黃花杓蘭種子無菌繁殖方法
2023-10-30 10:10:52
專利名稱：黃花杓蘭種子無菌繁殖方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域，具體地，涉及杓蘭屬植物種子無菌繁殖方法。
杓蘭屬是著名的蘭科(Orchidaceae)觀賞屬之一。該屬全世界有47種，中國有32種，主要分布於中國西南的橫斷山區和北美。杓蘭花色豔麗，花型奇特，其唇瓣呈拖鞋狀，故有「拖鞋蘭」之稱，具有很高的觀賞和開發價值。杓蘭屬是溫帶陸生蘭，種子人工無菌萌發很困難，有些杓蘭種類的種子萌發率還不到1％。杓蘭種子無菌繁殖在歐美等國家開展較多，但繁殖率並不十分理想，黃花杓蘭(Cypripedium flavum P．F．Hunt et Summerh．)為中國特有種，目前國內外尚未見黃花杓蘭種子無菌繁殖實生苗的報導。
本發明的目的在於提供一種黃花杓蘭種子無菌繁殖實生苗的方法，該方法具有操作簡單，種子萌發率高，易於大規模生產。
為了實現上述目的，本發明提供了如下技術方案黃花杓蘭種子無菌繁殖方法，包括種子的採集、預處理，培養基的配製，播種，原球莖培養步驟，培養基採用Harvais培養基改良型，將Harvais培養基中的NH4NO3去除，添加2．0mg／L甘氨酸，100mg／L穀氨醯胺，500mg／L酪蛋白水解物；原球莖培養將剛萌發形成的原球莖轉移到無激素的Harvais培養基中，置於黑暗中23℃恆溫培養，培養一個月後，將原球莖轉移到添加了0．5g／L活性炭的無激素Harvais培養基中繼續培養，當原球莖分化出芽和根，形成幼苗時，將幼苗轉移到光下培養，光照強度為2000lux，待幼苗葉片轉綠，出瓶栽培。
與現有技術相比，本發明具有以下有益效果和優異性1)進行了黃花杓蘭種子無菌繁殖研究，成功得到實生苗；2)採用的種子萌發培養基為本研究首次研製的改良型培養基，黃花杓蘭種子萌發率很高，可達90％以上；3)採用本發明的種子萌發和原球莖培養技術，黃花杓蘭原球莖成苗過程不需要經過低溫春化處理，與國外報導的杓蘭屬其它種的成苗技術不同。大大縮短了實生苗成苗周期，實生苗粗壯，易移栽成活。
下面用實施例來進一步說明本發明的實質內容，但本發明的內容並不局限於此。
實施例11、種子的採集採用人工授粉後第15周的黃花杓蘭(Cypripedium flavum P．F．Hunt et Summerh．)蒴果。2、種子的預處理1)將蒴果在自來水中衝洗乾淨，置於75％的酒精中浸泡0．5小時。
2)無菌條件下剖開蒴果，取出種子，將種子置於0．5％NaClO溶液中處理10分鐘，無菌水衝洗3次，無菌濾紙吸乾。3、培養基配製
1)培養基Harvais培養基(見表1)改良型，即是將Harvais培養基中的NH4NO3去除。添加2．0mg／L 甘氨酸，100mg／L 穀氨醯胺，500mg／L酪蛋白水解物。
2)配製改良型Harvais培養基＋0．4mg／L激動素＋20g／L葡萄糖＋2％土豆＋6．5g／L瓊脂，pH值用1N的NaOH調節至5．5。
將配好的培養基分裝到100mL的玻璃三角瓶中，每瓶約30mL，用橡皮塞塞住瓶口。培養基在121℃，15個大氣壓條件下滅菌15分鐘。冷卻備用。4、播種無菌條件下將黃花杓蘭種子播於改良型Harvais培養基中。置於黑暗中23℃恆溫培養。5、原球莖培養1)將剛萌發形成的原球莖轉移到無激素的Harvais培養基中培養，100mL玻璃三角瓶中每瓶約播原球莖10個。置於黑暗中23℃恆溫培養。
2)約培養一個月後，將原球莖轉移到添加了0．5g／L活性炭的無激素Harvais培養基中繼續培養。
3)當原球莖分化出長約1．0cm的芽和1-3條根，形成幼苗時，將幼苗轉移到光下培養，光照強度為2000lux。2周後幼苗葉片轉綠，即可出瓶栽培。
附表1Harvais培養基大量元素 每升培養基用量 母液Ca(NO3)2·4H2O 400mg4g／LNH4NO31400mg 14g／LKH2PO4200mg2g／LMgSO4·7H2O 200mg2g／LKNO3200mg2g／LKCl 100mg1g／L微量元素H3BO30．5mg 500mg／LCuSO4·5H2O 0．025mg 25mg／LZnSO4·7H2O 0．5mg 50mg／LNa2MoO4·2H2O 0．02mg 20mg／LCo(NO3)2·6H2O 0．025mg 25mg／LKI 0．1mg 100mg／LMnSO4．H2O 1．54mg 1540mg／L檸檬酸鐵鹽(NH4)3C6H5O719mg 190mg／LFe(NH4)3(C6H5O7)225mg 250mg／L有機成分煙酸 10mg100mg／L泛酸鈣5mg 50mg／L維生素B15mg50mg／L土豆 2％葡萄糖20g瓊脂 6．5gpH＝5．權利要求
1.黃花杓蘭種子無菌繁殖方法，包括種子的採集、預處理，培養基的配製，播種，原球莖培養步驟，其特徵在於培養基採用Harvais培養基改良型，將Harvais培養基中的NH4NO3去除，添加2．0mg／L甘氨酸，100mg／L穀氨醯胺，500mg／L酪蛋白水解物；原球莖培養將剛萌發形成的原球莖轉移到無激素的Harvais培養基中，置於黑暗中23℃恆溫培養，培養一個月後，將原球莖轉移到添加了0．5g／L活性炭的無激素Harvais培養基中繼續培養，當原球莖分化出芽和根，形成幼苗時，將幼苗轉移到光下培養，光照強度為20001ux，待幼苗葉片轉綠，出瓶栽培。
全文摘要
提供一種杓蘭屬黃花杓蘭種子無菌繁殖實生苗的方法,該方法包括種子的採集、預處理,培養基配製,播種,原球莖培養步驟,操作簡單,大大縮短了實生苗成苗周期,實生苗粗壯,易移栽成活,種子萌發率高,易於大規模生產。
文檔編號A01G31/00GK1278401SQ00109999
公開日2001年1月3日 申請日期2000年8月10日 優先權日2000年8月10日
發明者胡虹, 黃家林, 王 華, 李樹雲, 羅桂芬 申請人:中國科學院昆明植物研究所