66.5ml)和甲酸(7.6ml)的混合物，在170℃加熱4小時。將此混合物注入冰水(250ml)中，然後用35％NaOH鹼化，用氯仿萃取。有機層先用水洗(2次)，然後用鹽水洗(1次)，再將此溶劑用Na2SO4乾燥，並真空濃縮，得到6.3gN-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲醯胺。(e)4-(氨甲基)-1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-9-酮二鹽酸化物·1/2水合物(IR1＝R2＝甲基，Q＝CH2NH2，R8＝H，n＝2)將N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲醯胺(6.2g)和2NHCl(52ml)的混合物1加熱至100℃，持續1.5-2小時。將此反應混合物注入冰水中，用35％NaOH鹼化，用氯仿萃取。有機層用水洗(2次)，然後用鹽水洗(1次)用Na2SO4乾燥，並真空濃縮。殘留物通過柱層析純化，在矽膠柱上，先用乙酸乙酯洗脫，然後用0.5％三乙基胺/EtOAc洗脫，再用2％三乙基胺/EtOAc洗脫，再用CHCl3/l-2％異丙胺洗脫，最後用CHCl3/1-2％異丙胺/2％甲醇洗脫，得到3.3g(58％)該產品的游離鹼。取一部分此游離鹼(1.25g)溶於甲醇中，在甲醇(6ml)中用濃HCl(3.3ml)處理，得到1.2g該產品的二鹽酸化物·合1/2水，熔點213℃(分解)。(f)N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺甲磺酸鹽(IR1＝R2＝Me，Q＝CH2NHSO2Me，R8＝H，n＝2)將4-(氨甲基)-1-[[2-(二甲氨基)]乙基]氨基]-噻噸-9-酮(2g，6mmol)置於在氮氣下的30ml乾燥吡啶中，在室溫下攪拌，直至完全溶解。使此溶液在冰浴中冷卻，滴加溶於冷吡啶中的甲磺醯氯0.52ml(6.7mmol)，並將此混合物在室溫下攪拌1小時。再將此反應混合物注入含有0.51g氫氧化鈉的500ml水中，用氯仿萃取，有機層用水(2次)和鹽水洗，並用無水磷酸鈉乾燥。將此混合物過濾，並真濃縮。殘留物(2.5g)在乙醚中攪拌，過濾，乾燥後得到2gN-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺，熔點126-127℃。將此游離鹼溶於甲醇中，用甲磺酸(0.48g)處理，得到2.0g(67％)該產品的甲磺酸鹽，熔點168℃(分解)。實施例19(a)按照類似於在實施例17(c)中所述的方法，從1-氯和3-氯噻噸-9-酮(15.15g，61.4mmol)，吡啶(20ml)，以及二甲氨基丙基胺(6.01g，58.7mmol)的混合物，製備了6.83g1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]噻噸-9-酮。(b)按照類似於在實施例17(d)中所述的方法，從1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-噻噸-9-酮(6.8g，21.8mmol)，甲醛水溶液(175ml)和冰醋酸(0.75ml)，得到了6.74g(90％)1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基-4-(羥甲基)噻噸-9-酮。(c)按照類似於在實施例17(e)中所述的方法，從1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-4-(羥甲基)-噻噸-9-酮(6.7g)，甲苯(80ml)和MnO2(12.15g)，得到了4.2g1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-甲醛(結構式IIR1＝R2＝Me，R8＝H，n＝3)。將此產物通過柱層析純化，在矽膠柱上，先用CHCl3(100％)洗脫，然後用1％異丙胺/CHCl3洗脫。(d)將N-甲基甲醯胺(50ml)，甲酸(5.2g)和1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-甲醛(4.14g，12.16mmol)的混合物回流加熱3小時。再將此混合物用水(250ml)稀釋，用35％NaOH鹼化，並用CHCl3萃取(3次，每次CHCl3150ml)。將此有機層用Na2SO4乾燥，然後使之通過矽膠柱，先用CHCl3(100％)洗脫，然後用2％異丙胺/CHCl3洗脫，得到3.93g(84％)N-[[1-[[3-(二甲氨基)-丙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基甲醯胺(結構式IVR1＝R2＝Me，R4＝Me，R8＝H，n＝3)。(e)1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-4-[[甲氨基甲基]噻噸-9-酮二鹽酸化物·一水合物(R1＝R2＝Me，Q＝CH2NHMe，R8＝H，n＝3)將上面製備的N-甲基甲醯胺(3.83g，10mmol)在40ml3NHCl中的溶液，在蒸汽浴上加熱4小時，再用35％NaOH溶液中和，並在冰上冷卻1小時。將液體層輕輕倒去，粗製產物溶解於氯仿中，並使之過濾通過矽膠柱(用氯仿，1％異丙胺/氯仿洗脫)，得到2.38g所需的胺橙色膠狀物。此產物通過溶解在甲醇中，用濃HCl處理，被轉變成相應的鹽酸鹽，得到0.98g所需的二鹽酸化物一水合物，熔點228-229℃。實施例20(a)將1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4甲醛(4.75g，0.15mol)，N-甲基甲醯胺(48ml)和甲酸(3.9ml)的混合物，在170℃加熱4.5小時，然後使其在室溫下靜置大約64小時。再將此反應混合物注入水(250ml)中，用35％NaOH鹼化，用CHCl3萃取(3次)。分離出有機層，先用水洗(2次)，然後用鹽水洗(1次)，並用Na2SO4乾燥。真空除去溶劑後，得到5.75gN-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基甲醯胺(結構式IVR1＝R2＝Me，R4＝Me，R8＝H，n＝3)。(b)1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)-甲基]噻噸-9-酮二鹽酸化物·5/4水合物(IR1＝R2＝Me，Q＝CH2NHMe，R8＝H，n＝2)按照類似於實施例19e的方法，從5.7g(15.4mmol)實施例20(a)製備的相應N-甲基甲醯胺和50ml2NHCl，通過快速層析法純化其游離鹼之後(矽膠柱，先用氯仿洗脫，然後用0.5％異丙胺/氯仿洗脫，再後用1％異丙胺/氯仿洗脫)，得到了1.8g1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]噻噸-9-酮。通過在甲醇中用濃HCl處理，將此游離鹼轉化成相應的二鹽酸鹽·5/4水合物，得到1.8g(30％)此產品，熔點177℃(分解)。實施例21(a)將[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-甲醛(3.6g，10.57mmol)溶解於含有3.6g甲酸的50ml甲醯胺中，再將此溶液回流加熱1.5小時，然後使之在室溫下靜置過夜。用水(400ml)將此反應混合物稀釋後，用3ml5NNaOH溶液鹼化，快速攪拌30分鐘，再過濾出沉澱的固體，用水洗，乾燥後得到3.1g(79％)N-[[1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基甲醯胺(結構IR1＝R2＝Me，Q＝CH2NHCHO，R8＝H，n＝3)，為黃色粉末。(b)將實施例21(a)製備的甲醯胺(2.98g，8.07mmol)在40ml3NHCl中的溶液，在蒸汽浴上加熱4小時，使之冷卻至室溫後，再在冰上冷卻，並用5NNaOH溶液中和至pH8。形成的不均勻混合物用氯仿萃取(5×100ml)，將其有機層用硫酸鈉乾燥，並過濾通過矽膠柱(先用5％三乙基胺/乙醚洗脫，然後用1-5％異丙胺/氯仿洗脫)，得到2.3g(83％)4-(氨甲基)-1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]噻噸-9-酮(結構式IR1＝R2＝Me，Q＝CH2NH2，R8＝H，n＝3)。(c)N-[[1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺甲磺酸鹽·1/2水合物(IR1＝R2＝Me，Q＝CH2NHSO2Me，R8＝H，n＝3)將甲磺醯氯(0.51ml，6.59mmol)加到實施例21(b)所製備的胺(2.2g，6.44mmol)溶於吡啶的冰冷溶液中，並在室溫下將此形成的混合物攪拌過夜。用氯仿稀釋此混合物，並使之通過大矽膠柱，用5％三乙基胺/EtOAc洗脫，得到1.32gN-[[1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-甲磺醯胺黃色粉末。將此游離鹼溶解於甲醇(10ml)，並在甲醇中用甲磺酸(0.31g，1當量)處理，得到1.38g該甲磺酸鹽·1/2水合物，為橙色固體，熔點＞107℃。實施例22N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基-乙磺醯胺甲磺酸鹽(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2N(CH3)SO2Et，R8＝H，n＝2)將2.03g(5.49mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]噻噸-9-酮(按照實施例5中所述方法製備的)和三乙胺在45ml二氯甲烷中的溶液冷卻至0℃，並用乙磺醯氯(0.74g，5.76mmol)處理。在0℃放置15分鐘後，再在室溫下將此反應混合物攪拌72小時。真空濃縮此混合物，將殘留物溶於氯仿中，並使之通過矽膠柱純化(先用氯仿，然後用1％三乙胺/氯仿洗脫)，得到2.43g(96％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基乙磺醯胺。將此磺醯胺用乙酸乙酯重結晶，並在異丙醇中用甲磺酸處理，得到此產品的甲磺酸鹽，熔點159-161℃。實施例23N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基](對-甲氧基)苯磺醯胺甲磺酸鹽(IR1＝R2＝Et,Q＝CH2NHSO2C6H4-p-OMe，R8＝H，n＝2)將1.40g(3.94mmol)4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻噸-9-酮(按照實施例4中所述的方法製備的)溶於含有1.5ml三乙胺的30ml氯仿中，並將此溶液冷卻至0℃，再用對-甲氧苯磺醯氯(0.83g，4.02mmol)處理。在0℃放置10分鐘後，再將此反應混合物在室溫下攪拌2小時。真空除去氯仿，將殘留物溶解於含有1ml三乙胺的100ml二氯甲烷中，並在室溫下，攪拌中再加入對-甲氧苯磺醯氯(0.85g)處理。真空濃縮此混合物，殘留物通過矽膠柱純化(用1％三乙胺/氯仿洗脫)，得到1.57gN-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-對-甲氧基苯磺醯胺。將此磺醯胺在異丙醇/乙酸異丙酯/甲醇中用甲磺酸(0.3g)處理，得到1.07g其甲磺酸鹽，熔點133-137℃。實施例24N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]乙磺醯胺甲磺醯鹽(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHSO2Et，R8＝H，n＝2)將2.5g4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻噸-9-酮(按照實施例4中所述方法製備的)在30ml吡啶中的溶液在冰浴中冷卻15分鐘，快速滴加0.95g乙磺醯氯在5ml吡啶中的溶液，並將此反應混合物在室溫下攪拌1小時。再將此混合物注入含有0.75gNaOH的75ml水中，用氯仿萃取，然後用水(2次)和鹽水洗有機層，並將此有機層用硫酸鈉乾燥。真空濃縮此混合物，將殘留物在乙醚中攪拌，乾燥(40℃/0.1mm)，得到1.7gN-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]乙磺醯胺，熔點105℃(分解)。將此磺醯胺溶於甲醇中，在甲醇中用甲磺酸處理，得到1.61g(42％)其甲磺酸鹽，熔點135℃(分解)。實施例25N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-乙基-甲磺醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2N(Et)SO2Me，R8＝H，n＝2)將2.10g(5.48mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(乙氨基)甲基]噻噸-9-酮(按照實施例14的方法製備的)在30ml二氯甲烷中的溶液冷卻至0℃，用2ml三乙胺和甲磺醯氯(0.7ml)處理，並將此反應混合物在室溫下攪拌6小時。真空除去溶劑，將殘留物溶解於氯仿中，並使此溶液通過矽膠柱純化(先用氯仿，然後用2％三乙胺/氯仿洗脫)。將分離出的黃色固體用乙酸乙酯重結晶，乾燥後得到1.11g(44％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-乙基甲磺醯胺黃色粉末，熔點172-176℃。實施例26N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-3，4-二氯苯磺醯胺甲磺酸鹽·1/2水合物(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHSO2C6H3-3，4-二氯，R8＝H，n＝2)將2.5g(7mmol)4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻噸-9-酮(按照實施例4中所述方法製備的)，在氮氣下加入到溶解於35ml乾燥吡啶的3，4-二氯苯磺醯氯(1.84g，7.5mmol)溶液中，並將此反應混合物在室溫下攪拌15分鐘，然後使之靜置大約72小時。再將此反應混合物注入含有0.75gNaOH的75ml水中，並用氯仿萃取。有機層先用水(2次)和鹽水洗，再用硫酸鈉乾燥。真空除去氯仿後，殘留物用乙醇重結晶，得到1.24gN-[[1-[[2-(二乙氨基)]乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-3，4-二氯苯磺醯胺，熔點95℃(分解)。將此游離鹼溶解於甲醇中，並在甲醇中用甲磺酸處理，得到其甲磺酸鹽·1/2水合物，熔點55℃(分解)。實施例27N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-2-氟苯磺醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHSO2C6H4-2-F，R8＝H，n＝2)將1.36g(3.83mmol)4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻噸-9-酮(按實施例4中所述方法製備的)溶於含有1ml三乙胺的25ml二氯甲烷中，並將此溶液冷卻至0℃，再用2-氟苯磺醯氯(0.84g，4.32mmol)處理，攪拌反應混合物幾小時。真空除去溶劑後，將殘留物溶於氯仿中，並用快速層析法純化(矽膠柱，先用氯仿，隨後用1％三乙胺/氯仿洗脫)。真空除去溶劑後，用乙酸乙酯重結晶此產物，得到1.08g(55％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-2-氟苯磺醯胺橙色粉末，熔點125-127℃。實施例28N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-丙基-甲磺醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2N(C3H7)SO2Me，R8＝H，n＝2)通過用戊烷研磨(4次)，將油從氫化鈉在礦物油中的60％懸液0.2g中除去。在氮氣中，攪拌下將乾燥的二甲基甲醯胺(DMF、40ml)加入氫化物中，然後在氮氣中將2gN-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺(實施例6)加入到該反應混合物中，同時攪拌，並將此混合物加熱至50℃持續2小時。再將上面的混合物在冰浴中冷卻15分鐘，加入溶於少量DMF中的丙基胺0.87g，然後在室溫下將此混合物攪拌過夜。用35ml水攪拌此混合物，過濾，其殘留物用水洗，並乾燥(50℃/0.1mm/P2O5)，得到2.17gN-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-丙基甲磺醯胺，熔點142-143℃。實施例29N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基-苯磺醯胺甲磺酸鹽(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2N(Me)SO2C6H5，R8＝H，n＝2)將5.32g(14.4mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]噻噸-9-酮(按實施例5中所述方法製備的)在100ml二氯甲烷中的溶液冷卻至0℃，並用三乙胺(5ml)和苯磺醯氯(2ml，15.67mmol)處理，將此反應混合物攪拌2小時。真空濃縮此混合物，使其殘留物通過矽膠柱純化，(先用氯仿洗脫，然後用1/2％-1％異丙胺/氯仿洗脫)，得到6.24g黃色膠狀物。將此產物溶解於乙酸乙酯中，真空除去溶劑後得到6.06g(83％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基苯磺醯胺。將此磺醯胺(2.5g)懸浮於異丙醇中，用甲磺酸(0.51g)處理，生成2.63g其甲磺酸鹽，熔點171-174℃。實施例30(a)先將溴(85ml)，然後將水(1L)分別加入到間-茴香酸(250g，1.67mol)與乙酸(1L)的混合物中。將此混合物加熱回流，在冰浴中冷卻，並藉助過濾收集沉澱產物，用水洗，得到305.7g(79％)2-溴-5-甲氧基苯甲酸，熔點154-156℃。(b)將K2CO3(23g)加入到3-氯苯硫酚(20g，138mol)，乙酸銅(1.8g)和DMF(200ml)的混合物中。將此混合物加熱至150℃，持續15-20分鐘，然後分幾次加入2-溴-5-甲氧基苯甲酸(35.8g，0.155mol)。再將此混合物加熱過夜，然後注入水(600ml)中，過濾，並用活性炭處理濾出液，再過濾，並用HCl稀釋。再用過濾法收集生成的沉澱物，用水洗，在50℃，在P2O5上真空乾燥，得到27.6g2-[(3-氯苯基)硫基]-5-甲氧基苯甲酸。(c)在氮氣中，將2-[(3-氯苯基)硫基]-5-甲氧基苯甲酸(27g，0.092mol)加入到冷硫酸(89ml)中，分幾次加入，持續1.5-2小時以上。將此混合物在室溫下攪拌過夜，然後注入含有濃NH4OH(218ml)和冰的水(900ml)中。過濾收集沉澱的固體，在50℃，在P2O5上真空乾燥，得到21g(42％)1-氯和3-氯-7-甲氧基-噻噸-9-酮的混合物。(d)將1-氯和3-氯-7-甲氧基-噻噸-9-酮(20.7g)，吡啶(69ml)和二乙氨基乙胺(16.1g，0.138mol)的混合物，在115℃，氮氣中加熱20小時。真空除去溶劑後，殘留物通過柱層析法純化，在矽膠柱上，先用CHCl3(100％)洗脫，然後用1％異丙胺/氯仿洗脫，得到11.22g1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基噻噸-9-酮。(e)將1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基噻噸-9-酮(11.2g，0.031mol)，37％甲醛(277ml)和5N乙酸(4.6ml)的混合物在100℃加熱3小時。使反應混合物冷卻後過濾，將濾出液注入冰水(600ml)中，並用35％NaOH鹼化。用氯仿萃取此混合物(3次)，再用鹽水洗，並在Na2SO4上乾燥。真空除去溶劑後，殘留物通過柱層析純化，在矽膠柱上，依次用25％CHCl3/己烷，50％CHCl3/己烷，75％CHCl3/己烷，0.5％異丙胺/CHCl3洗脫，得到8.8g(73％)1-[[2-(二乙氨基)-乙基]氨基]-4-(羥甲基)-7-甲氧基噻噸-9-酮。(f)將1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(羥甲基)-7-甲氧基噻噸-9-酮(8.8g，0.023mol)在甲苯(268ml)中的溶液，在氮氣中加熱至60℃，然後加入MnO2(13.2g)。將此混合物加熱過夜，然後過濾，並將濾液真空濃縮，得到7.05g(81％)1-[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-甲醛(結構式IIR1＝R2＝Et，R8＝7-OCH3，n＝2)。(g)將1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-甲醛(3g，7.8mmol)和1.5ml甲酸在25.5mlN-甲基甲醯胺中的溶液在氮氣中，加熱至170℃，持續8小時，同時攪拌。將此反應混合物注入160ml冰水中，用35％NaOH溶液鹼化後用氯仿萃取(3次)。有機層用水(2次)和鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥，真空除去溶劑後得到3g(89％)所需的N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基甲醯胺(結構式IVR1＝R2＝Et，R4＝Me，R8＝7-OCH3，n＝2)。(h)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]-7-甲氧基-噻噸-9-酮(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHMe，R8＝7-OMe，n＝2)將實施例30(g)製備的N-甲基甲醯胺(3.0g)溶於2NHCl水溶液(24ml)中，在氮氣中，在100℃攪拌加熱2小時。將上述混合物冷卻後，注入125ml冰水中，用35％NaOH液鹼化，用氯仿萃取，先用水洗(2次)，再用鹽水洗。將此有機層在硫酸鈉上乾燥，並真空濃縮後得到3.1g粗製產物。將此產物在乙醚中研磨，其濾出液通過幾支快速層析柱純化(矽膠柱，依次用50％己烷/氯仿，氯仿，和0.25-0.5％異丙胺/氯仿洗脫(柱1)，先用氯仿，再用1％異丙胺/1％MeOH/CHCl3洗脫(柱2)，以及先用CHCl3，再用0.5％異丙胺/CHCl3洗脫(柱3))，得到0.746g1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]-7-甲氧基-噻噸-9-酮。實施例31(a)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基甲醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHCHO，R8＝7-OMe，n＝2)將1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-甲醛(3.6g，0.0094mol)，甲醯胺(48ml)和甲酸(6ml)的混合物，在N2中加熱至170℃，持續8小時。再將此混合物注入冰水中，用35％NaOH鹼化後用氯仿萃取。分離出有機層，先用水(2次)，然後用鹽水洗，並在Na2SO4上乾燥，真空濃縮後得到3.88gN-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-N-甲基甲醯胺。(b)4-(氨甲基)-1-[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-噻噸-9-酮(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NH2，R8＝7-OCH3，n＝2)將實施例31(a)製備的甲醯胺(3.88g)和2NHCl(32ml)的混合物，在氮氣中，在100℃攪拌加熱2小時。使上述混合物冷卻後，注入水中，用10％NaOH液鹼化後用氯仿萃取，再先後用水和鹽水洗有機層。將此有機層在硫酸鈉上乾燥，真空濃縮後得到3.6g粗製產物。將此產物溶解於氯仿中，藉助快速層析法純化(矽膠柱，先用己烷/氯仿(50∶50)洗脫，然後用在己烷/氯仿(50∶50)中的1％異丙胺洗脫)，得到1.75g所需的產物。(c)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-甲磺醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHSO2Me，R8＝7-OMe，n＝2)先將1.75g(0.0045mol)實施例31(b)製備的醯胺溶於在冰浴內冷卻的22.5ml吡啶中，然後在氮氣中，攪拌下向此溶液滴加0.39ml(0.005mol)甲磺醯氯在少量吡啶中的溶液，並將此反應混合物在室溫下攪拌2小時。再將此混合物注入含有0.38gNaOH的375ml水中，用氯仿萃取，其有機層用水和鹽水洗。再將此氯仿層在硫酸鈉上乾燥，真空除去此溶劑，殘留物被真空乾燥後得到1.61g(77％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺，熔點144℃(分解)。實施例32(a)在N2中，分幾次將N2CO3(23g)加入到3-氯苯硫酚(20g，0.138mol)，乙酸酮(1.75g)和DMF(199ml)的混合物中。先將此混合物加熱至150℃，然後加入2，5-二溴苯甲酸(43.5g)。再將此混合物加熱這夜，然後注入水中(600ml)，過濾，用活性炭處理濾液後再次過濾。將此濾出液先用濃HCl酸化，再用CHCl3萃取，用鹽水洗此有機層，並在Na2SO4上乾燥。真空除去溶劑後得到28.9g2-[(3-氯苯基)硫基]-5-溴苯甲酸。(b)將2-[(3-氯苯基)硫基]-5-溴苯甲酸(28.4g)和濃硫酸(80ml)的混合物，先在0℃攪拌，然後在室溫下攪拌過夜。再將此混合物注入含有濃NH4OH(199ml)的冰水(850ml)中，藉助過濾收集沉澱產物，並在50℃真空乾燥，得到15.0g1-氯和3-氯-7-溴-噻噸-9-酮的混合物。(c)將1-氯和3-氯-7-溴噻噸-9-酮(13.6g)，吡啶(108ml)，以及N，N-二乙基乙二胺(16.3ml)的混合物加熱至115℃，持續20小時。真空除去溶劑後，殘留物通過柱層析純化，在矽膠柱上，先用CHCl3(100％)，然後用1％異丙胺/CHCl3洗脫，得到9.3g1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴噻噸-9-酮。(d)將1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴噻噸-9-酮(9.3g，22.9mmol)，37％甲醛溶液203ml，以及5N乙酸溶液3.4ml的混合物，在氮氣中加熱至100℃，持續過夜。將此混合物冷卻至室溫，並藉助於過濾除去生成的固體。用水稀釋濾出液，並用35％NaOH液鹼化，用氯仿萃取。其有機層用鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥，真空除去溶劑後，得到10g油狀物。將此油狀物溶於二氯甲烷中，並過濾，真空除去此溶劑後，其羥甲基類似物粗品用快速層析法純化(矽膠柱，依次用25％氯仿/己烷，氯仿/己烷(1∶1)，25％氯仿/己烷，CHCl3(100％)，和0.5-1％異丙胺/氯仿洗脫)，得到3.2g1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(羥甲基)-7-溴噻噸-9-酮。(e)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻噸-4-甲醛(IIR1＝R2＝Et，R8＝7-Br，n＝2)將3.2g(7.34mmol)實施例32(d)製備的醇和4.3gMnO2在85ml甲苯中的混合物，在氮氣中，60℃加熱1小時。過濾此混合物，並用CHCl3洗，用真空法濃縮合併的濾出液，得到3g黃色固體。在乙醚中研磨此黃色固體，過濾，乾燥後得到2.7g(94.3％)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻噸-4-甲醛，熔點145-146℃。(f)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHCHO，R8＝7-Br，n＝2)將2.7g(6.2mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻噸-4-甲醛，31.7ml甲醯胺，和3.6ml甲酸的混合物，在氮氣中加熱至170℃，同時攪拌持續8小時，然後此混合物在室溫下靜置72小時。將此混合物注入150ml冰水中，用35％NaOH液鹼化，過濾出固體產物，並用水洗。將此固體產物溶於氯仿中，用鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥，真空除去溶劑後得到2.85g所需的甲醯胺，為黃色/橙色固體，熔點132℃(分解)。(g)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(氨甲基)-7-溴噻噸-9-酮(IR1＝R2＝o，Q＝CH2NH2，R8＝7-Br，n＝2)將2.85g(6.6mmol)上述甲醯胺(實施例32(f))在26ml2NHCl溶液中的混合物，在氮氣中加熱到100℃，持續2小時，然後使混合物在室溫下靜置過夜。將此反應混合物注入200ml冰水中，用35％NaOH溶液鹼化，用氯仿萃取。用水和鹽水洗其有機層，在硫酸鈉上乾燥，真空濃縮後得到2.67g黑色油狀物。用快速層析法純化此黑色油狀物(矽膠柱，先用1250ml己烷/氯仿(1∶1)洗脫，然後用在己烷/氯仿(1∶1)中的1％異丙胺洗脫)，得到1.87g(70％)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(氨甲基)-7-溴噻噸-9-酮，熔點79-82℃。實施例33N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHSO2Me，R8＝7-Br，n＝2)在氮氣中將1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4(氨甲基)-7-溴噻噸-9-酮(1g，2.3mmol)溶於11.5ml乾燥吡啶中，在冰浴內攪拌15分鐘，並滴加溶於冷吡啶中的0.2ml(2.6mmol)甲磺醯氯，在室溫下攪拌此混合物。將此反應混合物注入200ml水中，在冰水中加入0.19g氫氧化鈉，用氯仿萃取。用水(2次)和鹽水洗其有機層，並在無水硫酸鈉上乾燥。過濾此混合物，真空濃縮，在乙醚中攪拌其殘留物，過濾並乾燥後得到1.02gN-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-甲磺醯胺，熔點134-139℃。實施例34N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]氨基甲酸甲酯(IR1＝R2＝Et；Q＝CH2NHCOOMe；R8＝H；n＝2)將2.94g(8.27mmol)4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻噸-9-酮溶解於含有5ml三乙胺，並冷卻至0℃的50ml二氯甲烷中，向此溶液加入0.7ml(9.06mmol)氯甲酸甲酯，並將此混合物攪拌2.5小時。真空除去其溶劑後，將殘留物懸浮於氯仿中，並通過快速層析法純化(矽膠柱，先用氯仿，然後用1％異丙胺/氯仿洗脫)，得到2.36g(69％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]-氨基甲酸甲酯，為黃色固體，熔點129-131℃。實施例351-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]-7-羥基噻噸-9-酮(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHMe，R8＝7-OH，n＝2)將1.6g(4mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲基-氨基)甲基]-7-甲氧基-噻噸-9-酮(按實施例30(h)中所述方法製備的)在10ml48％HBr中的溶液加熱至110℃，持續5小時。冷卻後，將此反應混合物用飽和碳酸氫鈉中和，用氯仿萃取(3次，每次100ml氯仿)。得到一種不溶於水或氯仿的黑色膠狀物，將它溶解於甲醇，並與氯仿溶液結合。真空濃縮除去溶劑後得到1.67g深橙色固體物。用快速層析法純化此橙色固體產物(矽膠柱，用異丙胺/甲醇/氯仿(1∶1∶98)洗脫，隨後用第二支矽膠柱，以異丙胺/MeOH/CHCl3(2∶2∶96)洗脫)得到0.56g(36％)1-[[2-(二乙氨基)乙基]-氨基]-4-[(甲氨基)甲基]-7-羥基-噻噸-9-酮，熔點167-169℃。實施例36N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-基]-甲基]氨基甲酸甲酯(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHCOOMe，R8＝7-OMe，n＝2)將1.55g4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基噻噸-9-酮溶解於含有2ml三乙胺，並冷卻至0℃的40ml氯仿中，向此溶液加入0.45ml氯甲酸甲酯，將此混合物在室溫下攪拌幾小時。真空除去溶劑後，殘留物用快速層析法純化(矽膠柱，先用氯仿，然後用在氯仿/己烷(1∶1)中的1％三乙胺洗脫)，得到1.2gN-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-基]-甲基]氨基甲酸甲酯，用乙酸乙酯重結晶後，形成0.79g亮黃色固體物，熔點131-132℃。實施例37N-[[1-(2-二乙氨基)乙基]氨基]-7-羥基-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺·3/4水合物(IR1＝R2＝Et，Q＝CH2NHSO2CH3，R8＝7-OH，n＝2)在-78℃將1NBBr3在CH2Cl2(1.75ml)中的溶液加到N-[[1-[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺(0.5g)在CH2Cl2(45ml)中的溶液中。將此混合物溫熱至室溫，攪拌過夜，然後注入含有35％NaOH(8ml)的冰水(250ml)中。對此混合物先用稀HCl酸化，然後用固體Na2CO3鹼化，再用乙酸乙酯萃取。分離出有機層，用鹽水洗，用Na2SO4乾燥，並真空濃縮。殘留物用柱層析法純化，在矽膠柱上，用5％MeOH/EtOAc洗脫，得到0.28g(58％)N-[[1-(2-二乙氨基)乙基]氨基]-7-羥基-9-氧代噻噸-4-基]甲磺醯胺·3/4水合物，熔點78℃(分解)。按照如下的方法，測定了本發明代表性實施例化合物對小鼠的抗腫瘤活性。先將動物混合在一起，用12號標準套針皮下植入30-60mg腫瘤碎片，在未選擇分配到不同的治療組或對照組之前，將動物再次混合。對於早期治療，是在植入腫瘤後1-5天內開始化學治療，此時細胞的數量比較少(107-108個細胞)。對於晚期治療，是推遲到腫瘤變得比較大(重量200-300mg)時才開始化學治療。一個300mg的腫瘤總共含有大約3×108個細胞。對於90％動物，在已知晚期試驗中的腫瘤都在2.5倍的大小範圍之內。每周用卡尺測量腫瘤一次(或者對較快生長的腫瘤每周測量2次)。當它們的腫瘤達到1500mg時(也就是在它們能引起動物不安之前)將小鼠活殺。腫瘤的重量可根據二維測量來估算。當對照組腫瘤大小達到大約700-1200mg(組中位數)時，對治療組和對照組進行測定。確實每組動物的平均腫瘤重量(包括0)。T/C值(治療組腫瘤重量比對照組腫瘤重量)的百分數是抗腫瘤療效的指標按照癌症治療部分的藥物評價分部(DrugEvalnationBranchoftheDivisionofCancerTreatment(NCI))的標準，T/C等於或小於42％被認為有顯著的抗腫瘤活性。T/C值＜10％被認為表明有非常顯著的抗腫瘤活性。認為最低體重下降(組平均數)大於20％，或者大於20％的藥物-致死，指示是極端毒性的劑量。對於胰管腺癌#3的結果顯示在表1中，對於結腸腺癌#38的結果顯示在表2中。表1實施例號#T/C(％)體重下降(g)*藥物致死總劑量(mg/kg)靜脈內或口服101.601739202.00576271.60144400.40570501.60222601.60124703.21/5400800.80304981.6013951002.405401100.8085512363.2012981302.404311401.204481502.0039016(a)21+0.80117117(f)172.00106018(e)821.0012818(f)05.22/525619(e)43.4061020(b)100.4038321(c)04.502082203.2046523202.4012122402.302032504.6028826132.20654275+0.8025942802.805522962.40240331(c)05.6024830(h)01.4088033282.0012813403.602483600.401553770032*平均體重是25g表2實施例號#T/C(％)體重下降(g)*藥物致死總劑量(mg/kg)靜脈內注射202.806005112.90960605.03/7132641.71/7827160.608401004.00340(b)242.30200(b)220.60160(b)24.02/5740(a)71.20460(a)232.00865(b)1102.001709(a)00.80885(a)390.80518(b)16(a)201.201000271.5067018(e)512.24/518031.001202504.84/5852(c)00.60529(c)00.80327(c)*平均體重是20.5-25.5g(a)＝口服給藥(b)＝腹膜內給藥(c)＝靜脈注射給藥3-6天及口服給藥7-10天通過靜脈內輸注給藥，試驗了實施例5的化合物對抗多種其它腫瘤的作用，如表3中所示，並且，以300mg/kg口服給藥，此化合物具有抗結腸腺癌#38的活性。通過靜脈內快速濃注給藥，試驗了實施例6的化合物對抗多種其它腫瘤的作用，如表4中所示。實施例8(a)的化合物對抗多種腫瘤的試驗結果如表5中所示。實施例36的化合物對抗多種腫瘤的試驗結果如表6所示。本發明代表性化合物對抗乳腺癌16/C/RP的試驗結果如表7中所示。本發明代表性化合物對抗P388/阿黴素抗性白血病的試驗結果如表8中所示。表3總劑量腫瘤mg/kg給藥方案最低體重下降g/小鼠T/C值(％)無腫瘤的觀察天數HumanAdeno960輸注16小時，第7天，第20天-0.416％1/433SquamousLung#125-0.416％0/4132600-0.415％0/533-0.415％0/5132乳腺癌16/C720輸注4小時，第1天，第4天-2.018％0/713454-1.216％0/713乳腺癌16/C/Adr*960輸注3小時，第1天，第4天-2.823％0/727結腸腺癌#38732快速濃縮3-15次-2.00％1/5100477-2.89％0/5100結腸腺癌#38960輸注4小時，第6天，第3天-2.911％2/720-2.911％1/7100600-2.026％0/720-2.026％0/7100結腸癌#51720輸注3小時，第3天，第7天-1.18％0/550454-2.812％0/750胰腺癌03222輸注3小時-1.601/4108*阿黴素抗性的表4總劑量腫瘤mg/kg給藥方案最低體重下降T/C值(％)無腫瘤的觀摩天數結腸腺癌#3882第6-9天快速濃注-1.712/713251-1.2181/7132乳腺癌16/C82第1-4天快速濃注-3.060/52351-1.2130/523結腸癌51/A96第3-6天，第9天，11天快速-3.0140/632濃注66-2.3280/632胰腺癌0282第1-4天快速濃注-2.0230/52851-1.2420/528胰腺癌03124第3-4天，6-14天快速濃注-1.603/524579-1.001/5245表5總劑量最低體重下降T/C值腫瘤mg/kg給藥途徑給藥方案g/小鼠(％)藥物致死無腫瘤觀摩天數結腸腺癌#38340腹膜內注射3-10天-2.0005/5168196腹膜內注射3-10天-0.0001/5168112腹膜內注射3-10天+0.430--168550口服3-7天-2.8005/5168275口服3-7天-0.4003/5168結腸癌51/A500口服3-7天-4.604/50/531250口服3-7天-1.61600/531乳腺癌16/C/Adr*340靜脈注射靜注2次/天1-4-7.1325/60/622→口服天口服5天284靜脈注射靜注2次/天1-4-2.3613/60/622→口服天口服5-6天183靜脈注射靜脈2次/天口-4.3390/40/422→口服服5-6天*阿黴素抗性表6總劑量給藥途徑給藥方案最低體重下降T/C值藥物致死無腫瘤觀察天數腫瘤mg/kgg/小鼠(％)胰腺癌03420靜脈內注射3-6天-5.603/52/545240靜脈內注射3-6天-0.4005/545155靜脈內注射3-6天-0.4005/545結腸腺癌#38330靜脈內注射3-7天-3.2005/533220靜脈內注射3-7天-0.8005/533147靜脈內注射3-7天0005/533乳腺癌16/C363靜脈內注射1-4天-2.422/52/521242靜脈內注射1-4天-1.281/50/521161靜脈內注射1-4天-0.4900/521人MX-1乳腺癌297靜脈內注射1-6天-2.43900/526132靜脈內注射1-6天-0.82700/526(a)注意由於尾靜脈損傷，在注射給藥2-4天後，某些注射改為口服。表7實施例號No.總劑量給藥途徑給藥方案最低體重下降T/C值藥物致死無腫瘤觀察天數mg/kgg/小鼠(％)30(H)900靜脈內輸注輸注1天，4天0291/60/563600靜脈內輸注輸注1天，4天-0.7230/50/563400靜脈內輸注輸注1天，4天-1.0460/50/56331(C)224靜脈注射2次/天，3-6-4.4001/528天156.8靜脈注射2次/天，3-6-1.6500/528天109.6靜脈注射2次/天，3-6-1.6601/528天表8實施例號在第0天靜脈內注射植總劑量給藥給藥最低體重下降藥物ILSLog10殺腫腫瘤觀察No入的P388/Adr細胞數mg/kg途徑方案g/小鼠致死％瘤細胞數細胞天數10105520靜脈內輸第1，4天-3.753/7543.50/7129注3小時105320靜脈內輸第1，4天-1.750/5231.50/5129注3小時105200靜脈內輸第1，4天-1.50/780.50/7129注3小時13105450靜脈內輸第1，4天-3.02/7382.50/7129注3小時105300靜脈內輸第1，4天-1.750/7151.00/7129注3小時105150靜脈內輸第1，4天-1.750/880.50/8129注3小時30(H)106450靜脈內輸第1，4天-2.30/7625.30/743注3小時表8(續)實施例號在第0天靜脈內注射植總劑量給藥途徑給藥最低體重藥物ILSLog10殺腫腫瘤觀察No.入的P388/Adr細胞數mg/kg方案下降g/小鼠致死％瘤細胞數細胞天數106280靜脈內輸注第1天-1.70/7696.02/7433小時31(C)106248靜脈注射第1，4天-3.01/6000/643→口服*106112靜脈注射第1，4天-2.70/6000/643→口服*34106320靜脈內輸注第1天-3.65/5中毒LD1000/5233.5小時198靜脈內輸注第1天-1.20/541.73.30/523.5小時123靜脈內輸注第1天-1.20/58.30.70/5233.5小時76靜脈內輸注第1天-0.40/5000/5233.5小時*由於尾靜脈損傷注射4天後改為口服。％ILS＝生成期增加的百分數。在進行上述試驗過程中，研究者遇到了非在注射給藥之前新鮮配製的注射液降解的問題。因此，進行了提供在放置中不降解注射液的研究，這樣，該抗腫瘤劑就可以用於臨床治療腫瘤病人。具有細胞毒抗腫瘤活性的實施例6化合物被用於此項研究，它具有如下結構化學名稱為N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺。為便於引用，此化合物以後有時將被稱為WIN33377。用在安瓿中以2.5mg/ml的濃度溶於檸檬酸鹽緩衝液(pH5.5)的最後穩定化溶液製劑，對此化合物進行了臨床評價研究。為了達到可接受的貯存壽命，將此製劑在冷藏下貯存(2-8℃)。在較高的溫度下貯存會導致形成非常難溶解的二聚體形式，在低濃度就會沉澱出。為了提供能在室溫貯存，市場可接受的產品，可能要求製成冷凍乾燥製劑。使用了三種製劑，如表9中所示表9在加入穩定劑之前，先製成WIN33377的水溶液製劑。對此溶液以不同的濃度加入三種穩定劑甘露糖醇(FisonAR級，M/2405)，葡聚糖(SigmaChemicalCo.醫用級D-4751)，以及蔗糖(ProlaboNormapurAR級，27480.294)。採用了與亞室溫輔助部件相適應的Perkin-ElmerDSC-II。在Dell210微機上用DARES軟體進行數據收集和分析。如廠商說明書中所述，用銦和水作參照物進行溫度校準。將液體待分析樣品密封在大不鏽鋼平鍋內。在27℃把它們裝入熱量計中，並使之在-53℃和27℃之間進行冷/熱循環作用。加熱和冷卻的速度是5度/分鐘。冷凍乾燥的樣品也被密封在大不鏽鋼平鍋內，但是是在乾燥的氮氣環境中，以便減少這種幹塊吸潮的可能性。為了提高所有信號的強度，在-53℃-127℃的溫度範圍內採用了10度/分鐘的加熱和冷卻速度。在一臺實驗用冷凍乾燥機內進行冷凍乾燥。用高效液相色譜(HPLC)技術，通過分析WIN33377試樣或者其總色譜雜質，對冷凍乾燥樣品進行穩定性評價。試樣分析法用HPLC儀(Kontron)，在如下條件下進行色譜分析色譜柱PartisilODS-3,5μm，10×0.46cm流動相A∶B(77∶23v/v其中A＝0.5M乙酸銨緩衝液，pH4.8，和B＝乙腈流速2.0ml/min檢測波長258nm溫度40℃注入體積20μl總色譜雜質分析法以如下條件，用梯度洗脫HPLC技術對總色譜雜質進行測定色譜柱HypersilBDS，C18,5μm，25×0.46cm內徑流動相A7.71g/l乙酸銨+6.0ml/l冰醋酸+10ml/l三乙胺，調pH4.8B乙腈梯度條件時間(分鐘)％A％B0.00802030.00802060.00604070.00604070.01802080.008020流速2.0ml/min檢測波長438nm溫度40℃注入體積25μl製劑研製在試圖製備冷凍乾燥製劑之前，實施任何冷凍乾燥過程的第一步，是充分了解此溶液的物理化學特性。按照上述程序，通過DSC(差示掃描量熱法)對如表9中給出的三種製劑樣品進行了分析。在表10中概括地顯示了其相關的轉化溫度。表10發現這三種混合物發現出不同的物理化學性能發現基於乙酸鹽的製劑是結晶體狀，基於檸檬酸鹽的製劑一部分是結晶體狀，而其餘部分形成玻璃狀，基於乳酸鹽的製劑形成玻璃狀。這三種類型狀態中，部分結晶對冷凍乾燥導致最大的問題。部分結晶通常是不可預測的，並且，在藥瓶內配製藥劑的情況下，它可能導致不同藥瓶之間的冷凍產品結構有顯著差別。這又可能引起不同藥瓶之間的乾燥效果不同。最後結果是同一批次內產品質量不同，例如不同藥瓶之間的穩定性，再水化作用和貯存壽命不同。不同藥瓶之間的水分含量不同是此問題最直接的指示。如檸檬酸鹽製劑所表現的不完全結晶作用，可通過對此混合物加入適當的玻璃態形成賦形劑來防止。這種賦形劑將阻止其它材料形成結晶，而導致形成玻璃態。加入玻璃態形成劑的量將取決於結晶材料的性質和結晶的速度。在本研究中是拒絕使用檸檬酸鹽，主要是由於在檸檬酸鹽緩衝液中，藥物雖然在配製初期是溶解了，但是，在4℃或25℃貯存過程中，幾小時內就會結晶出來。因為冷凍乾燥並不影響藥物的溶解度，所以在使用時，當此檸檬酸鹽製劑被再水化、可能會遇到某種溶解困難，加之甚至在給藥過程中也可能出現散發的結晶作用。所有三種製劑的總溶劑含量都較少，大約僅1％-2％w/w。這種水平不足以維持適當的填料結構，因需要再配製。結晶體製劑1需要加入填充劑。另一方面，製劑3(玻璃狀的)需要加入玻璃態形成劑。對於結晶體，選擇的穩定劑是甘露糖醇，對於玻璃態製劑，穩定劑是蔗糖或葡聚糖。它們是以50mg/ml的濃度被加入到表9所列舉的溶液中。然後通過DSC對所配製溶液的樣品進行分析。DSC測定得出了這三種製劑的玻璃態轉化溫度值。這些溫度相當於瓦解和變質最小時可允許的最高初始乾燥溫度。含葡聚糖的系統具有最高的玻璃態轉化溫度，並且當冰的升華速度隨溫度升高按指數變化增加時，將使乾燥周期最短。但是，WIN33377需要重複給藥，在這種情況下，葡聚糖可能會引起過敏性休克反應。因此，出於醫療原因，這種製劑被排除了。對於其它二種製劑發現了如下情況。對於蔗糖/乳酸鹽製劑，初期乾燥應使在大約-40℃進行。這允許有5℃的安全範圍(對目前使用的乾燥器是足夠的)，以便補償乾燥器內的溫度梯度。每個藥瓶裝有10ml產品，裝填深度大約1.63cm。藥瓶的直徑為2.8cm，使產品有6.15cm2的表面積。對於這些樣品，總產品容量的有效升華速度計算為0.22g/瓶/h，其總產品容量由大約9.4g冰組成，其餘部分是由固體和未凍結的水組成。在-40℃，以0.226g/h的速度，完成升華需要大約42小時。對於甘露糖醇/乙酸鹽混合製劑，初期乾燥必須在低於通過DSC對乙酸鹽製劑所測定的最低轉化溫度下進行，即在-30℃下進行。藥瓶的裝填容積和直徑是相同的，但是，此刻升華作用可能在較高的溫度下進行，對於這些樣品，計算的有效升華速度是0.670g/瓶/h。同上面一樣，必須升華9.4g冰，而現在初期乾燥時間減少為14小時。按上述將產品在所推薦的溫度下保持一段時間，假定在升華面的溫度等於冰核心的溫度，這將確保能完成初始的乾燥。然後，必須使產品的溫度按逐漸增加的放置溫度上升，以便除去產品中殘留的水分。冷凍乾燥產品的製備表11顯示了一些冷凍乾燥的方法參數，可任選地用於分別以甘露糖醇和蔗糖穩定化的乙酸鹽和乳酸鹽緩衝的溶液。表11製劑甘露糖醇蔗糖藥瓶容量(ml)2020裝填容量(ml)1010裝填深度(cm)1.631.63初期乾燥溫度(℃)-30-40初期乾燥時間(h)1442第二期乾燥中溫度上升的速度(度/h)44最後乾燥溫度(℃)2525初期乾燥中的壓力(mbar)0.30.1用如下的方法對本發明的製劑進行冷凍乾燥。根據劑量要求，選擇裝填某種製劑所需容量的藥瓶。在選擇容納某一劑量的藥瓶時，裝填量不應越過藥瓶容量的某一分數。例如，不應將5ml裝填量裝入小於10ml的藥瓶內。裝瓶後，將藥瓶裝入乾燥室，並直接放在預冷至4℃的冷凍架上。將熱電偶安置在若干藥瓶內，以便監測冷凍乾燥過程中製劑的溫度。先使藥瓶溫度與架子溫度(4℃)平衡，然後，對於蔗糖的製劑使架子溫度降至-40℃，對於甘露糖醇的製劑，使之降至-30℃。分別對於蔗糖和甘露糖醇的製劑，一旦達到了-40℃和-30℃，使藥瓶在此溫度維持大約2小時，以便使製劑完全冷凍(對於甘露糖醇的製劑，在此階段包括一個退火步驟)。經過這段時間之後，再使冷凝器螺旋管冷卻至-60℃，並開動真空泵，對冷凝器室抽真空，隨之進行初期乾燥和第二期乾燥過程。在初期乾燥過程中，將冷凝器與乾燥室之間的主閥打開，對乾燥室抽真空，排出氮氣，使之達到大約100微米汞柱的壓力。冷凍乾燥周期的這部分時間(初級乾燥期)需要大約40-50小時。當冷凍混合物中的冰全部消失了，初期乾燥過程即告完成。在第二期乾燥過程中，為了除去在初期乾燥過程中未除去的所有殘留水分，使溫度從-20℃或-30℃上升至+25℃。這段第二期乾燥時間需要大約15小時。完成第二期乾燥過程之後，將主閥關閉，並對乾燥室充入氮氣，這樣使乾燥室內保持有輕微的真空度。然後啟動加塞機，將塞子壓下進入藥瓶口。使乾燥室與大氣壓平衡後，打開乾燥室門，取出藥瓶，並進行卷邊密封。然後將藥瓶貯存在規定的溫度下，直到以水再溶解用於注射。穩定性研究在30℃，40℃和50℃貯存至4周後，對乾燥產品的穩定性進行評價。對此樣品實施試樣研究和色譜雜質研究。對於甘露糖醇的製劑結果表明，在直至50℃的溫度下存放該產品4周後，藥物試樣沒有顯著改變。總色譜雜質從起始的0.35％w/w，在30℃增加至0.54％w/w，在40℃增加至0.49％w/w，在50℃增加至0.56％w/w。該產品的水分含量為2.4％w/w，凝結外觀也令人滿意，即就是說未見有產品崩坍現象。但是，5個藥瓶中的二個未能重新水合成澄清的黃色溶液。能夠重溶解形成澄清溶液的藥瓶，比不能形成澄清溶液(pH5.6)的藥瓶具有較低的pH(5.0)。認為這種pH偏移是由於冷凍乾燥過程中乙酸的蒸發。對蔗糖製劑(含5％殘留水分)的穩定性研究表明，在30℃和40℃存放4周後，試樣或總色譜雜質都沒有改變。在50℃存放的藥品顯示出試樣含量減少，總色譜雜質含量增加。在各個溫度下存放2周後，可見冷凍乾燥的凝塊有些崩坍。WIN33377/甘露糖醇製劑的穩定性顯示在表12中，WIN33377/蔗糖製劑的穩定性顯示在表13中。表12開始時2周後4周後溫度藥物雜質藥物雜質藥物雜質％W/W％W/W％W/W％W/W％W/W％W/W室溫101.60.35----30℃--100.30.4398.00.5440℃--102.50.54100.90.4950℃--101.00.6598.10.56表13開始時2周後4周後溫度藥物雜質藥物雜質藥物雜質％W/W％W/W％W/W％W/W％W/W％W/W室溫98.40.35----30℃--98.40.3296.80.3340℃--98.20.3198.10.3450℃--96.80.5195.20.87此研究發現了一種適當的冷凍乾燥製劑(乳酸鹽-蔗糖的製劑)，但是，對此還可以進一步最優化，並且可包括另一些最終使用要求。已發現在起始溶液中藥物濃度可增加到20mg/ml，這樣裝填量可以減半，使初級乾燥時間減少。通過加入氯化鈉平衡等滲性也是重要的。因為這種鹽會影響玻璃態轉化溫度(Tg′)，通過DSC對修改的製劑(見表14)進行了測定。其玻璃態轉化溫度測定結果在表15中被給出。表14-用於測定NaCl和蔗糖對緩衝的WIN33377溶液相對影響的待測製劑製劑ABCDWIN3337720.0mg20.0mg20.0mg20.0mg乳酸(0.1M)0.5ml0.5ml0.5ml0.5mlNaOH(0.5M)12μl12μl12μl12μl蔗糖100mg50mg40mg30mgNaCl2.7mg2.7mg3.8mg5.0mg加注射用水至1ml1ml1ml1mlpH3.993.993.993.99表15-對表14中所列製劑測定的玻璃態轉化溫度值製劑Tg′(℃)未加NaCl的對照製劑A-35A-37B-38C-42.5D-45.5可見，加入NaCl使此冷凍濃縮物的玻璃態溫度降低了。NaCl具有比蔗糖低很多的玻璃態轉化溫度(-87℃對-32℃)。因此，當NaCl的重量比率增加(從A到D)，玻璃態轉化溫度則朝向純NaCl的數值下降。向標準的5％蔗糖製劑加入NaCl，導致玻璃態轉化溫度降低2℃。降低蔗糖濃度，以及為了保持等滲性所必須的NaCl濃度補償性增加，將導致玻璃態轉化溫度進一步下降。可以認為，乾燥產品的玻璃態轉化溫度是該產品應該面對的最高溫度。超過玻璃態溫度，將導致填料最終崩坍，使產品變成液體態，在這種情況下，擴散速度將迅速增加，導致活性物質降解。玻璃態轉化溫度取決於水分含量，因此，在某一批次中水分含量的任何改變，都將引起玻璃態轉化溫度改變。這樣，考慮到在某一批次內安全貯存的最高溫度有所差異，為謹慎起見，此產品應貯存在低於所測定玻璃態溫度至少5℃之下。在20ml的藥瓶中，含量WIN33377溶液(100mg)和蔗糖的製劑賦形劑加入量(mg/瓶)WIN33377100.0蔗糖250.0氯化鈉5.00.5M乳酸溶液1.0ml1.0M氫氧化鈉57.0μl注射用水5.0mlpH(範圍3.70-4.30)4.00在30℃和40℃貯存直至6個月的過程中，對此優選的蔗糖製劑進行了穩定評價。試樣分析結果和pH被列舉在表16中。該產品具有1.3％w/w的起始水分含量。在40℃貯存2周之後觀察到產品有崩坍。這是被預料到的，因為這種貯存溫接近於此批產品的玻璃態轉化溫度(42℃)。穩定性結果表明，該產品是化學穩定的，也就是說，在30℃或40℃貯存6個月之後，試樣含量和pH都未見任何改變。表16WIN33377(％w/v)時間溫度(℃)雙份分析pH開始時室溫90.85，90.953.953周後30℃89.13，89.283.9640℃90.14，89.793.942周後30℃90.81，92.363.9540℃88.59，89.493.954周後30℃93.88，91.933.9940℃95.52，95.2400表16(續)WIN33377(％w/v)時間溫度(℃)雙份分析pH6月後30℃90.08，87.684.0240℃88.40，86.754.05由本發明提供的高穩定性，使該產品能貯存在室溫下，並延長了它的貯存壽命。這種冷凍乾燥產品既適合封裝在傳統的玻璃藥瓶內，也適合封裝在預先裝填的注射器內。這種製劑對治療腫瘤大有用處，是迄今未曾有過的。權利要求1.一種用於治療哺乳動物腫瘤的再配製冷凍乾燥製劑，含有a)大約1-50mg/ml具有如下結構式(I)結構的抗腫瘤劑其中n是2或3，R1和R2獨立地是低級烷基；Q是一個選自如下的殘基CH2NHR3，CH2N(R4)SO2R7，CH2NHCHO，CH＝N-Ar，C(O)NR5R6，CH2N(R4)C(O)R7，CH2N(C2H5)CHO，CH2N(R4)P(O)(O-低級烷基)2，CH2N＝CH-N(R9)(R10)，CH2N(R4)C(O)CF3，和CH2N(R4)C(O)OR7，R3是氫或低級烷基，R4是氫，低級烷基或Ar，R5是氫，低級烷基或Ar，R6是氫或低級烷基，R7是低級烷基，或Ar，R8是氫，低級烷基，低級烷氧基，或羥基，Ar是苯基，或者是被甲基，甲氧基，羥基，滷素或硝基取代的苯基，前提條件是當n是2，R1和R2是乙基，R8是氫，以及Q是CH2NHSO2Ar時，此Ar不能被甲基或滷素在第4位單基取代，R9和R10獨立地是低級烷基，或其可藥用的酸加成鹽或溶劑化物；b)大約10-125mg/ml選自甘露糖醇和蔗糖的穩定劑，以及c)大約0.025-0.25M的乳酸鹽緩衝劑，該製劑具有大約3.0-4.5的pH。2.權利要求1的再配製冷凍乾燥製劑，其還含有大約1.0-10.0mg/ml氯化鈉。3.權利要求1的再配製冷凍乾燥製劑，其中所說的乳酸鹽緩衝劑是乳酸鈉。4.一種用於治療哺乳動物腫瘤的再配製冷凍乾燥製劑，含有a)大約1-20mg/ml具有如下結構式(II)結構的抗腫瘤劑其中n是2或3，R1和R2獨立地是低級烷基，Q是一個選自如下的殘基CH2NHR3，CH2NHCHO，CH＝N-Ar，C(O)NR5R6，CH2N(R4)C(O)R7，CH2N(C2H5)CHO，CH2N(R4)P(O)(O-低級烷基)2，CH2N＝CH-N(R9)(R10)，CH2N(R4)C(O)CF3，和CH2N(R4)C(O)OR7，R3是氫或低級烷基，R4是氫，低級烷基或Ar，R5是氫，低級烷基或Ar，R6是氫或低級烷基，R7是低級烷基，或Ar，R8是氫，低級烷基，低級烷氧基，或羥基，Ar是苯基，或者是被甲基，甲氧基，羥基，滷素或硝基取代的苯基，以及R9和R10獨立地是低級烷基，或其可藥用的酸加成鹽或溶劑化物。b)大約30-100mg選自甘露糖醇和蔗糖的穩定劑，c)大約0.025-0.25M的乳酸鹽緩衝劑，該製劑具有大約3.5-4.5的pH。5.權利要求4的再配製冷凍乾燥製劑，其還含有大約1.0-10.0ml/ml氯化鈉。6.權利要求4的再配製冷凍乾燥製劑，其中所說的乳酸鹽緩衝劑是乳酸鈉。7.一種用於治療哺乳動物腫瘤的再配製冷凍乾燥製劑，含有a)1-50mg的N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻噸-4-基]甲基]甲磺醯胺，b)大約0.025-0.25M的乳酸鈉緩衝劑，c)大約10-125mg蔗糖，d)大約1.0-10mg氯化鈉，e)加水至1.0ml。8.一種治療哺乳動物的敏感性腫瘤的方法，該方法包括對哺乳動物給予能有效地縮小該腫瘤的適量權利要求1的製劑。9.一種治療哺乳動物的敏感性腫瘤的方法，該方法包括對哺乳動物給予能有效地縮小該腫瘤的適量權利要求4的製劑。10.一種治療哺乳動物的敏感性腫瘤的方法，該方法包括對哺乳動物給予能有效地縮小該腫瘤的適量權利要求7的製劑。全文摘要公開了幾種用於治療哺乳動物腫瘤的再配製冷凍乾燥製劑,它含有一種與作為穩定劑的甘露糖醇或蔗糖在乳酸鹽緩衝液中組合的噻噸酮抗腫瘤劑。文檔編號A61P35/00GK1201387SQ96198174公開日1998年12月9日申請日期1996年9月12日優先權日1995年9月18日發明者S·布朗,G·S·桑杜申請人:聖諾菲藥品公司