用作蛋白質聚集抑制劑的雜芳基醯胺的製作方法
2023-09-17 07:05:15 7
本發明涉及某些雜芳基醯胺衍生物、包含上述物質的藥物組合物及其使用方法，所述方法包括防止、反轉、延緩或抑制蛋白質聚集的方法和治療蛋白質聚集相關疾病的方法，所述疾病包括神經變性疾病(如帕金森病、阿爾茨海默病、路易體病、帕金森病痴呆、額顳痴呆、亨廷頓病、肌萎縮側索硬化、和多系統萎縮症、以及癌症)。序列表申請人在此提交了符合PCT規則13ter.1(a)至(d)和行政指令，部分208和附錄C的標準的序列表(通過EFS-WEB電子提交)。申請人聲明以ASCII.txt格式的計算機可讀形式記錄並在此提交的信息並不包括超過提交的國際申請的公開內容的內容。申請人要求考慮進入在此通過EFS-WEB提交的按照Rule5.2(a)作為本申請部分的序列表。txt文件標記為699462000840SeqList。在2015年1月27日產生國際申請的序列表格式部分並且含有645個字節。背景老齡化群體的神經變性疾病(如阿爾茨海默病(AD)、帕金森病(PD)和額顳痴呆(FTD))僅在美國和歐盟就影響了超過2000萬人並成為老年人死亡的主要原因之一。這些神經變性疾病之間的共同特點是蛋白質長期積累成神經毒性聚集體。各疾病的特徵是受影響的特定神經元群體、涉及的特定蛋白質聚集體和神經元變性所導致的臨床特徵。研究表明，蛋白質聚集的初始階段涉及靶蛋白的突變或翻譯後修飾(如亞硝化、氧化)，其繼而生成異常構象，促進與類似錯誤摺疊的蛋白質發生相互作用。異常蛋白隨後聚集以形成二聚體、三聚體和更高級的多聚體(也稱作「可溶性低聚體」)，其可能破壞突觸功能。此外，隨後聚集體會固定在細胞膜中並形成球形低聚體(其進而會在膜中形成孔)和/或原纖維或纖維。這些較大的不溶性纖維可能用作生物活性低聚體的儲器。多種證據支持以下見解：蛋白質聚集體的累進積聚與神經變性疾病的發病有因果關係。多種其他蛋白質可在神經變性疾病的患者腦部積聚，如α-突觸核蛋白、Aβ蛋白、Tau和TDP43。這些患者的認知障礙與新皮層和邊緣系統突觸損失緊密相關並且增加的蛋白質聚積水平可能導致這些突觸損失。許多研究聚焦於通過α-突觸核蛋白聚積的詳細機制並且其他澱粉樣前體蛋白(APP)代謝物導致突觸損傷和神經變性。許多研究支持了所有聚集體，也稱為低聚體的形成在神經毒性中起主要作用的假設。這些肽低聚體可組織成二聚體、三聚體、四聚體、五聚體和其他更高級的陣列，其可形成環形結構。高水平的這類低聚體預示著患者痴呆和突觸損失。因為證據表明低聚體而非較小的前體纖維是毒性物質，以特異性方式靶向這些早期聚積過程的化合物可用作PD、AD和相關病症的潛在新療法。各種神經變性疾病包括基於神經毒性蛋白質聚集體的累積。在特發性帕金森病(IPD)、路易體痴呆(LBD)、帕金森病痴呆(PDD)、和多系統萎縮症(MSA)中，神經毒性聚集體由α-突觸核蛋白(SYN)組成，其是正常條件下處於胞內的突觸蛋白。在FTD和肌萎縮側索硬化(ALS)中，神經毒性聚集體源自其他胞內蛋白(如tau、TDP-43或SOD1)。對於特定疾病(如AD)，SYN與主要蛋白質聚集(例如，Aβ蛋白)。在亨廷頓氏病中，聚集體從Htt蛋白的切割產物形成。癌症中，尤其是黑素瘤癌細胞中也涉及α-突觸核蛋白的累積。Pan等，PLoSOne2012，7(9)，e45183。因此，抑制這類累積的化合物可用於治療各種癌症，包括黑素瘤。這些蛋白質累積過程中顯示兩種機制。在第一種機制中，錯誤摺疊和/或聚集的蛋白質固定至多種細胞膜結構。錯誤摺疊或聚集的分子與質膜或細胞器(如線粒體或溶酶體)膜的結合會干擾蛋白質轉錄、自體吞噬、線粒體功能和孔形成。例如，神經毒性SYN通過突觸核蛋白C端區域的特定部分聚集並與細胞膜中的脂質相互作用。結合至該區域的化合物可抑制蛋白質-蛋白質或蛋白質-脂質相互作用並因此用於阻礙SYN或其他蛋白質的神經毒性低聚化及其與膜相互作用。在第二過程中，聚集的蛋白質從固定的亞基中釋放並傳播至相鄰細胞。隨後，這種毒性蛋白聚集體的細胞至細胞的傳播可能是神經變性的解剖學進展和症狀惡化的原因。與靶蛋白相互作用的小分子藥物可限制釋放和/或傳播，從而減少聚集蛋白質的神經毒性作用。蛋白質聚積的抑制劑的化合物描述於PCT公開號WO2011/084642、WO2013/148365、WO2013/134371和PCT申請號PCT/US2013/050719。仍然需要具有所需藥物特性的蛋白質聚集抑制劑。本發明中，已發現某些雜芳基醯胺化合物具有蛋白質聚集調節活性。技術實現要素：在一個方面，本發明涉及下式(I)的化學實體：其中，R1是H、滷素、C1-4烷基或CF3；R2是H、-CF3、或未取代的或者被滷素或-CF3取代的C1-4烷基；A是5元雜芳基環；Y不存在或者是C1-4亞烷基；R3和R4連同與其相連的氮一起形成未取代的或被C1-4烷基取代的單環雜環烷基環；或者其中Y是C1-4亞烷基，R3和Y連同與R3相連的氮一起形成單環雜環烷基環，並且R4是H或C1-4烷基；或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，式(I)的化合物是選自下文詳述中所描述或列舉的種類的化合物。在另一個方面，本發明涉及一種藥物組合物，所述藥物組合物包括至少一種式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽。本發明所述的藥物組合物還可包含藥學上可接受的賦形劑。本發明還涉及用作藥物的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽。在另一個方面，本發明涉及治療與蛋白或肽聚集相關的神經變性疾病或病症的方法，所述方法包括向需要這類治療的對象給予有效量的至少一種式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽。在另一個方面，本發明涉及治療與蛋白或肽聚集相關的疾病或醫學病症的方法，所述方法包括向需要這類治療的對象給予有效量的至少一種式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽。本發明還涉及式(I)的化合物在製備用於治療這類疾病和醫學病症的藥物中的用途，以及這類化合物和鹽用於治療這類疾病和醫學病症的用途。在另一個方面，本發明涉及幹擾細胞中蛋白質或肽聚集的累積或防止、延緩、反轉或抑制細胞中蛋白質或肽聚集體的方法，所述方法包括將細胞與有效量的至少一種式(I)的化合物或其鹽和/或與至少一種本發明的藥物組合物接觸，其中所述接觸是體外、離體或體內接觸。從下面的詳述和本發明的實踐中可以很容易地了解本發明的其他實施方式、特徵和優點。為簡便起見，該說明書中引用的出版物的內容(包括專利)通過引用納入本文。附圖的簡要說明圖1顯示了生物實施例3的結果。在圖1A中，Y軸(I/Io)是在脂膜存在(I)或不存在(Io)的情況下ASYN的(平均殘留3-23)異核單量子相干(HSQC)光譜信號強度的比率。在圖1B中，ASYN殘基3-23的平均I/Io比率以添加的實施例1的濃度的函數作圖。圖2顯示了如生物實施例4所述，在存在和不存在實施例1的情況下，ASYN低聚體的電子顯微圖像定量。圖3顯示了實施例1對表達GFP-標記的人ASYN的B103成神經細胞瘤細胞中ASYN的累積，如生物實施例5所述。圖4顯示了生物實施例6A的結果，以及圓點束任務模型中1mg/kg和5mg/kg劑量的實施例1對轉基因小鼠的影響。圖5顯示了使用A11抗體對大腦和海馬區腦部勻漿物的生物實施例6A點印跡分析的結果。圖6顯示了生物實施例6B的結果和實施例1對種系61ASYN轉基因小鼠中皮質神經氈和神經細胞體中ASYN免疫標記的影響。圖6A反映了ASYN神經氈臂，並且圖6B反映了研究的神經細胞體臂。圖7顯示了生物實施例6B的結果以及實施例1對包括酪氨酸羥化酶(圖7A)、NeuN(圖7B)、和膠質細胞原纖維酸性蛋白(GFAP；圖7C)的腎病變性相關標誌物的免疫標記的影響。圖8顯示了生物實施例6的結果以及使用圓點束表現測試的實施例1對種系61ASYN轉基因小鼠感覺運動損傷的影響。圖9顯示了生物實施例7A的結果以及實施例1對種系61ASYN轉基因小鼠的糞便勃利(fecalboli)計數的影響。圖10顯示了生物實施例7B的結果以及實施例1對種系61ASYN轉基因小鼠中ASYN的心臟水平的影響。圖11顯示了生物實施例7C的結果以及實施例1對PDNG78轉基因小鼠視網膜中含ASYN-GFP的圖像面積百分比的影響。圖12顯示了生物實施例7C的結果以及實施例1對PDNG78轉基因小鼠中血管周圍和神經末端GFP標記的影響。發明詳述在進一步描述本發明之前，應理解，本發明不限於所述的具體實施方式，因為它們當然可能變化。還應理解，本文所用術語的目的僅是描述具體實施方式，不用來構成限制，因為本發明的範圍僅受所附權利要求書的限制。除非另有說明，本文所用的所有科技術語與本發明所屬領域普通技術人員所理解的通常含義相同。本文中引用的所有專利、申請、公開申請和其他出版物都全文參考結合於本文。如果該部分中的定義與引用納入本文的專利、申請和其他出版物中所列的定義相反或不一致，該部分中的定義將壓倒引用納入本文的定義。本文和所附權利要求書所用的單數形式「一個」、「一種」和「所述」包括複數指示物，除非上下文另有明確說明。還應注意到，權利要求書可撰寫成排除任何任選要素。同樣，這種說明應用作引用權利要求元素相關地使用這類排除性術語，如「只有」、「僅僅」等，或使用「負」限制的前提基礎。本文所用術語「包含」、「含有」和「包括」以其開放、非限定的含義使用。為提供更簡明的描述，本文中的一些定量表達前不使用術語「約」。應理解無論是否明確地使用術語「約」，本文中的每個含量均表示實際給定的數值，且其還表示基於本領域普通技術所能合理推斷的給定數值的近似值，包括由於實驗和/或測量條件產生的這類給定數值的等同值和近似值。無論何時以百分比表示產率時，這類產率表示在特定的化學計量比條件下用於計算產率的實體質量與同一實體所能獲得的最大量的比值。百分比形式的濃度表示質量比率，除非另有說明。除非另有說明，本文所用的所有科技術語與本發明所屬領域普通技術人員所理解的通常含義相同。雖然也可採用與本文所述類似或等同的任何方法和材料實施或測試本發明，但以下描述優選的方法和材料。本文提及的所有出版物均通過引用納入本文，與所引用出版物相關聯來公開和描述這些方法和/或材料。除非另有說明，本發明實施方式的方法和技術一般遵循本領域熟知的傳統方法進行並如若干一般的或更特定的參考文獻中所述，所述參考文獻貫穿本說明書引用和討論。參見，例如，Loudon，OrganicChemistry(《有機化學》)，第四版；紐約：牛津大學出版社(OxfordUniversityPress)，2002，第360-361、1084-1085頁；Smith和March，March′sAdvancedOrganicChemistry：Reactions，Mechanisms，andStructure(《麻尺高級有機化學：反應、機制和結構》)，第五版，韋利科學公司(Wiley-Interscience)，2001。本文用於命名主題化合物的命名法在本文的實施例中說明。該命名法一般採用市售可得的AutoNom軟體(加利福尼亞州聖裡安德魯的MDL公司)，版本12.0.2獲得。應理解，為清楚起見，在單獨的各實施方式的內容中描述的本發明的一些特徵還可以合併在單個的實施方式中提供。反之，在單個實施方式的內容中簡短描述的本發明的各特徵也可以單獨提供或以任何合適的子組合的形式提供。與由可變形式代表的化學基團相關的實施方式的所有組合均特定包含在本發明範圍內並由本文公開，形同本文單獨且明確地公開每個和各個組合以至此類組合包含自身為穩定化合物的化合物(即，可分離、表徵和檢測生物學活性的化合物)。此外，描述此類可變形式的實施方式中所列的化學基團的所有子組合也具體包含在本發明範圍內並由本文公開，形同本文單獨且明確地公開化學基團的每個和各個此類子組合。代表性實施方式在式(I)的一些實施方式中，R1是H、氟、氯、溴、甲基、以及、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、或叔丁基。在其它實施方式中，R1是H或氟。在其它實施方式中，R1是H。在其它實施方式中，R1是氟。在一些實施方式中，R2是H、-CF3，或者是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、或叔丁基，其各自是未取代的或被氟、氯、溴或-CF3取代。在其它實施方式中，R2是H。在其他實施方式中，R2是-CF3或者是被滷素或-CF3任選取代的C1-4烷基。在其他實施方式中，R2是未取代的或被氟或-CF3取代的C3-4烷基。在其它實施方式中，R2是丁基。在其他實施方式中，R2是被-CF3取代的丙基。在一些實施方式中，R2處於「R」立體化學構型。在其他實施方式中，R2處於「S」立體化學構型。在其他實施方式中，式(I)的化合物是在R2位置處的立體化學混合物。在其他實施方式中，R2基本是「R」或基本是「S」立體化學構型。在一些實施方式中，A是具有2個或3個雜原子環原子的5-元雜芳基環。在其他實施方式中，A是具有2個不相鄰雜原子環原子的5-元雜芳基環。在其他實施方式中，A是噻唑、噻二唑、噁唑、咪唑或三唑。在其他實施方式中，A是噻唑或噻二唑。在其他實施方式中，A是噻唑。在一些實施方式中，Y不存在。在其他實施方式中，Y是-CH2-、-CH2CH2-、-CH(CH3)-、-(CH2)3-、-C(CH3)2-、-(CH2)4-、-CH((CH2)2CH3)-、-CH(CH(CH3)2)-、-CH(CH2CH3)CH2-、-CH(CH3)CH(CH3)-、-CH(CH3)(CH2)2-、或-CH2CH(CH3)CH2-。在其他實施方式中，Y是-CH2-、-CH2CH2-或-CH(CH3)-。在其他實施方式中，Y是-CH2CH2-。在一些實施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成單環雜環烷基環，其是未取代的或被C1-4烷基取代。在其他實施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成氮雜環丁烷、吡咯烷、哌啶、氮雜哌嗪、嗎啉、硫代嗎啉、或1，1-二氧代-硫代嗎啉，各自是未取代的或被C1-4烷基取代。在其它實施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成哌嗪、嗎啉、或吡咯烷，各自是未取代的或被C1-4烷基取代。在其它實施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成哌嗪或嗎啉，各自是未取代的或被C1-4烷基取代。在其它實施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成哌嗪，其是未取代的或被C1-4烷基取代。在其它實施方式中，R3和R4連同與其相連的氮一起形成哌嗪或4-甲基-哌嗪。在其中Y是C1-4亞烷基的其他實施方式中，R3和Y連同與R3相連的氮一起形成單環雜環烷基環，並且R4是H或C1-4烷基。在其他實施方式中，Y和R3連同與R3相連的氮一起形成吡咯烷或哌嗪。在其它實施方式中，R4是H或甲基。在一些實施方式中，R1是H，R2是H或C1-4烷基(或者是H，或者是C3-4烷基)，A是噻唑，Y不存在或者是亞乙基(或者不存在，或者是亞乙基)，並且R3和R4連同與它們相連的氮一起形成N-甲基哌嗪。在其他實施方式中，式(I)化合物選自：及其藥學上可接受的鹽。在其他實施方式中，式(I)化合物選自：及其藥學上可接受的鹽。在一些實施方式中，式(I)的化合物選自實施例1-11，及其藥學上可接受的鹽。在其他實施方式中，化合物是鹽酸鹽形式。在其他實施方式中，化合物是實施例27或28，或其藥學上可接受的鹽。在其他實施方式中，式(I)的R2處於(S)立體化學構型。在其他實施方式中，式(I)的R2處於(R)立體化學構型。化學定義術語「烷基」表示主鏈上具有1至12個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團。烷基基團的示例包括甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基(tBu)、戊基、異戊基、叔戊基、己基、異己基以及本領域普通技術中的基團，且本文提供的教導被認為相當於任一前述實施例。術語「雜芳基」表示單環、稠合雙環或稠合多環的芳族雜環(環結構含有選自碳原子和至多四個雜原子(選自氮、氧和硫)的環原子)，每個雜環含有3至12個環原子。雜芳基基團的示範性示例包括以下實體(以適當連接部分的形式)：術語「滷素」指氯、氟、溴或碘。術語「滷代」指氯、氟、溴或碘。術語「氧代」代表羰基氧。例如，被氧代取代的環戊基是環戊酮。本領域技術人員應認識到上文所列或所示的種類不是窮舉性的，也可選擇這些定義的術語範圍內的其他種類。術語「取代的」表示特定基團或部分帶有一個或多個取代基。術語「未取代的」表示特定基團不帶有取代基。術語「任選取代的」表示特定基團是未取代的或被一個或多個取代基取代。在使用術語「取代的」描述結構系統時，取代可發生在系統上任意價態允許的位置上。本文所述的任何式旨在表示該結構式的化合物及某些變體或形式。例如，本文的式指代包括外消旋形式，或者一種或多種對映體、非對映異構體、幾何異構體、或其混合物。另外，本文的任何式也指代水合物、溶劑合物、或該化合物的所晶型物，或其混合物。本文給出的任何化學式也旨在代表化合物的未標記的形式以及同位素標記形式。同位素標記的化合物具有本文給定化學式所描述的結構，不同之處在於一個或多個原子被具有選擇的原子質量或質量數的原子代替。可摻入本發明化合物的同位素的示例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，分別例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F、36Cl和125I。這類同位素標記的化合物可用於代謝研究(優選使用14C)、反應動力學研究(使用例如2H或3H)、包括檢測或成像技術(如正電子發射斷層成像術(PET)或單光子發射計算體層成像術(SPECT))的藥物或底物組織分布試驗、或對患者的放射性治療中。具體而言，18F或11C標記的化合物對於PET或SPECT研究是特別優選的。可如Brooks，D.J.，「ositronEmissionTomographyandSingle-PhotonEmissionComputedTomographyinCentralNervousSystemDrugDevelopment(中樞神經系統藥物開發中的正電子發射斷層成像術和單光子發射計算體層成像術)」NeuroRx2005，2(2)，226-236和本文所引用的參考文獻所述進行PET和SPECT研究。另外，用重同位素如氘(即2H)取代能提供因代謝穩定性較高(例如體內半衰期延長或劑量要求降低)而產生的某些治療優勢。本發明的同位素標記化合物及其前藥通常可通過進行下面方案或實施例和製備中公開的方法來製備，所述方法是用易於獲得的同位素標記試劑取代非同位素標記試劑。在本文中對一類取代基使用時，命名法「Ci-j」(其中i＞i)表示獨立地實現從i至i(包括i和i)的每一個碳原子數目的本發明實施方式。例如，術語C1-3獨立地表示含有一個碳原子(C1)的實施方式、含有兩個碳原子(C2)的實施方式和含有三個碳原子(C3)的實施方式。本文所提到的任意雙取代基包括多種連接可能性，其中允許多於一種的該可能性。例如，雙取代基-A-B-(其中A≠B)在本文中表示A連接至第一取代原子且B連接至第二取代原子的雙取代基，也表示A連接至第二取代原子且B連接至第一取代原子的雙取代基。本發明還包括式(I)所代表化合物的藥學上可接受的鹽，優選上文所述的那些以及本文所示的特定化合物，以及包括該鹽的藥學組合物，以及使用該鹽的方法。「藥學上可接受的鹽」旨在表示本文所示化合物的游離酸或鹼的鹽，其沒有毒性、生物學上可以容忍或者生物學上適於向對象給藥。通常參見，S.M.Berge等，「PharmaceuticalSalts(《藥用鹽》)」J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19。優選的藥學上可接受的鹽是藥學上有效並且適於接觸對象組織而沒有過多的毒性、刺激、或過敏反應的那些。本文所述的化合物可具有足夠酸性的基團、足夠鹼性的基團、兩種類型的官能團、或超過一種各類型，並且因此與多種無機或有機鹼，以及無機和有機酸反應以形成藥學上可接受的鹽。藥學上可接受的鹽的示例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、1，4-丁炔二酸鹽、1，6-己炔二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、甲基磺酸鹽、丙基磺酸鹽、苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽和扁桃酸鹽。其它合適的藥學上可接受的鹽的列表可見於Remington′sPharmaceuticalSciences(《雷明頓藥物科學》)，第17版，賓夕法尼亞州伊斯頓的馬克出版公司(MackPublishingCompany)，1985。對於含有鹼性氮的式(I)的化合物，可通過本領域中可採用的任意適當方法製備藥學上可接受的鹽，例如使用酸處理游離鹼，例如使用無機酸(如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、硼酸、磷酸等)或者使用有機酸(如乙酸、苯乙酸、丙酸、硬脂酸、乳酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、羥乙磺酸、琥珀酸、戊酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、油酸、棕櫚酸、月桂酸、吡喃糖苷酸(如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羥基酸(如扁桃酸、檸檬酸或酒石酸)、胺基酸(如天冬氨酸或穀氨酸)、芳族酸(如苯甲酸、2-乙醯氧基苯甲酸、萘甲酸或肉桂酸)、磺酸(如十二烷基磺酸、對甲苯磺酸、甲磺酸或乙磺酸))或任意相容的酸混合物(如本文實施例中所述)以及任意本領域普通技術中視為等同物或可接受的取代物的其他酸及其混合物。本發明還涉及式(I)的化合物的藥學上可接受的前藥，以及使用該藥學上可接受的前藥的治療方法。術語「前藥」表示指定的化合物的前體，在向對象給藥後其在體內通過化學或生理過程(如溶劑分解或酶切)或者在生理條件下生成化合物(例如將前藥置於生理pH下使其轉化為式(I)的化合物)。「藥學上可接受的前藥」指沒有毒性、生物學上可以容忍且生物學上適於向對象給藥的前藥。選擇和製備適當前藥衍生物的示範性步驟描述於例如「DesignofProdrugs(《前藥設計》)」，H.Bundgaard編，埃爾斯威爾出版社(Elsevier)，1985。本發明還涉及式(I)的化合物的藥物活性代謝物，以及該代謝物在本發明方法中的用法。「藥物活性代謝物」表示式(I)的化合物及其鹽在體內的藥物活性代謝產物。可使用本領域已知或可採用的常規技術確定化合物的前藥和活性代謝物。參見例如Bertolini等，J.Med.Chem.1997，40，2011-2016；Shan等，J.Pharm.Sci.1997，86(7)，765-767；Bagshawe，DrugDev.Res.1995，34，220-230；Bodor，Adv.DrugRes.1984，13，255-331；Bundgaard，DesignofProdrugs(《前藥設計》)(埃爾斯威爾出版社(ElsevierPress)，1985)；以及Larsen，DesignandApplicationofProdrugs(《前藥設計與應用》)、DrugDesignandDevelopment(《藥物設計與開發》)(Krogsgaard-Larsen等編，哈伍德學術出版公司(HarwoodAcademicPublishers)，1991)。藥物組合物為治療目的，包括本文所述化合物的藥物組合物還可包括一種或多種藥學上可接受的賦形劑。藥學上可接受的賦形劑指沒有毒性且生物學上適於向對象給藥的物質。這類賦形劑促進本文所述化合物的給藥過程且與活性成分相容。藥學上可接受的賦形劑的示例包括穩定劑、潤滑劑、表面活性劑、稀釋劑、抗氧化劑、粘結劑、著色劑、膨脹劑、乳化劑或調味劑。在優選實施方式中，該發明的藥物組合物是無菌組合物。可使用本領域技術人員已知或可以使用的複合技術製備藥物組合物。本發明也涉及無菌組合物，包括符合決定該組合物的國家和當地規定的組合物。根據本領域中用於多種劑型製備的常規方法，本文所述藥物組合物和化合物可配製為適當藥物溶劑或載劑中的溶液劑、乳劑、混懸劑或分散劑，或者丸劑、片劑、錠劑、栓劑、囊劑、糖衣劑、顆粒劑、粉末劑、用於重建的粉末劑或連同固態載劑的膠囊劑。本發明的藥物組合物可以通過適當的遞送途徑給予，如口服、胃腸外、直腸、經鼻、局部或經眼途徑，或通過吸入。優選地，該組合物配製為用於靜脈內或口服給藥。對於口服給藥，本發明的化合物可以固體形式(如片劑或膠囊劑)或溶液劑、乳劑或混懸劑的形式提供。為製備口服組合物，可配製本發明的化合物以形成例如每天約0.01至約50mg/kg、或每天約0.05至約20mg/kg、或每天約0.1至約10mg/kg的劑量。其他劑量包括每天約0.1mg至1g，每天約1mg至約10mg，每天約10mg至約50mg，每天約50mg至約250mg、或每天約250mg至1g。口服片劑可包括與相容的藥學上可接受的賦形劑(如稀釋劑、崩解劑、粘結劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、著色劑和防腐劑)混合的活性成分。合適的惰性填料包括碳酸鈉和碳酸鈣、磷酸鈉和磷酸鈣、乳糖、澱粉、糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露醇、山梨糖醇等。示例性液體口服賦形劑包括乙醇、甘油、水等。澱粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、澱粉乙醇酸鈉、微晶纖維素和海藻酸是示例性崩解劑。結合劑可包括澱粉和明膠。如果存在，潤滑劑可以是硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。如果需要，可以使用某種材料(如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯)包被片劑以延緩胃腸道中的吸收，或者使用腸溶衣包被。用於口服給藥的膠囊包括硬和軟明膠膠囊。為製備硬明膠膠囊，可將活性成分與固體、半固體或液體稀釋劑混合。軟明膠膠囊可以通過將活性成分與水、油(如花生油或橄欖油)、液體石蠟、短鏈脂肪酸的單和二甘油酯的混合物、聚乙二醇400或丙二醇混合的方式製備。用於口服給藥的液體可以是混懸劑、溶液劑、乳劑或糖漿劑的形式，或者可以是臨用前用水或其他合適載劑重建的乾燥產品。這類液體組合物可選包含：藥學上可接受的賦形劑，如助懸劑(例如山梨糖醇、甲基纖維素、藻酸鈉、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠等)；非水性載劑，例如油(例如杏仁油或分級椰子油)、丙二醇、乙醇或水；防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸)；潤溼劑(如卵磷脂)；以及(如果需要)調味劑或著色劑。本發明的組合物可配製為栓劑用於直腸給藥。對於胃腸外使用(包括靜脈內、肌肉內、腹膜內、鼻內或皮下途徑)，本發明的試劑可以無菌水性溶液劑或混懸劑，緩衝至合適pH和等滲性或者以胃腸道外可接受的油的形式提供。合適的水性載劑包括林格氏溶液和等滲氯化鈉。這類形式可以是單位劑量形式(如安瓿或一次性注射設備)、多劑量形式(如可以從中取出合適劑量的藥瓶)或固體形式或可用於製備可注射製劑的預濃縮液。在數分鐘至數天的時間內，示範性輸注劑量的範圍是約1至1000μg/kg/分鐘的與藥物運載體混合的試劑。對於經鼻、吸入或口服給藥，可使用例如也包含合適運載體的噴霧製劑給予本發明的藥物組合物。對於局部使用，優選將本發明的化合物配製為乳膏或軟膏或適用於局部給藥的類似載劑。對於局部給藥，可將本發明的化合物與藥物運載體混合，濃度為藥物佔載劑的約0.1％至約10％。另一個給予本發明的試劑的模式是利用貼片製劑以達到透皮遞送的效果。本文所用術語「治療」或「處理」包括「預防性」和「治療性」治療。「預防性」治療指推遲疾病、疾病症狀或醫學病症的發展、抑制可能出現的症狀或降低疾病或症狀發展或復發的風險。「治療性」治療包括降低已有疾病、症狀或病症的嚴重程度或抑制其惡化。因此，治療包括改善或防止已有疾病症狀的惡化、防止出現其他症狀、改善或防止症狀的根本性系統原因、抑制失調或疾病，例如阻止失調或疾病的發展、減輕失調或疾病、促使失調或疾病退行、減輕疾病或失調引起的病症或停止疾病或失調的症狀。術語「對象」指需要該治療的哺乳動物患者，例如人。示例性的特徵為蛋白質聚積的神經變性疾病包括阿爾茨海默病、帕金森病、額顳痴呆、路易體痴呆(路易體病)、帕金森病痴呆、多系統萎縮症、肌萎縮側索硬化、和亨廷頓病，以及癌症和炎性疾病。在一個方面，本發明的化合物和藥物組合物特異性靶向α-突觸核蛋白、β-澱粉樣蛋白和/或tau蛋白聚集體。因此，這些化合物和藥物組合物可用於防止、反轉、延緩或抑制α-突觸核蛋白、β-澱粉樣蛋白和/或tau蛋白的聚集，並用於本發明的方法中以治療聚集(如α-突觸核蛋白、β-澱粉樣蛋白和/或tau蛋白的聚集)相關或引起的神經變性疾病。優選地，本發明的方法靶向與α-突觸核蛋白、β-澱粉樣蛋白和/或tau蛋白的聚集相關的神經變性疾病。在優選的實施方式中，治療方法靶向帕金森病、阿爾茨海默病、路易體病、或多系統萎縮症。在其他實施方式中，方法靶向癌症或黑色素瘤。本發明的化合物、組合物和方法還可用於減輕蛋白質聚集繼發的有害作用，如神經元細胞死亡。在一些方面中，本發明的化合物、組合物和方法用於靶向α-突觸核蛋白(SYN)聚集。在另一個的方面，本發明的化合物、組合物和方法用於靶向Aβ聚集。在本發明的抑制性方法中，「有效量」指足以減少、延緩或反轉蛋白質或肽聚集的量。可通過如下文所述的常規分析方法對聚集的量進行測量。這類修飾可用於多種環境，包括體外試驗。在該方法中，所述細胞優選是神經細胞。在根據本發明的治療方法中，「有效量」指足以使需要這類治療的對象獲得所需治療益處的量或劑量。本發明的化合物的有效量或劑量可通過常規方法(如建模、劑量遞增或臨床試驗)確定，其中考慮常規因素，例如給藥或藥物遞送的模式或途徑、試劑的藥代動力學、感染的嚴重程度和過程、對象的健康狀態、病情和體重以及主治醫生的判斷。示例性劑量的範圍為每天每千克對象體重約1ug至2mg活性試劑，優選約0.05至100mg/kg/天、或約1至35mg/kg/天、或約0.1至10mg/kg/天。在其他實施方式中，示例性劑量的範圍是約1mg至約1g/天，或約1-500、1-250、1-100、1-50、50-500、或250-500mg/天。總劑量可以單個或分開的劑量單元(例如BID、TID、QID)給予。一旦患者的疾病出現改善，即可調節劑量用於預防性或維持治療。例如，給藥的劑量或頻率或兩者可以隨著症狀變化降至保持所需治療或預防效果的水平。當然，如果症狀已減輕至合適水平，可以停止治療。但任何症狀復發時，患者可以要求長期基礎上的間歇治療。患者可能還需要長時程基礎上的長期治療。藥物組合本發明的化合物可與一種或多種神經退行性疾病的治療中的其他活性成分聯用，用於藥物組合物或方法。用於癌症應用的其他活性成分包括減輕癌症化療劑的不良影響的其他癌症治療藥或試劑。這類組合可用於增加效力、改善其他疾病症狀、減少一種或多種副作用或減少所需的本發明化合物劑量。其他活性成分可以獨立於本發明的化合物的藥物組合物形式給予，或者可與本發明的化合物一起包含在單個藥物組合物中。其他活性成分可以與本發明的化合物同時給予、在其之前給予或在其之後給予。包含其他活性成分的組合試劑是那些已知或被發現能夠有效治療神經變性疾病的成分，包括對疾病相關的另一個靶標有活性的那些，諸如但不限於：a)解決蛋白質錯誤摺疊的化合物(如減少這些蛋白質生成、提高其清除或改變其聚集和/或傳播的藥物)；b)治療該疾病症狀的化合物(例如多巴胺替代療法)；以及c)通過互補機製作為神經保護劑的藥物(例如靶向自體吞噬的那些藥物，抗氧化的那些藥物以及通過其他機製作用的那些藥物(如腺嘌呤A2A拮抗劑))。例如，本發明的組合物和製劑以及治療方法還可包括其他藥物或藥品，例如用於治療或緩解蛋白質聚集(例如突觸核蛋白、β-澱粉樣蛋白和/或tau蛋白的聚集)相關或引起的神經變性疾病(例如帕金森病、阿爾茨海默病(AD)、路易體病(LBD)和多系統萎縮症(MSA)或相關症狀或病症)的其他活性劑。例如，本發明的藥物組合物還可包括一種或多種該活性劑，且治療方法還可包括給予有效量的一種或多種該活性劑。在某些實施方式中，其他活性劑可以是抗生素(例如抗菌或抑菌肽或蛋白質，例如有效對抗革蘭氏陽性或陰性細菌的那些)、流體、細胞因子、免疫調節劑、抗炎劑、補體活化劑(如包括膠原樣結構域或血纖蛋白原樣結構域(如纖維凝膠蛋白(ficolin))、碳水化合物結合結構域等的肽或蛋白質)及其組合。其他活性劑包括用於該組合物和方法的那些，包括多巴胺療法藥物、鄰苯二酚-O-甲基轉移酶(COMT)抑制劑、單胺氧化酶抑制劑、認知增強劑(如乙醯膽鹼酯酶抑制劑或美金剛胺)、腺嘌呤2A受體拮抗劑、β-分泌酶抑制劑或γ-分泌酶抑制劑。在特定實施方式中，本發明的至少一種化合物可在藥物組合物或治療方法中與一種或多種藥物聯用，所述藥物選自：他克林(Cognex)、多奈哌齊(Aricept)、利凡斯的明(Exelon)、加蘭他敏(Reminyl)、毒扁豆鹼、新斯的明、艾考哌齊(Icopezil)(CP-118954，5，7-二氫-3-[2-[1-(苯基甲基)-4-哌啶基]乙基]-6H-吡咯並-[4，5-f-]-1，2-苯並異唑-6-酮馬來酸鹽)、ER-127528(4-[(5，6-二甲氧基-2-氟-1-茚酮)-2-基]甲基-1-(3-氟苄基)哌啶鹽酸鹽)、扎那普齊(zanapezil)(TAK-147；3-[1-(苯基甲基)哌啶-4-基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯並氮雜-8-基)-1-丙烷富馬酸鹽)、美曲磷酯(Metrifonate)(T-588；(-)-R-.α.-[[2-(二甲基氨基)乙氧基]甲基]苯並[b]噻吩-5-甲醇鹽酸鹽)、FK-960(N-(4-乙醯-1-哌嗪基)-對氟苯甲醯胺水合物)、TCH-346(N-甲基-N-2-丙醯聯苯並[b，f]氧雜-10-甲胺)、SDZ-220-581((S)-.α.-氨基-5-(膦醯基甲基)-[1，1′-聯苯基]-3-丙酸)、美金剛胺(Namenda/Exiba)和1，3，3，5，5-五甲基環己烷-1-胺(Neramexane)、氟比洛芬(tarenfiurbil)(Flurizan)、3-氨基丙烷磺酸(tramiprosate)(Alzhemed)、氯碘喹啉(clioquinol)、PBT-2(8-羥基喹諾酮衍生物)、1-(2-(2-萘基)乙基)-4-(3-三氟甲基苯基)-1，2，3，6-四氫吡啶、石杉鹼A、泊替瑞林(posatirelin)、亮丙瑞林(leuprolide)或其衍生物、異丙克蘭(ispronicline)、(3-氨基丙基)(正丁基)次膦酸(SGS-742)、N-甲基-5-(3-(5-異丙氧基吡啶基))-4-戊-2-胺(ispronicline)、1-癸基銨(1-decanaminium)、N-(2-羥基-3-磺丙基)-N-甲基-N-辛基-、內鹽(zt-1)、水楊酸酯、阿司匹林、阿莫比林、貝諾酯、膽鹼水楊酸鎂、二氟尼柳、法西阿明、水楊酸甲酯、水楊酸鎂、雙水楊酯、雙氯芬酸、醋氯芬酸、阿西美辛、溴芬酸、依託度酸、吲哚美辛、萘丁美酮、舒林酸、託美汀、布洛芬、卡洛芬、芬布芬、非諾洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、酮咯酸、洛索洛芬、萘普生、噻洛芬酸、舒洛芬、甲芬那酸、甲氯滅酸、苯基丁氮酮、阿扎丙宗、安乃近、羥布宗、磺吡酮、吡羅昔康、氯諾昔康、美洛昔康、替諾昔康、塞來昔布、依他昔布、羅美考昔布、帕瑞昔布、羅非昔布、伐地昔布、尼美舒利、芳基烷酸、2-芳基丙酸(profens)、N-芳基鄰氨基苯甲酸(滅酸)、吡唑烷衍生物、昔康類、COX-2抑制劑、磺醯苯胺(sulphonanilides)、必需脂肪酸和米諾扎(Minozac)(2-(4-(4-甲基-6-苯基噠嗪-3-基)哌嗪-1-基)嘧啶二鹽酸水合物)或其組合物。用於癌症療法的潛在組合試劑可包括，例如，蛋白質和脂質激酶抑制劑(例如，PI3K、B-raf、BCR/ABL)、放療增強劑、微管結合劑(例如，紫杉醇、長春鹼)、細胞代謝抑制劑、DNA嵌入劑、拓撲異構酶抑制劑(例如，多柔比星)、和DNA烷基化試劑。測定本文所述的化合物可用於研究應用，包括體外、體內或離體實驗系統。實驗性系統可包括，但不限於，細胞樣品、組織樣品、細胞組分或細胞組分混合物、完整或部分器官、或生物體。研究應用包括，但不限於，用作測定試劑、生物化學通路解析、或其他試劑對實驗系統的解析，在一種或多種本文所述的化合物存在或缺失下。本文所述的化合物也可用於生物化學試驗。在一些實施方式中，本文所述的化合物可與來自對象的組織或細胞孵育以評價對象對化合物給予的潛在響應，或確定本文所述的哪種化合物在特定對象或對象組中闡述有關最優效果。一種這類試驗包括(a)從對象獲取細胞樣品或組織樣品，其中可測試一種或多種生物標誌物的調節，(b)向細胞樣品或組織樣品給予一種或多種本文所述的化合物；和(c)與給予化合物前的生物標誌物的狀態相比，確定給予化合物後一種或多種生物標誌物的調節量。任選地，在步驟(c)後，試驗將包括基於步驟(c)中確定的調節量選擇用於治療與蛋白質聚集相關的疾病或醫學病症的化合物的額外步驟(d)。化學合成現在，通過參考用於本文中通用製備方法的示意性合成方案和之後的具體實施例來描述本發明的方法中有用的示例性化學實體。本領域技術人員應認識到，為獲得本文中的多種化合物，可對起始材料進行適當選擇，從而通過適當地帶有或不帶有保護的反應方案使用最終所需的取代基以生成所需的產物。或者，可能需要或想要在最終所需的取代基位置上採用可通過反應方案攜帶並在適當時可被所需取代基替代的合適基團。此外，本領域技術人員應認識到，以下方案中顯示的轉化可以任意與特定側基功能相容的順序進行。通用方案中描述的各反應均優選在約0℃至所用有機溶劑的回流溫度下進行。除非另有說明，變量如上文所定義，可參考式(I)。本文所述同位素標記的化合物根據下文所述方法製備，使用適當標記的起始材料。這類材料通常可從放射標記的化學試劑的市場供應商處購得。方案A如方案A所示製備式(I)的化合物。氨基-乙基吲哚衍生物A1市售可得或按照方案B製備。在標準醯胺形成條件下，化合物A1與活化的醯基化合物A2偶聯，其中X是例如-OH或-C1，以產生式(I)的化合物。方案B如方案B所示，通過醯基化，之後還原性胺化從甲基-吲哚B1製備取代的吲哚A1。方案C按照方案C製備雜環化合物C4。某些化合物A、C1、A-CO2R(其中R是H或C1-4烷基)、和C2市售可得。在一些實施方式中，雜環A經滷化以形成滷代化合物C1，並且然後醯基化以形成雙官能化的化合物C2。在其他實施方式中，化合物A-CO2R經滷化以形成化合物C2。在標準醯胺偶聯條件下與胺HNR3R4偶聯形成化合物C3。酯C3的水解產生胺基酸C4，其可用於方案A中所示的偶聯反應。方案D如方案D所示，用例如多聚甲醛同系化甲基-雜環化合物D1以產生羥乙基化合物D2。羥基活化成例如滷素或甲苯磺酸基，並被HNR3R4替換，產生氨基化合物D3。雜環的醯基化產生酯D4，並且水解生成胺基酸D5。實施例以下實施例用於說明但非限制本發明。本領域技術人員將認識到可通過選擇合適的起始材料和試劑來修飾以下合成反應和方案以獲得式(I)的其他化合物。實施例1：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧醯胺.步驟1.在0℃下向幹1，2-二氯乙烷(80mL)中化合物1A(6g，45.8mmol)的溶液中加入AlCl3(18.3g，137.4mmol)。混合物升溫至25℃並且攪拌30分鐘。混合物冷卻至0℃並且滴加化合物1B(6.2g，51.3mmol)。將混合物在25℃下攪拌48小時。將反應混合物緩慢倒入冰水中並用二氯甲烷(DCM，三次(3x))萃取。用鹽水洗滌有機層(3x)，在Na2SO4上乾燥並濃縮。通過柱(20∶1石油醚/EtOAc)純化殘留物以得到黃色固體的化合物1C(4.8g，49％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.16(brs，1H)，7.39(d，J＝8.0Hz，1H)，7.37(d，J＝8.0Hz，1H)，7.23(t，J＝7.2Hz，1H)，7.15(t，J＝7.2Hz，1H)，7.15(s，1H)，3.83(s，2H)，2.50(t，J＝8.8Hz，2H)，1.54-1.63(m，2H)，1.24-1.29(m，2H)，0.86(t，J＝7.6Hz，3H).步驟2.向MeOH(150mL)中化合物1C(4.8g，22.3mmol)的混合物中加入AcONH4(3.35g，44.6mmol)和NaBH3CN(2.8g，44.6mmol)。混合物回流24小時。混合物濃縮，並且殘留物溶於DCM(150mL)中，用鹽水洗滌(3x)，在Na2SO4上乾燥，並濃多以得到黃色固體的粗化合物1D(2.4g，50％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.09(s，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.03-7.18(m，2H)，6.98(s，1H)，3.01-3.03(m，1H)，2.89(dd，J＝14.0，4.0Hz，1H)，2.52(dd，J＝14.0，8.8Hz，1H)，1.18-1.50(m，8H)，0.85(t，J＝7.2Hz，3H).步驟3.將內含化合物1E(2.2g，10.0mmol)、N-甲基哌嗪(1.1g，11.0mmol)和K2CO3(3.4g，24.9mmol)的乙腈(70mL)混合物在80℃下攪拌24小時。混合物經濃縮並用H2O稀釋並用EtOAc萃取(3x)。對合併的有機層進行乾燥並濃縮以獲得淡棕色固體狀的化合物1G(2.5g，＞100％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(s，1H)，4.28(q，J＝7.2Hz，2H)，3.58(t，J＝5.6Hz，4H)，2.50(t，J＝5.6Hz，4H)，2.33(s，3H)，1.32(t，J＝7.2Hz，3H).步驟4.向內含化合物1G(2.0g，8.3mmol)的THF(20mL)混合物添加內含NaOH(1.33g，33.2mmol)的H2O(40mL)溶液。將混合物在80℃下攪拌24小時。混合物經濃縮以去除THF並用n-BuOH萃取。有機層經乾燥並濃縮以獲得白色固體的化合物1H(1.38g，66.7％)。1HNMR(400MHz，MeOD)δ7.55(s，1H)，3.49-3.52(m，4H)，2.53-2.56(m，4H)，2.36(s，3H).步驟5.向內含化合物1H(1.1g，5.1mmol)的CH2Cl2(50mL)和THF(5mL)的混合物中加入化合物1D(2g，8.09mmol)，之後加入苯並三唑-1-基-氧三吡咯烷基六氟磷酸鏻(PyBOP，3.18g，6.12mmol)和DIPEA(2.6g，20.4mmol)。在25℃下N2下24小時後，用H2O(40mL)稀釋混合物並用DCM萃取(3x)。合併的有機層在Na2SO4上乾燥，濃縮並且通過製備型-HPLC(ShimadzuLC-8A製備型HPLC，Luna(2)C18柱，在20分鐘內以80mL/分鐘NH4OAc中26％-56％乙腈)純化殘留物以得到白色固體的實施例1(576mg，27％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.23(s，1H)，7.39(1H，s)，7.38(d，J＝7.2Hz，1H)，7.22(d，J＝7.2Hz，1H)，7.07-7.21(m，2H)，7.06(s，1H)，5.50(d，J＝8.4Hz，1H)，4.40-4.46(m，1H)，3.56(t，J＝5.2Hz，4H)，3.0-3.1(m，2H)，2.52(t，J＝4.8Hz，4H)，2.36(s，3H)，1.26-1.60(m，6H)，0.88(t，J＝7.2Hz，3H)LCMS：100％(M+1+)：426.2.替代合成向內含化合物3A(400g，0.98mol，如下所示)和K2CO3(340g，2.5mol)的CH3CN(3L)的混合物中加入化合物1F(197g，1.97mol)。將混合物在80℃下在N2氣氛下攪拌12小時。用水(4L)稀釋該混合物並用DCM萃取(4Lx3)。用Na2SO4乾燥合併的有機層，然後濃縮。用1∶1石油醚/乙酸乙酯洗滌殘留物以得到白色固體的實施例1(200g，44％)。向含實施例1(200g，0.47mol)的DCM(2L)溶液中加入含4MHCl的乙酸乙酯(235mL)。混合物在室溫下攪拌1小時，濃縮溶劑，並且從甲基叔丁基醚(1L)中重結晶殘留物。通過過濾收集殘留固體並且在50℃下減壓乾燥以得到實施例1的HCl鹽(210g，92％)。實施例2：N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧醯胺.步驟1.在0℃下，向含化合物2A(20g，84.7mmol)的四氫呋喃(THF，100mL)溶液中滴加含NaOH(4.1g，102mmol)的H2O(100mL)溶液。將混合物在10℃下攪拌1小時。混合物用HCl(6M)中和並用EtOAc萃取(3x)。對有機層使用鹽水洗滌、使用Na2SO4乾燥並濃縮以獲得黃色固體的化合物2B(17.7g，100％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.21(s，1H).步驟2.向含化合物2B(2.6g，12.5mmol)的THF(16mL)的混合物中加入1，1-羰基-二咪唑(2.06g，12.75mmol)。混合物在室溫下攪拌1小時，然後用三乙胺(TEA，2.53g，25mmol)和化合物2C(2g，12.5mmol)處理。所得混合物在室溫下攪拌12小時。混合物用EtOAc稀釋，用1MHCl(2x)和鹽水洗滌，然後在Na2SO4上乾燥，並濃縮以得到黃色固體的化合物2D(4.41g，＞100％)。步驟3.向內含化合物2D(1g，5.7mmol)和K2CO3(1.0g，7.2mmol)的CH3CN(6mL)的混合物中加入N-甲基哌嗪(0.6g，5.7mmol)。將混合物在80℃下在N2氣氛下攪拌12小時。加入水並且所述混合物用DCM(5x)萃取。合併的有機層在Na2SO4上乾燥並濃縮以得到黃色固體(0.8g)，其用甲基叔丁基醚(5mL)洗滌以得到白色固體的實施例2(0.3g，29％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.37(m，1H)，7.78(s，1H)，7.56(d，J＝7.6Hz，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，1H)，7.38-7.35(m，2H)，7.16(s，1H)，7.07(t，J＝7.4Hz，1H)，6.98(t，J＝7.4Hz，1H)，3.48-3.44(m，6H)，2.90(t，J＝7.2Hz，2H)，2.42-2.39(m，2H)，2.22(s，3H).MS：(M+H+)：370.實施例3：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(哌嗪-1-基)噻唑-5-羧醯胺.步驟1.向含化合物2B(5.19g，24.96mmol)的THF(40mL)的混合物中加入1，1-羰基-二咪唑(4.04g，24.96mmol)。混合物在室溫下攪拌1小時，然後用TEA(7.56g，74.88mmol)和化合物1D(5.4g，24.96mmol)處理。在室溫下12小時後，混合物用EtOAc稀釋，並用1MHCl(2x)和鹽水連續洗滌，在Na2SO4上乾燥，並濃縮以得到黃色固體的化合物3A(7.74g，76％)。1HNMR(400MHz，MeOD-d4)δ8.36(d，1H，J＝8.4Hz)，7.97(s，1H)，7.56(d，J＝8Hz，1H)，7.30(d，J＝8Hz，1H)，7.06(t，J＝7.2Hz，1H)，7.05(s，1H)，6.95(t，J＝7.2Hz，1H)，4.31-4.28(m，1H)，3.0-2.97(m，1H)，1.75-1.50(m，2H)，1.45-1.25(m，4H)，2.22(t，J＝6.8Hz，3H).MS：(M+H+)：406，408.步驟2.向內含化合物3A(2g，5.7mmol)和K2CO3(1.77g，12.8mmol)的CH3CN(12mL)的混合物中加入化合物3B(0.92g，4.9mmol)。在80℃下N2下12小時後，加入水(30mL)並用EtOAc萃取混合物(3x)。合併的有機層在Na2SO4上乾燥、濃縮、並且通過柱層析(10至67％EtOAc/石油醚)純化以得到黃色固體的化合物3C(2g，79％)。該化合物無需表徵即可直接用於下一步驟。步驟3.用HCl(10mL，4M，甲醇中)處理含化合物3C(1g，2.0mmol)的甲醇(10mL)溶液。在室溫下攪拌3小時後，去除溶劑並且將殘留物倒入冰水中(20mL)，用NaHCO3將pH調整到9，並用EtOAc萃取(2x)。合併的有機層在Na2SO4上乾燥並濃縮以得到黃色固體(0.45g)。通過柱色譜(石油醚/DCM/MeOH50/50/0至0/90/10)純化得到白色固體的實施例3(0.32g，39％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.16(s，1H)，7.64(d，J＝7.6Hz，1H)，7.39-7.36(m，2H)，7.18(t，J＝7.6Hz，1H)，7.13(t，J＝7.6Hz，1H)，7.05(s，1H)，5.53(d，J＝8.8Hz，1H)，4.46-4.38(m，1H)，3.58-3.49(m，4H)，3.06-2.96(m，6H)，2.05(s，1H)，1.65-1.60(m，1H)，1.48-1.32(m，5H)，0.90-0.86(m，3H).MS：(M+H+)：412.實施例4：N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)噻唑-5-羧醯胺.步驟1.將在密封管中的化合物4A(50g，0.5mol)和多聚甲醛(50g)的混合物在140℃下攪拌3小時。通過柱色譜(50％DCM/EtOAc)純化反應混合物以得到淡黃色油狀的化合物4B(27g，41％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.62(s，1H)，7.16(s，1H)，3.91-3.98(m，2H)，3.23-3.28(m，2H).步驟2.在0℃下向內含化合物4B(27g，0.2mmol)的THF(100mL)溶液中添加內含NaOH(16.7g，0.4mol)的水(100mL)溶液。在攪拌10分鐘後，分步添加4-甲基苯-1-磺醯氯(59.5g，0.3mol)。混合物升溫至室溫並總共攪拌2小時。用EtOAc(3x)提取混合物。有機相用鹽水洗滌，在Na2SO4上乾燥，濃縮，並通過柱色譜(己烷/EtOAc＝2∶1)純化以得到無色油狀的化合物4C(32g，54％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.75(2H，d，J＝8Hz，2H)，7.65(1H，d，J＝4Hz，1H)，7.32(d，J＝8Hz，2H)，7.22(d，J＝4Hz，1H)，4.40(t，J＝8Hz，2H)，3.80(t，J＝8Hz，2H)，2.45(s，3H).步驟3.向含化合物4C(32g，0.11mol)的乙腈(300mL)溶液中加入N-甲基哌嗪(16.9g，0.16mol)和Cs2CO3(55g，0.16mol)。混合物在60℃下攪拌過夜，然後過濾混合物並濃縮濾液，通過柱色譜(DCM/MeOH＝10∶1)純化殘留物以得到淡黃色油狀的化合物4D(14g，47％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.67(d，J＝3.2Hz，1H)，7.19(d，J＝2.4Hz，1H)，3.21(t，J＝8.0Hz，2H)，2.79(t，J＝8.0Hz，2H)，2.59(s，4H)，2.50(s，4H)，2.31(s，3H).步驟4.在-78℃下向含化合物4D(14g，66mmol)的無水THF(70mL)溶液中滴加正丁基鋰(32mL，80mmol)。混合物在該溫度下攪拌30分鐘，然後在相同溫度下向溶液中滴加氯甲酸甲酯(7.52g，80mmol)。混合物攪拌3小時，在期間升溫至室溫。混合物用飽和水性NH4Cl(50mL)稀釋，用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，在Na2SO4上乾燥，並濃縮以得到化合物4E(14g，78％)。該粗產物無需進一步純化即可直接用於下一步驟。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.26(s，1H)，3.89(s，3H)，3.19(t，J＝8.0Hz，2H)，2.77(t，J＝8.0Hz，2H)，2.58(s，4H)，2.49(s，4H)，2.17(s，3H).步驟5.向內含化合物4E(14g，52mmol)的MeOH(100mL)溶液中添加內含NaOH(3.12mL，78mmol)的水(39mL)溶液。在室溫下3小時後，混合物濃縮並且用EtOAc(30mL)洗滌。用1NHCl將水相調整到pH＝5-6並且用EtOAc(3x)萃取。合併的有機層用鹽水洗滌，在Na2SO4上乾燥，並濃縮以得到橙色固體的化合物4F(12g，92％)。該粗產物無需進一步純化即可直接用於下一步驟。步驟6.內含化合物4F(0.8g，3.1mmol)的DCM(2mL)和THF(10mL)溶液用碘化2-氯-1-甲基-吡啶鎓(Mukaiyama試劑，1.0g，3.8mmol)和N，N-二異丙基乙胺(DIPEA，1.5g，16mmol)處理，然後攪拌10分鐘。然後用2-(1H-吲哚-3-基)乙胺(0.5g，3.1mmol)處理混合物並且混合物在50℃下攪拌3小時。濾去所得沉澱並真空濃縮濾液。殘留物溶於乙酸乙酯中，用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，用Na2SO4乾燥，並濃縮。通過製備型HPLC(ShimadzuLC-8A，GeminiC-18，0.04％水性NH4OH中12-42％CH3CN，在20分鐘內，以80mL/分鐘)純化殘留物以得到淡黃色固體的實施例4(200mg，16％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(s，1H)，7.81(1H，s，1H)，7.65(d，J＝8Hz，1H)，7.40(d，J＝8Hz，1H)，7.21(t，J＝8Hz，1H)，7.08(s，1H)，5.99(brs，1H)，3.77(q，J＝6.2Hz，2H)，3.16(t，J＝7.1Hz，3H)，3.10(t，J＝6.6Hz，2H)，2.75(t，J＝6.8Hz，2H)，2.58(brs，4H)，2.49(brs，4H)，2.32(s，3H).實施例5：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)噻唑-5-羧醯胺.內含化合物4F(1.2g，5mmol)的DCM(2mL)和THF(10mL)溶液用Mukaiyama試劑(1.65g，6.5mmol)和DIPEA(1.9g，20mmol)處理，然後攪拌10分鐘。混合物然後用化合物1D(1.2g，5mmol)處理並在50℃下攪拌3小時。濾去所得沉澱並真空濃縮濾液。殘留物溶於乙酸乙酯(30mL)中，用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，用Na2SO4乾燥，並濃縮。通過製備型HPLC(ShimadzuLC-8A，GeminiC-18，0.04％水性NH4OH中25-55％CH3CN，在20分鐘內，以80mL/分鐘)純化以得到白色固體的實施例5(250mg，14％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(s，1H)，7.75(s，1H)，7.64(d，J＝8Hz，1H)，7.38(d，J＝8Hz，1H)，7.19-7.21(m，1H)，7.13-7.14(m，1H)，5.13(brs，1H)，4.41-4.45(m，1H)，3.13-3.18(m，1H)，3.05-3.09(m，1H)，2.74-2.77(m，1H)，2.58(brs，4H)，2.49(brs，4H)，2.32(s，3H)，1.63-1.70(m，1H)，1.49-1.54(m，1H)，1.34-1.39(m，4H)，0.89(t，J＝4Hz，3H).實施例6：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噁唑-5-羧醯胺.步驟1.在-60℃下向含化合物6A(15.0g，106mmol)的THF(150mL)溶液中滴加雙三甲基矽基氨基鋰(lithiumhexamethyldisilazide)(178mL，170mmol)。將溶液在-50℃下攪拌1小時。然後向溶液中加入六氯乙烷(37.8g，160mmol)。將溶液在室溫下攪拌12小時。通過加入飽和水性NH4Cl溶液(50mL)終止該反應並用EtOAc(50mL)萃取。有機層分離，在Na2SO4上乾燥，真空濃縮，並且用柱層析純化殘留物以得到無色油狀的化合物6B(10g，56％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.71(s，1H)，3.39(q，J＝7.2Hz，2H)，1.38(t，J＝7.2Hz，3H).步驟2.將內含化合物6B(5.5g，31.3mmol)、N-甲基哌嗪(9.4g，94mmol)和K2CO3(17.3g，125.2mmol)的乙腈(80mL)混合物在80℃下回流加熱2小時。混合物用H2O稀釋並用EtOAc萃取。分離有機層，使用Na2SO4乾燥，並真空濃縮以獲得棕色油狀的化合物6C(7g，94％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.52(s，1H)，4.32(q，J＝7.2Hz，2H)，3.66(t，J＝4.8Hz，4H)，2.48(q，J＝4.8Hz，4H)，2.34(s，3H)，1.34(t，J＝7.2Hz，3H).步驟3.內含化合物6C(2.0g，8.4mmol)和NaOH(0.33g，8.4mmol)的THF(10mL)和H2O(10mL)混合物在室溫下攪拌2小時。真空濃縮混合物以得到黃色固體的化合物6D(3.0g，粗)。1HNMR(400MHz，D2O)δ7.26(s，1H)，3.51(s，4H)，2.49(s，4H)，2.23(s，3H).步驟4.內含化合物6D(2.0g，9.5mmol)、化合物1D(1.64g，7.6mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC，3.63g，19mmol)、1-羥基-苯並三唑(HOBt，2.57g，19mmol)、和TEA(1.92g，19mmol)的DMF(30mL)的混合物在室溫下攪拌12小時。用水稀釋該混合物並用EtOAc萃取。分離有機層，用水(3x)、鹽水洗滌，在Na2SO4上乾燥並真空濃縮。用柱色譜(2至10％MeOH/DCM)純化殘留物以得到白色固體的實施例6(220mg，6％)。1HNMR(400MHzCDCl3)δ8.16(s，1H)，7.63(d，J＝8.0Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.39(t，J＝8.0Hz，1H)，7.18(d，J＝8.0Hz，1H)，7.10(t，J＝8.0Hz，1H)，7.08(s，1H)，5.69(d，J＝8.8Hz，1H)，4.47(t，J＝8.4Hz，1H)，3.47(d，J＝2.0Hz，4H)，3.08-2.98(m，2H)，2.49(t，J＝4.4Hz，4H)，2.36(s，3H)，1.66-1.51(m，1H)，1.51-1.49(m，1H)，1.39-1.27(m，4H)，0.90(d，J＝7.2Hz，3H).實施例7：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1，3，4-噻二唑-2-羧醯胺.步驟1.內含化合物7A(60g，0.313mol)、K2CO3(130g，0.94mol)、和甲基哌嗪的DMF(300mL)溶液在40℃下攪拌3小時。將反應混合物倒入水中，用CH2Cl2萃取。對有機層使用水洗滌、使用Na2SO4乾燥並濃縮以獲得黃色固體的化合物7B(58.5g，73％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.37-4.47(m，2H)，3.60-3.71(m，4H)，2.47-2.60(m，4H)，2.34(s，3H)，1.35-1.47(m，3H).步驟2.在室溫下向內含化合物7B(5.0g，19.53mmol)的THF(30mL)的溶液中加入1N水性NaOH(30mL)並且混合物攪拌3小時。混合物經濃縮以去除THF，用1N水性HCl調整至pH8，然後凍幹以得到黃色固體的粗製酸7C(5.25g，100％)(包含NaCl)，其無須任何純化可用於下一步驟。1HNMR(400MHz，MeOD)δ3.68(m，4H)，2.91(m，4H)，2.57(s，3H).步驟3.在0℃下，向內含化合物7C(450mg，2mmol)的DMF(15mL)和DCM(5mL)溶液中加入EDC(400mg，2mmol)和HOBt(310mg，2mol)。在0℃攪拌該混合物30分鐘。在0℃下添加化合物1D(500mg，2mmol)。將混合物在40℃下攪拌過夜。混合物用H2O稀釋並用EtOAc萃取。有機層在Na2SO4上乾燥並濃縮以得到粗產物，其通過柱色譜(石油醚/DCM/MeOH50/50/0至0/10/1)純化和重結晶(MeOH)以得到暗黃色固體的實施例7(230g，15％，2批)。1HNMR：(400MHz，DMSO-d6).10.74(s，1H)，8.61(d，J＝8.0Hz，1H)，7.56(d，J＝8.0Hz，1H)，7.30(d，J＝8.0Hz，1H)，7.09(s，1H)，7.05-7.02(m，1H)，6.96-6.93(m，1H)，4.14(s，1H)，3.50(s，4H)，2.99-2.84(m，2H)，2.42(s，4H)，2.21(s，3H)，1.57(s，2H)，1.25-1.21(m，4H)，0.80(s，3H).實施例8：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-4H-1，2，4-三唑-3-羧醯胺.步驟1.在0℃下向內含化合物8A(4.5g，35mmol)的1M硫酸(70mL，70mmol)的攪拌混合物中加入硝酸鈉(2.41g，52.5mmol)的水(20mL)溶液，之後加入額外的水(35mL)。25分鐘後，加入內含KBr(8.33g，70mmol)和溴化亞銅(4.51g，10.5mmol)的水(35mL)溶液。在20℃下攪拌所得的混合物3小時，並用乙酸乙酯萃取混合物(3x)並且合併的萃取物用鹽水(30mL)洗滌、在Na2SO4上乾燥，並濃縮至幹以得到白色固體的化合物8B(2.9g，43％)。實際ES-API：191.9，189.9步驟2.向內含化合物8B(2.9g，15mmol)的DCM(5mL)和THF(15mL)混合物的溶液中加入Mukaiyama試劑(5g，19.5mmol)和DIPEA(5.8mL)。在攪拌10分鐘後，向混合物中加入1-(1H-吲哚-3-基)己-2-胺1D(3.3g，15mmol)。將混合物在50℃下攪拌3小時。用DCM稀釋混合物，用水洗滌。有機相在Na2SO4上乾燥並濃縮，並且通過在矽膠(20∶1DCM/MeOH)上的柱色譜純化殘留物以得到淡黃色固體的化合物8C(2.7g，47％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.96(brs，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.23(d，J＝8.0Hz，1H)，7.07-7.11(m，2H)，7.01-7.04(m，1H)，6.96(brs，1H)，4.38(d，J＝4Hz，1H)，2.95(d，J＝4Hz，1H)，1.61(brs，1H)，1.39-1.46(m，1H)，1.19-1.28(m，4H)，0.78(s，3H).步驟3.在120℃下，化合物8C(778mg，2mmol)和N-甲基哌嗪(1g，10mmol)的混合物在密封管中過夜攪拌。加入乙酸乙酯(20mL)並濾去沉澱的固體。用水和鹽水洗滌濾液。溶液在Na2SO4上乾燥，濃縮，並通過製備型TLC(10：1DCM/MeOH)純化以得到黃色固體的實施例8(184mg，18％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.43(brs，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.26(d，J＝8.0Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.05(t，J＝8.0Hz，1H)，6.96-7.00(m，3H)，4.32(d，J＝4Hz，1H)，3.42(s，4H)，2.28-2.29(m，2H)，2.50(s，4H)，2.28(s，3H)，1.56-1.62(m，1H)，1.41-1.46(m，1H)，1.22-1.33(m，4H)，0.79(t，J＝8.0Hz，3H).實施例9：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-咪唑-5-羧醯胺.步驟1.在0℃下向內含咪唑9A(20g，294mmol)的THF(200mL)和TEA(40g，400mmol)溶液中緩慢加入二甲基氨基磺醯氯(55g，383mmol)。反應混合物在室溫下攪拌過夜。將反應混合物傾倒入300mL水中，用乙酸乙酯萃取(3x)。溶液用水和鹽水洗滌，在Na2SO4上乾燥，然後濃縮至幹以得到無色油狀的化合物9B(42g，89％)，其在置於室溫下1小時後固化。該固體物質無需進一步純化即可直接用於下一步驟。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.86(s，1H)，7.23(s，1H)，7.11(s，1H)，2.82(s，6H).步驟2.在-78℃下向含化合物9B(10g，57mmol)的無水THF(100mL)溶液中滴加正丁基鋰(27.3mL，68mmol)。溶液在該溫度下攪拌30分鐘。然後在-78℃下加入溴甲烷(20.5g，62.7mmol)並且允許混合物在3小時的時間段內升溫置室溫，之後在室溫(25℃)下過夜連續攪拌。混合物用飽和水性NH4Cl(50mL)稀釋並用DCM(3x)萃取。合併的有機層用鹽水洗滌，在Na2SO4上乾燥並濃縮，並且通過MPLC(己烷/DCM1∶1)純化以得到輕油狀的化合物9C(8.4g，57％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.41(s，1H)，7.00(s，1H)，3.01(s，6H).步驟3.向內含化合物9C(10g，39mmol)和N-甲基哌嗪(12g，118mmol)的二噁烷(100mL)混合物在90℃下過夜攪拌。將該溶液傾倒入水中，用DCM萃取(3x)。合併的有機層在Na2SO4上乾燥並濃縮，並且通過柱色譜(10∶1DCM/MeOH10∶1)純化殘留物以得到棕色固體的化合物9D(3.6g，34％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.27(s，1H)，6.84(s，1H)，3.43(m，8H)，2.97(s，3H)，2.91(s，6H).步驟4.在-78℃下向含化合物9D(3.6g，13mmol)的無水THF(40mL)溶液中滴加正丁基鋰(6.3mL，16mmol)。溶液在該溫度下攪拌30分鐘，然後加入氯甲酸甲酯(1.48g，16mmol)。在-78℃下攪拌該混合物3小時，然後升溫至室溫。混合物用飽和水性NH4Cl(50mL)稀釋並用DCM(3x)萃取。合併的有機層在Na2SO4上乾燥並濃縮，並且通過柱色譜(60∶1DCM/MeOH)純化殘留物以得到棕色粘稠油狀的化合物9E(1.5g，54％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.29(s，1H)，3.76(s，3H)，3.50(m，4H)，2.77(s，6H)，2.51(m，4H)，2.28(s，3H).步驟5.將化合物9E(1.5g，4.5mmol)和濃HCl(7.5mL)的混合物在60℃下攪拌過夜。混合物真空濃縮並且用MeOH處理殘留物(10mL)。通過過濾收集沉澱的白色固體並且真空乾燥以得到鹽酸鹽形式的化合物9F(800mg，84％)。1HNMR(400MHz，D2O)δ7.53(s，1H)，4.09(d，J＝14Hz，2H)，3.67(t，J＝12.4Hz，2H)，3.59(d，J＝12.4Hz，2H)，3.31(t，J＝12.4Hz，2H)，2.97(s，3H).步驟6.向內含化合物9F(1.05g，5mmol)的DCM(2mL)和THF(10mL)溶液中加入Mukaiyama試劑(1.65g，6.5mmol)和DIPEA(1.9g，20mmol)。在攪拌10分鐘後，向混合物中加入1-(1H-吲哚-3-基)己-2-胺1D(1.1g，5mmol)並且混合物在50℃下攪拌3小時。真空下去除溶劑並且用乙酸抑制稀釋殘留物並用水和鹽水洗滌，在Na2SO4上乾燥，並濃縮。殘留物通過製備型TLC(10∶1DCM/MeOH)純化2次以得到淡黃色固體的實施例9(200mg，8.3％)。1HNMR(400MHz，MeOD-d4)δ7.59(d，J＝8Hz，1H)，7.30(d，J＝8Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.08-7.04(m，1H)，7.07(s，1H)，6.98-6.94(m，1H)，4.33-4.26(m，1H)，3.40-3.35(m，4H)，2.99-2.97(m，2H)，2.70-2.68(m，4H)，2.44(s，3H)，1.68-1.60(m，1H)，1.55-1.45(m，1H)1.38-1.28(m，4H)，0.86(t，J＝7Hz，3H).實施例10：N-(1-(5-氟-1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(2-嗎啉代乙基)噻唑-5-羧醯胺.步驟1.內含化合物4C(12.7g，44.8mmol)的乙腈(127mL)溶液用嗎啉(5.6g，65mmol)和Cs2CO3(21.3g，65mmol)處理並在50℃下過夜攪拌。過濾混合物，濃縮濾液，並且通過柱層析(CH2Cl2/MeOH＝10∶1)純化殘留物以得到淡黃色油狀的化合物10A(5.6g，63％)。1HNMR(400MHz，MeOD)δ7.66(d，J＝3.2Hz，1H)，7.19(d，J＝3.6Hz，1H)，3.72(m，4H)，3.22(m，2H)，2.77(m，2H)，2.52(m，4H).步驟2.在-78℃下向含化合物10A(5.6g，28mmol)的無水THF(56mL)溶液中滴加正丁基鋰(13.6mL，17mmol)。混合物在該溫度下攪拌30分鐘，然後在-78℃下向溶液中滴加氯甲酸甲酯(3.2g，17mmol)。將混合物攪拌3小時。在此期間，溫度升溫至室溫(25℃)。加入飽和NH4Cl水溶液(50mL)以猝滅反應。混合物用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，在硫酸鈉上乾燥並濃縮以得到化合物10B(4.0g，60％)。該粗物質無需進一步純化即可直接用於下一步驟。1HNMR(400MHz，CDCl3)8.27(s，1H)，3.90(s，3H)，3.72-3.76(m，4H)，3.21(t，J＝8.0Hz，2H)，2.77(t，J＝8.0Hz，2H)，2.54(s，4H).步驟3.向內含化合物10B(3g，11.7mmol)的MeOH(30mL)溶液中添加內含NaOH(0.7g，17mmol)的水(9mL)溶液。將混合物在25℃下攪拌3小時。真空去除MeOH並且用EtOAc(30mL)洗滌溶液。用1NHCl將水相調整到pH＝5-6並且用EtOAc萃取(50mLx3)。有機相用鹽水洗滌，在硫酸鈉上乾燥並濃縮至幹以得到橙色固體的化合物10C(3g，100％)。該粗物質無需進一步純化即可直接用於下一步驟。步驟4.向含化合物10D(3.5g，18mmol)的CH2Cl2(35mL)溶液中加入CDI(3.52g，21.8mmol)。混合物在室溫下攪拌2小時，然後向混合物中加入N，O-二甲基鹽酸羥胺(2.3g，26mmol)。將混合物在室溫下攪拌4小時。混合物用水(30mL)稀釋，並用EtOAc(50mLx2)萃取。有機相用鹽水洗滌，在硫酸鈉上乾燥，濃縮以得到棕色油狀的化合物10E(4.5g，100％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)8.33(s，1H)，7.15-7.30(m，3H)，6.90-6.92(m，1H)，3.87(s，2H)，3.73(s，3H)，3.28(s，3H).步驟5.在-78℃下向含化合物10E(15mmol，57mmol)的無水THF(72mL)溶液中滴加正丁基鋰(46mL，91mmol)。混合物在該溫度下攪拌10分鐘。加入水性HCl(1M，30mL)以猝滅反應。混合物用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，在硫酸鈉上乾燥並濃縮以得到化合物10F(3.5g，70％)。該粗物質無需進一步純化即可直接用於下一步驟。步驟6.向含AcONH4(46g，0.6mol)和NaBH3CN(9.5g，0.15mol)的MeOH(140mL)和THF(30mL)溶液中加入化合物10F(3.5g，15mmol)。將混合物在室溫下攪拌20小時。真空去除MeOH和THF並且向殘留物中加入飽和NaHCO3。使用EtOAc萃取溶液(100mLx2)。有機相用鹽水洗滌，在硫酸鈉上乾燥，並濃縮以得到棕色油狀的化合物10G(4.0g，100％)。該粗物質無需進一步純化即可直接用於下一步驟。步驟7.向內含化合物10C(1.6g，6.6mmol)的二氯甲烷(6.4mL)和THF(16mL)溶液中加入Mukaiyama試劑(2.2g，8.6mmo1)和DIPEA(1.6g，6.6mmol)。將所得混合物攪拌10分鐘。加入化合物10G(1.6g，6.8mmol)並且混合物在40℃攪拌2小時。濾去所得沉澱並真空濃縮濾液。殘留物溶於乙酸乙酯(30mL)中，用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，用硫酸鈉乾燥，並濃縮。通過製備型HPLC(ShimadzuLC-8A製備型HPLC，Luna(2)C18柱，10mM水性NH4OH中25％-55％CH3CN，在20分鐘內，以80mL/分鐘)純化殘留物以得到白色固體的實施例10(300mg，9.8％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)8.38(s，1H)，7.74(s，1H)，7.16(t，J＝4.4Hz，1H)，7.01(s，1H)，6.81-6.86(m，1H)，5.80(d，J＝8.8Hz，1H)，4.33(d，J＝5.2Hz，1H)，3.63(s，4H)，3.05(t，J＝6.4Hz，2H)，2.89-2.94(m，2H)，2.64-2.66(m，2H)，2.43(s，4H)，1.55-1.58(m，1H)，1.42-1.44(m，1H)，1.22-1.31(m，4H)，0.80(t，J＝6.8Hz，3H).實施例11：N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-嗎啉代噻唑-5-羧醯胺.向內含化合物3A(200mg，0.49mmol)和DIPEA(171μL，0.98mmol)的THF(2mL)混合物中加入嗎啉(42μL，0.49mmol)。反應混合物在170℃下在密封的Q-管壓力反應器中攪拌1.5小時。加入額外的嗎啉(42μL，0.49mmol)並且混合物在170℃下在密封的Q-管壓力反應器中加熱0.5小時。混合物經濃縮並且通過柱層析(0-5％MeOH/DCM)純化殘留物以得到化合物實施例11(148mg，73％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(brs，1H)，7.64(d，J＝7.5Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.37(d，J＝8Hz，1H)，7.19(dd，J＝7.5Hz，1H)，7.12(dd，J＝7.5Hz，1H)，7.05(d，J＝2Hz，1H)，5.57(d，J＝8Hz，1H)，4.39-4.42(m，1H)，3.80(t，J＝4.5Hz，4H)，3.51(t，J＝4.5Hz，4H)，3.06(dd，J＝14.5，5.5Hz，1H)，3.01(dd，J＝14.5，5.5Hz，1H)，1.26-1.64(m，6H)，0.87(t，J＝7Hz，3H).ESMS+：413.6[M+1].可按照上述方法製備實施例12-26。實施例27：(S)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧醯胺，和實施例28：(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧醯胺.使用ChiralpakAD-H柱(250x30mm；5μM同上)在THAR80製備型SFC上分離對映異構體。對映異構體溶於甲醇(50mg/mL)中並且每次注射加載45mg的對映異構體。使用70g/流速的CO2中40％2-丙醇(添加劑：0.05％NH3H2O)的流動相和100巴的系統背壓來實現分離。柱溫度保持在40℃下並且在220nm處檢測峰。總循環時間是6分鐘。實施例27：((S)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧醯胺)：LCMS(XtimateC18，2.1X30mm，3μM同上)：峰1RT：2.036(100％)MS：426.2；任選旋轉(DichromPolaraizer，589nM)-0.143(sd＝0.0004)；手性純度檢驗(OJ-H，40％MeOH(0.05％DEA))峰1RT：3.61(99.87％)，峰2RT：5.3(0.13％)。實施例28：((R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)己-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)噻唑-5-羧醯胺)：LCMS(XtimateC18，2.1X30mm，3μM同上)：峰1RT：2.035(98.77％)MS：426.2.峰2RT：2.373(1.23％)MS：427.2；任選旋轉(DichromPolaraizer，589nM)+0.160(sd＝0.0003)；手性純度檢驗(OJ-H，40％MeOH(0.05％DEA))峰1RT：3.6(0.18％)，峰2RT：5.23(99.82％)。生物實施例1：用α-突觸核蛋白肽片段(4F)的體外螢光偏振試驗。螢光偏振試驗測試了化合物抑制α-突觸核蛋白肽片段的自聚集的能力。在測試化合物存在或不存在的情況下(化合物濃度為33.3至0.3μM)，肽在室溫下孵育60分鐘。使用485nm處的激發和520nm處的發射，在螢光偏振模式下的BMGPherastar酶標儀上讀取樣品。使用四參數邏輯擬合來分析數據(XLFit，IDBS軟體)。由美國肽公司(AmericanPeptide)製備肽4F(CTGFVKKDQLGK(SEQIDNO：1))。新鮮肽樣品以5mM在純化水中重建並且稀釋到含50mMNaCl的pH7.4的50mMHEPES中至100nM的終濃度。固體化合物溶於DMSO(10mM)中，然後在緩衝劑中稀釋。測試的化合物的數據示於表1。也測試了比較化合物A和B。比較物A：比較物B：表1.實施例IC50(μM)＊比較物A＞30§比較物B6.3513.33±1.9￥23.5530.2745.951.360.3970.3780.7798.5270.4±0.3§280.7±0.4§*n＝1除非另外說明§n＝2￥n＝3±SEM生物實施例2：體內藥代動力學試驗本文所述化合物的藥代動力學和腦部分布在單次靜脈內或口服給藥後的雄性C57BL/6小鼠中確定。一組54隻雄性小鼠被分成兩組27隻小鼠。以10mg/kg(i.v.)或2mg/kg(p.o.)的測試化合物給予組1(i.v.)和組2(p.o.)中的動物。在給藥前和給藥後0.08、0.25、0.5、1、2、4、8、和24小時(i.v.)，以及給藥前和給藥後0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小時(p.o.)收集血液樣品。在各時間點從三隻小鼠的組中收集血液到含K2EDTA作為抗凝劑的標記的微量離心管中。通過全血離心分離血漿樣品並且在-70℃以下儲存直至生物分析。在收集血液樣品之後，通過CO2窒息法人道地處死小鼠並且同時收集腦部。收集後，腦部樣品在冰冷的磷酸鹽緩衝鹽水(pH7.4)中洗滌，在濾紙上溫和乾燥，稱重並置於聚丙烯管中。使用磷酸鹽緩衝鹽水pH7.4勻化其他腦部樣品並且總的勻漿體積是腦部重量的三倍。樣品然後儲存在-70℃以下至生物分析。所有樣品經處理用於通過使用乙腈的蛋白質沉澱分析，並且用量身定做的LC/MS/MS方法分析(LLOQ：1.01ng/mL針對血漿和腦部)。使用PhoenixWinNonlin(版本6.3)的非房室分析工具來計算藥代動力學參數。從該試驗中獲得的數據示於表2。表2.*10mg/kg下**2mg/kg下NC＝沒有檢測到化合物(低於檢測限)ND＝未測定生物實施例3：測試化合物對α-突觸核蛋白與脂膜相互作用的影響的NMR試驗為了檢測脂膜存在下測試化合物與全長ASYN的相互作用，進行了NMR試驗。在Varian直接驅動600MHz和VarianInova800MHz光譜儀上在20mM磷酸鹽，pH＝7.4，100mMNaCl中進行NMR測量，使用10％D2O作為鎖定溶劑。使用NMRPipe處理光譜(參見，F.Delaglio，S.Grzesiek，G.W.Vuister，G.Zhu，J.Pfeifer，A.Bax，JBiomolNMR1995，6，277-293)。α-突觸核蛋白以0.12mM的濃度使用，同時在存在時以0.8mg/ml加入1-棕櫚醯-2-油醯-sn-甘油-3-磷酸甘油(POPG)-脂質體。用SOFAST脈衝序列來劑量所有1H-15N相關光譜(參見P.Schanda，E.Kupce，B.Brutscher，JBiomolNMR2005，33，199-211)。易於從之前的出版物中獲得靠近生理條件處的譜峰歸屬(BMRBID16300；參見J.N.Rao，Y.E.Kim，L.S.Park，T.S.Ulmer，JMolBiol2009，390，516-529)。為了配體滴定，向脂質體/ASYN混合物中逐步加入實施例1。記錄各步驟的15N-1H相關光譜並且信號強度參照游離形式的ASYN，同時考慮稀釋影響。為了減少獲得的數據的噪音，ASYN的多個醯胺位置的強度比相對於對應之前觀察到的SL1和SL2結合模式選擇的2個區域取平均(參見C.R.Bodner，A.S.Maltsev，C.M.Dobson，A.Bax，Biochemistry2010，49，862-871)。如圖1所示，當ASYN包埋在脂膜中時，ASYN的異核單量子相干(HSQC)光譜信號強度衰減。HSQC信號的脂質誘導的衰減被實施例1逆轉，因此證明了測試化合物破壞ASYH與脂膜結合的能力。圖1A顯示在POPG脂質體存在下隨著ASYN殘基變化的信號衰減。Y軸(I/Io)是在脂膜存在(I)或不存在(Io)下ASYN的HSQC光譜信號強度的比率。在圖1B中，ASYN殘基3-23的平均I/Io比率以添加的實施例1的濃度的函數作圖。該曲線顯示實施例1以濃度依賴性方式逆轉了ASYN與1-棕櫚醯-2-油醯-sn-甘油-3-磷酸甘油(POPG)(0.8mg/mL)脂質體的相互作用。當分析ASYN殘基66-76時獲得類似結果。生物實施例4：測試化合物對脂膜中環形低聚物的影響使用電子顯微鏡來直接觀察測試化合物對脂膜中ASYN低聚物形成的影響。用50％ETOH中的飽和乙酸鈾醯溶液對帶脂膜的福爾瓦網格復染25分鐘。網格然後在2％鹼式硝酸鉍的液滴上漂浮10分鐘，並再次用雙蒸水小心淋洗，並使其完全乾燥。使用ZeissEM10透射電子顯微鏡來對網格進行成像。對於各網格，獲得了10000倍放大的5-10個電子顯微圖和40000倍放大的5-10個圖像。掃描最好的底片並用ImageJ1.43程序分析來估計每個高倍視野(100x100nm)中環形低聚物的數量(Rasband，W.S.，ImageJ，美國馬裡蘭州貝塞斯達的國立衛生研究院(U.S.NationalInstitutesofHealth，Bethesda，Maryland，USA)，http：//imagej.nih.gov/ij/，1997-2014)。在該研究中，發現實施例1顯著降低了脂膜中ASYN的環形，環狀，低聚形式的積累，同時仍然觀察到小的非環形聚集體。圖2A顯示在實施例1存在或不存在的情況下，在脂質包被的福爾瓦網格上形成的ASYN低聚物的電子顯微圖像。圖2B是反應電子顯微圖像定量的照片。實施例1將福爾瓦網格上檢測到的環形ASYN低聚物的數量降低至10nM的濃度(20次測量的平均值±SEM)。實施例1在相對於ASYN低於化學計量濃度下實現這些效果。這些發現與顯示實施例1使ASYN構象穩定化不太可能在脂膜中形成環狀低聚物的分子動力學建模相一致。這些結果表明實施例1以降低ASYN低聚物對脂膜的親和性的方式與ASYN的低聚和脂質結合形式相互作用。實施例1能夠幹擾ASYN低聚化、ASYN與脂膜的結合、以及在這些膜中形成環形環狀低聚物(「孔」)。這些結果表明實施例1改變了ASYN的聚集並且防止被認為導致帕金森病中錯誤摺疊、低聚化的ASYN的神經毒性的特定低聚結構的形成。生物實施例5：測試化合物對細胞中α-突觸核蛋白的影響研究了實施例1對過表達人ASYN的B103神經母細胞瘤細胞中ASYN積累的影響。使用慢病毒表達系統來在這些細胞中表達GFP-標記的ASYN。在表達開始後48小時，加入載劑或實施例1(0.1或1.0μM)持續另外24小時。然後觀察累積的GFP-ASYN的量。如圖3所示，實施例1在1.0μM下降低了這些細胞中GFP螢光的強度(對比載劑對照組*p＜0.05)。因此，發現實施例1降低了ASYN-過表達細胞中ASYN-GFP的濃度。生物實施例6：體內功效研究帕金森病(PD)的特徵在於α-突觸核蛋白(ASYN)的低聚形式的異常累積。假設ASYN的這些毒性形式部分通過在細胞膜中形成孔狀結構導致PD和共核蛋白病中觀察到的神經功能障礙和細胞死亡。本文所述的化合物設計為通過阻斷這些ASYN毒性物質的形成和累積緩解PD-相關症狀和致病性。A)帕金森病的轉基因小鼠模型在Thy-1啟動子下過表達人野生型ASYN的PD轉基因小鼠(也稱為種系61ASYN轉基因小鼠)模型中評價實施例1，通過以每天一次給予0、1、或5mg/kg(i.p.)的實施例1(每周五天)持續3個月，然後評價PD-相關的感覺運動性能、生物化學改變、以及ASYN和相關蛋白質的神經病理變化。使用圓點束任務來評價感覺運動損傷，使用滑跌(slip)的數量作為主要結果測量(圖4)。為了確認轉基因小鼠模型的活力，測試了ASYN轉基因和非轉基因小鼠，並且載劑處理的轉基因對象的滑跌的數量在統計學上明顯高於載劑處理的非轉基因對照組(****p＜0.0001)。在兩個測試劑量下用實施例1處理的轉基因小鼠在滑跌上相比載劑處理的轉基因小鼠在統計學上顯著下降(對比載劑處理的ASYN轉基因小鼠，#p＜0.05和##p＜0.01)。對大腦皮質和海馬區腦部勻漿的Western印跡分析顯示在轉基因ASYN蛋白水平上統計學上顯著降低。進行了在皮質勻漿中使用A11抗體點印跡方法對低聚蛋白質(包括SAYN)的生物化學評價。驗證了轉基因小鼠模型，因為對皮質勻漿中低聚物的A11抗體點印跡評價顯示相對於載劑處理的非轉基因對照小鼠，載劑處理的ASYN轉基因小鼠中額葉皮質的胞質部分在A11免疫染色中的統計學顯著增加(圖5；*p＜0.05)。用實施例1(5mg/kg)處理相對於載劑處理的ASYN轉基因小鼠在來自小鼠的額葉皮質區的胞質部分中產生了低聚物的統計學顯著降低(圖5；###p＜0.001)。B)種系61ASYN轉基因小鼠模型Masliah及同事之前的免疫標記研究已經證明在種系61ASYN轉基因小鼠中的皮質神經氈中ASYN免疫標記的統計學顯著增加(MasliahE.等，Science，2000，287(5456)：1265-9)。這些神經病理發現在使用Masliah和同事所述的方法的現有研究中被再次確認。實施例1給藥(1和5mg/kg劑量)在ASYN水平上產生了統計學上顯著的減少，如對ASYN免疫標記的影響所確定(圖6和7)。相對於非轉基因/載劑對照，在ASYN轉基因小鼠的皮質神經氈(****p＜0.0001)(圖6A)和神經細胞體(**p＜0.01)(圖6B)中用密理博抗-α-突觸核蛋白抗體的ASYN免疫標記在統計學上顯著增加。實施例1(1和5mg/kg)給藥在皮質神經氈中的α-突觸核蛋白免疫標記中產生了統計學顯著降低(圖6A)(對於載劑處理的ASYN轉基因小鼠####p＜0.0001)，以及在5mg/kg下在ASYN免疫標記的神經元細胞體數量的非統計上顯著降低(圖6B)。此外，觀察到包括酪氨酸羥化酶、NeuN、和GFAP的神經變性相關標誌物的中和。如圖8所示，使用上述的圓點束表現試驗研究了0.5mg/kg和1mg/kg的實施例1對種系61ASYN轉基因小鼠中感覺運動損傷的影響。與載劑處理的非轉基因對照對象相比，在載劑處理的ASYN轉基因對照小鼠中觀察到滑跌數量的統計學顯著增加(****p＜0.0001)。相對於載劑處理的ASYN轉基因小鼠，在ASYN轉基因小鼠中，在1mg/kg下，實施例1處理產生了統計學顯著的改善(減少的滑跌)(##p＜0.01)。在0.5mg/kg下，實施例1產生了滑跌的非統計學顯著減少。總之，這些結果證明實施例1在轉基因小鼠模型中顯著改善了感覺運動性、生物化學、和神經病理學結果。這些發現確認給予實施例1在帕金森病/路易體痴呆(PD/DLB)的轉基因小鼠小鼠模型中產生的行為、生物化學、和神經病理學測量的改善。生物實施例7：生物標誌物的開發A)糞便勃利計數在開發可轉化功能性和生物化學生物標誌物的努力中，進行了其他評價，包括評價在新環境中產生的糞便勃利計數和ASYN的死後心臟水平。帕金森患者的慢性便秘患病率為50-80％，並且可能在診斷之前出現20年以上(Awad，R.A.WorldJ.Gastroenterol.2011，17(46)，5035-5048；Kim，J.S.等，J.Neurol.Sci.2011，310(1-2)，144-151)。相關的症狀包括降低的通便次數和EMG異常(括約肌，直腸肛門抑制反射)，並且伴隨著關鍵的病理學發現，包括副交感神經和神經中的路易體，和降低的多巴胺能神經元。這種帶有降低的活性水平的腸功能異常改變了飲食(食物和水)，以及帕金森藥物的效果。較早出版的研究包括種系61ASYN轉基因小鼠有降低的結腸運動、糞便排除、和體重的報告(Wang，L.等，Neurogastroenterol.Motil.2012，24(9)，e425-436)。對於本發明的研究而言，糞便勃利計數的評價與自發運動活性測試期間聯用。在5分鐘測試期間結束時，實驗人員對測試室中存在的糞便勃利數量進行計數，並且結果示於圖9。相對於載劑處理的非轉基因對照小鼠，載劑處理的ASYN轉基因小鼠在新環境中產生的糞便勃利在統計學上明顯減少(*p＜0.05)。實施例1對非轉基因小鼠中產生的勃利數量沒有影響，但是在0.5mg/kg(#p＜0.05對比載劑處理的ASYN轉基因小鼠)和1mg/kg(###p＜0.001對比載劑處理的ASYN轉基因小鼠)下在ASYN轉基因小鼠中恢復了功能。B)心臟功能向腸功能障礙那樣，心臟生物化學和功能的變化可能出現在帕金森診斷前20年或更早。PD患者中充分表徵的功能改變包括改變的心律差異和體位性低血壓(Kaufmann，H.等，HandbookClin.Neurol.2013，117，259-278；Jain，S.等，Neurobiol.Dis.2012，46(3)，572-580；Senard，J.M.等，Rev.Neurol.(Paris)2010，166(10)，779-784；Post，K.K.等，ParkinsonismRelat.Disord.2008，14(7)，524-531)。這些功能變化伴隨著心肌去甲腎上腺素能神經丟失的病理學發現和在心臟自主神經中存在ASYN聚集(Jellinger，K.A.，J.Neurol.Sci.2011，310(1-2)，107-111)。在種系61ASYN轉基因小鼠中之前的心臟功能和生物化學表徵已經證明位於去甲腎上腺素能神經內的心臟的心室和心房壁中存在hASYN(Fleming，S.M.，J.ParkinsonsDis.2011，1(4)，321-327)。對於目前的研究，通過Western印跡分析進行對心臟ASYN的死後Western印跡評價以確認在ASYN轉基因心臟組織中的存在並且在ASYN的轉基因心臟水平上評價實施例1的影響(圖10)。相對於載劑處理的非轉基因對照小鼠，在載劑處理的ASYN轉基因小鼠中在檢測的ASYN心臟水平上有統計學顯著增加(***p＜0.001)。相對於載劑處理的ASYN轉基因小鼠，用0.5或1mg/kg的實施例1處理的ASYN轉基因小鼠中ASYN水平有統計學顯著的正常化(####p＜0.0001)。C)視網膜成像已經假設神經蛋白α-突觸核蛋白(ASYN)的異常聚集是帕金森病(PD)和路易體痴呆(DLB)中神經細胞死亡和突觸功能失調的原因。已經開發了選擇性幹擾α-突觸核蛋白摺疊動力學並防止轉播二聚體形成的化合物並在動物模型中進一步評價。在一些帕金森患者中存在視覺功能改變(Botha，H.等，ParkinsonismRelat.Disord.2012，18(6)，742-747；Bodis-Wollner，I.等，Behav.Neurosci.2013，127(2)，139-150；Bodis-Wollner，I.，ParkinsonismRelat.Disord.2013，19(1)，1-14；Javaid，M.A.等，ParkinsonismRelat.Disord.2012，18(補充1)，S100-3)並且最近的報告已經表明PD視網膜中的潛在病理學變化。光學相干斷層成像術(OCT)研究已經證明帕金森患者中視網膜神經氈層減少(Yu，J.G.等，PLoSOne2014，9(1)，e85718)。死後評價已經顯示PD視網膜中ASYN沉積(Bodis-Wollner，I.等，Ann.Neurol.2014，75(6)，964-6)。之前證明了在DLB/PD的PDNG78轉基因小鼠模型中e-GFP-ASYN的報告縱向視網膜成像評價作為評價和跟蹤帕金森病的動物模型中神經變性變化進展的方法的可行性(Rockenstein等，「PD/DLB的轉基因小鼠模型中α-突觸核蛋白-eGFP的視網膜掃描評價(Retinalscanningevaluationsofalpha-synuclein-eGFPdepositioninatransgenicmousemodelofPD/DLB)，」神經科學協會(SocietyforNeurosciences)，年會，2013，摘要329.06)。PDNG78視網膜中進行性病理學特徵顯示反映CNS病理學，從而提供了非侵入性和重複評價PD/DLB的轉基因小鼠模型中潛在治療介入的手段。在帕金森病/路易提痴呆(PD/DLB)的轉基因小鼠模型中的縱向視網膜成像研究中，進行該研究以確定實施例1(3個月，0和5mg/kg下i.p.給藥)對α-突觸核蛋白(ASYN)視網膜病理學的存在和進展的影響。轉基因小鼠對象過表達PDGF-β啟動子下的融合α-突觸核蛋白-GFP(綠色螢光蛋白)並且通常稱為PDNG78轉基因小鼠(Rockenstein，E.等，J.Neurosci.Res.2005，80，247-259)。PDNG78轉基因小鼠以比非轉基因對照小鼠高2-5倍的水平表達融合的ASYN-GFP。ASYN的CNS表達水平在包括新皮層和海馬區的PDNG78轉基因小鼠的邊緣系統中最高。ASYN-GFP的細胞分布反映了共核蛋白病相關的特徵，包括神經細胞體中的積累、神經氈的瀰漫染色、突觸點狀染色、和血管周圍沉積。進行了總共四個成像期間，包括在開始處理之前的基線，和以大約1個月間隔的3次後續成像期間。對視網膜圖像中含ASYN-GFP的圖像的百分比的分析(圖11)顯示在開始處理之前，在基線處的轉基因小鼠的視網膜中含ASYN-GFP的圖像面積百分比(**p＜0.01對比載劑處理的非轉基因小鼠)和對於各後簇掃描(*p＜0.05和***p＜0.001對比載劑處理的非轉基因小鼠)。在處理約60天後，在用實施例1處理(5mg/kg)的轉基因小鼠中ASYN-GFP陽性面積百分比降低，並且持續至90天成像時間點(###p＜0.001對比載劑處理的ASYN轉基因小鼠)。對ASYN-GFP陽性顆粒計數的分析(圖12)顯示在轉基因小鼠中增加和持續的血管周圍和神經末端綠色螢光蛋白(GFP)標記，但在非轉基因小鼠中沒有顯示。在開始處理前的基線處(*p＜0.05對比載劑處理的非轉基因小鼠)和在處理約60天時開始的掃描(**p＜0.01對比載劑處理的非轉基因小鼠)，轉基因小鼠的視網膜中的總ASYN-GFP顆粒計數的統計學顯著增加。在處理約60天後，在用實施例1處理(5mg/kg)的ASYN轉基因小鼠中ASYN-GFP陽性顆粒數量降低，並且持續至90天成像時間點(##p＜0.07對比載劑處理的ASYN轉基因小鼠)。來自該研究的發現證明給予實施例1(每天5mg/kg；持續3個月)在作為PD/DLB模型的過表達ASYN的轉基因小鼠的ASYN視網膜病理學中產生了有益的變化。這些數據也通過潛在可轉化的成像方法提供了對實施例1的有益影響的其他證據測量。當前第1頁1 2 3