包含大米醇溶蛋白的抗消化性潰瘍的組合物的製作方法

2023-10-11 20:31:34 1

專利名稱：包含大米醇溶蛋白的抗消化性潰瘍的組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種抗消化性潰瘍組合物，其包含大米醇溶蛋白作為活性成分，其中 還包含至少一種選自以下組中的作為提高大米醇溶蛋白活性的輔助成分茶提取物、生人 參提取物、大麥提取物、(-)-表兒茶素(EC)、丹寧酸和半胱氨酸。
背景技術：
醫學治療消化性潰瘍的主要目的在於止痛，醫治潰瘍本身，並且預防潰瘍和並發 症的復發。為了達到上述目的，一般使用包括抗酸劑、H2-受體拮抗體、質子泵抑制劑和抗幽 門螺桿菌製劑在內的各種藥物。但是，需要注意的是由於長期和有規律的應用這些藥物會 導致各種各樣的副作用。同時，本發明人已報導糯米提取物不僅具有優異的抗胃潰瘍發生的作用和治療 進展性消化性潰瘍的作用，還具有高度的安全性，因為它來源於普通食物(第0208969、 0253740和10-0627820號韓國專利)。但是，上述專利未公開糯米中哪個主要物質具有抗 消化性潰瘍的活性。

發明內容
本發明人力圖鑑別出在糯米提取物中顯示抗消化性潰瘍活性的物質，並在發現大 米醇溶蛋白有所述活性後完成本發明。本發明提供一種抗消化性潰瘍的組合物，其包括大米醇溶蛋白作為活性成分。此外，發明人發現包含大米醇溶蛋白作為活性成分的抗消化性潰瘍的組合物的作 用可由於還包括至少一種選自以下組中的物質作為輔助組分而被增強茶提取物、生人參 提取物、大麥提取物、(-)_表兒茶素(EC)、丹寧酸和半胱氨酸。以1重量份的大米醇溶蛋白 計，所述輔助組分的含量優選為1到80重量份。本發明的抗消化性潰瘍的組合物的活性成分大米醇溶蛋白，可以是由糯米或粳米 純化得到，與大米醇溶蛋白具有類似結構的醇溶蛋白衍生物也同樣有效。本發明的組合物 可以是口服給藥的形式，並包含藥學上的可接受的載體。該組合物的單劑量，優選每Kg體重0. 3-3mg的糯米醇溶蛋白，並且推薦每日給藥 1到10次。本發明的包含大米醇溶蛋白作為活性成分的組合物具有優異的預防和治療消化 性潰瘍的作用。


圖1顯示糯米提取物、粳米提取物、大麥提取物和小麥提取物的抗消化性潰瘍活性。圖2顯示糯米提取物全部組分、沉澱的組分和可溶的組分的抗消化性潰瘍的活 性。
圖3顯示糯米提取物經100°C熱處理後的和經胃蛋白酶處理後沉澱的組分的抗消 化性潰瘍沉澱物的活性變化。圖4顯示沉澱組分分別經過0. 5M NaCl、1 %乳酸和70%乙醇提取後的糯米提取物 中可溶的亞組分和殘留的沉澱亞組分的抗消化性潰瘍活性的分配。圖5顯示純化的糯米醇溶蛋白的SDS-PAGE分析。圖6顯示純化的糯米醇溶蛋白的抗消化性潰瘍活性的劑量依賴性。圖7顯示純化的粳米醇溶蛋白的SDS-PAGE分析。圖8顯示純化的粳米醇溶蛋白的抗消化性潰瘍活性的劑量依賴性。
具體實施例方式已經在各方面對本發明進行了描述，提供以下的實施例和實驗是為了說明本發明 具體的實施方案。但是，本發明的範圍不限於此。實施例1 糯米提取物的製備150g的糯米粉加入5倍量的蒸餾水，並用旋渦攪拌器劇烈攪拌3次，每次30秒。 攪拌後，混合物置於離心機中並以3，OOOXg的轉速離心10分鐘，從而得到上清液。上清液 的蛋白質的濃度用BCA試劑盒測定(Pierce，USA)，結果為1.42mg/ml。用蒸餾水將上清液 稀釋至lmg/ml的蛋白質濃度，所得到的最終產品作為糯米提取物。實施例2 糯米提取物中沉澱組分和可溶組分的製備實施例1製得的500毫升的糯米提取物置於室溫下保存15小時以形成沉澱，並用 離心機以2，OOOXg的轉速離心10分鐘。將得到的沉澱物混懸於500ml的蒸餾水中，作為 糯米提取物的沉澱組分。澄清的上清液用作糯米提取物的可溶組分。實施例3 粳米提取物及其可溶組分的製備同實施例1和2 —樣的方法製備。50g的粳米粉末加入5倍量的蒸餾水，並用旋渦 攪拌器劇烈攪拌3次，每次30秒。在攪拌後，混合物在離心機以3，OOOXg的轉速離心10 分鐘以提供上清液，上清液稀釋到lmg/ml的蛋白質濃度，用作粳米提取物。粳米提取物置 於室溫下保存15小時以形成沉澱，並用離心機以2，OOOXg的轉速離心10分鐘以提供澄明 的上清液，用作粳米提取物的可溶組分。實施例4 大麥提取物、小麥提取物及其可溶組分的製備各50g的大麥和小麥的粉末分別加入5倍量的蒸餾水，並用旋渦攪拌器劇烈攪拌3 次，每次30秒。攪拌後，混合物置於離心機以3，OOOXg的轉速離心10分鐘，提供上清液。 用蒸餾水將上清液稀成蛋白質濃度為lmg/ml，稀釋後的上清液用作大麥和小麥提取物。必 要時，這些提取物用離心機以15，OOOXg轉速離心20分鐘，所得的澄明的上清液用作大麥 和小麥提取物的可溶組分。實施例5 生人參提取物的製備25g的生人參加入10倍量的蒸餾水，並用旋渦攪拌器劇烈攪拌3次，每次30秒。 攪拌後，提取物用離心機以15，OOOXg轉速離心20分鐘，所得的澄明的上清液用作生人參 提取物的可溶組分。實施例6 茶提取物的可溶組分的製備各IOg 的綠茶(Halla ；Amorepacific Corp.，韓國)、紅茶(Lipton.，英國)和烏龍茶(中國福建)加入100倍煮沸的蒸餾水，提取10分鐘並過濾。在本研究中，濾液以它
原來的形式或凍幹後使用。 實施例7 大米醇溶蛋白的純化IOOg的糯米或粳米粉末用300ml的蒸餾水提取4小時，在2，000 X g離心10分鐘
以除去上清液。將該提取方法是重複一次。然後，得到的沉澱物用300毫升的0.5M NaCl 提取4小時，進行兩次。得到的沉澱物用300ml的2-丙醇提取1小時，同樣的提取方法重 復一次。將兩份丙醇提取物合併，密閉環境下過濾並乾燥。將幹製品溶於50毫升的70%乙醇並過濾。向濾液中緩慢地加入三倍量的冰凍的 丙酮以形成蛋白質的沉澱物，並以2，OOOXg的轉速離心20分鐘。得到的沉澱物溶於30ml 的70%乙醇中，過濾，並加入3倍量的冰凍的丙酮以形成蛋白質的沉澱物，這些程序重複一 次。得到的蛋白質沉澱物在蒸餾水中透析24小時。最後，得到62mg的糯米醇溶蛋白和85mg 的粳米醇溶蛋白。實驗1 大米提取物中抗消化性_潰瘍物質的鑑別(1)抗消化性潰瘍活性的測定測定方法依照Yamasaki 等(Eur. J. Pharmacol. 142，23-29,1987)描述過的方法進 行，略作調整。口服給予250士20g的雄性sprague-dawley大鼠一毫升的乙醇誘導胃黏膜 損害。為評價抗消化性潰瘍製劑的活性，在乙醇給藥30分鐘之前，口服給予Iml的測試製 劑。對照組給予等量的蒸餾水。乙醇給藥一個半小時後，在乙醚麻醉下處死大鼠並取出胃。 給胃注射IOml的福馬林並固定30分鐘。在福馬林固定以後，胃沿著胃大彎切開， 並用數位相機拍它的內表面的照片。然後，在照片上平面地測量胃黏膜的損害面積並以潰 瘍指數來表示損害的部分佔總腺體面積的百分比。測試製劑的潰瘍形成的抑制率(％)是 通過如下計算的[(對照組的潰瘍指數-試驗組的潰瘍指數)/對照組的潰瘍指數]X100所有資料的統計顯著性都採用單向方差分析(ANOVA)和schefTe' s檢驗進行。(2)大米提取物及其他的穀物提取物的抗消化性潰瘍活性的比較比較糯米提取物、粳米提取物、大麥提取物和小麥提取物的抗消化性潰瘍活性，取 各提取物1毫升口服給予大鼠。三十分鐘以後，口服給予大鼠1毫升的乙醇並評價胃黏膜 的損害程度。結果見圖1。各組均由6隻大鼠組成，測得數值以平均值士標準差的表示。
<0.01:當和對照組比較時。如圖1所示，糯米提取物表現出最有效的抗消化性潰瘍活性，並且粳米提取物也 顯示除顯著的抗消化性潰瘍活性，雖然它的活性比糯米提取物低得多。但是，的大麥提取物 和小麥提取物都未顯示任何顯著的抗消化性潰瘍的活性。因此，在下面實驗中，糯米提取物 被認為是主要的抗消化性潰瘍的物質。(3)糯米提取物中的沉澱組分和可溶組分抗消化性潰瘍活性的分配作為找出糯米提取物中哪個組分存在抗消化性潰瘍物質的第一步驟，將實施例1 和2中製得的糯米提取物的沉澱組分和可溶組分口服給予大鼠(1毫升/大鼠)。三十分 鍾以後，口服給予乙醇(1毫升/大鼠)並評價胃黏膜的損害程度。結果見圖2。各組均由 6隻大鼠組成，測得數值以平均值士標準差的表示。、< 0. 05廣ρ < 0. 01 當和蒸餾水組 比較時。 < 0. 01 當和糯米提取物組比較時。
如圖2所示，給予蒸餾水的對照組的平均的潰瘍指數，給予糯米提取物的組，給 予糯米提取物的沉澱組分的組和給予糯米提取物的可溶組分的組分別為66. 5士 10. 4， 16. 0 士 8. 9,46. 3 士 10. 7和61. 5 士 11. 7 %，並且後三組的抑制潰瘍百分比分別為75.9%, 30. 4%和7.5%。這些結果表明沉澱組分顯示重要的抗消化性潰瘍活性(大約為糯米提取 物的40% )，而可溶組分未顯示任何顯著的抗消化性潰瘍活性。這些結果表明主要的抗消 化性潰瘍物質存在於糯米提取物的沉澱組分中，而不是在可溶組分中。另外，還建議需要一 些可溶性活性劑以使這些主要物質發揮它的最大活性。(4)各種物質對糯米提取物中的沉澱組分的抗消化性潰瘍活性的增強作用為了解其他的穀物或天然食品的可溶組分是否也可以提高糯米提取物的沉澱組 分的抗消化性潰瘍的活性，在向糯米提取物的沉澱組分中加入實施例3-6製得的各種粳米 提取物、大麥提取物、生人參的提取物和茶提取物的前後測定抗消化性潰瘍活性。在這些實 驗中，將實施例2製得的糯米提取物的沉澱組分離心後棄去上清液。然後，沉澱組分與上述 的各種提取物的可溶組分混合，並將混合物給予實驗的大鼠。如表1所示，所有的生人參和茶葉(綠茶、紅茶和烏龍茶)以及穀物的提取物，例 如粳米和大麥提取物的可溶組分均可以提高糯米提取物的抗消化性潰瘍活性，雖然它們單 獨都沒有顯示顯著的抗消化性潰瘍活性。那些可溶組分的試驗中，茶葉提取物表現出最強 的增效作用。為了鑑別出產生表1所示的增效作用的化合物，一些候選化合物加入糯米提取物 的沉澱組分中，並測定對抗消化性潰瘍活性的改變。如表2所示，IOmM的(_)_表兒茶素(EC)、丹寧酸和半胱氨酸顯示出顯著的增強糯 米提取物的沉澱組分的抗消化性潰瘍活性的作用。另一方面，IOmM的其他胺基酸，抗壞血 酸，還原型穀胱甘肽，(「)「表沒食子兒茶素沒食子酸酯，肌醇六磷酸，沒食子酸，和咖啡因沒 有顯示任何顯著的增強作用(數據未披露)。表 權利要求
一種抗消化性潰瘍的組合物，其包含大米醇溶蛋白作為活性成分。
2.權利要求1所述的抗消化性潰瘍的組合物，其還包含至少一種選自以下組中的作為 提高抗消化性潰瘍活性的輔助組分茶提取物、生人參提取物、大麥提取物、(-)_表兒茶素 (EC)、丹寧酸和半胱氨酸。
3.權利要求2所述的抗消化性潰瘍的組合物，其中以1重量份的大米醇溶蛋白計，包含 1到80重量份的所述輔助組分。
4.權利要求1所述的抗消化性潰瘍的組合物，其中所述大米是糯米或粳米。
5.權利要求1所述的抗消化性潰瘍的組合物，其中該組合物製備成供口服給藥的形式。
全文摘要
本發明涉及包含以大米中的醇溶蛋白為活性成份的抗消化性潰瘍的藥物組合物。本發明的抗消化性潰瘍的藥物組合物具有顯者的預防和治療消化性潰瘍的效果，並且由於它以普通食物的蛋白作為活性成分，所以安全性好，可以廣泛應用。
文檔編號A61K31/195GK101983053SQ200980112096
公開日2011年3月2日 申請日期2009年3月26日 優先權日2008年4月2日
發明者安鳳煥, 宋東業, 崔基五, 張美善, 梁誠烈, 辛富安, 鄭榮燾 申請人:茶山M&F株式會社;全南大學校產學協力團