合成膽汁酸組合物、方法和製劑與流程

2023-09-16 17:45:45 1

相關申請案交叉參考本申請案主張優先於在2007年6月19日申請的美國臨時專利申請案第60/945,035號和在2007年8月20日申請的美國臨時專利申請案第60/956,875號；優先於在2008年2月21日申請的美國實用新型專利申請案第12/035,339號和在2008年5月16日申請的美國實用新型專利申請案第12/153,446號；並且優先於在2008年4月25日申請的英國專利申請案第0807615.0號，每個所述專利都是全文以引用方式併入本文中。
技術領域：
：概括地說，本發明涉及膽汁酸和相關組合物和方法。在一方面中，本發明涉及脫氧膽酸和相關組合物、可用中間體、和其合成方法。在另一方面中，本發明涉及本發明組合物的用途和用作醫藥組合物的方法以及製造其的方法。重要的是，本發明膽汁酸並非自天然產生這些酸的哺乳動物和微生物分離，並且因此不含任何與所述有機體相關的毒素和汙染物。在另一方面中，本發明涉及脫氧膽酸和其醫藥上可接受的鹽和中間體的合成。
背景技術：
：：人們對研究膽汁酸和(尤其)膽汁酸化學的膽酸學的關注已延續了大半個世紀。儘管對膽汁酸化學已了解很多，但其涉及眾多種化學實體，其中許多具有驚人特性。綜述可參見(例如)穆霍帕德亞,S.(Mukhopadhyay,S.)和U.麥特拉(U.Maitra.),當代科學(CurrentScience)87∶1666-1683(2004)(「膽汁酸化學和生物學(Chemistryandbiologyofbileacids)」)，其是以引用方式併入本文中。膽汁酸的特徵在於兩個連接單元，即剛性類固醇核和脂肪族短側鏈(見本申請案的圖1)。參見霍夫曼,A.F.(Hofmann,A.F.)等人。膽汁酸的建議名稱參見脂質研究期刊(J.LipidRes.)33∶599-604(1992)。核和側鏈二者具有大量可能的立體排列方式。可通過個別環的擴展或收縮來改變核，並且可使側鏈縮短或延長。此外，膽酸分子的兩部分都具有大量可能的極性取代基。電離基團可存於核或側鏈上。最後，偶合基團可存於核上(例如硫酸根、葡萄糖醛酸酯、磷酸根)或存於側鏈上(甘氨酸或牛磺酸或其它胺基酸，或甚至糖類)。側鏈結構決定了化合物的種類(膽酸或膽酸鹽)。膽酸是兩親性化合物，其具有兼性和兩親性「面」，參見霍夫曼,A.F.，生理科學新聞報(NewsPhysiol.Sci.)14∶24-29(1999)(「膽汁酸：好的，壞的，和醜陋的(BileAcids:Thegood,theBad,andtheUgly)」，第25頁，圖1)。通常，將疏水表面稱作「β面」並且將親水表面稱作「α面」。一般來說，β面為脂溶性並且α面極性相對較強。存在多種膽汁酸，例如那些在疏水面和親水面上具有極性基團(在天然存在的膽汁酸中為羥基)者，例如熊脫氧膽酸。分子的兩親性使得其形成具有兩親性的水不溶性脂質的混合膠粒，例如磷脂醯膽鹼。除非膽汁酸超過臨界濃度(稱作臨界膠粒化濃度)，否則膽汁酸不能溶解呈混合膠粒形式的膳食脂質。在人體中所發現的最主要膽汁酸是鵝脫氧膽酸和脫氧膽酸。脫氧膽酸也稱作脫氧膽酸鹽、膽烷酸、和3α,12α-二羥基-5β-膽烷酸鹽。在人體中，脫氧膽酸用於乳化脂肪以供在腸中吸收。在研究中，使用脫氧膽酸作為分離膜相關蛋白的溫和洗滌劑。當脫氧膽酸基本純淨時，其呈白色至灰白色晶體粉末形式。脫氧膽酸是肝臟所產生四種主要酸之一。其可溶於醇和乙酸中。脫氧膽酸的CAS號是[83-44-3]。快速去除脂肪是古老的理想，並且人們已宣稱很多物質可達成這種結果，但很少顯示其真正起作用。由於安全性和效能方面的問題，「美塑療法(Mesotherapy)」或使用注射物來去除脂肪並未被從業醫師廣泛接受，但自20世紀50年代以來已主張採用順勢療法和美容療法。歐洲首先提出了美塑療法，其是採用含有多種治療局部醫學和美容狀況的化合物的混合物的皮膚注射劑的方法。儘管在傳統上採用美塑療法來緩解疼痛，但近來在美國人們開始關注其美容應用，尤其是脂肪和蜂窩組織的去除。一種經如此報導的用於局部減少脂肪的治療(其在巴西很受歡迎並且採用磷脂醯膽鹼注射劑)被誤認為與美塑療法含義相同。儘管其因被傳言為「脂肪溶解」注射而具有吸引力，但大多數患者和醫師仍不明確這些美容治療的安全性和效能。參見羅湯達,A.M.(Rotunda,A.M.)和M.卡羅尼(M.Kolodney)，皮膚外科學(DermatologicSurgery)，32∶465-480(2006)(「美塑療法和磷脂醯膽鹼注射：歷史說明和回顧(MesotherapyandPhosphatidylcholineInjections:HistoricalClarificationandReview)」)。WO2006/133160(其包括圖在內的全部內容以引用方式併入本文中)闡述脂肪雕塑方法，例如通過將神經肽Y受體拮抗劑投與脂肪儲存位點來減小脂肪儲存。克羅寧M.G.(KoloninM.G.)等人，自然醫學(Nat.Med.)6月10(6):625-32(2004)闡述具有有效脂肪細胞殺滅效應的脂肪選擇性促凋亡肽。所述促凋亡肽需要到達脈管系統以實施殺滅。近期公開的文獻報導，當將脫氧膽酸注射至體內脂肪沉積中時，脫氧膽酸具有脂肪去除特性。參見WO2005/117900和WO2005/112942，以及美國專利第US2005/0261258號、美國專利第US2005/0267080號、美國專利第US2006/127468號、和美國專利第US20060154906號，所有所述專利的包括圖在內的全部內容都是以引用方式併入本文中。注射至脂肪組織中的脫氧膽酸鹽具有兩種效應：1)其通過溶胞機制殺滅脂肪細胞；和2)其使皮膚繃緊。達成期望美容整形(即體形塑造)同時需要這兩種效應。由於注射至脂肪中的脫氧膽酸鹽因暴露於蛋白質中而迅速失活並且隨後迅速返迴腸內含物中，因此其效應在空間上受到限制。由於此衰減效應可賦予臨床安全性，脂肪去除治療通常需要4-6個療程。此無需手術的局部脂肪去除不僅有利於病理性局部脂肪沉積(例如在治療HIV時伴隨醫療幹預的血脂異常)的治療性治療，也有利於美容性脂肪去除，並且不存在手術(例如抽脂法)中固有的伴隨風險。參見羅湯達等人，皮膚外科學，30∶1001-1008(2004)(「脫氧膽酸鈉的洗滌劑效應是用於局部化脂肪溶解的可注射磷脂醯膽鹼調配物的主要特徵(Detergenteffectsofsodiumdeoxycholateareamajorfeatureofaninjectablephosphatidylcholineformulationusedforlocalizedfatdissolution)」)和羅湯達等人，美國皮膚病學會雜誌(J.Am.Acad.Dermatol.)2005∶973-978(「用皮下脫氧膽酸鹽注射來治療脂肪瘤(Lipomastreatedwithsubcutaneousdeoxycholateinjections)」)，兩個文獻都是以引用方式併入本文中。醫藥級膽汁酸製劑可以相對低的成本在市場上購得。此低成本是因為以下事實：膽汁酸得自動物軀體，尤其是諸如牛和綿羊等大型動物。重要的是，如同所有動物源藥劑，人們擔心動物源膽汁酸產物可能含有動物病原體和其它有害因子，例如動物或微生物代謝產物和毒素，包括諸如致熱原等細菌性毒素。所述動物病原體可包括朊病毒，其被視為可引發朊病毒疾病的傳染性病原蛋白類型。朊病毒疾病是神經系統的變性病症。人們認為一種此等疾病，即「瘋牛」病(被認為是克羅伊茨費爾特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakobdisease)(CJD)的變種)，是由存於來自病牛的食用牛肉中的朊病毒所引發。大多數病例是具有未知傳播模式的散髮型；某些病例是遺傳型；並且少量病例是通過醫療程序傳播。人類朊病毒疾病通過消耗受感染材料而蔓延在歷史上與庫魯病(kuru)有關並且近年來與變種CJD有關。其它動物朊病毒疾病(綿羊瘙癢症、傳染性水貂腦病、鹿類的慢性消耗性疾病、和牛海綿樣腦病)似乎都是通過接觸受感染動物或通過消耗受感染食物而橫向傳播。由於傳播模式不同、種間屏障不可預測、組織中感染性的分布可變、和在某些疾病中所發現的種系變異，關於朊病毒疾病的風險評價和對未來事件的預測難於確定。一般來說，動物產物可能會暴露於產生致熱原(致發燒物質)的微生物中。如腸出血性大腸桿菌(E.coli.)對食物的汙染所證實，食物和/或醫藥產品的細菌汙染物也是一個嚴重問題。在所述汙染中涉及諸如牛肉等產品以及諸如蘋果、菠菜、和類似物等作物。在所述案例中，是細菌所產生的毒素(而非細菌自身)在人體中產生有害效應。所述有害效應包括嚴重腹瀉、腎衰竭和在極端情況下的死亡。必須實質上除去所有醫藥組合物中的細菌性內毒素(一類致熱原)。動物產品一般是通過消除法來純化，即終產物是除去雜質後的剩餘材料，而非自混合物選擇終產物。並且除了諸如病原體等可能的動物部分外，自動物源純化的另一人為因素是終產物是一或多種膽汁酸的混合物。例如，脫氧膽酸的市售製劑含有某些鵝脫氧膽酸以及膽酸，膽酸在哺乳動物膽汁酸合成中是脫氧膽酸和鵝脫氧膽酸二者的前體。由於未預先選定脫氧膽酸/鵝脫氧膽酸/膽酸的確切比例，在意欲大量製造膽汁酸時此可導致批次間差異。所述批次間差異可能會造成問題並且在獲得監管部門批准或品質控制中、尤其在製造醫藥組合物的努力中可能會需要額外步驟。顯然，製造者在製造膽汁酸醫藥組合物時需要批次間的可預測性。目前，關於含有動物病原體和其它有害因子的動物源產品的問題已通過自經隔離並且經檢查的動物獲得產物來解決。例如，來自紐西蘭動物的脫氧膽酸是在美國管理制度下用於人體的膽汁酸來源，只要動物繼續保持隔離或不含有可觀察到的病原體即可。也就是說，需要此類政府控制的管理制度以便在注射動物源藥物時識別動物病原體傳播的固有風險。倘若可獲得非動物藥物替代品，則不再需要政府管理制度。具有相關優點的所述替代品(替代動物源藥物的非動物性藥物)實例是人用胰島素。美國已於1998年停止製造牛胰島素，並且在2006年1月停止製造人用豬胰島素。儘管可自已知尚未接觸過會引發BSE的致病因子或其它致病因子的牲畜獲得動物胰島素，但製造設施或製程可能會使動物成份暴露於已接觸過病原體的動物中。通過使用以重組方式或合成方式製造的胰島素可消除致病因子傳播至人類的風險。對於消費者來說，胰島素的情形具有指導性：倘若可自由地獲得合成物質，則在理論上可消除動物病原體傳播的風險。對於製造者來說，若能夠製造基本不含動物病原體物質的純淨化學實體則有利於達成安全、優質、和管理目的。此外，與自生物來源獲得的產品相比，合成製程所提供的產品通常具有更高可重現性。目前，由於動物軀體來源的膽汁酸相當豐富，工業尚未進步至完全以化學方式來合成膽汁酸，或使用植物甾醇或微生物起始材料來製備膽汁酸。並且儘管已合成出膽汁酸衍生物，但由於動物材料成本低並且易於獲得，因此所述工作的類固醇化學仍主要使用動物源膽汁酸作為起始材料。儘管在歷史上人們在植物甾醇研究中付出大量努力，但仍未開發出便於市售的植物甾醇源膽汁酸的醫藥級組合物。參見(例如)穆霍帕德亞,S.和U.麥特拉.，當代科學87∶1666-1683,1670(2004)(應注意，根據1981年參考文獻(龜谷(Kametani)等人，美國化學協會雜誌(J.Am.Chem.Soc.)103∶2890(1981)(「(+)-鵝脫氧膽酸的第一次總合成(FirstTotalSynthesisof(+)-ChenodeoxycholicAcid)」)，此時尚未曾實施任何膽汁酸的總合成))。已使用諸如細菌等微生物所產生膽汁酸作為細菌產物在原位用於(例如)海洋溢油清除中。參見馬尼拉(Maneerat)等人，實用微生物生物技術(Appl.Microbiol.Biotechnol.)76∶679-683(2004)(「膽汁酸是海洋細菌香味菌屬(Myroides)菌株SM1的新產物(Bileacidsarenewproductsofamarienebacterium,Myroidessp.StrainSM1)」)。為實現脫氧膽酸去除脂肪的全部潛力，必須進一步解決使用動物源產品的相關問題。顯然，業內需要適量的已知原本就不含動物源部分(或能作用於動物、尤其哺乳動物並且在用於人類時可對人類產生有害效應的病原部分)和其它有害因子(例如動物或微生物代謝產物、毒素，包括諸如致熱原等細菌性毒素)的有效膽汁酸和相關組合物(例如脫氧膽酸)以供用作人用藥物。本發明通過提供以合成方式製備並且不具有動物病原體和其它有害因子的潛在風險的膽汁酸組合物來解決此問題。所揭示膽汁酸組合物可用於脂肪分解治療並且可用於局部脂肪去除領域的進一步研究和研發性工作中。技術實現要素：本文提供足量適宜膽汁酸作為所定義醫藥組合物，並且提供其合成方法。由此提供的膽汁酸組合物和方法並非自天然產生膽酸的哺乳動物或微生物分離。在一方面中，提供不含任何動物源部分和哺乳動物和/或細菌致熱原的特定脫氧膽酸醫藥組合物以及相關製造方法和用途。在另一方面中，提供足量適宜脫氧膽酸作為所定義醫藥組合物，其可用作局部去除脂肪的可注射醫藥組合物，並且提供相關組合物、製造方法和使用方法。本發明所定義脫氧膽酸鹽注射物可與通過正交機制消除脂肪的分子(例如NPY拮抗劑和/或脂肪選擇性促凋亡肽)組合來提供可用於以較少治療療程和更有效方式達成體形塑造的藥劑。在另一方面中，本發明提供與合成脫氧膽酸和其醫藥上可接受的鹽相關的方法和中間體。以合成方式製備的脫氧膽酸可用於去除脂肪的脂肪分解治療。附圖說明圖1是表現膽汁酸結構的圖，其包括膽酸骨架中碳的編號系統。圖2展示用本發明合成脫氧膽酸鈉處理後原代人脂細胞的細胞存活率的劑量依賴性降低相對於牛源脫氧膽酸鈉(西格瑪(Sigma))的相似性。圖3展示膽酸是兩親性化合物，其具有兼性和兩親性「面」。具體實施方式以引用方式併入本說明書中所提及所有出版物和專利申請案都是以引用方式併入本文中，其併入程度如同明確並且單獨地指明以引用方式併入每一個別出版物或專利申請案一般。具體實施方式定義在整個本發明中，各個出版物、專利和公開專利說明書都是以等同引用方式來參照。此處，這些出版物、專利和所公開專利說明書的揭示內容都是以引用方式併入本發明中以更充分地闡述本發明所屬
技術領域：
：的狀態。本文所用某些術語具有以下所定義含義。除非上下文明確表示其它含義，否則說明書和權利要求書中所用單數形式「一(a、an)」和「所述」包括單數和複數含義。除非另外說明，否則說明書和權利要求書中所用表示成份數量、反應條件等的所有數值在所有情況下均應理解為受術語「約」修飾。因此，除非表明相反含義，否則以下說明書和隨附權利要求書中所述數值參數都是近似值。至少應根據所報告有效數字位數並且通過採用一般捨入技術來解釋每一數值參數。術語「乙醯化試劑」是指可將乙醯基CH3C(O)-添加至分子的試劑。術語「酸」是指質子供體並且包括有機酸和無機酸二者。術語「烷基」是指具有1至10個碳原子並且優選地具有1至6個碳原子的單價飽和脂肪族烴基。此術語包括(例如)直鏈和具支鏈烴基，例如甲基(CH3-)、乙基(CH3CH2-)、正丙基(CH3CH2CH2-)、異丙基((CH3)2CH-)、正丁基(CH3CH2CH2CH2-)、異丁基((CH3)2CHCH2-)、仲丁基((CH3)(CH3CH2)CH-)、叔丁基((CH3)3C-)、正戊基(CH3CH2CH2CH2CH2-)、和新戊基((CH3)3CCH2-)。術語「芳基」是指具有6至12個碳原子的單價芳香族碳環基團，其具有單環(例如苯基)或多個稠環(例如萘基)。術語「動物源」是指源自包括多細胞生物和單細胞生物的生物界(動物界)中任一種生物。術語「脫水劑」是指可與水反應的試劑。在一方面中，脫水劑可與自分子移除的水反應。術語「脫硫劑」是指可與硫化物反應的試劑。在一方面中，脫硫劑可與含硫化物分子反應以自分子移除硫化物基團。術語「乙二硫醇或二噻烷前體」是指通過與羰基反應可形成乙二硫醇或二噻烷的試劑。術語「親電乙醯基」是指作為親電體的乙醯基，親電體是受電子吸引並且易於接受電子的基團。術語「氫化劑」是指可向分子提供氫的試劑。術語「路易斯酸(Lewisacid)」是指電子對受體。路易斯酸包括有機金屬試劑，例如烷基滷化鋁(例如Et2AlCl和MeAlCl2)。術語「哺乳動物源」是指源自任何哺乳動物。術語「哺乳動物」是指以乳腺分泌的乳汁養育幼仔的溫血高等脊椎動物(例如胎生動物、有袋類動物、或單孔類動物)綱(哺乳綱)，其皮膚通常或多或少經毛髮覆蓋，並且包括人類。術語「微生物源」是指源自任何微生物。術語「微生物」是指圓形、螺旋形、或杆形單細胞原核微生物領域(細菌領域)，其可能缺少細胞壁或若其具有細胞壁則為革蘭氏(gram)陽性或革蘭氏陰性，其經常聚集成菌落或可藉助鞭毛來移動，其通常生存於土壤、水、有機物質、或植物和動物體內，其營養方式通常是自養、腐生或寄生，並且其特徵在於其生化效應和致病性。術語「烯化劑」是指與酮反應以形成對應烯烴的試劑。術語「烯烴形成條件」是指實施所述轉化的適宜條件。所述試劑的實例包括魏悌希(Wittig)試劑和魏悌希烯化條件。術語「氧化劑」是指可在氧化還原反應中接受電子的試劑。以此方式，可將滷素或氧添加至分子中或可自分子移除氫。術語「病原體」是指疾病的具體致病因子。「醫藥上可接受的鹽」是指自業內熟知的各種有機和無機異荷離子衍生的醫藥上可接受的鹽，並且包括(僅例如)鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽、和四烷基銨鹽。適宜鹽包括那些闡述於以下文獻中者：P.海因裡希斯塔爾(P.HeinrichStahl)、卡米爾G.韋穆特(CamilleG.Wermuth)(編輯)，藥物鹽特性、選擇和應用手冊(HandbookofPharmaceuticalSaltsProperties,Selection,andUse)；2002。這些醫藥上可接受的鹽可通過使DCA與適宜鹼反應來製備。出於例示性目的，所述鹼的實例包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、或氫氧化鋰。或者，所述鹽可通過用鹼水解DCA的酯和省略任何可產生DCA的酸處理來製備。術語「還原劑」是指在氧化還原反應中可提供電子的試劑。以此方式，可自分子移除滷素或氧，或可將氫添加至分子中。組合物和使用方法在本文所述各方面中，本發明提供用於醫藥用途的組合物(和可用中間體)、其合成方法、和本發明醫藥組合物的使用方法。重要的是，本發明膽汁酸組合物不具有自動物起始材料獲得的材料中的固有風險，並且因此不需要針對動物源材料的詳細檢查和管控。因此在一方面中，本發明涉及不含諸如哺乳動物病原體等動物源材料，並且實質上不含諸如致熱原等細菌源毒素的膽汁酸醫藥組合物。脫氧膽酸鈉是天然產生的膽酸鹽，其可在消化道內溶解膳食脂質。其是通過複雜的生物合成途徑採用膽固醇作為起始材料在體內產生，並且所述途徑同時涉及人類和細菌酶二者。脫氧膽酸鹽的主要功能是通過溶解膳食脂質以促進吸收來輔助消化過程。在體內，脫氧膽酸鹽的生物合成始於肝臟中膽固醇的酶促氧化、異構化、和還原，從而形成膽酸，其是在結構上與其膽固醇母體類似的膽汁酸(史屈爾L(StryerL)，第27章：膜脂和類固醇的生物合成(BiosynthesisofMembraneLipidsandSteroids)，生物化學(Biochemistry)，1995，W.H.弗裡曼公司(W.H.FreemanandCompany)：紐約，第691-707頁)。然後在肝臟中，膽酸以化學方式連接兩種胺基酸(牛磺酸或甘氨酸)之一而形成『偶合』膽酸(即L-甘膽酸鹽和牛磺膽酸鹽)。然後這些偶合膽酸儲存於膽囊中直至食用食物。食用食物後，膽汁溶液自膽囊中釋放至腸中，其中偶合膽酸分子發生兩次由腸道菌群所產生酶介導的額外化學修飾(李德龍J.M.(RidlonJ.M.)、康D.J.(KangD.J.)和希爾夢P.B.(HylemonP.B.)，人類腸細菌的膽汁酸鹽生物轉化(Bilesaltbiotransformationsbyhumanintestinalbacteria),脂質研究期刊,47(2)：第241-59頁(2006))。首先，使偶合膽酸去羥基以形成偶合脫氧膽酸鹽。然後使偶合脫氧膽酸鹽去偶合以形成游離脫氧膽酸鹽，其與其它膽汁酸一起參與膳食脂質的溶解。由於脫氧膽酸鹽位於膽酸合成的下遊，因此膽酸可能是存於脫氧膽酸鹽天然來源中的雜質。脫氧膽酸鹽在水中以333mg/mL溶解，在醇中少量溶解，並且在丙酮和冰乙酸中溶解度甚至更低。可以約2.4mg/mL的臨界膠粒濃度以上的脫氧膽酸鈉濃度和中性pH來達成膠粒的可逆形成(松岡K,M.Y.(MatsuokaK,M.Y.)，脫氧膽酸鈉和烏索脫氧膽酸鈉的膠粒形成(Micelleformationofsodiumdeoxycholateandsodiumursodeoxycholate)(部分1)，生物化學與生物物理學報(Biochim.Biophys.Acta.)，1580(2-3)：第189-99頁(2002))。在2.4mg/mL的臨界膠粒濃度以上的濃度下，脫氧膽酸鹽可形成膠粒並且能溶解細胞、脂質、和蛋白質。在諸如0.4mg/mL等較低濃度下(與禁食狀態相當)和在26mg/mL白蛋白(其接近35-50mg/mL的血清生理濃度)存在下，98％脫氧膽酸鹽與白蛋白結合(洛達A.(RodaA.)等人，膽汁酸與人血清白蛋白交互作用的容量現象(Quantitativeaspectsoftheinteractionofbileacidswithhumanserumalbumin)，脂質研究期刊,23(3)：第490-5頁(1982))。優選實施例涉及脫氧膽酸(DCA)或其前藥、或所述化合物或前藥醫藥上可接受的鹽、以及相關組合物和方法，其中脫氧膽酸(DCA)是：其中所述化合物並非自天然產生DCA的哺乳動物或微生物分離。其它優選實施例也涉及DCA的立體異構體和其醫藥上可接受的鹽，並且涉及合成DCA和其立體異構體和鹽時的中間體以及相關組合物和方法。任選地，本發明膽汁酸醫藥組合物呈鹽形式，並且任選地另外含有醫藥上可接受的稀釋劑、賦形劑或載劑。在一方面中，本發明涉及化合物和醫藥上可接受的賦形劑，所述化合物是脫氧膽酸(DCA)或其前藥、或所述化合物或前藥醫藥上可接受的鹽：其中所述化合物並非自天然產生DCA的哺乳動物或微生物分離。鹽製備的優選陽離子可選自由以下組成的群組：鈉(Na+)、鉀(K+)、鋰(Li+)、鎂(Mg2+)、鈣(Ca2+)、鋇(Ba2+)、鍶(Sr2+)、和銨(NH4+)。也可自鹼金屬或鹼土金屬來製備鹽。鹼金屬可選自鈉(Na+)、鉀(K+)、和鋰(Li+)。鹼土金屬可選自由鎂(Mg2+)、鈣(Ca2+)、鋇(Ba2+)、和鍶(Sr2+)組成的群組。用作局部去除脂肪的醫藥組合物的優選膽酸鹽是脫氧膽酸鈉。也涵蓋各實施例中化合物的前藥。前藥是活性或非活性化合物，在將前藥投與患者後其通過體內生理作用(例如水解、代謝和諸如此類)以化學方式被修飾為各實施例中的化合物。例如，可製備本發明脫氧膽酸或其衍生物的C1-C10酯或醯胺，從而通過細胞膜的破裂和酯酶的釋放來觸發脫氧膽酸或其衍生物的釋放。伴隨著酯酶的釋放，酯保護基團斷裂，從而使得脫氧膽酸活性形式或其衍生物原位存於期望位置。所述C1-C10酯任選地可包括1-4個選自氧、硫或氮的雜原子；任選地具有1-4個選自氧、硫或氮的雜原子的烷基，例如甲基、乙基、異丙基、丁基、己基等；在任何可接受取代點任選地具有1-4個雜原子並且總共具有最多10個碳原子的烷基苯基，例如苄基或乙基苯基；和諸如苯基等芳基。醯胺的實例包括(但不限於)異羥肟酸鹽。涉及酯的前藥的概述可參見斯文松(Svensson)和特內科(Tunek)，藥物代謝評論(DrugMetabolismReviews)165(1988)和班德格阿德(Bundgaard)，藥物設計(DesignofProdrugs)，埃爾塞維爾科學出版社(Elsevier)(1985)，其是全文以引用方式併入本文中。脫氧膽酸的C1-C10酯或醯胺的合成為業內所熟知。例如，可在無機酸存在下於酯化反應中通過脫氧膽酸與醇的反應來合成酯。脫氧膽酸和鵝脫氧膽酸的天然結構顯示如下。顯示四個環(A、B、C、D)以及自D環延伸的羧酸側鏈。脫氧膽酸和鵝脫氧膽酸(CDCA)或其衍生物的酯、異羥肟酸鹽、和羥基醯胺的某些實例非限制性地闡述於下文中。通過D環側鏈上羧基的酯化反應，不同官能團可附接至脫氧膽酸或鵝脫氧膽酸上來生成前藥。這些D環側鏈酯的某些實例非限制性地展示於表1中。表1.與脫氧膽酸和鵝脫氧膽酸的D環側鏈偶合的官能團脫氧膽酸或鵝脫氧膽酸和其衍生物的釋放可通過細胞膜的破裂和酯酶的釋放來觸發。伴隨著酯酶的釋放，酯保護基團可斷裂從而使得脫氧膽酸或鵝脫氧膽酸的活性形式或其衍生物原位存於期望位置。脫氧膽酸、鵝脫氧膽酸和其衍生物的前藥也包括可能具有與天然分子相反的立體化學的差向異構體。這些差向異構體分子的實例展示於表2中。表2.脫氧膽酸、鵝脫氧膽酸和其衍生物的差向異構體注射本發明實施例的膽汁酸組合物後可能出現局部刺激，並且因此需要同時或依次投與局部麻醉劑。例如，利多卡因(lidocaine)通常用於人體中，並且可作為共調配物(存於相同容器中並且同時注射)或共注射物(自不同容器注射)來投與。諸如利多卡因等麻醉劑可通過諸如貼劑或軟膏劑等局部製劑來投與。對於較深組織來說，可將麻醉劑更深地注射至目標組織中或全身性投與(例如全身麻醉、硬膜外麻醉或其它已知方法)。存於本發明溶液中的膽汁酸或膽汁酸鹽的濃度可為約0.001-10、0.01-5、或0.1-2％(w/w、w/v、或v/v)。優選地，存於上述溶液中的膽酸或膽酸鹽的濃度可為約0.1-5％w/w或更優選為約1％w/w。在某些實施例中，脂肪溶解溶液最多包含100、50、20、10、5、2、1、0.5、0.2、0.05、0.02、或0.01克的一或多種洗滌劑、膽汁酸和/或膽汁酸鹽，例如脫氧膽酸或其鹽或脫氧膽酸鈉。在優選實施例中，本發明溶液不包括任何脂質、磷脂或磷脂醯膽鹼。在某些實施例中，本發明溶液最多包括5％(w/w、w/v、或v/v)脂質、磷脂或磷脂醯膽鹼。在某些實施例中，上述溶液可另外包含選自由以下組成的群組的第二治療藥劑：抗微生物劑、血管收縮藥、抗血栓藥、抗凝血藥、抑泡劑(suds-depressant)、消炎劑、鎮痛藥、分散劑、抗分散劑、滲透促進劑、類固醇、鎮靜劑、肌肉鬆弛劑、和抗腹瀉藥。在某些實施例中，溶液存於最多可含500mL溶液的容器中。所述容器可為注射器或可裝載注射器的容器。在某些實施例中，組合物和方法另外包含已知可通過正交機制消除脂肪的分子。所述分子包括神經肽Y(NPY)受體拮抗劑，包括(但不限於)NPY受體拮抗劑，例如BIBP-3226(阿目金(Amgen))、BIBO-3304(柏林格殷格汗(BoehringerIngleheim))、BMS-192548和AR-H040922(百時美施貴寶(Bristol-MyersSquibb)、LY-357897(禮來(EliLilly))、1229U91和GW438014S(葛蘭素史克(GlaxoSmithKline))、JNJ-5207787(強生(Johnson&Johnson))、Lu-AA-44608(靈北(Lundbeck))、MK-0557(默克(Merck)NPY)、NGD-95-1(紐羅根(Neurgogen))、NLX-E201(紐羅吉科斯(Neurologix))、CGP-71683(諾華(Novartis))、PD-160170(輝瑞(Pfizer))、SR-120819A、BIIE0246、和S.A.0204(賽諾菲安萬特(SanofiAventis))、S-2367(施永利(Shiongli))、作為NPY受體拮抗劑的二氫吡啶和二氫吡啶衍生物、作為NPY受體拮抗劑的二環化合物、咔唑NPY受體拮抗劑、和作為NPY受體拮抗劑的三環化合物。參見(例如)WO2006/133160和美國專利第6,313,128號(其包括圖在內的全部內容都以引用方式併入本文中)。也涵蓋脂肪選擇性促凋亡肽，例如尋靶至白色脂肪脈管系統的CKGGRAKDC肽。參見克羅寧M.G.等人，自然醫學，6月10(6):625-32(2004)。在一方面中，本發明涉及減少個體中皮下脂肪沉積的方法。所述方法包含向個體中的皮下脂肪沉積局部投與組合物的步驟，所述組合物包含：(i)脂肪溶解有效量的一或多種藥理學活性洗滌劑或膽汁酸和/或膽汁酸鹽、或脫氧膽酸或其鹽、或脫氧膽酸鈉；(ii)醫藥、獸醫、或美容賦形劑；和(iii)(任選地)脂質，其中脂質與膽汁酸或膽汁酸鹽的比最高為1％w/w並且其中所述組合物不包括脂肪酶或輔脂肪酶。在某些實施例中，脂肪沉積與選自由以下組成的群組的病況相關：肥胖症、脂肪再分布綜合症、眼瞼脂肪疝出、脂肪瘤、德爾肯氏病(Dercum'sdisease)、脂肪代謝障礙、水牛背部脂肪代謝障礙、頸背面脂肪、內臟脂肪過多、乳房脹大、肥胖過度、身體脂肪在軀幹和臂周圍擴散、和與蜂窩組織相關的脂肪沉積。在優選實施例中，上述方法不包括對所述個體實施手術。在一方面中，本發明涉及自哺乳動物中的所選位置去除脂肪沉積的方法，其包含向有需要的哺乳動物投與治療有效量的DCA或其前藥或所述DCA或前藥醫藥上可接受的鹽：其中所述化合物並非自天然產生DCA的哺乳動物或微生物分離。在一實施例中，本發明方法可另外包含向哺乳動物投與至少一種選自由神經肽Y(NPY)受體拮抗劑和脂肪選擇性促凋亡肽組成的群組的額外活性成份。在一實施例中，神經肽Y(NPY)受體拮抗劑選自由以下組成的群組：BIBP-3226、神經肽Y5拮抗劑(阿目金NPY受體拮抗劑)、BIBO-3304(柏林格殷格汗NPY受體拮抗劑)、BMS-192548(百時美施貴寶NPY受體拮抗劑)、AR-H040922(百時美施貴寶NPY受體拮抗劑)、LY-357897(禮來NPY受體拮抗劑)、埃斯特韋(Esteve)NPY-Y5受體拮抗劑、1229U91(葛蘭素史克NPY受體拮抗劑)、GW438014S(葛蘭素史克NPY受體拮抗劑)、JNJ-5207787(強生NPY受體拮抗劑)、Lu-AA-44608(靈北NPY受體拮抗劑)、MK-0557(默克NPY受體拮抗劑)、NGD-95-1(紐羅根NPY受體拮抗劑)、NLX-E201(紐羅吉科斯NPY受體拮抗劑)、CGP-71683(諾華NPY受體拮抗劑)、PD-160170(輝瑞NPY受體拮抗劑)、SR-120819A(賽諾菲安萬特NPY受體拮抗劑)、BIIE0246(賽諾菲安萬特NPY受體拮抗劑)、S.A.0204(賽諾菲安萬特NPY受體拮抗劑)、S-2367(施永利NPY受體拮抗劑)、作為NPY受體拮抗劑的二氫吡啶、作為NPY受體拮抗劑的二氫吡啶衍生物、作為NPY受體拮抗劑的二環化合物、咔唑NPY受體拮抗劑、和作為NPY受體拮抗劑的三環化合物。參見(例如)WO2006/133160和美國專利第6,313,128號(其包括圖在內的全部內容都是以引用方式併入本文中)。在一實施例中，脂肪選擇性促凋亡肽是尋靶至白色脂肪脈管系統的CKGGRAKDC肽。參見克羅寧M.G.等人，自然醫學，6月10(6):625-32(2004)。在一方面中，本發明涉及在個體皮膚區域中還原皮膚病況外觀的方法。所述方法包含以下步驟：向所述皮膚區域局部投與包含以下的組合物：(i)緊膚有效量的一或多種藥理學活性洗滌劑、或膽汁酸和/或膽汁酸鹽、或脫氧膽酸或其鹽、或脫氧膽酸鈉，(ii)醫藥、獸醫、或美容賦形劑，和(iii)(任選地)脂質。在某些實施例中，投與步驟涉及通過皮下或經皮注射遞送本發明組合物。在某些實施例中，所治療或改善的皮膚病況選自由以下組成的群組：皮膚松垂、皮膚衰老、皮膚不規則、和皺紋。在某些實施例中，所治療皮膚區域是在眼下、頦下、臂下、臀部、頰、眉毛、小腿、背部、大腿、踝部、或腹部。在某些實施例中，將用於在皮膚區域還原皮膚病況外觀的組合物調配為緊膚溶液。所述緊膚溶液可另外包含選自由以下組成的群組的第二治療藥劑：抗微生物劑、血管收縮劑、抗血栓藥、抗凝血藥、抑泡劑、消炎藥、鎮痛藥、分散劑、抗分散劑、滲透促進劑、類固醇、鎮靜劑、肌肉鬆弛劑、和抗腹瀉藥。在優選實施例中，洗滌劑包含選自由以下組成的群組的膽汁酸：脫氧膽酸、膽酸、鵝脫氧膽酸、7-α-去羥基鵝脫氧膽酸、石膽酸、熊脫氧膽酸、上述膽汁酸中任一種的二羥基牛磺酸、三羥基牛磺酸和甘氨酸偶合物。在某些實施例中，洗滌劑包含具有選自由以下組成的群組的陽離子的膽汁酸鹽：鈉(Na+)、鉀(K+)、鋰(Li+)、鎂(Mg2+)、鈣(Ca2+)、鋇(Ba2+)、鍶(Sr2+)、和銨(NH4+)。在某些實施例中，洗滌劑包含具有鹼金屬或鹼土金屬陽離子的膽汁酸鹽。優選地，鹼金屬為鈉(Na+)、鉀(K+)、或鋰(Li+)並且鹼土金屬為鎂(Mg2+)、鈣(Ca2+)、鋇(Ba2+)、或鍶(Sr2+)。更優選地，膽汁酸鹽是脫氧膽酸鈉。另一實施例提供在哺乳動物中乳化脂肪的方法，其包含向有需要的哺乳動物投與治療有效量的化合物，所述化合物是DCA或其前藥或所述DCA或前藥醫藥上可接受的鹽：其中所述化合物並非自天然產生DCA的哺乳動物或微生物分離。另一實施例提供溶解磷脂醯膽鹼的方法，其包含混合磷脂醯膽鹼與有效量的化合物，所述化合物是DCA或其前藥或所述DCA或前藥醫藥上可接受的鹽，其中所述化合物並非自天然產生DCA的哺乳動物或微生物分離。本發明另一方面涉及混合諸如脫氧膽酸(DCA)等脂肪-燒蝕性膽汁酸與殺滅脂肪細胞的試劑。在一方面中，本發明涵蓋通過混合以正交機制消除脂肪的分子與脫氧膽酸鹽注射物來增強脫氧膽酸鹽注射美容效果的方式。所述候選分子的實例包括(但不限於)本文所述神經肽Y(NPY)拮抗劑和脂肪選擇性促凋亡肽。由於達成期望效應需要脂肪細胞殺滅和緊膚二者，因此可通過添加具有有效脂肪細胞殺滅效應的分子來增強具有脂肪消除能力和有效緊膚效應的試劑(例如脫氧膽酸鹽)的效應。此外，由於脫氧膽酸鹽可導致脈管滲漏，因此需要到達脈管系統才能實施殺滅的分子(例如結合毛細血管腔面上所表達蛋白質的某些促凋亡肽)可到達這些蛋白。因此，所述試劑可與脫氧膽酸鹽具有協同性，從而可能在更少治療療程中以更有效方式達成體形塑造。合成方法在其它實施例中，本發明提供合成DCA的化合物、鹽、和前藥以及其相關中間體的方法。本文所用類固醇支架的編號遵循圖1中所示的一般慣例。因此，本發明提供製備脫氧膽酸(DCA)或其酯或其醫藥上可接受的鹽的方法：所述方法包含：(a)在氫化條件下使9α-羥基雄甾-4-烯-3,17-二酮1與H2反應以形成化合物2(b)使化合物2與酸反應以形成化合物3(c)使化合物3與還原劑反應以形成化合物4，其呈4與5的混合物形式(d)在烯烴形成條件下使化合物4與二碳烯化劑反應以形成化合物6(e)將化合物6轉化為式7化合物，其中P是保護基團(f)在路易斯酸存在下使式7化合物與丙炔酸烷基酯CHCC(O)OR或丙烯酸烷基酯CH2＝CHC(O)OR反應(其中R是烷基)以形成式8化合物，其中P是保護基團，R是烷基，並且虛線----是單鍵或雙鍵；(g)在氫化條件下使式8化合物與H2反應以形成式9化合物，其中P是保護基團並且R是烷基(h)使式9化合物與氧化劑反應以形成式10化合物，其中P是保護基團並且R是烷基(i)在氫化條件下使式10化合物與H2反應以形成式11化合物，其中P是保護基團並且R是烷基(j)使式11化合物與還原劑反應以形成式12化合物，其中P是保護基團並且R是烷基和(k)使式12化合物暴露於去保護條件下以形成其酯，並且任選地使其暴露於適宜水解條件下以形成脫氧膽酸或其醫藥上可接受的鹽。本發明也提供下文方案1中所示的以下中間體，其中P和R是如上文中所定義。方案1.合成脫氧膽酸(DCA)在一實施例中，(a)項中的氫化條件包含Pd/C催化劑。在一實施例中，(b)項中的酸是無機酸。在某些方面中，無機酸是H2SO4。在一實施例中，(c)項中的還原劑是LiAl(OtBu)3H。在一實施例中，(d)項中的二碳烯化劑是諸如Ph3PCH2CH3+Br-等魏悌希試劑。在一實施例中，化合物7-12的保護基團P是-C(O)CH3。在某些方面中，將化合物6暴露於醯化條件下以形成7a，例如通過用乙酸酐或諸如Et3N、吡啶和/或二甲胺基吡啶等有機鹼處理6來達成。在一實施例中，(f)項中的路易斯酸是EtAlCl2。在一實施例中，(f)項中的丙炔酸烷基酯是丙炔酸甲酯。在一實施例中，(f)項中的丙烯酸烷基酯是丙烯酸甲酯。在一實施例中，(g)項中的氫化條件包含PtO2或Pd/C催化劑。在一實施例中，(h)項中的氧化劑是CrO3。在一實施例中，(i)項中的氫化條件包含Pd/C催化劑。在一實施例中，(j)項中的還原劑是LiAl(OtBu)3H。在一實施例中，當P為-C(O)CH3時，(k)項中的去保護和水解條件包含使化合物12與鹼土金屬氫氧化物、鹼土金屬醇鹽、或二者的混合物反應。在某些方面中，水解條件包括酸處理以獲得脫氧膽酸。在其它方面中，省略酸處理以獲得對應鹽。在一實施例中，鹼土金屬醇鹽是LiOH。在一實施例中，脫氧膽酸的鹽可通過與鹼土金屬醇鹽或氫氧化物反應來製備。脫氧膽酸的鹽包括鈉(Na+)、鉀(K+)、和鋰(Li+)鹽。在一實施例中，提供選自由以下組成的群組的中間體化合物9α-羥基-5β-雄甾烷-3,17-二酮(2)；5β-雄甾-9(11)-烯-3,17-二酮(3)；(Z)-3α-羥基-5β-孕甾-9(11),17(20)-二烯(6)；(Z)-3α-乙醯氧基-5β-孕甾-9(11),17(20)-二烯(7a)；(E)-3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11),16,22-三烯-24-酸甲酯(8a)；3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11),16-二烯-24-酸甲酯(8b)；3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11)-烯-12-酮-24-酸甲酯(10a)；和3α-乙醯氧基-5β-膽烷-12-酮-24-酸甲酯(11a)。醫藥組合物和投與模式組合物可包括所揭示化合物以及至少一種醫藥上可接受的賦形劑。可接受的賦形劑無毒性、有助於投與、並且對所揭示化合物的治療益處無不良影響。所述賦形劑可為所屬領域技術人員通常可獲得的任一固體、液體、半固體或(在氣溶膠組合物情況下)氣體賦形劑。固體醫藥賦形劑包括澱粉、纖維素、滑石粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、水稻、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、氯化鈉、無水脫脂乳和諸如此類。液體和半固體劑賦形劑可選自甘油、丙二醇、水、乙醇和各種油，包括那些源於石油、植物或合成油者，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。優選液體載劑(尤其用於可注射溶液者)包括水、鹽水、水性右旋糖、和二醇。一般來說，優選實施例的化合物可通過具有類似效用的藥劑的任一已接受投與模式以治療有效量來投與。優選實施例的化合物(即活性成份)的實際量可取決於諸如以下等多種因素：欲治療疾病的嚴重程度、個體的年齡和相對健康狀況、所用化合物的效能、投與途徑和形式、和其它因素。藥物可每日投與一次以上，優選地每日投與一次或兩次。所有這些因素都為會診醫師所熟知。調配物中化合物的量可在所屬領域技術人員所用整個範圍內變化。可製備本文所述各方面中的本發明組合物，其中以重量/水相體積計或在假定水密度(即重量與體積之間的比為1∶1)時以w/w計，脫氧膽酸部分在約0.5％-10％範圍內。在另一方面中，本發明實施例涉及濃度最高為稀釋劑飽和點的當前所述醫藥組合物。可根據諸如濃度和pH等條件來選擇觸變粘度。參見(例如)穆霍帕德亞,S.和U.麥特拉,當代科學87:1666-1683(2004)，第1680頁。在某些實施例中，投與步驟涉及通過經皮貼劑、泵、或皮下儲存來遞送本發明組合物。在某些實施例中，投與步驟涉及以局部或皮下方式遞送本發明組合物。在具體實施例中，投與步驟涉及局部(例如皮下或真皮下)投與至所述個體的眼下、頦下、臂下、臀部、小腿、背部、大腿、或腹部區域。可通過皮下或經皮注射來達成投與。合成方案下文提供完成膽汁酸醫藥組合物的化學合成的方法和可用中間體的其它實例。以下這些闡述和實例提供自天然產生DCA的哺乳動物或微生物提取此化合物的替代方案。本發明中意欲使用合成途徑1-6來合成脫氧膽酸(DCA)。合成途徑1B和實例1-11展示自氫化可的松合成DCA。1.始於腎上腺雄酮通過9(11)-烯或11,12-烯的第1A合成途徑方案1A(下文)的可的松(化合物1.1)廣泛用作完全合成材料。可使用氯鉻酸吡啶鎓(PCC)使其有效斷裂以形成C17酮化合物。此生成腎上腺雄酮(化合物1.2)的斷裂也可使用HIO4或鉍酸鈉(NaBiO3)來達成。將化合物1.2轉化為化合物1.3的反應是已知化學過程。化合物1.3向化合物1.4的轉化涉及單縮酮化。之後的步驟是3-酮-4-烯再生，選擇性還原4,5-烯(H2/Pt/DMF)以產生C5β-構型，並且將C3羰基選擇性還原為期望3α-構型以產生化合物1.5。在將化合物1.5轉化為化合物1.6時添加保護基團並且隨後將產物還原，從而產生C11β-醇(同軸構型)，即化合物1.7，其適合發生區域選擇性消除反應而生成關鍵的9(11)-烯(即化合物1.7轉化為化合物1.8)。合成方案在此處分支，其中化合物1.7可用作轉化為化合物1.8或化合物1.9的起始材料。由於C11羥基與C9氫原子之間存在反式雙軸關係，因此用於將化合物1.7轉化為化合物1.8的消除反應具有區域選擇性。產生化合物1.9的異構C11-C12烯烴的替代消除模式也具有區域選擇性，其涉及順式熱消除(即化合物1.7轉化為化合物1.9)。方案1A.合成DCA中C12羥基的兩個C環前體化合物1.8的烯丙位氧化(通過用CrO3和3,5二甲基吡唑處理)產生含烯酮化合物1.10。化合物1.9自類固醇的α-位向發生過酸氧化以產生C11-12環氧化物化合物1.11(參見上述方案1A)。這些化學轉化產生C12羥基官能團的兩個關鍵前體，即化合物1.10和化合物2.1(方案1A和2)。所屬領域技術人員應理解，可將上述可的松途徑修改為始於氫化可的松，氫化可的松具有相同碳骨架和相同的氧原子相對布局，並且氫化可的松與可的松的差別僅在於C-11載氧碳原子的氧化狀態不同。氫化可的松是在市場上購得並且此化合物的各種合成是已知的(什切爾巴(Szczebara)等人，自然生物技術(NatureBiotechnology)21∶143-149(Feb.2003))，其包括總化學合成(伍德沃R.B.(WoodwardR.B.)等人，美國化學協會雜誌74∶4223(1952))。酮1.13是通過α,β-不飽和雙鍵的氫解自氫化可的松1.12開始合成(方案1B)，之後使用硼氫化鈉實施整體酮還原以使得可使用NaIO4使1,2-二醇斷裂，由此在類固醇環系統的D環上形成C17酮。之後用氯鉻酸吡啶鎓(PCC)氧化來產生1.13。用處理1.13，之後用乙酸酐/吡啶實施乙醯化以獲得受保護醇1.15。之後用魏悌希試劑烯化1.15來提供烯烴1.16，然後用丙炔酸甲酯和乙基二氯化鋁處理1.16以形成二烯1.17。在對兩個雙鍵實施氫化後，還原酮1.18，並且在用存於吡啶中的SOCl2處理後消除所得醇中間體以獲得烯烴1.19。用CrO3對烯烴1.19實施烯丙位氧化並且在氫化條件下還原雙鍵以獲得酮1.21。去除乙酸根保護基團並且氧化所得醇以獲得二酮1.22。用LiAlH(O-tBu)3還原1.22並且水解甲酯以獲得DCA。方案1B.自氫化可的松合成DCA化合物1.10和2.1的進一步轉化展示於方案2中。首先修飾化合物1.10以使其含有與DCA相同的經適度官能化的C環系統(方案2)。立體選擇性還原C12羰基以產生化合物2.1，並且對存於化合物2.1中的9(11)雙鍵實施催化氫化而獲得化合物2.2。方案2.使用烯丙位氧化途徑引入C12α-羥基方案3展示將含環氧化物的化合物1.11轉化為方案2的類似C12α-羥基類固醇化合物2.2。方案3.C11-C12環氧化物的立體選擇性還原如上所述，在這兩種途徑中形成共同中間體化合物2.2。合成DCA的下一步驟是修飾存於化合物2.2中的D環，以使所述化合物含有DCA的經羧基側鏈取代的D環(方案4和方案5)。方案4.去保護和魏悌希反應首先水解化合物2.2的C17縮酮和C3甲矽烷醚基。然後實施魏悌希反應以產生化合物4.2。通過烯反應實施化合物4.2向化合物5.1的轉化。之後催化還原化合物5.1並水解酯來產生DCA(方案5)。方案5.用以安裝DCA側鏈的烯反應和催化還原2.始於可的鬆通過腎上腺雄酮的第2合成途徑(異類固醇(3,5-環甾醇)途徑)腎上腺雄酮(化合物1.2，方案6)在C17的選擇性縮酮化、硼氫化物還原、甲磺醯化、和緩衝水解產生含有異類固醇(3,5-環甾醇)的化合物6.1。化合物6.1發生9(11)-烯形成(化合物6.1轉化為化合物6.2，方案6)和烯丙位氧化(化合物6.2轉化為化合物6.3，方案6)，之後實施羰基還原以產生化合物6.4。異甾醇的水解和氫化產生化合物6.5，可通過上文第1合成途徑中所示合成方法將其轉化為DCA。方案6.通過形成異類固醇(即3,5-環甾醇)來保護A-B環系統3.始於番麻皂素(Hecogenin)的第3合成途徑番麻皂素(化合物7.1，方案7)是在墨西哥山藥(Mexicanyam)和其它龍舌蘭屬(Agave)植物中大量發現的植物甾醇。番麻皂素作為DCA合成起始材料的主要優勢在於，其C12氧官能度與DCA一致。始於番麻皂素的合成途徑中的第一步驟是將番麻皂素(化合物7.1)中的C12羰基立體選擇性還原為所需C12-α構型(化合物7.1轉化為化合物7.2)。然後使3-β-醇、5α-AB環系統轉化為3α-醇、5β-AB環系統(化合物7.1轉化為化合物7.2，轉化為化合物7.3)(方案7)。在化合物7.2轉化為化合物7.3後，通過熟知的馬克(Marker)降解(馬克R.E.、羅爾曼E.(Rohrmann,E.)，薩爾薩皂苷元、薩爾薩皂苷元酸和相關物質的甾醇類LXIX.氧化產物(Sterols.LXIX.OxidationProductsofSarsasapogenin.SarsasapogenoicAcidandRelatedSubstances)，美國化學協會雜誌，61(8)：第2072-2077頁(1939))產生化合物7.4。可通過方案4和5中所述的方法來達成將D環側鏈(方案8)安裝至化合物8.2中。化合物8.2中所需的C17酮是通過臭氧分解化合物8.1的乙酸烯醇酯來形成(方案8)。然後以與方案5中類似的方式使用烯化和烯反應序列自8.2製備DCA。始於番麻皂素的替代途徑展示於方案9和10中。方案7.C12羥基的引入，AB環修飾和側鏈斷裂方案8.側鏈引入方案9.二硫乙烷途徑生成3-酮-4-烯方案10A.通過3-酮-4-烯形成DCA4.始於皂苷配基(Sapogenin)的第4合成途徑皂苷配基得自與皂苷C3羥基連接的糖和二糖的水解(即類固醇糖苷)。這些皂苷配基是廣泛存在的植物產物。在自然界中皂苷是以下文所示的螺酮縮醇結構存在。化合物10.3也可自劍麻皂素(tigogenin)、薯蕷皂苷配基(diosgenin)、克洛皂苷元(chlorogenin)、異菝葜皂苷元(smilagenin)和番麻皂素(化合物7.1)形成。吾等確信DCA可自這些化合物中的每一種來合成，即劍麻皂素、薯蕷皂苷配基、克洛皂苷元、異菝葜皂苷元和番麻皂素(化合物7.1)。(Y.馬祖爾(Y.Mazur)、N.達涅利(N.Danieli)和弗朗茨松徳海姆(FranzSondheimer)，美國化學協會雜誌；82,5809(1960))。既然可自番麻皂素合成DCA，則可確定任一上述皂苷配基都同樣可用作DCA合成的起始材料。方案10B.始於皂苷的合成途徑5.始於豆甾醇的第5合成途徑豆甾醇(化合物11.1)是可自多種途徑獲得的植物甾醇。作為DCA合成的起始材料，其優勢在於其含有官能化AB環系統和易於斷裂的側鏈部分。其缺點在於其C環中缺乏DCA合成所需關鍵官能團。在此合成途徑中，通過異類固醇形成來保護豆甾醇(化合物11.1)的AB環，之後實施臭氧分解以形成安裝於C17的側鏈並且將其還原為呈羧基掩蔽形式的C24-醇(方案11)。隨後的步驟在C12生成烯丙型位置(方案12)。B環二烯形成和乙酸汞氧化是已知方法並且對B環系統實施催化還原以產生與上述先前途徑共有的中間體。然而，與其它途徑相反，側鏈已經存在。實施烯丙位氧化(化合物12.4轉化為化合物1.20)和立體選擇性還原(化合物1.20轉化為化合物1.21)，之後實施先前所述步驟，從而產生可轉化為DCA的產物。方案11.異類固醇的臭氧分解和側鏈還原方案12.三烯形成和烯丙位氧化豆甾醇途徑的變化形式使用B環二烯的狄爾斯-阿德爾(Diels-Alder)保護。此是有利的，因為其可分離9(11)雙鍵以在烯丙位氧化步驟期間防止可能的幹擾(方案13)。方案13.三烯形成和環B二烯的狄爾斯-阿德爾保護6.始於麥角固醇(Ergosterol)的第6合成途徑麥角固醇(化合物14.1)是易於獲得的起始材料並且可用於通過本申請案中所述程序的調整形式來製備DCA。烯丙位氧化提供產生C12氧官能度的便捷途徑(方案14)。此途徑的優勢在於始於環B二烯。其與豆甾醇途徑匯聚於一點。方案14.始於麥角固醇的三烯形成優選實施例的化合物可使用下列一般方法和程序自易於購得的起始材料來製備。應了解，儘管給出了典型或優選製程條件(即反應溫度、時間、反應物的摩爾比、溶劑、壓力等)，但除非另有說明，否則也可使用其它製程條件。最佳反應條件可隨所用特定反應物或溶劑而變化，但所述條件可由所屬領域技術人員通過常規優化程序來確定。此外，如所屬領域技術人員所了解，可能需要習用保護基團來防止某些官能團發生不期望反應。各種官能團的適宜保護基團以及保護和去保護特定官能團的適宜條件為業內所熟知。例如，許多保護基團闡述於T.W.格林(T.W.Greene)和G.M.伍茨(G.M.Wuts)，有機合成中的保護基團(ProtectingGroupsinOrganicSynthesis)，第3版，威利出版社(Wiley)，紐約，1999和其中所引用參考文獻中。用於本文所述反應的起始材料和試劑通常是已知化合物或可通過已知程序或其經明顯修改的形式來製備。例如，許多起始材料和試劑可自諸如奧德裡奇化學(AldrichChemical)公司(密爾沃基(Milwaukee)，威斯康星州，USA)、巴赫姆(Bachem)(託倫斯(Torrance)，加利福尼亞，USA)、伊姆卡-凱姆斯(Emka-Chem)或西格瑪(聖路易斯，密蘇裡州，USA)等供應商購得。其它起始材料和試劑可通過闡述於諸如下列等標準參考文本中的程序或其經明顯修改的形式來製備：菲澤和有機合成用菲氏試劑(FieserandFieser'sReagentsforOrganicSynthesis)，第1-15卷(約翰威利父子公司(JohnWileyandSons),1991)、碳化合物的羅德化學(Rodd'sChemistryofCarbonCompound)，第1-5卷和增刊(埃爾塞維爾科學出版社(ElsevierSciencePublishers),1989)、有機反應(OrganicReactions)，第1-40卷(約翰威利父子公司,1991)、馬氏高級有機化學(March'sAdvancedOrganicChemistry)，(約翰威利父子公司，第4版),和拉洛克系統有機化學(Larock'sComprehensiveOrganicTransformations)(VCH出版(VCHPublishers)公司，1989)。實例若適宜，可使用諸如以下等習用技術分離和純化優選實施例的各種起始材料、中間體和化合物：沉澱、過濾、結晶、蒸發、蒸餾、和色譜。可使用諸如以下等習用方法對這些化合物實施表徵：熔點法、質譜、核磁共振、和各種其它波譜分析。在第1合成途徑的方案1B中實施產物合成的步驟的實例性實施例更詳細地闡述於下文中。表3闡述在以下實例和整個說明書中用於在實例性反應方案和合成途徑中表達各種化合物/部分/裝置/程序/特性的縮寫。表3一般方法：氧敏感和溼度敏感材料的處理是在氬氣氛下用經火焰乾燥的雙頸燒瓶來實施。使用SE-馬克(SE-Make)矽膠(60-120目)、光譜化學(Spectrochem)矽膠(230-400目)或90中性氧化鋁(SD-精細化工(SD-FineChem)有限公司，印度)來實施柱色譜。在默克矽膠(Kieselgel)60F254(0.25mm)板(默克公司，白宮站(WhitehouseStation)，NJ)上實施分析型薄層色譜(TLC)。通過UV光(254nm)燈或通過用存於乙醇中的硫酸(5％)和對茴香醛(3％)的溶液碳化來檢測斑點顯影。裝置：可在下文所述裝置和設備上實施對本文所述反應方案和合成途徑的化合物和產物的分析。核磁共振(NMR)在瓦裡安水星-雙子星(VarianMercury-Gemini)200(1HNMR,200MHz；13CNMR,50MHz)或瓦裡安水星-愛諾瓦(Inova)500(1HNMR,500MHz；13CNMR,125MHz)(瓦裡安公司，帕羅奧圖，CA)波譜儀上以溶劑共振作為內標(1HNMR，在7.26ppm處的CHCl3或在2.5ppm處的DMSO和在3.33ppm處的DMSO-H2O；13CNMR，在77.0ppm處的CDCl3或在39.5ppm處的DMSO)記錄質子和碳核磁共振波譜(1HNMR和13CNMR)。1HNMR數據報告如下：化學位移(δ，ppm)，多重態(s＝單峰，d＝雙峰，t＝三峰，q＝四重峰，br＝寬峰，m＝多重峰)，偶聯常數(Hz)，和積分。紅外光譜紅外光譜(FT-IR)是在超市吉之島(JASCO)-460+型(超市吉之島公司，伊士頓，MD)上運行。質譜是以帕金埃爾默(PerkinElmer),API-2000波譜儀(帕金埃爾默公司，沃爾瑟姆(Waltham)，MA)使用ES+模式來獲得。熔點熔點是使用LAB-INDIA熔點測量裝置(印度實驗室儀器Pvt.(LabindiaInstrumentsPvt.公司)，印度)來測定並且未經校正。高壓液相色譜HPLC色譜圖是使用島津(SHIMADZU)-2010型以PDA檢測器(島津公司，日本)來記錄。光學活性比旋光度([α]D)是使用超市吉之島-1020(超市吉之島公司，伊士頓，MD)在589nm處測定並且未經校正。化學物質：除非另外說明，否則使用未經純化的市售試劑。自二苯甲酮羰基鈉蒸餾二乙醚和THF。無水DMF、DCM、戊烷和己烷是通過自CaH2蒸餾來獲得。實例1製備雄甾烷-3,11,17-三酮(1.13)將10％Pd/C(2.5g,5wt％)添加至存於DMF(250mL)中的氫化可的松(化合物1.12)(50.0g,138.12mmol)溶液中。在帕爾(Parr)裝置(50psi)中將所得漿液氫化12h。如TLC所顯示，在起始材料完全消失後，通過小型硅藻土濾塞過濾粗反應混合物並且在真空下去除溶劑。獲得呈無色固體形式的粗產物(48.0g)。將NaBH4(2.1g,55.3mmol)添加至存於EtOH(500mL)和CH2Cl2(500mL)中的上述粗產物(48.0g,131.86mmol)的溶液中。1小時後，依次添加丙酮(50mL)和水(150mL)以及NaIO4(70.5g,329.6mmol)。在室溫下將混合物攪拌過夜。添加蒸餾水(500mL)並且用乙酸乙酯(3x250mL)萃取混合物。通過矽膠濾塞清洗乙酸乙酯層並且蒸發溶劑以獲得38g呈無色固體形式的粗產物。不經純化即進一步氧化粗產物。經30分鐘以3等份將PCC(40.4g,187.5mmol)添加至存於CH2Cl2(400mL)中的上述粗產物的溶液中。在室溫下將所得反應混合物攪拌約3-4h。如TLC所監測，在反應完成後，依次通過硅藻土和矽膠過濾粗反應混合物並且通過柱色譜[59(W)x700(L)mm，60-120目二氧化矽，150g]來純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(3∶10)洗脫[每個溶離份50mL，10mL/min洗脫，通過TLC用對茴香醛碳化來監測；在EtOAc/己烷(1∶1)中化合物1.13的Rf＝0.37並且化合物1.12的Rf＝0.05]以提供呈無色固體形式的非對映異構化合物1.13(33.0g，產率79％)。通過製備型HPLC純化所獲得粗材料，其中使用月神(PhenomenexLunov)C18管柱(250x30.0mm,10μ)並且用CH3CN:H2O(12∶13)以25mL/min的流速和每個溶離份15mL實施等度洗脫。製備型HPLC僅用於純化，並不用於分析。表4闡述產物的所測得特性。表4實例23β-羥基-雄甾烷-11,17-二酮(1.14)經15分鐘於惰性氣氛和-78℃下將(98.39mL，98.01mmol，存於THF中的1M溶液)添加至存於THF(330mL)中的化合物1.13(33.0g,109.27mmol)的溶液中並且在-78℃下將其攪拌約3-4h。用NaOH水溶液(2M,70mL)使反應混合物驟冷。用乙酸乙酯(500mL)稀釋粗反應混合物並且用水(3x75mL)、飽和鹽水溶液(100mL)洗滌有機層並用MgSO4(75g)乾燥。在真空下去除溶劑以獲得33g粗材料。不經純化即對粗產物實施乙醯化。粗材料的純化通過柱色譜[29(W)x600(L)mm,230-400目二氧化矽，200g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1∶4)洗脫[每個溶離份25mL，5mL/min洗脫，通過TLC用對茴香醛碳化來監測；在EtOAc/己烷(1∶1)中化合物1.14的Rf＝0.3並且化合物1.13的Rf＝0.37]以獲得化合物1.14。表5闡述產物的所測得特性。表5實例33β-羥基雄甾烷-11,17-二酮乙酸酯(1.15)在0℃和惰性氣氛下將乙酸酐(16.6g,162.8mmol)添加至存於吡啶(150mL)中的化合物1.14(33.0g,108.55mmol)的溶液中。在環境溫度下將所得反應混合物攪拌過夜。如TLC所顯示，在反應完成後，在真空下去除吡啶和殘餘乙酸酐。用乙酸乙酯(500mL)稀釋粗殘餘物並且用水(3x150mL)、飽和鹽水溶液(100mL)洗滌並用MgSO4(75g)乾燥。在真空下蒸發溶劑並且通過柱色譜[59(W)x800(L)mm，60-120目二氧化矽，150g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1∶10)洗脫[每個溶離份25mL，10mL/min洗脫，通過TLC用對茴香醛碳化來監測；在EtOAc/己烷(3∶7)中化合物1.15的Rf＝0.38並且化合物1.14的Rf＝0.1]以獲得呈無色固體形式的化合物1.15(19.0g，產率66.4％)。表6闡述產物的所測得特性。表6實例4(Z)-3β-羥基-5β-孕-17(20)-烯-11-酮乙酸酯(1.16)在1h內於惰性氣氛和-5℃下將叔丁醇鉀(159.28mL，159.2mmol，存於THF中的1M溶液)逐滴添加至存於THF(150mL)中的乙基三苯基溴化鏻(61.16g,164.8mmol)的溶液中。使所得暗粉色反應混合物升溫至10-15℃並且在相同溫度下另外攪拌1h。在-5℃下將存於THF(50mL)中的化合物55(19.0g,54.9mmol)的溶液緩慢引入上述魏悌希內鎓鹽懸浮液中。將溶液另外攪拌10-20分鐘並且使反應混合物緩慢升溫至環境溫度。繼續攪拌約3-4h。如TLC所顯示，在起始材料完全消失後，用飽和NH4Cl水溶液(75mL)使反應混合物驟冷。用EtOAc(2x150mL)萃取水層並且用飽和鹽水溶液(100mL)洗滌經合併有機萃取物並用MgSO4(75g)乾燥。在真空下去除溶劑並且通過柱色譜[49(W)x600(L)mm,60-120目二氧化矽，300g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1∶20)洗脫[每個溶離份25mL，10mL/min洗脫，通過TLC用對茴香醛碳化來監測；在EtOAc/己烷(1∶6)中化合物1.16的Rf＝0.54並且化合物1.15的Rf＝0.06]以獲得呈無色粘稠液體形式的化合物1.16(15.5g，產率78.8％)，其在1-2天後於0℃下緩慢固化。表7闡述產物的所測得特性。表7實例5(E)-3β-羥基-5β-膽-16(17),22(23)-二烯-24-酸酯乙酸甲酯(1.17)在0℃下將丙炔酸甲酯(9.68g,114.95mmol)添加至存於CH2Cl2(220mL)中的化合物1.16(16.5g,46mmol)的溶液中。在惰性氣氛下使反應混合物升溫至環境溫度並且將其攪拌1h。在0℃下將乙基二氯化鋁(17.5g,137.8mmol)逐滴引入上述混合物中並且使所得反應物質再次升溫至環境溫度並將其攪拌過夜。如TLC所顯示，在反應完成後，用冰水混合物(100mL)使粗反應混合物驟冷並且用EtOAc(3x150mL)萃取水層。用飽和鹽水溶液(100mL)洗滌經合併有機層並且用MgSO4(50g)乾燥。在真空下去除溶劑並且通過柱色譜[49(W)x600(L)mm,60-120目二氧化矽，300g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1∶7)洗脫[每個溶離份15mL，10mL/min洗脫，通過TLC來監測並且通過UV光(254nm)燈或對茴香醛碳化來檢測；在EtOAc/己烷(1∶6)中化合物1.17的Rf＝0.36並且化合物1.16的Rf＝0.54]以獲得呈無色半固體形式的化合物1.17(16g，產率79％)。表8闡述產物的所測得特性。表8實例63β-羥基-5β-膽烷-11-酮-24-酸酯乙酸甲酯(1.18)將10％Pd/C(2.9g,20wt％)添加至存於EtOAc(150mL)中的化合物1.17(14.5g,32.8mmol)的溶液中。在帕爾裝置(50psi)中將所得漿液氫化12h。如TLC[在EtOAc/己烷(1∶3)中化合物1.18的Rf＝0.43並且化合物1.17的Rf＝0.43；然而僅化合物1.17具有來自共軛酯發色團的UV活性]，在起始材料完全消失後，通過小型硅藻土濾塞過濾粗反應混合物並且在真空下去除溶劑以獲得呈無色固體形式的化合物1.18(14g，產率95.7％)。表9闡述產物的所測得特性。表9實例73β-羥基-5β-膽-9(11)-烯-24-酸酯乙酸甲酯(1.19)在催化量的AcOH(2.0mL)存在下將PtO2(5.0g,100wt％)添加至存於EtOAc(75mL)中的1.18(5.0g,11.2mmol)的溶液中。在帕爾裝置(70psi)中將所得漿液氫化約14-16h。在反應完成後，通過小型硅藻土濾塞過濾粗混合物並且在真空下去除溶劑。不經進一步純化即將粗產物用於消除反應中。在0℃下將SOCl2(1.98g,16.78mmol)逐滴引入存於吡啶(100mL)中的上述粗材料的溶液中。使所得反應混合物升溫至環境溫度並且攪拌約1h。如TLC所顯示，在反應完成後，在真空下去除吡啶。用乙酸乙酯(100mL)稀釋粗殘餘物並且用水(2x50mL)、飽和鹽水溶液(100mL)洗滌並用MgSO4(40g)乾燥。在真空下蒸發溶劑並且通過柱色譜[49(W)x600(L)mm,60-120目二氧化矽，120g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1∶10)洗脫[每個溶離份10mL，5mL/min洗脫，通過TLC用對茴香醛的碳化反應監測，在EtOAc/己烷(1∶6)中化合物1.19的Rf＝0.51並且化合物1.18的Rf＝0.22]以獲得呈無色固體形式的化合物1.19(4.1g，產率85.4％)。表10闡述產物的所測得特性。表10實例83β-羥基-5β-膽-9(11)-烯-12-酮-24-酸酯乙酸甲酯(1.20)將CrO3(8.0g,100wt％,80.0mmol)添加至存於AcOH(150mL)中的化合物1.19(8.0g,18.6mmol)的溶液中。在60℃下將所得反應混合物加熱約24-36h。前體完全消失後，在真空下蒸發乙酸，並且使粗材料溶解於二乙醚(400mL)中。用水(2x100mL)、飽和鹽水溶液(100mL)洗滌有機層並且用MgSO4(40g)乾燥。在真空下去除溶劑並且通過柱色譜[49(W)x600(L)mm,60-120目二氧化矽，120g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1∶5)洗脫[每個溶離份10mL，3mL/min洗脫，通過TLC監測並且用UV光(254nm)燈來檢測；在EtOAc/己烷(1∶4)中化合物1.20的Rf＝0.28並且化合物1.19的Rf＝0.61]以獲得呈無色固體形式的化合物1.20(5g，產率60.5％)。表11闡述產物的所測得特性。表11實例93β-羥基-5β-膽烷-12-酮-24-酸酯乙酸甲酯(1.21)將10％Pd/C(30mg,10wt％)添加至存於EtOAc(30mL)中的化合物1.20(300mg,0.675mmol)的溶液中。在帕爾裝置(50psi)中將所得漿液氫化約16h。通過TLC[在EtOAc/己烷(3∶7)中化合物1.21的Rf＝0.44並且化合物1.20的Rf＝0.44；然而僅化合物1.20具有來自其烯酮發色團的UV活性；此外化合物1.20的碳化微弱但化合物1.21的碳化鮮明]顯示，在起始材料完全消失後，通過小型硅藻土濾塞過濾粗反應混合物並且在真空下去除溶劑以獲得呈無色固體形式的化合物1.21(270mg，產率90％)。表12闡述產物的所測得特性。表12實例105β-膽-3,12-二酮-24-酸甲酯(1.22)將NaOH(73mg,1.8mmol)添加至存於MeOH(10mL)中的化合物2.1(270mg,0.6mmol)的溶液中。在環境溫度下將所得反應混合物攪拌約2h。如TLC所顯示，在反應完成後，在真空下去除MeOH並且用乙酸乙酯(20mL)稀釋粗產物。用飽和鹽水溶液(10mL)洗滌有機層並且用MgSO4(5.0g)乾燥。在真空下去除溶劑，粗材料不經純化即用於酯化反應中。在0℃下將SOCl2(0.1mL,1.35mmol)逐滴添加至存於MeOH(10mL)中的上述粗材料的溶液中。在環境溫度下將所得反應混合物攪拌約1h。反應完成後，在真空下去除MeOH。用EtOAc(30mL)稀釋粗反應混合物，並且用水(3x10mL)、飽和鹽水溶液(15mL)洗滌有機層並且用MgSO4(5g)乾燥。在真空下蒸發溶劑並且不經純化即將粗產物用於氧化反應中。經約5分鐘以3等份將PCC(1.0g,4.6mmol)引入存於CH2Cl2(25mL)中的所獲得酯的溶液中。在環境溫度下將所獲得反應混合物攪拌約3-4h。如TLC所顯示，在反應完成後，通過硅藻土墊過濾粗反應混合物。在真空下去除溶劑並且通過柱色譜[19(W)x400(L)mm,60-120目二氧化矽，45g]純化粗材料，其中用乙酸乙酯/己烷(1∶6)洗脫[每個溶離份10mL，5mL/min洗脫，通過TLC用對茴香醛的碳化反應來監測，在EtOAc/己烷(2∶3)中化合物1.22的Rf＝0.57並且化合物1.21的Rf＝0.71]以獲得呈無色固體形式的化合物1.22(170mg，產率70.8％)。表13闡述產物的所測得特性。表13實例11脫氧膽酸甲酯(1.22-酯)在惰性氣氛和環境溫度下將LiAlH(O-tBu)(332mg,1.3mmol,)逐滴引入存於THF(10mL)中的化合物1.22(150mg,0.37mmol)的溶液中。攪拌約4-5小時後，用HCl水溶液(2mL,1N)使反應混合物驟冷並且用EtOAc(30mL)稀釋粗混合物，將其用水(15mL)、飽和鹽水溶液(10mL)洗滌並用MgSO4(3g)乾燥。在真空下去除溶劑，並且通過柱色譜[29(W)x500(L)mm,230-400目二氧化矽，50g]純化粗物質，其中用MeOH/CH2Cl2(1∶20)洗脫[每個溶離份5mL，3mL/min洗脫，通過TLC用對茴香醛碳化來監測；在MeOH/CH2Cl2(1∶9)中化合物1.22-酯的Rf＝0.42並且化合物1.22的Rf＝0.85]以獲得呈無色固體形式的脫氧膽酸甲酯(化合物1.22-酯)(110mg，產率72.8％)。表14闡述產物的所測得特性。表14實例11脫氧膽酸將存於H2O(2.0mL)中的LiOH(23mg,0.55mmol)溶液添加至存於THF(4mL)中的1.22-酯(110mg,0.27mmol)的溶液中。在環境溫度下將所得反應混合物攪拌約2-3h。通過TLC[在MeOH/CH2Cl2(1∶9)中化合物DCA的Rf＝0.35並且化合物1.22-酯的Rf＝0.42]顯示，在酯消失後，用乙酸乙酯稀釋粗反應混合物(10mL)並且將其與飽和鹽水溶液一起研磨以獲得有機層的澄清分離物。用飽和NH4Cl溶液(10mL)洗滌有機層並且用MgSO4(3.0g)乾燥。在真空下去除溶劑並且通過與甲苯(3x5mL)共沸來去除任何痕量的水以獲得呈無色固體形式的脫氧膽酸(DCA)(100mg，產率94.3％)。表15闡述產物的所測得特性。表15實例1至11中所述實例性製程的產物的產率闡述於表16中。表16：合成DCA製程的總產率實例129α-羥基-5β-雄甾烷-3,17-二酮(2)向存於DMF(150mL)中的9α-羥基雄甾-4-烯-3,17-二酮1(30.0g,99.3mol)的溶液中添加10％Pd/C(2.1g)並且在帕爾裝置(60psi)中將所得漿液氫化12h。如TLC所顯示，在起始材料完全消失後，通過小型墊過濾粗反應混合物並且在真空下去除溶劑以提供無色固體(30.0g)。在0℃下使此固體與丙酮(90mL.)合併且將所得漿液攪拌1h。然後將其過濾，用冷(0℃)丙酮(30mL)洗滌，並且在相同過濾漏鬥中於真空和室溫下乾燥以獲得化合物2(26.0g,86％)。表17闡述產物的所測得特性。表17實例135β-雄甾-9(11)-烯-3,17-二酮(3)經15分鐘於惰性氣氛和10℃下向存於DCM(520mL)中的化合物2(26.0g,85.4mmol)的溶液中添加濃硫酸(7.53g,76.8mmol)。使溫度升高至25℃並且將所得溶液攪拌2h。在此時如TLC所顯示，無任何起始材料殘餘。通過添加10％NaHCO3水溶液(200mL)終止反應。分離各層並且用DCM(2x100毫升)將水層萃取兩次。合併有機層並且依次用水(100mL)和飽和鹽水溶液(100mL)洗滌。然後用Na2SO4(75g)乾燥有機相併過濾。在真空下蒸發濾液以提供呈灰白色固體形式的化合物3(23.0g,94％)。不經進一步純化即將此產物「原樣」用於下一步驟中。表18闡述產物的所測得特性。表18實例143α-羥基-5β-雄甾-9(11)-烯-17-酮(4)在惰性氣氛下將三叔丁氧基氫化鋁鋰(1.0M,84.4mL,84.4mmol)的THF溶液添加至存於THF(230mL)中的化合物3(23.0g,80.4mmol)的冷(-40℃)溶液中。將所得反應混合物攪拌2h。如TLC所顯示，在此時確定反應完成，並且通過添加1NHCL(200mL)和乙酸乙酯(230mL)的混合物使反應混合物驟冷。分離所得二相混合物並且用乙酸乙酯(2x100mL)將水層萃取兩次。合併有機相併且依次用水(150mL)和飽和鹽水溶液(100mL)洗滌。然後用Na2SO4(75g)乾燥有機相併過濾。在真空下蒸發濾液以提供呈灰白色固體形式的化合物4(23.0g)。不經進一步純化即將上述粗產物「原樣」用於下一步驟中。表19闡述產物的所測得特性。表19實例15(Z)-3α-羥基-5β-孕甾-9(11),17(20)-二烯(6)經1h在25℃下將存於THF中的叔丁醇鉀溶液(1M,230mL,231mmol)逐滴添加至存於THF(150mL)中的乙基三苯基溴化鏻(88.7g,239mmol)的懸浮液中。在25℃下將所得暗紅色混合物另外攪拌1h。在25℃下將存於THF(230mL)中的化合物4(23.0g,79.7mmol)的溶液緩慢添加至紅色混合物中。將所得混合物攪拌3-4h，在此時通過TLC確定反應已完成。通過添加飽和NH4Cl水溶液(75mL)來終止反應。分離各相併且用EtOAc(3x150mL)將水層萃取三次。合併有機部分，用飽和鹽水溶液(100mL)洗滌，用Na2SO4(75g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液並且通過柱色譜[49mm(W)x600mm(L),60-120目二氧化矽，300g]純化粗固體，其中用乙酸乙酯/己烷(1∶9)洗脫。合併含產物溶離份並且將其濃縮，此提供呈白色固體形式的化合物6(19.1g,80.0％)。表20闡述產物的所測得特性。表20實例16(Z)-3α-乙醯氧基-5β-孕甾-9(11),17(20)-二烯(7a)使化合物6(19.0g,63mmol)溶於CH2Cl2(380mL)中。在25℃和氮氣氛下依次添加三乙胺(17.6mL,126.6mmol)、DMAP(0.772g,6mmol)和乙酸酐(8.98mL,94mmol)。在25℃下將所得溶液攪拌2h，在此時通過TLC確定反應已完成。通過添加冰水(100mL)來終止反應並且分離各相。用DCM(3x150mL)將水層萃取三次。合併有機部分並且用飽和鹽水溶液(100mL)洗滌，用無水Na2SO4(50g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液以獲得呈灰白色固體形式的化合物7a(22.0g，產率95％)。表21闡述產物的所測得特性。表21實例17(E)-3α-乙醯氧基-5β-膽-9(11),16,22-三烯-24-酸甲酯(8a)在0℃和惰性氣氛下將乙基二氯化鋁(104.5mL，192mmol，1.8M存於甲苯中)添加至存於DCM(100mL)中的丙炔酸甲酯(13.58mL,153mmol)溶液中。將所得溶液攪拌15min然後添加化合物7a(22g,64.3mmol)。在0℃下另外攪拌20min後，使溫度升高至25℃並且另外保持18h。在此時通過TLC確定反應已完成，並且將混合物傾倒入冷(0℃)水(200mL)中。分離各相併用DCM(150mL)萃取水層。合併有機層並且依次用水(200mL)和飽和鹽水溶液(100mL)洗滌。然後用無水Na2SO4(40g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液並且通過在甲醇(280mL)中漿化來純化所得固體以獲得呈白色固體形式的化合物8a(17.5g68％)。表22闡述產物的所測得特性。表22實例183α-乙醯氧基-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯(9a)向存於EtOAc(350mL)中的化合物8a(17.5g,41mmol)的溶液中添加PtO2(4.37g)，並且在帕爾裝置(70psi)中將所得漿液氫化14-16h。在此時通過TLC確定反應已完成。通過小型硅藻土過濾混合物並且在真空下去除溶劑，此可獲得呈白色固體形式的化合物9a(17.0g,96.0％)。不經進一步純化即將上述產物用於下一步驟中。表23闡述產物的所測得特性。表23實例193α-乙醯氧基-5β-膽-9(11),16-二烯-24-酸甲酯(8b)在0℃和惰性氣氛下將乙基二氯化鋁(14.2mL，25mmol，1.8M存於甲苯中)添加至存於DCM(60mL)中的丙烯酸甲酯(1.89mL,20mmol)溶液中。將所得溶液攪拌15min然後添加化合物7a(3g,8.7mmol)。在0℃下另外攪拌20min後，使溫度升高至25℃並且在所述溫度下另外保持18h。在此時通過TLC確定反應已完成，然後將混合物傾倒入冷(0℃)水(60mL)中。分離各相併用DCM(60mL)萃取水層。合併有機層並且依次用水(50mL)和飽和鹽水溶液(100mL)洗滌。然後用無水Na2SO4(5g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液，從而提供化合物8b(2.6g,70％)。表24闡述產物的所測得特性。表24實例203α-乙醯氧基-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯(9a)向存於EtOAc(60mL)中的化合物8a(3g,7mmol)的溶液中添加10％Pd/C(300mg,10％wt/wt)，並且在帕爾裝置(70psi)中將所得漿液氫化14-16h。在此時通過TLC(存於己烷中的10％乙酸乙酯)來確定反應已完成。通過小型硅藻土過濾混合物並且在真空下去除溶劑，此可獲得呈白色固體形式的化合物9a(2.6g,86％)。表25闡述產物的所測得特性。表25實例213α-乙醯氧基-5β-膽-9(11)-烯-12-酮-24-酸甲酯(10a)將CrO3(17.0g,170mmol)添加至存於AcOH(270mL)中的化合物9a(17g,39.5mmol)的溶液中。在50℃下將所得混合物加熱24-36h。通過TLC所顯示，在起始材料完全消失後，在真空下蒸發溶劑並且將粗材料溶於乙酸乙酯(400mL)和水(200mL)中。分離兩相併且用水(2x100mL)將有機層洗滌兩次，然後用飽和鹽水溶液(100mL)洗滌一次。然後將有機相用無水Na2SO4(40g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液並且通過柱色譜[49mm(W)x600mm(L),60-120目二氧化矽，120g]純化所得固體，其中用乙酸乙酯/己烷(1∶5)洗脫[每個溶離份10mL，3mL/min洗脫，通過TLC監測並且用UV光(254nm)燈來檢測]。合併含產物溶離份並且在真空下將其濃縮以獲得呈白色固體形式的化合物10a(8.8g，產率50％)。表26闡述產物的所測得特性。表26實例223α-乙醯氧基-5β-膽烷-12-酮-24-酸甲酯(11a)將10％Pd/C(900mg)添加至存於EtOAc(150mL)中的化合物10a(2.0g,4.5mmol)的溶液中並且於50℃下在帕爾裝置(50psi)內將所得漿液氫化16h。在此時通過TLC確定反應已完成。通過小型硅藻土過濾混合物並且在真空下去除溶劑，此可提供呈白色固體形式的化合物11a(1.6g，產率80％)。表27闡述產物的所測得特性。表27實例233α-乙醯氧基-12α-羥基-5β-膽烷-24-酸甲酯(12a)在環境溫度下將三叔丁氧基氫化鋁鋰(1M,22.4mL,22.4mmol)的THF溶液逐滴添加至存於THF(25mL)中的化合物11a(2.5g,5.6mmol)的溶液中。另外攪拌4-5h後，通過TLC來確定反應已完成。通過添加HCL(1M,10mL)水溶液來終止反應並且用EtOAc(30mL)稀釋混合物。分離各相併且依次用水(15mL)和飽和鹽水溶液(10mL)洗滌有機相。然後將有機相用無水Na2SO4(3g)乾燥並過濾。在真空下濃縮濾液並且通過柱色譜[29mm(W)x500mm(L),60-120目二氧化矽，50g]純化所得固體，其中用EtOAc/己烷(2∶8)洗脫[每個溶離份5mL，通過TLC用對茴香醛碳化來監測]。合併含產物溶離份並且將其在真空下濃縮以獲得呈白色固體形式的化合物12a(2.3g,91％)。表28闡述產物的所測得特性。表28實例24脫氧膽酸(DCA)將存於H2O(2.0mL)中的LiOH(187mg,4.4mmol)的溶液添加至存於THF(8mL)和MeOH(8mL)中的化合物12a(500mg,1.11mmol)的溶液中。在50℃下將所得混合物攪拌3-4h。通過TLC所顯示，在起始材料完全消失後，在真空下濃縮反應混合物。合併水(10mL)與3NHCL(1mL)的混合物並且將其冷卻至0℃，然後將其添加至粗產物中。在0℃下攪拌1h後，過濾所沉澱固體然後用水(10mL)和己烷(20mL)洗滌。在真空和室溫下乾燥獲得呈白色固體形式的脫氧膽酸(DCA，400mg，產率91％)。表29闡述產物的所測得特性。表29實例25將原代人脂細胞與不同濃度的使用9-HAD作為起始材料來合成的合成脫氧膽酸鈉或如下所述自西格瑪獲得的牛源脫氧膽酸鈉一起培養。材料脂細胞(森生物公司(Zen-Bio)cat號SA-1096)96孔板(US科學(USScientific)cat號施樂士達(cellstar)第655180號)無血清RPMI培養基(聯發科(Mediatech)cat號17-105-CV)脫氧膽酸鈉(DC)(西格瑪cat號D6750)合成去氧甘膽酸鈉(歇拉島(Kythera))PBS(1x)MTS分析試劑盒(普洛麥格(Promega)cat號G3580)脂細胞到達分化階段並且以13,000細胞/孔的密度存於96孔板中。獲得兩個板並且用相同樣品處理每個板。在37℃下將細胞與5％CO2一起培養24小時。通過將20mg膽汁酸溶於2mL培養基(無血清)中來製備每種膽汁酸(合成和非合成DCA)的1％儲備溶液。使用1％儲備溶液通過稀釋來製備以下11種溶液：0.005％、0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.05％、0.06％、和0.1％、以及0％(僅培養基)。在室溫下用150μL1xPBS(磷酸緩衝鹽溶液)將細胞洗滌2x。通過將板上側翻轉並且將液體倒入容器中而自96孔板的孔中依次去除培養基和PBS。在最後一次PBS洗滌後，每孔添加80μL樣品。將每種濃度的特定膽汁酸添加至8個孔中並且在37℃下與5％CO2一起培養1小時。然後將板自培養器中移出並且倒出溶液。將100μLMTS試劑(3-(4,5-二乙基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓，內鹽)的稀溶液(1mLRPMI中的40μL)直接添加至各孔中。在37℃下將板與5％CO2一起培養直至對照(無膽汁酸)孔變色為橙-棕色，然後將其裝載至分析96孔板的分光光度計上。樣品是在490nm波長設定下運行。使用來自普洛麥格的比色分析(MTS)試劑盒來評價細胞生存力。結果展示經合成NaDC或西格瑪-NaDC處理後細胞存活率的劑量依賴性降低(參見圖2)。在此實驗中兩種分子都表現類似的溶胞行為，此表明合成NaDC和牛源西格瑪-NaDC在其殺滅脂肪細胞的能力上具有相同功能。上述實驗和實例並非意欲限制本發明。應理解根據本發明原則可作出許多修改和變化。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp