允許靶細胞長期暴露於治療性和預防性核酸的局部施用的製作方法

2023-09-16 17:20:40 1

專利名稱：：允許靶細胞長期暴露於治療性和預防性核酸的局部施用的製作方法
背景技術：
：本申請涉及2005年1月21日提交的美國臨時專利申請60/645,826，和2005年6月21日提交的美國臨時專利申請60/692,481，其兩者在此以其全文引用作為參考。1.發明領域本發明總體說來涉及基因轉移、基因治療、藥理學和藥劑學的領域。更特別地，其涉及可被施用以檢測、預防或治療受試者的疾病的核酸的新藥物組合物和使用這些藥物組合物檢測、預防或治療疾病的方法。將藥物組合物配製為用於給受試者的身體表面例如皮膚表面或黏膜表面局部施用的液體、半固體或固體。本發明也涉及用於遞送診斷性或治療性核酸的經皮膚或透皮給藥裝置以及使用這些裝置在受試者中診斷、預防和治療疾病的方法。2.相關領域的描述基因轉移是相對新的方法，其包括遞送特定的基因至受試者的特定靶細胞。用於治療目的的基因轉移(即，基因療法)包括將治療性基因轉移至受試者中的靶細胞。儘管最初被設想為單基因病症的治療，但大多數基因治療試驗適合癌症和血管疾病的治療。因為在美國和其他地方癌症是死亡的首要原因，因此癌症的基因治療的鑑定存在極大的吸收力。與癌症相關的高發病率和死亡率的一個重要原因是在目前可獲得的診斷和治療措施中存在相當大的局限性的事實。許多診斷措施是可獲得的，實例包括目測(例如，鑑定皮膚損傷的身體檢查和鑑定結腸癌的結腸鏡檢查)、成像研究例如乳腺造影法、CT和MRI和驗血(例如，作為前列腺癌標記的PSA)。通常，這些測量不能鑑定疾病的小病灶。在其他情況下，疾病在診斷時已發展至很晚期。癌症的常規治療包括手術、化學治療和/或放射治療。這些治療法通常是不成功的手術可能不能切除所有的癌症；一些癌症對化學治療和放射治療具有抗性；且抗化學治療的腫瘤經常發生。基因療法已在癌症的治療中顯現出希望。癌症治療中的基因療法的目的是重新建立對細胞增殖的正常控制或清除正在進行異常增殖的細胞。存在多種策略，通過所述策略體內遺傳修飾可導致治療益處。示例性策略包括對異常細胞的免疫原性的增強，對導致異常表型的遺傳缺陷的修正和遞送基因，所述基因的產物對受體細胞具有毒性或可經改造對受體細胞具有毒性。可被當作用於癌症的基因治療的治療性基因的示例性種類包括腫瘤抑制基因。腫瘤抑制基因是正常地限制細胞生長但，當因突變導致缺失或失活時，允許細胞不受限制地生長的基因。最為人所知的一個腫瘤抑制基因是p53，該基因在細胞周期進程中起著中心作用，其使生長停止從而使響應DNA損害的修復或編程性細胞死亡可發生。如果DNA損傷經證明是不可修復的，其也可啟動編程性細胞死亡。無論使用哪個基因恢復細胞周期進程的調控，該方法的原理和實際的適用性都是一致的。即，獲得基因轉移的高效率，從而表達治療量的重組產物。癌症或其他疾病的成功的基因治療的一個方面是影響相當大部分的異常細胞的能力。病毒載體可用於該目的。重組腺病毒具有優於逆轉錄病毒和其他基因遞送方法的顯著的有利方面(綜述於Siegfried，1993)。從未顯示過腺病毒在人中誘導腫瘤且其一直被安全地用作活疫苗(參見Straus，1984)。可通過用靶基因替代複製所必需的E1區產生複製缺陷型重組腺病毒。作為感染的正常結果腺病毒不整合入人基因組，因此大大減少了插入誘變的風險。可產生穩定的高滴度的重組腺病毒，從而使得能夠產生足量的材料以治療巨大的患者群體。此外，腺病毒載體能夠在體內高效地將基因轉移入廣泛的組織和腫瘤細胞類型。儘管病毒載體提供了優於基因遞送載體的其他模式的幾個有利方面，但其仍然展現對其體內有效用途加以限制的一些特徵。這些限制主要導致所述載體有效地將治療性基因遞送和靶向異常細胞的有限能力。一直以來在進行通過將大量病毒載體直接注射入包含靶細胞的區域來克服該問題的嘗試。目前的病毒載體的局部施用是通過將大約1×1012個病毒顆粒注射入包含靶細胞的區域。不幸的是，高比例的該材料未保持留在注射的區域，卻很快地通過循環和淋巴系統被清除，因此阻止了靶細胞的感染。除了病毒介導的基因遞送系統外，還存在用於基因遞送的幾種非病毒選擇。一種非病毒方法包括使用脂質體運送治療性基因。另一種在應用中受到限制的方法是將治療性DNA直接導入靶細胞。除了作為治療形式的基因轉移外，少數研究已描述了基因轉移在成像中的應用。在過去十年中發展的成像的新形式包括報告基因的原位或體內成像。報告基因技術首先被應用於組織切片的原位成像(綜述於Blasberg等人，2003)。例如，Hooper等人(1990)描述了螢光素酶基因在單個哺乳動物細胞中的表達。報告基因成像已被描述為基於磁共振、核成像(PET，γ射線照相)和/或體內光學成像系統(綜述於Blasberg等人，2003)的成像。例如，通過正電子成像術(PET)(Alauddin等人，1996；Alauddin和Conti，1998；Gambhir等人，1998；MacLaren等人，1999；Tjuvajev等人，1998)已檢測到單純皰疹病毒-1胸苷激酶或多巴胺受體2型的轉移。相比這下，通過γ射線照相成像已檢測到碘化鈉共輸送體(Mandell，1999)、多巴胺轉運蛋白(Auricchio等人，2003)或生長激素釋放抑制激素受體2型(Kundra，2002；Sun等人，2001)的轉移。仍需確定這些測量中的任一種是否可用於診斷人的疾病。因此，存在對在疾病例如癌症的診斷和治療中用於基因轉移的新的和改進的組合物以及方法的需要。例如，允許核酸與合適的靶細胞長時間接觸的治療性核酸的組合物將提高製劑的治療功效。遞送報告基因至受試者的患病細胞的方法可提供得到更大提高的靶向和檢測患病細胞的能力。發明概述本發明已鑑定了核酸的某些新製劑和將這些製劑用於診斷、治療和預防疾病的方法。此處所示製劑的核酸可以是可用於診斷、預防或治療疾病的任何核酸。例如，所述核酸可以是編碼能夠在受試者中促進傷口癒合或治療過度增生性病灶(hyperproliferativelesion)擴大的胺基酸序列的核酸。核酸的這些新製劑促進目的核酸至受試者中的靶細胞的更有效遞送和靶向。例如，用粘合劑配製一些組合物以造成治療性核酸與目的靶細胞的長時間接觸。本發明者也已發現用於遞送診斷性或治療性核酸序列的新的透皮或經皮膚給藥裝置。例如，所述裝置可經設計用於遞送編碼能夠抑制受試者中過度增生性病灶的擴大的蛋白的核酸。也已鑑定了適合基因治療的疾病的診斷、預防或治療中使用這些新製劑和裝置的方法。更特別地，本發明的某些實施方案通常涉及包含經配製用於受試者的表面的治療性核酸和/或診斷性核酸的藥物組合物。所述受試者可以是任何受試者，例如哺乳動物或鳥類物種。在特定的實施方案中，所述受試者是人，例如患有癌症的人。所述受試者的表面可以是任何表面。按照其在生物體背景中平常和普通的意思使用術語「表面」，意思是「動物身體的外表、或其任何部分的外表；體壁(integument)的外側界面；還有，空腔或管部分的內部界面」。例如，所述表面可以是皮膚表面、黏膜表面、病灶表面、傷口表面或空腔臟器表面。所述皮膚表面可以是正常皮膚，或其可以是皮膚病灶例如皮膚癌(例如，基底細胞癌、鱗狀細胞癌)的表面。黏膜表面可以是身體的任何黏膜表面，例如，口腔表面、食管表面、肺黏膜表面、胃、十二指腸、小腸、大腸、結腸、直腸、陰道或膀胱的表面。所述黏膜表面可以是正常黏膜，或其可以是黏膜病灶例如嘴的黏膜白斑病、結腸息肉或腫瘤的黏膜。病灶表面可以是任何病灶，無論是良性的、惡化前的還是惡性的。所述表面可以是傷口表面，例如外傷性傷口或手術後傷口例如腫瘤的手術切除後的傷口。所述表面可以是內臟器官的表面，例如胃腸道的表面、膀胱、陰道、子宮頸或子宮的表面。如下面詳細描述的，可預處理例如刮擦表面以使得能夠更有效地轉移至下面的組織。用於表面的製劑並不意味著所述製劑以後不可能適用於通過其他方法例如靜脈內給藥的方法進行應用。此外，此處所示的某些核酸製劑可以是適合用於一種表面例如傷口表面但不適用於其他表面例如胃的表面的製劑。在此處所示的組合物和裝置可包含任何類型的核酸，其包括例如DNA、所有類型的RNA例如siRNA、RNAi、microRNA、核酶和CpG寡核苷酸。此處定義的「治療性核酸」是指已知或懷疑在疾病或健康相關性狀況(health-relatedcondition)的治療或預防中有益的核酸。例如，所述「治療性核酸」可以是編碼已知或懷疑在疾病或健康相關性狀況的治療中有益的蛋白或多肽的核酸。轉錄第二核酸的核酸(例如，轉錄成核酶或siRNA的DNA)也包含在「治療性核酸」的定義中，所述第二核酸已知或懷疑在病症或健康相關性狀況的治療中是有益的。可選擇地，所述「治療性核酸」可以是已知或懷疑無需進行轉錄即可提供治療性益處的核酸(例如，siRNA或核酶)。治療性益處可作為例如通過核酸改變特定基因的表達的結果產生。特定基因表達的改變可以是抑制特定基因的表達或增強特定基因的表達。在本發明的特定實施方案中，所述治療性核酸編碼可用於治療或預防受試者中的疾病或健康相關性狀況的一種或多種蛋白或多肽。「疾病」定義為由任何原因例如感染、遺傳缺陷或環境應激(stress)，導致的身體部分、器官或系統的病理狀況。「健康相關性狀況」在此定義為可以不是病理性的但要求治療的身體部分、器官或系統的狀況。例子包括要求進行美容治療的狀況，例如皮膚皺紋、皮膚瑕疵等。所述疾病可以是任何疾病，非限定性實例包括過度增生性疾病例如癌症和癌前病灶、傷口和感染。按照其普通和常用的意思，所用的「預防」和「防止」表示「在....前作用」或此等作用。在特定疾病或健康相關性狀況的背景中，這些術語是指為了阻止疾病或健康相關性狀況的發生而對受試者施用或使用藥劑、藥物或治療劑或對受試者進行治療法或用藥程式。治療性核酸可編碼治療性蛋白，例如腫瘤抑制劑、促凋亡蛋白(Proapoptoticprotein)(是指促進編程性細胞死亡的蛋白)、細胞因子、生長因子、激素、腫瘤抗原或酶。腫瘤抑制基因的實例包括mda7、APC、CYLD、HIN-1、KRAS2b、p16、p19、p21、p27、p27mt、p53、p57、p73、PTEN、Rb、Uteroglobin、Skp2、BRCA-1、BRCA-2、CHK2、CDKN2A、DCC、DPC4、MADR2/JV18、MEN1、MEN2、MTS1、NF1、NF2、VHL、WRN、WT1、CFTR、C-CAM、CTS-1、zac1、ras、MMAC1、FCC、MCC、FUS1、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或編碼SEMA3多肽的基因。在特定的實施方案中，所述腫瘤抑制劑是p53和/或FUS1。促凋亡基因的實例包括CD95、caspase-3、Bax、Bag-1、CRADD、TSSC3、bax、hid、Bak、MKP-7、PARP、bad、bcl-2、MST1、bbc3、Sax、BIK和BID。細胞因子的實例包括GM-CSF、G-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α、TNF-β、PDGF、TGF-α、TGF-β、VEGF和mda7。在特定的實施方案中，所述細胞因子是mda7。所述核酸可以編碼腫瘤抗原。所述腫瘤抗原可以是本領域技術人員已知的任何腫瘤抗原。腫瘤抗原的實例包括MelanA(MART-I)、gp100(Pmel17)、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE-1、GAGE-2、p15(58)、CEA、RAGE、NY-ESO(LAGE)、SCP-1、Hom/Mel-40、PRAME、p53、H-Ras、HER-2/neu、BCR-ABL、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、EB病毒抗原、EBNA、人乳頭狀瘤病毒(HPV)抗原E6和E7、TSP-180、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、和MAGE基因家族的其他成員、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、mn-23H1、PSA、TAG-72-4、CA19-9、CA72-4、CAM17.1、NuMa、K-ras、β-Catenin、CDK4、Mum-1、p16、TAGE、PSMA、PSCA、CT7、端粒酶、43-9F、5T4、791Tgp72、甲胎蛋白、β-HCG、BCA225、BTAA、CA125、CA15-3(CA27.29\BCAA)、CA195、CA242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、G250、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90(Mac-2結合蛋白\親環蛋白C關聯蛋白(cyclophilinC-associatedprotein))、TAAL6、TAG72、TLP、TPS、ING1、乳腺珠蛋白(mamaglobin)、細胞周期蛋白B1、S100、BRCA1、BRCA2、腫瘤免疫球蛋白獨特型、腫瘤T細胞受體克隆型、MUC-1、或表皮生長因子受體、腫瘤抑制劑或前述腫瘤關聯抗原、癌基因或pep.的任一種的肽。所述核酸可包含腫瘤抑制基因、或癌基因或腫瘤抑制基因的野生型或突變形式。腫瘤抗原的實例包括由染色體易位或癌基因/腫瘤抑制基因突變(例如，bcr/abl、ras)形成的抗原；發育/分化抗原(例如.MUC-1、MAGE、酪氨酸酶、melan-A和gp75)；在惡性轉化中上調的抗原(胎性癌抗原-癌胚抗原/CEA、甲胎蛋白/AFP、生長因子受體-Her2/neu、端粒酶和p53)以及與腫瘤發病相關的病毒抗原(肝炎病毒、乳頭狀瘤病毒和EB病毒)和di(MUC-1、Melan-A)。生長因子的實例包括表皮生長因子、角質形成細胞生長因子和肝細胞生長因子。在下面在說明書中描述其他治療性蛋白(包括激素和酶)的實例。明確地指出該段落中鑑定的任何蛋白可以被認為是本發明的部分；此外，明確地指出這些蛋白中的一種或多種在一些實施方案中也不被當作本發明的部分。「診斷性核酸」是已知或懷疑在鑑定疾病或健康相關性狀況的存在或不存在中是有益的核酸，或已知或懷疑在鑑定處於發生特定疾病或健康相關性狀況風險中的受試者中有益的核酸。編碼一種或多種報告蛋白的核酸也包含在「診斷性核酸」的定義中。「報告蛋白」是指胺基酸序列，當所述胺基酸序列存在於細胞或組織中時，可被檢測到且可與存在於細胞中的其他遺傳序列或被編碼的多肽區別。報告蛋白可以是天然發生的蛋白或非天然發生的蛋白。如果是天然發生的，其可作為基因轉移後表達的量的結果被檢測到，或其可以是可檢測的標籤可附著的蛋白。這些報告蛋白的實例包括螢光蛋白例如綠色螢光蛋白(gfp)、青色螢光蛋白(cfp)、紅色螢光蛋白(rfp)或藍色螢光蛋白(bfp)或這些蛋白的衍生物或酶蛋白例如β-半乳糖苷酶、化學發光蛋白例如螢光素酶、生長抑素受體胺基酸序列、碘化鈉共輸送體胺基酸序列、螢光素酶胺基酸序列和胸苷激酶胺基酸序列。在下面在說明書中更詳細地描述這些和其他報告蛋白。此處所示的一些新藥物組合物涉及治療性核酸和/或診斷性核酸的組合物，其中所述製劑是水性製劑。水性製劑的實例包括漱口劑、口腔清洗劑、灌洗劑、灌腸劑、噴霧劑和氣霧劑。其他製劑包括分散劑、乳劑、微乳劑、混懸劑、基質、微粒、微型膠囊劑(microcapsule)、乳劑、微乳劑或分散劑。其他組合物配製為固體或半固體。固體和半固體製劑是指除了水性製劑以外的任何製劑。在特定的實施方案中，固體或半固體不是丸劑或片劑，例如用於口服施用。實例包括凝膠、基質、泡沫、乳膏、軟膏、錠劑、棒棒糖(lollipop)、冰棒(popsicle)、口膠劑、粉劑、凝膠條(gelstrip)、膜劑、水凝膠、溶解條(dissolvingstrip)、糊劑、牙膏劑或固體棒(solidstick)。在某些實施方案中，本發明明確不包括一種或多種錠劑、棒棒糖、冰棒、口膠劑、凝膠條、膜劑、水凝膠、溶解條或固體棒。對於固體或半固體製劑，作為固體或半固體的本發明的藥物組合物的任何製劑包括在本發明中。在本說明書的其他地方對此進行詳細描述。所述製劑可包含任何數目的下面更詳細描述的其他賦形劑。實例包括膠原、甘油、PEG、含水二氧化矽、纖維素、黃原膠(xanthumgum)、聚糖卡波姆956(glycancarbomer956)、吐溫80、氟化物、角叉菜聚糖、粘合劑和/或核酸吸收增強劑。在一些實施方案中，所述賦形劑也可包含在下面更詳細描述的美容組分。如在下面更詳細描述的，此處所示的藥物組合物可包含任何數目的其他治療劑和/或診斷劑。實例包括其他治療劑、抗酸劑和藻酸鹽筏形成(alginate-raftforming)組分。在某些特定的實施方案，藥物組合物包含治療性和/或診斷性核酸，其中所述組合物配製為錠劑、棒棒糖、冰棒、口膠劑、凝膠條、膜劑、水凝膠、溶解條、乳膏、油膏劑、栓劑或固體棒。此處所示的治療性和/或診斷性核酸的藥物組合物還可包含一種或多種粘合劑。此處定義的「粘合劑」通常是指促進或有助於核酸與表面的接觸，或促進或有利於一個表面與另一個表面的接觸的試劑或試劑的組合。本領域技術人員已知的用於製藥目的的任何粘合劑用作可在本發明的藥物組合物和裝置中包含的粘合劑。例如，所述粘合劑可以是丙烯酸酯、水膠體、水凝膠、基於聚丙烯酸的凝膠基質、聚異丁烯、矽酮聚合物或其混合物。在下面在說明書中詳細地描述了粘合劑。丙烯酸酯粘合劑的示例性類型包括氰基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯或烷基丙烯酸酯。本領域技術人員已知的任何核酸吸收增強劑包含在此處所示的本藥物組合物中。此處定義的「核酸吸收增強劑」是指可用於細胞的表面或可與細胞的表面接觸以促進吸收對於所述細胞是外來的核酸的任何試劑或超過一種試劑的組合物。示例性陽離子脂質包括季銨細胞轉染劑(quaternarycytofectin)、二-胍-三烯-膽固醇(bis-guanidinium-tren-cholesterol)-1，2-二油醯-3-(三甲基銨)丙酸(DOTAP)。在下面在說明中更詳細地描述這些試劑。在一些實施方案中，將固體或半固體藥物組合物配製為化妝品。所述化妝品可以以唇膏、油膏劑、乳膏、糊劑、凝膠或洗劑的形式存在。也可包含其他賦形劑，例如著色劑，例如蠟、油、保溼劑、防腐劑、抗氧化劑、紫外吸收劑、紫外散射劑、聚合物、表面活性劑、著色劑、色素、粉末、藥物、醇、溶劑、芳香劑(fragrance)或香料。藥物組合物可配製為牙膏且可包含一種或多種通常存在於牙膏中的其他試劑，例如氟化物、香料和增白劑。在一些其他的實施方案中，將所述藥物組合物配製為口膠劑。所述口膠劑可以是口香糖(chewinggum)。其他賦形劑，例如增甜劑和香料，也可包含在製劑中。在一些實施方案中，口膠劑包括黃原膠。在本發明的一些實施方案中，冷凍乾燥所述藥物組合物。本領域技術人員熟悉冷凍乾燥法。可在表達盒中包含核酸，所述表達盒包含有效地偶聯至所述核酸的啟動子，其中所述啟動子在受試者的細胞中是有活性的。可在病毒載體中包含所述表達盒。本領域技術人員熟悉許多類型的可獲得的病毒載體。例如，所述病毒載體可以是腺病毒載體、杆狀病毒載體、細小病毒載體、塞姆利基森林病毒載體、α病毒載體、細小病毒載體、新培斯病毒載體、慢病毒載體、逆轉錄病毒載體、痘苗病毒載體、腺伴隨病毒載體或痘病毒載體。在某些特定的實施方案中，所述病毒載體是腺病毒載體，例如包含編碼p53、mda7或FUS1的核酸的腺病毒載體。在一些實施方案中，所述病毒載體是溶瘤病毒(oncolyticvirus)。在下面在說明書中詳細地描述溶瘤病毒。溶瘤病毒的實例包括過表達ADP的病毒和病毒例如Ad5、dl327、pm734.1、dl309、dl01/07、KD1、KD2、KD3、dl1520和VRX-007。包含病毒載體的藥物組合物可以被冷凍乾燥或可以不被冷凍乾燥。在其他實施方案中，包含治療性和/或診斷性核酸的藥物組合物包括一種或多種遞送試劑。此處定義的「遞送試劑」是指除了病毒載體外促進核酸至目的靶細胞的遞送的任何試劑或物質。本領域技術人員熟悉各種類型的可獲得的遞送試劑。例如，所述遞送試劑可以是脂質。所述脂質可以包含在或可以不包含在脂質體中。脂質體製劑在本領域內是熟知的。在一些實施方案中，DOTAP膽固醇納米顆粒是遞送試劑。本發明的組合物和裝置的表達盒可包含任何類型的啟動子，只要所述啟動子在受試者的細胞中是有活性的。例如，所述啟動子可以是組成型啟動子、誘導型啟動子、阻抑型啟動子或組織選擇性啟動子。此處定義的組織選擇性啟動子是指與其他組織類型相比在某些組織類型中相對更活躍的任何啟動子。因此，例如，肝特異性啟動子將是在肝中更活躍(與身體中其他組織相比)的啟動子。組織選擇性啟動子的一種類型是腫瘤選擇性啟動子。此處定義的腫瘤選擇性啟動子是指與其他組織類型相比在腫瘤組織中更具活性的啟動子。在其他組織類型中可具有一些功能，但與其他組織類型相比，所述啟動子在腫瘤組織中相對更具活性。腫瘤選擇性啟動子的實例包括hTERT啟動子、CEA啟動子、PSA啟動子、probasin啟動子、ARR2PB啟動子和AFP啟動子。在本發明的一些實施方案中，所述藥物組合物是非腺病毒組合物，所述組合物包含治療性核酸和/或診斷性核酸，其中將所述組合物配製為凝膠、糊劑、泡沫劑、結晶漿液(slurry)、乳膏、軟膏、栓劑或粉劑。在特定的方面，所述組合物包含編碼p53、mda7和/或FUS1的核酸的組合物。可配製藥物組合物以使其可通過透皮貼劑、條帶(strip)、繃帶、帶、敷料或人造皮膚(syntheticskin)施用。在下面更詳細地描述這些製劑。本發明總的說來也涉及用於遞送治療劑或診斷劑至受試者的透皮給藥或經皮膚遞送裝置，所述裝置包括貼劑和包含核酸的藥物組合物，所述核酸編碼報告蛋白、腫瘤抑制劑、促凋亡蛋白、生長因子或細胞因子，其中將所述藥物組合物施用於貼劑的至少一個表面。涉及藥物組合物的上面的描述此處也適用於這些透皮或經皮膚的遞送裝置。在本說明書的其他地方描述示例性腫瘤抑制劑、促凋亡蛋白、生長因子、報告因子和細胞因子。如上所示，可在表達盒中包含核酸，所述表達盒包含有效地偶聯至所述核酸的啟動子，其中所述啟動子在受試者的細胞中具有活性。涉及表達盒的上述描述此處也適用於該部分。在特定的實施方案中，所述表達盒是病毒載體，例如腺病毒載體。在一些實施方案中，所述核酸是編碼p53、mda7或FUS1的治療性核酸。本發明的實施方案也涉及檢測、預防或治療受試者的疾病的方法，所述方法包括給所述受試者施用上面所示的任何藥物組合物。此外，本發明的實施方案也涉及檢測、預防或治療受試者的疾病的方法，所述方法包括將此處所示的一種或多種透皮或經皮膚遞送裝置用於所述受試者的身體表面。在一些實施方案中，所述核酸可編碼報告蛋白，且其中所述方法被進一步確定為在受試者中檢測病灶的方法。所述疾病可以是任何疾病。例如，所述疾病可以是過度增生性病灶。示例性過度增生性病灶包括惡化前病灶、癌症和腫瘤。過度增生性病灶、惡化前病灶或癌症可以是乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、腦癌、肝癌、子宮頸癌、宮頸發育異常、結腸癌、腎癌、皮膚癌、發育不良痣、頭與頸癌、骨癌、食管癌、過度角化症、脊柱後凸、脂溢性角化病、膀胱癌、子宮癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睪丸癌、淋巴瘤、白血病或這些組織或器官的發育異常病變(dysplasticlesion)。其他疾病包括糖尿病性潰瘍、靜脈淤積性潰瘍(venousstasisulcer)、褥瘡、燒傷、傷口和黏膜炎。在某些實施方案中，過度增生性病變是可影響受試者的嘴的疾病。示例包括黏膜白斑病、鱗狀上皮細胞增生性病變(squamouscellhyperplasticlesions)、惡化前上皮病變(premalignantepitheliallesion)、口腔發育異常(oraldysplasia)、上皮內瘤形成病變(intraepithelialneoplasticlesion)、局灶性上皮增生和鱗狀細胞癌病變(squamouscarcinomalesion)。所述受試者可以是任何受試者，例如哺乳動物。在某些實施方案中，所述哺乳動物是人。例如，人可以是患有癌前病變的患者或患有癌症的患者。在某些實施方案中，所述受試者正經歷過度增生性病變的次級治療(secondarytreatment)例如次級抗癌治療。在下面在說明書中更詳細描述的這樣的治療的實例包括手術治療、化學治療、放射治療和免疫治療。所述核酸可以是治療性核酸，例如編碼腫瘤抑制劑、促凋亡蛋白、細胞因子或生長因子的核酸。在上面和本說明書中其他地方更詳細地描述了這些核酸。所述核酸還可以是診斷性核酸，例如編碼上述報告蛋白的核酸。在其他實施方案中，特別地所述治療性核酸明確地不編碼此處描述的腫瘤抑制劑、促凋亡蛋白、細胞因子或生長因子或這些蛋白中的任一種。在一些實施方案中，所述方法還被確定為促進受試者的傷口癒合的方法。在這些實施方案中，例如，所述核酸可編碼生長子，例如上述生長因子。在其他實施方案中，所述核酸是治療性核酸，所述方法還被確定為在受試者中預防或抑制過度增生性病變擴大的方法。例如，過度增生性病變可以是受試者的口腔發育異常(oraldysplasia)或黏膜白斑病。所述方法還可包括鑑定需要疾病或健康相關性狀況的檢測、治療或預防的受試者。鑑定處於風險的受試者的方法的實例包括基於歷史或檢查的臨床篩查、醫生會診或鑑定這些風險因子的問卷調查。如上所示，表達盒可包含所述核酸並且包含有效連接至該核酸的啟動子，其中所述啟動子在所述受試者的細胞中是有活性的。在特定的實施方案中，所述表達盒包含在病毒載體例如腺病毒載體中。在更特定的實施方案中，所述表達盒包含在腺病毒載體中，所述核酸編碼p53、mda7或FUS1。本方法包括施用本領域技術人員已知的藥物組合物的任何方法。「施用」包括給受試者提供藥物組合物。本領域技術人員熟悉許多通過其可施用藥物的方法。例如，施用可包括給受試者的身體表面局部施用製劑。例如，可使用塗藥器(applicator)施用凝膠或糊劑，例如使用棉頭塗藥器和刮勺施用凝膠或糊劑。所述塗藥器可以是或可以不是一次性的。可由任何個體例如健康護理專業人員或被施以藥物組合物的受試者施用組合物。「施用」的定義也包括開出藥物組合物的處方，例如由健康護理專業人員開的處方。此處所示的藥物組合物可以以包含一次性或可重複使用的塗藥器和藥物組合物的試劑盒的形式存在。可設計這樣的試者盒以使保健人員或受試者能夠施用藥物組合物。此處所示的治療方法可包括給受試者施用一種或多種的次級治療形式。次級治療形式包括本領域技術人員已知的任何形式，其主要依賴於疾病過程。在下面在說明書中提供了實例。此處所示的某些核酸對於此處所示的每種製劑並不都是適用的。因此，例如適合用於乳膏製劑的特定核酸可能不一定適合於錠劑形式的製劑。所述關於本發明的一個方面的任何實施方案同樣可用於本發明的其他方面。實施例部分的實施方案理解為可用於本發明的所有方面的實施方案。權利要求中的術語「或」用於表示「和/或」，除非明確指出是指選擇其一或選擇方案是相互排斥的，儘管本公開內容支持擇一選擇和「和/或」的定義。在整個本申請中，術語「大約」用於表示這樣的值，該值包括用於確定該值的裝置或方法的誤差的標準差。如在本說明書中所用的，「a」或「an」可表示一個或多個。如此處在權利要求中所用的，當與詞「包含」一起使用時，詞「a」或「an」可表示一個或不止一個。如此處所用的，「另一個」可表示至少第二個或更多個。根據詳細的描述，本發明的其他目的、特徵和有利方面將變得明顯。然而，應當理解，詳細的描述和特定的實施例，表示本發明的優選的實施方案，其只是以舉例說明的方式給出，因為根據該詳細描述，本發明的精神和範圍內的各種改變和變化對於本領域技術人員將變得顯然。附圖概述下列附圖形成本說明書的部分且用於進一步展示本發明的某些方面。通過參考與此處提供的特定實施方案的詳細描述結合的這些附圖中的一個或多個附圖可更好地理解本發明。圖1.重組P53腺病毒的產生的示意圖。在pXCJL.1的XbaI和ClaI位點之間插入p53表達盒。將p53表達盒(pEC53)和重組質粒pJM17共轉染入293細胞。在培養基中保持轉染的細胞直至細胞病變效應發生。使用從CPE上清液(所述上清液用蛋白酶K和酚抽提處理)製備的DNA模板，通過DNA的PCR分析鑑定新產生的p53重組腺病毒(AdCMV-p53)。示例性實施方案的描述本發明已鑑定了可用於診斷、治療和/或預防受試者的疾病的核酸的某些新組合物。這些組合物包含經配製用於例如受試者的身體表面(例如皮膚、病變表面、黏膜表面、傷口表面、腫瘤表面或空腔臟器例如胃的襯裡(lining))的核酸。在一些實施方案中，所述核酸編碼可用於疾病的診斷的報告基因。也提供了診斷和治療受試者的疾病的新方法，其包括使用此處所示的核酸的新製劑。此處提供的新組合物和方法可用於檢測、預防或治療許多疾病和健康相關性狀況的任一種。這些疾病的實例包括癌症和感染以及傷口癒合。這些新組合物在疾病的診斷、治療和預防中的應用代表了現有基因治療技術的改進。A.核酸1.一般而言的核酸本發明的藥物組合物和方法包括已知或懷疑在受試者的疾病或健康相關性狀況的診斷、治療或預防中是有益的核酸。術語「核酸」在本領域中是熟知的。此處所用的「核酸」一般是指DNA、RNA(包括RNAisiRNA和核酶)以及寡核苷酸的分子(即，鏈)、包含CpG位點的寡核苷酸或其包含核鹼基(nucleobase)的衍生物或類似物。術語「核酸」包括術語「寡核苷酸」和「多核苷酸」，各作為術語「核酸」的亞類。術語「寡核苷酸」是指長度在大約3和大約100個核鹼基之間的分子。術語「多核苷酸」是指至少一個長度大於大約100個核鹼基的分子。這些定義一般是指單鏈分子，但在特定的實施方案中也可包括另外的鏈。所述另外的鏈可以部分、基本上或完全與所述單鏈分子互補。因此，核酸可包括包含一個或多個互補鏈的雙鏈分子或三鏈分子或包含分子的特定序列的「互補物」。如此處所用的，單鏈核酸可用前綴「ss」表示，雙鏈核酸用前綴「ds」表示，而三鏈核酸用前綴「ts」表示。a.核鹼基如此處所用的，「核鹼基」是指雜環鹼基，例如在至少一個天然發生的核酸(即DNA和RNA)中發現的天然發生的核鹼基(即A、T、G、C或U)和這樣的核鹼基的天然或非天然發生的衍生物和類似物。核鹼基通常可以以可替代天然發生的核鹼基配對的方式與至少一個天然發生的核鹼基形成一個或多個氫鍵(例如，A和T、G和C、以及A和U之間的氫鍵)(「退火」或「雜交」)。「嘌呤」和/或「嘧啶」核鹼基包括天然發生的嘌呤和/或嘧啶核鹼基和其衍生物和類似物，包括但不限於，由一個或多個烷基、羧烷基、氨基、羥基、滷素(即，氟、氯、溴或碘)、巰基或烷硫基部分取代的嘌呤或嘧啶。優選的烷基(例如，烷基、羧烷基等)部分由大約1、大約2、大約3、大約4、大約5至大約6個碳原子組成。嘌呤或嘧啶的其他非限定性實例包括脫氮雜嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、5-氟尿嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、8-溴鳥嘌呤、8-氯鳥嘌呤、溴胸腺嘧啶、8-氨基鳥嘌呤、8-羥基鳥嘌呤、8-甲基鳥嘌呤、8-硫鳥嘌呤、氮雜鳥嘌呤、2-氨基嘌呤、5-乙基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-乙基尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-丙基尿嘧啶、硫尿嘧啶、2-甲基腺嘌呤、甲基硫腺嘌呤、N，N-二甲基腺嘌呤、氮雜腺嘌呤、8-溴腺嘌呤、8-羥基腺嘌呤、6-羥基氨基嘌呤、6-硫嘌呤、4-(6-氨基己基/胞嘧啶)等。表1顯示嘌呤和嘧啶衍生物及類似物的非限定性實例。可通過使用此處描述的或本領域技術人員已知的任何化學或天然合成方法將核鹼基包含在核苷或核苷酸中。b.核苷如此處所用的，「核苷酸」是指包含共價地附著至核鹼基連接體部分的核鹼基的單個化學單位。「核鹼基連接體部分」的非限定性實例是包含5-碳原子的糖(即，「5-碳糖」)，包括但不限於脫氧核糖、核糖、阿拉伯糖或五碳糖的衍生物或類似物。5碳糖的衍生物或類似物的非限定實例包括2′-氟-2′-脫氧核糖或碳環糖，其中用碳原子取代糖環中的氧原子。不同類型的核鹼基至核鹼基連接體部分的共價附著在本領域內是已知的。以非限定性實例為例，包含嘌呤(即，A或G)或7-脫氮雜嘌呤核鹼基的核苷一般將嘌呤或7-脫氮雜嘌呤的9位置共價地附著至5碳糖的1』位置。在另一個非限定性實例中，包含嘧啶核鹼基(即，C、T或U)的核苷一般將嘧定的1位置共價地附著至5碳糖的1』位置(Kornberg和Baker，1992)。c.核苷酸如此處所用的，「核苷酸」是指進一步包含「主鏈部分」的核苷。主鏈部分一般將核苷酸共價地附著至包含核苷酸的另一個分子，或附著至另一個核苷酸，從而形成核酸。天然發生的核苷酸中的「主鏈部分」通常包含磷部分，該部分共價地附著至5碳糖。主鏈部分的附著一般發生在5碳糖的3′或5′位置。然而，附著的其他類型在本領域內是已知的，特別是當核苷酸包含天然發生的5碳糖或磷部分的衍生物或類似物時。d.核酸類似物核酸可包含，或可完全由可存在於天然發生的核酸中的核鹼基、核鹼基連接體部分和/或主鏈部分的衍生物或類似物組成。如此處所用的，「衍生物」是指天然發生的分子的化學修飾的或改變的形式，而術語「模擬物」或「類似物」是指結構上可與天然發生的分子或部分相似或不相似，但具有相似功能的分子。如此處所用的，「部分」一般是指更大的化學或分子結構的較小的化學或分子組分。核鹼基、核苷和核苷酸類似物或衍生物在本領域內是熟知的，且已進行了描述(參見例如，Scheit，1980，此處引用作為參考)。本領域技術人員已知的核苷或核苷酸的任何衍生物或類似物可用於本發明的方法和組合物。非限制性實例是「聚醚核酸(polyethernucleicacid)」和「肽核酸」。e.核酸的製備可通過本領域技術人員已知的任何技術製備核酸。實例包括化學合成、酶促產生或生物產生。合成的核酸(例如合成的寡核苷酸)的非限定性實例，包括使用磷酸三酯、亞磷酸或亞磷醯胺化學藥品以及固相技術通過體外化學合成來製備的核酸。酶促產生的核酸的非限制性實例包括由擴增反應例如PCRTM和本領域內技術人員已知的其他技術(參見，例如，美國專利4,683,202和美國專利4,682,195，各自在此引用作為參考)或美國專利No.5,645,897(在此引用作為參考)中描述的寡核苷酸的合成中的酶產生的核酸。生物產生的核酸的非限定性實例包括活細胞中產生(即，複製的)的重組核酸，例如在細菌中複製的重組DNA載體(參見例如，Sambrook等人2001，在此引用作為參考)。f.核酸互補物本發明也包括與編碼能夠在患者中診斷、治療或預防疾病的胺基酸序列的核酸互補的核酸。當核酸能夠按照標準的Watson-Crick、Hoogsteen或反向Hoogsteen結合互補法則(reverseHoogsteenbindingcomplementarityrule)與另一個核酸進行鹼基配對時，其是所述另一個核酸的「互補物」或對於所述另一個核酸是「互補的」。如此處所用的，「另一個核酸」可以是指分開的分子或相同分子的空間上分開的序列。如此處所用的，術語「互補的」或「互補物」也指核酸，該核酸包含連續核鹼基或半連續核鹼基(例如，一個或多個核鹼基部分不存於該分子中)的序列，所述序列即使在並非所有核鹼基都與對應的核鹼基配對的情況下仍能夠與另一個核酸鏈或雙鏈體雜交。在某些實施方案中，「互補的」核酸包含序列，在所述序列中，核鹼基序列的大約70％至大約100％(以及該範圍內的任何值)能夠在雜交過程中與單鏈或雙鏈核酸鹼基配對。在某些實施方案中，術語「互補的」是指可在嚴緊條件下與另一個核酸鏈或雙鏈雜交的核酸，本領域技術人員對此是理解的。在某些實施方案中，「部分互補的」核酸包含可在低嚴緊條件下與單鏈或雙鏈核酸雜交的序列，或包含其中低於大約70％的鹼基序列能夠在雜交過程中與單鏈或雙鏈核酸分子鹼基配對的序列。2.治療性核酸在此處所示的製劑的一些實施方案中，所述核酸是治療性核酸。此處定義的「治療性核酸」是指能夠給患者施用以治療或預防疾病的核酸。所述核酸是已知或懷疑在治療受試者的疾病或健康相關性狀況中是有益的核酸。在本說明書的其他部分詳細地描述了疾病和健康相關性狀況。治療性益處可作為例如通過核酸改變特定基因的表達的結果而產生。特定基因的表達的改變可以是特定基因的表達的抑制或提高。在本發明的某些實施方案中，治療性核酸編碼一種或多種可用於在受試者中治療或預防疾病或健康相關性狀況的蛋白或多肽。術語「蛋白」和「多肽」此處可互換使用。兩個術語都指包含兩個或更多個胺基酸殘基的胺基酸序列。本領域技術人員已知的已知或懷疑在疾病或健康相關性狀況的治療或預防中是有益的任何核酸被本發明當作治療性核酸。術語「編碼....的核酸序列」，如整個本申請中所提及的，是指指導特定蛋白或肽的表達的核酸。所述核酸序列包括轉錄成RNA的DNA鏈序列和翻譯成蛋白的RNA序列。在一些實施方案中，所述核酸包括治療性基因。術語「基因」用於表示編碼功能性蛋白、多肽或肽編碼性單位的核酸序列。如本領域技術人員所理解的，術語「治療性核酸」包括基因組序列、cDNA序列和更小的經基因工程改造的基因片段，所述序列或片段表達或經改造可適用於表達蛋白、多肽、結構域、肽、融合蛋白和突變體。所述核酸可包含大約5至大約12000個或更多個核苷酸、核苷、或鹼基對的連續核酸序列。已證明在疾病或健康相關性狀況的治療或預防中具有益處的治療性核酸的「生物功能等價物」包含在「治療性核酸」的定義內。因此，本發明涉及具有與已知的核酸大約70％至大約99％的同源性的序列。a.編碼腫瘤抑制劑和促凋亡蛋白的核酸在一些實施方案中，所述藥物組合物的核酸包括編碼可用於治療或預防癌症或其他過度增生性疾病的蛋白或多肽的核酸序列。這些蛋白的實例包括，但不限於，Rb、CFTR、p16、p21、p27、p57、p73、C-CAM、APC、CTS-1、zac1、scFVras、DCC、NF-1、NF-2、WT-1、MEN-I、MEN-II、BRCA1、VHL、MMAC1、FCC、MCC、BRCA2、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11IL-12、IL-13、GM-CSF、G-CSF、胸苷激酶、mda7、fus、幹擾素α、幹擾素β、幹擾素γ、ADP、p53、ABLI、BLC1、BLC6、CBFA1、CBL、CSFIR、ERBA、ERBB、EBRB2、ETS1、ETS2、ETV6、FGR、FOX、FYN、HCR、HRAS、JUN、KRAS、LCK、LYN、MDM2、MLL、MYB、MYC、MYCL1、MYCN、NRAS、PIM1、PML、RET、SRC、TAL1、TCL3、YES、MADH4、RB1、TP53、WT1、TNF、BDNF、CNTF、NGF、IGF、GMF、aFGF、bFGF、NT3、NT5、ApoAI、ApoAIV、ApoE、Rap1A、胞嘧啶脫氨酶、Fab、ScFv、BRCA2、zac1、ATM、HIC-1、DPC-4、FHIT、PTEN、ING1、NOEY1、NOEY2、OVCA1、MADR2、53BP2、IRF-1、Rb、zac1、DBCCR-1、rks-3、COX-1、TFPI、PGS、Dp、E2F、ras、myc、neu、raf、erb、fms、trk、ret、gsp、hst、abl、E1A、p300、VEGF、FGF、血小板反應蛋白、BAI-1、GDAIF或MCC。「腫瘤抑制劑」是指多肽，當其存在於細胞中時，減少細胞的腫瘤形成性、惡性或過度增殖性表型。編碼腫瘤抑制劑基因的胺基酸序列的核酸序列包括腫瘤抑制劑基因的全長核酸序列和來源該全長序列的任何長度的非全長序列。要進一步理解，所述序列包含天然序列或可被導入從而在特定宿主細胞中提供密碼子偏愛的序列的簡併密碼子。編碼腫瘤抑制劑的核酸一般是指減少細胞的腫瘤形成性、惡性或過度增殖性表型的核酸序列。因此，健康細胞中腫瘤抑制基因的缺乏、突變或正常表達的破壞增加了該細胞獲得致瘤性狀態的可能性或導致獲得致瘤性狀態的細胞。相反地，當功能性腫瘤抑制劑基因或蛋白存在於細胞中時，其存在抑制了宿主細胞的腫瘤形成性、惡性或過度增殖性表型。腫瘤抑制劑的示例包括，但不限於，APC、CYLD、HIN-1、KRAS2b、p16、p19、p21、p27、p27mt、p53、p57、p73、PTEN、Rb、子宮珠蛋白、Skp2、BRCA-1、BRCA-2、CHK2、CDKN2A、DCC、DPC4、MADR2/JV18、MEN1、MEN2、MTS1、NF1、NF2、VHL、WRN、WT1、CFTR、C-CAM、CTS-1、zac1、scFV、ras、MMAC1、FCC、MCC、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或編碼SEMA3多肽和FUS1的基因。其他示例性腫瘤抑制劑基因描述於www.cise.ufl.edu/～yyl/HTML-TSGDB/Homepage.html中的腫瘤抑制基因的資料庫中。該資料庫明確地在本申請的該部分和所有其他部分引用作為參考。編碼上述腫瘤抑制基因的核酸包括腫瘤抑制基因或由其衍生的核酸(例如，cDNAs、cRNA、mRNA和編碼各腫瘤抑制劑胺基酸序列的活性片段的其亞序列)以及包含這些序列的載體。本領域技術人員熟悉可用於本發明的腫瘤抑制基因。最為熟知的一個腫瘤抑制基因是p53。p53是許多細胞抗癌機制的中心。其可誘導生長抑制、編程性細胞死亡和細胞衰老。在正常的細胞中p53通常是無活性的，結合至蛋白MDM-2，這防止了其作用和促進了其降解。在各種致癌劑例如UV輻照、癌基因和一些DNA損傷藥物的作用後活性p53被誘導。DNA損傷在細胞周期中被『檢查點』感覺到，然後使蛋白例如ATM、Chk1和Chk2在靠近p53蛋白的MDM2結合區域的位置磷酸化p53。癌基因也刺激由蛋白p14ARF介導的p53的激活。一些癌基因也可刺激結合MDM2且抑制其活性的蛋白的轉錄。一旦被活化，p53具有許多抗癌機制，最詳盡證明的是其結合DNA的區域和激活基因(所述基因在細胞周期抑制、編程性細胞死亡、遺傳穩定性和抑制血管發生中起著重要作用)的轉錄的能力(Vogelstein等人，2000)。研究已將p53和pRB腫瘤抑制劑途徑通過蛋白p14ARF聯結起來，產生了所述途徑可相互調節的可能性(Bates等人，1998)。編碼促凋亡蛋白的核酸編碼誘導或維持活性形式的編程性細胞死亡的蛋白。本發明包括編碼本領域技術人員已知的促凋亡蛋白的任何核酸。示例性促凋亡蛋白包括CD95、caspase-3、Bax、Bag-1、CRADD、TSSC3、bax、hid、Bak、MKP-7、PERP、bad、bcl-2、MST1、bbc3、Sax、BIK、BID和mda7。本領域技術人員熟悉促凋亡蛋白，包括此處未明確提及的促凋亡蛋白。編碼促凋亡蛋白胺基酸序列的核酸包括，例如cDNA、cRNA、mRNA和編碼各自的促凋亡蛋白胺基酸序列的活性片段的其亞序列。本領域技術人員理解存在編碼蛋白或多肽的其他核酸，所述蛋白或多肽可用於治療此處未明確提及的疾病或健康相關性狀況。此外，要理解本說明書中其他地方提及的治療性核酸的任一種例如編碼細胞因子的核酸可用於癌症的治療和預防。b.編碼細胞因子的核酸在此處提供的藥物組合物的一些實施方案中，所述核酸編碼細胞因子。術語「細胞因子」是由一種細胞群體釋放的以細胞間調節劑的形式作用於另一種細胞的蛋白的總稱。所述核酸序列可編碼細胞因子的全長核酸序列和從所述全長序列衍生的任何長度的非全長序列。要進一步理解，如上面所描述的，所述序列包含天然序列的簡併密碼子或可被導入從而在特定宿主細胞中提供密碼子偏愛的序列。這些細胞因子的實例是淋巴因子、單核因子、生長因子和常規的多肽激素。在細胞因子中包括生長激素例如人生長激素、N-甲硫氨醯人生長激素和牛生長激素；甲狀旁腺激素；甲狀腺素；胰島素；前胰島素；鬆弛素(relaxin)；前鬆弛素(prorelaxin)；糖蛋白類激素例如促卵泡激素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)和促黃體激素(LH)；肝生長因子；前列腺素、成纖維細胞生長因子(FGF)例如FGF-α和FGF-β；催乳激素；胎盤催乳激素、OB蛋白；腫瘤壞死因子α和β；苗勒氏抑制物質(mullerian-inhibitingsubstance)；小鼠促性腺激素結合多肽(gonadotropin-associatedpeptide)；抑制素；激活蛋白；血管內皮生長因子；整聯蛋白；促血小板生成素(TPO)；神經生長因子例如NGF-β；血小板生長因子；轉化生長因子(TGFs)例如TGF-α和TGF-α；胰島素樣生長因子I和II；促紅細胞生成素(EPO)；骨誘導因子；幹擾素例如幹擾素α、β和γ；集落刺激因子(CSFs)例如巨噬細胞-CSF(M-CSF)；粒細胞-巨噬細胞-CSF(GM-CSF)；和粒細胞-CSF(G-CSF)；白細胞介素(IL)例如IL-1、IL-1.α.、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-11、IL-12；IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、LIF、G-CSF、GM-CSF、M-CSF、EPO、kit-配體或FLT-3.參與傷口癒合的生長因子細胞因子的非限定性實例包括表皮生長因子、血小板衍生生長因子、角質形成細胞生長因子、肝細胞生長因子、轉化生長因子(TGFs)例如TGF-α和TGF-β、以及血管內皮生長因子(VEGF)。這些生長因子引發利用Ras、MAPK、PI-3K/Akt、PLC-γ和Rho/Rac/肌動蛋白信號轉導的促有絲分裂、動力產生性(motogenic)和存活途徑。缺氧通過HIF激活促血管生成(pro-angiogenic)基因(例如，VEGF、血管生成素)，而血清應答因子(SRF)對於VEGF誘導的血管發生、上皮再形成和肌肉恢復是至關重要的。EGF、其受體HGF和Cox2對於胃腺的上皮細胞增殖、遷移再上皮形成和重建是非常重要的。VEGF、血管生成素、一氧化氮、內皮素和金屬蛋白酶對於潰瘍內的血管發生、血管重構和黏膜再生是非常重要的(Tarnawski，2005)。細胞因子的另一個實例是IL-10。IL-10是由免疫系統細胞和一些腫瘤細胞產生的多效同型二聚體細胞因子(Ekmekcioglu等人，1999)。其免疫抑制功能包括促炎細胞因子合成的有效抑制作用，包括IFNγ、TNFα和IL-6的合成的有效抑制(DeWaal等人，1991)。IL-10樣細胞因子的家族在染色體1q32上的小的195kb基因簇中被編碼，且由許多與IL-10具有結構和序列同源性的細胞蛋白(IL-10、IL-19、IL-20、MDA-7)組成(Kotenko等人，2000；Gallagher等人，2000；Blumberg等人，2001；Dumoutier等人，2000；Knapp等人，2000；Jiang等人，1995a；Jiang等人，1996)。最近發現的假定的所述細胞因子家族的成員是MDA-7。MDA-7已被表徵為IL-10家族成員且也稱為IL-24。染色體定位、轉錄調控、鼠類和大鼠的同源物表達以及假定的蛋白結構都暗示MDA-7為細胞因子(Knapp等人，2000；Schaefer等人，2000；Soo等人，1999；Zhang等人，2000)。與GM-CSF、TNFα和IFNγ轉錄物(其都在其3』UTR包含富含AU的元件以將mRNA靶向快速降解)相似，MDA-7在其3』UTR17具有三個ARE。已在人PBMC中鑑定了Mda-7mRNA(Ekmekcioglu，等人，2001)，且儘管以前未報導過MDA-7蛋白的細胞因子功能，但基於基因和蛋白序列的特徵(NCBI資料庫檢索號XM_001405)已將MDA-7稱為IL-24。c.編碼酶的核酸治療性核酸的其他實例包括編碼酶的核酸。實例包括，但不限於，ACP去飽和酶、ACP羥化酶、腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶、ATPase、醇脫氫酶、澱粉酶、澱粉葡萄糖苷酶、觸酶、纖維素酶、環氧合酶、脫羧酶、糊精酶、酯酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶、透明質酸合酶、半乳糖苷酶、葡聚糖酶、葡糖氧化酶、GTPase、解旋酶、半纖維素酶、透明質酸酶、整合酶、轉化酶、異構酶、激酶、乳糖酶、脂酶、脂肪氧化酶、裂解酶、溶菌酶、果膠脂酶、過氧化物酶、磷酸酶、磷脂酶、磷酸化酶、多聚半乳糖醛酸酶、蛋白水解酶、肽酶、支鏈澱粉酶(pullanase)、重組酶、逆轉錄酶、拓撲異構酶、木聚糖酶、報導基因、白細胞介素或細胞因子。然而，在本發明的某些實施方案中，本發明明確地不包括在上面或下面的段落中鑑定的一種或多種酶。治療性基因的其他實例包括編碼下列酶的基因，所述酶是氨甲醯合成酶I、鳥氨酸轉氨甲醯酶、精氨琥珀酸合成酶、精氨琥珀酸裂解酶、精氨酸酶、延胡索醯乙醯乙酸水解酶、苯丙氨酸羥化酶、α1-抗胰蛋白酶、葡萄糖-6-磷酸酶、低密度脂蛋白受體、膽色素原脫氨酶、VIII因子、因子IX、胱硫醚β-合酶、支鏈酮酸脫羧酶、白蛋白、異戊醯輔酶A脫氫酶、丙醯輔酶A羧化酶、甲基丙二醯輔酶A變位酶、戊二醯輔酶A脫氫酶、胰島素、β-葡糖苷酶、丙酮酸羧化酶、肝磷酸化酶、磷酸化酶激酶、甘氨酸脫羧化酶、H蛋白、T蛋白、門克斯病銅轉運三磷酸腺苷酶、威爾遜氏病銅轉運三磷酸腺苷酶、胞嘧啶脫氨酶、次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶、1-磷酸半乳糖尿苷酸轉移酶、苯丙氨酸羥化酶、葡萄糖腦苷脂酶、鞘磷脂酶、α-L-艾杜糖苷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、葡萄糖基轉移酶、HSV胸苷激酶、或人胸苷激酶。本發明的治療性核酸可編碼過氧化物歧化酶(SOD)。以幾種同工型存在的SOD是將超氧自由基解毒成過氧化氫的金屬酶。兩種同工型是細胞內的在細胞質中表達的Cu/Zn-SOD和在線粒體中表達的Mn-SOD(Linchey和Fridovich，1997)。已證明Mn-SOD在用MnSODcDNA轉染的造血腫瘤細胞系中增加對輻射的抗性(Suresh等人，1993)。已證明Cu/Zn-SOD的腺病毒遞送保護免受乙醇誘導的肝損傷的傷害(Wheeler等人，2001)。此外在溫暖的局部缺血-再灌注模型中，Mn-SOD和Cu/Zn-SOD兩者的腺病毒介導的基因遞送在保護免受氧化應激的傷害中具有同樣功效(Wheeler等人，2001)。d.編碼激素的核酸治療性核酸也包括編碼激素的核酸。實例包括，但不限於，生長激素、催乳素、胎盤催乳激素、促黃體激素、促卵泡激素、絨毛膜促性腺激素、促甲狀腺激素、瘦素、促腎上腺皮質激素、血管緊張素I、血管緊張素II、β-內啡肽、β-黑素細胞刺激激素、膽囊收縮素、內皮素I、神經節肽、抑胃肽、胰高血糖素、胰島素、促脂解激素、後葉激素運載蛋白、生長抑素、降鈣素、降鈣素基因相關肽、β-降鈣素基因相關肽、高鈣血症候群惡性腫瘤因子(hypercalcemiaofmalignancyfactor)、甲狀旁腺激素相關蛋白、甲狀旁腺激素相關蛋白、胰高血糖素樣肽、胰抑素、胰肽、肽YY、PHM、促胰液素、腸道血管活性肽、催產素、血管加壓素、加壓催產素、enkephalinamide、metorphinamide、α-黑素細胞刺激激素、心房鈉尿肽、支鏈澱粉、澱粉樣P物質、促腎上腺皮質素釋放激素、生長激素釋放因子、黃體生成激素釋放激素、神經肽Y、K物質、P物質和促甲狀腺激素釋放激素。治療性基因的其他實例包括編碼存在於病原體中的抗原或參與自身免疫的免疫效應子的基因。這些基因可用於例如製劑中，所述製劑可用於傳染性疾病和自身免疫性疾病的免疫治療或免疫預防的免疫接種。在本發明的另一個實施方案中，單獨地或與治療性基因一起使用報告基因。報告基因的實例包括，但不限於編碼螢光蛋白例如gfp、rfp或bfp、酶蛋白如β-半乳糖苷酶或化學發光蛋白例如螢光素酶的基因。「生物等效性」治療性基因包括在「報告基因」的定義內。因此，與所述報告基因的胺基酸相同或功能上等效的具有大約70％至大約99％的胺基酸同源性的序列可以是作為生物學功能等效的序列，只要所述蛋白的生物活性得到保持。e.編碼抗原的核酸此處所示的藥物組合物可包括編碼一種或多種抗原的核酸。例如，所述治療性基因可編碼存在於腫瘤、病原體中的抗原或參與自身免疫的免疫效應子。這些基因可用於例如可用於接種的製劑，所述接種用於瘤形成、傳染性疾病和自身免疫性疾病的免疫治療或免疫預防。i.腫瘤抗原在某些實施方案中，所述治療性核酸編碼腫瘤抗原。腫瘤抗原對於本領域技術人員來說是熟知的。實例包括，但不限於，由Dalgleish(2004)，Finn(2003)，以及Hellstrom和Helstrom(2003)描述的腫瘤抗原，所述參考資料各自在此以其全文引用作為參考。其他實例可在http://www.bioinfo.org.cn/hptaa/search.php(其明確地在此引用作為參考)中查到。ii.微生物抗原類在一些實施方案中，所述核酸編碼微生物抗原。術語「微生物」包括病毒、細菌、微觀真菌(microscopicfungi)、原生動物和其他微觀寄生蟲。「微生物抗原」是指當由抗原呈遞細胞(APC)呈遞在細胞表面上時誘導免疫應答的多肽。該反應可誘導細胞毒性T細胞反應或抗體的產生或兩者。微生物病原體可從其衍生的病毒的實例包括人皰疹病毒(HHVs)-1至8；皰疹B病毒；HPV-16、18、31、33和45；肝炎病毒A、B、C、δ；脊髓灰質炎病毒；輪狀病毒；流感病毒；慢病毒；HTLV-1；HTLV-2；馬傳染性貧血病病毒；東方馬腦炎病毒；西方馬腦炎病毒；委內瑞拉馬腦炎病毒；立夫特山谷熱病毒；西尼羅病毒；黃熱病病毒；克裡米亞-剛果出血熱病毒；登革病毒；SARS冠狀病毒；天花病毒；猴痘病毒等。病毒微生物的實例包括，但不限於逆轉錄病毒科、黃病毒科、冠狀病毒科、小RNA病毒科(picornaviridae)、披膜病毒科、彈狀病毒科、副粘病毒科、正粘病毒科、本揚病毒科、沙粒病毒科、呼腸孤病毒科、多瘤病毒科、乳頭瘤病毒科、皰疹病毒科和嗜肝DNA病毒科。逆轉錄病毒科的實例包括慢病毒例如HIV-1、HIV-2、SIV、FIV、Visna、CAEV、BIV和EIAV。由慢病毒編碼的基因可包括gag、pol、env、vif、vpr、vpu、nef、tat、vpx和rev。逆轉錄病毒的其他實例包括α逆轉錄病毒例如禽白血病病毒、鳥成髓細胞白血病病毒、禽肉瘤病毒、藤浪肉瘤病毒和勞斯肉瘤病毒。由α逆轉錄病毒編碼的基因可包括gag、pol和env。逆轉錄病毒的其他實例包括β逆轉錄病毒例如南非綿羊逆轉錄病毒(jaagsiektesheepretrovirus)、葉猴病毒(langurvirus)、梅森-菲舍猴病毒、小鼠乳房腫瘤病毒、猿猴逆轉錄病毒1和猿猴逆轉錄病毒2。由β逆轉錄病毒編碼的基因可包括gag、pol、pro和env。逆轉錄病毒的其他實例包括δ逆轉錄病毒例如HTLV-1、HTLV-2、牛白血病病毒和狒狒T細胞白血病病毒。由δ逆轉錄病毒編碼的基因可包括gag、pol、env、tax和rex。逆轉錄病毒的其他實例包括泡沫病毒例如牛、貓、馬、猿和人泡沫病毒。由泡沫病毒編碼的基因可包括gag、pol、env、bel-1、bel-2和bet。黃病毒的實例包括但不限於C型肝炎病毒、蚊媒黃熱病病毒(mosquitoborneyellowfevervirus)、登革病毒、日本腦炎病毒、聖路易斯腦炎病毒、墨萊溪谷腦炎病毒、西尼羅病毒、庫京病毒、中歐蜱媒病毒(CentralEuropeantickbornevirus)、遠東蜱媒病毒(FarEasterntickbornevirus)、科薩努爾森林病毒、跳躍病病毒(loupingIIIvirus)、波瓦桑病毒、鄂木斯克出血熱病毒、風疹病毒屬(風疹病毒)和瘟病毒屬(黏膜病病毒、豬瘟病毒、邊境病病毒)。由黃病毒編碼的基因包括從其產生所有黃病毒蛋白的黃病毒多蛋白(polyprotein)。編碼黃病毒多蛋白的核酸序列可包含編碼最終加工的黃病毒蛋白產物例如C、prM、E、NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5的序列。冠狀病毒科的實例包括但不限於人呼吸道冠狀病毒(respiratorycoronaviruse)例如SARS和牛冠狀病毒。由冠狀病毒編碼的基因可包括pol、S、E、M和N。小RNA病毒科的實例包括但不限於腸道病毒屬(脊髓灰質炎病毒、柯薩基病毒A組和B組、埃柯病毒(entericcytopathichumanorphan(ECHO)viruses)、A型肝炎病毒、猿猴腸道病毒、鼠腦脊髓炎(ME)病毒、鼠脊髓灰質炎病毒、牛腸道病毒、豬腸道病毒、心病毒屬(腦炎心肌炎病毒(EMC)、門戈病毒)、鼻病毒屬(人鼻病毒，包括至少113種亞型；其他鼻病毒)和口蹄疫病毒屬(口蹄疫(FMDV)。由小RNA病毒科編碼的基因可包括小RNA病毒多蛋白。編碼所述小RNA病毒多蛋白的核酸可包含編碼最終加工的小RNA病毒蛋白產物例如VPg、VP0、VP3、VP1、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D的序列。披膜病毒科的實例包括但不限於α病毒屬(東方馬腦炎病毒、塞姆利基森林病毒、辛德比斯病毒、基孔肯雅病毒、阿尼昂尼昂病毒、羅斯河病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、西方馬腦炎東方馬腦炎病毒)。由披膜病毒科病毒編碼的基因的實例可包括編碼nsP1、nsP2、nsP3、nsP4、C、E1和E2的基因。彈狀病毒科的實例包括，但不限於水泡性病毒屬(VSV)、錢迪普拉病毒、Flanders-HartPark病毒)和狂犬病毒屬(狂犬病毒)。由彈狀病毒科病毒編碼的基因的實例可包括N、P、M、G和L。線狀病毒科的實例包括伊波拉病毒和馬爾堡病毒。由線狀病毒科病毒編碼的基因的實例可包括NP、VP35、VP40、GP、VP35、VP24和L。副粘病毒的實例包括，但不限於副粘病毒屬(副流感病毒1型、仙臺病毒，、血細胞吸附病毒、副流感病毒2至5型、新城疫病毒、腮腺炎病毒)、麻疹病毒屬(麻疹病毒、亞急性硬化性全腦炎病毒、溫熱病病毒、牛瘟麻疹病毒)、肺病毒屬(呼吸道合胞病毒(RSV)、牛呼吸道合胞病毒和小鼠肺炎病毒)。由副粘病毒科病毒編碼的基因的實例包括N、P/C/V、P/C/V/R、M、F、HN、L、V/P、NS1、NS2、SH和M2。正粘病毒科的實例包括流感病毒。由正粘病毒科編碼的基因的實例可包括PB1、PB2、PA、HA、NP、NA、M1、M2、NS1和NS2。布亞病毒的實例包括，但不限於bunyvirus屬(布尼雅科病毒和相關病毒、加利福尼亞腦炎病毒群(Californiaencephalitisgroupviruse))、白蛉病毒屬(白蛉熱西西里病毒、立夫特山谷熱病毒)、內羅病毒屬(克裡米亞-剛果出血熱病毒、奈洛比綿羊病病毒)和吳孔病毒屬(吳孔病毒和相關病毒)。由布亞病毒編碼的基因的實例可包括N、G1、G2和L。沙粒病毒的實例包括，但不限於淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒、拉沙熱病毒、阿根廷出血熱病毒、玻利維亞出血熱病毒和委內瑞拉出血熱病毒。由沙粒病毒編碼的基因的實例可包括NP、GPC、L和Z。呼腸病毒的實例包括但不限於正呼腸孤病毒屬(哺乳動物和禽類逆轉錄動物的多個血清型)、環狀病毒屬(藍舌病毒、Eugenangee病毒、克麥羅沃病毒、非洲馬病病毒和科羅拉多蜱熱病毒)和輪狀病毒屬(人輪狀病毒、內布拉斯加牛腹瀉病毒、鼠類輪狀病毒、猿猴輪狀病毒、牛或羊輪狀病毒、禽類輪狀病毒)。由呼腸病毒編碼的基因的實例可包括以其對應的蛋白產物命名的基因組片段，例如VP1、VP2、VP3、VP4、NSP1、NSP3、NSP2、VP7、NSP4、NSP5和NSP6。多瘤病毒屬病毒的實例包括，但不限於BK和JC病毒。由多瘤病毒屬病毒編碼的基因的實例可包括Agno、P2、VP3、VP2、VP1、大T和小t。乳頭瘤病毒科病毒的實例包括，但不限於HPV-16和HPV-18。由乳頭瘤病毒科病毒編碼的基因的實例可包括E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7、E8、L1和L2。皰疹病毒科的實例包括，但不限於人皰疹病毒(HHV)1、HHV2、HHV3、HHV4、HHV5、HHV6、HHV7和HHV8。由皰疹病毒科病毒編碼的基因的實例可包括γ134.5、ORFP、ORF0、α0、UL1至UL56、α4、α22、US2至US12、OriSTU和LATU。嗜肝DNA病毒屬病毒的實例包括但不限於B型肝炎病毒。由嗜肝DNA病毒編碼的基因的實例可包括S、C、P和X。可從其產生抗原的真菌的實例包括夾膜組織胞漿菌(histoplasmacapsulatum)、麴黴(aspergillus)、放線菌屬(actinomyces)、念珠菌屬(candida)、鏈黴菌屬(streptomyces)等等。可從其產生抗原的原生動物或其他微生物的實例包括惡性瘧原蟲(plasmodiumfalciparum)、間日瘧原蟲(plasmodiumvivax)、卵形瘧原蟲(plasmodiumovale)、三日瘧原蟲(plasmodiummalaria，)等。來源於瘧原蟲種的基因可包括PyCSP、MSP1、MSP4/5、Pvs25和Pvs28。可從其產生微生物抗原的細菌的實例包括結核分支桿菌(mycobacteriumtuberculosis)、鼠疫耶爾森氏菌(yersiniapestis；)、普瓦基克氏立克次氏體(rickettsiaprowazekii)、立克氏立克次氏體(rickettsiarickettsii；)、土拉弗朗西斯菌(francisellatularensis)、炭疽桿菌(bacillusanthracis)、幽門螺旋桿菌(helicobacterpylori)、傷寒沙門氏菌(salmonellatyphi)、博氏疏螺旋體(borreliaburgdorferi)、變形鏈球菌(streptococcusmutans)等。來源於結核分支桿菌的基因可包括85A、85B、85C和ESAT-6。來源於鼠疫耶爾森氏菌的基因可包括lcrV和caf1。來源於立克次體種類的基因可包括ospA、invA、ompA、ompB、virB、cap、tlyA和tlyC。來源於土拉弗朗西斯菌的基因可包括二磷酸核苷激酶、異檸檬酸脫氫酶、Hfq和ClpB。來源於炭疽桿菌的基因可包括PA、BclA和LF。來源於幽門螺旋桿菌的基因可包括hpaA、UreB、hspA、hspB、hsp60、VacA和cagE。來源於傷寒沙門氏菌的基因可包括mpC、aroC、aroD、htrA和CS6。來源於博氏疏螺旋體的基因可包括OspC。可從其產生微生物抗原的真菌的實例包括組織胞漿菌屬(hitoplasma)；ciccidis；粗球孢子菌(immitis)；麴黴菌(aspargillus)；放線菌(actinomyces)；芽生菌(blastomyces)；念珠菌(candida)、鏈黴菌(streptomyces)等。可從其產生抗原的原生動物或微生物的實例包括惡性瘧原蟲(plasmodiumfalciparum)、間日瘧原蟲(plasmodiumvivax)、卵形瘧原蟲(plasmodiumovale)、三日瘧原蟲(plasmodiummalariae)、giadariaintestinalis等。所述微生物抗原可以是來源於變形鏈球菌的葡萄糖基轉移酶。所述葡萄糖基轉移酶介導變形鏈球菌在牙齒表面上積累。已證明葡萄糖基轉移酶的失活導致老年齲的減少(Devulapalle和Mooser，2001).來源於變形鏈球菌的抗原的另一個實例是PAc蛋白。PAc是參與變形鏈球菌的集落化的190-kDa的表面蛋白抗原，其介導該生物至牙表面的初始附著。近年來，已報導編碼融合蛋白(所述融合蛋白由變形鏈球菌的葡萄糖基轉移酶B編碼的胺基酸殘基1185-1475與由變形鏈球菌的PAc基因編碼的胺基酸殘基222-965組成)的質粒DNA的體內施用引起了抗這些各個基因產物的免疫應答(Guo等人，2004)。f.編碼抗體的核酸此處提及的核酸可編碼抗體。術語「抗體」用於指具有抗原結合區域的任何抗體樣分子，其包括抗體片段例如Fab′、Fab、F(ab′)2、單結構域抗體(DABs)、Fv、scFv(單鏈Fv)等。用於製備和使用各種基於抗體的構建體和片段的技術在本領域內是熟知的。用於製備和表徵抗體的方法在本領域內也是熟知的。如此處所用的，術語「抗體」廣義上是指任何免疫結合劑例如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。一般地，IgG和/或IgM是優選的，因為其是生理狀況中最普遍的抗體且因為其在實驗室環境中最容易製備。在本發明的某些實施方案中，此處提及的藥物組合物的核酸編碼單鏈抗體。單鏈抗體描述於美國專利4,946,778和5,888,773，其各自在此引用作為參考。g.核酶在本發明的某些實施方案中，此處所示的藥物組合物的核酸編碼或包含核酶。儘管常規地將蛋白用於核酸的催化，但在該嘗試中已開始使用另一類大分子。核酶是以位點專一性的方式切割核酸的RNA-蛋白複合物。核酶擁有特定的具有內切核酸酶活性的催化結構域(Kim和Cook，1987；Gerlach等人，1987；Forster和Symons，1987)。例如，許多核酶以高度的特異性(通常只切割寡核苷酸底物中的幾個磷酸酯中的一個)加速磷酸酯轉移反應(Cook等人，1981；Michel和Westhof，1990；Reinhold-Hurek和Shub，1992)。該特異性歸因於在化學反應之前通過特異性的鹼基配對相互作用將底物結合至核酶的內在引導序列(「IGS」)的要求。核酶催化作用主要作為涉及核酸的序列特異性切割/連接反應的部分被觀察到(Joyce，1989；Cook等人，1981)。例如，美國專利5,354,855報導某些核酶可用作內切核酸酶，該酶具有大於已知的核糖核酸酶的序列特異性和接近DNA限制性內切酶的序列特異性。因此，基因表達的序列特異性核酶介導的抑制可特別適合治療性應用(Scanlon等人，1991；Sarver等人，1990)。近年來，報導了核酶在一些施用核酶的細胞系中引起遺傳改變；被改變的基因包括癌基因H-ras、c-fos和HIV的基因。本工作的大部分涉及靶mRNA的修飾，該修飾基於被特定核酶切割的特定突變密碼子。h.RNAi在本發明的某些實施方案中，此處所示的藥物組合物的治療性核酸是RNAi。RNA幹擾(也稱作「RNA介導的幹擾」或RNAi)是通過其可減少或消除基因表達的機制。已觀察到雙鏈RNA(dsRNA)介導減少，該反應是多步驟過程。dsRNA激活轉錄後基因表達監視機制，該機制表現出保護細胞免受病毒感染和轉座子活性的侵害的功能(Fire等人，1998；Grishok等人，2000；Ketting等人，1999；Lin和Avery等人，1999；Montgomery等人，1998；Sharp和Zamore，2000；Tabara等人，1999)。這些機制的激活將成熟的、dsRNA互補性mRNA靶向破壞。RNAi對於研究基因功能具有很大的實驗優勢。這些優勢包括非常高的特異性、易於運動穿過細胞膜和長時間下調被靶向的基因(Fire等人，1998；Grishok等人，2000；Ketting等人，1999；Lin和Avery等人，1999；Montgomery等人，1998；Sharp等人，1999；Sharp和Zamore，2000；Tabara等人，1999)。此外，已顯示dsRNA在廣泛的系統中沉默基因，所述系統包括植物、原生動物、真菌、美麗線蟲(C.elegans)、錐蟲(Trypanasoma)、果蠅(Drosophila)和哺乳動物(Grishok等人，2000；Sharp等人，1999；Sharp和Zamore，2000；Elbashir等人，2001)。通常認為RNAi在轉錄後起作用，將RNA轉錄物靶向降解。似乎細胞核和細胞質RNA都可被靶向(Bosher和Labouesse，2000)。RNAi領域內的技術人員理解存在其他類型的RNAi，包括但不限於可類似地用於本發明的微RNA(microRNA)。微RNA描述於Du和Zamore，2005，其明確地以其全文在此引用作為參考。已知內切核糖核酸酶Dicer產生兩種類型的調節基因表達的小調控RNA小幹擾RNA(siRNA)和微RNA(miRNAs)(Bernstein等人，2001；Grishok等人，2001；Hutvagner等人，2001；Ketting等人，2001；Knight和Bass，2001)。在動物中，siRNA指導將mRNA靶向斷裂(Elbashir等人，2001)，而miRNA阻止靶mRNA翻譯(Reinhart等人，2000；Brennecke等人，2003；Xu等人，2003)。最近的數據表明siRNA和miRNA都整合入相似的甚至完全相同的蛋白複合物中，且mRNA的破壞和翻譯調控的至關重要的決定子是小RNA和其mRNA靶之間的序列互補性的程度(Hutvagner和Zamore，2002；Mourelatos等人，2002；Zeng等人，2002；Doench等人，2003；Saxena等人，2003)。許多已知的miRNA序列和其在基因組或染色體中的位置可在http://www.sanger.ac.uk/Software/Rfam/mirna/help/summary.shtml中查到。必須這樣設計siRNA以使其在抑制目的基因的表達中是特異性的且是有效的。選擇靶序列(即存在於目的基因中的、被所述siRNA導向降解機制的序列)的方法要避免可幹擾siRNA的導向功能的序列，同時要包含對於所述基因是特異性的序列。一般地長度大約21至23個核苷酸的siRNA靶序列是最有效的。該長度反映由上述長得多的RNA的加工產生的降解產物的長度(Montgomery等人，1998).主要通過直接的化學合成來製備siRNA；通過將更長的雙鏈RNA暴露於果蠅胚胎裂解物以加工所述RNA來製備siRNA；或通過來源於S2細胞的體外系統製備siRNA。使用細胞裂解物或體外加工可進一步包括隨後從裂解物分離短的、21-23個核苷酸siRNA等，這使得該方法有些煩瑣和昂貴。通過製備兩個單鏈RNA寡聚物然後使兩條單鏈寡聚物退火形成雙鏈RNA來進行化學合成。化學合成的方法多種多樣。在美國專利5,889,136、4,415,723和4,458,066(此處明確地引用作為參考)和Wincott等人(1995)中提供了非限定性實例。為改變其穩定性或提高其功效已提出對siRNA序列的幾種其他修飾。有人提出具有二核苷酸突出端的合成的互補21聚體RNA(例如，19個互補的核苷酸+3′非互補二聚體)可提供抑制的最大水平。這些方案主要使用兩個(2′-脫氧)胸腺嘧啶核苷酸作為二核苷酸突出端的序列。這些二核苷酸突出端通常寫作dTdT以將其與整合入RNA的一般核苷酸區分開。文獻已指出dT突出端的使用主要受減少化學合成的RNA的成本的需要驅動。也提出所述dTdT突出端可能比UU突出端更穩定，儘管可獲得的數據顯示與具有UU突出端的siRNA相比，dTdT突變端只有輕微(＜20％)的提高。發現當化學合成的siRNA以25-100nM濃度存在於細胞培養物中時，其工作最佳，但大約100nM的濃度已在哺乳動物細胞中獲得有效的表達抑制。siRNA在哺乳動物細胞培養中以大約100nM的濃度最為有效。然而，在幾種情況下，已使用更低濃度的化學合成的siRNA(Caplen，等人，2000；Elbashir等人，2001)。WO99/32619和WO01/68836提出用於siRNA的RNA可以是化學合成的或酶促合成的。這兩個文件都在此以其全文引用作為參考。這些參考資料中涉及的酶促合成是通過使用和產生本領域內已知的表達構建體，通過細胞RNA聚合酶或噬菌體RNA聚合酶(例如，T3、T7、SP6)進行的。例如，參見美國專利5,795,715。所述構建體提供產生RNA的模板，所述RNA包含與靶基因的部分同一的核苷酸序列。由這些參考資料提供的同一的序列的長度至少為25個鹼基，且長度可多至400或更多個鹼基。該參考資料的重要方面是作者提出用在體內將長dsRNA轉變成siRNA的內源核酸酶複合物將更長的dsRNA降解為21-25聚體的長度。其不描述或提供用於體外合成和使用轉錄的21-25聚體dsRNA的數據。在RNA幹擾的用途中，化學和酶促合成的dsRNA的預期的性質沒有區別。類似地，WO00/44914，在此引用作為參考，提出可酶促或通過部分/總地有機合成產生RNA的單鏈。優選地，從DNA模板(優選地克隆的cDNA模板)的PCRTM產物酶促合成單鏈RNA，所述RNA產物是所述cDNA的模板轉錄物，其可包含數百個核苷酸。WO01/36646(此處引用作為參考)對合成siRNA的方式沒有限制，只要所述RNA可使用人工和/或自動的方法在體外或體內合成。該參考資料也提出，體外合成可以是化學或酶促的，例如使用克隆的RNA聚合酶(例如，T3、T7、SP6)以轉錄內源DNA(或cDNA)模板或兩者的混合物。此外，在用於RNA幹擾的想要的性質上，化學或酶促合成的siRNA之間沒有區別。美國專利5,795,715報導了在單個反應混合物中同時轉錄兩個互補DNA序列，其中所述兩個轉錄物立即雜交。使用的模板優選地在40和100個鹼基對之間，且其在各末端配備啟動子序列。優選地將所述模板附著至固體表面。在用RNA聚合酶轉錄後，所得的dsRNA片段可用於檢測和/或測定核酸靶序列。美國專利申請20050203047報導了通過RNA幹擾調控基因表達的方法，通過將siRNA或miRNA序列整合入轉運RNA(tRNA)編碼序列進行所述RNA幹擾。可將包含siRNA或miRNA序列的tRNA整合入核酸表達構建體，這樣該序列可從表達的tRNA中被剪接出來。可將所述siRNA或miRNA序列置於與未加工的tRNA轉錄物連接的內含子中，或可置於所述tRNA轉錄物的任一末端。i.其他治療性核酸治療性核酸的其他實例包括包含CpG結構域的寡核苷酸(「CpG寡核苷酸」)。已證明細菌DNA在體外具有對外周血單核細胞的直接免疫刺激效應。(Messina等人，1991)。這些效應包括B細胞的增殖和增加的免疫球蛋白Ig的分泌。(Krieg等人，1995)此外，這些效應包括通過激活單核細胞、巨噬細胞和樹突細胞分泌Th1細胞因子(包括IL-12)。(Klinman，等人，1996；Halpern等人，1996；Cowdery等人，1996)所述分泌的Th1細胞因子刺激天然殺傷(NK)細胞分泌γ幹擾素和具有增加的裂解活性。(Klinman等人，1996，同上；Cowdery等人，1996，同上；Yamamoto等人，1992)這些刺激作用通常是未甲基化的CpG二核苷酸在特定序列(CpG-S)中存在的結果(Krieg等人，1995)。通過CpG-S序列進行的B細胞激活是T細胞非依賴性的和抗原非特異性的。然而，CpG-S序列與通過B細胞抗原受體遞送的信號具有很強的協同效應。與B細胞抗原受體的該相互作用不促進抗原特異性免疫應答，表明需要CpG序列作為免疫刺激佐劑。CpG-S序列包含胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸且大小通常在2至100個鹼基對之間。共有CpG-S序列由式5′X1X2CGX3X43′表示，其中X1、X2、X3和X4是核苷酸且GCG三核苷酸序列不存於5′和3′末端或其附近。CpG-S序列的實例包括GACGTT、AGCGTT、AACGCT、GTCGTT和AACGAT。相反地，一些表現為免疫中和的微生物例如腺病毒血清2型包含CpG序列。在這些病毒中，發現大多數CpG序列以成簇的正向重複形式存在或在5′側上具有C或在3′側上具有G。似乎這樣的CpG序列是免疫中和性的(CpG-N)，因為其在體外通過CpG-S序列阻止Th1型免疫激活作用。同樣，當CpG-N和CpG-S序列與抗原一起施用，與單獨使用CpG-S序列的情況相比，抗原特異性免疫應答被減弱。當在體內將單獨的CpG-N序列與抗原一起施用時，Th2樣抗原特異性免疫應答發生。GpG-N序列也包含胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸且在長度上通常為2至100個鹼基對之間。共有CpG-N序列由式5′GCGXnGCG3′表示，其中X是任意核苷酸，n在0-50的範圍內變動。因此，可操作核酸構建體中的核苷酸序列以增加CpG-S序列的數目。也可操作這些構建體以減少CpG-N序列的數目。例如，本領域技術人員可選擇使用定點誘變來產生具有一個或多個CpG基序的想要的核酸序列。可選擇地，可合成特定的CpG序列並將其插入核酸構建體。在美國專利5,889,136、4,415,723和4,458,066(明確地在此引用作為參考)中提供了非限定性實例。美國專利6,194,388和美國專利6,207,646提出，可穩定用於免疫刺激的GpG寡核苷酸以提供對降解的抗性。這兩份資料都以其全文在此引用作為參考。通過磷酸主鏈修飾來進行這些參考資料所描述的穩定方法。優選的穩定的寡核苷酸具有硫代磷酸酯修飾的主鏈。硫代磷酸酯寡核苷酸的藥物動力學在齧齒目動物中顯示48小時的全身性半衰期(Agrawal等人，1991)。可使用自動化技術利用亞磷醯胺或H磷酸化學藥品合成這些硫代磷酸酯。可如美國專利4,469,863中所述製備芳基和烷基磷酸酯；其中帶電荷的氧部分被烷基化的烷基磷酸三酯描述於美國專利5,023,243中，所述參考資料各自明確地在此以其全文引用作為參考。也描述了用於進行DNA主鏈修飾和替代的其他方法(Uhlmann，E.和Peyman，A.，1990，和Goodchild，1990)。美國專利6,206,646報導了，已發現包含未甲基化CpG、具有硫代磷酸酯主鏈的核酸分子優先地激活B細胞的活性，而包含未甲基化CpG、具有磷酸二酯主鏈的核酸分子經發現優先地激活巨噬細胞、樹突細胞、單核細胞和NK細胞。所述修飾優先地在核酸分子的5′和/或3′末端或其附近發生。美國專利6,339,068報導了，可通過除去CpG-N序列改進並通過加入CpG-S序列進一步改進用於免疫刺激的DNA載體。此外，對於高水平和長效水平的表達，最優化的載體應當優選地包含啟動子/增強子，所述啟動子/增強子不被免疫刺激性CpG序列誘導的細胞因子下調。也報導了產生這樣的基於質粒的DNA載體的方法，該載體編碼B型肝炎表面抗原基因。然而，該參考資料顯示為了獲得免疫刺激作用，必須同時或在相同的位置(即在編碼抗原的質粒上)施用CpG-S序列。然而，其未顯示所述修飾必須在抗原序列自身範圍之內。美國專利6,399,068也報導了NFκB是CpG效應的介導者。例如，在用CpG序列處理B細胞或單核細胞的15分鐘內，NFκB結合活性的水平增加，而用未包含這些序列的DNA處理的相同細胞類型顯示變化。所述參考資料也報導了NFκB激活的抑制阻止了通過CpG序列進行的淋巴細胞的刺激。此外，CpGDNA導致快速誘導活性氧簇B細胞和單核細胞的產生，這可通過Royall和Ischiropoulos，1993中描述的靈敏的螢光染料二氫核黃素123檢測。此外報導了在用CpGDNA處理B細胞後產生活性氧簇要求所述DNA在內體中進行酸化步驟。基於使用5′放射性標記的具有或不具有CpG基序的寡核苷酸的電泳遷移率測定法(EMSA)，發現似乎代表對具有CpG序列的單鏈寡核苷酸特異性結合的蛋白的條帶。據報導如果加入包含NFκB結合位點的寡核苷酸，該結合被阻止。本發明的組合物和方法也包括未在此處明確地提及的在疾病或健康相關性狀況的治療或預防中是有益的任何其他核酸。此處所示的治療性核酸還可包含或編碼報告基因的序列。在下面更詳細地描述報告基因的序列。3.診斷性核酸本發明的藥物組合物可包含作為診斷性核酸的核酸。「診斷性核酸」是可用於診斷疾病或健康相關性狀況的核酸。編碼一種或多種報告蛋白的核酸序列也包括在「診斷性核酸」的定義中。「報告蛋白」是指當存在於細胞或組織中時可檢測的和可與存在於細胞中的其他遺傳序列或編碼的多肽區分開的胺基酸序列。在一些實施方案中，治療性基因可融合至報告基因或以分開的蛋白產生。例如，可通過共轉染(共感染)在分開的遞送載體中通過分開的啟動子或通過相同的遞送載體中的分開的啟動子誘導目的基因和報告基因。另外，可通過例如內部核糖體進入位點或雙向啟動子將兩個基因連接至相同的啟動子。使用這些技術，使目的基因和報告基因的表達關聯。因此，人們可精確估計目的基因表達的位置、量和持續時間。目的基因可以是例如抗癌基因例如腫瘤抑制基因或促凋亡基因(pro-apoptoticgene)。因為可用報告基因轉染細胞，因此報告基因可用於跟蹤細胞運輸。例如，在體外，可用報告基因轉染特定的細胞，然後將其返回至動物以估計定位(homing)。在多發性硬化症的實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型中，Costa等人(2001)轉移了經轉導以表達IL-12p40和螢光素酶的髓鞘鹼性蛋白特異性CD4+T細胞。在體內，螢光素酶被用於證明至中樞神經系統的運輸。此外，IL-12p40抑制炎症。在另一個系統中，使用正電子成像術(PET)，Koehne等人(2003)在體內證明了表達單純皰疹病毒-1胸苷激酶(HSV-TK)的EB病毒(EBV)特異性T細胞選擇性地運輸至表達T細胞的限制性HLA等位基因的EBV+腫瘤。此外，這些T細胞保持其消除被靶向的腫瘤的能力。通過使用連續成像，Dubey等人(2003)證明表達HSV-TK的細胞至腫瘤的特異性定位由鼠類肉瘤病毒/莫洛尼鼠類白血病病毒(M-MSV/M-MuLV)誘導。組織特異性啟動子也可用於估量分化，例如幹細胞分化或與肝細胞的融合以及吸收分化的細胞的特徵例如II型肺細胞中的表面活性劑啟動子(surfactantpromoter)的激活。優選地，報告序列編碼通過其存在、其與可檢測部分的結合或通過其導致可檢測的信號產生的活性可容易地被檢測的蛋白。在某些方面，可檢測部分可包括放射性核素、螢光基團、發光基團、微粒、微球、酶、酶底物、多肽、多核苷酸、納米顆粒和/或納米球，所有這些可偶聯至識別報告序列和/或與其相互作用的抗體或配體。在各種實施方案中，本發明的核酸序列包含報告核酸序列或編碼產生可檢測的多肽的產物。報告蛋白能夠直接或間接地產生可檢測信號。一般地，儘管不是必需地，報告基因包括不由細胞產生的核酸序列和/或編碼不由細胞產生的可檢測多肽。已描述了許多報告基因，且一些報告基因可商購獲得用於基因調控的研究(例如，Alam和Cook，1990，其公開內容在此引用作為參考)。可被檢測的信號包括，但不限於顏色、螢光、發光、同位素或放射性同位素信號、細胞表面標記、細胞存活力、細胞營養需求的解除、細胞生長和藥物抗性。報告序列包括，但不限於DNA序列，所述DNA序列編碼β內醯胺酶、β半乳糖苷酶(LacZ)、鹼性磷酸酶、胸苷激酶、綠色螢光蛋白(GFP)、氯黴素乙醯轉移酶(CAT)、螢光素酶，膜結合蛋白，包括，例如，G蛋白偶聯受體(GPCRs)、生長抑素受體、CD2、CD4、CD8、流感病毒血細胞凝集素蛋白(influenzahemagglutininprotein)、共輸送體(例如NIS)和本領域內熟知的其他蛋白(存在或可通過常規的方法產生的針對所述蛋白的高親和力的抗體或配體)和包含恰當地融合至來自(除其他以外)紅細胞凝集素(hemagglutinin)或Myc的抗原標籤結構域的膜結合蛋白的融合蛋白。Kundra等人，2002，演示了使用生物擾動研究和γ射線照相成像在體外和體內非侵入性監控生長抑素受體2型嵌合基因的轉移。在一些實施方案中，報告序列編碼螢光蛋白。可根據本發明使用的螢光蛋白的實例包括綠色螢光蛋白(GFP)、增強的綠色螢光蛋白(EGFP)、RenillaReniformis綠色螢光蛋白、GFPmut2、GFPuv4、增強的黃色螢光蛋白(EYFP)、增強的青色螢光蛋白(ECFP)、增強的藍色螢光蛋白(EBFP)、來源於圓盤擬珊瑚海葵(discosoma)的檸檬色和紅色螢光蛋白(dsRED)。在各種實施方案中，與診斷性核酸的基線轉錄水平相比，至少一種報告序列的表達的想要的水平在報告序列的表達水平中增加、減少或無改變。在特定的實施方案中，與報告序列的基線轉錄水平相比，報告序列中的一個序列的想要的表達水平在報告序列的表達水平中是增加的。在各種實施方案中，報告序列編碼可被獨立地、同時地或獨立地和同時地分析的唯一的可檢測的蛋白。在其他實施方案中，宿主細胞可以是真核細胞或原核細胞。示例性真核細胞包括酵母和哺乳動物細胞。哺乳動物細胞包括展示病理表型的人細胞和各種細胞例如癌細胞。例如，一些報告蛋白在細胞中誘導可容易地在可見光和/或紫外光下觀察到的顏色改變。所述報告蛋白可以是本領域技術人員已知的任何報告蛋白。實例包括gfp、rfp、bfp和螢光素酶。編碼報告蛋白的核酸包括DNA、cRNA、mRNA和編碼各自報告胺基酸序列的活性片段的其亞序列以及包含這些序列的載體。報告蛋白的成像的示例性方法包括γ射線照相成像、CT、MRI、PET、SPECT、光學成像和超聲。在一些實施方案中，診斷性核酸適於使用不止一種方式例如CT和MRI、PET和SPECT等進行成像。在Kumar，2005；Kundra等人，2005；和Kundra等人，2002中列出了與報告蛋白在成像中的實例相關的其他信息，所述參考資料各自在此以其全文引用作為參考。4.反義構建體在此處所示的一些實施方案中，核酸編碼反義構建體。反義方法學利用核酸傾向於與「互補」序列配對的事實。對於互補，其是指多核苷酸是能夠根據標準的Watson-Crick互補法則進行鹼基配對的多核苷酸。即，更大嘌呤將與更小的嘧啶鹼基配對，從而形成鳥嘌呤與胞嘧啶配對的組合(G:C)和在DNA的情況下腺嘌呤與胸腺嘧啶配對的組合(A:T)或在RNA的情況下腺嘌呤與尿嘧啶配對的組合(A:U)。在雜交序列中包含較不常見的鹼基例如次黃嘌呤核苷、5-甲基胞嘧啶、6-甲基腺嘌呤、次黃嘌呤和其他鹼基不幹擾配對。將雙鏈(ds)DNA靶向多核苷酸導致三螺旋的形成；靶向RNA將導致雙螺旋的形成。反義多核苷酸，當被導入靶細胞時，特異性地結合其靶核苷酸且幹擾轉錄、RNA加工、轉運、翻譯和/或穩定性。反義RNA構建體或編碼這些反義RNA的DNA，可在宿主細胞內(體外的宿主細胞或體內的宿主細胞例如宿主動物包括人受試者內的細胞)，例如用於抑制基因轉錄或翻譯或抑制兩者。可設計反義構建體使之結合基因的啟動子和其他控制區域、外顯子、內含子或甚至外顯子-內含子邊界。最有效的反義構建體將包括與內含子/外顯子剪接點互補的區域。因此，提出優選的實施方案包括具有與內含子-外顯子剪接點的50-200個鹼基內的區域互補的反義構建體。已觀察到一些外顯子序列可包含在構建體中而不會嚴重地影響其靶向選擇性。包含的外來材料的量將依賴於所用的特定外顯子和內含子序列而變化。可只通過體外檢測構建體以確定正常的細胞功能是否受影響或具有互補序列的相關基因的表達是否受到影響就能容易地檢測是否包含太多的外顯子DNA。如上面所提到的，「互補」或「反義」是指基本上在其整個長度上互補的多核苷酸序列並且具有非常少的鹼基錯配。例如，當長度為15個鹼基的序列在13或14個位點上具有互補的核苷酸，那麼其可被稱為互補的。天然地，完全互補的序列是在其整個長度上完全互補的且不具有鹼基錯配的序列。也涉及具有較低程度的同源性的其他序列。例如，可設計具有有限的高同源性區域，同時也包含非同源區域的反義構建體(例如，核酶；參見下面)。這些分子，儘管具有低於50％的同源性，可在適當的條件下結合靶序列。將基因組DNA的部分與cDNA或合成的序列組合以產生特定的結構可以是有利的。例如，當在最終的構建體中想要內含子時，需要使用基因組克隆。cDNA或合成的多核苷酸可為構建體的其餘部分提供更方便的限制性位點，從而可用於序列的其他部分。B.表達盒1.概述在本發明的某些實施方案中，此處提及的藥物組合物和方法涉及治療性核酸或診斷性核酸，其中所述核酸包含在「表達盒」中。在整個本說明書中，術語「表達盒」包括任何類型的包含編碼基因產物的核酸的基因構建體，在所述構建體中，所述核酸編碼序列的部分或全部能夠被轉錄。2.啟動子和增強子為了使表達盒實現轉錄物的表達，編碼診斷性基因或治療性基因的核酸在啟動子的轉錄控制之下。「啟動子」是控制序列，該序列是控制轉錄的起始和速率的核酸序列區域。其可包含調控蛋白和分子例如RNA聚合酶和其他轉錄因子可結合的基因元件。術語「有效地置於」、「有效地連接」、「在......控制下」和「在轉錄控制下」是指啟動子相對於核酸序列處於正確的功能性位置和/或方向，從而控制該序列的轉錄起始和/或表達。啟動子可以與或可以不與「增強子」一起使用，所述增強子是指參與核酸序列的轉錄激活的順式作用調控序列。本領域技術人員已知的在受試者的任何細胞中具有活性的任何啟動子被認為是可用於本發明的方法和組合物中的啟動子。如其他地方所描述的，受試者可以是任何受試者，包括人和其他哺乳動物，例如小鼠或實驗室動物。本領域技術人員熟悉可用於本方法和組合物的許多種類的啟動子。在某些實施方案中，例如，所述啟動子是組成型啟動子、誘導型啟動子或阻抑型啟動子。啟動子也可以是組織選擇性啟動子。此處定義的組織選擇性啟動子是指與其他組織類型相比在某些組織類型中相對更具活性的任何啟動子。因此，例如，肝特異性啟動子可以是與身體中的其他組織相比在肝中更具活性的啟動子。一種類型的組織選擇性啟動子是腫瘤選擇性啟動子。此處定義的腫瘤選擇性啟動子是指與其他組織類型相比在腫瘤組織中更具活性的啟動子。可能在其他組織類型中存在一些功能，但與其他組織類型相比，所述啟動子在腫瘤組織中相對更具活性。腫瘤選擇性啟動子的實例包括hTERT啟動子、CEA啟動子、PSA啟動子、probasin啟動子、ARR2PB啟動子和AFP啟動子。啟動子可以是在特定的靶細胞具有活性的啟動子。例如，當靶細胞是角質形成細胞時，啟動子是在角質形成細胞中具有活性的啟動子。類似的，當細胞是上皮細胞、皮膚細胞、黏膜細胞或可通過乳頭瘤病毒進行轉化的任何其他細胞時，用於所述實施方案的啟動子是在該特定的細胞類型中具有活性的啟動子。啟動子可以是天然地與基因或序列結合的啟動子，這可通過分離位於編碼區段和/或外顯子的上遊的5』非編碼序列獲得。這樣的啟動子可被稱為「內源的」。類似地，增強子可以是天然地與核酸序列結合、位於該序列的下遊或上遊的增強子。可選擇地，可通過將編碼核酸區段置於重組的或異源的啟動子的控制之下獲得某些有利方面，所述啟動子是指通常不與其天然環境中的核酸結合的啟動子。重組增強子或異源增強子也指通常不與其天然環境中的核酸序列結合的增強子。這些啟動子或增強子可包括其他基因的啟動子或增強子和從任何其他原核細胞、病毒或真核細胞分離的啟動子或增強子以及非「天然發生的」即包含不同轉錄調控區域的不同元件和/或改變表達的突變的啟動子或增強子。除了通過合成產生啟動子和增強子的核酸序列外，還可使用重組克隆和/或核酸擴增技術(包括PCRTM)產生與此處公開的組合物相關的序列(參見美國專利4,683,202和美國專利5,928,906，各自在此引用作為參考)。此外，也可使用在非細胞核細胞器例如線粒體等內指導序列的轉錄和/或表達的控制序列。自然地，使用有效地指導DNA片段在選擇用於表達的細胞類型、細胞器和生物體中表達的啟動子和/或增強子是非常重要的。分子生物學領域內的技術人員一般知道用於蛋白表達的啟動子、增強子和細胞類型組合，例如，參見Sambrook等人(2001)，在此引用作為參考。使用的啟動子可以是組成型、組織特異性、誘導型和/或在合適的條件下使用以指導導入的DNA片段的高水平表達的啟動子，例如在重組蛋白和/或肽的大規模生產中是有利的。啟動子可以是異源的或內源的。用於控制目的核酸的表達的特定啟動子據認為不是至關重要的，只要其能夠在被靶向的細胞中以足夠的水平表達多核苷酸。因此，當人細胞被靶向時，優選地將多核苷酸編碼區緊鄰能夠在人細胞中表達的啟動子並在其控制之下。一般說來，這樣的啟動子包括人或病毒的啟動子。在各種實施方案中，可使用人巨細胞病毒(CMV)立即早期基因啟動子、SV40早期啟動子和勞斯肉瘤病毒長末端重複。也涉及本領域內熟和的獲得多核苷酸的表達的其他病毒或哺乳動物細胞或細菌噬菌體啟動子的用途，只要所述表達水平足以產生生長抑制效果。通過使用具有熟知的特性的啟動子，可最優化轉染後多核苷酸的表達水平和模式。例如，在特定的細胞中具有活性的啟動子的選擇，例如酪氨酸(黑色素瘤)、甲胎蛋白和白蛋白(肝腫瘤)、CC10(肺腫瘤)和前列腺特異性抗原(前列腺腫瘤)啟動子將允許此處所示的治療性核酸的組織特異性表達。表2列出了可在本發明的背景中用於調節抗癌基因的表達的啟動子/元件的其他實例。該列表未窮舉所有可能的啟動子和增強子元件，但只是作為其的示例。增強子最初作為增加從位於相同的DNA分子的遠距離位點上的啟動子的轉錄的基因元件被發現的。在較大距離上發揮作用的該能力在原核轉錄調控的經典研究中具有極少的先例。隨後的工作顯示具有增強子活性的DNA區域組織得非常象啟動子。即，其由許多單個的元件組成，各個元件結合至一個或多個轉錄蛋白。增強子與啟動子之間的基本區別是可操作性。增強子區域作為整體必須能夠以一定距離刺激轉錄；啟動子區域或其組成元件則不一定要這樣。在另一方面，啟動子必須具有一個或多個在特定的位點和以特定的方向指導RNA合成起始的元件，而增強子缺少這些特異性。啟動子和增強子常常交疊和相鄰，通常似乎具有非常相似的模塊組織。此外，任何啟動子/增強子組合(按照真核啟動子資料庫EPDB)也可用於驅動診斷或治療性基因的表達。T3、T7或SP6細胞質表達系統是另一個可能的實施方案。真核細胞可支持來自某些噬菌體啟動子的細胞質轉錄，如果作為遞送複合物的部分或作為另外的表達載體提供合適的噬菌體聚合酶。響應特定的生理信號而被調節的啟動子的其他選擇可允許構建體的誘導型表達。例如，將多核苷酸置於人PAI-1啟動子的控制之下，可通過腫瘤壞死因子誘導表達。表3提供了誘導型元件的實例，所述元件是可響應特定的刺激而被激活的核酸序列的區域。3.報告基因在本發明的某些實施方案中，可通過將報告基因包含在表達載體中在體外或體內鑑定表達盒的遞送。所述報告基因將對轉染的細胞產生可鑑定的改變，從而允許容易地鑑定表達。通常藥物標記有助於轉化子的克隆和選擇。可選擇地，可使用酶例如β-半乳糖苷酶(β-gal)單純皰疹病毒胸苷激酶(tk)(真核生物)或氯黴素乙醯轉移酶(CAT)(原核生物)。也涉及螢光和化學發光標記。也可使用免疫學標記。所使用的可選擇報告基因據認為不是非常重要的，只要其能夠和治療性核酸一起表達。可選擇報告基因的其他實例對於本領域技術人員來說是熟知的。4.起始信號為了編碼序列的有效翻譯也可能需要特定的起始信號。這些信號包括ATG起始密碼子或相鄰的序列。可能需要提供外源翻譯控制信號，包括ATG起始密碼子。本領域技術人員可容易地確定該信號且提供必需的信號。眾所周知，起始密碼子必須與想要的編碼序列的讀框「符合讀框」以確保整個插入物的翻譯。外源翻譯控制信號和起始密碼子可以是天然的或合成的。可通過包含合適的轉錄增強子元件來增強表達的功效。5.IRES在本發明的某些實施方案中，內部核糖體進入位點(IRES)元件用於建立多基因或多順反子信使RNA。IRES元件能夠繞過5』甲基化帽依賴性翻譯的核糖體掃描模式並在內部位點開始翻譯(Pelletier和Sonenberg，1988)。已描述了來自小RNA病毒科的兩個成員(脊髓灰質炎和腦心肌)的IRES(Pelletier和Sonenberg，1988)和來自哺乳動物信使RNA的IRES(Macejak和Sarnow，1991)。可將IRES元件連接至異源可讀框。可一起轉錄多個可讀框，各可讀框被IRES分隔，產生了多順反子信使RNA。依靠IRES元件，核糖體可接近各可讀框進行有效翻譯。可使用單個啟動子/增強子轉錄單個信使RNA來有效地表達多個基因(參見美國專利5,925,565和5,935,819)。本領域技術人員熟悉IRES在基因治療中的應用。6.多克隆位點表達盒可包含多克隆位點(MCS)，所述多克隆位點是包含多個限制性酶切位點的核酸區域，所述位點的任一位點可與標準的重組技術一起使用以降解載體。參見Carbonelli等人(1999)；Levenson等人(1998)；Cocea(1997)。「限制性酶降解」是指用只在核酸分子的特定位置起作用的酶對核酸分子進行的催化切割。許多這些限制性酶是可商購獲得的。本領域技術人員廣泛地理解這些酶的用途。經常地，使用限制性內切酶線性化或片段化載體，所述酶在MCS內進行切割以使外源序列能夠被連接至所述載體。「連接」是指在兩個核酸片段之間形成磷酸二酯鍵的過程，所述兩個核酸片段互相之間可以連續或不連續。涉及限制性內切酶和連接反應的技術對重組技術學領域內的技術人員來說是熟知的。大部分轉錄的真核生物RNA分子將進行RNA剪接以從原始轉錄物中除去內含子。包含基因組真核生物序列的載體可能需要供體和/或受體剪接位點以確保用於蛋白表達的轉錄物的正確加工(參見Chandler等人，1997)。7.多腺苷酸化信號在表達中，通常包括多腺苷酸化信號以進行轉錄物的正確多腺苷酸化。多腺苷酸化信號的本質據信對於本發明的成功實踐不是至關重要的，和/或可使用任何這樣的序列。優選的實施方案包括在各種靶細胞中方便的和/或已知良好地發揮功能的SV40多腺苷酸化信號和/或牛生長激素多腺苷酸信號。也被當作表達盒的元件是轉錄終止位點。這些元件可用於增強信使RNA的水平和/或使從表達盒進入其他序列的通讀減少至最小。8.其他表達盒組件在本發明的某些實施方案中，表達盒包含病毒或來源於病毒基因組的經基因工程改造的構建體。某些病毒通過受體介導的內吞作用進入細胞和在某些情況下整合入宿主細胞染色體的能力已使其成為用於將基因轉移入哺乳動物細胞的具有吸收力的候選者。然而，因為已證明裸露DNA的直接吸收以及DNA複合物的受體介導的吸收，表達載體可以不是病毒，相反地，可以是能夠支持編碼的基因在哺乳動物細胞表達的任何質粒、粘粒或噬菌體構建體例如pUC或BluescriptTM質粒系列。為了在宿主細胞中擴增載體，其可包含一個或多個複製起始位點(通常稱「ori」)，其是在其上起始複製的特定核酸序列。可選擇地，如果宿主細胞是酵母，則可使用自主複製序列(ARS)。在本發明的某些實施方案中，可通過將報告基因包含在表達載體中在體外或體內鑑定受處理的細胞。這些報告基因給細胞提供可鑑定的變化，從而允許容易地鑑定包含表達載體的細胞。一般地，可選擇的報告基因是提供允許進行選擇的特性的基因。陽性的可選擇報告基因是其中所述報告基因的存在允許其的選擇的基因，而陰性可選擇報告基因是其中其存在阻止其選擇的基因。陽性可選擇標記的實例是藥物抗性標記。通常包含藥物選擇標記有助於轉化子的克隆和鑑定，例如提供對新黴素、嘌呤黴素、潮黴素、DHFR、GPT、zeocin和組氨醇的抗性的基因是有用的選擇標記。除了提供表型的標記(所述表型允許基於互補的條件分辨轉化子)外，也可使用其他類型的報告蛋白，包括可篩選的報告蛋白例如GFP或螢光素酶。可選擇地，可使用可篩選的酶例如單純皰疹病毒胸苷激酶(tk)或氯黴素乙醯轉移酶(CAT)。本領域技術人員也已知使用免疫報告基因(可能與FACS分析結合使用)的方法。使用的標記據認為不是非常重要的，只要其能夠與編碼基因產物的核酸同時表達。可選擇和可篩選的報告基因的其他實例對於本領域技術人員是熟知的。在本發明的某些實施方案中，可將報告基因有效地連接至組織特異性啟動子以使報告基因產物例如GFP只在想要的組織類型的細胞中表達。例如，可將gfp報告基因有效地連接至複製選擇性腺病毒載體內的hTERT啟動子，從而通過端粒酶特異性GFP表達檢測過度增生性病變(Umeoka等人，2004.)。C.病毒載體病毒載體是可將遺傳物質從一個位置轉移至另一個位置例如從使用的位點至目的靶細胞的病毒。在本發明的某些實施方案中，此處所示的組合物的核酸是「裸露」的核酸序列，該核酸序列不包含在病毒載體或遞送試劑例如脂質或脂質體中。然而在本發明的其他實施方案中，所述核酸包含在病毒載體中。本領域技術人員熟悉可獲得的用作用於將基因遞送至目的靶細胞的載體的各種類型的病毒。這些病毒的每一種在本發明中用作載體。在下面描述示例性載體。1.病毒載體「病毒載體」包括包含病毒序列的構建體，所述序列足以(a)支持包含治療性核酸序列的表達盒的包裝和(b)足以最終表達已被克隆在其中的重組基因構建體。a.腺病毒載體本發明的藥物組合物和方法可涉及包含在腺病毒載體中的治療性核酸的表達構建體，所述腺病毒載體用於遞送所述核酸。儘管已知腺病毒載體具有低的整合入基因組DNA的能力，但該特徵被由這些載體提供的基因轉移的高效率彌補。腺病毒是目前在臨床情況中最常使用的用於基因轉移的載體。這些病毒的有利方面是其在將基因遞送至不分裂和分裂的細胞中都是有效的且可大量產生。在針對癌症的許多臨床試驗中，局部瘤內注射已用於將載體導入疾病的位點，因為目前的載體不具有用於優先遞送至腫瘤的機制。體內實驗已證明腺病毒載體的施用全身性地導致口腔黏膜中的表達(Clayman等人，1995)。Ad-βgal和Ad-p53-FLAG在organotypicraftculture上的局部施用已證明通過多層細胞層的有效的基因轉導和深入的細胞層穿透作用(Eicher等人，1996)。因此，使用腺病毒載體的基因轉移策略在處於涉及p53的基因改變的病變和惡性腫瘤風險中的患者中是潛在可行的。所述載體包括腺病毒的基因工程改造形式。基因組織或腺病毒的知識(腺病毒為36kb，線性雙鏈DNA病毒)允許用多至7kb的外源序列取代大片段的腺病毒DNA(Grunhaus和Horwitz，1992)。與逆轉錄病毒相反，宿主細胞的腺病毒感染不導致染色體整合，因為腺病毒可以附加體的方式複製腺病毒DNA而無潛在的遺傳毒性。同樣，腺病毒是結構穩定的，且在大量擴增後未檢測到基因組重排。因為其中等大小的基因組、易操作、高滴度、廣泛的靶細胞範圍和高感染性，腺病毒特別適合用作基因轉移載體。病毒基因組的兩個末端都包含100-200個鹼基對的反向重複序列(ITRs)，該序列是病毒DNA複製和包裝所必需的順式元件。基因組的早期(E)和晚期(L)區域包含被病毒DNA的複製分開的不同的轉錄單位。E1區域(E1A和E1B)編碼負責病毒基因和少數細胞基因的轉錄調控的蛋白。E2區域(E2A和E2B)的表達導致用於病毒DNA複製的蛋白的合成。這些蛋白參與DNA複製、晚期基因表達和宿主細胞關閉(shut-off)(Renan，1990)。晚期基因的產物，包括大多數病毒衣殼蛋白，只在由主要晚期啟動子(MLP)產生的單個原始轉錄物的有效加工後表達。MLP(位於16.8m.u.)在感染的晚期階段是特別有效的，且由該啟動子產生的所有mRNA都具有5′-三聯前導序列(TPL)，該序列使其成為優選的用於翻譯的mRNA。在目前的系統中，從穿梭載體和前病毒載體之間的同源重組產生重組腺病毒。由於兩種前病毒載體之間的可能的重組的原因，可從該過程產生野生型腺病毒。因此，從單個斑中分離病毒的單個克隆和檢查其基因組結構是至關重要的。目前的腺病毒載體(其為複製缺陷型)的產生和繁殖依賴於稱為293的獨特的輔助細胞系，該細胞系使用Ad5DNA片段從人胚腎細胞轉化而來並組成型表達E1蛋白(Graham等人，1977)。因為E3區域對於腺病毒基因是不重要的(Jones和Shenk，1978)，因此目前的腺病毒載體，在293細胞的幫助下，在E1、D3或兩個區域上都攜帶外源DNA(Graham和Prevec，1991)。在自然界中，腺病毒可包裝大約105％的野生型基因組(Ghosh-Choudhury等人，1987)，提供了大約2kb額外的DNA的容量。與大約5.5kb的在E1和E3區域中可替換的DNA組合，現有腺病毒載體的最大容量在7.5kb之下，或大約為載體的總長度的15％。超過80％的腺病毒基因組保留在載體主鏈中。輔助細胞系可來源於人細胞例如人胚腎細胞、肌細胞、造血細胞或其他人胚間充質細胞或上皮細胞。可選擇地，輔助細胞可來源於允許人腺病毒的其他哺乳動物種類的細胞。這些細胞包括，例如，Vero細胞或其他猴胚間充質細胞或上皮細胞。如上所述，優選的輔助細胞系是293。Racher等人(1995)已公開了用於培養293細胞和繁殖腺病毒的改進的方法。在一種形式中，通過將單個細胞接種入1升裝有100-200ml培養基的矽化處理的旋轉培養瓶(Techne，Cambridge，UK)中來培養天然的細胞團塊。在40rpm下進行攪拌後，用臺盼藍評估細胞的存活力。在另一種形式中，如下使用Fibra-Cel微載體(BibbySterlin，Stone，UK)(5g/l)。向250mlErlenmeyer燒瓶中的載體(50ml)中加入重懸浮於5ml培養基中的細胞接種物，然後靜置，偶爾攪拌，進行1至4小時。然後用50ml新配製的培養基替換培養基，然後開始振蕩。對於病毒生產，允許細胞生長至大約80％的匯合，此後替換培養基(至25％的終體積)，加入MOI為0.05的腺病毒。將培養物靜置過夜，之後將體積增加至100％並開始振蕩，再進行72小時。所述腺病毒載體可以是複製缺陷型，或至少是條件缺陷型，腺病毒載體的性質據認為對於本發明的成功實踐不是至關重要的。腺病毒可以是已知的42種不同的血清型或亞群A-F中的任一種。為獲得用於本發明的條件複製缺陷型腺病毒載體，亞群C的腺病毒5型是優選的起始材料。這是因為腺病毒5型是人腺病毒，關於該病毒的大量生物化學和遺傳學信息都是已知的，且其歷史上一直用於大多數使用腺病毒作為載體的構建體。如上所述，本發明的一般載體是複製缺陷型且不具有腺病毒E1區域。因此，在已從其除去E1編碼序列的位置上導入轉化構建體是最方便的。然而，腺病毒序列內構建體插入的位置對於本發明不是至關重要的。也可將編碼目的基因的多核苷酸插入如由Karlsson等人(1986)描述的E3置換型載體的缺失的E3區域位置，或其中輔助細胞系或輔助病毒能互補E4缺陷的E4區域中。腺病毒的生長和操作對於本領域技術人員來說是已知的，且其在體外和體內展示廣譜宿主性。可以高滴度例如每ml109-1011個空斑形成單位獲得該病毒群，且其具有高感染性。腺病毒的生活周期不需要整合入宿主細胞基因組。通過腺病毒載體遞送的外源基因是附加體，因此具有低的對宿主細胞的遺傳毒性。在使用野生型腺病毒的免疫研究(Couch等人，1963；Top等人，1971)中未曾報導過副作用，這證明其作為體內基因轉移載體的安全性和治療潛能。腺病毒載體已被用於真核生物基因表達(Levrero等人，1991；Gomez-Foix等人，1992)和疫苗開發(Grunhaus和Horwitz，1992；Graham和Prevec，1992)。動物研究已表明重組腺病毒可用於基因治療(Stratford-Perricaudet和Perricaudet，1991；Stratford-Perricaudet等人，1990；Rich等人，1993)。給不同的組織施用腺病毒的研究包括導管滴注法(tracheainstillation)(Rosenfeld等人，1991；Rosenfeld等人，1992)、肌肉注射(Ragot等人，1993)、外周靜脈內注射(Herz和Gerard，1993)以及立體定向接種(stereotacticinoculation)入大腦(LeGalLaSalle等人，1993)。b.逆轉錄病毒載體逆轉錄病毒是單鏈RNA病毒，其特徵在於其通過逆轉錄過程在感染的細胞中將其RNA轉變成雙鏈DNA的能力(Coffin，1990)。然後將所得的DNA作為前病毒穩定地整合入細胞染色體並指導病毒蛋白的合成。所述整合導致病毒基因序列保留在受體細胞和其後代中。逆轉錄病毒基因組包含分別編碼衣殼蛋白、聚合酶和被膜組分的三個基因gag、pol和env。在gag基因上遊發現的序列包含用於將基因組包裝入病毒體的信號。兩個長末端重複(LTR)序列存在於病毒基因組的5′和3′末端。這些序列包含強啟動子和增強子序列且也是整合入宿主細胞基因組所必需的(Coffin，1990)。為了構建逆轉錄病毒載體，將編碼目的基因的核酸插入病毒的基因組以取代某些病毒的序列，從而產生複製缺陷型病毒。為了產生病毒體，可構建包含gag、pol和env基因但不包含LTR和包裝組分的包裝細胞系(Mann等人，1983)。當將包含cDNA的重組質粒和逆轉錄病毒LTR和包裝序列一起導入(例如通過磷酸鈣沉澱法)該細胞系時，所述包裝序列允許重組質粒的RNA轉錄物被包裝入病毒顆粒，然後所述病毒顆粒被分泌入培養基中(Nicolas和Rubenstein，1988；Temin，1986；Mann等人，1983)。然後收集包含重組逆轉錄病毒的培養基，任選地對其進行濃縮，然後用於基因轉移。逆轉錄病毒載體能夠感染許多細胞類型。然而，整合和穩定的表達需要宿主細胞的分裂(Paskind等人，1975)。對缺陷型逆轉錄病毒的用途的擔憂是野生型可複製病毒在包裝細胞中的潛在出現。這可由重組事件產生，在所述重組事件中，來自重組病毒的完整序列插入來自整合入宿主細胞基因組中的gag、pol、env序列的上遊。然而，能夠極大地減少重組可能性的包裝細胞系是可獲得的(Markowitz等人，1988；Hersdorffer等人，1990)。c.AAV載體腺伴隨病毒(AAV)是吸引人的用於本發明的載體系統，因為其具有高整合頻率且其可感染不分裂細胞，從而使其能夠在組織培養中用於將基因遞送入哺乳動物細胞(Muzyczka，1992)。AAV在傳染性方面具有廣譜宿主性(Tratschin等人，1984；Laughlin等人，1986；Lebkowski等人，1988；McLaughlin等人，1988)，這意味著其可用於本發明。關於rAAV載體的產生和用途的詳細內容描述於美國專利5,139,941和美國專利4,797,368，各自在此引用作為參考。顯示AAV在基因遞送中的用途的研究包括LaFace等人(1988)；Zhou等人(1993)；Flotte等人(1993)；和Walsh等人(1994)。重組AAV載體已成功地用於標記基因(Kaplitt等人，1994；Lebkowski等人，1988；Samulski等人，1989；Shelling和Smith，1994；Yoder等人，1994；Zhou等人，1994；Hermonat和Muzyczka，1984；Tratschin等人，1985；McLaughlin等人，1988)和參與人疾病的基因(Flotte等人，1992；Ohi等人，1990；Walsh等人，1994；Wei等人，1994)的體外和體內轉導。最近，已批准AAV載體用於進行囊性纖維化的治療的I期人試驗。AAV是依賴性的細小病毒，因為其要求與另一種病毒(腺病毒或皰疹病毒科的成員)一起同時感染以在培養的細胞中進行有效感染(Muzyczka，1992)。在缺少與輔助細胞的同時感染的情況下，野生型AAV基因組通過其末端整合入人第19號染色體，在該染色體上其作為前病毒以潛伏狀態存在(Kotin等人，1990；Samulski等人，1991)。然而，除非也表達AAVRep蛋白(Shelling和Smith，1994)，否則rAAV不限於在染色體19上進行整合。當用輔助細胞超感染具有AAV前病毒的細胞時，AAV基因組被從染色體上或從重組質粒上「解救」出來，並建立正常的有效感染(Samulski等人，1989；McLaughlin等人，1988；Kotin等人，1990；Muzyczka，1992)。一般地，通過共轉染包含側翼連接兩個AAV末端重複的目的基因的質粒(McLaughlin等人，1988；Samulski等人，1989；各自在此引用作為參考)和包含無末端重複的野生型AAV編碼序列的質粒例如pIM45(McCarty等人，1991；在此引用作為參考)來產生重組AAV(rAAV)病毒。也用攜帶AAV輔助功能所需的腺病毒基因的腺病毒或質粒感染或轉染細胞。用腺病毒汙染以該方式產生的rAAV病毒貯液，所述腺病毒在物理上必須與所述rAAV顆粒分開(例如，通過氯化銫密度離心)。可選擇地，可使用包含AAV編碼區的腺病毒載體或包含AAV編碼區和腺病毒輔助者基因中的一些或所有基因的細胞系(Yang等人，1994；Clark等人，1995)。也可使用具有以前病毒的方式整合的rAAVDNA的細胞系(Flotte和Carter，1995).d.皰疹病毒載體單純皰疹病毒(HSV)因為其對於神經細胞的向性的原因而在治療神經系統病症中產生極大的吸引力，但由於其具有廣泛的宿主範圍，該載體也可被開發用於其他組織。使HSV成為具有吸引力的載體的另一個因素是其基因組的大小和組織。因為HSV很大，所以多個基因或表達盒的整合沒有其他更小的病毒系統中的問題多。此外，具有不同的表現(短暫的、強度等)的不同病毒控制序列的可獲得性使得其可能比在其他系統中更大限度地控制表達。病毒具有相對少的剪接信息，從而進一步使得基因操作簡易也是有利方面。HSV也相對容易操作且可被培養至高滴度。因此，在獲得足夠的MOI所需的體積方面以及在減少的對重複劑量給藥的需要方面遞送都不太成問題。關於HSV作為基因治療載體的綜述，參見Glorioso等人(1995)。HSV(指明為亞型1和2)是有包膜病毒，所述病毒是人類遇到的最常見的感染劑，其感染世界範圍內數百萬的人受試者。大的複雜的雙鏈DNA基因組編碼許多不同的基因產物，其中一些來源於剪接的轉錄物。除了病毒體和被膜結構組分外，所述病毒編碼許多其他蛋白，包括蛋白酶、核糖核苷酸還原酶、DNA聚合酶、ssDNA結合蛋白、解旋酶/引發酶、DNA依賴性ATP酶、dUTPase和其他酶。HSV基因形成幾個組群，所述組群的表達受到協同調節和以級聯方式按順序相繼地進行(Honess和Roizman，1974；Honess和Roizman1975)。通過病毒粒子蛋白第16號或α-反式誘導因子感染後表達的第一套基因α基因的表達(Post等人，1981；Batterson和Roizman，1983)。β基因的表達需要功能性α基因的產物，最著名的是ICP4，其由α4基因編碼(DeLuca等人，1985)。γ基因，主要編碼病毒體結構蛋白的異源基因組，為了最佳表達需要病毒DNA合成的起始(Holland等人，1980)。與基因組的複雜性相符，HSV的生活周期相當複雜。除了裂解周期(該周期導致病毒顆粒的合成和最終細胞的死亡)外，該病毒還具有進入潛伏狀態的能力，在該狀態中基因組保留在神經節直至一些至今仍未確定的信號觸發裂解周期再發生。已發展了HSV的無毒性變體且可容易地獲得所述變體以用於基因治療背景(美國專利5，672，344)。e.痘苗病毒載體痘苗病毒載體因其構建容易、獲得相對高水平的表達、廣泛的宿主範圍和攜帶DNA的大容量而一直被廣泛使用。痘苗病毒包含大約186kb的線性雙鏈DNA基因組，所述基因組表現明顯的「A-T」偏愛性。大約10.5kb的末端反向重複序列側翼連接該基因組。中心區域內存在大部分必需基因，所述區域在痘苗病毒中是最高度保守的。據估計痘苗病毒中的可讀框數目在150至200個之間。儘管兩條鏈都編碼，但可讀框的廣泛交疊卻不常見。痘苗病毒基因組至少可插入25kb(Smith和Moss，1983)。原型痘苗載體包含通過同源重組插入病毒胸苷激酶基因的轉基因。基於tk-表型選擇載體。由於包含了腦心肌炎病毒的非翻譯前導序列，所以表達的水平比常規載體的水平高，在24小時內轉基因積累了10％或更多的被感染細胞的蛋白(Elroy-Stein等人，1989)。f.溶瘤病毒載體溶瘤病毒也用作本發明中的載體。此處定義的溶瘤病毒通常是指殺死腫瘤或癌細胞的頻率高於其殺死正常細胞的頻率的病毒。示例性溶瘤病毒包括過度表達ADP的腺病毒。在美國專利申請公開號20040213764、美國專利申請公開號20020028785和美國專利申請系列號09/351,778中詳細描述了這些病毒，所述參考資料各自明確地以其全文在本申請的該部分和本申請的所有其他部分引用作為參考。示例性溶瘤病毒在本說明書的其他部分進行描述。本領域技術人員熟悉可用於本發明的藥物組合物和方法的其他溶瘤病毒。g.其他病毒載體可在本發明中用作載體的其他病毒載體包括可用於疫苗或複合疫苗(dualvaccine)以及免疫治療應用的病毒載體。病毒載體和用於使用病毒載體的接種和免疫治療的技術更詳細地描述於PCT申請WO0333029、WO0208436、WO0231168和WO0285287，其各自明確地以其全文在本申請的該部分和本申請的所有其他部分引用作為參考。可用於在接種和複合免疫治療/接種的技術中使用的其他載體包括上面所示的溶瘤病毒。其他病毒載體也包括杆狀病毒載體、微小病毒載體、小RNA病毒載體、α病毒載體、塞姆利基森林病毒載體、辛德比斯病毒載體、慢病毒和逆轉錄病毒載體。可使用來源於病毒例如痘病毒的載體。委內瑞拉馬腦炎(VEE)病毒的分子克隆株系已通過基因工程改造為用於異源病毒蛋白表達的具有複製能力的疫苗載體(Davis等人，1996)。研究已證明VEE感染刺激有效的CTL反應並且表明VEE可以是用於免疫接種的非常有用的載體(Caley等人，1997)。在本發明中，VEE病毒可用於靶向樹突細胞。根據對缺陷型B型肝炎病毒的最新認識，對不同病毒序列的結構功能相互關係獲得了新的認識。體外研究顯示儘管多至80％的其基因組缺失，但病毒可保留輔助細胞依賴性包裝和逆轉錄的能力(Horwich等人，1990)。這暗示著大部分的基因組可用外源遺傳物質置換。Chang等人最近將氯黴素乙醯轉移酶(CAT)基因導入鴨B型肝炎病毒基因組以替代聚合酶、表面和前表面(pre-surface)編碼序列。將其與野生型病毒一起共轉染入禽類肝癌細胞系。將包含高滴度的重組病毒的培養基用於感染原代小鴨肝細胞。在轉染後檢測到穩定的CAT基因表達至少維持24天(Chang等人，1991)。用於本發明的組合物和方法中的其他病毒載體包括Tang等人，2004提及的載體，對於本申請的該部分和本申請的所有其他部分，所述文獻明確地在此以其全文引用作為參考。i.使用經修飾的病毒進行的基因遞送可將診斷性或治療性核酸插入已經基因工程改造從而表達特定結合配體的病毒載體內。因而所述病毒顆粒可特異性地結合靶細胞的相關受體並將內容物遞送至所述細胞。基於逆轉錄病毒的化學修飾發展了經設計允許逆轉錄病毒的特異性靶向的新方法，所述化學修飾通過以化學方法向病毒包膜加入乳糖殘基來進行。該修飾可允許通過唾液酸糖蛋白受體進行的肝細胞的特異性感染。設計用於重組逆轉錄病毒的靶向的另一個方法，在所述方法中使用生物素化的抗逆轉錄病毒包膜蛋白和抗特異性細胞受體的抗體。使用鏈黴抗生物素通過生物素組分偶聯抗體(Roux等人，1989)。通過使用抗主要組織相容性複合物I類和II類抗原的抗體，其證明親嗜性病毒在體外感染多種人細胞，所述細胞具有那些表面抗原(Roux等人，1989)。D.遞送劑在本發明的某些實施方案中，編碼胺基酸序列的核酸還可包含遞送劑。此處定義的遞送劑是指除了病毒載體以外幫助遞送核酸至目的靶細胞的任何試劑或物質。示例性遞送劑包括脂質和脂質製劑(包括脂質體)。在某些實施方案中，脂質包含在納米顆粒中。納米顆粒此處定義為亞微米顆粒(submicronparticle)。例如，納米顆粒可具有大約1至大約500納米的直徑。所述顆粒可由任何物質或化合物組成。在本發明中，例如，「納米顆粒」可包含具有大約1至大約500納米的直徑的某些脂質體。本領域技術人員熟悉使用脂質體或脂質製劑捕獲核酸序列的用途。脂質體是特徵在於磷脂雙層膜和內部水性介質的泡狀結構。多層脂質體具有多個由水性介質分開的脂層。當磷脂懸浮在過量的水溶液中時其自發地形成。在封閉的結構形成之前脂質組分進行自我重排並將水和溶解的溶質包含在脂雙層之間(Ghosh和Bachhawat，1991)。脂質介導的核酸遞送和外源DNA在體外的表達已經非常成功(Nicolau和Sene，1982；Fraley等人，1979；Nicolau等人，1987)。Wong等人(1980)證明了在培養的雞胚、HeLa和肝細胞瘤細胞中進行脂質介導的遞送和外源DNA的表達的可行性。基於脂質的非病毒製劑提供了腺病毒基因療法的另一種選擇。儘管許多細胞培養研究已證明基於脂質的非病毒基因轉移，但通過基於脂質的製劑進行的全身性基因遞送受到限制。基於非病毒脂質的基因遞送的主要限制是包含所述非病毒遞送載體的陽離子脂質的毒性。脂質體的體內毒性部分地解釋了體外和體內基因轉移結果之間的差異。促成該矛盾的數據的另一個因素是在血清蛋白存在和不存在的情況下脂質體穩定性的差別。脂質體和血清蛋白之間的相互作用對脂質體的穩定性質具有很大的影響(Yang和Huang，1997)。陽離子脂質體吸引和結合帶負電荷的血清蛋白。被血清蛋白包被的脂質體溶解或被巨噬細胞吸收，從而導致其從循環中清除。目前的體內脂質體遞送方法使用皮下、皮內、瘤內或顱內注射以避免與循環中的陽離子脂質相關的毒性和穩定性問題。脂質體和血漿蛋白的相互作用解釋了體外基因轉移(Felgner等人，1987)和體內基因轉移(Zhu等人，1993；Solodin等人，1995；Liu等人，1995；Thierry等人，1995；Tsukamoto等人，1995；Aksentijevich等人，1996)的功效之間的差異。脂質體製劑的最新進展已提高了體內基因轉移的功效(WO98/07408)。由等摩爾比例的1，2-二(油醯氧)-3-(三甲基銨)丙烷(DOTAP)和膽固醇組成的新脂質體製劑顯著增強了體內全身基因遞送，增加了大約150倍。據認為DOTAP膽固醇脂質製劑形成了稱為「三明治脂質體(sandwichliposome)」的獨特結構。據報導該製劑將DNA「夾」在內陷的雙層或『花瓶』結構之間。這些脂質體的有益特徵包括正ρ、通過膽固醇產生的膠體穩定性、二維DNA包裝和增加的血清穩定性。通常在(I)反相蒸發法(II)脫水-再水化(III)去垢劑透析和(IV)薄膜水合作用後通過脂質體混合物的超聲或系列擠出(serialextrusion)進行脂質體製劑的製備。在製備後，脂質結構可用於封裝當在循環中時有毒的(化療劑)或不穩定的(核酸)化合物。脂質體封裝已導致這些化合物的更低的毒性和更長的血清半衰期(Gabizon等人，1990)。許多疾病療法正使用基於脂質的基因轉移策略來增強常規療法或建立新療法，特別是用於治療過度增生性疾病的療法。可將脂質體與血凝病毒(HVJ)混合。已顯示這有利於與細胞膜的融合，從而促進脂質體封裝的DNA進入細胞(Kaneda等人，1989)。在另一個實施方案中，可將脂質體與細胞核非組蛋白染色體蛋白(HMG-1)混合或與其一起使用(Kato等人，1991)。在其他實施方案中，可將脂質體與HVJ和HMG-1兩者混合或與其一起使用。此外，本領域技術人員意識到其他納米顆粒製劑適合用於基因遞送。實例包括由Bianco(2004)，Doerr(2005)，和Lang等人(2005)描述的納米顆粒製劑，所述參考資料各自明確地在此以其全文引用作為參考。E.療法1.定義此處定義的「治療性核酸」是指已知或懷疑在疾病或健康相關性狀況的治療或預防中具有益處的核酸。編碼已知或懷疑在疾病或健康相關性狀況的治療中具有益處的蛋白或多肽的核酸以及更直接地為例如核酶的核酸包括在「治療性核酸」的定義之內。治療性核酸也可以是轉錄已知或懷疑在疾病或健康相關性狀況的治療中具有益處的核酸的核酸(例如轉錄核酶的核酸)。在整個本說明書中使用的術語「治療」或「療法」是指已知或可能提高或增強具有疾病或健康相關性狀況的受試者的健康的任何事件。因此「治療性核酸」是已知或懷疑提高患有疾病或健康相關性狀況的受試者的健康的核酸。這些治療益處的非窮舉實例的目錄包括使受試者壽命延長任何時間長度，或減少或延遲疾病的發展。在癌症的情況下，治療性益處包括過度增殖的減少，腫瘤生長的減小，轉移的延遲或轉移灶數目的減少，癌症細胞的減少或腫瘤細胞增殖率的減少，從惡化前病症至瘤形成發展的進程的減少或延遲，和可歸因於受試者的病症的受試者的疼痛的減輕。「疾病」定義為由任何原因例如感染、遺傳缺陷或環境應激造成的身體部分、器官或系統的病理狀況。此處定義的「健康相關性狀況」是指可以是非病理性的但需要治療的身體部分、器官或系統的狀況。實例包括需要美容治療的狀況，例如皮膚皺紋、皮膚瑕疵等。「預防」和「防止」按照其通常和平常的意思使用，表示「在.....之前作用」或這樣的作用。在特定的疾病或健康相關性狀況的背景中，這些術語是指為了阻止疾病或健康相關性狀況的發生對受試者施用或使用藥劑、藥物或治療劑或對受試者進行治療方法。在本發明的某些實施方案中，所述治療方法包括遞送編碼治療性蛋白的核酸以在受試者中預防疾病或健康相關性狀況。適合預防疾病或健康相關性狀況的組合物的量是已知或懷疑阻止所述疾病或健康相關性狀況的發生的量。在整個本申請中使用的「診斷」是指已知或懷疑在受試者中鑑定疾病或健康相關性狀況存在或不存在中具有益處的任何事件。已知或懷疑在鑑定處於發生特定疾病或健康相關性狀況的風險中的受試者中是有益的任何事件也包括在該定義中。因此，診斷性核酸是已知或懷疑在鑑定疾病或健康相關性狀況存在或不存在中具有益處或已知或懷疑在鑑定處於發生特定疾病或健康相關性狀況的風險中的受試者中具有益處的核酸。例如，所述診斷性核酸可以是編碼可檢測的報告蛋白的核酸。這樣的蛋白可以例如用於成像方法。2.被診斷、預防或治療的疾病本發明涉及通過施用編碼能夠預防或抑制受試者的疾病的胺基酸序列的核酸來檢測、預防、抑制或治療受試者的疾病的方法。如上所示，可用於或給受試者施用以檢測、預防或抑制或治療疾病的任何核酸包含在此處所示的藥物組合物中。在某些實施方案中，所述疾病可以是可影響受試者的過度增生性疾病，所述受試者對於通過給該受試者施用核酸序列來進行的檢測、治療或預防是順從的。例如，所述疾病可以是過度增生性疾病。過度增生性疾病是與細胞的異常生長或繁殖相關的疾病。所述過度增生性疾病可以是在受試者中表現為病變的疾病。示例性過度增生性病變包括下列鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺瘤、腺癌、硬變性胃炎、胰島素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、血管活性腸肽腫瘤、膽管癌、肝細胞癌、腺樣囊性癌、類癌瘤、催乳素瘤、嗜酸細胞瘤、嗜酸性細胞腺瘤、腎細胞癌、子宮內膜樣腺瘤、囊腺瘤、腹膜假性粘液瘤、瓦爾信瘤、胸腺瘤、泡膜細胞瘤、粒層細胞瘤、男性細胞瘤、塞-萊細胞瘤(Sertoli-Leydigcelltumor)、神經節細胞瘤、嗜鉻細胞瘤、血管球瘤(glomustumor)、黑色素瘤、軟組織肉瘤、結締組織增生性小圓細胞腫瘤、纖維瘤、纖維肉瘤、粘液瘤、脂肪瘤、脂肉瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、肌瘤、肌肉瘤、橫紋肌瘤、橫紋肌肉瘤、混合瘤、腎胚細胞瘤、布倫納瘤(brennertumor)、滑膜肉瘤、間皮瘤、無性細胞瘤、生殖細胞瘤(germcelltumors)、胚胎性癌(embryonalcarcinoma)、卵黃囊瘤、畸胎瘤、皮樣囊腫(dermoidcysts)、絨毛膜癌、中腎瘤、血管瘤、血管瘤、血管肉瘤、血管肉瘤、血管內皮瘤、血管內皮瘤、卡波西肉瘤、血管外皮細胞瘤、淋巴管瘤、囊性淋巴管瘤(cysticlymphangioma)、骨瘤、骨肉瘤、骨軟骨瘤、軟骨性外生軟骨瘤、軟骨瘤、軟骨肉瘤、巨細胞瘤、尤因氏肉瘤、牙源性腫瘤(odontogenictumors)、成牙骨質細胞瘤、成釉細胞瘤(ameloblastoma)、顱咽管瘤、神經膠質瘤、混合性少突星形細胞瘤、室管膜瘤(ependymoma)、星形細胞瘤、成膠質細胞瘤(glioblastomas)、少突神經膠質瘤(oligodendrogliomas)、神經上皮贅生物(neuroepitheliomatousneoplasms)、成神經細胞瘤、視網膜成神經細胞瘤(retinoblastoma)、腦脊膜瘤(meningiomas)、神經纖維瘤、神經纖維瘤病(neurofibromatosis)、神經鞘瘤、神經細胞瘤、神經瘤、粒細胞瘤(granularcelltumors)、軟組織腺泡狀肉瘤、淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、淋巴肉瘤、何杰金氏病(Hodgkin′sdisease)、小淋巴細胞性淋巴瘤、淋巴瘤、外套細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、縱隔(胸腺)大細胞淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuselargeB-celllymphoma)，血管內的巨大的B細胞淋巴瘤(intravascularlargeB-celllymphoma)、伯基特淋巴瘤、脾的邊緣區淋巴瘤(splenicmarginalzonelymphoma)、濾泡性淋巴瘤、黏膜相關淋巴樣組織型邊緣區B細胞淋巴瘤(MALT-淋巴瘤)、節邊緣區B細胞淋巴瘤、蕈樣肉芽腫(mycosisfungoides)，塞扎裡氏症候群(Sezarysyndrome)、周圍T-細胞淋巴瘤、血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤、皮下脂膜炎樣T細胞淋巴瘤(subcutaneouspanniculitis-likeT-celllymphoma)、間變性大細胞淋巴瘤、肝脾的T細胞淋巴瘤(hepatosplenicT-celllymphoma)、腸病型T細胞淋巴瘤(enteropathytypeT-celllymphoma)、淋巴瘤樣丘疹病、原發性表皮的間變性大細胞淋巴瘤(primarycutaneousanaplasticlargecelllymphoma)、結外NK/T細胞淋巴瘤、原始NK細胞淋巴瘤(blasticNKcelllymphoma)、漿細胞瘤、多發性骨髓瘤(multiplemyeloma)、肥大細胞瘤、肥大細胞肉瘤、肥大細胞增生病、肥大細胞白血病、朗格漢斯細胞組織細胞增生症(langerhanscellhistiocytosis)、組織細胞肉瘤、朗格漢斯細胞肉瘤樹突細胞肉瘤(langerhanscellsarcomadendriticcellsarcoma)、濾泡樹突細胞肉瘤(folliculardendriticcellsarcoma)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、淋巴瘤樣肉芽腫(ymphomatoidgranulomatosis)、急性白血病、淋巴細胞性白血病、急性成淋巴細胞性白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、成人T細胞性白血病/淋巴瘤、漿細胞性白血病、T細胞大顆粒淋巴細胞性白血病(T-celllargegranularlymphocyticleukemia)、B細胞前淋巴細胞性白血病(B-cellprolymphocyticleukemia)、T細胞前淋巴細胞性白血病(T-cellprolymphocyticleukemia)、pecursorBlymphoblasticleukemia、前體T淋巴母細胞白血病、急性紅細胞系統非白血性白血病(acuteerythroidleukemia)、淋巴肉瘤細胞性白血病、髓細胞性白血病、髓細胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性髓細胞性白血病、急性前髓細胞性白血病、急性早幼粒細胞性白血病(acutepromyelocyticleukemia)、急性骨髓單核細胞性白血病、嗜鹼細胞性白血病、嗜酸細胞性白血病、急性嗜鹼細胞性白血病、急性髓細胞樣白血病、慢性髓細胞性白血病、單核細胞性白血病、急性成單核細胞和單核細胞性白血病、急性巨核細胞白血病(acutemegakaryoblasticleukemia)、急性細胞樣白血病和骨髓增生異常症候群、綠色瘤或髓樣肉瘤、具有骨髓纖維化的急性全骨髓增殖症(acutepanmyelosiswithmyelofibrosis)、毛細胞性白血病、青少年慢性骨髓性白血病、進行性NK細胞白血病、真性紅細胞增多症(polycythemiavera)、骨髓組織增生性疾病、慢性特發性骨髓纖維變性(chronicidiopathicmyelofibrosis)、原發性血小板過多症、慢性中性粒細胞性白血病、慢性嗜酸細胞性白血病/嗜酸細胞過多症候群、移植後淋巴增生性障礙、慢性骨髓增生性疾病、骨髓增生異常/骨髓增生性疾病、慢性骨髓單核細胞性白血病和骨髓增生異常症候群。在某些實施方案中，過度增生性病變是可影響受試者的嘴的疾病。實例包括黏膜白斑病、鱗狀上皮細胞過度增生(squamouscellhyperplasticlesions)、惡化前上皮病變(premalignantepitheliallesions)、上皮內瘤形成病變(intraepithelialneoplasticlesion)、局灶性上皮增生和鱗狀細胞癌病變。在某些其他實施方案中，過度增殖性病變是可影響受試者皮膚的疾病。實例包括鱗狀細胞癌、基底細胞癌、黑色素瘤、乳頭狀瘤(疣)和牛皮癬。也涉及與病毒相關的癌症的治療，包括但不限於頭與頸癌。所述病變可包括細胞例如角質細胞、上皮細胞、皮膚細胞和黏膜細胞。所述疾病也可以是影響肺黏膜的疾病。所述疾病可以是癌前病變，例如口腔的黏膜白斑病或皮膚的光化性角化病。被治療或預防的疾病的其他實例包括傳染病和炎性疾病，例如自身免疫性疾病。本發明的方法和組合物可用於遞送可用於疾病的免疫治療或免疫預防的抗原。其他示例性疾病包括損傷、燒傷、皮膚潰瘍、脊柱後凸、皮膚病病症(綜述於Burns等人，2004中)、牙疾病例如齦炎(綜述於Neville等人，2001中)和眼疾病(綜述於Yanoff等人，2003中)。傷口的基因療法綜述於Eriksson和Vranckx，2004；Atiyeh等人，2005；Ferguson和O』Kane，2004；Waller等人，2004；Simon等人，2004；和Bok和Bok，2004中，其各自明確地以其全文在此引用作為參考。本領域技術人員熟悉許多疾病，所述疾病可使用此處所示的藥物組合物和方法預防或治療。3.定義的生長抑制廣義地定義過度增生性病變的「生長抑制」，其包括，例如，使病變的擴大減慢或停止。抑制病變的擴大也可包括減少病變的大小或誘導病變細胞的編程性細胞死亡。編程性細胞死亡的誘導是指其中藥物、毒素、化合物、組合物或生物實體使細胞凋亡或程序性細胞死亡。在特定的實施方案中，所述細胞是腫瘤細胞。在另一個實施方案中，所述腫瘤細胞是頭與頸癌細胞、鱗狀細胞癌、子宮頸癌細胞或肛門生殖器疣的細胞。在其他實施方案中，所述細胞是角質細胞、上皮細胞、皮膚細胞、黏膜細胞或可通過乳頭瘤病毒進行轉化的任何其他細胞。病變的擴大可被抗病變細胞的免疫反應的誘導所抑制。F.藥物組合物1.定義術語「藥物組合物」和「配製的」是指當給哺乳動物或人(適當時)施用時不產生不利的、過敏性的或其他不想要的反應的分子實體和組合物。如此處所用的，「藥物組合物」包括任何和所有溶劑、分散介質、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。這些用於藥物活性物質的介質和試劑的用途在本領域內是熟知的。除非任何常規介質或試劑不與活性組分相容，否則可將其用於治療性組合物。也可將補充性活性成分整合入組合物。此外，所述組合物可包含補充性活性組分。例如，用作牙膏的組合物可包含香料或組合物可包含補充性成分以使製劑定時釋放(timed-release)。在下面部分更詳細地描述製劑。配製用於口服遞送的一些本發明的藥物組合物。口服遞送包括通過動物或其他哺乳動物(如果合適)的嘴施用。口服遞送也包括對口腔的任何部分例如對牙齦、牙齒、口腔黏膜或對嘴中的病變例如腫瘤前病變或腫瘤病變進行局部施用。口服遞送也包括至嘴傷口或嘴中腫瘤的遞送。在本發明的背景中，「局部施用」經定義包括對身體的表面例如皮膚、口腔黏膜、胃腸黏膜、眼、肛門、子宮頸或陰道的施用，或對這些區域的任何區域中的切除病變的床(即，切除的咽HNSCC或切除的宮頸癌的外科床)的表面的施用，或對空腔臟器例如膀胱表面的施用。在本發明的另一個實施方案中，藥物組合物是腸製劑。腸製劑經定義包括丸劑、具有保護性包衣的膠囊劑或經設計抗胃的低pH的混懸劑。這樣的腸製劑使得能夠遞送治療性或診斷性基因至小腸或大腸。2.固體或半固體製劑本發明的藥物組合物可配製為固體或半固體。固體或半固體製劑是指除了水性製劑外的任何製劑。本領域技術人員熟悉以固體或半固體形式存在的試劑的配製。實例包括凝膠、基質、泡沫、乳膏、軟膏、錠劑、棒棒糖、口膠劑、粉劑、凝膠條、薄膜、水凝膠、溶解條、糊劑、牙膏或固體棒。如下更詳細地描述這些製劑中的一些製劑。a.凝膠凝膠此處定義為從膠體溶液形成的外觀呈固體、果凍樣的材料。膠體溶液是其中以阻止其容易地過濾或快速沉積的方式精細地分開分散在連續介質內的顆粒的溶液。涉及凝膠的配製的方法示於美國專利6,828,308、美國專利6,280,752、美國專利6,258,830、美國專利5,914,334、美國專利5,888,493和美國專利5,571,314中，所述專利各自明確地以其全文在此引用作為參考。i.局部凝膠將此處所示的一些藥物組合物配製為局部凝膠。例如，可將核酸表達構建體配製為基於疏水凝膠的藥物製劑。可通過將五聚體cyclomethacone組分(DowCorning245fluidtm)與核酸表達構建體的液體懸浮液、氫化蓖麻油、棕櫚酸辛酯和環甲基矽酮與聚二甲基矽氧烷醇的混合物以8∶2的比例混合來配製疏水凝膠。優選地，五聚體環甲基矽酮組分佔凝膠的大約40％，液體核酸表達構建體組分佔凝膠的大約30.0％，氫化蓖麻油組分佔凝膠的大約10％，棕櫚酸辛酯組分佔凝膠的大約10.0％以及環甲基矽酮/聚二甲基矽氧烷醇組分佔凝膠的大約10.0％。可將上面所列的各組分混合在一起同時在真空下在大約80-90℃下加熱。在將溫度降低至例如37℃後，然後可加入核酸表達構建體組分，且應當使最終的凝膠組分冷卻至環境溫度。疏水凝膠製劑中的核酸表達構建體的終濃度依賴於所用的構建體類型和施用目的。ii.口服凝膠製劑也可使用本領域技術人員已知的任何方法製備用於遞送核酸表達構建體的口服凝膠藥物製劑。這些藥物製劑可用於口腔。可通過例如混合水、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、EDTA二鈉、透明質酸和麥芽糖糊精來產生這樣的凝膠。在上述組分溶解後，可在攪拌和真空例如30mmHg的情況下加入聚乙烯吡咯烷酮直至完全溶劑化。可在仍處於真空條件下將其他組分，例如羥乙基纖維素和甜味劑例如糖精鈉攪拌加入所述混合物直到完全溶劑化。然後，可在相同的條件下且按照所列的順序向所述混合物中加入氫化蓖麻油、苯扎氯銨和丙二醇與甘草亭酸的混合物，直至組分完全溶解。該混合物通過在真空下再攪拌30分鐘可形成凝膠。表4提供了優選濃度的上述組分的目錄。可選擇地，可使用包含上述組分的商購可獲得的口服凝膠製劑例如(HelsinnHealthcare，Switzerland)。表4組分按重量計算的％透明質酸鈉0.1甘草亭酸0.06聚乙烯吡咯烷酮9.0麥芽糖糊精6.00丙二醇2.94山梨酸鉀0.3羥乙基纖維素1.5氫化蓖麻油PEG-400.27EDTA二鈉0.1苯扎氯銨0.5糖精鈉0.1純水78.60隨後可將凝膠與一種或多種本發明的核酸表達構建體混合。例如，可將15ml前述凝膠與30-50ml核酸表達構建體的液體懸浮液混合。液體懸浮液和凝膠製劑中的核酸表達構建體的濃度依賴於所用的表達構建體的類型和治療用途。iii.眼用凝膠製劑可通過本領域技術人員已知的任何方法配製用於眼部遞送的凝膠。例如，可通過製備第一溶液和第二溶液，然後將各溶液混合來製備用於將核酸表達構建體局部遞送至受試者的眼用凝膠。第一溶液的一個實例包含大約200g純水、906g硼酸、0.13g硼酸鈉、1.0g乙二胺四乙酸二鈉、0.1g苯扎氯銨、4.0g氯化鈉和0.26g凍幹的或液體懸浮核酸表達構建體。表達構建體的類型和治療法以及治療目的決定了第一溶液中核酸表達構建體的特定濃度。第二溶液可包含例如760g純水和35g羥丙基甲基纖維素。可將羥丙基甲基纖維素加入水中，通過將水加熱至大約90℃直至羥丙基甲基纖維素均勻分散溶解在水中。在混合第二溶液後，可降低溫度，這樣可在無菌的狀況下加入第一溶液而不使核酸表達構建體失活。該方法只是示例性的。b.基質基質此處定義為其中包含其他物質例如藥物組分的周圍物質(surroundingsubstance)。涉及傳導矽酮基質(conductingsiliconematrix)的配製的方法示於美國專利6,119,036，其在此明確地以其全文引用作為參考。也參考如Doukas等人，2001.，和Gu等人2004中所描述的涉及基於膠原的基質的配製方法。c.泡沫此處將泡沫定義為通過將許多氣泡捕獲在液體中而形成的組合物。涉及泡沫配製和施用的方法示於美國專利4,112,942、美國專利5,652,194、美國專利6,140,355、美國專利6,258,374和美國專利6,558,043，所述專利各自明確地以其全文在此引用作為參考。可通過例如將氣體導入凝膠或水性藥物組合物中以使氣泡存在於所述藥物組合物中來構建一般的泡沫藥物製劑。如下描述包括使用壓縮氣體的泡沫藥物製劑的製備的一個實例。簡而言之，通過在輕微真空條件下攪拌大約30分鐘將本發明的核酸(12％w/v)與礦物油混合，從而產生第一混合物。可在相同的條件下向第一混合物中加入礦物油中的鯨蠟基硬脂醇(6％w/v)溶液以形成終混合物。隨後可將所述終混合物再攪拌10分鐘。然後可將終混合物放入合適的金屬罐並用推進氣體壓縮。金屬罐可具有分配終混合物的機械裝置，例如通常在壓縮金屬罐中見到的聚乙烯閥類型。該方法只是示例性方法。d.乳膏和洗劑乳膏此處定義為半固體乳劑，所述半固體在此處定義為包含一種或多種油和水的混合物的組合物。洗劑和乳膏被認為是相同類型的製劑。涉及乳膏的配製的方法示於美國專利6,333,194、美國專利6,620,451、美國專利6,261,574、美國專利5,874,094和美國專利4,372,944，其各自明確地在此以其全文引用作為參考。e.軟膏軟膏此處定義為局部用於多種身體表面的粘性半固體製劑。涉及軟膏配製的方法示於美國專利5,078,993、美國專利4,868,168和美國專利4,526,899，其各自在此明確地以其全文引用作為參考。作為例子，軟膏藥物製劑可包含大約23.75w/v％異十八烷基苯甲酸酯、23.85w/v％二(2-乙基己基)蘋果酸酯、10.00w/v％環甲基矽酮、5.00w/v％硬脂醇、10.00w/v％微孔纖維素、15.00w/v％乙烯/醋酸乙烯共聚物、0.1w/v％對羥基苯甲酸丁酯、0.1w/v％對羥基苯甲酸丙酯和2.20w/v％的核酸表達構建體。表達構建體的類型以及治療和施用目的決定了第一溶液中核酸表達構建體的特定濃度。f.粉劑粉劑此處定義為通過搗碎、碾磨或研製使任何無水物質減小成的精細顆粒。g.凝膠條凝膠條此處定義為具有彈性特徵的凝膠薄層。可用或可以不用粘合劑配製所述凝膠。可配製在一段時間內慢慢溶解的凝膠。例如，可設計在施用後溶解的用於口服施用的凝膠。適合用於本發明的用途的另一種口服遞送系統是可溶解條。這樣的裝置的實例是CoolMintListerine條，其為用在Antiseptic(Thymol，Eucalyptol，MethylSalicylate，Menthol)中發現的組分浸漬的基於澱粉的微超薄膜劑。非活性條組分包括支鏈澱粉、香料、阿司帕坦、丁磺氨鉀(potassiumacesulfame)、葡萄糖酸銅、聚山梨醇酯80、角叉藻聚糖、油酸甘油酯、豆角膠、丙二醇和黃原酸膠。h.膜劑膜劑此處定義為包被選擇的藥物組分的柔韌性材料例如纖維素衍生物或熱塑性樹脂的薄層或帶。棒棒糖是附著至用作把手的棍的一個末端的錠劑。本發明的藥物膜劑、錠劑或棒棒糖可由組分組成，所述組分可包括，例如，黃原酸膠、豆角膠、角叉藻聚糖和支鏈澱粉。可在純水中水合所述組分，然後在4℃下貯存過夜，之後可向該混合物中加入著色劑、葡萄糖酸銅、甜味劑、香料和聚氧乙烯山梨醇酯例如聚山梨醇酯80和Atmos300TM(ICICo.)，然後可向所述混合物中加入核酸表達構建體。可通過例如將上述混合物倒入模具中並鑄造為膜，然後可乾燥該膜劑並依賴於藥物組合物的想要劑量將其切成想要的大小來製備本發明的膜劑。例如如果製劑不用於口服施用，那麼也可在不加甜味劑或香料的情況下配製膜劑。i.錠劑固體錠劑在藥物遞送領域是熟知的。錠劑是經設計當置於受試者嘴中時緩慢溶解的治療劑和其他試劑例如粘合劑和甜味劑的小的固體形式。錠劑可包含在該劑型中已知的其他組分例如酸度調節劑、遮光劑(opacifier)、穩定劑、緩衝劑、調味劑、甜味劑、著色劑和防腐劑。例如，通過在真空下加熱錠劑基質(例如，糖和液體葡萄糖的混合物)以除去過多水分，然後將剩餘的組分混合成混合物可將固體製劑製備為錠劑。然後將所得的混合物拉成圓柱體，從所述圓柱體形成單個的錠劑。然後將錠劑冷卻，接受目測，包裝入合適的包裝中。合適的包裝的一種形式是通過金屬箔片密封的不透水塑料材料(例如聚氯乙烯)的泡眼包裝。患者通過對泡眼施壓以迫使錠劑破裂和穿過金屬箔密封片來取出錠劑。錠劑通常通過患者吮吸來釋放藥物。可通過用於製備可咀嚼的糖果產品或口香糖的方法來製備可咀嚼的固體劑型。例如，可從擠壓出的糖和葡萄糖漿的混合物製備咀嚼式固體劑型，已向所述混合物中加入了藥物和任選地發泡劑、溼潤劑、潤滑劑、香料和著色劑。參見PharmaceuticalDosageFormsTablets，第1，2版，Lieberman等人(Eds.)，1989。j.棒棒糖在另一個實施方案中，可以「棒棒糖」或「吮吸物」的形式口服遞送所述核酸。一般地，棒棒糖和吮吸物定義為已將藥物分散入其中的固體基質。其在室溫下是固體或半固體，且通過與水環境即嘴接觸而被溶解。可通過嘴中增加的溫度(與環境或室溫相比)增強基質的溶解(從而釋放藥物)。棒棒糖可以是給患者施用藥物的方便載體，其與錠劑的不同在於棒棒糖可暫時從患者的嘴中取出。這使患者在需要時能夠進行口頭交流和控制遞送的持續時間和程度。本發明的棒棒糖(或膜劑或錠劑)可由組分組成，所述組分可包括，例如，黃原酸膠、豆角膠、角叉藻聚糖和支鏈澱粉。所述組分可以例如在純水中進行水合，然後在4℃下貯存過夜，之後，可向該混合物中加入著色劑、葡萄糖酸銅、甜味劑、香料和聚氧乙烯山梨醇例如聚山梨醇酯80和Atmos300TM(ICICo.)以及核酸表達構建體。可通過將上述混合物倒入想要的大小的模具中，然後將其乾燥來製備本發明的棒棒糖或錠劑製劑。在乾燥之前，將常用的棒棒糖握棍(holdingstick)插入用於棒棒糖製備的模具中。k.水凝膠水凝膠此處定義為聚合物鏈的網絡，該聚合物鏈網絡有時發現為其中水為分散介質的膠態凝膠。通過使用說明書中的教導和本領域技術人員的知識，也可將藥物製劑組裝為水凝膠，這樣其可與核酸表達構建體混合，以用於局部遞送至受試者。下面顯示用於遞送病毒載體中的核酸的水凝膠製劑的實例。例如，可將牛I型膠原(可從例如CollagenCorporation，Fremont，Calif.獲得)、藻酸鈉和病毒載體的液態懸浮物混合在一起以形成水凝膠前體。膠原∶藻酸鹽的比例，基於乾重，可以是從大約7∶3至大約4∶6。在形成水凝膠前體混合物後，通過固化該混合物從其形成水凝膠基質。可通過將所述混合物與多價陽離子例如Ca2+接觸來固化其，從而產生水凝膠。優選地，Ca2+溶液應當至少為2.5毫摩爾。核酸表達構建體的濃度依賴於所用構建體的類型和施用目的。l.溶解條(DissolvingStrip)溶解條此處定義為在水環境例如體腔存在的情況下溶解的膜劑。m.糊劑和牙膏糊劑此處定義為在施加足夠大的負荷或壓力(在該點上其象液體一樣流動)之前行為表現為固體的物質。牙膏此處定義為用於清除或提高牙的美觀表現的糊劑或凝膠。糊劑牙膏(pastedentifrice)可包含水、粘合劑、磨料(abrasive)、香料、發泡劑和溼潤劑。涉及牙膏配製的方法示於美國專利4,627,979、美國專利6,508,647、美國專利申請20020045148和美國專利申請20040018155，其各自明確地以其全文在此引用作為參考。使用本說明書的教導和本領域技術人員的知識，可選擇構建用於遞送核酸表達構建體至受試者的口腔的牙膏藥物製劑。本發明的牙膏可以例如具有下列配方按重量計算1％的擦亮劑例如矽石或碳酸鈣，按重量計算20-75％的多元醇例如甘油或聚乙二醇、按重量計算20-55％的碳酸氫鈉、按重量計算0.001-40％的十二烷基硫酸鈉、按重量計算0.001-20％的二氧化鈦、按重量計算0.1-10％的增稠劑例如瓜爾膠或果膠、按重量計算0.001-5％的糖精鈉和按重量計算10-30％的核酸表達構建體的液體製劑。表達構建體的類型以及治療法和治療目的決定了第一溶液中核酸表達構建體的具體濃度。n.栓劑和陰道栓劑適合於其他施用模式的其他製劑包括陰道栓劑和/或陰道栓(pessarie)。也可使用直腸栓(rectalpessary)和/或栓劑。栓劑是不同重量和/或形狀通常含藥的用於插入直腸、陰道和/或尿道的固體劑型。在插入後，栓劑變軟、熔化和/或溶解在腔液中。一般地，對於栓劑，常規粘合劑和/或載體可包括，例如，聚烷基二醇和/或甘油三酯；可從包含0.5％至10％的，優選地1％-2％的活性組分的混合物形成這些栓劑。涉及栓劑的藥物配製的方法示於美國專利6,982,091，其明確地在此以其全文引用作為參考。可通過例如混合選擇的核酸、羥丙基甲基纖維素、親脂性載體和滲透促進劑來配製本發明的栓劑。例如，通過將羥丙基甲基纖維素(例如從DowChemical，Midland，Mich.獲得的METHOCELK，HPMCK15M)(8％/wt)和滲透促進劑聚氧乙烯烷基醚(例如，從Gattefossé獲得的)(17％/wt)溶解入從Gattefossé，Westwood，N.J.獲得的親脂性載體SUPPOCIRECS2(75％wt)來配製栓劑。可將選擇的核酸攪拌入該混合物，然後倒入合適的栓劑模具中並在局部施用之前使其固化。o.口膠劑本發明也涉及本發明的基於口膠劑的藥物製劑，該製劑經配製用於口服遞送核酸至受試者。作為例子，可冷凍口膠劑基質丸劑以增加硬度，然後通過機械碾磨成粉劑形式。隨後，可將口膠劑粉劑提高至室溫並與甜味劑例如果糖或阿司帕坦混合，其按重量計算構成大約20-65％的口膠劑-增甜劑組合物。然後可用本發明的核酸的液態懸浮劑添加入口膠劑-甜味劑組合物。例如，核酸液態懸浮液的量按重量計算可大致為口膠劑-甜味劑組合物的2％。然後可將口膠劑-甜味劑組合物與核酸的混合物壓製成想要的形狀並給受試者施用。本發明涉及將治療劑配製在口膠劑中的其他方法，且所述方法對於本領域技術人員來說是熟知的。3.稀釋劑和載體在某些確定的實施方案中，口服藥物組合物通常包含惰性稀釋劑和/或可同化食用的載體，和/或其可被封裝入硬殼和/或軟殼明膠膠囊中，和/或其可被壓製成片劑，和/或可將其直接與飲食食物整合。對於口服治療性施用，可將活性組分與賦形劑整合和/或以可攝入的片劑、口頰片劑(buccaltable)、含片、膠囊劑、酏劑、混懸劑、糖漿劑、華夫(wafer)等形式使用。本發明也包括適合在局部使用之前溶解在或懸浮在液體中的固體形式。本發明的固體或半固體製劑可包含下列物質粘合劑，如西黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米澱粉和/或明膠；賦形劑，例如磷酸鈣；崩解劑，例如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、海藻酸等；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；香料和/或甜味劑，例如可加入蔗糖、乳糖和/或糖精和/或調味劑例如薄荷、冬青油和/或櫻桃調味料(cherryflavoring)。當劑量單位劑型是膠囊時，除了上述類型的材料外，其還可包含液體載體。各種其他材料可以包衣的形式存在和/或修飾劑量單位的物理形式。例如，可用紫膠、糖和/或兩者包被片劑、丸劑和/或膠囊劑。涉及本領域技術人員已知的防腐劑、染料和調味劑。涉及用於皮膚表面的本發明的固體和半固體製劑可包含其他組分，所述組分通常混合在用於美容目的的組合物中。例如，這些化妝品組分包括蠟、油、保溼劑、防腐劑、抗氧化劑、紫外吸收劑、紫外散射劑、聚合物、表面活性劑、著色劑、色素、粉劑、藥物、醇、溶劑、芳香劑(fragrance)、香料等的各化妝品組分。化妝品組合物的特定實例包括但不限於化妝美容劑例如口紅、唇彩(lip-gloss)、唇膏、皮膚遮瑕劑(skinblemishconcealer)和洗劑。涉及經設計用作藥物載體的化妝品製劑的方法示於美國專利6,967,023、美國專利6,942,878、美國專利6,881,776、美國專利6,939,859和美國專利6,673,863，其各自明確地以其全文在此引用作為參考。4.水性製劑可將本發明的某些藥物組合物配製成水性組合物。本發明的水性組合物包含有效量的溶解於或分散在藥物可接受的載體或水性介質中的核酸。可通過任何常用的途徑施用此處所示的藥物組合物的某些實施方案，只要靶組織可通過該途逕到達。例如，所述途徑包括經食管、胃、口、鼻、口頰、肛門、直腸、陰道、局部眼部的途徑或對皮膚的施用。這些組合物通常以藥物可接受的組合物的形式施用，所述藥物可接受的組合物包括生理上可接受的載體、緩衝劑或其他賦形劑。其他賦形劑的實例包括芳香劑和香料。所述製劑可以以液體形式或懸浮液形式存在。用於該目的的一般組合物包含藥物可接受的載體。例如，所述組合物可包含每ml磷酸緩衝鹽溶液10mg、25mg、50mg或多至大約100mg的人血清白蛋白。其他藥物可接受的載體包括水性溶液，非毒性賦形劑，包括鹽、防腐劑、緩衝劑等。非水性溶劑的實例是丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有機酯例如油酸乙酯。水性載體包括水、醇/水性溶液、鹽溶液、腸胃外媒介物例如氯化鈉、林格爾葡萄糖等。防腐劑包括抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體。根據熟知的參數調節藥物組合物的各種組分的pH和確切濃度。用於口服施用的水性組合物的實例包括漱口劑、口腔清洗劑、通過塗藥器對嘴施用的包衣(coating)或口噴霧劑。漱口劑製劑對於本領域技術人員來說是熟知的。在例如美國專利6,387,352、美國專利6,348,187、美國專利6,171,611、美國專利6,165,494、美國專利6,117,417、美國專利5,993,785、美國專利5,695,746、美國專利5,470,561、美國專利4,919,918、美國專利申請20040076590、美國專利申請20030152530和美國專利申請20020044910中詳細地描述了涉及漱口劑和口腔清洗劑的製劑，所述參考資料各自明確地在本說明書的該部分和本說明書的所有其他部分引用作為參考。口服製劑包括這些通常使用的賦形劑如，例如，藥物級的甘露糖、半乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。這些組合物採取溶液例如漱口劑和口腔清洗劑的形式存在。這些組合物和/或製劑應當包含至少0.1％的活性物質。當然組合物和/或製劑的百分比可以變化和/或可適宜地在單位的重量的大約2至大約75％之間，和/或優選地在25-60％之間。這些對治療有用的組合物中活性物質的量是使得能夠獲得合適的劑量的量。對於口服施用，可將本發明的表達盒與賦形劑組合併且以非可攝入的漱口劑和潔牙劑(dentifrice)的形式使用。可通過將活性組分以需要的量整合入合適的溶劑例如硼酸鈉溶液(多貝爾氏液)來製備漱口劑。可選擇地，可將活性組分整合入包含硼酸鈉、甘油和碳酸氫鉀的抗菌劑洗液。也可將活性組分分散在潔牙劑中，其包括凝膠、糊劑、粉劑和膏劑。可以中性或鹽形式配製本發明的組合物。藥物可接受的鹽包括酸加成鹽(用蛋白質的游離氨基形成的)和用無機酸例如鹽酸或磷酸或有機酸例如醋酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成的鹽。也可從無機鹼例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵和這樣的有機鹼例如異丙胺、三甲胺、組氨酸、普魯卡因等生成用游離羧基形成的鹽。關於口服施用，也可將本發明的表達盒與染料例如甲苯胺藍O染料整合以幫助檢測過度增生性病變和以非消化性的漱口劑類、口腔漱液和潔牙劑的形式使用。可通過將活性組分以所需要的量整合入口服施用的染料組合物(例如甲苯胺藍O染料、緩衝液、香料、防腐劑、醋酸、乙醇和水的組合物)來製備漱口劑。可在例如美國專利4,321,251、美國專利5,372,801、美國專利6,086,852和美國專利申請20040146919中查找到關於甲苯胺藍O染料在癌變前病變和癌性病變的染色中的用途的方法和配製。用於局部表面的水性組合物的實例包括乳液或藥物可接受的載體例如活性物質如游離鹼或藥物可接受鹽的溶液、與水和表面活性劑混合的活性物質和乳液。乳液一般是一種液體以通常超過0.1um的直徑的微滴的形式分散在另一種液體中的異質系統。(Idson，1988；Rosoff，1988；Block，1988；Higuchi等人，1985)。乳液通常是包含兩種密切混合和相互分散的不混溶的液體相的兩相系統。一般地，乳液可以是油包水(w/o)或水包油(o/w)種類。涉及可與本發明的方法和組合物一起使用的乳液的方法示於美國專利6,841,539和美國專利5,830,499，其各自明確地以其全文在此引用作為參考。用於給皮膚施用的水性組合物也可包括甘油、液體聚乙二醇和其混合物中的分散相。在貯存和使用的常規條件下，這些製劑包含防止微生物生長的防腐劑。本發明也涉及脂質體和/或納米顆粒的使用。脂質體的形成和使用對於本領域技術人員來說一般是已知的，且也在下面進行描述。也在本說明書的其他部分描述脂質體。納米膠囊(Nanocapsule)一般可以穩定和可重複的方式捕獲化合物。為避免由於細胞內多聚體過載引起的副作用，應當使用能夠在體內降解的聚合物設計這些超微粒(大小大約0.1μm)。滿足這些要求的生物可降解的聚烷基-氰基丙烯酸酯納米顆粒可用於本發明，且這些顆粒可容易地製備。涉及可與本發明的方法和組合物一起使用的納米顆粒的使用的方法包括美國專利6,555,376、美國專利6,797,704、美國專利申請20050143336、美國專利申請20050196343和美國專利申請20050260276，其各自明確地以其全文在此引用作為參考。可用於食管和胃遞送的水性組合物的實例包括液體抗酸劑和形成藻酸鹽筏(alginate-raft)的液體組合物。液體抗酸劑和液體硫糖鋁(sucralfate)或藻酸鹽筏形成性組合物對於本領域技術人員來說是熟知的。藻酸鹽通常被認為是安全的從而用於製備多種製藥系統的藥物賦形劑，在專利文獻例如在美國專利6,348,502、美國專利6,166,084、美國專利6,166,043、美國專利6,166,004、美國專利6,165,615和美國專利5,681,827中詳盡地描述了所述製藥系統，所述專利各自明確地以其全文在本說明書的該部分和本說明書的所有其他部分引用作為參考。用於食道或胃遞送的口服製劑包含這些常用的賦形劑如藥物級的羥基乙基纖維素、水、二甲基矽酮、碳酸鈉、糖精鈉、去水山梨醇等。也可使用香料。這些組合物和/或製劑應當包含至少0.1％的活性物質。當然，組合物和/或製劑的百分比可以變化和/或常規地可在大約2至大約75％的單位的重量之間，和/或優選地在25-60％之間。這些治療有用的組合物中的活性物質的量是使得能夠獲得合適的劑量的量。也可在本發明中使用溶液和/或噴霧劑、無針注射器(hypospray)、氣霧劑和/或吸入劑進行施用。一個實例是用於給上呼吸消化道(aerodigestivetract)施用的噴霧劑。所述噴霧劑是等滲的和/或輕微緩衝的，從而保持5.5至6.5的pH。此外，如果需要，可在製劑中包含與眼製劑中使用的抗微生物防腐劑相似的抗微生物防腐劑和/或合適的藥物穩定劑。關於噴霧施用的方法示於美國專利6,610,272、美國專利6,551,578、美國專利6,503,481、美國專利5,250,298和美國專利5,158,761中，其各自明確地在本申請的該部分和本申請的所有其他部分引用作為參考。通過任何常用的途徑施用此處所示的水性藥物組合物的某些實施方案，只要通過該途徑能夠到達靶組織。例如，該途徑可包括經口、鼻、口頰、肛門、直腸、陰道或眼睛局部的途徑。通常以藥物可接受的組合物形式施用這些組合物，所述藥物可接受的組合物包含生理可接受的載體、緩衝液或其他賦形劑。其他賦形劑的實例包括芳香劑和香料。a.漱口劑製劑通過使用本說明書的教導和本領域技術人員的知識，可配製以用於給口腔施用的漱口劑的形式遞送核酸表達構建體的藥物製劑。例如，所述漱口劑製劑可包含一般的漱口劑溶液和選擇的核酸表達構建體的懸浮液。可按照本發明使用的一般漱口劑溶液的一個配方示於表5中。可將漱口劑製劑與核酸表達構建體例如腺病毒載體混合在一起。核酸表達構建體的濃度可依賴於所用的特定構建體和治療目的。隨後可將該製劑用於受試者的口腔。例如，可通過刷子、漱口或含漱(swishing)進行施用。也可重複施用一次或數次。可選擇地，通過使用本說明書的教導和本領域技術人員的知識，可配製整合了癌變前和癌性病變檢測染料的漱口劑藥物製劑，該藥物製劑用於將核酸表達構建體遞送至口腔。例如，可將核酸構建體和包含染料的漱口劑混合。下面顯示一個這樣的方法和製劑，所述方法和製劑涉及包含能夠檢測口腔中癌變前和癌性病變的染料的漱口劑。例如可將甲苯胺藍O染料(1％w/v)、香料(0.2％w/v)和醋酸鈉三水合物緩衝溶液溶解在水、冰醋酸和乙醇的溶液中，從而形成包含染料的漱口劑溶液。隨後可將本發明的核酸以合適的量加入至該漱口劑溶液中。核酸在漱口劑中的濃度依賴於使用的核酸構建體的類型和施用的目的。作為例子，可使用下列步驟給受試者施用藥物製劑1)受試者含漱大約15ml包含1％的醋酸和苯甲酸鈉防腐劑水溶液的漱洗溶液，進行20秒，然後吐出，2)受試者含漱大約15ml水，進行20秒，然後吐出，3)受試者含漱大約30ml藥物製劑，進行60秒，然後吐出，4)重複步驟1兩次，和5)重複步驟2兩次。涉及施用這些組合物的其他方法，且所述方法對本領域技術人員來說是熟知的。在施用藥物製劑後即刻可在合適的放大鏡和合適的光下觀察口腔，就被染色的癌變前和癌變細胞的存在檢查口腔。可在一段時間後對口腔進行隨後的觀察以使能夠用本發明的核酸轉導口腔細胞。可在合適的放大鏡和合適的光下進行這些觀察。b.灌洗劑和灌腸劑製劑還可將核酸配製為灌洗劑或灌腸劑。例如，可將選擇的核酸表達構建體與本領域技術人員熟知的常用灌洗劑或灌腸劑混合。常用的灌洗劑或灌腸劑的配方示於表6。根據本說明書的教導和本領域技術人員的知識，可將常用的灌洗劑或灌腸劑(例如表6中所示的製劑)與選擇的核酸構建體混合。灌洗劑或灌腸劑中的核酸表達構建體的濃度依賴於使用的表達構建體的類型和施用目的。隨後可經肛門、陰道、或通過導管給受試者施用所述製劑。5.非離子型表面活性劑製劑藥物製劑可以是用於局部遞送的非離子表面活性劑。這樣的製劑可由例如三種分開的組分組成。第一組分可以是形成非離子層的表面活性劑。第二組分可以是另一種表面活性劑。最後的組分可以是核酸表達構建體例如腺病毒載體。可將核酸表達構建體凍幹或懸浮在經蒸餾的磷酸鹽緩衝生理鹽水和10％甘油(pH7.4)中。可使用的形成層的表面活性劑的實例見於表7。第二表面活性劑的實例見於表8。可通過例如以獲得最終的包含5wt％的水性分散相所需要的量混合蔗糖月桂酸酯(L-595)和POE(7)十二烷基醚(C12EO7)來配製用於腺病毒載體局部遞送的非離子表面活性劑的製劑。所述混合物可以是例如第一和第二表面活性劑各自的比例為0.3∶0.7或0.2∶0.8或0.1∶0.9的混合物。可首先將這些表面活性劑溶解在氯仿對甲醇為3∶1的溶液中，之後，可蒸發溶劑。然後可通過加入核酸表達構建體的液體懸浮液例如大約5ml這樣的懸浮液來水化剩下的乾燥的膜。6.抗酸劑製劑在本發明的一些實施方案中，藥物組合物還包含一種或多種抗酸劑。本發明涉及配製抗酸劑的任何方法。在根據本說明書的教導和本領域技術人員的知識製備抗酸劑製劑中，可能首先希望在液體製劑中懸浮核酸表達構建體。例如，可將腺病毒載體懸浮在蒸餾磷酸緩衝生理鹽水和10％的甘油pH7.4的水性製劑中。腺病毒載體或任何核酸表達構建體的量將依賴於治療目的。這些液體製劑的其他組分可以是抗酸劑，該抗酸劑可在給受試者施用之後使胃黏膜的pH暫時升高。抗酸劑，例如，可包含組分例如氫氧化鋁或氫氧化鎂。此外，可向這樣的藥物製劑中加入通常可見於商購可獲得的液體抗酸劑製劑中的其他組分。這些組分通常包括，但不限於對羥基苯甲酸丁酯、羥丙基甲基纖維素、維晶纖維素、對羥苯甲酸丙酯、羧甲基纖維素鈉、糖精鈉、山梨醇、蒸餾水和香料。7.藻酸鹽筏製劑本發明也涉及藻酸鹽筏製劑。此處定義的藻酸鹽筏是指通過在胃酸存在的情況下沉澱海藻酸而形成的具有氣體的凝膠。例如，可在腺病毒載體中包含核酸表達構建體。在按照本說明書的教導和本領域技術人員的知識製備藻酸鹽筏製劑中，可將核酸表達構建體懸浮於形成藻酸鹽筏的液體組合物中。包含在形成藻酸鹽筏的藥物組合物中的這樣的核酸表達構建體的實例可以是，例如，腺病毒載體。可將所述腺病毒載體與形成藻酸鹽筏的液體混合。這樣的形成藻酸鹽筏的液體可包含見於商購可獲得的該類型的製劑中的組分，例如氫氧化鋁、碳酸鎂、碳酸氫鈉和海藻酸。商購可獲得的藻酸鹽筏製劑(GlaxoSmithKline)是優選實例。在胃酸存在的情況下，海藻酸沉澱，形成了凝膠。形成藻酸鹽筏的組合物也可包含碳酸氫鈉或碳酸氫鉀；在胃酸存在的情況下，碳酸氫鹽被轉化成二氧化碳，所述二氧化碳被捕獲在凝膠沉澱中，從而將其轉化成『漂浮』在胃內容物的表面上的泡沫。筏形成在給藥的幾秒鐘內發生，並且筏可在胃中保留數小時。可通過例如混合海藻酸鈉(500mg)、碳酸氫鈉(250mg)、碳酸鈣(150mg)、對羥基苯甲酸甲酯(40mg)、對羥基苯甲酸丙酯(6mg)和交聯的聚丙烯酸例如(Noveon)來配製形成藻酸鹽筏的組合物。可將組分混合在一起，然後溶解在包含腺病毒載體的水性製劑中，形成10ml終體積。隨後可由受試者吞食本發明的海藻酸筏藥物製劑。形成海藻酸筏的製劑的其他實例可見於美國專利6,348,502、美國專利5,681,827和美國專利5,456,918中，其各自明確地在本說明書的該部分和本說明書的所有其他部分引用作為參考。8.使用病毒載體的組合物當涉及本發明的病毒表達載體的臨床使用時，必需製備作為適合用於想要的用途的藥物組合物的複合物。一般地，這將使得必需製備基本上不含熱原以及可對人和其他哺乳動物有害的任何其他雜質的藥物組合物。人們一般也想使用合適的鹽和緩衝液使所述複合物穩定並使複合物能夠被靶細胞吸收。9.乳劑製劑通過使用本說明書的教導和本領域技術人員的知識，也可配製作為用於局部遞送核酸表達構建體的乳劑的藥物製劑。例如，所述核酸表達構建體可以是病毒載體，例如腺病毒載體。用於遞送病毒載體中的核酸的乳劑的一個實例如下可將聚(乳酸-羥乙酸)(PLGA)溶解在二氯甲烷中，然後與病毒載體的水性懸浮液混合。例如，可使用1ml二氯甲烷和0.05ml病毒的水性懸浮液。然後可渦旋該溶液大約30秒以形成油包水乳劑。然後可向該乳劑中加入1ml1％的聚乙烯醇，隨後再渦旋30秒。在第二輪渦旋後，然後可向100ml0.1％聚乙烯醇溶液中加入該乳劑並再攪拌30分鐘。接下來，可在攪拌的同時對乳劑使用真空進行2.5小時來除去二氯甲烷。在除去二氯甲烷後，然後可用0.2μm尼龍濾器過濾乳劑並用500ml磷酸緩衝生理鹽水進行洗滌。在乳劑包含病毒的情況下，可使用保護劑防止病毒蛋白的變性。常用的保護劑包括，例如，甘油、蔗糖和牛血清白蛋白。10.納米顆粒脂質體製劑本發明也包括用於局部遞送核酸表達構建體的納米顆粒脂質體製劑。例如，所述脂質體製劑可包含DOTAP和膽固醇。下面顯示這些包含核酸表達構建體的製劑的實例。可以等摩爾濃度將陽離子脂質(DOTAP)與中性脂質膽固醇(Chol)混合(AvantiLipids)。可將混合的粉末狀脂質溶解在1L圓底燒瓶中的HPLC級的氯仿(Mallinckrodt，Chesterfield，Mo.)中。溶解後，將該溶液在30℃下置於Buchi旋轉式蒸發儀上旋轉30分鐘以形成薄膜。然後在真空下將裝有薄膜的燒瓶乾燥15分鐘。一旦乾燥完成，可在5％葡萄糖水溶液(D5W)中水化薄膜，從而產生20mMDOTAP和20mM膽固醇的終濃度，稱為20mMDOTAPChol。可將水化的脂質膜在水浴中在50℃下旋轉45分鐘，然後在35℃下進行10分鐘。然後使混合物在室溫下在石蠟膜覆蓋的燒瓶中靜置過夜，之後在50℃下以低頻率進行超聲(Lab-Line，TranSonic820/H)，進行5分鐘。超聲後，將混合物轉移至試管中並在50℃下加熱10分鐘，然後使用注射器通過不斷減小的大小1.0、0.45、0.2和0.1μm的Whatman(Kent，UK)過濾器進行連續擠壓。可使用0.2μm和0.1μm的WhatmanAnotop過濾器。在擠壓後，可在4℃下在氬氣氣氛下貯存脂質體。可在D5W中稀釋例如150μg以質粒DNA的形式存在的核酸表達構建體。也可在分開的D5W溶液中稀釋貯存的脂質體。然後可將等體積的DNA溶液和脂質體溶液混合，從而產生例如150μgDNA/300μl體積(2.5μg/5μl)的終濃度。可在室溫下進行稀釋和混合。然後使用Pipetman移液器尖頭將DNA溶液快速加在脂質體溶液的表面。然後可在移液器尖頭中上下顛倒兩次快速混合DNA脂質體混合物以形成DOTAP膽固醇核酸表達構建體複合物。通過使用本說明書的教導和本領域技術人員的知識，可進行確定DOTAPChol-核酸表達複合物的顆粒大小的檢測。例如，可使用N4-Coulter顆粒大小分析儀(Beckman-Coulter)確定DOTAPChol-核酸表達構建體複合物的顆粒大小。關於該確定，在確定顆粒大小之前應當將5μl新配製的複合物稀釋在1ml水中。此外，也可將O.D.400nm處的複合物的分光光度計測量計數用於分析。關於該分析，可將5μl樣品稀釋在95μlD5W中以產生100μl的終體積。使用上述配製技術和大小分析方法應當證明複合物的大小在374至400nm之間。11.冰棒製劑通過使用本說明書的教導和本領域技術人員的知識，可配製用於遞送以給口腔或胃腸道施用的冰棒形式存在的核酸表達構建體的藥物製劑。此處將冰棒定義為包含手持放樣器例如棒或鞘的凍結的液體製劑。例如，冰棒製劑可包含冰棒製劑和選擇的核酸表達構建體的懸浮物。因此，冰棒製劑可由糖(20％w/v)、調味劑(1.0％w/v)、著色劑(0.5％w/v)和包含本發明的核酸的水溶液(80％w/v)的冰凍溶液組成。可將以液體形式存在的製劑的組分混合在一起，然後在冰棒模具中冰凍。冰棒製劑的其他實例可見於例如美國專利5,194,269和美國專利5,660,866中，其各自明確地在此以其全文引用作為參考。12.透皮或經皮膚遞送裝置本發明的某些實施方案涉及透皮或經皮膚遞送裝置，所述裝置用於遞送包含貼布(patch)和編碼胺基酸序列的核酸的治療劑，所述胺基酸序列能夠預防或抑制受試者中的疾病例如受試者中的過度增生性病變的擴展。將所述治療劑與貼布的表面接觸。如上所示，所述治療劑包含編碼能夠預防或抑制受試者中的疾病例如過度增生性病變擴展的胺基酸序列。所述貼布可由本領域技術人員已知的任何材料組成。此外，可設計用於通過將貼布貼在受試者的身體表面(例如皮膚表面、口腔黏膜表面、傷口表面或瘤床表面)來遞送治療劑的貼布。可將貼布設計為任何形狀或構形，可包括，例如，條帶、繃帶、帶子、敷料(例如傷口敷料)或人造皮膚。在例如，美國專利5,770,219，美國專利6,348,450，美國專利5,783,208，美國專利6,280,766和美國專利6,555,131中詳細地描述了透皮或經皮膚貼布的配製，所述專利各自明確地在本說明書的該部分和所有其他部分引用作為參考。在一些實施方案中，可設計具有膜的裝置以控制治療劑的液體或半固體製劑通過皮膚和進入血流的速度。裝置的組分可包括，例如，溶解或分散在貯器或惰性聚合物基質中的治療劑；紙、塑料或箔的外側襯背膜；和將貼布固定在皮膚上的壓感膠粘劑(pressure-sensitiveadhesive)。所述膠粘劑可以或可以不用釋放襯裡覆蓋，必需在將貼布用於皮膚前將該釋放襯裡剝去。在一些實施方案中，將治療劑裝入水凝膠基質中。在一些實施方案中，想要將治療劑運輸通過皮膚。因此，局部貼布製劑可包含皮膚滲透機制例如氫氧化物釋放劑和親脂性共增強劑、用於電穿孔的經皮膚促吸劑、穿透增強劑和水性佐劑、包含甘油一酯和棕櫚酸乙酯的皮膚滲透促進劑、來自刺胞動物門、腰鞭毛目和粘原蟲門動物的刺細胞等。在例如美國專利6,835,392、在美國專利6,721,595、在美國專利6,946,144、在美國專利6,267,984和在美國專利6,923,976中詳細描述了涉及皮膚滲透性機制的製劑，所述專利各自明確地在本說明書的該部分和所有其他部分引用作為參考。也涉及的是如Bramson等人(2003)中所述，通過對皮膚使用很小的電阻元件使皮膚產生微孔，然後施用包含腺病毒載體的貼布；如Tuqan等人(2005)所述通過冷凍劑噴霧冷卻增加皮膚的滲透性的方法；如Baxter等人(2005)所述的噴射誘導的皮膚穿刺；如Akomeah等人(2004)所述的皮膚的熱處理；和刮擦皮膚以增加滲透性。在其他實施方案中，設計貼布以使用低功率電流將治療劑運輸通過皮膚。在其他實施方案中，設計用於將藥物被動傳遞通過皮膚或黏膜的貼布。在其他實施方案中，設計使用用於遞送治療劑的離子電滲療法的裝置。所述裝置可包含貯液器，其中將治療劑包含在襯背層和控制治療劑的遞送速度的膜之間的溶液或懸浮液中。在其他實施方案中，所述裝置包含含有治療劑的基質，其中所述治療劑存在於分散在膠原基質、聚合物或棉花墊的溶液或懸浮液中，從而使治療劑與皮膚接觸。在一些實施方案中，將膠粘劑用於遞送系統的外側邊緣以使其能夠附著至受試者的表面。在一些實施方案中，所述裝置由可在一段時間後在受試者皮膚上溶解的物質組成。例如，所述裝置可以是可用於嘴黏膜表面的file或皮膚(skin)，其中所述裝置在一段時間後溶解在嘴中。這些實施方案中的治療劑可以用於裝置的單個表面(即，與受試者接觸的表面)，或浸潰入組成該裝置的物質中。在一些實施方案中，設計整合了超過一種治療劑的裝置。所述裝置可包含分開的用於各治療劑的貯器，或可在單個貯器中包含多種治療劑。此外，可設計基於受試者的身體的改變例如溫度或排汗的變化而改變治療劑的遞送速度的裝置。例如，可在覆蓋在治療劑的膜中包含某些試劑，所述膜響應溫度變化從而允許改變藥物通過所述膜的水平。在其他實施方案中，可通過改變(通過將溫度控制型裝置整合入該裝置中)貼布的溫度來改變治療劑的透皮或經皮膚遞送。本領域技術人員熟悉通過使用貼布進行藥物的透皮和經皮膚遞送的方法和技術。通過使用本說明書的教導和本領域技術人員的知識，可選擇使用透皮遞送貼布局部遞送核酸表達構建體。在按照本說明書的教導和本領域技術人員的知識製備透皮貼布的過程中，可將核酸表達構建體、膠粘劑和滲透促進劑混合在一起，然後分配在矽化處理的聚酯釋放襯裡(ReleaseTechnologies，Inc.，W.Chicago，I11.)上。例如，所述透皮貼布製劑可由佔組合物大約88％的丙烯酸共聚物粘合劑、2％的核酸表達構建體和10％的去水山梨糖醇單油酸酯滲透增強劑例如ARACEL80TM(ICIAmericas，Wilmington，Del.)組成。然後可乾燥和貯存混合物以用於治療受試者。13.膠粘劑在一些實施方案中，藥物組合物包含一種或多種膠粘劑。此處定義的膠粘劑一般是指促進或有利於核酸與表面接觸或促進或有利於一個表面與另一個表面的接觸的試劑或試劑的混合物。用於藥物製劑和藥物的膠粘劑對於本領域技術人員來說是熟知的，其包括局部皮膚膠粘劑例如無菌的、液體膠以及固體或半固體膠粘劑。用於本發明的膠粘劑也包括在施用時是液體，但很快就幹成固體粘膠的膠粘劑。用於本發明的組合物和方法的示例性膠粘劑包括丙烯酸酯例如氰基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯和烷基丙烯酸酯。其他示例性膠粘劑包括水膠體、水凝膠、聚異丁烯和基於凝膠基質的膠粘劑例如基於聚丙烯酸的凝膠基質膠粘劑。也涉及用於本發明的藥物組合物和方法的組織膠粘劑。在美國專利申請20040199207、美國專利申請20030119985、美國專利申請20020116026、美國專利申請20020037323、美國專利6,723,114、美國專利6,596,318、美國專利6,329,337、美國專利6,310,036、美國專利6,299,631和美國專利6,251,370中詳細描述了涉及組織膠粘劑的組合物，所述專利申請各自明確地在此引用作為參考。通過使用本說明書的教導和本領域技術人員的知識，可用膠粘劑藥物製劑局部地遞送核酸表達構建體。例如，可通過混合基於氰基丙烯酸酯的膠粘劑例如甲氧基丙基氰基丙烯酸酯和共聚物來構建膠粘劑藥物製劑。例如，所述共聚物可以是ε-己內酯-乙交酯/丙交酯-乙交酯共聚物。通過混合例如0.13摩爾的乙交酯與1.18摩爾的ε-己內酯和催化劑量的辛酸亞錫(0.262mmole)和1-癸醇(3.275mmole)來構建ε-己內酯-乙交酯/丙交酯-乙交酯共聚物。將所述混合物加熱至170℃的溫度並攪拌大約30分鐘，然後將所述混合物冷卻至120℃以使能夠加入大約0.65摩爾的乙交酯和0.52摩爾的d1-丙交酯。然後再加熱所述混合物至170℃的溫度並再攪拌6.5小時。然後通過在例如130℃的溫度下在減小的壓力下攪拌混合物1.5小時來從共聚物溶液中除去任何未反應的單體。可將甲氧基丙基氰基丙烯酸酯、共聚物和核酸表達構建體的藥物製劑混合在一起，然後用於受試者的局部表面。例如，所述混合物可以是大約90％的甲氧基丙基氰基丙烯酸酯、5％的共聚物和5％的核酸表達構建體。然而，本領域技術人員將認識到，表達構建體的確切濃度依賴於使用的表達構建體的類型，例如腺病毒載體，和使用目的。通過使用本說明書的教導和本領域人員的知識，可選擇使用粘性繃帶(adhesivebandage)局部遞送核酸表達構建體。可與粘性繃帶一起使用的核酸表達構建體的實例是腺病毒載體。為了通過繃帶轉導皮膚，可用移液器將液體懸浮液形式的核酸表達構建體滴入粘性繃帶的墊子。可預處理局部表面以增強表達構建體的遞送。例如，可剃除局部表面的毛髮，或可用熱、微孔、電穿孔、刮擦或化學方法預處理局部表面。如果需要，可使例如繃帶保持與皮膚接觸18小時或更長時間以達到治療目的。14.核酸吸收促進劑(nucleicaciduptakeenhancer)此處定義的「核酸吸收促進劑」是指可用於細胞的表面或與細胞的表面接觸以促進對於所述細胞是外源的核酸的吸收的任何試劑或超過一種試劑的組合物。示例性試劑包括陽離子脂質。在美國專利6,670,332、美國專利6,399,588、美國專利6,147,055、美國專利5,264,618、美國專利5,459,127、美國專利5,994,317和美國專利5,861,397中更詳細地描述了作為核酸吸收促進劑的陽離子脂質，所述專利各自明確地在此以其全文引用作為參考。可用於本發明的方法和組合物的陽離子脂質的實例包括季銨細胞轉染劑(參見美國專利5,994,317和美國專利5,861,397。15.劑量基於想要的目的確定治療劑或預防劑的有效量，所述想要的目的是例如(i)抑制過度增生性病變的擴大或(ii)誘導抗過度增生性病變的免疫應答。本領域技術人員很好地認識到將基因遞送至體內或離體狀況的方法。對於病毒載體，人們一般製備病毒載體貯液。依賴於病毒的種類和可獲得的滴度，可將1×104、1×105、1×106、1×107、1×108、1×109、1×1010、1×1011或1×1012個感染顆粒遞送至患者。通過比較相對吸收效率可推斷出脂質體或其他非病毒製劑的相似數據。下面描述作為藥物可接受組合物的製劑。施用的量(根據治療的次數和劑量)依賴於被治療的受試者、受試者的狀況和想要的保護作用。治療性組合物的精確量也依賴於醫生的判斷且對於各個體是獨特的。在某些實施方案中，給患者提供連續的治療性組合物供給可以是想要的。對於局部施用，可使用重複施用。關於各種方法，可使用提供有限的但在長時期內提供恆定量的治療劑的緩釋製劑。對於體內施用，目的區域的連續灌注可以是優選的。這可通過在一些情況下在手術後插入導管，然後施用治療劑來實現。針對特定患者和狀況由臨床醫生來選擇灌注的時間長度，但時間可在從大約1-2小時至2-6小時、至大約6-10小時、至大約10-24小時、至大約1-2天、至大約1-2周或更長的範圍內變動。一般地，通過連續灌注的治療性組合物劑量與由單次或多次注射提供的劑量相等，就施用藥劑的時間段調整劑量。J.受試者的表面的治療配製用於給受試者的表面施用的本發明的某些治療性組合物。例如，所述表面可以是皮膚表面、病變表面、病變切除後的外科床、傷口表面、黏膜表面或空腔臟器的表面例如胃腸道的襯裡。可通過手術切除除去癌症，從而產生具有表面的「腔」。可在手術時或之後施用本發明的藥物組合物。這基本上是腔的表面的「局部」治療的一個實例。組合物的體積應當足以確保腔的整個表面被表達盒接觸。在此處所示的方法的一些實施方案中，使用敷貼施用藥物組合物。塗藥器(applicator)的實例包括海綿、刷子、棉花籤敷料器等。在一些實施方案中，通過透皮或經皮膚的遞送裝置進行機械施用可以是想要的。通過刷子的施用可能需要刷子和局部表面之間的一種或多種相互作用。可通過反覆地將刷子或海綿與所述表面接觸或通過將刷子或海綿以直線、環形或組合運動的方式在皮膚上移動來將本發明的藥物製劑用於局部表面。此外，可將刷子、海綿、透皮或經皮膚遞送裝置置於局部表面一段時間。可在腫瘤切除之後以及開始手術期間使用這些方法中的任一種。在另一個實施方案中，在手術進入位點閉合之前將導管插入腔中。然後連續灌注所述腔，進行想要的時間長度。在其他實施方案中，通過使用塞子樣塗藥器或泡沫分散塗藥器(foamdispersionapplicator)將本發明的藥物製劑用於局部表面，例如陰道或直腸。涉及使用塞子樣塗藥器遞送藥物的方法見於美國專利6,588,043，涉及使用泡沫分散塗藥器的方法見於美國專利4,112,942，所述專利各自明確地以其全文引用作為參考。在該治療的另一種形式中，診斷或治療性組合物的「局部」施用被靶向天然的體腔例如嘴、咽、食道、喉、氣管、胸膜腔、腹膜腔或中空器官腔包括膀胱、結腸、食道、胃或其他內臟器官。許多方法可用於實現至這些內臟器官或腔表面的「局部」施用。例如，只通過使用漱口劑或口腔清洗劑進行含漱就可影響到咽中的口腔。在一些施用中，重複多次口部含漱。在某些施用中，受試者可在吐出或吞咽之前將漱口劑或口腔清洗劑保持在口腔中進行一段時間。胃內的治療可能需要提高酸性環境的pH。然而，咽和氣管內的局部治療可能需要內窺鏡觀察且治療組合物的局部遞送或施用需要通過噴霧或噴霧劑進行。內臟器官例如膀胱或結腸黏膜可能需要留置導管輸注或再次用膀胱鏡或其他內窺鏡儀器直接觀察。也可通過提供到達這些區域的留置導管或手術方法來進入體腔。在其他實施方案中，為了增加屏障細胞(blockingcell)的滲透性和/或除去屏障細胞層可處理或預處理局部表面，從而提高核酸的吸收/病毒感染。所述治療可包括使用洗劑，例如醋酸或其他膜透化劑。其他試劑包括低滲溶液、離子螯合劑、陽離子肽、閉合蛋白肽、經設計用於破壞連接複合體的細胞外部分的肽、細胞骨架破壞劑、抗體、醚、神經遞質、甘油、FCCP、氧化劑和炎症介質。在其他特定的實施方案中，所述離子螯合劑可以是EGTA、BAPTA或EDTA；陽離子肽可以是聚L賴氨酸；細胞骨架破壞劑可以是細胞鬆弛素B或秋水仙素；神經遞質可以是capsianoside；氧化劑可以是過氧化氫或臭氧；炎症介質可以是TNFα。抗體可以是抗E鈣粘著蛋白抗體。可選擇地，可通過機械方法獲得相同的效果。在某些實施方案中，所述治療可包括刮除術以除去屏障細胞層。刮除可包括，例如除去0.1mm至超過3mm厚的屏障細胞。可用各種裝置進行除去屏障細胞的局部表面刮除，所述裝置是例如，但不限於醫用刮鏟(medicalspatul)、針、銳口牙刮匙、解剖刀、刀、皮膚摩擦裝置或適合用於皮膚摩擦的顆粒製劑。用於皮膚刮除術的皮膚摩擦裝置的實例見於美國專利6,629,091，其以其全文在此引用作為參考。在一些實施方案中，所述治療可包括使用雷射消除局部表面的屏障細胞。在某些實施方案中，所述治療可包括使用電極從局部表面除去屏障細胞。在其他實施方案中，所述治療包括通過等離子氣體電極除去屏障細胞。在其他實施方案中，所述治療可包括用研磨清潔劑、冷凍處理(cryotreatment)或加熱進行預處理。涉及使用雷射從局部表面除去屏障細胞的方法見於美國專利5,423,803和美國專利6,273,884，通過電極除去屏障細胞的實例見於美國專利6,024,733和美國專利6,309,387，涉及通過等離子氣體電極除去屏障細胞的實例見於美國專利6,629,974，所述專利各自以其全文在此引用作為參考。涉及使用加熱來增加皮膚對於藥物遞送的透性的方法可見於美國專利4,898,592。在某些實施方案中，肺黏膜的治療可需要使用以噴霧劑的形式存在的吸入藥物製劑。在一些實施方案中，可通過噴霧器裝置將噴霧劑遞送至肺黏膜。例如，本發明的藥物製劑的遞送可包括用於遞送入受試者的肺的界面，例如菸嘴口、面罩(mask)、氣管內插管、鼻管等。可將界面連接至吸入管(inhalationtube)。可將吸入管連接用於提供脈衝量的經過濾空氣帶來的藥物製劑的裝置。所述裝置可包含具有脈衝空氣的進氣孔、具有擴散器擋板(diffuserbaffle)和連接器的充氣室的噴霧器，提供了對大氣空氣過濾的過濾器。涉及通過噴霧器遞送藥物製劑的方法可見於例如美國專利6,269,810和美國專利6,705,316，其各自在此以其全文引用作為參考。K.預防性治療此處所示的方法的某些實施方案涉及在受試者中預防疾病或健康相關性狀況的方法。預防性策略在今天的醫療中是至關重要的。例如，在治療患有HNSCC的患者後，其有很大的機會(30-40％)獲得第二個原發性腫瘤(Khuri等人，1997)。高風險群體的化學預防可減少第二原發性腫瘤的發展和提高存活率(Khuri等人，1997)。上呼吸消化道(UADT)的黏膜處於由於通過微小轉移(Bedi等人，1996)或通過區域性癌變(Lydiatt等人，1998)而發生第二原發性腫瘤的風險中。因為在組織學和臨床上表現正常的黏膜組織中發現基因改變，因此這些細胞可進一步形成第二原發性腫瘤。因此這些癌前細胞是治療性基因轉移的靶。阻止前癌細胞中的細胞周期的G1期可停止細胞進程。預防性治療的另一個實例是預防正常組織的感染或炎症，所述感染或炎症可由於活性氧簇例如由放射療法誘導的活性氧簇效應原因而發生。例如，已知超氧化物歧化酶將超氧自由基解毒為過氧化氫。涉及編碼超氧化物歧化酶的核酸的遞送的方法和組合物見於例如美國專利5,599,712、美國專利6,221,712和美國專利6,887,856，其各自明確地以其全文在此引用作為參考。可對其他疾病使用相同的策略。處於風險中的群體可包括具有危險度因子或以前曾被治療的疾病的歷史的受試者。依照劑量、治療次數和治療的持續時間，被施用的藥物組合物的量依賴於被治療的受試者、受試者的狀況、被預防的疾病的性質和想要的保護。治療組合物的精確量也依賴於醫生的判斷且對於各個體是獨特的。例如，組合物的施用頻率可以是1天1次、1天2次、1周1次、1周2次或1月1次。治療的持續時間可在1個月至1年或更長的時間範圍內變化。此外，精確的預防方案將高度依賴於受試者、危險度因子的性質和醫生的判斷。本發明的組合物也可在受試者中用於免疫預防疾病，例如通過接種或接種與免疫療法的組合來進行。所述製劑可用於本領域技術人員已知的免疫接種方案。關於免疫預防和接種的方法示於Robinson等人(2003)和Plotkin等人(2003)，其各自在此明確地引用作為參考。L.免疫反應的增強在此處所示的方法的一些實施方案中，通過在受試者中增強免疫反應獲得治療性反應。可以為了疾病的免疫治療或預防疾病的發生或進展的免疫預防目的增強免疫反應。在某些實施方案中，例如，所述疾病是癌症。在其他實施方案中，所述疾病是傳染病或炎性疾病例如自身免疫性疾病。因此，在某些實施方案中，可對受試者施用藥物製劑以增強或誘導免疫反應。在某些實施方案中，治療性核酸將編碼或具有一個或多個免疫刺激劑例如，但不限於抗原佐劑和其他免疫調節劑。在對受試者施用核酸後，靶受試者中包含的一個或多個細胞可表達由所述治療性核酸編碼的序列。示例性方案示於Robinson等人(2003)和Plotkin等人(2003)，其各自在此明確地引用作為參考。在某些其他實施方案中，所述藥物製劑自身可包含一種或多種其他的免疫刺激劑。在一些實施方案中，一種或多種其他的試劑以任何組合共價結合至抗原或其他免疫刺激劑。抗原，可以是從例如癌基因、腫瘤抑制基因、其他自身基因例如酶和來源於微生物的基因產生的多肽序列。以前已公開了各種基因的核酸和蛋白、多肽和肽編碼序列，所述序列可在本領域技術人員已知的計算機化的資料庫中查找到。一個這樣的資料庫是美國國家生物技術信息基因庫和GenPept資料庫中心(NatioralCenterforBiotechnologyInformation′sGenbankandGenPeptdatabases)(www.ncbi.nlm.nih.gov/)。可使用此處公開的技術或通過本領域技術人員已知的技術(例如，Sambrook等人，2001)擴增、組合和/或表達這些已知基因的編碼區域。儘管核酸可在體外表達系統中表達，但在優選實施方案中所述核酸包含用於體內複製和/或表達的載體。合適的佐劑包括所有可接受的免疫刺激物質，例如細胞因子、毒素或合成的組合物。可用於本發明的佐劑的非限定性目錄包括MDA-7、IL-1、IL-2、IL-4、IL-7、IL-12、γ-幹擾素、GMCSP、BCG、氫氧化鋁、MDP化合物，例如thur-MDP和nor-MDP、CGP(MTP-PE)、脂質A和單磷醯脂質A(MPL)。包含從細菌中提取的三種組分MPL、海藻糖二黴菌酸酯(TDM)和2％角鯊烯/Tween80乳液中的細胞壁骨架(CWS)的RIBI、MHC抗原、完全弗氏佐劑(包含被殺死的結核分支桿菌的免疫反應非特異性刺激劑)、不完全弗氏佐劑、氫氧化鋁、AdjumerTM(即，PCPP鹽；聚磷腈)；Adju-Phos(即，磷酸鋁凝膠)；AlgalGlucan(即，b-葡聚糖；葡聚糖)；Algammulin(即，γ菊粉/鋁混合物佐劑)；鋁膠(即，氫氧化鋁凝膠；鋁)；抗原製劑(即，SPT、AF)；(即，N，N-二(十八)烷基-N′，N′-二(2-羥乙基)丙二胺；CP20，961)；BAYR1005(即，N-(2-脫氧-2-L-亮氨醯氨基-b-D-吡喃葡萄糖基)-N-十八烷基十二醯胺氫化乙酸)；鈣三醇(即，la、25-二羥維生素D3；1，25-二(OH)2D3；1，25-DHCC；la、25-二羥膽鈣化醇)；磷酸鈣凝膠(即，磷酸鈣)；霍亂全毒素(CT)和霍亂毒素B亞基(CTB)(即，CT；CTB亞基；CTB)；霍亂毒素A1-亞基-A蛋白D-片段融合蛋白(即，CTA1-DD基因融合蛋白)；CRL1005(即，嵌段共聚物P1205)；包含細胞因子的脂質體(即，包含細胞因子的脫水再水化的小泡)；DDA(即，二甲基二(十八)烷基溴化銨；二甲基二硬脂溴化銨(CAS註冊號3700-67-2))；DHEA(即，脫氫表雄甾酮；雄甾烯二酮；普拉雄酮)；DMPC(即，二(十四)醯磷脂醯膽鹼；1，2-二(十四)醯-sn-3-磷脂醯膽鹼；(CAS註冊號18194-24-6))；DMPG(即，二肉豆蔻醯磷脂醯甘油；sn-3-磷脂醯甘油-1、2-二(十四)醯、鈉鹽(CAS註冊號67232-80-8))；DOC/鋁複合物(即，脫氧膽酸鈉鹽；DOC/Al(OH)3/礦物載體複合物)；弗氏完全佐劑(即，CIA；FCA)；弗氏不完全佐劑(即，IFA；FIA)；γ菊粉；Gerbu佐劑；GM-CSF(即，粒細胞巨噬細胞集落刺激因子；沙莫司亭(來源於酵母的rh-GM-CSF))；GMDP(即，N-乙醯氨基葡萄糖-(b1-4)-N-乙醯胞壁醯-L-丙氨醯-D-異穀氨醯胺(CAS註冊號70280-03-4))；咪喹莫特(即，1-(2-甲丙基)-IH-咪唑[4，5-c]喹林-4-胺；R-837；S26308)；ImmTherTM(即，N-乙醯氨基葡萄糖基-N-acetyhnuramyl-L-Ala-D-異Glu-L-Ala-丙三醇二棕櫚酸酯；DTP-GDP)；包含抗共刺激分子的抗體的免疫脂質體(即，從脫水-再水合小泡製備的免疫脂質體(DRVs))；幹擾素-g(即，(rhIFN-γ，Genentech.Inc.)；免疫幹擾素；IFN-g；γ-幹擾素)；白細胞介素-1b(即，IL-10；IL-1；人白細胞介素1b成熟多肽117-259)；白細胞介素-2(即，IL-2；T細胞生長因子；阿地白介素(脫-丙氨醯基-1、絲氨酸-125人白細胞介素2)；)；白細胞介素-7(即，IL-7)；白細胞介素-12(即，IL-12；天然殺傷細胞刺激因子(NKSF)；細胞毒淋巴細胞成熟因子(CLMF))；ISCOM(s)TM(即，免疫刺激複合物)；Iscoprep7.0.3.TM；脂質體(即，包含蛋白或Th-細胞和/或B細胞肽的脂質體(L)、或具有或不具有共捕獲的白細胞介素、BisHOP或DOTMA的微生物；A，[L(抗原)])；羅唑利賓(即，7-烯丙基-8-氧代鳥嘌呤核苷)；LT-OA或LT口服佐劑(即，大腸桿菌不穩定性腸毒素原毒素)；MF59；MONTANIDEISA51(即，純化的IFA；不完全弗氏佐劑)；MONTANIDEISA720(即，可代謝的油佐劑)；MPLTM(即，3-Q-脫醯基-4′-單磷醯脂質A；3D-MLA)；MTP-PE(即，N-乙醯-L-丙氨醯-D-異穀氨醯胺-L-丙氨酸-2-(1，2-二棕櫚醯-sn-甘油-3-(羥基-磷醯氧基))乙基醯胺、單鈉鹽)；MTP-PE脂質體(即，MTP-PE抗原呈遞脂質體)；Murametide(即，Nac-Mur-L-Ala-D-Gln-OCH3)；Murapalmitine(即，Nac-Mur-L-Thr-D-isoGIn-sn-二棕櫚醯甘油)；D-Murapalmitine(即，Nac-Mur-D-Ala-D-isoGln-sn-二棕櫚醯丙三醇)；NAGO(即，神經氨酸酶-半乳糖氧化酶)；非離子型表面活性劑小泡(即，NISV)；Pleuran(即，b-葡聚糖；葡聚糖)；PLGA、PGA和PLA(即，乳酸和羥基乙酸的同聚物和共聚物；丙交酯/乙交酯聚合物；聚乳酸共聚乙交酯)；PluronicL121(即，泊洛沙姆401)；PMMA(即，聚甲基丙烯酸甲酯)；PODDSTM(即，類蛋白微球體)；PolyrAPolyrU(即，聚腺苷酸聚尿嘧啶核苷酸複合物)；聚山梨醇酯80(即，吐溫80；去水山梨糖醇單-9-十八烷酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物)；ProteinCochleate；QS-21(即，StimulonTMQS-21佐劑)；Quil-A(即，Quil-A皂角苷、Quillajasaponin)；RehydragelHPA(即，高蛋白吸附劑氫氧化鋁凝膠；鋁)；RehydragelLV(即，低粘度氫氧化鋁凝膠；鋁)；S-28463(即，4-氨基-八-二甲基-2-乙氧甲基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-乙醇)；SAF-1(即，SAF-m；Syntex佐劑製劑)；Sclavo肽(即，IL-1b163-171肽)；Sendai蛋白脂質體、包含Sendai的脂質基質(即，包含Sendai糖蛋白的小泡；促融合蛋白脂質體；FPLs)；Span85(即，Arlacel85、去水山梨糖醇三油酸酯)；Specol；角鯊烷(即，鯊烯；；2，6，10，15，19，23-六甲基二十四烷)；角鯊烯(角鯊烯；鯊烯；2，6，10，15，19、23-六甲基-2，6，10，14，18，22廿四碳六烯)；硬脂醯酪氨酸(即，十八烷基酪氨酸鹽酸鹽)；TheramideTM(即，N-乙醯氨基葡萄糖基-N-acetylinuramyl-L-Ala-D-異Glu-L-Ala-二棕櫚醯氧丙醯胺(DTP-DPP))；蘇氨醯基-MDP(即，TermurtideTM；[thrl]-MDP；N-乙醯胞壁醯基-L-蘇氨醯-D-異穀氨醯胺)；Ty顆粒(即，Ty-VLPs、(病毒樣顆粒))；WalterReed脂質體(即，包含被吸附至氫氧化鋁的脂質A的脂質體、[L(脂質A+抗原)+明礬])。除了佐劑外，施用免疫調節劑例如反義RNA、RNAi、編碼Cpg基元的核酸和生物反應修飾劑(BRMs)可以是想要的，已顯示所述生物反應修飾劑上調T細胞免疫或下調抑制細胞的活性。這些BRM包括，但不限於，西米替丁(CIM；1200mg/d)(Smith/Kline，PA)；或低劑量的環磷醯胺(CYP；300mg/m2)(Johnson/Mead，NJ)以及細胞因子例如g-幹擾素、IL-2或IL-12或編碼參與免疫輔助功能的蛋白例如B-7的基因。在本發明的其他實施方案中，可給受試者施用編碼或具有一個或多個免疫刺激劑的核酸，這樣所述核酸的表達可在受試者中誘導體液或細胞介導的免疫反應。該免疫反應可以是主動或被動免疫反應。可選擇地，所述反應可以是過繼免疫治療方法的部分，在所述治療方法中從動物(例如，患者)獲得淋巴細胞，然後用包含抗原組分的組合物脈衝所述淋巴細胞。在該實施方案中，抗原組分可包含其他免疫刺激劑或編碼這樣的刺激劑的核酸。可從受試者的血液獲得淋巴細胞，或可選擇地從腫瘤組織獲得淋巴細胞從而獲得如Rosenberg等人，1986公開的腫瘤浸潤淋巴細胞，所述參考資料在此引用作為參考。在特定的實施方案中，所述淋巴細胞是外周血淋巴細胞。在一個特定的實施方案中，可對相同的或不同的動物(例如，相同的或不同的供體)施用所述淋巴細胞。例如，所述動物(例如人)可具有或被懷疑具有癌症，例如乳腺癌或前列腺癌。在其他實施方案中，實施與癌症治療法(例如，如在下面更詳細描述的癌症疫苗療法)相結合的增強免疫反應的方法。靶受試者包含的一個或多個細胞可在對該受試者施用核酸後表達由該核酸編碼的序列。示例性方案示於Robinson等人(2003)和Plotkin等人(2003)，其各自明確定地在此引用作為參考。合適的腫瘤抗原的實例對於本領域技術人員來說是熟知的，其包括但不限於由Dalgleish，2004；Finn，2003；和Hellstrom和Hellstrom，2003描述的腫瘤抗原。其各自在此以其全文引用作為參考。對黏膜表面局部施用編碼腫瘤抗原的核酸可被當作預防性或防治性療法，因此這些黏膜施用可產生抗過度增生性疾病例如癌症的隨後發展的免疫保護。在一些實施方案中，可在過度增生性疾病例如癌症的發展之前將編碼腫瘤抗原的核酸用於黏膜表面。之前已報導了包含來源於微生物的一個或多個抗原的組合物的黏膜施用。這些研究表明這些抗原的黏膜施用可誘導抗感染這些表面的微生物的預防性免疫反應。(Gallichan等人，1993；Gallichan和Rosenthal，1995；Gallichan和Rosenthal，1996.)。相反地，已報導了在產生感染後經黏膜施用這些抗原可減少或消除重要的治療益處。例如，在感染產生後施用目前可獲得的脊髓灰質炎和肺炎球菌疫苗與在暴露於這些微生物之前施用相比可以說不具有治療效應。M.治療的第二形式1.概述在本發明的某些實施方案中，本發明的方法涉及在受試者中檢測、治療或預防疾病，其中所述受試者接受一個或多個治療的第二形式。本發明的某些方面涉及對受試者例如人受試者施用人ACC的調節劑的方法。這些組合物可用於預防或治療疾病，其中本領域技術人員已知或懷疑人ACC的調節劑的施用是有益的。例如，如上所示，被治療或預防的疾病或健康相關性狀況可以是肥胖症、過度增生性疾病、心血管疾病、糖尿病或胰島素抗性。人ACC的調節劑可與另一種藥物或治療方法一起施用。例如，用於在人受試者中治療糖尿病的人ACC的調節劑的施用可在用於糖尿病的其他療法(例如口服降血糖酸或胰島素療法)之前、之後或同時進行。可在血管成形術或冠狀動脈旁路術後施用用於治療急性心肌梗塞的人ACC的調節劑。在另一個實例中，可在用於治療肥胖症的膳食幹預或胃部手術之前或之後施用治療或預防肥胖症的人ACC的調節劑。對患者施用人ACC的調節劑將依照用於施用治療劑的一般方案，且要考慮其他參數，包括，但不限於，患者的其他醫療狀況和患者正在接受的其他療法。預期必要時重複治療周期。可以數分鐘至數周的範圍內變動的間隔在其他療法之前或之後進行使用本發明的人ACC的調節劑的治療。在其中施用另一種藥物的實施方案中，一般確保有效時段不超過每次遞送的時間之間的間隔，這樣所述試劑能夠對細胞產生有利的組合效應。例如，可基本上同時(即，在少於大約1分鐘內)與本發明的組合物一起施用2、3、4或更多劑量的一種藥物。在其他方面，可在施用治療量的本發明的組合物之前和/或之後大約1至大約48個小時或更多小時內或在此處未顯示的任何時間長度之前和/或之後施用治療劑或方法。在某些其他實施方案中，可在施用另一種治療方式例如手術或藥物治療之前和/或之後大約1天至大約21天之內施用本發明的人ACC的調節劑。然而，在一些情況下，可能想要顯著地延長治療時間，其中在各個施用之間要間隔數周時間(例如，大約1至8周或更長時間)。可使用各種組合，人ACC的調節劑被命名為「A」，而可以是任何其他治療劑或方法的第二治療命名為「B」A/B/AB/A/BB/B/AA/A/BA/B/BB/A/AA/B/B/BB/A/B/BB/B/B/AB/B/A/BA/A/B/BA/B/A/BA/B/B/AB/B/A/AB/A/B/AB/A/A/BA/A/A/BB/A/A/AA/B/A/AA/A/B/A2.第二抗癌療法可將本領域技術人員已知的許多癌症療法與本發明的組合物一起使用。下面描述一些現有的癌症療法和化學治療劑。本領域技術人員認識到可與本發明的方法和組合物一起使用但不限於下面所示的治療形式的其他抗癌療法的存在和發展。為了增加治療性核酸的功效，將其與一種或多種在治療過度增生性疾病方面有效的其他藥劑或方案組合可以是想要的。可混合或分開施用治療性組合物。治療目的是殺死或抑制癌細胞的增殖。該方法可包括將細胞與表達構建體和藥物或第二因子同時接觸。這可通過將細胞與包含兩種藥物的單個組合物或藥物製劑接觸，或通過將所述細胞在相同的時間與兩種不同的組合物或製劑接觸來實現，其中一種組合物包含表達構建體而另一種包含第二藥物。可選擇地，所述核酸療法可以數分鐘至數周範圍內變化的間隔在其他治療劑或方案之前或之後進行。在其中其他藥劑和表達構建體分開使用的實施方案中，通常確保有效時段不超過各遞送的時間之間的間隔，這樣藥劑和表達構建體仍然能夠產生有利的組合治療效應。在該情況下，可將細胞與兩種治療形式在相互之間相隔大約12-24小時之內，更優選地在相互之間相隔大約6至12小時之內接觸。然而，在一些情況下，顯著延長治療的時段是想要的，其中各個施用之間要經過幾天(2、3、4、5、6或7)至幾周(1、2、3、4、5、6、7或8)。可使用多種組合，例如，第一療法為「A」，而第二療法為「B」A/B/AB/A/BB/B/AA/A/BA/B/BB/A/AA/B/B/BB/A/B/BB/B/B/AB/B/A/BA/A/B/BA/B/A/BA/B/B/AB/B/A/AB/A/B/AB/A/A/BA/A/A/BB/A/A/AA/B/A/AA/A/B/A對患者施用本發明的治療性核酸將依照用於施用化學治療劑的一般方案，如果載體有毒性的話要考慮載體的毒性。預期必要時可重複治療周期。各種標準的治療法以及手術幹預也可與所述的過度增生性細胞療法一起使用。a.放射療法放射療法包括誘導DNA損傷的輻射和波例如γ輻射、X射線、紫外照射、微波、電子發射、放射性同位素等。可通過用上述形式的輻射照射被定位的腫瘤位置來獲得治療。所有這些因素最可能對DNA的前體、DNA複製和修復以及染色體的組裝和維持造成廣泛的DNA損傷。X射線的劑量範圍對於長時段(3至4周)在50至200倫琴的日劑量範圍內變動，對於單一劑量為2000至6000倫琴。放射性同位素的劑量範圍變化很廣，且依賴於同位素的變衰期、發射的輻射的強度和種類以及被贅生性細胞的吸收。在本發明的上下文中，放射療法可在使用此處所示的治療性核酸中的一種的治療之前、期間或之後進行，且可按照標準的方案重複治療。b.手術用於除去癌生長的手術治療通常是用於治療腫瘤和癌症的標準方法。該方法試圖除去整個癌生長。然而，通常將手術與化學療法和/或放射療法一起使用以確保破壞任何殘留的贅生性細胞或惡性細胞。因此，在本發明的上下文中，除了使用本發明的腫瘤細胞特異性肽外以獲得細胞特異性癌症療法，還可使用手術。在手術幹預的情況下，可在手術前使用本發明的組合物以使不能做手術的腫瘤受試者能夠進行切除術。可選擇地，可在手術時和/或之後使用本發明以檢測或治療殘留或轉移的疾病。例如，可通過使用本發明的一種藥物組合物檢測或治療受試者口腔內切除的瘤床。所述施用可在術後繼續進行。也涉及周期性術後治療。在某些實施方案中，被治療的腫瘤可以是(至少在開始時)不可切除的。使用診斷性或治療性病毒構建體的治療可增加腫瘤的可切除性，這歸因於邊緣處的皺縮或某些特定侵襲性部分的消除。此外，包含報告基因的病毒構建體可幫助手術去除過度增生性細胞，所述報告基因具有導致特定組織類型顏色改變的能力。在進行治療後，可能可以進行切除術。術後的其他治療法將用於消除腫瘤位置上的微小殘留疾病。對於原發性腫瘤或術後瘤床，一般的療程包括多劑給藥。一般的原發性腫瘤治療包括在兩周的時間內施用6劑藥物。可重複該兩周方案1、2、3、4、5、6或更多次。在療程中，可重新評估對完成計劃的劑量給藥的需要。所述治療可包括各種「單位劑量」。單位劑量定義為包含預先確定的量的治療性組合物。被施用的量和特定途徑以及製劑在臨床域技內的技術人員的能力範圍之內。單位劑量不一定以單次注射進行施，而且可包括在一段時間內連續輸注。本發明的單位劑量可以根據病毒構建體的蝕斑形成單位(pfu)方便地進行描述。單位劑量在103、104、105、106、107、108、109、1010、1011、1012、1013pfu和更高的範圍內變動。c.化學治療劑癌症療法也包括多種與基於化學和放射療法組合的組合療法。組合化學治療劑包括，例如，順鉑(CDDP)、卡鉑、甲基苄肼、雙氯乙基甲胺、環磷醯胺、喜樹鹼、異磷醯胺、美法蘭、氯氨布西、重硫酸鹽、亞硝基脲(nitrosurea)、放線菌素D、柔紅黴素、多柔比星、博來黴素、普卡黴素(plicomycin)、絲裂黴素、依託泊苷(VP16)、它莫西芬、紫杉酚、transplatinum、5-氟尿嘧啶、長春新鹼、長春鹼、苯並咪唑和甲氨蝶呤或其任何類似物或衍生變體。此處所用的術語「化學治療劑」定義為使用可用於癌症的治療的藥物、毒素、化合物、組合物或生物實體。這些治療劑可以是，例如直接與DNA交聯的試劑、嵌入DNA的試劑、打斷微管系統的試劑、導致腫瘤抑制蛋白積累的試劑和通過影響核酸合成導致染色體和有絲分裂異常的試劑。此處設計和顯示了直接交聯核酸特別是DNA以產生DNA損傷，從而導致協同的抗瘤組合物的試劑。可使用藥劑例如順鉑和其他DNA烷化劑。破壞DNA的試劑也包括幹擾DNA複製、有絲分裂和染色體分離的物質。這些物質的實例包括阿黴素(也稱作多柔比星)、VP-16(也稱為依託泊苷)、維拉帕米、鬼臼毒素等。這些物質廣泛用於治療贅生物的臨床環境，通過靜脈內推注施用這些物質，對於阿黴素以21天的間隔以25至27mg/m2的濃度範圍的劑量進行靜脈內推注，對於依託泊苷以35-100mg/m2的濃度範圍經靜脈內或口服施用。破壞細胞的微管系統的試劑包括例如苯並咪唑。苯並咪唑是廣譜類型的驅蟲藥(antihelmintics)，該藥展示了優秀的抗寄生線蟲的活性和較低程度的抗絛蟲和吸蟲的活性。也已顯示苯並咪唑是非常有效的抗原蟲劑，其也具有抗真菌活性。目前認為，由於對微管系統的結合和破壞其功能，苯並咪唑產生了其細胞毒性效應(Lacey，1988；Friedman和Platzer，1980)。微管是苯並咪唑的靶的建議已受到使用蠕蟲的富集提取物和哺乳動物微管蛋白的藥物結合研究的結果(Lacey，1988)支持。此外，使用哺乳動物微管蛋白的競爭性藥物結合研究已顯示苯並咪唑在體外競爭秋水仙素的結合和抑制L1210鼠類白血病細胞的生長(Friedman和Platzer，1978；Lacey和Watson，1989)。然而，當作為驅蟲藥施用時苯並咪唑對線蟲類具有選擇性毒性而對宿主無毒性。相反地，苯並咪唑抑制哺乳動物微管蛋白的體外聚合。宿主和寄生蟲大分子對於苯並咪唑的親和力的差異(Russell等人，1992；Kohler和Bachmann，1981)和宿主與寄生蟲之間的苯並咪唑的藥物動力學之間的差異被認為是苯並咪唑的選擇性毒性(Gottschall等人，1990)的原因，但該選擇性毒性的實際分子基礎仍然不清楚。甲苯咪唑，或5-苯甲醯-2-苯並咪唑氨基甲酸甲酯是苯並咪唑類化合物的成員。最近，已發現甲苯咪唑通過在非小細胞肺癌細胞中解聚微管來誘導有絲分裂的停止和編程性細胞死亡。(Sasaki等人，2002)。也已發現甲苯咪唑在體外和體內都引發對人癌細胞的抗腫瘤效應(Mukhopadhyay等人，2002)。作為由Brugmans等人(1971)進行的研究的結果，第一次引入甲苯咪唑治療線蟲感染。其是系列作為用於動物和人用途的廣譜驅蟲藥(VandenBossche等人，1982)的廣泛用於動物和人的廣譜驅蟲藥(Michiels等人，1982)的原型。具有驅蟲特性的相關的苯並咪唑衍生物包括阿苯噠唑和氟苯達唑。其它的苯並咪唑是芬苯達唑、阿苯噠唑、阿苯噠唑碸、奧苯達唑、rycobendazole、噻苯達唑、奧芬達唑、氟苯達唑和卡苯達唑。甲苯咪唑導致受影響的蠕蟲的皮層細胞和腸細胞中的細胞質微管的選擇性消失。分泌物質在高爾基體區域積累，乙醯膽鹼酯酶的分泌和葡萄糖的吸收被損害，且糖原被耗盡。甲苯咪唑的這些作用在宿主細胞中未出現。甲苯咪唑在體外具有對寄生蟲微管蛋白的高親和力，但其也結合宿主微管蛋白。因此其選擇作用的生物化學基礎還不清楚。(參見VandenBossche，1981；Watts等人，1982)。甲苯咪唑是高親脂性的，具有小於1μg/ml的水溶解度。由此MZ的片劑吸收較差和不規律，血漿中藥物的濃度非常低從而不能反映被攝入的劑量(Witassek等人，1981)。因此，甲苯咪唑的常規製劑導致較低的藥物生物利用度和胃腸道的不穩定吸收。許多其他的苯並咪唑和苯並咪唑衍生物也是高度親脂性的且被胃腸道無規律吸收。因此，苯並咪唑在用於口服或局部施用的藥物製劑中可以是有利的。可通過各種途徑例如，但不限於皮內、胃腸外、靜脈內、肌內、鼻內和口服和局部施用來施用此處描述的各種化學治療劑的施用途徑。d.免疫療法一般地，免疫療法依賴於免疫效應細胞和分子靶向和破壞癌細胞的用途。免疫效應器可以是例如對於腫瘤細胞表面上的一些標記是特異性的抗體。所述抗體單獨地可用作療法的效應器或其可招募其他細胞以進行實際的細胞殺傷作用。也可將所述抗體綴合至藥物或毒素(化學治療劑、放射性核素、蓖麻毒素A鏈、霍亂毒素、百日咳毒素等)且只用作靶向試劑。可選擇地，所述效應器可以是具有直接或間接地與腫瘤細胞靶相互作用的表面分子的淋巴細胞。各種效應細胞包括細胞毒性T細胞和NK細胞。因此免疫療法可用作與此處所示的方法結合的組合療法的部分。下面描述用於組合療法的一般方法。一般地，腫瘤細胞必需具有易於靶向(即不存在於大部分其他細胞上的)一些標記。存在許多腫瘤標記且這些標記中的任一個可適合用於本發明的上下文中的靶向。常見的腫瘤標記包括癌胚抗原、前列腺特異性抗原、泌尿器官腫瘤相關性抗原(urinarytumorassociatedantigen)、胎兒抗原、酪氨酸酶(p97)、gp68、TAG-72、HMFG、SialylLewis抗原、MucA、MucB、PLAP、雌激素受體、層粘連蛋白受體、erbB和p155。e.基因在另一個實施方案中，第二療法是另外的基因療法，在所述療法中，在此處所示的藥物組合物施用之前、之後或同時施用其他形式的治療性核酸(例如，用於靜脈內遞送的核酸製劑)。因此，例如，本發明涉及可使用不止一種此處所示的用於遞送治療性或預防性核酸序列的方法治療受試者。在一些實施方案中，可使用同時編碼兩種基因的單個載體。f.其他癌症療法其他癌症療法的實例包括光療法、冷凍療法、毒素療法或激素療法。本領域技術人員知道該名單未窮舉可獲得的用於癌症或其他增生性病變的治療模式的類型。N.實施例下列實施例用於展示本發明的優選實施方案。本領域技術人員應當認識到後面的實施例中公開的技術代表了由本發明者發現在本發明的實施中良好地發揮功能的技術，因此可被認為組成了其實踐的優選模式。然而，在本公開內容的教導下，本領域技術人員應當認識到可在公開的特定實施方案中進行許多改變且該改變仍能獲得同樣或相似的結果而不背離本發明的精神和範圍。實施例1p53表達載體的構建本實施例涉及用於構建p53表達載體的示例性技術。按所示構建該載體並將其用於取代腺病毒株系AdS基因組的E1區域(1.3-9.2m.u.)和用於構建下面在實施例2中描述的腺病毒病毒體。將圖1中顯示的p53表達盒插入pXCJL1(由Dr.FrankL.Graham，McMasterUniversity，Canada提供)的XbaI和ClaI位點之間，所述表達盒包含人巨細胞病毒(CMV)啟動子(Boshart等人，1985)、p53cDNA和SV40早期多腺苷酸化信號。所述基因組的大小為35.4kb，分成100個圖譜單位(mapunit)(1m.u.＝0.35kb)。p53表達盒取代Ad5基因組的E1區域(1.3-9.2m.u.)。引物1具有序列5′-GGCCCACCCCCTTGGCTTC-3′(SEQIDNO1)且位於人CMV主要IE基因啟動子(Boshart等人，1985)下遊的第一內含子中。引物2具有序列5′-TTGTAACCATTATAAGCTGC-3′(SEQIDNO2)且位於SV40早期多腺苷酸化信號中。兩個引物與p53cDNA插入子的兩個末端相距15-20bp，其確定了1.40kb的PCR產物。引物3具有序列5′-TCGTTTCTCAGCAGCTGTTG-3′(SEQIDNO3)，引物4具有序列5′-CATCTGAACTCAAAGCGTGG-3′(SEQIDNO4)且分別位於Ad5基因組的11m.u.和13.4m.u.處，其確定了0.86kb的病毒基因組特異性PCR產物。使用本方法的變體構建這些載體的其他方法可用於構建p53表達載體。實施例2重組p53腺病毒的產生和增殖本實施例描述了適合用於產生表達p53的輔助細胞非依賴性重組腺病毒的示例性方法。用於產生重組腺病毒的分子策略基於下列事實，該事實是歸因於腺病毒的包裝限制，pJM17自身不能形成病毒。因此，在轉染的細胞內p53表達載體質粒和pJM17之間的同源重組導致只可在表達必需的腺病毒蛋白的細胞中包裝的有活力的病毒。本實施例的方法使用293細胞作為增殖病毒的宿主細胞，所述病毒在E1或E3區域包含異源DNA表達盒替代。該方法需要將DNA共轉染入293細胞。轉染主要決定病毒增殖的功效。在本發明之前用於將DNA轉染入293細胞的方法通常是磷酸鈣/DNA共沉澱(Graham和vanderEb，1973)。然而，該方法，與噬菌斑測定一起使用時，相對較困難且通常導致病毒增殖的低效率。如在本實施例中舉例說明的，當通過細胞病變效應(CPE)鑑定被轉染的細胞時，通過使用脂質體介導的轉染顯著地提高被感染的細胞的轉染和隨後的鑑定。將293細胞系保持在補充有10％熱滅活的馬血清的Dulbecco′s改良基本必需培養基中。按照廠商的方案(BoehringerMannheimBiochemicals，1992)通過DOTAP介導的轉染將用於同源重組的p53表達載體和質粒pJM17(McGrory，等人，1988)共轉染入293細胞。圖1示意性地顯示該方法。在轉染前在60mm培養皿或24孔板中溫育293細胞(第35代，60％匯合度)24小時。用30.mu.lDOTAP、2.mu.g的p53表達載體和3.mu.g質粒pJM17轉染各孔中的細胞。轉染後，每隔2至3天用MEM培養基飼養細胞直至CPE開始。使用本領域技術人員熟知的這些技術和/或其他技術的變體產生和增殖腺病毒載體的其他方法也可用於此。實施例3通過轉移的綠色螢光蛋白基因的端粒酶特異性擴增使用光學成像進行腫瘤體內檢測本實施例提供了用於體內研究的示例性方案，可進行該方案以確定編碼報告基因例如綠色螢光蛋白基因(gfp)的核酸表達構建體在鼠類模型中檢測腫瘤的能力。在初始輪的體內試驗中，可使用用人肺癌和結腸癌皮下注射的BALB/cnu/nu小鼠(Umeoka等人，2004)。例如，可用編碼只能夠在表達人端粒酶逆轉錄酶的細胞中表達gfp的核酸表達構建體治療動物，所述端粒酶逆轉錄酶在＞85％的人癌細胞中具有活性但在大多數正常細胞中不具活性。因此，hTERT啟動子優選地可作為驅動gfp表達的組織選擇性啟動子，因為hTERT表達的正常產物是人端粒酶逆轉錄酶。例如，可在用人肺癌和結腸癌皮下注射的BALB/cnu/nu小鼠中就抗腫瘤活性的腫瘤檢測對核酸表達構建體進行體內檢測，所述構建體編碼在hTERT啟動子有效控制下的gfp。然後可在螢光顯微鏡例如EclipseTS-100螢光顯微鏡(Nikon，Tokyo，Japan)下通過光學檢查腫瘤組織樣品估量核酸表達構建體的效果，所述核酸表達構建體編碼在hTERT啟動子有效控制下的gfp。實施例4使用編碼腫瘤抑制基因的核酸表達構建體體內預防胃的腫瘤發展本實施例提供了體內研究的實例，可進行該體內研究以確定編碼腫瘤抑制基因的核酸表達構建體在鼠類模型中抑制癌症的能力。在初始輪的體內試驗中，可使用人胃和食管癌的小鼠模型(Dumon等人，2001)。例如，Fhit-/-小鼠在暴露於致癌物N-亞硝基甲基苄胺(NMBA)後對致癌物誘導的食管和賁門竇中的腫瘤發展易感。可用編碼人FHIT腫瘤抑制基因的核酸表達構建體處理動物以確定腫瘤發展的抑制。例如，在暴露於NMBA的Fhit-/-小鼠或本領域技術人員已知的癌症的任何其他鼠類模型中就抗腫瘤活性體內檢測編碼人FHIT腫瘤抑制基因的核酸表達構建體。與這些研究相結合，可在鼠類模型中估量編碼人FHIT腫瘤抑制劑基因的核酸表達構建體的抗腫瘤活性。簡而言之，可在用致癌物例如NMBA預處理後，用編碼人FHIT腫瘤抑制基因的核酸表達構建體處理合適的癌症模型的不同小鼠組。可檢測編碼人FHIT腫瘤抑制基因的核酸表達構建體的幾個組合和濃度。對照小鼠應當只用NMBA進行預處理。然後可通過腫瘤大小的檢查和蘇木精和伊紅染色的腫瘤組織的組織病理學檢查比較編碼人FHIT腫瘤抑制基因的核酸表達構建體對處理小鼠相對於對照組的癌症發展的影響。也可通過將樣品組織與抗人Fhit蛋白的C末端的兔抗人Fhit抗體一起溫育，然後再與生物素化山羊抗兔抗體溫育來進行免疫組織化學檢查。實施例5AdCMV-p53具有兩周觀察期的小鼠中的單劑口服生物分布研究方法在施用8.3×1010(組2)、8.3×1011(組3)或8.3×1012(組4)vp/kg的單次口服強飼劑量(oralgavagedose)後，在C57BL/6N小鼠中評估AdCMV-p53的生物分布。各處理組由6隻雄性和6隻雌性小鼠組成；相同大小的對照組(組1)只接受媒介物。在處理後第4或第15天，按下列順序收集組織樣品卵巢/睪丸、肝臟、腎、腎上腺、脾、胃、淋巴結、迴腸、直腸、心臟、肺、食管、肌肉、股骨、大腦和脊髓。將組織在液氮中快速冷凍並在-70±10℃下貯存。從眶後竇(retro-orbitalsinus)抽取血液樣品放入無菌EDTA血液收集管中，在4±2℃下貯存並在3天內進行處理以提取DNA。從冷凍的組織樣品中分離基因組DNA。各組DNA提取物包括來自單個動物的所有組織。首先對來自組1(對照)動物的組織進行提取，然後提取來自組2、3和4的組織。通過在260nm處的吸光率來定量組織和血液DNA樣品並將其在低於-15℃的條件下貯存直至使用。使用實時PCR(PCR)進行定量PCR分析。引物產生包含CMV啟動子和非翻譯的p535』區域之間的接合處的70bp擴增產物。PREYF5』TTATGCGACGGATCCCGTAA3』(SEQIDNO5)PREYR5』GCGTGTCACCGTCGTACGTA3』(SEQIDNO6)探針5』CTTCGAGGTCCGCGGCCG3』(SEQIDNO7)測定靈敏度為0.5μg小鼠基因組DNA中100個載體DNA拷貝，且在模板在從100至105個拷貝的範圍內變動時為線性。各96孔PCR反應板包含不含DNA的負對照以鑑定汙染的不存在，系列10倍稀釋的AdCMV-p53DNA用於產生標準曲線。以兩份重複進行各PCR反應，其中一份摻入AdCMV-p53DNA以確定不存在PCR抑制劑。通過將未摻入的樣品標繪在標準曲線上來定量陽性樣品。PCR分析的結果表示為拷貝數/0.5μg小鼠組織DNA。值大於10個拷貝的樣品被認為是陽性的。然而，因為不能恆定地獲得10個拷貝的檢測，10和100個拷貝之間的值可能是不精確的，因為其基於標準曲線被ABI7700以內插入值替換。結果實時PCR分析恆定地檢測0.5μgDNA中的100個拷貝的AdCMV-p53DNA。10至100拷貝/0.5μgDNA的載體DNA水平被認為是低的(且不能被恆定地檢測)，100-1000個拷貝/0.5μgDNA為中等水平，1000個拷貝以上/0.5μgDNA為高水平。低於10個拷貝/0.5μgDNA的Ad5CMV-p53DNA水平被定義為不可計量的，因為假陰性可從樣品中的少數拷貝的隨機組合產生。在高劑量組(8.3×1012vp/kg)中，對於劑量給藥後第4天收集的組織和血液樣品，在至少一個動物的肝、胃、肺、食管、肌肉、腦、脊髓和血液中檢測到處於中等水平或更高水平(超過每0.5μgDNA100拷貝)的AdCMV-p53DNA(表9)。在第15天時，只有來自高劑量組的肺樣品保持中等水平或高於中等水平的陽性。在第4天在中等劑量組(8.3×1011vp/kg)中，來自胃、肺、食管和血液的樣品在中等水平或高於中等水平上呈陽性。在第15天時，在來自中等劑量動物的樣品中，在腎上腺、心臟、肺、食管、肌肉和脊髓發現以中等水平或高於中等水平存在的AdCMV-p53DNA。在低劑量組(8.3×1010vp/kg)中，在第4天只有來自受試的肺和血液樣品對於中等水平或高於中等水平的AdCMV-p53DNA呈陽性。在低劑量AdCMV-p53施用之後第15天，來自肺、食道和骨的樣品在中等水平或更高水平上呈陽性。在任何對照樣品中未檢測到可定量的信號。下表列出了各種器官和組織中的AdCMV-p53DNA平均量和在每0.5μg小鼠基因組DNA＞10個拷貝的AdCMV-p53上呈陽性的樣品的數目。絕大多數陽性樣品是零星發生的。在給定的劑量和時間點所有樣品都呈陽性的唯一器官是中等劑量動物(大約200拷貝/0.5ug)中的血液。其中6個樣品中≥4個樣品呈陽性的器官都在高劑量組中肺(240,000個拷貝/0.5ug)、食管(900個拷貝/0.5ug)、血液(250個拷貝/0.5ug)和胃(110個拷貝/0.5ug)。結論在AdCMV-p53的單次口服劑量後，AdCMV-p53DNA主要位於肺和食管中。在第4天，除了血液、肺和食管例外，AdCMV-p53DNA的表現在大多數器官中呈零星的或陰性的。在第15天時，在低劑量和中等劑量動物中，對於Ad5CMV-p53DNA呈陽性的器官比第4天時的多。在高劑量動物中，陽性器官的數目和器官中的AdCMV-p53DNA的絕對滴度從第4天至第15天減少。本研究中AdCMV-p53DNAPCR信號強度的劑量和時間依賴性不遵從在大多數其他生物分布研究中看到的趨勢(劑量越高和時間越短則信號越強)。首先，在第15天檢測到存在AdCMV-p53DNA的器官比第4天的多(在低和中等劑量的組中)，表明使用口服施用途徑的緩慢散播。第二，在第4天AdCMV-p53DNA的水平和散播是劑量依賴性的，但在第15天不是。在第15天，AdCMV-p53DNA的量在來自高劑量動物的器官中比來自中等劑量動物的器官(肺例外)中的低，且甚至在來自高劑量動物的許多器官中的量比來自低劑量動物的器官中的量更低。實施例6估量治療性或診斷性核酸的製劑的功效的測定通過使用本說明書的教導和本領域技術人員的知識，可估量核酸的各種製劑的功效。本領域技術人員理解作為治療性或檢測性試劑的特定核酸的製劑的功效依賴於許多因素，例如核酸的濃度、pH、製劑的溫度、製劑的其他組分等。例如，可通過本領域技術人員已知的許多技術中的任一技術就治療功效檢查特定核酸的各種製劑(其中這些因素中的任何因素或所有因素都是可改變的)。例如，如果被治療或預防的疾病是過度增生性疾病例如癌症，那麼可使用合適的人癌症的體內模型例如具有移植的腫瘤細胞的裸鼠評估這些製劑的治療功效。例如，可確定特定的製劑是否顯示在動物模型中減小腫瘤大小的功效。可在動物模型中評價製劑使用的頻率和方法。可使用本領域技術人員熟知的信息估量治療性反應和副作用的存在或不存在。關於診斷性核酸例如編碼報告蛋白的核酸，可使用本領域技術人員熟知的許多技術中的任一技術進行估量可檢測蛋白在動物模型的細胞中存在或不存在的研究。例如，可進行使用技術例如實施例4中所示的技術進行的光學成像並與合適的對照比較。實施例7核酸製劑用於在疾病治療的局部遞送中的用途的臨床試驗-一般考慮本實施例總地來說涉及使用本發明的核酸製劑的人治療方案的發展。特別地，這樣的治療可用於各種疾病的治療，在所述各種疾病的治療中，已知或認為施用核酸是有益處的。這些疾病的治療實例包括過度增生性疾病例如癌症的治療、傷口癒合和感染的治療。在下面的實施例中描述關於癌症的更詳細的實例。進行臨床試驗的各種基礎條件，包括臨床患者的治療和臨控，在本公開內容的教導下對於本領域技術人員來說是已知的。下列信息可用作用於建立核酸製劑在臨床試驗中的用途的一般指導方針。患有被靶向的疾病的患者可以是新診斷的患者或具有已有疾病的患者。具有已有疾病的患者可包括不能對常規治療的至少一個療程起反應的患者。可單獨地或與另一種治療劑一起施用核酸製劑。可按照本說明書中所示的任何方法例如局部施用和口服施用來施用治療性核酸。可在治療的過程中例如除去患病組織的手術切除中施用所述藥物。起始劑量可以是，例如，0.5mg/kg體重。可在確定的毒性水平不存在的情況下在各劑量水平上治療三個患者。可以100％的增量(例如，0.5mg、1mg、2mg、4mg)進行劑量增加直至特定水平的藥物相關性毒性發生。此後可以25％的增量進行劑量增加。可分次進行施用的劑量。可在數天或數周的時期內一次或多次施用核酸製劑。可單獨地或與其他藥物一起施用。可在治療之前和之後大約3-4周的間隔進行專門針對被治療的疾病的體格檢查、實驗室檢驗和其他臨床研究。實驗室研究可包括確定疾病的程度或確定現有症狀的原因的CBC、血小板分類計數(differentialandplateletcount)、尿檢驗、SMA-12-100(肝和腎功能檢驗)、凝血功能檢查(coagulationprofile)和任何其他合適的化學研究。可按照本領域技術人員的任何方法確定對治療的反應，所述反應極大地依賴於被治療的病症。例如，當疾病是癌症時，可通過腫瘤大小的減少估量反應。可通過估量傷口大小和/或臨床表現來估量傷口癒合。實施例8核酸製劑用於在癌症的治療中的局部或口服遞送的用途的臨床試驗本實施例描述了可用於使用此處所示的核酸製劑治療人癌症患者的示例性方案。患者可以但不必已接受化學、放射或基因治療療法。最佳情況是患者可展示充分的骨髓功能(例如，＞2,000/mm3的外周粒細胞絕對計數和100,000/mm3的血小板計數，充分的肝功能(膽紅素1.5mg/dl)和充分的腎功能(例如，肌酸酐1.5mg/dl)。所述核酸製劑可以是此處所示的任何製劑，例如適合於局部或口服施用的製劑。所述製劑可在包含上面所示的任何媒介物、佐劑和載體的劑量單位製劑中包含一種或多種治療性核酸。所述組合物可口服攝入或局部施用，例如使用塗藥器。當使用組合療法時，可在使用其他抗癌藥之前、之後或同時施用所述組合物。在一個實例中，療程可包括在7至21天的時段中遞送大約6劑藥物。在臨床醫生選擇後，所述方案在每三周或在更少頻率(每月、每兩月、每季等)的基礎上繼續使用6劑。當然，這些只是示例性的治療次數，熟練的醫生可容易地認識到也可能使用許多其他的時程(time-course)。在一些實施方案中，施用可使核酸組合物局部用於皮膚或黏膜表面。在另一個實施方案中，可在腫瘤切除後將導管插入術後傷口內，可持續地對腔進行輸注，進行想要的時間。可通過本領域技術人員已知的可接受的度量確定臨床反應。例如，可通過所有可測量的疾病消失至少一個月來定義完全反應。同時可通過所有可估量的腫瘤節(tumornodules)的垂直直徑的乘積總和的50％或更大的減少或至少一個月內沒有顯示腫瘤位點的擴大來定義部分反應。類似地，可通過所有可測量的病變的垂直直徑的乘積減少50％或更多和一個或多位點的進程的減緩來定義混合反應。本領域技術人員可採用在本說明書中公開的信息來最優化治療方案。實施例9核酸製劑用於傷口的治療的用途的臨床試驗通過使用本說明書的教導和本領域技術人員的知識，可設計可用於使用此處所示的一種核酸製劑(例如包含編碼生長因子的核酸的製劑)在人受試者中促進傷口的治療的方案。所述傷口可以是例如術後傷口(例如腫瘤切除後的傷口)或外傷性傷口。通常可以包含上面所示的媒介物、佐劑和載體的單位劑量製劑將本發明的組合物局部施用至傷口。在某些情況下，所述製劑可包含編碼抗癌藥例如腫瘤抑制基因(除生長因子外)的核酸。此外，可以和或可以不和傷口的其他標準療法例如抗生素療法一起施用治療性核酸。當使用組合療法時，可在任何第二治療劑施用之前、之後或同時施用治療性核酸。當傷口是手術傷口時，可在手術方法之前、之後或同時施用療法。例如，療程可包括在1至6天的時段遞送大約6劑藥物。在臨床醫生選擇後，可在更多或更少頻率的基礎上持續進行該方案。當然，這些只是治療的示例性次數，熟練的醫生可容易地認識到可能使用許多其他時程。對治療的反應可能是確定劑量方案的至關重要的因素。在一個實施方案中，施用可僅使治療性組合物局部用於傷口。在另一個實施方案中，可將導管插入傷口並持續輸注傷口，進行想要的時間。可通過本領域技術人員已知的任何可接受的度量確定臨床反應，所述度量是例如傷口癒合跡象的目測，例如傷口大小的減小、炎症的減少等。********在本公開內容的教導下可產生和執行此處公開和聲明的所有組合物和方法而無需過多的實驗。儘管已以優選實施方案的方式描述了本發明的組合物和方法，但對於本領域技術人員很明顯的是可對此處描述的組合物和方法以及方法的步驟或步驟的順序進行改變但不背離本發明的概念、精神和範圍。更特別地，很明顯某些在化學和生理學上相關的試劑可用於替代此處描述的試劑但可獲得相同或相似的結果。對於本領域技術人員來說所有這些明顯的相似的替代物和改變被認為在所附的權利要求確定的本發明的精神、範圍和概念之內。參考文獻下列參考文獻，在其為此處提供示例性程序或其他詳細內容補充的程度上，明確地在此引用作為參考。美國專利6,348,502美國專利4,112,942美國專利4,321,251美國專利4,372,944美國專利4,415,723美國專利4,458,066美國專利4,469,863美國專利4,526,899美國專利4,627,979美國專利4,682,195美國專利4,683,202美國專利4,797,368美國專利4,868,168美國專利4,898,592美國專利4,919,918美國專利4,946,778美國專利5,023,243美國專利5,078,993美國專利5,139,941美國專利5,158,761美國專利5,194,269美國專利5,250,298美國專利5,264,618美國專利5,354,855美國專利5,372,801美國專利5,423,803美國專利5,456,918美國專利5,459,127美國專利5,470,561美國專利5,571,314美國專利5,599,712美國專利5,645,897美國專利5,652,194美國專利5,660,866美國專利5,672,344美國專利5,681,827美國專利5,695,746美國專利5,770,219美國專利5,783,208美國專利5,795,715美國專利5,830,499美國專利5,861,397美國專利5,874,094美國專利5,888,493美國專利5,888,773美國專利5,889,136美國專利5,914,334美國專利5,925,565美國專利5,928,906美國專利5,935,819美國專利5,993,785美國專利5,994,317美國專利6,024,733美國專利6,086,852美國專利6,117,417美國專利6,119,036美國專利6,140,355美國專利6,147,055美國專利6,165,494美國專利6,165,615美國專利6,166,004美國專利6,166,043美國專利6,166,084美國專利6,171,611美國專利6,194,388美國專利6,206,646美國專利6,207,646美國專利6,221,712美國專利6,251,370美國專利6,258,374美國專利6,258,830美國專利6,261,574美國專利6,267,984美國專利6,269,810美國專利6,273,884美國專利6,280,752美國專利6,280,766美國專利6,299,631美國專利6,309,387美國專利6,310,036美國專利6,329,337美國專利6,333,194美國專利6,339,068美國專利6,348,187美國專利6,348,450美國專利6,348,502美國專利6,387,352美國專利6,399,588美國專利6,503,481美國專利6,508,647美國專利6,551,578美國專利6,555,131美國專利6,555,376美國專利6,558,043美國專利6,588,043美國專利6,596,318美國專利6,610,272美國專利6,620,451美國專利6,629,091美國專利6,629,974美國專利6,670,332美國專利6,673,863美國專利6,705,316美國專利6,721,595美國專利6,723,114美國專利6,797,704美國專利6,828,308美國專利6,835,392美國專利6,841,539美國專利6,881,776美國專利6,887,856美國專利6,923,976美國專利6,939,859美國專利6,942,878美國專利6,946,144美國專利6,967,023美國專利6,982,091美國申請20020028785美國申請20020037323美國申請20020044910美國申請20020045148美國申請20020116026美國申請20030119985美國申請20030152530美國申請20040018155美國申請20040076590美國申請20040146919美國申請20040199207美國申請20040213764美國申請20050143336美國申請20050196343美國申請20050203047美國申請20050260276美國申請系列09/351,778Agrawal，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，917595，1991.Akomeah等人，Eur.J.Pharm.Sci.，21(2-3)337-45，2004.Aksentijevich等人，Hum.GeneTher.，7(9)1111-1122，1996.AlamandCook，Anal.Biochem.，188245-254，1990.AlauddinandConti，Nucl.Med.Biol.，25(3)175-1801998.Alauddin等人，Nucl.Med.Biol.，23(6)787-7921996.Angel等人，Cell，49729，1987b.Angel等人，Mol.Cell.Biol.，72256，1987a.Atchison和Perry，Cell，46253，1986.Atchison和Perry，Cell，48121，1987.Atiyeh等人，InStateoftheArtinBurnTreatment，WorldJ.Surgery，2005.Auricchio等人，Hum.GeneTher.，14(3)255-261，2003.Banerji等人，Cell，27(2Pt1)299-308，1981.Banerji等人，Cell，33(3)729-740，1983.Bates等人，Nature，395124-125，1998.Batterson和Roizman，J.Virol.，46(2)371-377，1983.Baxter和Mitragotri，J.Control.Release，106(3)361-73，2005.Bedi等人，CancerRes.，56(11)2484-2487，1996.Berkhout等人，Cell，59273-282，1989.Bernstein等人，Nature，409363-366，2001.Bianco，ExpertOpin.DrugDeliv.，1(1)57-65，2004.Blanar等人，EMBOJ.，81139，1989.Blasberg，Mol.CancerTher.，2(3)335-343，2003.Blasberg，Nucl.Med.Biol.，30(8)879-888，2003.Block，InPharmaceuticalDosageForms，Lieberman等人(Eds.)，MarcelDekker，NY，1335，1988.Blumberg等人，Cell，104(1)9-19，2001.Bodine和Ley，EMBOJ.，62997，1987.BokandBok，InManualofWoundManagementandHealing，McGraw-HillProfessional，第1版，2004.Boshart等人，Cell，41521，1985.Bosze等人，EMBOJ.，5(7)1615-1623，1986.Braddock等人，Cell，58269，1989.Bramson等人，GeneTher.，10(3)251-60，2003.Brennecke等人，Cell，11325-36，2003.Brugmans等人，JAMA，217313-316，1971.BullaandSiddiqui，J.Virol.，621437，1986.Burns等人，InDermatology--Rook′sTextbookofDermatology，Burns等人，(Eds.)，，BlackwellPublishers；7thEd.，2004.Caley等人，J.Virology，71(4)3031-3038，1997.Campbell和Villarreal，Mol.Cell.Biol.，81993，1988.Campere和Tilghman，GenesandDev.，3537，1989.Campo等人，Nature，30377，1983.Caplen等人，Gene，252(1-2)95-105，2000.Carbonelli等人，FEMSMicrobiol.Lett.，177(1)75-82，1999.Celander和Haseltine，J.Virology，61269，1987.Celander等人，J.Virology，621314，1988.Chandler等人，Cell，33489，1983.Chandler等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94(8)3596-601，1997.Chang等人，Hepatology，14134A，1991.Chang等人，Mol.Cell.Biol.，92153，1989.Chatterjee等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，869114，1989.Choi等人，Cell，53519，1988.Clark等人，Hum.GeneTher.，6(10)1329-1341，1995.Clayman等人，CancerRes.，55(14)1-6，1995.Cocea，Biotechniques，23(5)814-816，1997.Coffin，InVirology，Fields等人(Eds.)，RavenPress，NY，1437-1500，1990.Cohen等人，J.Cell.Physiol.，575，1987.Cook等人，Cell，27487-496，1981.Costa等人，Mol.Cell.Biol.，881，1988.Couch等人，Am.Rev.Resp.Dis.，88394-403，1963.Cowdery等人，J.Immunol.，1564570-4575，1996Cripe等人，EMBOJ.，63745，1987.CulottaandHamer，Mol.Cell.Biol.，91376，1989.Dalgleish，ExpertRev.Vaccines，3(6)665-668，2004.Dandolo等人，J.Virology，4755-64，1983.Davisetal，Curr.Biol.，6146-148，1996.DeVilliers等人，Nature，312(5991)242-246，1984.deWaal等人，J.Exp.Med.，17412091220，1991.DeLuca等人，J.Virol.，56(2)558-570，1985.Deschamps等人，Science，2301174-1177，1985.DevulapalleandMooser，J.Dent.Res.，80(2)466-469，2001.Doench等人，GenesDev.，17438-42，2003.Doerr，Nat.Methods，2(11)808，2005.Doukas等人，HumGeneTher.，12(7)783-98，2001.DuandZamore，Development，132(21)4645-4652，2005.Dubey等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，100(3)1232-1237，2003.Dumon等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，98(6)3346-33512001.Dumoutier等人，J.Immunol.，164(4)1814-1819.，2000.Edbrooke等人，Mol.Cell.Biol.，91908，1989.Edlund等人，Science，230912-916，1985.Eicher等人，Clin.CancerRes.，2(10)1659-1664，1996.Ekmekcioglu等人，Int.J.Cancer，94(1)54-59，2001.Ekmekciouglu等人，MelanomaRes.，9(3)261-272，1999.Elbashir等人，EMBO，20(23)6877-6888，2001.Elbashir等人，EMBO，20(23)6877-6888，2001.Elbashir等人，GenesDev.，5(2)188-200，2001.Elbashir等人，GenesDev.，5(2)188-200，2001.Elroy-Stein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86(16)6126-6130，1989.Eriksson和Vranckx，Am.J.Surg.，188(1ASuppl)36-41；2004.Feng和Holland，Nature，3346178，1988.FergusonandO』Kane，Biol.Sci.，359(1445)839-850，2004.Finn等人，CancerChemother.Biol.ResponseModif.，21223-233，2003.Finn，Nat.Rev.Immunol.，3(8)630-641，2003.FirakandSubramanian，Mol.Cell.Biol.，63667，1986.Fire等人，Nature，391(6669)806-811，1998.Flotte和Carter，GeneTher.，2(6)357-62，1995.Flotte等人，Am.J.Respir.CellMol.Biol.，7(3)349-356，1992.Flotte等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90(22)10613-10617，1993.Foecking和Hofstetter，Gene，45(1)101-105，1986.Forster和Symons，Cell，49(2)211-220，1987.Fraley等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，763348-3352，1979.Friedman和Platzer，Biochim.Biophys.Acta，544605-614，1978.Friedman和Platzer，Biochim.Biophys.Acta，630271-278，1980.Fujita等人，Cell，49357，1987.Gabizon等人，CancerRes.，50(19)6371-6378，1990.Gallichan等人，JInfectDis.，168(3)622-629，1993.Gallichan和Rosenthal，J.Exp.Med.，194(5)1879-1990，1996.Gallichan和Rosenthal，Vaccine，13(16)1589-1595，1995.Gallagher等人，GenesImmun.，1(7)442-450，2000.Gambhir等人，J.Nucl.Med.，39(11)2003-2011，1998.Gerlach等人，Nature(London)，328802-805，1987.GhoshandBachhawat，InLiverDiseases，TargetedDiagnosisandTherapyUsingSpecificReceptorsandLigands，Wu等人(Eds.)，MarcelDekker，NY，87-104，1991.Ghosh-Choudhury等人，EMBOJ.，61733-1739，1987.Gilles等人，Cell，33717，1983.Glorioso等人，Mol.Biotechnol.，4(1)87-99，1995.Gloss等人，EMBOJ.，63735，1987.Godbout等人，Mol.Cell.Biol.，81169，1988.Gomez-Foix等人，J.Biol.Chem.，26725129-25134，1992.Goodbourn和Maniatis，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，851447，1988.Goodbourn等人，Cell，45601，1986.Goodchild，BioconjugateChem.，1165□187，1990.Gottschall等人，Endocrinology，127(1)272-277，1990.Graham和Prevec，InMethodsinMolecularBiologyGeneTransferandExpressionProtocol，Murray(Ed.)，HumanaPress，NJ，7109-128，1991.GrahamandVanDerEb，Virology，52456-467，1973.Graham等人，J.Gen.Virl.，36(1)59-74，1977.Greene等人，ImmunologyToday，10272，1989Grishok等人，Cell，10623-34，2001.Grishok等人，Science，2872494-2497，2000.Grosschedl和Baltimore，Cell，41885，1985.Grunhaus和Horwitz，SeminarinVirology，3237-252，1992.Gu等人，Mol.Ther.，9(5)699-711，2004.Guo等人，J.Dent.Res.，83(3)266-270，2004.Halpern等人，CellImmunol.，167(1)72-78，1996.Haslinger和Karin，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，828572，1985.Hauber和Cullen，J.Virology，62673，1988.Hellstrom和Hellstrom，ExpertRev.Vaccines，2(4)517-532，2003.Hen等人，Nature，321249，1986.Hensel等人，LymphokineRes.，8347，1989.Hermonat和Muzycska，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，816466-6470，1984.Herr和Clarke，Cell，45461，1986.Hersdorffer等人，DNACellBiol.，9713-723，1990.Herz和Gerard，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，902812-2816，1993.Higuchi等人，Remington′sPharmaceuticalSciences，MackPublishingCo.，Easton，Pa.，301，1985.Hirochika等人，J.Virol.，612599，1987.Hirsch等人，Mol.Cell.Biol.，101959，1990.Holbrook等人，Virology，157211，1987.Holland和Holland，JBiolChem，255(6)2596-605，1980.Honess和Roizman，J.Virol.，14(1)8-19，1974.Honess和Roizman，J.Virol.，16(5)1308-130826.1975.Hooper等人，J.Biolumin.Chemilumin.，5(2)123-130，1990.Horlick和Benfield，Mol.Cell.Biol.，92396，1989.Horwich，等人，J.Virol.，64642-650，1990.Huang等人，Cell，27245，1981.Hug等人，Mol.Cell.Biol.，83065，1988.HutvagnerandZamore，Science，297(5589)2056-2060，2002.Hutvagner等人，Science，293834-838，2001.Hwang等人，Mol.Cell.Biol.，10585，1990.Idson，InPharmaceuticalDosageForms，Lieberman(Eds.)，1199，1988.Imagawa等人，Cell，51251，1987.Imbra和Karin，Nature，323555，1986.Imler等人，Mol.Cell.Biol.，72558，1987.Imperiale和Nevins，Mol.Cell.Biol.，4875，1984.Jakobovits等人，Mol.Cell.Biol.，82555，1988.Jameel和Siddiqui，Mol.Cell.Biol.，6710，1986.Jaynes等人，Mol.Cell.Biol.，862，1988.Jiang等人，Nature，375151-155，1995.Jiang等人，Oncogene，11(12)2477-2486，1995.Jiang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93(17)9160-9165，1996.Johnson等人，Mol.Cell.Biol.，93393，1989.JonesandShenk，Cell，13181-188，1978.Joyce，Nature，338217-244，1989.Kadesch和Berg，Mol.Cell.Biol.，62593，1986.Kaneda等人，Science，243375-378，1989.Kaplitt等人，NatGenet.，8(2)148-154，1994.Karin等人，Mol.Cell.Biol.，7606，1987.Karin等人，Mol.Cell.Biol.，7606，1987.Karlsson等人，EMBOJ.，52377-2385，1986.Katinka等人，Cell，20393，1980.Kato等人，J.Biol.Chem.，2663361-3364，1991.Kawamoto等人，Mol.Cell.Biol.，8267，1988.Ketting等人，Cell，99(2)133-141，1999.Ketting等人，GenesDev.，15(20)2654-2659，2001.Khuri等人，J.Natl.CancerInst.，89(3)199-211，1997.Kiledjian等人，Mol.Cell.Biol.，8145，1988.KimandCook，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84(24)8788-8792，1987.Klamut等人，Mol.Cell.Biol.，10193，1990.Klinman，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93(7)2879-2883，1996.Knapp等人，Atherosclerosis，152(1)217-227，2000.KnightandBass，Science，22，2001.Koch等人，Mol.Cell.Biol.，9303，1989.Koehne等人，Nat.Biotechhol.，21(4)405-413，2003.Kohler和Bachmann，Mol.Biochem.Parasitol.，4(5-6)325-336，1981.Kornberg和Baker，DNAReplication，2ndEd.，Freeman，SanFrancisco，1992.Kotenko等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，97(4)1695-1700，2000.Kotin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87(6)2211-2215，1990.Krieg等人，Nature，374546-549，1995.Kriegler和Botchan，InEukaryoticViralVectors，Gluzman(Ed.)，ColdSpringHarborColdSpringHarborLaboratory，NY，1982.Kriegler和Botchan，Mol.Cell.Biol.，3325，1983.Kriegler等人，Cell，38483，1984.Kriegler等人，Cell，5345，1988.Kuhl等人，Cell，501057，1987.Kundra等人，J.Nucl.Med.，43(3)406-412，2002.Kundra等人，QJNucl.Med.Mol.Imaging，49(4)325-338.2005.Kunz等人，Nucl.AcidsRes.，171121，1989.Lacey和Watson，Biochem.Pharmacol.，341073-1077，1989.Lacey，Int.J.Parasitol.，18(7)885-936，1988.LaFace等人，Virology，162(2)483-486，1988.Larsen等人，ProcNatl.Acad.Sci.USA.，838283，1986.Laspia等人，Cell，59283，1989.Latimer等人，Mol.Cell.Biol.，10760，1990.Laughlin等人，J.Virol.，60(2)515-524，1986.LeGalLaSalle等人，Science，259988-990，1993.Lebkowski等人，Mol.Cell.Biol.，8(10)3988-3996，1988.Lee等人，Nature，294228，1981.Lee等人，NucleicAcidsRes.，124191-206，1984.Levenson等人，Hum.GeneTher.，9(8)1233-1236，1998.Levinson等人，Nature，29579，1982.Levrero等人，Gene，101195-202，1991.Liang等人，NucleicAcidsRes.，333(19)e170，2005.LinandAvery，Nature，402128-129，1999.Lin等人，Mol.Cell.Biol.，10850，1990.Linchey和Fridovich，FreeRadic.Biol.Med.，23(4)668-671，1997.Liu等人，CancerRes..，55(14)3117-3122，1995.Luria等人，EMBOJ.，63307，1987.LuskyandBotchan，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，833609，1986.Lusky等人，Mol.Cell.Biol.，31108，1983.Lydiatt等人，Cancer，82(7)1376-1380，1998.Macejak和Sarnow，Nature，35390-94，1991.MacLaren等人，GeneTher.，6785-791，1999.Majors和Varmus，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，805866，1983.Mann等人，Cell，33153-159，1983.Markowitz等人，J.Virol.，621120-1124，1988.McCarty等人，J.Virol.，65(6)2936-2945，1991.McGrory等人，Virology，163(2)614-617，1988.McLaughlin等人，J.Virol.，62(6)1963-1973，1988.McNeall等人，Gene，7681，1989.Messina等人，J.Immunol.，147(6)1759-17641991.Michel和Westhof，J.Mol.Biol.，216585-610，1990.Michiels等人，Arch.Int.PharmacodynTher.，256(2)180-191，1982.Miksicek等人，Cell，46203，1986.Montgomery等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，9515502-15507，1998.Mordacq和Linzer，GenesandDev.，3760，1989.Moreau等人，Nucl.AcidsRes.，96047，1981.Mourelatos等人，GenesDev.，16(6)720-728，2002.Muesing等人，Cell，48691，1987.Mukhopadhyay等人，Clin.CancerRes.，8(9)2963-2969，2002.Muzyczka，Curr.TopicsMicrobiol.Immunol.，15897-129，1992.Neville等人，InDentistry--Oral&MaxillofacialPathology，WBSaunders；2ndEd.，2001.Ng等人，Nuc.AcidsRes.，17601，1989.Nicolas和Rubenstein，InVectorsAsurveyofmolecularcloningvectorsandtheiruses，RodriguezandDenhardt(Eds.)，StonehamButterworth，494-513，1988.Nicolau和Sene，Biochim.Biophys.Acta，721185-190，1982.Nicolau等人，MethodsEnzymol.，149157-176，1987.Ohi等人，Gene，89(2)279-282，1990.Ondek等人，EMBOJ.，61017，1987.Ornitz等人，Mol.Cell.Biol.，73466，1987.Palmiter等人，Nature，300611，1982.Paskind等人，Virology，67242-248，1975.PCTAppln.WO00/44914PCTAppln.WO01/36646PCTAppln.WO01/68836PCTAppln.WO0208436PCTAppln.WO0231168PCTAppln.WO0285287PCTAppln.WO0333029PCTAppln.WO98/07408PCTAppln.WO99/32619Pech等人，Mol.Cell.Biol.，9396，1989.Pelletier和Sonenberg，Nature，334(6180)320-325，1988.Perez-Stable和Constantini，Mol.Cell.Biol.，101116，1990.PicardandSchaffner，Nature，30783，1984.Pinkert等人，GenesandDev.，1268，1987.Plotkin等人，InVaccines，W.B.SaundersCompany，第4版.，2003.Ponta等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，821020，1985.Porton等人，Mol.Cell.Biol.，101076，1990.Post等人，Cell，24(2)555-65，1981.Queen和Baltimore，Cell，35741，1983.Quinn等人，Mol.Cell.Biol.，94713，1989.Racher等人，BiotechnologyTechniques，9169-174，1995.Ragot等人，Nature，361647-650，1993.Redondo等人，Science，2471225，1990.Reinhart等人，Nature，403901-906，2000.Reinhold-Hurek和Shub，Nature，357173-176，1992.Reisman和Rotter，Mol.Cell.Biol.，93571，1989.Renan，Radiother.Oncol.，19197-218，1990.ResendezJr.等人，Mol.Cell.Biol.，84579，1988.Rich等人，Hum.GeneTher.，4461-476，1993.Ripe等人，Mol.Cell.Biol.，92224，1989.Rittling等人，Nuc.AcidsRes.，171619，1989.Robinson等人，InVaccineProtocols(MethodsinMolecularMedicine)，HumanaPress，第2版，2003.Rosen等人，Cell，41813，1988.Rosenberg等人，Science，223218-1321，1986.Rosenfeld等人，Science，252431-434，1991.Rosenfeld，等人，Cell，68143-155，1992.Rosoff，InPharmaceuticalDosageFormsTablets，第2版，1245，Lieberman等人(Eds.)，1989.Roux等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，869079-9083，1989.Russell等人，BiochemPharmacol.，43(5)1095-1100，1992.Sakai等人，GenesandDev.，21144，1988.Sambrook等人，InMolecularcloning，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY，2001.Samulski等人，J.Virol.，633822-3828，1989.Sarver等人，Science，2471222-1225，1990.Sasaki等人，Mol.CancerTher.，1(13)1201-1209，2002.Satake等人，J.Virology，62970，1988.Saxenaetal，J.Biol.Chem.，278(45)44312-44319，2003.Scanlon等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，8810591-10595，1991.Schaefer等人，CellSignal，12(3)143-151，2000.Schaffner等人，J.Mol.Biol.，20181，1988.Scheit，InSynthesisandBiologicalFunction，Wiley-Interscience，NY，171-172，1980.Searle等人，Mol.Cell.Biol.，51480，1985.Sharp和Marciniak，Cell，59229，1989.Sharp和Zamore，Science，2872431-2433，2000.Sharp，GenesDev.，13139-141，1999.Shaul和Ben-Levy，EMBOJ.，61913，1987.ShellingandSmith，GeneTherapy，1165-169，1994.Sherman等人，Mol.Cell.Biol.，950，1989.Siegfried，Exp.Clin.Endocrinol.，101(1)7-11，1993.Simon等人，BMJ，328(7452)1358-1362，2004.Sleigh和Lockett，J.EMBO，43831，1985.Smith和Moss，Gene，25(1)21-8，1983.Solodin等人，Biochemistry，34(41)13537-13544，1995.Soo等人，J.Cell.Biochem，，74(1)1-10，1999.Spalholz等人，Cell，42183，1985.Spandau和Lee，J.Virology，62427，1988.Spandidos和Wilkie，EMBOJ.，21193，1983.Stephens和Hentschel，Biochem.J.，2481，1987.Stratford-PerricaudetandPerricaudet，InHumanGeneTransfer，Eds，Cohen-HaguenauerandBoiron，JohnLibbeyEurotext，France，51-61，1991.Stratford-Perricaudet等人，Hum.Gene.Ther.，1241-256，1990.Straus等人，J.CellBiol.，99(5)1838-1847，1984.Stuart等人，Nature，317828，1985.SullivanandPeterlin，Mol.Cell.Biol.，73315，1987.Sun等人，GeneTher.，81572-1579，2001.Suresh等人，Exp.Hematology，2118281993.Swartzendruber和Lehman，J.Cell.Physiology，85179，1975.Tabara等人，Cell，99(2)123-132，1999.Takebe等人，Mol.Cell.Biol.，8466，1988.Tang等人，Blood，104(9)2704-2713，2004.Tarnawski，Dig.Dis.Sci.，50Suppl1S24-33，2005.Tavernier等人，Nature，301634，1983.TaylorandKingston，Mol.Cell.Biol.，10165，1990a.TaylorandKingston，Mol.Cell.Biol.，10176，1990b.Taylor等人，J.Biol.Chem.，26415160，1989.Temin，InGeneTransfer，Kucherlapati(Ed.)，NY，PlenumPress，149-188，1986.Thierry等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92(21)9742-9746，1995.Thiesen等人，J.Virology，62614，1988.Tjuvajev等人，CancerRes.，584333-4341，1998.Top等人，J.Infect.Dis.，124155-160，1971.Tratschin等人，Mol.Cell.Biol.，42072-2081，1984.Tratschin等人，Mol.Cell.Biol.，53258-3260，1985.Treisman，Cell，42889，1985.Tronche等人，Mol.Biol.Med.，7173，1990.Trudel和Constantini，GenesandDev.，6954，1987.Tsukamoto等人，Nat.Genet.，9(3)243-248，1995.Tuqan等人，LasersMed.Sci.，20(2)80-6，2005.Tyndell等人，Nuc.Acids.Res.，96231，1981.Uhlmann和Peyman，Chem.Rev.，90544-584，1990.Umeokaetal，CancerRes.，646259-6265，2004.VandenBossche等人，Chemother.，1967-128，1982.VandenBossche，Ann.Soc.Belg.Med.Trop.，61287-296，1981.VanniceandLevinson，J.Virology，621305，1988.Vasseur等人，ProcNatl.Acad.Sci.USA，771068，1980.Vogelstein等人，Nature，408(6810)307-310，2000.Waller等人，Microsurgery，24(3)168-173，2004.Walsh等人，J.Clin.Invest，941440-1448，1994.WangandCalame，Cell，47241，1986.Watts等人，Biochem.Pharmacol.，313035-3040，1982.Weber等人，Cell，36983，1984.Wei等人，GeneTherapy，1261-268，1994.Weinberger等人Mol.Cell.Biol.，8988，1984.Wheeler等人，Gastrointerology，1201241-1250，2001Wheeler等人，Hum.GeneTher.，122167-2177，2001Wincott等人，NucleicAcidsRes.，23(14)2677-2684，1995.Winoto和Baltimore，Cell，59649，1989.Witassek等人，Eur.J.Clin.Pharmacol.，20427-433，1981.Wong等人，Gene，1087-94，1980.Xu等人，Curr.Biol.，13790-795，2003.Yamamoto等人，J.Immunol.，1484072-4076，1992.YangandHuang，GeneTherapy，4(9)950-960，1997.Yang等人，J.Virol.，684847-4856，1994.Yang等人，Radiology，235(3)950-958，2005.Yanoff等人，InOpthalmologyOphthalmology，2NDBk&CdrEd.，2003.Yoder等人，Blood，82(Supp.)1347A，1994.Yutzey等人Mol.Cell.Biol.，91397，1989.Zeng等人，CancerRes.，62(13)3630-3635，2002.Zhang等人，Endocrinology，1414698-4710，2000.Zhou等人，Exp.Hematol，21928-933，1993.Zhou等人，J.Exp.Med.，1791867-1875，1994.Zhu等人，Science，261(5118)209-211，1993.序列表CLARKE，PETERCHADA，SUNILMENANDER，KERSTINSOBOL，ROBERTE.ZHANG，SHUYUAN允許靶細胞長期暴露於治療性和預防性核酸的局部施用INGN132WOPCT/US2006/0022552006-01-2060/645,8262005-01-2160/692,4812005-01-217PatentInVer.2.1119DNA人工序列人工序列的描述合成的引物1ggcccacccccttggcttc19220DNA人工序列人工序列的描述合成的引物2ttgtaaccattataagctgc20320DNA人工序列人工序列的描述合成的引物3tcgtttctcagcagctgttg20420DNA人工序列人工序列的描述合成的引物4catctgaactcaaagcgtgg20520DNA人工序列人工序列的描述合成的引物5ttatgcgacggatcccgtaa20620DNA人工序列人工序列的描述合成的引物6gcgtgtcaccgtcgtacgta20718DNA人工序列人工序列的描述合成的引物7cttcgaggtccgcggccg18權利要求1.包含治療性核酸和/或診斷性核酸的藥物組合物，其中將所述組合物配製為錠劑、棒棒糖、冰棒、口膠劑、凝膠條、膜劑、水凝膠、溶解條或固體棒。2.權利要求1的藥物組合物，其中所述組合物包含治療性核酸。3.權利要求2的藥物組合物，其中所述治療性核酸編碼治療性蛋白。4.權利要求3的藥物組合物，其中所述治療性蛋白是腫瘤抑制劑、促凋亡蛋白、細胞因子、生長因子、激素、腫瘤抗原或酶。5.權利要求1的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼報告蛋白的診斷性核酸。6.權利要求5的藥物組合物，其中所述報告蛋白是生長抑素受體、碘化鈉共運輸體、真核生物綠色螢光蛋白、紅色螢光蛋白、螢光素酶、β半乳糖苷酶或胸苷激酶。7.權利要求1的藥物組合物，其中所述治療性核酸包含或編碼siRNA、核酶、mRNA、寡核苷酸或CpG寡核苷酸。8.權利要求1的藥物組合物，其中所述製劑還包含膠原、甘油、PEG、含水二氧化矽、纖維素、黃原酸膠、聚糖卡波姆956、吐溫80、氟化物、角叉菜聚糖、粘合劑或核酸吸收增強劑。9.權利要求8的藥物組合物，其中所述粘合劑包含丙烯酸酯、水膠體、水凝膠、基於聚丙烯酸的凝膠基質、聚異丁烯、矽酮聚合物或其混合。10.權利要求9的藥物組合物，其中所述丙烯酸酯包括氰基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯或烷基丙烯酸酯。11.權利要求8的藥物組合物，其中所述核酸吸收增強劑包括陽離子脂質。12.權利要求11的藥物組合物，其中所述陽離子脂質是bis-guanidinium-tren-chloesterol或1，2-二油醯-3-(三甲基銨)propate(DOTAP)。13.權利要求1的藥物組合物，其中將所述核酸配製為錠劑。14.權利要求1的藥物組合物，其中將所述核酸配製為溶解條。15.權利要求1的藥物組合物，其中將所述組合物配製為水凝膠。16.權利要求1的藥物組合物，其中所述組合物是包含黃原凝膠的口膠劑。17.權利要求1的藥物組合物，其中一些或所有組合物已凍幹。18.權利要求4的藥物組合物，其中所述腫瘤抑制劑是mda7、APC、CYLD、HIN-1、KRAS2b、p16、p19、p21、p27、p27mt、p53、p57、p73、PTEN、Rb、子宮珠蛋白、Skp2、BRCA-1、BRCA-2、CHK2、CDKN2A、DCC、DPC4、MADR2/JV18、MEN1、MEN2、MTS1、NF1、NF2、VHL、WRN、WT1、CFTR、C-CAM、CTS-1、zac1、ras、MMAC1、FCC、MCC、FUS1、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或SEMA3多肽。19.權利要求18的藥物組合物，其中所述腫瘤抑制劑是p53。20.權利要求18的藥物組合物，其中所述腫瘤抑制劑是FUS1、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或SEMA3多肽。21.權利要求4的藥物組合物，其中所述促凋亡蛋白是CD95、caspase-3、Bax、Bag-1、CRADD、TSSC3、bax、hid、Bak、MKP-7、PARP、bad、bcl-2、MST1、bbc3、Sax、BIK或BID。22.權利要求4的藥物組合物，其中所述細胞因子是GM-CSF、G-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α、TNF-β、PDGF、TGF-α、TGF-β、VEGF或mda7。23.權利要求22的藥物組合物，其中所述細胞因子是mda7。24.權利要求4的藥物組合物，其中所述腫瘤抗原是MelanA(MART-I)、gp100(Pmel17)、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE-1、GAGE-2、p15(58)、CEA、RAGE、NY-ESO(LAGE)、SCP-1、Hom/Mel-40、PRAME、p53、H-Ras、HER-2/neu、BCR-ABL、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、EB病毒抗原、EBNA、人乳頭瘤病毒(HPV)抗原E6和E7、TSP-180、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、mn-23H1、PSA、TAG-72-4、CA19-9、CA72-4、CAM17.1、NuMa、K-ras、β聯蛋白、CDK4、Mum-1、p16、TAGE、PSMA、PSCA、CT7、端粒酶、43-9F、5T4、791Tgp72、甲胎蛋白、β-HCG、BCA225、BTAA、CA125、CA15-3(CA27.29\BCAA)、CA195、CA242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、G250、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90(Mac-2結合蛋白\親環蛋白C關聯蛋白)、TAAL6、TAG72、TLP、TPS、ING1、乳腺珠蛋白(mamaglobin)、細胞周期蛋白B1、S100、BRCA1、BRCA2、腫瘤免疫球蛋白獨特型、腫瘤T細胞受體克隆型、MUC-1、或表皮生長因子受體。25.權利要求5的藥物組合物，其中所述報告蛋白包括螢光蛋白。26.權利要求25的藥物組合物，其中所述螢光蛋白是藍色螢光蛋白、青色螢光蛋白、綠色螢光蛋白、黃色螢光蛋白、紅色螢光蛋白或其生物學活性衍生物。27.權利要求1的藥物組合物，其中所述核酸包含在表達盒中，所述表達盒包含有效地偶聯至所述核酸的啟動子，其中所述啟動子在受試者的細胞中是有活性的。28.權利要求27的藥物組合物，其中病毒載體中包含所述表達盒。29.權利要求28的藥物組合物，其中所述病毒載體是腺病毒載體、杆狀病毒載體、細小病毒載體、塞姆利基森林病毒載體、新培斯病毒載體、慢病毒載體、逆轉錄病毒載體、痘苗病毒載體、腺伴隨病毒載體、小RNA病毒載體、α病毒載體或痘病毒載體。30.權利要求29的藥物組合物，其中所述病毒載體是腺病毒載體。31.權利要求28的藥物組合物，其中所述病毒載體是溶瘤病毒。32.權利要求31的藥物組合物，其中所述溶瘤病毒過度表達ADP。33.權利要求32的藥物組合物，其中所述溶瘤病毒選自Ad5、d1327、pm734.1、d1309、d101/07、KD1、KD2、KD3和d11520以及VRX-007。34.權利要求30的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼p53的治療性核酸。35.權利要求30的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼mda7的治療性核酸。36.權利要求30的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼FUS1的治療性核酸。37.權利要求1的藥物組合物，其中所述組合物還包含遞送劑。38.權利要求37的藥物組合物，其中所述遞送劑是脂質。39.權利要求38的藥物組合物，其中所述脂質包含在脂質體中。40.權利要求39的藥物組合物，其中所述脂質體還定義為DOTAP膽固醇納米顆粒。41.權利要求27的藥物組合物，其中所述啟動子是組成型啟動子、誘導型啟動子、阻抑型啟動子或組織選擇性啟動子。42.權利要求41的藥物組合物，其中所述組織選擇性啟動子選擇性地在過度增生性細胞中具有活性。43.權利要求42的藥物組合物，其中所述啟動子選自hTert啟動子、CEA啟動子、PSA啟動子、probasin啟動子、ARR2PB啟動子和AFP啟動子。44.權利要求8的藥物組合物，其中所述核酸吸收增強劑是陽離子脂質。45.權利要求44的藥物組合物，其中所述陽離子脂質是bis-guanidinium-tren-cholesterol或1，2-二油醯-3-(三甲基銨)propate(DOTAP)。46.權利要求44的藥物組合物，其中所述陽離子脂質是季銨細胞轉染劑。47.包含治療性核酸和/或診斷性核酸的非腺病毒藥物組合物，其中將所述組合物配製為凝膠、糊劑、泡沫、結晶漿液、乳膏、軟膏、栓劑或粉劑。48.權利要求47的藥物組合物，其中所述核酸包含在表達盒中，所述表達盒包含有效地偶聯至該核酸的啟動子，其中所述啟動子在受試者的細胞中具有活性。49.權利要求48的藥物組合物，其中所述表達盒包含在病毒載體中。50.權利要求49的藥物組合物，其中所述病毒載體是杆狀病毒載體、細小病毒載體、塞姆利基森林病毒載體、新培斯病毒載體、慢病毒載體、逆轉錄病毒載體、痘苗病毒載體、腺伴隨病毒載體或小RNA病毒載體、α病毒載體或痘病毒載體。51.權利要求50的藥物組合物，其中所述病毒載體是腺病毒載體。52.權利要求51的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼p53的治療性核酸。53.權利要求51的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼mda7的治療性核酸。54.權利要求51的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼p53的治療性核酸。55.權利要求51的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼FUS1的治療性核酸。56.權利要求47的藥物組合物，其中將所述組合物配製為糊劑。57.權利要求56的藥物組合物，其中所述糊劑進一步定義為牙膏。58.包含治療性和/或診斷性核酸和粘合劑的藥物組合物。59.權利要求58的藥物組合物，其中所述組合物包含治療性核酸。60.權利要求59的藥物組合物，其中所述治療性核酸編碼腫瘤抑制劑、促凋亡蛋白、細胞因子、生長因子、激素、腫瘤抗原或酶。61.權利要求60的藥物組合物，其中所述腫瘤抑制劑是mda7、APC、CYLD、HIN-1、KRAS2b、p16、p19、p21、p27、p27mt、p53、p57、p73、PTEN、Rb、子宮珠蛋白、Skp2、BRCA-1、BRCA-2、CHK2、CDKN2A、DCC、DPC4、MADR2/JV18、MEN1、MEN2、MTS1、NF1、NF2、VHL、WRN、WT1、CFTR、C-CAM、CTS-1、zac1、ras、MMAC1、FCC、MCC、FUS1、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或SEMA3多肽。62.權利要求60的藥物組合物，其中所述促凋亡蛋白是CD95、caspase-3、Bax、Bag-1、CRADD、TSSC3、bax、hid、Bak、MKP-7、PARP、bad、bc1-2、MST1、bbc3、Sax、BIK或BID。63.權利要求60的藥物組合物，其中所述細胞因子是GM-CSF、G-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α、TNF-β、PDGF、TGF-α、TGF-β、VEGF或mda7。64.權利要求60的藥物組合物，其中所述腫瘤抗原是MelanA(MART-I)、gp100(Pmel17)、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE-1、GAGE-2、p15(58)、CEA、RAGE、NY-ESO(LAGE)、SCP-1、Hom/Mel-40、PRAME、p53、H-Ras、HER-2/neu、BCR-ABL、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、EB病毒抗原、EBNA、人乳頭瘤病毒(HPV)抗原E6和E7、TSP-180、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、mn-23H1、PSA、TAG-72-4、CA19-9、CA72-4、CAM17.1、NuMa、K-ras、β聯蛋白、CDK4、Mum-1、p16、TAGE、PSMA、PSCA、CT7、端粒酶、43-9F、5T4、791Tgp72、甲胎蛋白、β-HCG、BCA225、BTAA、CA125、CA15-3(CA27.29\BCAA)、CA195、CA242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、G250、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90(Mac-2結合蛋白\親環蛋白C關聯蛋白)、TAAL6、TAG72、TLP、TPS、ING1、乳腺珠蛋白(mamaglobin)、細胞周期蛋白B1、S100、BRCA1、BRCA2、腫瘤免疫球蛋白獨特型、腫瘤T細胞受體克隆型、MUC-1、或表皮生長因子受體。65.權利要求58的藥物組合物，其中所述核酸是編碼螢光蛋白的診斷性核酸。66.權利要求65的藥物組合物，其中所述螢光蛋白是藍色螢光蛋白、綠色螢光蛋白、黃色螢光蛋白、紅色螢光蛋白、青色螢光蛋白或其生物學活性衍生物。67.權利要求58的藥物組合物，其中所述核酸包含在表達盒中，所述表達盒包含有效地偶聯至該核酸的啟動子，其中所述啟動子在受試者的細胞中具有活性。68.權利要求67的藥物組合物，其中所述表達盒包含在病毒載體中。69.權利要求68的藥物組合物，其中所述病毒載體是腺病毒載體、杆狀病毒載體、細小病毒載體、塞姆利基森林病毒載體、新培斯病毒載體、慢病毒載體、逆轉錄病毒載體、痘苗病毒載體、腺伴隨病毒載體或痘病毒載體。70.權利要求69的藥物組合物，其中所述病毒載體是腺病毒載體。71.權利要求70的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼p53的治療性核酸。72.權利要求70的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼mda7的治療性核酸。73.權利要求70的藥物組合物，其中所述組合物包含編碼FUS1的治療性核酸。74.權利要求68的藥物組合物，其中所述病毒載體是溶瘤病毒。75.權利要求74的藥物組合物，其中所述溶瘤病毒選自Ad5、dl327、pm734.1、dl309，dl01/07、KD1、KD2、KD3和dl1520。76.權利要求67的藥物組合物，其中所述表達盒包含在遞送劑中。77.權利要求76的藥物組合物，其中所述遞送劑是脂質。78.權利要求77的藥物組合物，其中所述脂質包含在脂質體中。79.權利要求78的藥物組合物，其中所述脂質體進一步定義為DOTAP膽固醇納米顆粒。80.權利要求67的藥物組合物，其中所述啟動子是組成型啟動子、誘導型啟動子、阻抑型啟動子或組織選擇性啟動子。81.權利要求80的藥物組合物，其中所述組織選擇性啟動子選擇性地在過度增生性細胞中具有活性。82.權利要求81的藥物組合物，其中所述啟動子選自hTert啟動子、CEA啟動子、PSA啟動子、probasin啟動子、ARR2PB啟動子和AFP啟動子。83.權利要求58的藥物組合物，其中所述粘合劑包含丙烯酸酯、水膠體、水凝膠、基於聚丙烯酸的凝膠基質、聚異丁烯、矽酮聚合物或其混合物。84.權利要求83的藥物組合物，其中所述丙烯酸酯包括氰基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯或烷基丙烯酸酯。85.權利要求58的藥物組合物，其中組合物配製為可通過透皮貼布、條帶、繃帶、帶子、敷料或人造皮膚施用。86.權利要求58的藥物組合物，其中將所述組合物配製為液體、半固體或固體。87.權利要求58的藥物組合物，其中所述組合物還包含核酸吸收增強劑。88.權利要求87的藥物組合物，其中所述核酸吸收增強劑是陽離子脂質。89.權利要求88的藥物組合物，其中所述陽離子脂質是bis-guanidinium-tren-chloesterol或1，2-二油醯-3-(三甲基銨)propate(DOTAP)。90.用於遞送治療性或診斷性試劑至受試者的透皮或經皮遞送裝置，其包括a)貼布；和b)包含編碼報告蛋白、腫瘤抑制劑、促凋亡蛋白、生長因子、腫瘤抗原或細胞因子的核酸的用於貼布的至少一個表面的藥物組合物。91.權利要求90的裝置，其中所述核酸編碼腫瘤抑制劑，所述腫瘤抑制劑選自mda7、APC、CYLD、HIN-1、KRAS2b、p16、p19、p21、p27、p27mt、p53、p57、p73、PTEN、Rb、子宮珠蛋白、Skp2、BRCA-1、BRCA-2、CHK2、CDKN2A、DCC、DPC4、MADR2/JV18、MEN1、MEN2、MTS1、NF1、NF2、VHL、WRN、WT1、CFTR、C-CAM、CTS-1、zacl、ras、MMAC1、FCC、MCC、FUS1、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或SEMA3多肽。92.權利要求91的裝置，其中所述腫瘤抑制劑是FUS1、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或SEMA3多肽。93.權利要求91的裝置，其中所述核酸編碼選自CD95、caspase-3、Bax、Bag-1、CRADD、TSSC3、bax、hid、Bak、MKP-7、PARP、bad、bcl-2、MST1、bbc3、Sax、BIK或BID的促凋亡蛋白。94.權利要求90的裝置，其中所述核酸編碼細胞因子，其中所述細胞因子選自GM-CSF、G-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α、TNF-β、PDGF、TGF-α、TGF-β、VEGF和mda7。95.權利要求90的裝置，其中所述核酸編碼腫瘤抗原。96.權利要求90的裝置，其中所述核酸包含在表達盒中，所述表達盒包含有效地連接至該核酸的啟動子，所述啟動子在所述受試者的細胞中具有活性。97.權利要求96的裝置，其中所述表達盒包含在病毒載體中。98.權利要求97的裝置，其中所述病毒載體是腺病毒載體、杆狀病毒載體、細小病毒載體、塞姆利基森林病毒載體、新培斯病毒載體、慢病毒載體、逆轉錄病毒載體、痘苗病毒載體、腺伴隨病毒載體或痘病毒載體。99.權利要求98的裝置，其中所述病毒載體是腺病毒載體。100.權利要求99的裝置，其中所述治療性核酸編碼FUS1。101.權利要求99的裝置，其中所述治療性核酸編碼mda7。102.權利要求99的裝置，其中所述治療性核酸編碼p53。103.權利要求90的裝置，其中所述藥物組合物還包含核酸吸收增強劑。104.權利要求103的裝置，其中所述核酸吸收增強劑是陽離子脂質。105.權利要求104的裝置，其中所述陽離子脂質是bis-guanidinium-tren-cholesterol或1，2-二油醯-3-(三甲基銨)propate(DOTAP)。106.權利要求104的裝置，其中所述陽離子脂質是季銨細胞轉染劑。107.在受試者中檢測、治療或預防疾病的方法，其包括給所述受試者施用權利要求1或權利要求58中所示的藥物組合物。108.權利要求107的方法，其中所述核酸編碼報告蛋白，且其中所述方法進一步定義為檢測受試者中的病變的方法。109.權利要求108的方法，其中所述病變是過度增生性病變。110.權利要求109的方法，其中所述過度增生性病變是癌症。111.權利要求110的方法，其中所述癌症是乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、腦癌、肝癌、子宮頸癌、結腸癌、腎癌、皮膚癌、頭與頸癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宮癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睪丸癌、淋巴瘤或白血病。112.權利要求107的方法，其中所述核酸是治療性核酸。113.權利要求112的方法，其中所述治療性核酸編碼腫瘤抑制劑、促凋亡蛋白、細胞因子或生長因子。114.權利要求113的方法，其中所述腫瘤抑制劑選自mda7、APC、CYLD、HIN-1、KRAS2b、p16、p19、p21、p27、p27mt、p53、p57、p73、PTEN、Rb、子宮珠蛋白、Skp2、BRCA-1、BRCA-2、CHK2、CDKN2A、DCC、DPC4、MADR2/JV18、MEN1、MEN2、MTS1、NF1、NF2、VHL、WRN、WT1、CFTR、C-CAM、CTS-1、zac1、ras、MMAC1、FCC、MCC、FUS1、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或SEMA3多肽。115.權利要求112的方法，其中所述腫瘤抑制劑是FUS1、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或SEMA3多肽。116.權利要求113的方法，其中所述促凋亡蛋白是CD95、caspase-3、Bax、Bag-1、CRADD、TSSC3、bax、hid、Bak、MKP-7、PARP、bad、bcl-2、MST1、bbc3、Sax、BIK或BID。117.權利要求113的方法，其中所述細胞因子是GM-CSF、G-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α、TNF-β、PDGF、TGF-α、TGF-β、VEGF或mda7。118.權利要求112的方法，其中所述治療性核酸編碼腫瘤抗原。119.權利要求112的方法，其中所述方法進一步被定義為在黏膜表面誘導免疫反應的方法，且其中將所述藥物組合物施用於受試者的黏膜表面。120.權利要求107的方法，其中所述組合物包含編碼報告蛋白的診斷性核酸。121.權利要求120的方法，其中所述報告蛋白是螢光蛋白。122.權利要求121的方法，其中所述螢光蛋白是藍色螢光蛋白、綠色螢光蛋白、黃色螢光蛋白、紅色螢光蛋白、青色螢光蛋白或其生物學活性衍生物。123.權利要求107的方法，其中所述組合物包含編碼生長因子的治療性核酸。124.權利要求123的方法，其中所述生長因子是表皮生長因子、角質形成細胞生長因子或肝細胞生長因子。125.權利要求107的方法，其中所述方法進一步定義為促進受試者的傷口癒合的方法。126.權利要求107的方法，其中所述核酸是治療性核酸，且其中所述方法進一步定義為防止或抑制受試者中過度增生性病變的擴展的方法。127.權利要求126的方法，其進一步定義為用於防止或抑制受試者中的口腔發育異常或黏膜白斑病的方法。128.權利要求107的方法，其中所述核酸包含在表達盒中，所述表達盒包含有效地連接至該核酸的啟動子，其中所述啟動子在受試者的細胞中具有活性。129.權利要求128的方法，其中所述表達盒包含在病毒載體中。130.權利要求129的方法，其中所述病毒載體是腺病毒載體、杆狀病毒載體、細小病毒載體、塞姆利基森林病毒載體、新培斯病毒載體、慢病毒載體、逆轉錄病毒載體、痘苗病毒載體、腺伴隨病毒載體或痘病毒載體。131.權利要求130的方法，其中所述病毒載體是腺病毒載體。132.權利要求131的方法，其中所述治療性核酸編碼FUS1。133.權利要求131的方法，其中所述治療性核酸編碼mda7。134.權利要求131的方法，其中所述治療性核酸編碼p53。135.權利要求107的方法，其中所述受試者是哺乳動物。136.權利要求135的方法，其中所述哺乳動物是人。137.權利要求136的方法，其中所述人是癌症患者或具有癌前病變的患者。138.權利要求107的方法，其中施用藥物組合物包括使用塗藥器將所述藥物組合物施用於受試者的身體表面。139.權利要求107的方法，其還包括鑑定需要疾病的檢測、預防或治療的受試者。140.權利要求139的方法，其中所述核酸是治療性核酸，且其中所述方法還包括給受試者施用一種或多種第二形式的治療。141.檢測、治療或預防受試者中的疾病的方法，其包括給所述受試者施用權利要求47中所示的藥物組合物。142.權利要求141的方法，其中所述核酸編碼報告蛋白，且其中所述方法進一步定義為在受試者中檢測病變的方法。143.權利要求142的方法，其中所述病變是過度增生性病變。144.權利要求143的方法，其中所述過度增生性病變是癌症。145.權利要求144的方法，其中所述癌症是乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、腦癌、肝癌、子宮頸癌、結腸癌、腎癌、皮膚癌、頭與頸癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宮癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睪丸癌、淋巴瘤或白血病。146.權利要求141的方法，其中所述核酸是治療性核酸。147.權利要求146的方法，其中所述治療性核酸編碼腫瘤抑制劑、促凋亡蛋白、細胞因子或生長因子。148.權利要求147的方法，其中所述腫瘤抑制劑選自mda7、APC、CYLD、HIN-1、KRAS2b、p16、p19、p21、p27、p27mt、p53、p57、p73、PTEN、Rb、子宮珠蛋白、Skp2、BRCA-1、BRCA-2、CHK2、CDKN2A、DCC、DPC4、MADR2/JV18、MEN1、MEN2、MTS1、NF1、NF2、VHL、WRN、WT1、CFTR、C-CAM、CTS-1、zac1、ras、MMAC1、FCC、MCC、FUS1、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或SEMA3多肽。149.權利要求148的方法，其中所述腫瘤抑制劑是FUS1、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-1(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)或SEMA3多肽。150.權利要求147的方法，其中所述促凋亡蛋白是CD95、caspase-3、Bax、Bag-1、CRADD、TSSC3、bax、hid、Bak、MKP-7、PARP、bad、bcl-2、MST1、bbc3、Sax、BIK或BID。151.權利要求147的方法，其中所述細胞因子是GM-CSF、G-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α、TNF-β、PDGF、TGF-α、TGF-β、VEGF或mda7。152.權利要求146的方法，其中所述治療性核酸編碼腫瘤抗原，所述腫瘤抗原選自MelanA(MART-I)、gp100(Pmel17)、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE-1、GAGE-2、p15(58)、CEA、RAGE、NY-ESO(LAGE)、SCP-1、Hom/Mel-40、PRAME、p53、H-Ras、HER-2/neu、BCR-ABL、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、EB病毒抗原、EBNA、人乳頭瘤病毒(HPV)抗原E6和E7、TSP-180、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、mn-23H1、PSA、TAG-72-4、CA19-9、CA72-4、CAM17.1、NuMa、K-ras、β聯蛋白、CDK4、Mum-1、p16、TAGE、PSMA、PSCA、CT7、端粒酶、43-9F、5T4、791Tgp72、甲胎蛋白、β-HCG、BCA225、BTAA、CA125、CA15-3(CA27.29\BCAA)、CA195、CA242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、G250、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90(Mac-2結合蛋白\親環蛋白C關聯蛋白)、TAAL6、TAG72、TLP、TPS、ING1、乳腺珠蛋白(mamaglobin)、細胞周期蛋白B1、S100、BRCA1、BRCA2、腫瘤免疫球蛋白獨特型、腫瘤T細胞受體克隆型、MUC-1和表皮生長因子受體。153.權利要求146的方法，其中所述方法進一步定義為在黏膜表面誘導免疫反應的方法，且其中將所述藥物組合物施用於受試者的黏膜表面。154.權利要求141的方法，其中所述組合物包含編碼報告蛋白的診斷性核酸。155.權利要求154的方法，其中所述報告蛋白是螢光蛋白。156.權利要求155的方法，其中所述螢光蛋白是藍色螢光蛋白、綠色螢光蛋白、黃色螢光蛋白、紅色螢光蛋白、青色螢光蛋白或其生物學活性衍生物。157.權利要求141的方法，其中所述組合物包含編碼生長因子的治療性核酸，且其中所述方法進一步定義為促進受試者的傷口癒合的方法。158.權利要求157的方法，其中所述生長因子是表皮生長因子、角質形成細胞生長因子或肝細胞生長因子。159.權利要求141的方法，其中所述核酸是治療性核酸，且其中所述方法進一步定義為預防或抑制受試者中過度增生性病變的擴展的方法。160.權利要求159的方法，其中所述過度增生性病變是嘴的黏膜白斑病或嘴的癌。161.權利要求141的方法，其中所述核酸包含在表達盒中，所述表達盒包含有效地連接至該核酸的啟動子，其中所述啟動子在受試者的細胞中具有活性。162.權利要求161的方法，其中所述表達盒包含在病毒載體中。163.權利要求162的方法，其中所述病毒載體是杆狀病毒載體、細小病毒載體、α病毒載體、塞姆利基森林病毒載體、新培斯病毒載體、慢病毒載體、逆轉錄病毒載體、痘苗病毒載體、腺伴隨病毒載體或痘病毒載體。164.權利要求163的方法，其中所述治療性核酸編碼FUS1。165.權利要求163的方法，其中所述治療性核酸編碼mda7。166.權利要求163的方法，其中所述治療性核酸編碼p53。167.權利要求141的方法，其中所述受試者是哺乳動物。168.權利要求167的方法，其中所述哺乳動物是人。169.權利要求168的方法，其中所述人是癌症患者或具有癌前病變的患者。170.權利要求141的方法，其中施用所述藥物組合物包括使用塗藥器給受試者的身體表面施用所述藥物組合物。171.權利要求141的方法，其還包括鑑定需要疾病的檢測、預防或治療的受試者。172.權利要求141的方法，其中所述核酸是治療性核酸，且其中所述方法還包括給受試者施用一種或多種第二形式的治療。173.在受試者中檢測、治療或預防疾病的方法，其包括給受試者的表面施用權利要求90中所示的透皮或經皮遞送裝置。174.權利要求173的方法，其中所述表達盒包含在病毒載體中。175.權利要求174的方法，其中所述病毒載體是腺病毒載體、杆狀病毒載體、細小病毒載體、塞姆利基森林病毒載體、新培斯病毒載體、慢病毒載體、逆轉錄病毒載體、痘苗病毒載體、腺伴隨病毒載體或痘病毒載體載體。176.權利要求175的方法，其中所述病毒載體是腺病毒載體。177.權利要求176的方法，其中所述治療性核酸編碼FUS1。178.權利要求176的方法，其中所述治療性核酸編碼mda7。179.權利要求176的方法，其中所述治療性核酸編碼p53。全文摘要本發明公開了用於預防或抑制受試者中過度增生性病變的擴展的組合物和方法，所述組合物和方法包括包含在固體或半固體製劑中或透皮或經皮遞送裝置中的核酸。也公開了能夠預防或抑制受試者中的過度增生性病變的擴展的核酸的組合物，該組合物包含粘合劑。也公開了能夠預防或抑制受試者中過度增生性病變的擴展的核酸的組合物，所述組合物包含核酸吸收增強劑。也公開了預防或抑制受試者中過度增生性病變的擴展的方法，該方法涉及這些治療性組合物和裝置。文檔編號A61K48/00GK101166546SQ200680009226公開日2008年4月23日申請日期2006年1月20日優先權日2005年1月21日發明者P·克拉克,S·查達,K·曼南德,R·索伯爾,張書元申請人:因特羅根治療公司