用作tpo模擬物的化合物和組合物的製作方法

2023-10-29 00:28:32

專利名稱：用作tpo模擬物的化合物和組合物的製作方法
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本申請請求2005年7月14日提交的美國臨時申請號US60/699,481的優先權權益。本文引用該申請所有公開內容作為參考並用於所有目的。
背景技術：
發明領域 本發明提供了一類新的化合物，包含這類化合物的藥物組合物和使用這類化合物治療或預防與異常或失調的TPO活性相關的疾病或障礙，特別是涉及血小板減少的疾病或障礙的方法。

背景技術：
巨核細胞為骨髓衍生的細胞，它們產生循環的血小板。造血細胞因子血小板生成素(TPO)支持造血幹細胞增殖和分化過程並且對巨核細胞調節而言是必需的。
本發明的新化合物作為TPO模擬物用於治療參與或導致血液或血小板減少的疾病或病症，包括，但不限於放療、化療、免疫療法、癌症、病毒感染和移植，諸如骨髓和幹細胞移植。
發明概述 本發明在一個方面中提供了式I的化合物及其N-氧化物衍生物，前體藥物衍生物，被保護的衍生物，各異構體及其異構體混合物和這類化合物的藥學上可接受的鹽和溶劑合物(例如水合物)
其中 n選自0、1、2和3； m選自0和1； Y選自CR9R10、NR9、O和S(O)2；其中R9和R10獨立地選自氫和C1-6烷基； R1選自氫、滷素、氰基、硝基、NR9R10、C1-6烷基、C1-6烷氧基、滷素-取代的-C1-6烷氧基、滷素-取代的-C1-6烷基、C3-12環烷基和C3-8雜環烷基；其中R9和R10獨立地選自氫和C1-6烷基； R2和R3獨立地選自滷素、氰基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、滷素-取代的-C1-6烷基、C6-10芳基、C1-10雜芳基、C3-8雜環烷基和C3-12環烷基；其中R2或R3的任意烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基任選被1-3個獨立地選自如下的基團取代滷素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷氧基、-NR12R13、-XOR13、-S(O)2R13、C3-12環烷基、C3-8雜環烷基、C6-10芳基和C1-10雜芳基；其中X為鍵或C1-6亞烷基且R12和R13獨立地選自C1-6烷基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基和滷素-取代的-C1-6烷氧基；其中R2和R3的任意芳基、雜芳基、環烷基和雜環烷基取代基任選進一步被1-3個獨立地選自如下的基團取代滷素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基和滷素-取代的-C1-6烷氧基； R4選自氫、滷素、氰基、硝基、XNR9R10、OXNR9R10、C1-6烷基、C1-6烷氧基、滷素-取代的-C1-6烷氧基、滷素-取代的-C1-6烷基、C3-12環烷基、C3-8雜環烷基、C6-10芳基和C1-10雜芳基；其中X為鍵或C1-6亞烷基且R9和R10獨立地選自氫和C1-6烷基； R5、R6和R7獨立地選自氫、C1-6烷基、C3-8雜環烷基、C1-10雜芳基、C6-10芳基、OS(O)2R11、NR11S(O)2R14、NR11C(O)R14、NR11C(O)NR11R14、NR11C(O)C(O)OR14、NR11C(O)OR14、OC(O)NR11R14、C(O)OR11、C(O)R15、NR11R14、NR11R15和C(O)NR11R14；其中R11和R14獨立地選自氫、C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基和被NR9R10取代的C1-6烷基；R15為任選被1-3個C1-6烷基取代的C3-8雜環烷基；其中R5、R6和R7的任意芳基、雜環烷基或雜芳基可以進一步任選被1-3個獨立地選自如下的基團取代滷素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷氧基、OS(O)2R11、NR11S(O)2R14、NR11C(O)R14、NR11C(O)NR11R14、NR11C(O)C(O)OR14、NR11C(O)OR14、OC(O)NR11R14、C(O)OR11、C(O)R15、NR11R14、NR11R15和C(O)NR11R14；其中R11，R14和R15如上述所定義； R8選自氫、滷素、氰基、C1-6烷氧基、滷素-取代的-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷氧基和C1-6烷基。
本發明在第二個方面中提供了藥物組合物，它包含式I的化合物或其N-氧化物衍生物，各異構體及其異構體混合物或其藥學上可接受的鹽與一種或多種合適的賦形劑的混合物。
本發明在第三個方面中提供了治療動物疾病或病症的方法，其中血小板水平升高可以抑制或改善所述疾病或病症的病理學和/或症狀學情況，該方法包含對所述的動物給予治療有效量的式I的化合物或其N-氧化物衍生物，各異構體及其異構體混合物或其藥學上可接受的鹽。
本發明在第四個方面中提供了式I的化合物在製備用於治療動物疾病或病症的的藥物中的用途，其中所述疾病或病症的病理學和/或症狀學由血小板水平下降引起。
本發明的第五個方面中提供了製備式I的化合物及其N-氧化物衍生物，前體藥物衍生物，被保護的衍生物，各異構體及其異構體混合物及其藥學上可接受的鹽的方法。
發明詳述 定義 「烷基」作為基團和其它基團的結構元件，例如滷素-取代的-烷基和烷氧基，其可以為直鏈或支鏈的。C1-4-烷氧基包括甲氧基、乙氧基、等。滷素-取代的烷基包括三氟甲基、五氟乙基等。
「芳基」意指含6-10個環碳原子的單環或稠合雙環芳族環組合。例如芳基可以為苯基或萘基，優選苯基。「亞芳基」意指衍生自芳基的二價基團。
將「雜芳基」如上述對芳基所定義，其中環成員中的一個或多個為雜原子。例如，C1-10雜芳基包括吡啶基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯並呋喃基、苯並吡喃基、苯並硫代吡喃基、苯並[1，3]間二氧雜環戊烯、咪唑基、苯並-咪唑基、嘧啶基、呋喃基、唑基、異唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、噻吩基等。
「環烷基」意指包含所示環原子成員的飽和或部分不飽和的單環、稠合雙環或橋連多環組合。例如C3-10環烷基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基等。
「雜環烷基」意指如本申請中定義的環烷基，條件是所示環碳中的一個或多個被選自-O-、-N＝、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-的部分所替換，其中R為氫、C1-4烷基或氮保護基。例如，作為本申請中用於描述本發明化合物的C3-8雜環烷基包括嗎啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶基酮、1，4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸-8-基等。
「滷素(halogen)」(或滷素(halo))優選表示氯或氟，但也可以為溴或碘。
「血小板生成素(TPO)」在本領域中也稱作c-Mpl配體、mpl配體、巨核細胞生成素和巨核細胞生長和發育因子。
「治療(Treat)」、「治療(treating)」和「治療(treatment)」意指緩解或減輕疾病和/或其伴隨症狀的方法。
優選實施方案的描述 本發明提供了治療血小板減少的化合物、組合物和方法。可以將血小板減少廣泛解釋為認為血小板數量低於正常值或健康個體要求的任意下降。
在一個實施方案中，涉及式I的化合物，n選自0、1和2； Y選自CR9R10、O和S(O)2；其中R9和R10獨立地選自氫和C1-6烷基； R1選自氫、C1-6烷基和滷素-取代的-C1-6烷基； R2選自滷素、C6-10芳基、C1-6烷基和C2-6鏈烯基；其中R2的任意芳基任選被1-3個獨立地選自滷素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的基團取代； R3選自滷素、羥基、氰基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、滷素-取代的-C1-6烷基、C6-10芳基和C1-10雜芳基；其中R3的任意芳基或雜芳基任選被1-3個獨立地選自如下的基團取代滷素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷氧基、-NR12R13、-XOR13、-S(O)2R13和C3-8雜環烷基；其中X為鍵或C1-6亞烷基且R12和R13獨立地選自氫和C1-6烷基； R4選自氫和滷素； R5選自氫和C1-6烷基； R6選自C1-10雜芳基、OS(O)2R11、NR11S(O)2R14、NR11C(O)R14、NR11C(O)OR14、C(O)OR11、R15、NR11R14和C(O)NR11R14；其中R11和R14獨立地選自氫、C1-6烷基、羥基-C1-6烷基和滷素-取代的-C1-6烷基；R15為任選被1-3個C1-6烷基取代的C3-8雜環烷基； R7選自氫、羥基、NR11S(O)2R14和NR11R14；其中R11和R14如上述所定義；且 R8選自氫和C1-6烷基。
在另一個實施方案中，n選自0和1；且Y選自CR9R10、O和S(O)2；其中R9和R10獨立地選自氫和甲基。
在另一個實施方案中，R1選自氫和三氟甲基；且R2選自氫、溴、氯、碘、烯丙基、三氟甲基和任選被1-3個獨立地選自甲基和乙基的基團取代的苯基。
在另一個實施方案中，R3選自氫、溴、氯、氰基、三氟甲基、烯丙基、嘧啶基、吡啶基、哌啶基、苯並唑基、噻唑基和苯基；其中所述的嘧啶基、噻唑基和苯基任選被1-3個獨立地選自如下的基團取代氯、氟、甲基、乙基、丙基、丁基、異-丁基、叔-丁基、異丙氧基、丙氧基、甲氧基、二甲基氨基、甲氧基-甲基、羥基、環己基、吡啶基、甲基磺醯基、乙基磺醯基、嗎啉代、二乙基氨基、吡嗪基、哌啶基、苯基、三氟甲基、己烷基和氰基-甲基。
在另一個實施方案中，R4選自氫、氟和溴。
在另一個實施方案中，R5和R8均為氫。
在另一個實施方案中，R6選自氨基、脲基、羥基-乙醯基氨基、羧基、甲氧基羰基、甲氧基羰基-氨基、4H-[1，2，4]二唑-5-酮、四唑基、甲基-氨基羰基、二甲基氨基羰基、甲基-羰基-氨基、嗎啉代-羰基、甲基-哌嗪基-羰基、氰基、四唑基、氨基-羰基、甲基磺醯基氨基、甲基磺醯基氨基-羰基、叔-丁氧基羰基-氨基、羥基-羰基-甲基氨基、羥基-甲基-羰基-氨基、草醯基氨基和三氟甲基-磺醯氧基。
在另一個實施方案中，R7選自氫、羥基、甲基-羰基-氨基、氨基和氨基-羰基。
另一個實施方案中詳細描述了下文實施例和表中的化合物。
藥理學和應用 可以將血小板減少廣泛解釋為認為低於正常值或對健康個體所需的血小板數量的任意下降。已知血小板減少具有許多致病因素，包括，但不限於化療、化療、免疫療法、免疫性血小板減少性紫癜、骨髓異常增生症候群(MDS)、再生障礙性貧血、AML、CML、病毒感染(包括，但不限於HIV、C型肝炎病毒、細小病毒)、肝病、重度骨髓抑制、骨髓移植、幹細胞移植、外周血幹細胞移植、祖細胞缺陷、幹細胞和祖細胞多態現象、TPO缺乏、中性白細胞減少、樹突細胞活動化、增殖、活化或分化。
TPO在治療患有血小板計數減少的患者中具有顯著的治療價值。特別地，具有許多類型癌症的患者存在血小板減少，這是因骨髓抑制性化療或放療所致，這種化療或放療可以導致出血風險增加並且通常限制了為接受加強化療或骨髓移植給予的化療劑的劑量。
本發明的化合物用於治療血小板減少，而與導致該病症的因素或多種因素無關。本發明的化合物還用於治療在致病因素或多種致病因素未知或尚未得到鑑定時的血小板減少。本發明的化合物是有用的，無論是否涉及血液或血小板減少，包括，但不限於移植術、手術、分娩前麻醉和腸保護。
因為血小板(凝血細胞)是凝血所必需的並且在其數量極低時，患者因突然出血而處於死亡危險，本發明的TPO模擬物具有在治療各種出血性障礙中的有用應用，例如主要因血小板缺乏導致的疾病。
按照上述所述，本發明進一步提供了有這類治療需要的個體預防或治療上述疾病或障礙中的任意種的方法，該方法包含對所述患者給予治療有效量(參見下文的「施用和藥物組合物」)的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽。就上述用途中的任意種而言，所需劑量根據施用方式、所治療的特定病症和所需作用的不同而改變。
施用和藥物組合物 一般而言，通過本領域常用和可接受的已知方式中的任意種給予治療有效量的本發明化合物，可以將其單獨給予或與一種或多種治療劑聯合給予。治療有效量可以根據疾病的嚴重性、個體的年齡和相對健康情況、所用化合物的功效和其它因素的不同而廣泛改變。一般而言，顯示以約0.03-2.5mg/kg/體重的每日劑量獲得令人滿意的結果。在較大哺乳動物，例如人中的所示每日劑量在約0.5mg-約100mg的範圍，便利地例如以達每日4次的分次劑量或以延遲劑型給予。用於口服施用的合適的劑型包含約1-50mg活性組分。
可以通過任意常規途經給予作為藥物組合物的本發明化合物，特別是經腸道，例如口服，例如以片劑或膠囊形式；或通過非腸道，例如以可注射溶液或混懸液的形式；通過局部，例如以洗劑、凝膠、軟膏劑或霜劑或鼻用劑型或栓劑形式。可以通過混合、制粒或包衣方法按照常規方式製備包含游離形式或藥學上可接受的鹽形式與至少一種藥學上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。例如，口服組合物可以為片劑或明膠膠囊，它們包含活性組分與a)稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如二氧化矽、滑石粉、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚乙二醇；就片劑而言還包含c)粘合劑，例如矽酸鎂鋁、澱粉糊、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，還包含d)崩解劑，例如澱粉、瓊脂、藻酸或其鈉鹽，或泡騰混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑。可注射組合物可以為等滲水溶液或混懸液，並且可以由脂肪乳劑或混懸液製備栓劑。可以將這些組合物滅菌和/或其包含輔助劑，諸如防腐劑、穩定劑、溼潤劑或乳化劑、溶解促進劑、用於調節滲透壓的鹽和/或緩衝劑。此外，它們還可以包含其它治療上有價值的物質。用於透皮施用的合適的製劑包括有效量的本發明化合物與載體。載體可以包括可吸收的藥理學可接受的溶劑以便輔助通過宿主皮膚。例如，透皮裝置可以為包含裱背部件、包含化合物任選與載體的儲庫、任選的在延長時間期限內以受控和預定速率將化合物遞送至宿主皮膚的速率控制屏障和將裝置與皮膚固定的用具。還可以使用骨架透皮製劑。用於局部施用，例如皮膚和眼的合適的製劑優選為本領域眾所周知的水溶液、軟膏劑、霜劑或凝膠。這類製劑可以包含增溶劑、穩定劑、張力促進劑、緩衝劑和防腐劑。
可以將治療有效量的本發明化合物與一種或多種治療劑聯合施用(聯合用藥)。本發明的TPO模擬物化合物還用於與已知對存活或增殖細胞起作用的其它已知活性劑一起對存活或增殖細胞起作用。這類活性劑包括，但不限於G-CSF、GM-CSF、TPO、M-CSF、EPO、Gro-β、IL-11、SCF、FLT3配體、LIF、IL-3、IL-6、IL-1、Progenipoietin、NESP、SD-01或IL-5或上述活性劑中任意種的生物活性衍生物。
已經證實人樹突細胞表達TPO受體並且TPO為樹突細胞的強效轉移物。本發明的TPO模擬物化合物還用作疫苗佐劑，即它們增加樹突細胞的活性和活動。本發明的藥物活性化合物因增加樹突細胞活性和活動而用作免疫佐劑，與口服、透皮或皮下遞送的疫苗和/或免疫調節劑一起給予。
已知TPO對巨核細胞、血小板和幹細胞具有各種作用，包括抗-細胞凋亡/存活作用和對幹細胞和巨核細胞的增殖作用。因此，本發明的TPO和/或TPO模擬物有效增加幹細胞和祖細胞的數量，以便在將TPO與誘導分化的其它細胞因子聯用時存在協同作用。
如果將本發明的化合物與其它療法聯合施用，那麼共同施用的化合物劑量當然要根據所用的共同藥物、使用的具體藥物、所治療的疾病等的不同而改變。
本發明還提供了藥物組合產品，例如藥盒，它包含a)為如本文披露的游離或藥學上可接受的鹽形式的本發明化合物的第一種活性劑；和b)至少一種共同的活性劑。該藥盒可以包含用於其施用的說明書。
如本文所用的術語「共同施用」或「聯合施用」等意指包括對單一患者給予選擇的治療劑並且指定包括治療方案，其中不一定通過相同施用途徑或同時施用所述的活性劑。
本文所用的術語「藥物組合產品」意指因混合或合併一種以上活性組分產生並且包括活性組分的固定和不固定組合的產品。術語「固定組合」意指以單一本體的形式或劑量同時對患者給予活性組分，例如式I的化合物和共同活性劑。術語「不固定組合」意指沒有特定時間限制的同時，同時或依次對患者給予活性組分，例如式I的化合物和共同活性劑，這類施用在患者體內提供了治療有效水平的2種化合物。後者也適用於雞尾酒療法，例如給予3種或3種以上活性組分。
製備本發明化合物的方法 本發明還包括製備本發明化合物的方法。在所述的反應中，有必要保護反應官能團，例如羥基、氨基、亞氨基、硫代或羧基，其中這些基團為終產物中所需的，以避免其參與不需要的反應。可以按照標準實踐使用常用的保護基，例如，參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts在「ProtectiveGroups in Organic Chemistry」，John Wiley和Sons，1991中所述。
可以如下列反應方案I中所述的方法製備式I的化合物 反應方案I
其中n、m、Y和R1-R8如本發明概述中所定義。可以通過在有合適的路易絲酸(例如氯化鋅等)或質子酸(例如HCl等)存在下和合適的溶劑(例如乙酸、乙醇等)中式2化合物與式3的化合物反應合成式I的化合物。該反應在約80℃-約120℃的溫度下進行並且可能需要約達24小時完成。
合成式I的化合物的詳細實施例可以在下文實施例中找到。
製備本發明化合物的額外方法 可以通過使游離鹼形式的化合物與藥學上可接受的無機酸或有機酸反應將本發明的化合物製備成藥學上可接受的酸加成鹽。或者，可以通過游離酸形式的化合物與藥學上可接受的無機鹼或有機鹼反應製備本發明化合物的藥學上可接受的鹼加成鹽。
或者，可以使用原料或中間體的鹽製備本發明化合物的鹽形式。
可以分別由相應的鹼加成鹽或酸加成鹽製備本發明化合物的游離酸或游離鹼。例如，可以通過用合適的鹼(例如氫氧化銨溶液、氫氧化鈉等)處理將酸加成鹽形式的本發明化合物轉化成相應的游離鹼。可以通過用合適的酸(例如鹽酸等)處理將鹼加成鹽形式的本發明化合物轉化成相應的游離酸。
可以通過在0-80℃下用還原劑(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化物等)在合適的惰性有機溶劑(例如乙腈、乙醇、含水二烷等)中處理由本發明化合物的N-氧化物製備的未氧化形式的本發明化合物。
可以通過本領域技術人員公知的方法製備本發明化合物的前體藥物衍生物(進一步的詳細內容例如參見Saulnier等，(1994)，Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters，Vol.4，p.1985)。例如，可以通過使本發明非衍生的化合物與合適的氨基甲醯化試劑(例如1，1-acyloxyalkylcarbanochloridate、碳酸對-硝基苯酯等)反應製備合適的前體藥物。
可以通過本領域普通技術人員公知的方式製備本發明化合物的被保護的衍生物。適合於產生保護基及其除去的技術的詳細描述可以在T.W.Greene，「Protecting Groups in Organic Chemistry」，第3版，John Wiley和Sons，Inc.1999中找到。
本發明的化合物可以便利地製備或在本發明方法過程中形成，如溶劑合物(例如水合物)。可以通過使用有機溶劑，諸如二英、四氫呋喃或甲醇從含水/有機溶劑混合物中重結晶便利地製備本發明化合物的水合物。
可以通過使化合物的外消旋混合物與旋光活性拆分試劑反應而形成非對映異構體化合物對，分離非對映體並且回收光學純的對映體將本發明的化合物製備成其各個立體異構體。儘管可以使用本發明化合物的共價非對映異構體衍生物對對映體進行拆分，但是優選易離解的複合物(例如結晶非對映異構體鹽)。非對映體具有不同的物理特性(例如熔點、沸點、溶解度、反應性等)並且易於通過利用這些不同性分離。可以通過色譜法或優選通過基於溶解度差異的分離/拆分技術分離非對映體。然後通過不會產生外消旋化的任何實施方式回收光學純的對映體與拆分試劑。適合於從外消旋混合物中拆分化合物的立體異構體的技術的更詳細描述可以在Jean Jacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen，「Enantiomers，Racemates andResolutions」，John Wiley和Sons，Inc.1981中找到。
總之，可以通過一種方法製備式I的化合物，包括 (a)反應方案I的方法；和 (b)任選將本發明的化合物轉化成藥學上可接受的鹽； (c)任選將本發明的化合物的鹽形式轉化成非鹽形式； (d)任選將本發明化合物的未氧化形式轉化成藥學上可接受的N-氧化物； (e)任選將本發明化合物的N-氧化物形式轉化成其未氧化形式； (f)任選從異構體的混合物中拆分本發明化合物的各異構體； (g)任選將本發明的未衍生化合物轉化成藥學上可接受的前體藥物衍生物；和 (h)任選將本發明化合物的前體藥物衍生物轉化成其非衍生形式。
就未特別描述原料的生產而言，化合物為已知的或可以按照與本領域公知或下文實施例中披露的方法類似的方式製備。
本領域技術人員應理解上述轉化僅為製備本發明化合物方法的代表，並且可以類似地使用其它眾所周知的方法。
實施例 本發明進一步以如下實施例為典型，這些實施例用於解釋本發明式I化合物的製備，但不起限定作用。
實施例1 8-溴-10-氟-2-羥基-9-三氟甲基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸甲酯
步驟13-羥基-5-氧代-4a，5，6，7，8，8a-六氫-萘-2-甲酸甲酯
向在Parr Bomb中的3，5-二羥基-2-萘甲酸(30g，147mmol)在MeOH(400mL)中的溶液中加入分散於MeOH(30mL)中的Pd(OH)2(20％wt/碳，1.5g)。用H2給該混合物增壓至1000psi並且在50℃下攪拌過夜。然後給該系統釋壓並且使用甲醇通過短矽膠墊過濾該混合物。濃縮濾液並且重新溶於乙醚(250mL)和MeOH(50mL)。然後加入三甲代甲矽烷基重氮甲烷(在乙醚中2M，70mL)。在攪拌10分鐘後，濃縮該混合物並且通過矽膠閃式色譜法純化(洗脫液20～25％在己烷中的乙酸乙酯)而得到11.5g黃白色固體狀的3，5-二羥基-4a，5，6，7，8，8a-六氫-萘-2-甲酸甲酯。
向3，5-二羥基-4a，5，6，7，8，8a-六氫-萘-2-甲酸甲酯(3g，13.5mmol)在DCM(100mL)中的溶液中加入PDC(5.33g，14.2mmol)。將該混懸液在室溫下攪拌過夜。在反應完成時，通過短矽膠墊過濾該混合物，用DCM衝洗。在蒸發溶劑後，獲得粗產物，為淡黃色固體。使用DCM和己烷重結晶而得到2.4g 3-羥基-5-氧代-4a，5，6，7，8，8a-六氫-萘-2-甲酸甲酯，為白色結晶固體；[M+H]+C12H12O4的LC/MS的理論值221.1，實測值221.1。
步驟2(4-溴-2-氟-3-三氟甲基-苯基)-肼
將4-溴-2-氟-3-三氟甲基-苯基苯胺(4g，15.5mmol)的樣品懸浮於濃HCl(36mL)中並且在冰/鹽浴中冷卻。然後用NaNO2(1.12g，16.3mmol)在水(36mL)中的溶液滴加處理該反應。將該反應攪拌30分鐘且然後用SnCl2二水合物(17.5g，77.5mmol)在濃HCl(36mL)中的溶液處理。然後將該反應在冰/水浴中攪拌1小時，隨後在室溫下攪拌1小時。然後過濾該反應並且用50％NaOH水溶液(30mL)和乙醚(50mL)處理固體。用乙醚將水相萃取一次以上並且用MgSO4乾燥合併的有機相且過濾。用5mL 4M在二烷中的HCl處理所得溶液，同時攪拌並且收集所得固體且在高度真空中乾燥而得到2.44g(4-溴-2-氟-3-三氟甲基-苯基)-肼鹽酸鹽；[M+H]+C7H5BrF4N2的LC/MS的理論值273.0，實測值272.9。
步驟3用無水ZnCl2(219mg，1.60mmol)和乙酸(8mL)處理(4-溴-2-氟-3-三氟甲基-苯基)-肼鹽酸鹽(199mg，642μmol)和3-羥基-5-氧代-4a，5，6，7，8，8a-六氫-萘-2-甲酸甲酯(141mg，642μmol)的樣品。將該反應加熱至105℃下過夜。在冷卻至室溫後，通過旋轉蒸發除去溶劑。然後用乙酸乙酯處理該反應並且用1M HCl萃取兩次。然後用MgSO4乾燥有機層並且過濾。然後使殘餘物從甲醇中結晶而得到標題化合物，為白色固體；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.58(s，1H)，10.56(s，1H)，7.93(s，1H)，7.73(s，1H)，7.54(s，1H)，3.92(s，3H)，3.00-2.88(m，4H)；(M++H+)的ESIMS m/z理論值458.0，實測值458.0。
實施例2 8-溴-10-氟-2-羥基-9-三氟甲基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸
用乙醇(0.3mL)和水(0.5mL)，隨後用LiOH(4mg，190μmol)處理8-溴-10-氟-2-羥基-9-三氟甲基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸甲酯(28.9mg，63.4μmol)的樣品。然後將該反應在50℃下攪拌過夜。然後用乙酸乙酯稀釋該反應並且用1M HCl萃取。然後用MgSO4乾燥有機層，過濾並且除去溶劑。使用UV啟動的HPLC純化所得殘餘物而得到22mg標題化合物，為白色固體；1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.78(s，1H)，7.76(s，1H)，7.32(s，1H)，3.00(m，2H)，2.95(2，H)；[M+H]+C18H11F4NO3的LC/MS的理論值445.1，實測值445.9。
通過使用合適的原料重複上述實施例中所述的方法獲得如表1中所鑑定的下列式I的化合物。
表1



就化合物17而言3-(4，6-二甲基-嘧啶-2-基)-苯胺的製備
用N2將2-氯-4，6-二甲基-嘧啶(92mg，0.645mmol，1eq.)、3-氨基苯硼酸(100mg，0.645mmol，1eq.)、Na2CO3(137mg，1.29mmol，2eq.)和Pd(PPh3)2Cl2(23mg，0.032mmol.5mol％)在1∶1 v/v的CH3CN/H2O混合物(2.6mL)中的混合物淨化5分鐘且然後在150℃下的微波中加熱5分鐘。在冷卻至室溫後，用EtOAc稀釋該反應並且依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4乾燥有機溶液。濃縮後，通過矽膠色譜法純化殘餘物(1∶1己烷/EtOAc)而得到3-(4，6-二甲基-嘧啶-2-基)-苯胺，為黃色半固體。[MS(ES+)200.1(M+1)+]。
然後按照與如實施例1步驟2中所述相同的方式將該物質轉化成肼。
就化合物18而言3-(4，5-二甲基-噻唑-2-基)-苯胺的製備
向3-氨基-硫代苯甲醯胺(200mg，1.31mmol，1eq.)在EtOH(4mL)中的溶液中加入3-氯-2-丁酮(140mg，1.31mmol，1eq.)。將該混合物在100℃下加熱72小時。在冷卻至室溫後，用EtOAc稀釋該反應並且依次用飽和NaHCO3水溶液、H2O和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4乾燥有機溶液。濃縮後，通過矽膠色譜法純化殘餘物(2∶1己烷/EtOAc)而得到3-(4，5-二甲基-噻唑-2-基)-苯胺，為黃色油狀物。[MS(ES+)205.1(M+1)+]。
然後按照與如實施例1步驟2中所述相同的方式將該物質轉化成肼。
實施例19 2-羥基-8-苯基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸
步驟18-溴-2-羥基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸甲酯
向在密封試管中的4-溴肼(225mg，1mmol)、3-羥基-5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-甲酸甲酯(220mg，1mmol)和ZnCl2(272mg，2mmol)的混合物中加入乙酸(2mL)。用氮氣淨化該混合物並且在105℃下加熱過夜。使該反應冷卻下來並且用水稀釋。加入飽和NaHCO3溶液以便中和乙酸。用EtOAc(3x20 mL)萃取該混合物。用NaHCO3(飽和)溶液和鹽水洗滌合併的有機相併且用NaSO4乾燥。在蒸發溶劑後獲得粗產物，為黃色固體，並且將其用於下一步。
步驟2和3在微波管中向來自上述步驟的粗產物(20mg，0.054mmol)、苯基硼酸(13mg，0.11mmol)、氟化銫(32mg，0.22mmol)在二烷(2mL)中的混合物中加入雙(三-叔-丁膦)鈀(3mg，10％mmol)。密封該管。用N2將該混合物淨化3分鐘且然後在120℃和微波照射下加熱10分鐘。冷卻該混合物，過濾並且濃縮。將殘餘物轉入微波管並且用乙醇/H2O(1mL/0.1mL)，隨後用LiOH(12mg，0.54mmol)處理。然後將該混合物在120℃下和微波照射中加熱6分鐘。過濾粗產物並且應用於質量啟動的製備型HPLC以純化。在3步內獲得標題化合物，為黃色固體1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.59(s，1H)，11.3(br，1H)，7.82-7.80(m，1H)，7.72-7.69(m，3H)，7.48-7.42(m，4H)，7.33-7.29(m，1H)，7.26(s，1H)，2.97(s，4H)；ESMS m/z356.2(M+H+)。
實施例20 8-烯丙基-10-氟-2-羥基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸
在微波反應管中向8-溴-10-氟-2-羥基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸甲酯(50mg，0.13mmol)(實施例19，步驟1)、烯丙基三丁基錫(56mg，0.15mmol)、氟化銫(38mg，0.25mmol)、二烷(2mL，無水)的混合物中加入雙(三-叔-丁膦)鈀(4mg，5％mmol)。密封該管。用N2將該混合物淨化3分鐘且然後在100℃下加熱3小時。然後將該混合物冷卻至室溫並過濾。濃縮濾液並重新溶於EtOH/H2O(1mL/0.1mL)。向該混合物中加入氫氧化鋰(30mg，1.3mmol)。將該混合物在120℃下和微波照射中加熱6分鐘。然後過濾粗混合物並且應用於質量啟動的製備型HPLC以純化。獲得標題化合物，為黃色固體；ESMS m/z 338.1(M+H+)。
實施例21 10-氟-2-羥基-8-丙基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸
遵循實施例20的方法，但在Stille反應完成後，濃縮濾液並且重新溶於乙醇/EtOAc(5mL/3mL)。向該溶液中加入Pd/C(10％)。給該反應混合物脫氣並且用H2淨化幾次並且在氫氣環境中攪拌過夜。將該混合物通過硅藻土過濾並且水解且如實施例20純化而得到標題化合物1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.72(s，1H)，11.29(br，1H)，7，67(s，1H)，7.41(s，1H)，7.16(s，1H)，6.85(d，1H，J＝12.4Hz)，2.94-2.87(m，4H)，2.62(t，2H，J＝7.6Hz)，1.63(qt，2H，J＝7.6，7.2Hz)，0.91(t，3H，J＝7.6Hz)，ESMS m/z 339.1(M+H+)。
通過使用合適的原料重複實施例19-21中所述的方法獲得下列表2中鑑定的化合物。
表2

實施例30 9-(苯基)-2-羥基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸
步驟19-溴-2-羥基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸甲酯
在密封試管內向3-溴-苯基肼(225mg，1mmol)、3-羥基-5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-甲酸甲酯(220mg，1mmol)和ZnCl2(272mg，2mmol)的混合物中加入乙酸(2mL)。用氮氣淨化該混合物並且在105℃下加熱過夜。冷卻該反應並且用水稀釋。加入NaHCO3飽和溶液以中和乙酸。用EtOAc(3x20mL)萃取該混合物。用NaHCO3(飽和)溶液和鹽水洗滌合併的有機相併且用NaSO4乾燥。濃縮後，獲得粗產物，為1∶1比例的7-和9-溴-2-羥基-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸甲酯並且用於下一步。
步驟2在微波管中向來自上述步驟的粗產物(50mg，0.13mmol)、苯基硼酸(32mg，0.26mmol)、氟化銫(78mg，0.52mmol)在二烷(3mL，無水)中的混合物中加入雙(三-叔-丁膦)鈀(6mg，10％mmol)。密封該管。用N2將該混合物淨化3分鐘且然後在120℃和微波照射下加熱10分鐘。冷卻該混合物，過濾並且濃縮。將殘餘物轉入含有乙醇/H2O(1mL/0.1mL)的微波管。加入LiOH(12mg，0.54mmol)。將該混合物在120℃下和微波照射中加熱6分鐘。過濾粗混合物並且應用於質量啟動的製備型HPLC以純化。獲得標題化合物，為黃色固體1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.59(s，1H)，11.3(br，1H)，7.82-7.80(m，1H)，7.72-7.69(m，3H)，7.48-7.42(m，4H)，7.33-7.29(m，1H)，7.26(s，1H)，2.97(s，4H)；ESMS m/z 356.2(M+H+)。
通過使用合適的原料重複實施例30中所述的方法獲得下列表3中鑑定的化合物。
表3





實施例57 9-氯-10-氟-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸
步驟15-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-甲酸甲酯
將商購的5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-甲酸(200mg，1.05mmol)樣品溶於二氯甲烷與甲醇的混合物(5∶1，10mL)。然後用三甲代甲矽烷基重氮甲烷在四氫呋喃中的溶液(2M)處理該溶液，直到黃色持續出現。然後用少量乙酸處理該反應以便破壞過量的試劑且除去溶劑。用矽膠純化殘餘物而得到標題化合物，為黃色固體。ESMS m/z 204.1(M+H+)。
步聚2-3將5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-甲酸甲酯和2-氟-3-氯苯基肼鹽酸鹽樣品用於製備Fischer產物，隨後如實施例1步驟3和實施例2皂化而得到標題物質1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ12.12(s，1H)，7.88(m，3H)，7.39(m，1H)，7.11(dd，J＝6.5，1.9Hz，1H)，3.08(m，2H)，2.94(m，2H)；[M+H]+C17H12FClNO2的LC/MS的理論值316.7，實測值316.1。
實施例58 9-(3，5-二甲基-4-丙氧基-苯基)-10-氟-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸甲酯
步驟12-(3，5-二甲基-4-丙氧基-苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜環戊硼烷
將2，6-二甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜環戊硼烷-2-基)-苯酚(500mg，2.02mmol，1eq.)、1-溴丙烷(793mg，6.45mmol，3.2eq.)和K2CO3(334mg，2.42mmol，1.2eq.)在丙酮(20mL)中的混合物在65℃下加熱4天。在冷卻至室溫後，濃縮該反應，用EtOAc稀釋並且依次用H2O和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4乾燥有機溶液並且濃縮得到2-(3，5-二甲基-4-丙氧基-苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜環戊硼烷，為澄清油狀物。
步驟2如實施例19步驟2中偶聯9-氯-10-氟-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸甲酯(如實施例57步驟2中製備)和2-(3，5-二甲基-4-丙氧基-苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜環戊烷粗樣品而得到標題物質ESMS m/z458(M+H+)。
實施例59 9-(3，5-二甲基-4-丙氧基-苯基)-10-氟-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸
如實施例1步驟2中皂化9-(3，5-二甲基-4-丙氧基-苯基)-10-氟-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸甲酯樣品而得到標題物質；(丙酮-d6)δ11.07(bs，1H)，7.99(s，1H)，7.97(d，1H)，7.86(d，1H)，7.42(d，1H)，7.24(s，2H)，7.12(dd，1H)，3.82(t，2H)，3.17(t，2H)，3.08(t，2H)，2.31(s，6H)，1.94-1.84(m，2H)，1.10(t，3H)；ESMS m/z 444(M+H+)。
通過使用合適的原料重複實施例57-59中所述的方法獲得下列表4中鑑定的化合物。
表4 化合物# 結構 NMR和/或ESMS


就化合物63而言如下製備硼酸 2-(4-氟-3-丙氧基-苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜環戊硼烷
將5-溴-2-氟-苯酚(通過Elliott，M.等GB2187731的方法製備)(500mg，2.62mmol，1eq.)、1-溴丙烷(322mg，2.62mmol，1eq.)和K2CO3(434mg，3.14mmol，1.2eq.)在丙酮(20mL)中的混合物在65℃下加熱24小時。在冷卻至室溫後，濃縮該反應，用EtOAc稀釋並且依次用1N NaOH水溶液和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4乾燥有機溶液。濃縮後，通過矽膠色譜法純化殘餘物(3∶1己烷/EtOAc)而得到4-溴-1-氟-2-丙氧基-苯，為黃色油狀物。
用N2將4-溴-1-氟-2-丙氧基-苯(224mg，0.961mmol，1eq.)、聯硼酸頻那醇酯(bis(pinacolato)diboron)(268mg，1.057mmol，1eq.)、KOAc(283mg，2.88mmol，3eq.)和Pd(dppf)2Cl2(7mg，0.01mmol.1mol％)在DMF(無水，1mL)中的混合物淨化10分鐘且然後在密封試管內在80℃下加熱12小時。在冷卻至室溫後，用EtOAc稀釋該反應並且用H2O洗滌。用Na2SO4乾燥有機溶液。在濃縮後，通過矽膠色譜法純化殘餘物(1∶2己烷/CH2Cl2)而得到2-(4-氟-3-丙氧基-苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜環戊硼烷，為澄清油狀物[MS(ES+)281.2(M+1)+]。
就化合物69而言使用烯丙基三丁基錫替代硼酸。
實施例70 9-(4-丁基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸
步驟14′-丁基-聯苯-3-基胺
將3-溴苯胺(2.00g，11.6mmol)、4-丁基苯基硼酸(3.1g，17.4mmol)和氟化銫(5.3g，35mmol)的樣品加入到微波反應瓶中並且用無水二烷(12mL)和雙(三-叔-丁膦)(600mg，1.16mmol)處理。密封該瓶並且用氮氣淨化5分鐘。然後將該反應加熱至120℃下5分鐘並且用硅藻土過濾，用乙酸乙酯洗滌。除去溶劑並且通過UV啟動的反相HPLC純化粗物質而得到標題化合物ESMS m/z 226.2(M+H+)。
步驟2(4′-丁基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽
如實施例1步驟2製備該物質。
步驟3用氯化鋅(134mg，0.99mmol)和乙酸(5mL)處理商購的5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-甲酸(75mg，0.39mmol)和(4′-丁基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(115mg，0.41mmol)的樣品。然後將該反應加熱至105℃下過夜並且冷卻至室溫。過濾該反應並且用甲醇洗滌濾液且在高度真空路徑上乾燥而得到標題物質，為單一區域異構體。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.63(s，1H)，7.90-7.84(m，2H)，7.75-7.71(m，1H)，7.62-7.57(m，4H)，7.35-7.31(m，1H)，7.28(d，J＝8.0Hz，2H)，3.11-3.05(m，2H)，2.99-2.92(m，2H)，2.62(dd，J＝7.6，7.6Hz，2H)，1.65-1.55(m，2H)，1.40-1.29(m，2H)，0.92(dd，J＝7.3，7.3Hz，3H)；(M++H+)的ESIMS m/z的理論值396.2，實測值396.2。
實施例71 9-(4-丁基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸甲醯胺
將9-(4-丁基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲酸(116.2mg，41μmol)的樣品溶於DMF(1mL)並且用HATU(16.3mg，41μmol)和甲胺(2M)在四氫呋喃(0.1mL，100μmol)中的溶液處理。在攪拌過夜後，用乙酸乙酯稀釋該反應並且用水萃取兩次。用MgSO4乾燥有機層並且除去溶劑。通過質量啟動的HPLC純化所得殘餘物而得到標題產物，凍幹後為白色固體。[M+H]+C28H29N2O的LC/MS的理論值409.5，實測值409.1。
通過使用合適的原料重複實施例71中所述的方法獲得下列表5中鑑定的化合物。
表5

實施例75 7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸
步驟11-氧代-茚滿-5-腈
向在密封試管內的5-溴-茚滿-1-酮(1g，4.7mmol)、氰化鋅(1.11g，9.4mmol)在NMP/THF(2mL/4mL)中的混合物中加入雙(三-叔-丁膦)鈀(120mg，5％mmol)。用N2淨化該混合物並且在120℃下加熱3小時。然後將該反應混合物冷卻至rt，用H2O稀釋並且用EtOAc(3x20mL)萃取。用飽和氯化銨水溶液和鹽水洗滌有機相併且用Na2SO4乾燥。通過矽膠柱色譜法純化在濃縮後獲得的粗產物，用己烷/EtOAc(5/1～3/1)的混合溶劑洗脫而得到1-氧代-茚滿-5-腈，為淡黃色固體ESMS m/z 158.0(M+H+)。
步驟21-氧代-茚滿-5-甲酸甲酯
向在0℃下1-氧代-茚滿-5-腈(100mg，0.64mmol)在KOH(25％，0.21mL)中的混懸液中加入H2O2(0.32mL)。將該混合物在rt下攪拌30分鐘，然後在50℃下攪拌1小時。在冷卻至室溫後，用EtOAc(3x10mL)萃取該混合物。用鹽水洗滌合併的有機相併且用Na2SO4乾燥。蒸發溶劑而得到1-氧代-茚滿-5-甲醯胺，為白色固體。向該固體中加入HCl水溶液(4N，3mL)。將該混合物加熱至90℃達2小時。然後用EtOAc(3x10mL)萃取該反應混合物。用鹽水洗滌合併的有機相。向該溶液中滴加MeOH(5mL)，隨後滴加三甲基甲矽烷基重氮甲烷(在乙醚中2M)，直到全部甲酸耗盡。蒸發溶劑而得到粗產物1-氧代-茚滿-5-甲酸甲酯，其純度足以用於下一步。ESMS m/z 191.1(M+H+)。
步驟2-4將1-氧代-茚滿-5-甲酸甲酯和2-氟-3-氯苯基肼鹽酸鹽的樣品用於製備Fischer產物，隨後進行與4-丁基苯基硼酸的Suzuki反應並且如實施例30步驟1和2皂化而得到標題物質1H NMR(400MHz，丙酮-d6)δ11.32(s，1H)，8.22(s，1H)，8.09(d，1H，J＝7.6Hz)，7.79(d，1H，J＝8Hz)，7.58-7.53(m，3H)，7.34(s，1H)，7.32(s，1H)，7.24-7.20(m，1H)，3.88(s，2H)，2.68(t，2H，J＝7.6Hz)，1.66(tt，2H，J＝7.6，7.6Hz)，1.40(qt，2H，J＝7.6，7.6Hz)，0.95(t，3H，J＝7.60Hz)，ESMS m/z 400.1(M+H+)。
實施例76 6-氟-7-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸
使用3-甲基4-氟苯基硼酸作為步驟3中的偶聯配偶體，按照與實施例75相同的方法獲得收率類似的標題化合物。ESMS m/z 376.1(M+H+)。
實施例77 7-(4-丁基-苯基)-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸
通過使(4′-丁基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例70，步驟1)和1-氧代-茚滿-5-甲酸甲酯如實施例1中所述反應，隨後如實施例2中所述水解獲得收率類似的標題化合物。ESMS m/z 382.1(M+H+)。
實施例78 7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-腈
步驟1(4′-丁基-2-氟-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽
按照與實施例70步驟1中類似的方式製備該物質，但將2-氟-3-氯苯胺用作滷化物輸入物。[M+H]+C16H19FN2的LC/MS的理論值259.2，實測值259.2。
步驟2使1-氧代-茚滿-5-腈(133.5mg，0.85mmol)(實施例74，步驟1)和(4′-丁基-2-氟-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(250.4，0.85mmol)的樣品彼此如實施例1步驟3中反應，隨後通過UV啟動的反相HPLC純化而得到標題化合物，為白色固體。[M+H]+C26H21FN2的LC/MS的理論值381.2，實測值381.2。
實施例79 9-(4-丁基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-腈
按照如實施例1步驟3中相同的方式和類似的收率由商購6-氰基四氫萘酮和(4′-丁基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例70，步驟1)製備該物質。[M+H]+C27H25N2的LC/MS的理論值377.2，實測值377.1。
實施例80 9-(4-丁基-苯基)-3-(1H-四唑-5-基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑
步驟16-(1H-四唑-5-基)-3，4-二氫-2H-萘-1-酮
將6-氰基四氫萘酮(102mg，0.60mmol)溶於DMF(1mL)並且用疊氮化鈉(96.8mg，1.5mmol)、氯化銨(31.9mg，0.60mmol)和氯化鋰(25.3mg，0.60mmol)處理且加熱至120℃過夜。用乙酸乙酯稀釋該反應並且用水萃取兩次。通過UV啟動的反相HPLC純化殘餘物而得到標題化合物，為白色固體。
步驟2按照如實施例1步驟3中相同的方式和類似的收率使6-(1H-四唑-5-基)-3，4-二氫-2H-萘-1-酮和(4′-丁基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例70，步驟1)反應，但用乙酸而非甲醇洗滌固體。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ11.66(s，1H)，7.97(m，2H)，7.84(d，J＝8.9Hz，1H)，7.63(m，4H)，7.34(d，J＝8.2Hz，2H)，7.29(d，J＝8.1Hz，2H)，3.13(t，J＝7.5Hz，2H)，2.99(t，J＝7.6Hz，2H)，2.63(m，2H)，1.60(m，2H)，1.35(m，2H)，0.93(t，J＝7.3Hz，3H)；[M+H]+C27H26N5的LC/MS的理論值420.5，實測值420.1。
實施例81 9-(4-丁基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-甲醯胺
步驟15-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-甲醯胺
如實施例75步驟2將商購6-氰基四氫萘酮樣品水解成醯胺。[M+H]+C11H11NO2的LC/MS的理論值189.1，實測值189.2。
步驟2按照與實施例1步驟3相同的方式和類似的收率使5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-甲醯胺和(4′-丁基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例70，步驟1)反應。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)

11.60(s，1H)，7.83(m，2H)，7.70(d，J＝8.3Hz，1H)，7.59(m，3H)，7.27-7.35(m，4H)，3.05(m，2H)，2.96(m，2H)，2.62(m，2H)，1.60(m，2H)，1.35(m，2H)，0.92(m，3H)；[M+H]+C27H27N2O的LC/MS的理論值395.5，實測值395.1。
實施例82 6-氟-7-(4-氟-3-甲基-苯基)-10，10-二甲基-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲醯胺
步驟16-甲氧基-1，1-二甲基-茚滿
用二甲基鋅(2M，30mL)在甲苯中的溶液處理在N2環境中的四氯化鈦在無水二氯甲烷中的攪拌的冷卻(-40℃)溶液(1M，20mL)。30分鐘後，通過注射器加入6-甲氧基-茚滿-1-酮(1.62g，10mmol)在二氯甲烷(無水，10mL)中的溶液。在添加完成後，將該反應溫熱至rt並且持續攪拌3小時。將該反應混合物冷卻至-40℃並且用甲醇(1mL)謹慎淬滅。用DCM和飽和氯化銨水溶液稀釋該混合物。分離各相併且用二氯甲烷(2x20mL)萃取水相。用Na2SO4乾燥合併的有機相，過濾，並且在真空中蒸發而得到6-甲氧基-1，1-二甲基-茚滿，為油狀物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.19-7.20(m，1H)，7.10-7.12(m，1H)，6.69-6.68(m，1H)，3.82(s，3H)，2.82(t，2H，J＝7.2Hz)，1.92(t，2H，J＝7.2Hz)，1.24(s，6H)。
步驟25-甲氧基-3，3-二甲基-茚滿-1-酮
將6-甲氧基-1，1-二甲基-茚滿(1g，5.67mmol)在乙酸(5mL)中的溶液冷卻至0℃並且用三氧化鉻(1.3g，13mmol)在乙酸/H2O(5mL/4mL)中的溶液處理。然後將該反應混合物溫熱至環境溫度並且攪拌3小時。稀釋該反應混合物並且用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。用飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌合併的有機相併且用Na2SO4乾燥。蒸發溶劑而得到5-甲氧基-3，3-二甲基-茚滿-1-酮，為黃色油狀物ESMS m/z 191.1(M+H+)。
步驟35-羥基-3，3-二甲基-茚滿-1-酮
在微波反應管中，用N2淨化5-甲氧基-3，3-二甲基-茚滿-1-酮(880mg，4.63mmol)、苯硫酚(510mg，4.63mmol)和碳酸鉀(64mg，0.46mmol)在NMP(5mL)中的混合物。將該反應混合物在220℃下和微波照射中加熱30分鐘。使用1N NaOH水溶液(10mL)使該反應混合物呈鹼性並且用Et2O(3x20mL)萃取。使用6N HCl在冰浴中酸化含水部分並且用Et2O(3x20mL)萃取。用鹽水洗滌合併的有機相併且用Na2SO4乾燥。濃縮後，用矽膠柱色譜法純化粗產物(30％在己烷中的乙酸乙酯)而得到5-羥基-3，3-二甲基-茚滿-1-酮，為黃色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.63(d，1H，J＝8Hz)，6.88(d，1H，J＝2Hz)，6.84(dd，1H，J＝2，8Hz)，6.14(s，1H)，2.59(s，2H)，1.40(s，6H)，ESMS m/z 177.1(M+H+)。
步驟4三氟-甲磺酸3，3-二甲基-1-氧代-茚滿-5-基酯
向5-羥基-3，3-二甲基-茚滿-1-酮(480mg，2.72mmol)在DCM(無水，10mL)中的混懸液中加入三乙胺(1.2mL，8.16mmol)。該混懸液變澄清。將該溶液冷卻至-78℃並且用在DCM(無水，3mL)中的N-苯基三氟甲磺醯胺(1.07g，3.0mmol)處理。將該反應混合物逐步溫至環境溫度並且攪拌過夜。用DCM稀釋該反應混合物並且用飽和氯化銨水溶液(2x50mL)和鹽水洗滌並且用Na2SO4乾燥。在真空中蒸發後，使用矽膠柱色譜法純化粗產物(10～15％在己烷中的乙酸乙酯)而得到所需產物三氟-甲磺酸3，3-二甲基-1-氧代-茚滿-5-基酯，為油狀物ESMS m/z 309.10(M+H+)。
步驟53，3-二甲基-1-氧代-茚滿-5-腈
按照與實施例74步驟1中所述相同的方法獲得3，3-二甲基-1-氧代-茚滿-5-腈，為白色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.82(s，1H)，7.78(d，1H，J＝8Hz)，7.65(dd，1H，J＝1.2，7.6Hz)，2.66(s，1H)，1.46(s，6H)，ESMS m/z186.1(M+H+)。
步驟6和7如實施例1步驟3使3，3-二甲基-1-氧代-茚滿-5-腈和(4′-氟-3′-甲基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(如實施例70步驟1和2製備，但使用3-甲基-4-氟苯基硼酸和3-氯-2-氟苯胺作為偶聯配偶體)彼此反應。然後使該粗產物如實施例19步驟3進行水解而得到6-氟-7-(4-氟-3-甲基-苯基)-10，10-二甲基-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲醯胺，為淡黃色固體1H NMR(400MHz，丙酮-d6)δ11.18(s，1H)，8.14(s，1H)，7.95(dd，1H，J＝1.2，7.6Hz)，7.68(d，1H，J＝8Hz)，7.57(d，1H，J＝8.4Hz)，7.54(dd，1H，J＝0.8，7.6Hz)，7.46-7.45(m，2H)，7.20-7.25(m，2H)，6.65-6.50(br，2H)，225(d，3H，J＝1.6Hz)，1.66(s，6H)，ESMS m/z 403.2(M+H+)。
通過使用合適的原料重複實施例81的方法獲得下列表6中鑑定的化合物。
表6 化合物# 結構 NMR和/或ESMS

實施例87 三氟-甲磺酸9-(4-丁基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基酯
步驟1三氟-甲磺酸5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-基酯
按照報導的方法製備該已知物質(Tetrahedron Lett.1992，33(38)，5499)。
步驟2通過按照與實施例1步驟3類似的方式和類似的收率使三氟-甲磺酸5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-基酯和(4′-丁基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例70，步驟2)反應製備標題物質，但通過反相UV啟動的HPLC進行純化。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)d11.63(s，1H)，7.78(m，2H)，7.58(m，4H)，7.46(s，1H)，7.33(d，J＝6.7Hz，1H)，7.28(m，2H)，3.09(m，2H)，2.95(m，2H)，2.64(m，2H)，1.60(m，2H)，1.35(m，2H)，0.94(m，3H)；[M+H]+C27H25F3NO3S的LC/MS的理論值500.5，實測值500.0。
實施例88 N-{3-[10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-苯基}-甲磺醯胺
步驟1N-[3-(5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-基)-苯基]-甲磺醯胺
將按照已知方法製備的已知(Tetrahedron Lett.1992，33(38)，5499)三氟-甲磺酸5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-基酯(77.6mg，0.26mmol)和3-甲磺醯氨基-苯硼酸(85.1mg，0.40mmol)的樣品加入到微波反應容器中並且用無水二烷(1mL)和氟化銫(94mg，0.62mmol)，隨後用雙(三-叔-丁膦)鈀(13.5mg，0.026mmol)處理。用氮氣將該反應淨化5分鐘且然後在微波照射下加熱至120℃下15分鐘。用乙酸乙酯稀釋該反應並且用水萃取。然後用MgSO4乾燥有機層並且除去溶劑。通過質量啟動的反相HPLC純化殘餘物[M+H]+C17H17NO3S的LC/MS的理論值316.1，實測值316.1。
步驟2按照實施例1步驟3類似的方式使N-[3-(5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-基)-苯基]-甲磺醯胺和(4′-氟-3′-甲基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(如實施例70步驟1和2中製備，但使用3-甲基-4-氟苯基硼酸和3-氯-2-氟苯胺作為偶聯配偶體)反應製備標題產物，但通過反相UV啟動的HPLC進行純化1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ12.66(s，1H)，9.88(s，1H)，8.82(d，J＝8.7Hz，1H)，8.31(m，1H)，8.29(d，J＝8.6Hz，1H)，8.08(d，J＝8.2Hz，1H)，7.94(m，1H)，7.80(d，J＝8.6Hz，1H)，7.66(m，1H)，7.61(m，2H)，7.48(m，1H)，7.30(m，2H)，3.09(m，2H)，3.04(s，3H)，2.97(m，2H)，2.08(s，3H)；[M+H]+C30H25F2N2O2S的LC/MS理論值515.6，實測值515.0。
實施例89 [10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
用叔丁醇(10mL)、二苯基磷醯基氮化物(343mg，1.25mmol)和三乙胺(126mg，1.25mmol)處理實施例61(441.5mg，1.13mmol)的樣品。然後將該反應回流過夜，濃縮並且通過UV啟動的反相HPLC純化而得到標題化合物。[M+H]+C28H27F2N2O2的LC/MS的理論值461.5，實測值461.2。
實施例90 10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基胺
用二氯甲烷(1mL)和三氟乙酸(1mL)處理[10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(實施例89)(33mg，0.072mmol)的樣品並且在室溫下攪拌2小時。然後濃縮該反應並且通過反相質量啟動的HPLC純化而得到標題化合物的TFA鹽。[M+H]+C23H19F2N2的LC/MS的理論值361.4，實測值361.2。
實施例91 N-[10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-甲磺醯胺
用二氯甲烷(1mL)和吡啶(0.5mL)處理10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基胺三氟乙酸鹽(實施例90)(17.8mg，0.038mmol)的樣品。然後用甲磺醯氯(8.6mg，7.5mmol)處理該反應並且將該反應在室溫下攪拌過夜。然後濃縮該反應並且通過反相質量啟動的HPLC純化而得到標題化合物，在凍幹後為白色固體1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ11.82(s，1H)，11.21(s，1H)，7.79(d，J＝8.2Hz，1H)，7.55(m，2H)，7.45(m，1H)，7.38(m，1H)，7.32(d，J＝8.1Hz，1H)，7.20(m，1H)，7.02(dd，J＝8.0，7.0Hz，1H)，2.95(m，2H)，2.87(m，2H)，2.26(s，3H)，1.29(s，3H)；[M+H3O]+C24H23F2N2O3S的LC/MS的理論值457.1，實測值457.0。
實施例92 N-[6-氟-7-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基]-甲磺醯胺
步驟1N-(1-氧代-茚滿-5-基)-甲磺醯胺
用吡啶(59mg，0.75mmol)在二氯甲烷(1.5mL)和四氫呋喃(1.5mL)混合物中的溶液處理5-氨基-茚滿-1-酮樣品(100mg，0.68mmol)。然後在冰浴中冷卻該反應。滴加甲磺醯氯(86mg，0.75mmol)在四氫呋喃(1.5mL)中的溶液並且將該反應在冰浴溫度下攪拌2小時並且在室溫下攪拌過夜。用乙酸乙酯稀釋該反應並且用1M HCl萃取兩次。用MgSO4乾燥有機相併且除去溶劑而得到標題物質(64mg，收率42％)，不對其純化，但照此進行[M+H]+C10H11NO3S的LC/MS的理論值226.0，實測值226.0。
步驟2按照與實施例1步驟3類似的方式，通過使N-(1-氧代-茚滿-5-基)-甲磺醯胺和(4′-氟-3′-甲基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(如實施例70步驟1和2中製備，但使用3-甲基-4-氟苯基硼酸和3-氯-2-氟苯胺作為偶聯配偶體)反應製備標題物質，但通過反相UV啟動的HPLC進行純化，收率為29％1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ12.08(s，1H)，9.75(s，1H)，7.61(d，J＝8.1Hz，1H)，7.55-7.50(m，1H)，7.48-7.40(m，3H)，7.28-7.22(m，2H)，7.14-7.09(m，1H)，3.74(s，2H)，3.01(s，3H)，2.34-2.31(m，3H)；[M+H]+C23H18F2N2O2S的LC/MS的理論值425.1，實測值425.1。
實施例93 N-[6-氟-7-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基]-甲磺醯胺
按照與實施例92類似的方式製備該物質，但在步驟1中，醯化試劑為草醯氯且在步驟2中，肼為(4′-丁基-2-氟-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例78，步驟1)；對[M]+C27H23FN2O3的LC/MS的理論值442.2，實測值442.1。
實施例94 N-[10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-乙醯胺
用二烷(1mL)和乙酐(43mg，0.42mmol)處理10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基胺三氟乙酸鹽(實施例88)(16.5mg，0.035mmol)的樣品並且溫熱至50℃下過夜。將該反應冷卻至室溫並且濃縮且通過反相質量啟動的HPLC純化而得到標題化合物，凍幹後為白色固體1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ12.49(s，1H)，10.21(s，1H)，8.63(d，J＝8.7Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.18(d，J＝8.7Hz，1H)，8.02(d，J＝8.1Hz，1H)，7.75(d，J＝8.2Hz，1H)，7.59(m，1H)，7.53(s，1H)，7.30(m，1H)，2.97(m，2H)，2.91(m，2H)，2.35(s，3H)，2.13(s，3H)；[M+H]+C25H21F2N2O的LC/MS的理論值403.4，實測值403.1。
實施例95 N-[7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基]-2-羥基-乙醯胺
步驟1乙酸(1-氧代-茚滿-5-基氨基甲醯基)-甲酯
向5-氨基-茚滿-1-酮(商購，100mg，0.679mmol，1eq.)在DCM(5mL)中的溶液中加入吡啶(0.066mL，0.815mmol，1.2eq.)。將所得溶液冷卻至0℃，隨後加入乙醯氧基乙醯氯(0.073mL，0.679mmol，1eq.)。在0℃下攪拌15分鐘後，將該反應溫熱至25℃並且攪拌12小時。用DCM稀釋該反應並且依次用1N HCl(水溶液)和飽和NaHCO3水溶液洗滌。用Na2SO4乾燥所得有機溶液。在濃縮後，通過矽膠色譜法純化殘餘物(1∶6己烷/EtOAc)而得到乙酸(1-氧代-茚滿-5-基氨基甲醯基)-甲酯，為米色固體(136mg，收率81％)。[MS(ES+)248.1(M+1)+]。
步驟2和3按照與實施例1步驟3類似的方式，通過使(1-氧代-茚滿-5-基)-氨基甲酸甲酯和(4′-丁基-2-氟-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例78，步驟1)反應，隨後如實施例2中水解並且通過反相質量啟動的HPLC純化製備標題物質1H NMR(DMSO-d6)δ12.01(s，1H)，9.70(s，1H)，8.00(s，1H)，7.68(d，1H)，7.63-7.54(m，3H)，7.41(d，1H)，7.29(d，2H)，7.11(dd，1H)，5.70(bs，1H)，4.03(s，2H)，3.75(s，2H)，2.64(t，2H)，1.68-1.60(m，2H)，1.41-1.32(m，2H)，0.94(t，3H)；[M+H]+C27H25FN2O2的LC/MS的理論值429.2，實測值429.2。
實施例96 7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基]-氨基甲酸甲酯
步驟1(1-氧代-茚滿-5-基)-氨基甲酸甲酯
向5-氨基-茚滿-1-酮(商購，100mg，0.679mmol，1eq.)在2∶1v/vEtOAc/H2O混合物(6mL)中的混懸液中加入NaHCO3(114mg，1.36mmol，2eq.)。將所得混合物冷卻至0℃，隨後添加氯甲酸甲酯(0.052mL，0.679mmol，1eq.)。在0℃下攪拌15分鐘後，將該反應溫熱至25 ℃並且攪拌12小時。用EtOAc稀釋該反應並且依次用1N HCl(水溶液)和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4乾燥所得有機溶液，濃縮而得到(1-氧代-茚滿-5-基)-氨基甲酸甲酯，為黃褐色固體(124mg，收率89％)。[MS(ES+)206.1(M+1)+]。
步驟2按照與實施例1步驟3類似的方式，通過使(1-氧代-茚滿-5-基)-氨基甲酸甲酯和(4′-丁基-2-氟-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例78，步驟)反應製備標題物質，但通過反相質量啟動的HPLC進行純化1H NMR(丙酮-d6)δ11.09(s，1H)，8.76(s，1H)，7.90(s，1H)，7.67-7.54(m，4H)，7.47(d，1H)，7.32(d，2H)，7.18(dd，1H)，3.79(s，2H)，3.75(s，3H)，2.72(t，2H)，1.72-1.64(m，2H)，1.49-1.38(m，2H)，0.96(t，3H)；[M+H]+C27H25FN2O2的LC/MS的理論值429.2，實測值429.2。
實施例97 [10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-脲
用甲苯(1mL)、二苯基磷醯基氮化物(22.2mg，0.081mmol)和三乙胺(8.2mg，8.1mmol)處理6-氟-7-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸(實施例61)樣品(30mg，0.075mmol)並且加熱至回流，同時攪拌2小時。然後用濃氨水處理該反應且在回流狀態下加熱過夜。然後通過旋轉蒸發濃縮該反應並且使用UV啟動的HPLC純化而得到8.4mg(收率27％)[10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-脲；[M+H]+C24H20F2N3O的LC/MS的理論值404.2，實測值404.0。
實施例98 [7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基]-脲
步驟17-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基胺
按照與實施例1步驟3類似的方式，通過使5-氨基-茚滿-1-酮(商購)和(4′-丁基-2-氟-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例78，步驟)反應製備標題物質，收率為17％；[M+H]+C25H23FN2的LC/MS的理論值371.2，實測值371.2。
步驟2向7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基胺(25mg，0.068mmol，1eq.)在1∶1v/v AcOH/H2O混合物(1mL)中的混懸液中加入NaOCN(4.4mg，0.068mmol，1eq.)在H2O(1mL)中的溶液。將所得混合物在25℃下攪拌2小時，此時再向反應中添加NaOCN(4.4mg，0.068mmol，1eq.)。將所得混合物在25℃下再攪拌12小時。用EtOAc稀釋該反應並且用H2O、飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液依次洗滌。用Na2SO4乾燥所得有機溶液。在濃縮後，通過製備型RP LC-MS純化粗產物而得到[7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基]-脲(10mg，收率36％)1H NMR(丙酮-d6)δ11.09(s，1H)，8.26(s，1H)，7.89(s，1H)，7.59(d，2H)，7.58(s，1H)，7.48(d，1H)，7.42(d，1H)，7.33(d，2H)，7.18(dd，1H)，5.53(bs)，3.72(s，2H)，2.72(t，2H)，1.72-1.64(m，2H)，1.49-1.36(m，2H)，0.96(t，3H)；[M+H]+C26H24FN3O的LC/MS的理論值414.2，實測值414.2。
實施例99 N-[9-(4-丁基-苯基)-10-氟-5，1-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-羰基]-甲磺醯胺
步驟1N-(5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-羰基)-甲磺醯胺
用K2CO3(36.5mg，0.26mmol)、KOH粉末(32.9mg，0.82mmol)和硫酸氫四丁基銨(2.6mg，0.008mmol)依次處理5-氧代-5，6，7，8-四氫-萘-2-甲醯胺(實施例81，步驟1)(29.4mg，0.16mmol)在四氫呋喃(71μL)中的樣品。將該反應升溫至55℃並且劇烈攪拌20分鐘。然後在20分鐘內加入甲磺醯氯(23.2mg，0.20mmol)在四氫呋喃(140μL)中的溶液並且將該反應在55℃下攪拌過夜。然後將該反應冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋並且用水萃取兩次。然後用MgSO4乾燥有機相，過濾並且除去溶劑。在不進行純化時獲得磺醯胺粗品(35.5mg收率86％)；[M+H]+C12H13NO4S的LC/MS的理論值268.1，實測值268.1。
步驟2按照與實施例1步驟3類似的方式，通過使5-氨基-茚滿-1-酮(商購)和(4′-丁基-2-氟-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例78，步驟1)反應製備標題物質；[M+H]+C28H28FN2O3S計算的LC/MS的理論值491.6，實測值491.1。
實施例100 3-乙醯氨基-7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸
步驟16-硝基-5-乙烯基-茚滿-1-酮
將5-溴-6-硝基-茚滿-1-酮(58mg，0.23mmol)(J.Med.Chem.2003，46，399-408)、乙烯基硼酸二丁酯(74μL，0.34mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(7.8mg，0.0011mmol)和Na2CO3(167mg，1.57mmol)在4∶1 THF/H2O(1.4mL/360μL)中的溶液加熱至80℃下過夜。用硅藻土過濾粗反應並且用EtOAC萃取。乾燥有機相(MgSO4)，過濾並且濃縮。對粗物質進行色譜(SiO2)而得到36mg(79％)6-硝基-5-乙烯基-茚滿-1-酮；[M+H]+C11H9NO2的LC/MS的理論值204.1，實測值204.1。
步驟26-硝基-1-氧代-茚滿-5-甲酸
將6-硝基-5-乙烯基-茚滿-1-酮(36mg，0.18mmol)、RuCl3·H2O(1.8mg，8.9μmol)和NaIO4(152mg，0.713mmol在CCl4(300μL)、H2O(445μL)和乙腈(300μL)的混合物中的溶液加熱至50℃下2小時且然後冷卻至RT並且用硅藻土過濾且在真空中濃縮。通過質量啟動的HPLC純化甲酸粗品而得到26mg(66％)6-硝基-1-氧代-茚滿-5-甲酸；[M+H]+C10H7NO5的LC/MS的理論值222.0，實測值222.0。
步驟37-(4-丁基-苯基)-6-氟-3-硝基-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸
給可密封的小瓶中加入6-硝基-1-氧代-茚滿-5-甲酸(26mg，0.12mmol)、(4′-丁基-2-氟-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例78，步驟1)(25mg，0.12mmol)、氯化鋅(II)(24mg，0.18mmol)和醋酸(1.5mL)，密封並且加熱至105℃過夜。然後將該反應冷卻至RT，在真空中濃縮並且通過UV-啟動的HPLC純化而得到22 mg(41％)的7-(4-丁基-苯基)-6-氟-3-硝基-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸；[M+H]+C26H21FN2O4的LC/MS的理論值445.1，實測值445.1。
步驟4和5用10％Pd/C-DeGussa型(5mg)處理7-(4-丁基-苯基)-6-氟-3-硝基-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸(20mg，0.055mmol)在乙醇(2mL)和THF(1mL)中的溶液並且進行H2(g)發泡15分鐘。將該反應維持在H2(g)氣環境中過夜且然後用硅藻土過濾並且濃縮。[M+H]+C26H23FN2O2的LC/MS的理論值415.2，實測值415.2。用THF(1mL)稀釋粗氨基-化合物，冷卻至0℃並且用Et3N(16μL，0.12mmol)隨後用乙酐(11μL，0.12mmol)處理。將該反應溫熱至RT，攪拌過夜並且濃縮且通過UV-啟動的HPLC純化而得到4.4mg(17％)的所需標題化合物；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ12.43(s，1H)，11.45(s，1H)，8.92(s，1H)，8.14(s，1H)，7.54(m，2H)，7.50(d，J＝8.2 Hz，1H)，7.31(d，J＝8.1Hz，2H)，7.17(dd，J＝8.0，7.3Hz，1H)，3.77(s，2H)，2.64(t，J＝7.6Hz，2H)，2.20(s，3H)，1.61(m，2H)，1.35(m，2H)，0.93(t，J＝7.3Hz，3H)；[M+H]+C28H28FN2O3S的LC/MS的理論值491.2，實測值491. 實施例101 10-(4-丁基-苯基)-11-氟-5，6，7，12-四氫-苯並[6，7]環庚[1，2-b]吲哚-3-甲酸
按照與實施例1步驟3類似的方式，通過使5-氧代-6，7，8，9-四氫-5H-苯並環庚烯-2-甲酸(J.Org.Chem.1962，27(1)，p 70-76)和(4′-丁基-2-氟-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(如實施例69步驟1和2中所述製備，但使用4-正-丁基苯基硼酸作為偶聯配偶體)反應製備標題化物質，收率為34％，但通過反相質量啟動的HPLC進行純化1H NMR(丙酮-d6) 10.72(bs，1H)，8.09(d，1H)，7.99(d，1H)，7.92(s，1H)，7.58(d，2H)，7.45(d，1H)，7.31(d，2H)，7.17(dd，1H)，3.18(t，2H)，3.10-3.04(m，2H)，2.72(t，2H)，2.22-2.14(m，2H)，1.73-1.64(m，2H)，1.45-1.38(m，2H)，0.96(t，3H)；[M+H]+C28H26FNO2的LC/MS的理論值428.2，實測值428.2。
實施例102 9-(4-丁基-苯基)-5，5-二氧代-6，11-二氫-5H-516-硫雜-11-氮雜-苯並[a]芴-3-甲酸
步驟11，1，4-三氧代-116-硫代色滿-7-甲酸甲酯
用30％過氧化氫(30mg，0.26mmol)在乙酸(1mL)中的溶液處理已知的(US2003158413)4-氧代-硫代色滿-7-甲酸甲酯(24.2mg，0.11mmol)的樣品。然後將該反應加熱至100℃下1.5小時並且除去溶劑而得到標題物質，但不純化，而照此進行[M+H]+C11H10O5S的LC/MS的理論值254.0，實測值254.1。
步驟2用(4′-丁基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例70，步驟2)(39mg，0.142mmol)和氯化鋅(37mg，0.27mmol)和乙酸(1mL)處理來自步驟1的粗物質並且加熱至105℃下過夜。冷卻後，用乙酸乙酯和水處理該反應。存在不溶的固體，但將其懸浮於乙酸乙酯中。用水將有機相洗滌一次以上且然後與固體一起導流入燒瓶。除去溶劑並且將粗混合物溶於熱二烷(5mL)並且用乙醇(3mL)、水(1mL)和過量的氫氧化鋰(～100mg)處理。將該反應在70℃下攪拌2小時，冷卻至室溫並且用1M HCl酸化至酸性。除去溶劑並且使該反應分配在乙酸乙酯與水之間。棄去水相。用水將有機相萃取3次並且棄去。用濃HCl酸化鹼性萃取物並且用乙酸乙酯萃取兩次。用MgSO4乾燥合併的有機相併且除去溶劑。通過UV啟動的反相HPLC純化殘餘物而得到標題物質，為白色固體。該物質中汙染有～15％的7-(4-丁基-苯基)-5，5-二氧代-6，11-二氫-5H-5l6-硫雜-11-氮雜-苯並[a]芴-3-甲酸。僅對標題物質給出NMR數據；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.30(s，1H)，8.39-8.31(m，2H)，8.15-8.10(m，1H)，7.82-7.77(m，1H)，7.68(s，1H)，7.64(d，J＝8.1Hz，1H)，7.47-7.44(m，1H)，7.36(s，1H)，7.31(d，J＝8.1Hz，1H)，5.12(s，2H)，2.64(dd，J＝7.6，7.6Hz，2H)，1.64-1.56(m，2H)，1.39-1.29(m，2H)，0.93(dd，J＝7.3，7.3Hz，3H)；(M++H+)的ESIMS m/z理論值446.1，實測值446.1。
實施例103 10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-6，11-二氫-5-氧雜-1-氮雜苯並[a]芴-3-甲醯胺
步驟17-羥基-色滿-4-酮
向間苯二酚(5g，45.5mmol)和3-氯丙酸(5.2g，48mmol)的攪拌混合物中一次加入三氟甲磺酸(25g，166mmol)。將該混合物在室溫下攪拌10分鐘，然後在80℃下加熱30分鐘。將該反應冷卻至室溫並且用DCM(200mL)稀釋該混合物。將該溶液緩慢傾入冰水(200mL)。分離雙-層並且用DCM(2x40mL)萃取水相。用鹽水洗滌合併的有機相併且用用硫酸鈉乾燥。在蒸發溶劑並且照此進行後獲得3-氯-1-(2，4-二羥基-苯基)-丙-1-酮粗品，為橙色固體(6.9g)。
在0℃下將3-氯-1-(2，4-二羥基-苯基)-丙-1-酮(6.9g)溶於氫氧化鈉(2N，100mL)。將該溶液攪拌2小時並且用HCl(5N)酸化至pH＝3。用乙酸乙酯(3x50mL)萃取該混合物。用鹽水洗滌合併的有機相併且用硫酸鈉乾燥。在蒸發溶劑後獲得7-羥基-色滿-4-酮，為黃色固體1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.70(d，1H，J＝8.8Hz)，6.47(dd，1H，J＝2.4，8.8Hz)，6.30(d，1H，J＝2.0Hz)，4.47(t，2H，J＝6.4Hz)，2.70(t，2H，J＝6.4Hz)。
步驟24-氧代-色滿-7-腈
按照與實施例81步驟4和5中所述相同的轉化順序獲得4-氧代-色滿-7-腈，為白色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.98(d，1H，J＝8Hz)，7.30(s，1H)，7.27(d，1H，J＝8Hz)，4.60(t，1H，J＝6.4Hz)，2.88(t，1H，J＝6.4Hz)。
步驟3使4-氧代-色滿-7-腈和(4′-氟-3′-甲基-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(如實施例70步驟1和2中所述製備，但使用3-甲基-4-氟苯基硼酸作為偶聯配偶體)如實施例1步驟3中所述一起反應。然後使粗產物如實施例19步驟3進行水解而得到10-氟-9-(4-氟-3-甲基-苯基)-6，11-二氫-5-氧雜-11-氮雜苯並[a]芴-3-甲醯胺，為黃色固體1H NMR(400MHz，MeOD)δ 7.68(d，1H，J＝8Hz)，7.51(dd，1H，J＝2，8Hz)，7.48-7.39(m，2H)，7.29(d，1H，J＝8Hz)，7.14-7.08(m，2H)，5.64(s，2H)，2.33(d，3H，J＝1.6Hz)。ESMS m/z390.1(M+H+)。
實施例104 N-[7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基]-甲磺醯胺
按照與實施例92中類似的方式製備標題物質，但在步驟2中，肼為(4′-丁基-2-氟-聯苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實施例78，步驟1)1H NMR(400MHz，丙酮-d6)δ11.17(bs，1H)，8.59(bs，1H)，7.69(d，1H)，7.62(s，1H)，7.58(d，2H)，7.46(d，1H)，7.36(d，1H)，7.32(d，2H)，7.19(dd，1H)，3.82(s，2H)，3.05(s，3H)，2.69(t，2H)，1.71-1.62(m，2H)，1.50-1.40(m，2H)，0.98(t，3H)；ESMS m/z449.2(M+H+)。
實施例105 N-[9-(4-丁基-苯基)-10-氟-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-2-羥基-乙醯胺
按照與實施例95中類似的方式使用合適的原料製備標題物質ESMSm/z 443.2(M+H+)。
實施例106 N-[9-(4-丁基-苯基)-10-氟-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-甲磺醯胺
按照與實施例92中類似的方式使用合適的原料製備標題物質ESMSm/z 463.2(M+H+)。
實施例107 N-[7-(4-二乙氨基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基]-乙醯胺
步驟1二乙基-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜環戊硼烷-2-基)-苯基]-胺
將4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜環戊硼烷-2-基)-苯胺(500mg，2.28mmol，1eq.)溶於無水DMF(5mL)並且冷卻至0℃。加入NaH(60％分散液，201mg，5.02mmol，2.2eq.)並且將所得混合物在0℃下攪拌30分鐘，此後向該反應混合物中滴加碘乙烷(0.38mL，2.1eq)。一旦這一添加完成，就將該反應混合物溫熱至室溫並且攪拌3天。用EtOAc稀釋該反應並且依次用H2O(5x)和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4乾燥有機溶液並且濃縮而得到二乙基-[4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜環戊硼烷-2-基)-苯基]-胺，為黃褐色粘性固體ESMS m/z 276.1(M+H+)。
步驟2將來自步驟1的產物(200mg，0.7268mmol)、3-溴-2-氟-苯胺(165mg，0.7268mmol，1eq.)、Na2CO3(616mg，5.814mmol.8eq.)和Pd(PPh3)4(84mg，0.1eq.)部分溶於DMF(10mL)和H2O(2mL)混合物中。使N2氣體通過該反應混合物發泡5分鐘。將所得混合物在密封試管內和微波照射下加熱至150℃下10分鐘。用EtOAc稀釋該反應並且依次用H2O、1N NaOH(aq)和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4乾燥有機溶液並且濃縮。使用矽膠純化所得殘餘物(2∶1己烷/EtOAc)而得到苯胺產物，為黃色油狀物。ESMS m/z 259.1(M+H+)。
步驟3-4按照與實施例1步驟2和3類似的方式，使用來自實施例107步驟2的產物和商購的N-(1-氧代-茚滿-5-基)-乙醯胺製備標題物質1HNMR(400MHz，CD3OD，TFA鹽)δ7.89(d，2H)，7.81(s，1H)，7.61(d，2H)，7.56-7.48(m，2H)，7.42(d，1H)，7.13(dd，1H)，3.78-3.65(m，6H)，2.12(s，3H)，1.18(t，6H)；ESMS m/z 428.2(M+H+)。
實施例108-124 通過使用合適的原料重複實施例17、30、57、75和/或107的方法獲得下列表7中鑑定的化合物。
表7






實施例125-136 通過使用合適的甲酸作為原料(通過實施例30、57、75、107和/或143中所述的方法獲得)重複實施例97中所述的方法獲得下列表8中鑑定的化合物。
表8




實施例137-141 通過使用合適的原料重複實施例30、92和/或107中所述的方法獲得下列表9中鑑定的化合物。
表9


實施例142 7-(4-丁基-苯基)-6-氟-10，10-二甲基-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸
將實施例84(10mg，0.023mmol)溶於甲醇(2mL)和HCl(5N，2mL)的混合物。將該溶液在95℃下加熱過夜。用水稀釋該混合物並且用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。濃縮合併的有機萃取物。用乙醇(1mL)和水(0.3mL)隨後用LiOH(3mg，0.115mmol)處理殘餘物。然後將該混合物在120℃下和微波照射中加熱7分鐘。過濾該混合物並且通過反相HPLC純化而得到標題化合物，為黃色固體。[M+H]+C28H27FNO2的LC/MS的理論值428.2，實測值428.2。
實施例143 6-氟-10，10-二甲基-7-(4-哌啶-1-基-苯基)-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸
通過使用合適的原料重複實施例82、107和142中所述的方法獲得標題化合物，為黃褐色固體1H NMR(400MHz，CD3OD，HCl鹽)δ8.12(s，1H)，8.06(d，1H)，7.89(d，2H)，7.74(d，2H)，7.65(d，1H)，7.56(d，1H)，7.19(dd，1H)，3.80-3.70(m，4H)，2.12-2.06(m，4H)，1.92-1.78(m，2H)，1.66(s，6H)；ESMS m/z 455.2(M+H+)。
實施例144 N-[10-氟-5，5-二甲基-9-(4-哌啶-1-基-苯基)-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-甲磺醯胺
通過使用合適的原料重複實施例82(步驟1和2)中所述的方法獲得標題化合物，為黃褐色固體1H NMR(400MHz，DMSO-d6，HCl鹽)δ11.85(s，1H)，9.79(s，1H)，7.84(d，2H)，7.68(bs，2H)，7.36(d，2H)，7.29(d，2H)，7.15(m，1H)，7.10(m，1H)，3.56(s，2H)，3.51-3.45(bs，4H)，3.03(s，3H)，2.84(s，2H)，1.93-1.82(bs，4H)，1.72-1.85(bs，2H)，1.29(s，6H)；ESMS m/z518.1(M+H+)。
實施例145 N-(7-苯並唑-2-基-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基)-乙醯胺
通過使用合適的原料(如WO03/074516中所述製備的3-苯並唑-2-基-苯胺)重複實施例1(步驟2和3)中所述的方法獲得標題化合物，為固體1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.01(s，1H)，10.06(s，1H)，8.27(s，1H)，7.92(m，2H)，7.90(m，1H)，7.77(m，2H)，7.71(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(s，2H)，7.39(m，2H)，3.76(s，2H)，2.09(s，3H)；ESMS m/z 380.2(M+H+)。
實施例146 [9-(4-丁基-苯基)-10-氟-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-脲
通過使用合適的原料重複實施例98中所述的方法獲得標題化合物，為黃褐色固體1H NMR(400MHz，丙酮-d6)δ10.84(bs，1H)，8.16(bs，1H)，7.68(d，1H)，7.53(d，2H)，7.48(d，1H)，7.45(s，1H)，7.33(d，1H)，7.29(d，2H)，7.11(dd，1H)，5.50(bs，2H)，3.08-2.90(m，4H)，2.69(t，2H)，1.69-1.60(m，2H)，1.45-1.33(m，2H)，0.98(t，3H)；ESMS m/z 428.2(M+H+)。
實施例147 3-氨基-7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-甲酸
通過使用反相HPLC純化實施例100步驟4的產物獲得標題物，為黃褐色固體1H NMR(400MHz，丙酮-d6)δ11.18(s，1H)，8.00(s，1H)，7.55(dd，2H)，7.50(d，1H)，7.32(d，2H)，7.22-7.18(m，1H)，7.10(s，1H)，3.71(s，2H)，2.69(t，2H)，1.71-1.63(m，2H)，1.44-1.34(m，2H)，0.95(t，3H)；ESMS m/z415.2(M+H+)。
實施例148 7-(4-丁基-苯基)-6-氟-2-四唑-1-基-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚
將7-(4-丁基-苯基)-6-氟-5，10-二氫-茚並[1，2-b]吲哚-2-基胺(實施例98，步驟1，60mg，0.1620mmol)溶於AcOH(1.6mL)。在室溫下向原料溶液中依次加入原甲酸三乙酯(38mg，0.2591mmol，1.6eq.)和疊氮化鈉(15mg，0.2429mmol，1.5eq.)。將所得反應混合物加熱至80℃下3.5小時。在冷卻至室溫後，用EtOAc稀釋該反應並且依次用H2O、1N HCl(水溶液)和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4乾燥有機溶液並且濃縮。通過反相HPLC純化所得殘餘物而得到標題化合物，為黃褐色固體1H NMR(400MHz，丙酮-d6)δ11.31(bs，1H)，9.77(s，1H)，8.15(s，1H)，7.97(s，2H)，7.62-7.52(m，3H)，7.38(d，2H)，7.21(dd，1H)，3.99(s，2H)，2.69(t，2H)，1.72-1.63(m，2H)，1.50-1.40(m，2H)，0.99(t，3H)；ESMS m/z 424.1(M+H+)。
實施例149 3-[9-(4-丁基-苯基)-10-氟-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-基]-4H-[1，2，4]二唑-5-酮
步驟1將9-(4-丁基-苯基)-10-氟-5，11-二氫-6H-苯並[a]咔唑-3-腈(通過使用合適的原料重複實施例78中所述方法獲得，76mg，0.1927mmol，1eq.)、羥基胺HCl鹽(27mg，0.3853mmol，2eq.)和Na2CO3(61mg，0.5780mmol，3eq.)加入到EtOH(3.5mL)、H2O(1.0mL)和1N NaOH(0.35mL)中。使N2氣通過該反應混合物發泡5分鐘。將該反應在80℃下密封試管內加熱過夜。將該反應濃縮至幹並且取前面的粗產物在不純化的情況下用於下一步ESMS m/z 428.1(M+H+)。
步驟2將來自步驟1的粗產物和吡啶(12mg，0.15mmol)溶於無水THF(2mL)並且冷卻至0℃。滴加氯甲酸2-乙基己基酯(0.03mL，0.15mmol)。將所得反應混合物在0℃下攪拌45分鐘。用EtOAc稀釋該反應並且依次用H2O和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4乾燥有機溶液並且濃縮。用矽膠純化所得殘餘物(2∶1己烷/EtOAc)而得到醯化產物，為米色固體。
步驟3將來自步驟2的產物(23mg，0.04mmol)溶於無水甲苯(2mL)。使N2氣通過該反應混合物發泡5分鐘。將該反應在125℃下的密封試管內加熱過夜。將該反應混合物濃縮至幹並且通過反相HPLC純化而得到標題化合物，為淡黃色固體ESMS m/z 454.2(M+H+)。
測定 檢測本發明的化合物以便測定其作為TPO模擬物在體外使用人TPO受體(TPO-R)轉染的鼠BaF3細胞系的增殖測定中的功效 螢光素酶報導分子測定 洗滌Ba/F3-TpoR細胞並且重新懸浮於以8x104個細胞/mL補充了1％或20％FBS、MS、HS或(人血清清蛋白+α1酸糖蛋白)、1％Pen-Strep-Glu和1mM或25μM ZnSO4的RPMI-1640中並且以50mL/孔配入384-孔平板過夜飢餓(18-20小時)。在第2天，在37℃、5％CO2下用0.5mL DMSO、化合物或rhTpo(30ng/mL)將飢餓細胞處理7小時。將在水中稀釋至60％的Perkin Elmer Britelite(25mL)加入到各孔中並且在幾分鐘後，在CLIPR上讀取平板以便記錄發光信號。
增殖測定 洗滌Ba/F3-TPO-R細胞並且重新懸浮於以8x104個細胞/mL補充了1％FBS，1％Pen-Strep-Glu和1mM或25μM ZnSO4的RPMI-1640中並且以50mL/孔配入384-孔平板過夜飢餓(18-20小時)。在第2天，在37℃，5％CO2下用0.5mL DMSO、化合物或rhTpo(30ng/mL)將飢餓細胞處理48小時。將Alamar Blue試劑(在～7％終濃度下的3.5μL)加入到各孔中，將平板孵育4小時並且在Analyst GT上讀取以便記錄螢光信號。
CFU-Meg測定 將CD34+細胞和MegaCult-C試劑盒(StemCell Technologies，Inc.Vancouver，Canada)用於本測定。將CD34+細胞以104個細胞/載玻片與MegaCult-C膠原蛋白溶液按照製造商的方案混合。在以不同濃度添加TPO或本發明的化合物後，將載玻片在37℃、5％CO2下孵育12天，固定，染色人CFU-Meg並且使用倒置顯微鏡對集落定量。
游離形式或藥學上可接受的鹽形式的式I的化合物表現出有價值的藥理學特性，例如本申請中所述的體外試驗中所示。本發明的化合物優選表現出TPO模擬物活性，其中IC50在1x10-9-1x10-5M的範圍，優選低於500nM，更優選低於250nM。式I的化合物表現出相對於TPO 25％-150％範圍的有效性。
應理解本文所述的實施例和實施方案僅用於解釋目的，並且可以提示本領域技術人員對其進行各種變型或改變並且它們均包括在本申請的實質和範圍內以及待批權利要求範圍內。為所有目的而將本文引述的全部公開文獻、專利和專利申請引入本文作為參考。
權利要求
1.式I的化合物及其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑合物和異構體
其中
n選自0、1、2和3；
m選自0和1；
Y選自CR9R10、NR9、O和S(O)2；其中R9和R10獨立地選自氫和C1-6烷基；
R1選自氫、滷素、氰基、硝基、NR9R10、C1-6烷基、C1-6烷氧基、滷素-取代的-C1-6烷氧基、滷素-取代的-C1-6烷基、C3-12環烷基和C3-8雜環烷基；其中R9和R10獨立地選自氫和C1-6烷基；
R2和R3獨立地選自滷素、氰基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、滷素-取代的-C1-6烷基、C6-10芳基、C1-10雜芳基、C3-8雜環烷基和C3-12環烷基；其中R2或R3的任意烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基任選被1-3個獨立地選自如下的基團取代滷素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷氧基、-NR12R13、-XOR13、-S(O)2R13、C3-12環烷基、C3-8雜環烷基、C6-10芳基和C1-10雜芳基；其中X為鍵或C1-6亞烷基且R12和R13獨立地選自C1-6烷基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基和滷素-取代的-C1-6烷氧基；其中R2和R3的任意芳基、雜芳基、環烷基和雜環烷基取代基任選進一步被1-3個獨立地選自如下的基團取代滷素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基和滷素-取代的-C1-6烷氧基；
R4選自氫、滷素、氰基、硝基、XNR9R10、OXNR9R10、C1-6烷基、C1-6烷氧基、滷素-取代的-C1-6烷氧基、滷素-取代的-C1-6烷基、C3-12環烷基、C3-8雜環烷基、C6-10芳基和C1-10雜芳基；其中X為鍵或C1-6亞烷基且R9和R10獨立地選自氫和C1-6烷基；
R5、R6和R7獨立地選自氫、C1-6烷基、C3-8雜環烷基、C1-10雜芳基、C6-10芳基、OS(O)2R11、NR11S(O)2R14、NR11C(O)R14、NR11C(O)NR11R14、NR11C(O)C(O)OR14、NR11C(O)OR14、OC(O)NR11R14、C(O)OR11、C(O)R15、NR11R14、NR11R15和C(O)NR11R14；其中R11和R14獨立地選自氫、C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基和被NR9R10取代的C1-6烷基；R15為任選被取代1-3個C1-6烷基取代的C3-8雜環烷基；其中R5、R6和R7的任意芳基、雜環烷基或雜芳基可以任選進一步被1-3個獨立地選自如下的基團取代滷素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷氧基、OS(O)2R11、NR11S(O)2R14、NR11C(O)R14、NR11C(O)NR11R14、NR11C(O)C(O)OR14、NR11C(O)OR14、OC(O)NR11R14、C(O)OR11、C(O)R15、NR11R14、NR11R15和C(O)NR11R14；其中R11、R14和R15如上述所定義；
R8選自氫、滷素、氰基、C1-6烷氧基、滷素-取代的-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷氧基和C1-6烷基。
2.權利要求1的化合物，其中
n選自0、1和2；
Y選自CR9R10、O和S(O)2；其中R9和R10獨立地選自氫和C1-6烷基；
R1選自氫、C1-6烷基和滷素-取代的-C1-6烷基；
R2選自滷素、C6-10芳基、C1-6烷基和C2-6鏈烯基；其中R2的任意芳基任選被1-3個獨立地選自滷素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的基團取代；
R3選自滷素、羥基、氰基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、滷素-取代的-C1-6烷基、C6-10芳基和C1-10雜芳基；其中R3的任意芳基或雜芳基任選被1-3個獨立地選自如下的基團取代滷素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷基、滷素-取代的-C1-6烷氧基、-NR12R13、-XOR13、-S(O)2R13和C3-8雜環烷基；其中X為鍵或C1-6亞烷基且R12和R13獨立地選自氫和C1-6烷基；
R4選自氫和滷素；
R5選自氫和C1-6烷基；
R6選自C1-10雜芳基、OS(O)2R11、NR11S(O)2R14、NR11C(O)R14、NR11C(O)OR14、C(O)OR11、R15、NR11R14和C(O)NR11R14；其中R11和R14獨立地選自氫、C1-6烷基、羥基-C1-6烷基和滷素-取代的-C1-6烷基；R15為任選被1-3個C1-6烷基取代的C3-8雜環烷基；
R7選自氫、羥基、NR11S(O)2R14和NR11R14；其中R11和R14如上述所定義；
R8選自氫和C1-6烷基。
3.權利要求2的化合物，其中n選自0和1；且Y選自CR9R10、O和S(O)2；其中R9和R10獨立地選自氫和甲基。
4.權利要求3的化合物，其中R1選自氫和三氟甲基；且R2選自氫、溴、氯、碘、烯丙基、三氟甲基、和任選地被1-3個獨立地選自甲基和乙基的基團取代的苯基。
5.權利要求4的化合物，其中R3選自氫、溴、氯、氰基、三氟甲基、烯丙基、嘧啶基、吡啶基、哌啶基、苯並唑基、噻唑基和苯基；其中所述的嘧啶基、噻唑基和苯基任選被1-3個獨立地選自如下的基團取代氯、氟、甲基、乙基、丙基、丁基、異-丁基、叔-丁基、異丙氧基、丙氧基、甲氧基、二甲基-氨基、甲氧基-甲基、羥基、環己基、吡啶基、甲基磺醯基、乙基磺醯基、嗎啉代、二乙基氨基、吡嗪基、哌啶基、苯基、三氟甲基、己烷基和氰基-甲基。
6.權利要求5的化合物，其中R4選自氫、氟和溴；且R5和R8均為氫。
7.權利要求6的化合物，其中R6選自氨基、脲基、羥基-乙醯基-氨基、羧基、甲氧基羰基、甲氧基羰基-氨基、4H-[1，2，4]二唑-5-酮、四唑基、甲基-氨基羰基、二甲基-氨基羰基、甲基-羰基-氨基、嗎啉代-羰基、甲基-哌嗪基-羰基、氰基、四唑基、氨基-羰基、甲基-磺醯基-氨基、甲基-磺醯基-氨基-羰基、叔-丁氧基-羰基-氨基、羥基-羰基-甲基-氨基、羥基-甲基-羰基-氨基、草醯基-氨基和三氟甲基-磺醯氧基；且R7選自氫、羥基、甲基-羰基-氨基、氨基和氨基-羰基。
8.藥物組合物，其包含治療有效量的權利要求1的化合物與藥學上可接受的賦形劑。
9.治療動物疾病的方法，其中血小板水平升高可以抑制或改善所述疾病或病症的病理學和/或症狀學情況，該方法包含對所述的動物施用治療有效量的權利要求1的化合物。
10.權利要求1的化合物在製備用於治療動物疾病的藥物中的用途，其中所述疾病或病症的病理學和/或症狀學由血小板水平的下降引起。
全文摘要
本發明提供了一類新的化合物、包含這類化合物的藥物組合物和使用這類化合物治療或預防與異常或失調的TPO活性相關的疾病或障礙特別是涉及血小板減少的疾病或障礙的方法。
文檔編號C07D403/04GK101213190SQ200680024338
公開日2008年7月2日 申請日期2006年7月14日 優先權日2005年7月14日
發明者P·阿爾佩爾, T·馬爾希傑, A·查特吉, 陸文碩, D·穆特尼克, M·J·羅伯茨, 耘 賀 申請人:Irm責任有限公司