一種複方丹參滴丸質量控制方法

2023-10-11 16:54:24 2

專利名稱：一種複方丹參滴丸質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種複方丹參滴丸質量控制方法，具體地說是利用指紋圖譜檢測方法控制複方丹參滴丸製劑的質量。
背景技術：
心腦血管疾病是嚴重危害人類的常見疾病。近年來，由於社會的發展，工作、生活、飲食結構及環境等的變化，心腦血管疾病呈上升趨勢。對於心血管疾病的治療，雖然中藥單一靶點的作用強度低於西藥，但其多途徑、多靶點、動態整體治療、毒副作用小的特性則遠非西藥所能企及，療效確切的中成藥的綜合治療效果要超過西藥。複方丹參製劑多用來治療心腦血管疾病，例如複方丹參片、複方丹參滴丸、冠心丹參滴丸等。這些複方丹參製劑(均含有丹參、三七)因其配方不同，或者配方比例不同，或者提取精製方法不同，或者劑型不同，治療效果也有所差異。另外，由於這些複方丹參製劑的質量控制方法不夠全面，難以全面表徵它們的物理化學特徵。因此，對複方丹參製劑的提取精製方法、質量控制方法進行改進成為人們積極研究的課題。
丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的乾燥根及根莖。全國大部分地區均產。由於丹參因品種、產地、採收期不同而造成質量參差不齊，因而其製成品質量的穩定性也難以保證。目前，對丹參及其複方製劑的鑑定，往往是選取丹參的一、二個活性成分或指標成分進行含量測定，並以其含量多少來判定質量。例如，以丹參酮IIA含量(中國藥典2000年版一部58頁)或丹參素含量(張友芹等，中醫藥學報，2000，28(3)68)等來鑑別丹參藥材的質量；以丹參酮來判定丹參品種和產地情況(裘飛君，中國現代應用藥學，1998，15(5)16；胡世林等，中國中藥雜誌，1999，24(12)721)；用丹參素含量(嚴常開等，中國醫院藥學雜誌，2000，20(10)600)、原兒茶醛含量(鄭末晶等，中國藥事，2000，14(4)254)或丹參酮IIA含量(林偉忠等，中成藥，2000，22(11)766)等判別複方丹參製劑的質量，用丹參酮IIA含量鑑別不同廠家生產的複方丹參片的質量(邵水娟，中國藥業，2000，9(7)27)等。已知的丹參的化學成分有幾十種，其脂溶性成分大多為醌型紅黃色物質，如丹參酮I、IIA、IIB，丹參醌A、B、C，丹參酸鉀脂，異丹參酮I、II，隱丹參酮等。其水溶性成分大多為酚性醛、酚性酸、二萜酸，如丁二酸、丹酚酸A、B、C，3，4-二羥基苯甲酸等。此外，還分離出β-谷甾醇、維生素E等(王伯祥主編，中醫肝膽病學，第一版，中國醫藥科技出版社，1993年，96頁)。三七為五加科(Araliaceae)植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen，的乾燥根，主產於雲南、廣西及四川等地，是我國珍貴的特產藥材，常用中藥。其味甘，微苦，性溫，歸肝、腎經，具有散瘀止血、消腫止痛的功效，傳統用於治療跌打損傷和各種出血性疾病。研究表明，三七主要含有皂甙、多糖、胺基酸等化學成分，其中皂甙部分是三七活血化瘀功效應用的物質基礎，是三七主要的有效成分。三七總皂甙含有人參皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Bh1，三七皂甙R1、R2、R3、R4、R6等20餘種皂甙成分。這些成分均屬於達馬烷型[Dammarane type]四環三萜皂甙，其中人參皂甙Rb1、Rg1，三七皂甙R1是含量最高的3個成分，三七皂甙R1是三七最具代表性特徵的化合物。
中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特徵性的某類或數類成分的色譜或光譜的圖譜。在現階段中藥的有效成分絕大多數沒有明確的情況下，中藥指紋圖譜對於有效控制中藥材或中成藥的質量具有重要的意義。日本漢方藥主要生產企業在20世紀80年代就已經在企業內部採用高效液相指紋圖譜控制質量。德國、法國在對銀杏葉提取物聯合開發的過程中，發現銀杏葉提取物的醫療作用是提取物所得物質群的整體作用結果，而對這樣一個整體的質量控制，亦採用高效液相指紋圖譜方法。美國FDA最近幾年制定的植物草藥指南中已經明確把指紋圖譜作為混合物質群的質量控制方法(FDA.Guidance of IndustryBotanical Drug(Draft).2000 August)。隨著研究的深入，人們發現，作為中醫理論的實踐產物，中藥，尤其是複方中藥，其中所含的任一成分都不能代表其整體療效。人們逐漸認識到，現行的參照西藥(合成藥)質量控制模式的質量標準不能恰當地反映中藥內在的質量。從發展趨勢看，從現行的質量控制模式向一種綜合的、宏觀的、可量化的鑑別與主要有效成分含量測定結合已是發展的趨勢。
中藥質量評價的現行標準是利用光譜或色譜手段鑑別和測定某一種或幾種有效成分、活性成分或指標成分，以及藥典規定的常規檢查項目。如中國藥典2000年版[一部]共收載602種藥材及成藥品種。其中有992個薄層色譜鑑別，308個品種有含量測定〔容量法、光譜法、液相色譜法、氣相色譜法及薄層色譜掃描法〕，大多數品種有一般的檢查項目。顯然。這些質量標準的設置是模仿了化學藥品的模式。其它國家如英國、印度、美國草藥典、日本藥局方中的漢藥及德國Commission E編輯的德國草藥專論等也採用了基本相同的內容。對於化學藥品而言，其藥效成分為結構清晰的單一化合物，構效關係明確，其含量和純度直接表達其有效及安全性。然而，中醫用藥的特點是複方配伍，任何單一的有效或活性成分的含量高低均不能表達其整體的療效。例如，黃芪所含的黃芪甲苷(aastraga losideIV)是當前被選擇為質量標準的鑑別和含量測定的最為常見的目標，但並沒有依據證明黃芪甲苷與黃芪的功能主治的明確聯繫。同樣，黃連、黃柏、三棵針均含小梁鹼，一般都以它作為檢測的目標，但是三者的功能主治卻截然不同。複方製劑的情況就更加複雜。中醫這種不是一對一的非線性的理論和實踐說明中藥質量應該採用某種宏觀的綜合的質量評價手段。
複方丹參滴丸是由丹參、三七為主要原料製成的滴丸製劑，臨床上用於治療心腦血管疾病、冠心病、心絞痛、心肌缺血、微循環障礙所導致的各類疾病等，其治療效果已經得到臨床的驗證，而是否能夠保證藥物的質量以及複方丹參滴丸中有效成分的含量，是決定複方丹參滴丸療效的基礎。如果用一、二種丹參的活性成分來說明複方丹參滴丸的內在質量，具有一定的片面性，更不用說無藥效的指標成分了。要控制複方丹參滴丸的功效，只針對其一、二個化學成分進行表徵和控制是不夠的，必須對它的物質群整體予以控制。所以，除了「微觀分析」外，還應該用某種「宏觀分析」方法，從整體上有效地表徵中藥質量。指紋圖譜作為中草藥及其提取物質量控制方法，目前已經成為國際共識。現在，對丹參中活性成分如丹參酮、丹參素等的測定方法較多，對三七中活性成分如三七皂甙Rg1，人參皂甙Rg1等測定方法較多，但如何能夠從更宏觀的角度對複方丹參滴丸製劑進行質量控制的宏觀質量控制方法尚未見報導。

發明內容
本發明的目的是提供一種複方丹參滴丸質量控制的方法，通過此種方法，可控制複方丹參滴丸製劑的質量。
本發明的目的是建立一種中藥複方製劑質量控制的方法，本發明在一定條件下通過大量的實驗，將複方丹參滴丸對照樣品的指紋圖譜與丹參藥材指紋圖譜、複方丹參滴丸中間體指紋圖譜進行比較，觀察在相同的色譜測試條件下，其吸收峰的可重複性，以及通過指紋圖譜確定丹參藥材中的有效化學組分是否大部分進入複方丹參滴丸中間體以及複方丹參滴丸對照樣品中。通過實驗證明，本發明中複方丹參滴丸對照樣品中含有丹參藥材中大部分化學組分，因此測定複方丹參滴丸中丹參化學組分的指紋圖譜，並將其與相應的對照指紋譜圖進行對比，可以對複方丹參滴丸的質量進行控制。
本發明可通過下列步驟實施(a).複方丹參滴丸對照指紋圖譜的建立複方丹參滴丸對照樣品溶液的製備取複方丹參滴丸對照樣品，稱量後置容量瓶中，加蒸餾水超聲溶解，定容，過濾，製得所述對照樣品溶液；複方丹參滴丸對照指紋圖譜的測定吸取上述對照品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到複方丹參滴丸對照指紋圖譜，色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相A為磷酸水溶液；流動相B為乙腈磷酸水溶液；檢測波長275～285nm；(b).複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜的測定取複方丹參滴丸待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(c).將所述複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與所述複方丹參滴丸對照指紋圖譜進行比較，識別其相同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
優選的複方丹參滴丸對照指紋圖譜的建立採用如下方法(a).複方丹參滴丸對照指紋圖譜的建立複方丹參滴丸對照樣品溶液的製備取複方丹參滴丸對照樣品，稱量後置容量瓶中，加蒸餾水超聲溶解，定容，過濾，製得所述對照樣品溶液；複方丹參滴丸對照指紋圖譜的測定吸取上述對照品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到複方丹參滴丸對照指紋圖譜，色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相A為磷酸水溶液；流動相B為乙腈磷酸水溶液，流速0.500～1.500ml/min，檢測波長278～283nm，柱溫20～40℃；(b).複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜的測定取複方丹參滴丸待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(c).將所述複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與所述複方丹參滴丸對照指紋圖譜進行比較，識別其相同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
最為優選的複方丹參滴丸對照指紋圖譜的建立採用如下方法(a)複方丹參滴丸對照指紋圖譜的建立複方丹參滴丸對照品溶液的製備取複方丹參滴丸5～20粒，精密稱定，置10ml容量瓶中，加蒸餾水超聲15min，溶解，定容，過濾，製得所述對照樣品溶液；吸取上述對照品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到複方丹參滴丸對照指紋圖譜；色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相A為0.02％磷酸水溶液；流動相B為80％乙腈0.02％磷酸水溶液；梯度洗脫程序如下0min時，流動相A為90％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為10％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；8min時，流動相A為78％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為22％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；15min時，流動相A為74％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為26％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；55min時，流動相A為48％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為52％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；流速1.000ml/min，檢測波長280nm，柱溫30℃，進樣體積10μl；(b).複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜的測定取複方丹參滴丸待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(c).將所述複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與所述複方丹參滴丸對照指紋圖譜進行比較，識別其相同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
在本發明所述複方丹參滴丸對照指紋圖譜的建立中，其流動相A溶液的配製比例是按體積比配製，流動相B溶液的配製比例是按體積比配製。
在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的複方丹參滴丸的對照指紋圖譜中有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有3個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號峰，平均保留時間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；8號峰，平均保留時間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％；在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的複方丹參滴丸的對照指紋圖譜中有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積5％的吸收峰有4個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號峰，平均保留時間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；6號峰，平均保留時間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；
8號峰，平均保留時間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％；在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的複方丹參滴丸的對照指紋圖譜中有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積2％的吸收峰有8個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號峰，平均保留時間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；3號峰，平均保留時間RT為16.89min，RSD為0.61％，峰面積為366.89，RSD為10.92％；4號峰，平均保留時間RT為17.84min，RSD為0.07％，峰面積為381.40，RSD為13.81％；5號峰，平均保留時間RT為20.31min，RSD為0.96％，峰面積為186.08，RSD為12.04％；6號峰，平均保留時間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；7號峰，平均保留時間RT為27.73min，RSD為0.50％，峰面積為281.91，RSD為18.08％；8號峰，平均保留時間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％。
本發明採用如下方法控制複方丹參滴丸的質量，取待測複方丹參滴丸，採用與複方丹參滴丸對照樣品的製備方法、色譜條件、測定方法完全相同的方法進行測定，獲取指紋圖譜，將複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與複方丹參滴丸對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有3個或3個以上相同的吸收峰時，便認為複方丹參滴丸待測產品是合格產品。
優選地，複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與複方丹參滴丸對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有5個或5個以上相同的吸收峰時，便認為複方丹參滴丸待測產品是合格產品。
較為優選地，複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與複方丹參滴丸對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有7個或7個以上相同的吸收峰時，便認為複方丹參滴丸待測產品是合格產品。
最為優選地，複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與複方丹參滴丸對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有8個相同的吸收峰時，認為複方丹參滴丸待測產品是合格產品。
本發明還對丹參藥材、複方丹參滴丸中間體中的化學成分進行了測定，方法如下丹參藥材中化學組分高效液相標準指紋圖譜的測定方法如下丹參藥材標準樣品的製備取丹參藥材粉碎，置燒瓶中，加水，加熱回流，放冷，收集回流液，將殘渣中再加水，加熱回流，放冷，收集回流液，合併兩次回流液，定容，過濾，作為所述丹參藥材標準樣品溶液；色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相A為磷酸～水溶液；流動相B為乙腈磷酸水溶液，流速1.000ml/min，檢測波長280nm，柱溫30℃；
測定精密吸取所述丹參藥材標準樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到丹參組分化學成分的標準指紋圖譜。
優選的丹參藥材中化學組分高效液相指紋圖譜的測定方法如下丹參藥材標準樣品的製備取粉碎的丹參藥材2.5g，置燒瓶中，加50ml水，加熱回流1.5小時，放冷，收集回流液，將殘渣中再加50ml水，加熱回流1小時，放冷，收集回流液，合併兩煎回流液與100ml容量瓶中，定容，過濾，作為所述丹參藥材標準樣品；色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相A相為0.02％的磷酸水溶液；流動相B相為80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；色譜流動相洗脫梯度如下0min時，流動相A為90％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為10％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；8min時，流動相A為78％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為22％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；15min時，流動相A為74％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為26％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；55min時，流動相A為48％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為52％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；流速1.000ml/min，檢測波長280nm，柱溫30℃，進樣體積10μl；測定精密吸取所述標準樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到丹參組分化學成分的標準指紋圖譜；所述指紋圖譜中，丹參藥材中丹參組分化學成分有9個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積2％的吸收峰有9個，分別為1號峰，平均保留時間RT為5.99min，RSD為0.45％，峰面積為784.93，RSD為7.34％；2號峰，平均保留時間RT為9.85min，RSD為0.47％，峰面積為916.57，RSD為6.06％；3號峰，平均保留時間RT為20.13min，RSD為0.46％，峰面積為778.87，RSD為8.78％；4號峰，平均保留時間RT為22.37min，RSD為0.77％，峰面積為1165.13，RSD為7.60％；5號峰，平均保留時間RT為23.49min，RSD為0.45％，峰面積為1076.7，RSD為3.70％；6號峰，平均保留時間RT為24.51min，RSD為0.46％，峰面積為802.43，RSD為8.21％；7號峰，平均保留時間RT為27.26min，RSD為0.44％，峰面積為9017.8，RSD為10.82％；8號峰，平均保留時間RT為29.71min，RSD為0.32％，峰面積為539.37，RSD為13.30％；9號峰，平均保留時間RT為30.68min，RSD為0.29％，峰面積為496.67，RSD為15.23％。
丹參藥材中丹參組分化學成分有9個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積5％的吸收峰有7個，分別為1號峰，平均保留時間RT為5.99min，RSD為0.45％，峰面積為784.93，RSD為7.34％；2號峰，平均保留時間RT為9.85min，RSD為0.47％，峰面積為916.57，RSD為6.06％；3號峰，平均保留時間RT為20.13min，RSD為0.46％，峰面積為778.87，RSD為8.78％；4號峰，平均保留時間RT為22.37min，RSD為0.77％，峰面積為1165.13，RSD為7.60％；5號峰，平均保留時間RT為23.49min，RSD為0.45％，峰面積為1076.7，RSD為3.70％；6號峰，平均保留時間RT為24.51min，RSD為0.46％，峰面積為802.43，RSD為8.21％；7號峰，平均保留時間RT為27.26min，RSD為0.44％，峰面積為9017.8，RSD為10.82％。
丹參藥材中丹參組分化學成分有9個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有1個，該峰如下7號峰，平均保留時間RT為27.26min，RSD為0.44％，峰面積為9017.8，RSD為10.82％。
複方丹參滴丸中間體中丹參化學組分高效液相標準指紋圖譜的測定方法如下複方丹參滴丸中間體標準樣品的製備取丹參浸膏，置於容量瓶中，加蒸餾水超聲溶解，定容，過濾，即為所述複方丹參滴丸中間體標準樣品；色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相A為磷酸水溶液；流動相B為乙腈磷酸水溶液，流速1.000ml/min，檢測波長280nm，柱溫30℃；測定精密吸取所述複方丹參滴丸中間體標準樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到複方丹參滴丸中間體中丹參組分化學成分的標準指紋圖譜；優選的複方丹參滴丸中間體中丹參化學組分高效液相指紋圖譜的測定方法如下複方丹參滴丸中間體標準樣品的製備取丹參浸膏0.1g，精密稱定，置10ml容量瓶中，加蒸餾水超聲15min，溶解，定容，過濾，即為所述複方丹參滴丸中間體標準樣品；色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相A相為0.02％的磷酸水溶液；流動相B相為80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；色譜流動相洗脫梯度如下0min時，流動相A為90％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為10％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；8min時，流動相A為78％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為22％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；15min時，流動相A為74％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為26％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；55min時，流動相A為48％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為52％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；流速1.000ml/min，檢測波長280nm，柱溫30℃，進樣體積10μl；測定精密吸取所述複方丹參滴丸中間體標準樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到複方丹參滴丸中間體中丹參組分化學成分的標準指紋圖譜；所述指紋圖譜中，複方丹參滴丸中間體中丹參組分化學成分有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積2％的吸收峰有8個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.12min，RSD為0.83％，峰面積為2554.6，RSD為10.68％；2號峰，平均保留時間RT為10.00min，RSD為0.77％，峰面積為4438.6，RSD為14.63％；3號峰，平均保留時間RT為15.96min，RSD為0.58％，峰面積為740.16，RSD為13.18％；4號峰，平均保留時間RT為17.89min，RSD為1.17％，峰面積為667.68，RSD為13.47％；5號峰，平均保留時間RT為20.27min，RSD為2.94％，峰面積為654.73，RSD為15.01％；6號峰，平均保留時間RT為23.83min，RSD為0.88％，峰面積為1140.51，RSD為16.45％；7號峰，平均保留時間RT為27.67min，RSD為0.61％，峰面積為880.14，RSD為11.49％；8號峰，平均保留時間RT為30.93min，RSD為0.47％，峰面積為2965.29，RSD為10.21％。
所述指紋圖譜中，複方丹參滴丸中間體中丹參組分化學成分有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積5％的吸收峰有6個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.12min，RSD為0.83％，峰面積為2554.6，RSD為10.68％；2號峰，平均保留時間RT為10.00min，RSD為0.77％，峰面積為4438.6，RSD為14.63％；3號峰，平均保留時間RT為15.96min，RSD為0.58％，峰面積為740.16，RSD為13.18％；6號峰，平均保留時間RT為23.83min，RSD為0.88％，峰面積為1140.51，RSD為16.45％；7號峰，平均保留時間RT為27.67min，RSD為0.61％，峰面積為880.14，RSD為11.49％；8號峰，平均保留時間RT為30.93min，RSD為0.47％，峰面積為2965.29，RSD為10.21％。
所述指紋圖譜中，複方丹參滴丸中間體中丹參組分化學成分有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有3個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.12min，RSD為0.83％，峰面積為2554.6，RSD為10.68％；2號峰，平均保留時間RT為10.00min，RSD為0.77％，峰面積為4438.6，RSD為14.63％；8號峰，平均保留時間RT為30.93min，RSD為0.47％，峰面積為2965.29，RSD為10.21％。
本發明通過測定複方丹參滴丸、複方丹參滴丸中間體、丹參藥材的指紋圖譜發現，三者中吸收峰的數量幾乎完全相同，說明採用複方丹參滴丸對照樣品的指紋圖譜作為複方丹參滴丸質量控制標準可以客觀地反映產品內在成分的有無與含量，以便全面控制產品的質量。
本發明的優點如下(1).以複方丹參滴丸中主要有效成分丹參化學組分為指標建立起來的HPLC標準指紋圖譜，代表著複方丹參滴丸大部分藥理活性，能有效地表徵複方丹參滴丸的質量。從而實現對複方丹參滴丸最大可能的化學成分進行檢測，有利於對中藥質量的全方面監控。
(2).把複方丹參滴丸中丹參各有效成分指紋圖形作為一個整體看待，注重各個構成指紋特徵峰的前後順序和相互關係，注重整體面貌特徵，既避免了因只測定一、二個化學成分而判定複方丹參滴丸整體質量的片面性，又減少了為質量達標而人為處理的可能性。本發明為完整、準確評價複方丹參滴丸的質量提供了新的對照標準，將為提高複方丹參滴丸及其他以丹參、三七為主要成分成方製劑的質量及療效做出貢獻。
(3).本發明具有方法簡便、穩定、精密度高、重現性好、易於掌握的特點。
本發明提供了一種複方丹參滴丸的鑑定方法，本發明是通過大量實驗所得到的切實可行的方法。在本發明中通過高效液相、在相同測試條件下所獲取的複方丹參滴丸中丹參化學組分高效液相標準指紋圖譜，具有重複性好的特點，因此可通過將上述測定方法建立的複方丹參滴丸指紋圖譜作為標準指紋圖譜，用於鑑定含有丹參、三七有效成分的中藥製劑。
對於本領域技術人員而言，根據本發明所公開的技術內容，本領域技術人員將很清楚本發明的其它實施方案，本發明實施例僅作為示例。在不違反本發明主旨及範圍的情況下，可對本發明進行各種改變和改進。例如，使用不同的檢測儀器所獲得的測定結果可能有所不同，但只要使用本發明所述的質量控制方法，均在本發明保護範圍之內。


下面給出丹參藥材指紋圖譜、複方丹參滴丸中間體中丹參有效成分的指紋圖譜、複方丹參滴丸中丹參有效成分的指紋圖譜、不同來源的丹參化學組分HPLC指紋圖譜的對照，旨在進一步說明本發明，但對本發明並不構成限制。
圖1丹參藥材中丹參有效成分的指紋圖譜圖2複方丹參滴丸中間體中丹參有效成分的指紋圖譜圖3複方丹參滴丸中丹參有效成分的指紋圖譜圖4不同來源的丹參化學組分HPLC指紋圖譜的對照其中1為複方丹參滴丸2為複方丹參滴丸中間體3為丹參藥材
具體實施例方式
下面列舉製備方面的實施例進一步詳細說明本發明，該實施例僅用於說明本發明，對本發明並不構成限制。
實施例一(製備例)稱取丹參41.06g、三七8.03g，加水煎煮二次，第一次4倍量水2小時，第二次3倍量水1小時，過濾，濾液合併，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時，加濃度為90％左右乙醇至乙醇含量為65％(20℃)，靜置12小時，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對密度為1.37(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和冰片0.46g，與聚乙二醇-6000 18g混和均勻，加熱至溫度85℃，化料80分鐘後，移至罐溫保持在86℃的滴丸機滴罐中。藥液滴至8℃液體石蠟中，取出滴丸，除油，篩網選丸，即得。
實施例二(製備例)稱取丹參59.36g、三七6.38g，加水煎煮二次，第一次4倍量水2.5小時，第二次3倍量水1.5小時，過濾，濾液合併，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時，加濃度為85％左右乙醇至乙醇含量為70％(20℃)，靜置10小時，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對密度為1.35(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和冰片0.34g，與聚乙二醇-6000 23g混和均勻，加熱至溫度89℃，化料100分鐘後，移至罐溫保持在85℃的滴丸機滴罐中。藥液滴至8℃甲基矽油中，取出滴丸，除油，篩網選丸，即得。
實施例三(製備例)稱取丹參31.12g、三七9.21g，加藥材總量0.5％的氫氧化鈉，煎煮二次，第一次4倍量水1.5小時，第二次3倍量水1.5小時，過濾，濾液合併，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時，加濃度為88％左右乙醇至乙醇含量為66％(20℃)，靜置10小時，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對密度為1.40(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和冰片0.50g，甘露醇90g、依地酸鈣鈉15g和蒸餾水15ml，上述組分混勻後，冷凍乾燥，製成粉針劑。
實施例四(製備例)稱取丹參116.35g、三七58.21g，加藥材總量2.0％的碳酸氫鈉，煎煮二次，第一次4倍量水2小時，第二次3倍量水1.5小時，過濾，濾液合併，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時，加濃度為88％左右乙醇至乙醇含量為66％(20℃)，靜置10小時，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對密度為1.40(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和降香油1.8g，與40g微晶纖維素混合均勻，加3％聚維酮乙醇溶液制軟材，過18目篩制顆粒，60℃乾燥35分鐘，整粒，加入4g滑石粉，混勻，充於膠囊中，即得。
實施例五(製備例)稱取丹參116.35g、三七58.21g，加水煎煮二次，第一次4倍量水2小時，第二次3倍量水1.5小時，過濾，濾液合併，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時，加濃度為88％左右乙醇至乙醇含量為66％(20℃)，靜置10小時，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對密度為1.40(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和冰片0.9g，與微晶纖維素120g、羥丙甲基纖維素40g、木糖醇5g、硬脂酸鎂2g混合均勻，壓片，即得。
實施例六(製備例)稱取丹參140.35g、三七36.42g，加藥材總量2.5％的碳酸氫鈉，煎煮二次，第一次4倍量水2小時，第二次3倍量水1.5小時，過濾，濾液合併，濃縮至比重為1.19-1.20(75±1℃)時，加濃度為90％左右乙醇至乙醇含量為65％(20℃)，靜置8小時，分離上清液，回收乙醇，濃縮至藥液相對密度為1.35(55-60℃)，得丹參三七浸膏。取上述丹參三七浸膏和冰片1.0g，與46g微晶纖維素混合均勻，加3％聚維酮乙醇溶液制軟材，過18目篩制顆粒，60℃乾燥30分鐘，整粒，加入4g滑石粉，混勻，壓片，即得。
實施例七(複方丹參滴丸丹參組分指紋圖譜檢測例)1、儀器與試劑儀器採用Agilent 1100液相色譜，包括四元泵，在線脫氣裝置，自動進樣器，DAD檢測器，柱溫箱，Chemstation工作站；BS210S電子天平(1/10-4g)(北京塞多利斯公司)、METTLERAE240電子天平(1/10-4g或1/10-5g)(梅特勒—託利多(上海)有限公司)、LD4-2離心機(4000r/min)(北京醫用離心機廠)、數顯恆溫水浴鍋(天津長風有限公司)、RE-52AA旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠)、SHE-(III)循環水式真空泵(鞏義英峪予華儀器廠)、KQ-250B超聲波清洗器(崑山市超聲儀器有限公司)、HENGAO TD過濾器(HENGGAO TD)、合成纖維過濾膜(孔徑0.45μm)(上海興亞淨化材料廠)；試劑乙腈(色譜純，美國墨克公司)，磷酸(優級純)，娃哈哈純淨水。
2、複方丹參滴丸對照樣品的製備複方丹參滴丸供試品的製備取實施例一各批次複方丹參滴丸10粒，精密稱定，置10ml容量瓶中，加蒸餾水超聲15min，溶解，定容，過濾，即為供試品。
複方丹參滴丸中間體標準樣品的製備取實施例一各批次丹參三七浸膏0.1g，精密稱定，置10ml容量瓶中，加蒸餾水超聲15min，溶解，定容，過濾，即為供試品。
丹參藥材標準樣品的製備取丹參藥材(粉碎)2.5g，置燒瓶中，加50ml水，加熱回流1.5小時，放冷，收集回流液。將殘渣中再加50ml水，加熱回流1小時，放冷，收集回流液。合併兩煎回流液與100ml容量瓶中，定容，過濾，作為供試品。
3、HPLC分析條件Agilent ZoRBAx SB-C18(4.6×250mm，5μm)色譜柱，流動相A相為0.02％的磷酸水溶液；B相為80％乙腈0.02％的磷酸水溶液。流速1.000ml/min，檢測波長280nm，柱溫30℃，進樣體積10μl。
色譜流動相洗脫梯度如下表

成分名稱

數據分析共計對200餘批覆方丹參浸膏分別進行丹參指紋圖譜分析，其相似度均在90％以上。現將圖譜的保留時間、峰面積的平均值以及RSD值匯總如下丹參指紋圖譜部分

共計對200餘批覆方丹參滴丸分別進行丹參指紋圖譜分析，其相似度均在90％以上。現將圖譜的保留時間、峰面積的平均值以及RSD值匯總如下複方丹參滴丸指紋圖譜部分

在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的複方丹參滴丸的對照指紋圖譜中有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有3個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號峰，平均保留時間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；8號峰，平均保留時間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％；在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的複方丹參滴丸的對照指紋圖譜中有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積5％的吸收峰有4個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號峰，平均保留時間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；6號峰，平均保留時間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；8號峰，平均保留時間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％；在對照指紋圖譜的建立中使用高效液相色譜法測定所獲得的複方丹參滴丸的對照指紋圖譜中有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積2％的吸收峰有8個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號峰，平均保留時間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；3號峰，平均保留時間RT為16.89min，RSD為0.61％，峰面積為366.89，RSD為10.92％；4號峰，平均保留時間RT為17.84min，RSD為0.07％，峰面積為381.40，RSD為13.81％；5號峰，平均保留時間RT為20.31min，RSD為0.96％，峰面積為186.08，RSD為12.04％；6號峰，平均保留時間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；7號峰，平均保留時間RT為27.73min，RSD為0.50％，峰面積為281.91，RSD為18.08％；8號峰，平均保留時間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％。
權利要求
1.一種複方丹參滴丸的質量控制方法，其特徵在於包括如下步驟(a).複方丹參滴丸對照指紋圖譜的建立複方丹參滴丸對照樣品溶液的製備取複方丹參滴丸對照樣品，稱量後置容量瓶中，加蒸餾水超聲溶解，定容，過濾，製得所述對照樣品溶液；複方丹參滴丸對照指紋圖譜的測定吸取上述對照樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到複方丹參滴丸對照指紋圖譜，色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相A為磷酸水溶液；流動相B為乙腈磷酸水溶液；檢測波長275～285nm；(b).複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜的測定取複方丹參滴丸待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(c).將所述複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與所述複方丹參滴丸對照指紋圖譜進行比較，識別二者所具有的共同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
2.如權利要求1所述的複方丹參滴丸的質量控制方法，其特徵在於所述(a)步驟中流動相的流速0.500～1.500ml/min，檢測波長278～283nm，柱溫20～40℃。
3.如權利要求1所述的複方丹參滴丸的質量控制方法，其特徵在於所述(a)步驟中複方丹參滴丸對照樣品溶液的製備方法為，取複方丹參滴丸對照樣品5～20粒，精密稱定，置10ml容量瓶中，加蒸餾水超聲15min，溶解，定容，過濾；色譜條件流動相A為0.02％磷酸水溶液；流動相B為80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；梯度洗脫程序如下0min時，流動相A為90％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為10％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；8min時，流動相A為78％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為22％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；15min時，流動相A為74％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為26％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；55min時，流動相A為48％的0.02％的磷酸水溶液，流動相B為52％的80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；流速1.000ml/min，檢測波長280nm，柱溫30℃，進樣體積10μl。
4.如權利要求1、2或3所述的複方丹參滴丸的質量控制方法，其特徵在於複方丹參滴丸對照指紋圖譜的建立中，其流動相A溶液的配製比例是按體積比配製，流動相B溶液的配製比例是按體積比配製。
5.如權利要求1、2或3所述的複方丹參滴丸的質量控制方法，其特徵在於，所述複方丹參滴丸的對照指紋圖譜中有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有3個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號峰，平均保留時間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；8號峰，平均保留時間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％。
6.如權利要求1、2或3所述的複方丹參滴丸的質量控制方法，其特徵在於所述複方丹參滴丸的對照指紋圖譜中有8個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積5％的吸收峰有4個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號峰，平均保留時間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；6號峰，平均保留時間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；8號峰，平均保留時間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％。
7.如權利要求1、2或3所述的複方丹參滴丸的質量控制方法，其特徵在於，所述複方丹參滴丸的對照指紋圖譜中有8個吸收峰，其單峰面積均超過總峰面積的2％的吸收峰有8個，分別為1號峰，平均保留時間RT為6.04min，RSD為0.31％，峰面積為1627.92，RSD為5.91％；2號峰，平均保留時間RT為9.90min，RSD為0.25％，峰面積為2575.54，RSD為13.53％；3號峰，平均保留時間RT為16.89min，RSD為0.61％，峰面積為366.89，RSD為10.92％；4號峰，平均保留時間RT為17.84min，RSD為0.07％，峰面積為381.40，RSD為13.81％；5號峰，平均保留時間RT為20.31min，RSD為0.96％，峰面積為186.08，RSD為12.04％；6號峰，平均保留時間RT為23.74min，RSD為0.76％，峰面積為555.35，RSD為10.48％；7號峰，平均保留時間RT為27.73min，RSD為0.50％，峰面積為281.91，RSD為18.08％；8號峰，平均保留時間RT為31.02min，RSD為1.18％，峰面積為1852.33，RSD為14.84％。
8.如權利要求1、2或3所述的複方丹參滴丸的質量控制方法，其特徵在於，所述複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與所述複方丹參滴丸對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有3個或3個以上相同的吸收峰時，認為所述複方丹參滴丸待測產品的質量合格。
9.如權利要求8所述的複方丹參滴丸的質量控制方法，其特徵在於，所述複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與所述複方丹參滴丸對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有5個或5個以上相同的吸收峰時，認為所述複方丹參滴丸待測產品的質量合格。
10.如權利要求8所述的複方丹參滴丸的質量控制方法，其特徵在於，所述複方丹參滴丸待測產品指紋圖譜與所述複方丹參滴丸對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有7個或7個以上相同的吸收峰時，認為所述複方丹參滴丸待測產品的質量合格。
11.如權利要求8所述的複方丹參滴丸質量控制方法，其特徵在於被測的複方丹參滴丸產品指紋圖譜與對照複方丹參滴丸指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有8個相同的吸收峰時，認為所述複方丹參滴丸待測產品的質量合格。
全文摘要
本發明涉及一種複方丹參滴丸的質量控制方法。該方法包括，在本發明所述條件下，使用高效液相色譜法測定複方丹參滴丸對照樣品的指紋圖譜；並使用相同的條件和方法測定複方丹參滴丸待測產品的指紋圖譜，將二者進行對比，當二者所具有的共同的吸收峰數目達到，本發明所述值時，認為該待測產品的質量合格。
文檔編號A61P9/00GK1679871SQ20051005526
公開日2005年10月12日 申請日期2005年3月17日 優先權日2004年3月17日
發明者程翼宇, 葉正良, 吳永江, 範驍暉, 王毅, 孫玉俠, 李淑菊 申請人:天津天士力製藥股份有限公司