被分析物的檢測方法
2023-10-25 14:58:37 1
專利名稱：被分析物的檢測方法
技術領域：
本發明涉及檢測被分析物(特別是特異性結合分子，例如唾液樣品中的抗體或抗原)的方法，本發明尤其涉及在未經貯存或冷凍的新鮮唾液樣品中的分析物的檢測方法。
唾液中抗體的檢測是診斷各種疾病和病態(特別是腸道感染)的一種方便的方法。哺乳動物(特別是人)中的腸道感染刺激分泌粘液的免疫反應，例如通過激活普通黏膜免疫系統分泌唾液。這一反應開始時常常與血清中的抗體反應平行，一般以存在IgA抗體為特徵。然而，在抗原(如細菌或病毒)從機體消除後，分泌粘液(包括唾液)的免疫反應迅速減弱。因此，唾液中抗體的存在反映出當時的，即同時發生的感染。在微生物感染的情況下，例如，唾液中的抗體(此後稱作分泌抗體)反映出例如腸道中微生物定居的當時的狀態，因此是同時發生感染有用的監視物。另一方面，在微生物從機體消除後，血清抗體持續一段時間。因此，陽性血清抗體試驗反映出過去和當時抗原的出現，對臨床醫生較少有幫助。陽性分泌抗體試驗指示出當前或同時發生的微生物感染。
由病人提供唾液樣品比提供其它液體樣品(特別是血清樣品)要好得多。而且，在獲得唾液樣品的過程中，對病人或醫生感染的危險性都非常低，因為它不需要使用取血清樣品時所需的針頭。
從唾液樣品診斷的方法是公知的。具體地說，AU-A-9067676涉及檢測對粘液分泌物(例如唾液)中Helicobacter pylori抗原有特異性的IgG，從而提供了一種監測該微生物在哺乳動物中的當前(即同時)感染的方法。相應的學術出版物是Witt et al.Fron-tiers in Mucosal Immunology 1 693-696(1991)。
WO-A-9322682涉及有關H.pylori的基於唾液的試驗，其中檢測針對H.pylori的IgG抗體。
目前可用的基於唾液試驗的方法的一個缺點是，在某些情況下，它們可能是不可靠的。試驗中獲得的假性陽性數量可以高得不可接受。在試圖開發有關針對H.pylori的唾液抗體的免疫測定方法而進行的實驗中，要求78個受試者將唾液收集到乾淨的無菌容器中。當試驗樣品中H.pylori抗體的存在時，由於大量假性陽性結果，發現其與血清試驗的結果不能很好地吻合。
與其它大多數類型的診斷試驗一樣，基於唾液的試驗的另一個缺點是，為了獲得結果，必須將樣品依所要分析的順序送入實驗室。這一過程可能花去幾天時間，部分抵銷了能夠獲得微生物當前感染指示的優點。此外，病人可能忘記去獲取試驗結果，特別是在提交樣品和取得試驗結果之間症狀消失時。
因此，在幾分鐘內提供可靠結果的檢測唾液樣品中被分析物的試驗試劑盒將是很有價值的，因為在一般醫療工作者的診斷期間可以進行試驗。這將有另一個優點，那就是保證病人取得結果，必要時開處方治療。然而，當在收集的幾分鐘內分析唾液樣品時，任何基於唾液的試驗所存在的假性陽性結果的問題更加嚴重，過去，假性陽性結果多得使對新鮮唾液樣品進行試驗獲得的結果幾乎完全沒有意義。
人們相信，尤其在新鮮唾液樣品中可以出現不足的可靠性，這是由於在樣品中存在非特異性結合試驗試劑並由此給出假性陽性結果的試劑。當然，向樣品中加入降低非特異性結合的試劑是可能的，但也證明存在問題，因為許多這類試劑也降低特異性結合，使得真正的陽性結果與假性陽性一同消失。本發明使解決這一問題，並且在保留真正的陽性結果的同時消除假性陽性結果成為可能。
本發明的第一方面提供了檢測唾液樣品中被分析物存在的方法，該方法包括使唾液樣品與能夠和被分析物形成特異性結合複合物的特異性結合劑接觸，並且檢測特異性結合複合物的存在；其特徵在於，首先將唾液樣品與包含棕櫚酸和/或硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的溶液接觸。
本發明方法的優點是可以用非侵入性方法快速並可靠地獲得試驗結果，此外，它克服了當使用新鮮唾液時出現的問題，能夠從「點滴」試驗獲得可靠的結果。在本發明的內容中，「新鮮唾液」指已貯存的時間不長於30分鐘，優選地不長於10分鐘，常常是短於上述時間的唾液。
有必要非常仔細地選擇表面活性劑，本發明一個驚人的特徵是，在大範圍的可獲得的表面活性劑中，能使我們獲得可靠結果的僅有的一些是以上限定的那些。合適的表面活性劑可以按以下商標獲得Tween 40、Tween 60、Tween 61、Tween 65和Tween 80。
含有40％-65％硬脂酸衍生物的表面活性劑是優選的，包含約55％硬脂酸衍生物及剩餘量為棕櫚酸衍生物的Tween60是特別優選的，它明顯能給出比大多數其它表面活性劑更可靠的結果。
當使用以下討論的固體基質時，最好選擇表面活性劑存在的量，以使樣品通過基質的流量最大。當表面活性劑以0.1％到1％體積(典型地約0.5％體積)的量存在時，所述流量通常最大。這種量的表面活性劑給出消除非特異性結合而不明顯影響特異性結合的最好的結果和可由本發明的方法獲得的檢測極限值。
當溶液緩衝到pH約6.8到約7.8，獲得最好的結果，但發現溶液緩衝到7.4時最佳。只要導致溶液的pH值保持在優選的範圍內，任何緩衝溶液都可以使用。磷酸鹽是用於本發明特別優選的緩衝液，但可以用來保證溶液的pH值在優選範圍內的緩衝液的其它例子是本領域技術人員熟知的。
儘管鈉鹽通常給出最好的結果，但任何水溶性鹽(例如鈉鹽、鉀鹽或銨鹽)均可用於製備所述的緩衝溶液。已發現使用0.001-0.05M，最好是0.02M的磷酸鈉溶液可以獲得有效的緩衝。
其它試劑可以存在在溶液中，以便降低試驗樣品中的粘蛋白和顆粒物質對試驗試劑的非特異性結合，這些試劑包括無機鹽如氯化鈉和蛋白質和牛血清白蛋白(BSA)。
氯化鈉可以以約0.1到0.2M的濃度存在。不超過0.2M的濃度上限是非常好的，因為這樣有助於特異性結合。典型地，存在於溶液中的氯化鈉的濃度是約0.125M。
如果存在BSA，則典型地含有約0.05到0.5％(重量)，優選0.1％(重量)的量。
所述的被分析物可以是能夠與特異性結合劑反應形成特異性結合複合物的任何特異性結合分子。特異性結合複合物的例子包括抗原——抗體複合物，因此，被分析物可以是抗體或抗原。
在被分析物是抗體的情況下，它可以是任何同種型的，並且可以是針對任何病原體的抗體。唾液樣品分析在由病原體(例如Heli-cObacter pylori，以前稱作Camplobacter pylori)引起的腸道感染的診斷中特別有用。如以上的討論，H.pylori感染由唾液中存在IgG指示，因此，如果試驗的目標是檢測H.pylori感染，則被分析物可以是對H.pylori抗原有特異性的IgG。
術語「抗原」以其最廣泛的含義被使用，包括完整的病原體細胞，或來源於病原體的同質的、近同質的或異質的抽提物，所有這些都能結合到唾液中的特異性抗體上。
當特異性結合劑是抗原時，它可以是蛋白質、多糖或脂質或它們的任何組合。優選的是抗原的特異性結合劑包括用例如超聲波、壓力分解、去汙劑抽提或分級分離製備的病原體蛋白質、脂多糖或細胞提取物。
當本發明的方法用於檢測H.pylori感染時，特異性結合劑可以是得自H.pylori的抗原。適於在本發明的方法中用作特異性結合劑的得自H.pylori的抗原在WO-A9322682中公開。然而，任何H.pylori來源的抗原都可以用作特異性結合劑。
方便的和優選的是將特異性結合劑結合到固體支持物上。合適的固體支持物包括硝化纖維素膜、玻璃或聚合物固體支持物。這一用途最常用的聚合物是纖維素、聚丙烯醯胺、尼龍、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯，但本發明不限於這些。固體支持物可以呈條狀、管狀、珠狀、盤狀或微板狀，或者適於進行免疫測定的任何其它表面的形式。
特別有用的固體支持物可以包括襯有吸附墊的硝化纖維素膜，這樣，當將樣品添加到固體支持物上時，被分析物將被硝化纖維素膜上表面上的特異性結合劑固定，而樣品的其它組分通過膜並吸附於墊上。這保證了從檢測特異性結合複合物的區域除去任何不需要的物質。
硝化纖維素膜可以具有從約0.5到8μm，優選的是從約1到2μm的孔徑。
所述的墊可以由任何吸附性材料形成，但吸附性紙是經常選擇的材料，這一般是出於對價格的考慮。
在本發明中有用的特異性結合分子可以共價或非共價(「被動」)結合到固體表面上。合適的結合方法是本領域公知的，一般包括將抗原交聯、共價結合或物理吸附到固體支持物上。
由通過檢測被分析物和特異性結合劑之間的複合物的形成的本發明的方法判斷被分析物的存在。因此，某些形式的檢測工具是鑑別特異性結合複合物存在(或者需要時測定其量)所必需的。
檢測工具可以是與報導分子結合的抗體，它能特異性結合到特異性結合複合物上。
在檢測抗體的情況下，檢測工具可以包含對被分析物抗體的同種型的所有抗體特異的標記的第二抗體。在人H.pylori試驗中，被分析物抗體常常是IgG同種型的，在這種情況下，第二抗體可以是抗一人IgG。
「報導分子」是化學性質上具有經分析可識別的特徵，或提供經分析可識別的信號(可用來檢測抗原結合的抗體)的分子或基團。檢測可以是定性的，也可以是定量的。用於這類檢測的報導分子可以是酶、螢光團或包含放射性核素的分子(即，放射性同位素)。在酶免疫測定的情況下，通常用戊二醛或高碘酸鹽的方法將酶結合到第二抗體上。然而，將很容易認識到，存在本領域技術人員容易獲得的多種不同的結合技術。其中，通常使用的酶包括辣根過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和鹼性磷酸酶。一般選擇與特異性酶一起使用的生色團以便當用相應的酶水解時產生可檢測的顏色變化。生色團可以是可溶的或不可溶的，取決於所選定的用途。例如，5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸鹽/氮藍四唑鹽適於與鹼性磷酸酶結合物一起使用。對過氧化物酶結合物來說，通常使用1，2-苯二胺-5-氨基水楊酸，3，3，5，5-四甲基聯苯胺、聯甲苯胺或聯茴香胺。使用產生螢光產物的螢光團而不是以上所述的生色團也是可能的。螢光團的例子是螢光素和羅丹明。當被用特定波長的光照射激活時，螢光團標記的抗體吸收光能，誘發分子的激發狀態，接著發射特徵顏色的光，該光通常是用光學顯微鏡可肉眼檢測的。
然而，本發明特別適合用於在幾分鐘內可取得結果並且可以在診斷期間由一般醫療工作者進行的「快速診斷」試驗中。由於這一原因，檢測方法儘可能簡單並且不需要特殊儀器時是非常優選的。因此，本發明中優選的報導分子是顏色試劑，例如膠態金或碳，聚苯乙烯或乳膠粒子。
當使用這類報導物質時，除去未結合的第二抗體以使連接有顏色劑的結合的第二抗體明顯可見是重要的。這可以通過採用如上所述的固定在背襯吸附墊的硝化纖維素膜上的特異性結合劑來達到。任何剩餘的第二抗體都將通過膜並吸附在墊上，僅留下結合的第二抗體的相關的顏色劑在硝化纖維素膜的表面上。
有關從基於唾液的試驗獲得可靠結果的問題的進一步的研究表明，產生假性陽性結果的一個可能的原因是存在與試驗試劑發生非特異性結合從而產生假性陽性結果的唾液中的粘蛋白和顆粒物質。因此，在本發明的方法中，在嘗試檢測特異性結合複合物存在之前，包括過濾樣品的步驟是有利的。
典型地，濾器具有從約1到15μm，優選地從約3到8μm的有效孔徑。這可以由使用任何類型的濾器達到，但優選的類型是由塑料製造的具有典型的5到10μm實際孔徑的過濾器板。在這種類型的過濾器板中，有效孔徑較實際孔徑要小，因為過濾器板相對較深，孔徑排列在外。
從唾液樣品除去顆粒物質有助於保證特異性結合劑結合到其上的基質不被汙染。當基質是一種膜時，這一點特別重要，因為顆粒物質可以阻塞膜孔，阻止未結合的樣品通過膜和從試驗表面除去，從而增加樣品流過時間。
在過濾步驟之前可以包括的另一個步驟是初步分離步驟，其中，樣品通過粗濾器(如棉花或棉花絨墊)。這可能是通過除去高分子量粘多糖降低了唾液樣品的粘度。當特異性結合分子被固定在膜基質上時，降低了粘度的樣品是有幫助的，因為粘性唾液樣品可能通過膜孔困難，因此，當不存在這一步驟時，試驗會花費長得多的時間。此外，如果不包括這一步驟，則殘渣常常留在試驗表面，會幹涉特異性結合反應或檢測步驟。
即使當樣品已經過預過濾，這些初步過濾步驟在從唾液除去粘蛋白和顆粒物質上並不顯得完全有效，流過時間較長，常常獲得許多假性陽性結果。
然而，現在已表明，在本發明的試驗中，通過在樣品吸附到表面上後簡單地揩擦基質的表面，降低獲得的假性陽性結果的數量是可能的，這是完全意想不到的，因為人們一直認為，所有汙染物已由以前嘗試的過濾步驟除去，而現在看起來不是這樣。
因此，在特異性結合劑吸附在基質上的情況下，本發明的方法優選地包括揩擦基質的步驟，該步驟在樣品加入到基質上之後，在嘗試測定特異性結合複合物之前。所述揩擦步驟明顯縮短樣品的流過時間，並減少假性陽性結果的出現。
揩擦可以手工進行，也可以進行自動化操作。一般使用吸附性材料揩擦基質，合適的材料的例子是棉花絨和吸附性紙。
該揩擦步驟應進行得足夠強有力，以便從基質表面除去任何不結合到特異性結合分子上的物質。為了確保除去所有不需要的物質，可以向基質上的樣品中加入著色劑。為方便起見，著色劑可以包含在表面活性劑溶液中，但這不是必需的。表面活性劑溶液可以包含從約0.005％到0.05％(W/W)，優選地從約0.01％到0.02％的顆粒著色劑，但其它類型的著色劑可以以更大的量存在。
著色劑可以是對留在基質上的並且是對唾液試驗中發生的假性陽性結果的許多問題的原因的粘蛋白和其它汙染物有特異性的試劑。然而，提供作為著色劑的有色顆粒物質(如乳膠、瓊脂糖、聚苯乙烯或其它聚合物)常常是比較簡單的。當然，粒子應當大於基質孔徑，但也必須小於可以使用的任何預過濾濾器的孔徑。已經發現在許多情況下使用直徑為約3μm的粒子是合適的，因為如以上的討論，可以選擇具有比之更大的孔徑的用於任何起始純化步驟中的濾器。當較小的顆粒通過基質時，有色粒子與引進假性陽性問題的粘蛋白和顆粒雜質一起留在基質表面上。
這樣，當使用著色劑時，醫療工作者從基質表面揩擦著色劑，由此保證從基質除去所有表面碎片將是一件簡單的事情。
有助於消除假性陽性結果的進一步改進的方法是在基質上提供能夠與檢測試劑反應的對照試劑。對照試劑與特異性結合分子不處於同一位置，並且能夠特異性結合檢測試劑。因此，例如，如果檢測試劑是抗-人IgG，對照試劑將是人IgG。對照試劑的存在是監測本發明的方法可靠性的一種手段，因為如果不能檢測它的存在，則檢測方法顯然不能正常地起作用。
因此，本發明提供了一種簡單並有效的試驗唾液樣品的方法，即使唾液樣品是新鮮的也是如此。
表面活性劑溶液是本發明的一個重要部分，因為已經發現僅以上與本方法有關的討論中的表面活性劑在阻止試驗的假性陽性結果上是完全有效的。
因此，本發明的第二方面提供了一種用於本發明的方法的表面活性劑溶液，該溶液包含0.1％到1％(體積)的棕櫚酸和/或硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物；能夠保持溶液的pH值在6.8到7.8水平上的緩衝溶液；以及可有可無的水溶性鹽、蛋白質(如BSA)和顆粒著色劑。
優選的緩衝劑及鹽、BSA和著色劑的濃度如以上有關本發明第一方面的討論中討論的那些。
可以採用試劑盒完成本發明的方法，試劑盒本身構成本發明的另一方面。
本發明的這一方面提供了一種試劑盒，該試劑盒包含i)包含棕櫚酸和硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物；ii)固定在基質上，並且能夠與被分析物形成特異性結合複合物的特異性結合劑。
iii)檢測特異性結合複合物存在的檢測試劑。
本發明在檢測針對H.pylori的可能存在H.pylori感染病人唾液中的抗體上特別有用。如以上的討論，感染產生存在於唾液中的IgG同種型抗體對H.pylori來說並不常見。
因此，本發明的第四方面提供了一種檢測對H.pylori有特異性的試劑盒，該試劑盒包含i)包含棕櫚酸和硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的溶液；ii)固定在基質上的得自H.pylori的抗原；iii)能夠特異性結合人IgG的標記抗體溶液。
溶液的優選組分、優選基質和檢測試劑是本發明第一方面方法中描述的那些。
試劑盒也可以包括唾液收集裝置。也可以包括用於樣品初步過濾的粗濾器(如棉花或棉花絨墊)，需要時其可構成唾液收集裝置的一部分。此外，試劑盒可以包括除去樣品中顆粒物質的濾器。如以上有關第一方面的方法所討論的，濾器可以具有從約1到15μm，優選地從約3到8μm的有效孔徑。這可以用任何類型的濾器達到，但優選的類型是由塑料材料製造的具有約5到l0μm的典型實際孔徑的過濾器板。在這種類型的過濾器板中，有效孔徑較實際孔徑小，因為過濾器板相對較深，孔排列在外。
如果本發明的方法包括以上提到的揩擦步驟，則也可以包括能保留在基質表面上的著色劑。著色劑可以是能使粘蛋白和顆粒雜質著色的試劑，但優選地包括乳膠、瓊脂糖、聚苯乙烯或某些其它聚合物，其中應選擇粒子大小，以便在所進行的任何初步過濾步驟中粒子不被除去，但要大得不能通過基質的孔。
下面將參照以下實施例詳細描述本發明。實施例1製備表面活性劑溶液從下列成分製備表面活性劑溶液0.02M磷酸鈉溶液 100ml氯化鈉0.73g
牛血清白蛋白 0.1gTWEEN 60TM0.5g深藍色乳膠粒子(3.0μm直徑)0.1g室溫下混合。深藍色乳膠粒子從Polymer Laboratories，UK獲得。實施例2製備H.pylori來說的抗原按照WO-A-9322682實施例1中提出的方法製備H.Pylori來源的抗原。總的來說，製備和分級分離H.Pylori的粗超聲波處理物。除去440kDa蛋白質，留下含265和340kDa蛋白質的混合物。實施例3製備試驗裝置將1和5μl之間的實施例2的0.05％(W/W)抗原溶液加到基質上形成試驗區。基質是由作為引流材料的SchleicherSchuell色譜紙3469號(從AndermanCo，Kinston upon Thames，UK獲得)背層支撐的1.2μmSARTORIUSTM硝化纖維素膜。
將1到5μl的0.005％(W/W)純化的普通人IgG溶液(sigmaChemical Company Ltd，Poole，Dorset，UK)加到基質的明顯區別於試驗區的對照區上。實施例4製備顯示劑用含有0.05％(體積)表面活性劑(按商標Tween 20購得)和0.1％(重量)BSA的磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)稀釋結合到山羊抗-人IgG(重和輕鏈)上的膠態金(Biocell Research Laboratories，Cardiff，UK)至在520nm下1cm樣品池中的0.5光密度單位的吸收值，由此製備顯示劑。實施例5測定唾液樣品用以商標OmniSal(Saliva Diagnostic Systems，Vancouver，Wash-ington，USA)購得的收集裝置收集唾液(1ml)，在所述裝置中，樣品收集到也兼作粗濾器的墊上。然後，將含有樣品的收集裝置轉移到含有1.0ml實施例1溶液的管中。用Porex Ultrafine血清分離器過濾收集的唾液，分離器分離出約5μm物質，然後加入到實施例3製備的試驗裝置中。
在稀釋過的唾液樣品流過硝化纖維素膜至襯有背層的色譜紙後，藍色乳膠粒子在基質表面形成一層。用棉花絨穩而輕地揩擦至無藍色留下，由此除去以上所述的一層。
將0.5ml實施例4的顯示劑加入到試驗裝置中。使顯示劑流過硝化纖維素膜，然後取得試驗結果。
在對照區的單獨粉紅色斑點表明可靠的陰性試驗結果，而在試驗區和對照區都產生斑點的試驗表明陽性結果。
該試驗可以檢測低至0.8單位(以從0到10的等級計)的抗-H.pylori IgG，並且不給出假性陽性結果。
權利要求
1.一種檢測唾液樣品中被分析物存在的方法，該方法包括使所說的唾液樣品與能和被分析物形成特異性結合複合物的特異性結合劑接觸，並且檢測特異性結合複合物的存在，其特徵在於，首先使唾液樣品與包含棕櫚酸和/或硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的溶液接觸。
2.如權利要求1要求的方法，其中的唾液樣品包括新鮮唾液。
3.如權利要求1或2要求的方法，其中的表面活性劑是可以以商標Tween 40、Tween 60、Tween 61、Tween 65或Tween 80獲得的。
4.如權利要求1-3任一要求的方法，其中的表面活性劑以0.1％到1％(體積)的量存在。
5.如權利要求1-4任一要求的方法，其中的表面活性劑溶液被緩衝至PH約6.8到7.8。
6.如權利要求1-5任一要求的方法，其中的被分析物是抗體。
7.如權利要求6要求的方法，其中的被分析物是對H.pylori抗原有特異性的。
8.如權利要求7要求的方法，其中的抗體是IgG同種型的。
9.如權利要求1-8任一要求的方法，其中的特異性結合分子是抗原。
10.如權利要求9要求的方法，其中的抗原得自H.pylori。
11.如權利要求1-10任一要求的方法，其中的特異性結合分子固定在固體支持物(例如硝化纖維素膜或玻璃或聚合物固體支持物)上。
12.如權利要求11要求的方法，其中的固體支持物包括內襯吸附墊的硝化纖維素膜。
13.如權利要求1-12任一要求的方法，其中的特異性結合複合物用與報導分子結合的抗體檢測，所說抗體能夠特異性結合到特異性結合複合物上。
14.如權利要求13要求的方法，其中的被分析物是H.pylori特異性IgG同種型抗體，特異性結合複合物用能夠特異性結合到人IgG上的抗體檢測。
15.如權利要求13或14要求的方法，其中的報導分子是酶(例如，辣根過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶或鹼性磷酸酶)、螢光團(例如螢光素或羅丹明)、包含放射性核素的分子，或顏色試劑(例如膠態金或聚苯乙烯粒子)。
16.如權利要求1-15任一要求的方法，該方法進一步包括在嘗試檢測特異性結合複合物存在之前過濾樣品的步驟。
17.如權利要求16要求的方法，其中的濾器具有從約3到8μm的有效孔徑。
18.如權利要求1-17任一要求的方法，該方法進一步包括起始的粗過濾步驟。
19.如權利要求11-18任一要求的方法，該方法進一步包括在樣品添加到基質上之後和在嘗試檢測特異性結合複合物之前揩擦基質。
20.如權利要求19的方法，其中在揩擦步驟前將要保留在基質表面的著色劑添加到樣品中。
21.如權利要求20的方法，其中的著色劑包括著色顆粒，其直徑小於過濾步驟中使用的任何濾器的孔徑，但大於基質的孔徑。
22.如權利要求11到21任一要求的方法，其中有固定在基質上的對照試劑，該對照試劑可由相同的方法以特異性結合複合物檢測。
23.如權利要求22要求的方法，其中的對照試劑是人IgG。
24.一種適用於權利要求1-23在一要求的方法的表面活性劑溶液，該溶液包含O.1％到1％(體積)的棕櫚酸和/或硬脂酸聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物；能夠保持溶液的pH值在6.8至7.8水平上的緩衝液；可有可無的水溶性鹽、蛋白質(如BSA)和顆粒著色劑。
25.一種試劑盒，該試劑盒包括i.包含棕櫚酸和硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的表面活性劑溶液；ii.固定在基質上並且能夠與被分析物形成特異性結合複合物的特異性結合劑；和iii.檢測特異性結合複合物存在的檢測試劑。
26.一種檢測對H.pylori有特異性的IgG的試劑盒，該試劑盒包括i.包含棕櫚酸和硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的表面活性劑溶液；ii.固定在基質上的得自H.pylori的抗原；和iii.能夠特異性結合人IgG的標記抗體的溶液。
27.如權利要求25或26要求的試劑盒，其中的表面活性劑溶液是如權利要求24要求的溶液。
28.如權利要求25到27任一要求的試劑盒，其中的表面活性劑溶液還包括能夠保留在基質表面上的著色劑，例如著色顆粒。
29.如權利要求25到28任一要求的試劑盒，該試劑盒還包括以下的一種或多種唾液收集裝置；可以構成唾液收集裝置一部分的粗濾器，(如棉花或棉花絨墊)，和從樣品中除去顆粒物質的濾器。
全文摘要
本發明涉及檢測唾液樣品中被分析物的方法，該方法克服了已知的唾液試驗方法存在的問題。所述方法涉及包含棕櫚酸和/或硬脂酸的聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物的表面活性劑溶液的使用，對檢測特別易於給出假性陽性結果的新鮮唾液樣品非常有用。
文檔編號G01N33/53GK1144560SQ95192299
公開日1997年3月5日 申請日期1995年3月29日 優先權日1994年3月29日
發明者P·R·古德溫, C·J·史密斯 申請人:科特克斯有限公司