一類抑制C肝病毒的大環狀雜環化合物及其製備和用途的製作方法
2023-10-06 03:23:44 6
本發明具體涉及一種新型大環狀雜環化合物及其中間體、製備方法和用途。
背景技術：
C型肝炎病毒感染造成慢性肝病，如肝硬化和肝癌。C肝病毒感染是主要傳染病之一。根據世界衛生組織統計，全球有1.7億C型肝炎受害者，我國將近有3900萬C肝感染者。近年來，C型肝炎的的治療已取得了長足的進步，目前已批准上市了幾個產品，其中，sofosbuvir,harvoni(ledipasvir/sofosbuvir),viekiraxpak(ombitasvir/paritaprevirandritonavir/exviera)，對於hcv-genotype1b的療效優良。然而，對於其他hcvgenotype及其耐藥性病毒療效尚有待提高。所以有必要開發更具有效性與更好耐受性之C型肝炎病毒治療藥物。
至今的各項研究表明，C型肝炎病毒(hcv)是引起大多數非甲非B型肝炎的主要病原體。C型肝炎病毒是一種黃病毒科(f1aviviridae)正單鏈rna病毒，其基因組含有大約10000個核苷酸並編碼約3000個胺基酸之聚合蛋白。它包括一個核衣殼蛋白(c)和包膜蛋白(e1和e2)，和一些非結構蛋白(ns1,ns2,ns3,ns4a，ns5a和ns5b)。ns3蛋白分解酶具有絲氨酸蛋白酶活性，被認為是病毒複製和感染機制之必需要素。ns3蛋白分解酶之必需性可藉由變異黃熱病病毒ns3蛋白酶減少病毒感染之事實而推定。此外，hcvns3絲氨酸蛋白酶被發現有利於ns3/ns4a，ns4a/ns4b，ns4b/ns5a，ns5a/ns5b等接合處蛋白裂解，而負責在病毒複製過程中四個病毒蛋白之生成(參考us2003/0207861)。因此，hcvns3絲氨酸蛋白酶已成為治療C型肝炎病毒感染的最具吸引力的目標靶點。
技術實現要素：
本發明提供了一種與現有結構不同的以18-19元雜環為核心的新型大環狀雜環化合物，以及其中間體，製備方法和應用。本發明的大環狀雜環化合物對C型肝炎病毒具有較佳的抑制活性，可以有效用於治療C型肝炎病毒感染，並且具有較低的毒副作用。
根據本申請的一個方面，本申請提供了式a的化合物:
或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽或它們的混合物；
其中，
a-b為單鍵或碳碳雙鍵，當a-b為單鍵時，a選自碳、氧、硫或氮，b選自碳；
n＝0、1或2；
q選自c1-6烷基、c2-6烯基或c3-6環烷基；
l獨立地為一個氧、硫、c2-c20烯基、c1-c20烷基、c3-c20環烷基、c2-c20雜環基、c6-c20芳基、c3-c20雜環芳基、c1-c20烷硫基、c1-c20烷氧基、c3-c20環烷氧基、c2-c20雜環基氧基、c1-c20烷基氨基、c1-c20烷氧基一羰基、c6-c20芳基、或c6-c20芳氧基；
l1各自獨立地為氧、硫、c2-c20烯基、c1-c20烷基、c3-c20環烷基、c2-c20雜環基、c6-c20芳基、c3-c20雜環芳基、c1-c20烷硫基、c1-c20烷氧基、c3-c20環烷氧基、c2-c20雜環基氧基、c1-c20烷基氨基、c1-c20烷氧基羰基、c6-c20芳基、或c6-c20芳氧基；
x為氧、硫或氮；
y為氮或ch；
r1為氫、c1-c20烷基、c3-c20環烷基、c6-c20芳基、c3-c20雜環芳基、c1-c20烷基磺醯氨基、c2-c20雜環磺醯氨基、或c1-c20烷氧基羰基氨基；
r2為氫、c1-c20烷基、c3-c20環烷基、c1-c20烷氧基-羰基、c3-c20環烷氧基-羰基、c6-c20芳基、c3-c20雜環芳基、c6-c20芳氧基、c1-c20烷基磺醯基、c3-c20環烷基磺醯基、c1-c20烷氧基磺醯基、c3-c20環烷氧基磺醯基、c6-c20芳基磺醯基、c6-c20芳氧基磺醯基、c1-c20烷氨基磺醯基、c3-c20環烷氨基磺醯基、或c6-c20芳氨基磺醯基；
r3、r4各自獨立地為氫、c1-c20烷基、c3-c20環烷基、c1-c20烷氧基、滷素、羥基、氰基、硝基、c1-c20烷基氨基、c2-c20雜環氨基、c6-c20芳基、c6-c20芳基氨基、c1-c20烷基磺醯氨基、c2-c20雜環磺醯氨基、c6-c20芳基磺醯氨基或c1-c20烷基氨基磺醯氨基；其中，r3與r4之間可以相互連接成環狀結構；
r5和r6各自獨立地為氫、滷素、羥基、氰基、硝基、c1-c20烷基、c3-c20環烷基、c1-c20烷氧基、c1-c20烷基氨基、c2-c20雜環氨基、c6-c20芳基、c6-c20芳基氨基、c1-c20烷基磺醯氨基、c2-c20雜環磺醯氨基、c6-c20芳基磺醯氨基或c1-c20烷基氨基磺醯氨基；
r7、r8、r9和r10各自獨立地為氫、滷素、羥基、氰基、硝基、三氟甲烷基、c1-c20烷基、c1-c20烷氧基、c1-c20烷硫基、c1-c20烷氧基-羰基、氨基羰基、c1-c20烷基氨基羰基、羰基氨基、c1-c20烷基羰基氨基、c2-c20雜環基氧基羰基、c6-c20芳基、c6-c20芳氧基、c6-c20芳氧基羰基或c2-c20雜環基；其中，r7與r8、r8與r9、r9與r10之間可以相互連接成5-6元環狀結構，其任選被烷基取代；
j為氫、羥基、c1-c20烷基、c3-c20環烷基、c1-c20烷氧基、c3-c20環烷氧基、c1-c20烷基氨基、c3-c20環烷基氨基、c2-c20雜環氨基、c6-c20芳基、c6-c20芳氨基、c4-c20雜環芳氨基、rso2nh-、-so2nh2或-so2nhr，其中r選自任選取代的c1-c20烷基、c1-c20烷氧基、c3-c20環烷基、c6-c20芳基、雜芳基等c3-c20環烷氧基、c6-c20芳氧基、c1-c20烷氨基、c3-c20環烷氨基、c6-c20芳氨基、c1-c20脲基、c1-c20硫脲基、c1-c20磷酸酯、或c1-c20硼酸酯；如果r被取代，則取代基選自c1-c6烷基、c3-c6環烷基、c1-c6烷氧基。
上述各基團中的雜環含有1-3個選自氮、氧和硫的雜原子。
根據本申請的一些實施方式，在式a中，
r3、r4各自獨立地為氫、滷素、羥基、氰基、硝基、c1-c6烷基、c3-c6環烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷基氨基、c2-c6雜環氨基、c6-c10芳基、c6-c10芳基氨基、c1-c6烷基磺醯氨基、c2-c6雜環磺醯氨基、c6-c10芳基磺醯氨基或c1-c6烷基氨基磺醯氨基，其中所述雜環含有1-3個氮、氧或硫原子，或者，r3與r4相互連接成5-7個環原子的環狀結構；
r5和r6各自獨立地為氫、滷素、羥基、氰基、硝基、c1-c6烷基、c3-c6環烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷基氨基、c2-c6雜環氨基、c6-c10芳基、c6-c10芳基氨基、c1-c6烷基磺醯氨基、c2-c6雜環磺醯氨基、c6-c10芳基磺醯氨基或c1-c6烷基氨基磺醯氨基，其中所述雜環含有1-3個氮、氧或硫原子；
r7、r8、r9和r10中，r7與r8、r8與r9和/或r9與r10之間相互連接成含氧或氮的5-6元雜環，且該雜環任選地被c1-c6烷基取代；其餘未成環基團獨立地選自氫、滷素、羥基、氰基、硝基、三氟甲烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、c1-c6烷氧基-羰基、氨基羰基、c1-c6烷基氨基羰基、羰基氨基、c1-c6烷基羰基氨基、c2-c6雜環基氧基羰基、c6-c10芳基、c6-c10芳氧基、c6-c10芳氧基羰基或c2-c6雜環基，其中所述雜環含有1-3個氮、氧或硫原子；
j為氫、羥基、c1-c6烷基、c3-c6環烷基、c1-c6烷氧基、c3-c6環烷氧基、c1-c6烷基氨基、c3-c6環烷基氨基、c2-c6雜環氨基、c6-c10芳基、c6-c10芳氨基、c4-c10雜環芳氨基、rso2nh-、-so2nh2或-so2nhr，其中r選自任選取代的c1-c10烷基、c3-c6環烷基、c6-c10芳基、c1-c6烷氧基、c3-c6環烷氧基、c6-c10芳氧基、c1-c6烷氨基、c3-c6環烷氨基、c6-c10芳氨基、c1-c6脲基、c1-c6硫脲基、c1-c6磷酸酯基、或c1-c6硼酸酯基；
l為單鍵、氧、硫、c2-c6烯基、c1-c6烷基、c3-c6環烷基、c2-c6雜環基、c6-c10芳基、c3-c6雜環芳基、c1-c6烷硫基、c1-c6烷氧基、c3-c6環烷氧基、c2-c6雜環基氧基、c1-c6烷基氨基、c1-c6烷氧基羰基、c6-c10芳基、或c6-c10芳氧基；
l1選自氧、硫、c2-c6烯基、c1-c6烷基、c3-c6環烷基、c2-c6雜環基、c6-c10芳基、c3-c6雜環c6-c10芳基、c1-c6烷硫基、c1-c6烷氧基、c3-c6環烷氧基、c2-c6雜環基氧基、c1-c6烷基氨基、c1-c6烷氧基羰基、c6-c10芳基、或c6-c10芳氧基；
x為氧、硫或氮；
y為氮或ch；
r1為氫、c1-c6烷基、c3-c6環烷基、c6-c10芳基、c3-c6雜環芳基、c1-c6烷基磺醯氨基、c2-c6雜環磺醯氨基、或c1-c6烷氧基羰基氨基；
r2為氫、c1-c6烷基、c3-c6環烷基、c1-c6烷氧基-羰基、c3-c6環烷氧基-羰基、c6-c10芳基、c3-c60雜環c6-c10芳基、c6-c10芳氧基、c1-c6烷基磺醯基、c3-c6環烷基磺醯基、c1-c6烷氧基磺醯基、c3-c6環烷氧基磺醯基、c6-c10芳基磺醯基、c6-c10芳氧基磺醯基、c1-c6烷氨基磺醯基、c3-c6環烷氨基磺醯基、或c6-c10芳氨基磺醯基。
根據本申請的另一些實施方式，在式a中，
l為單鍵；
l1選自氧或硫；
x選自氧、硫或氮；
y選自氮或ch；
r1選自叔丁基；
r2選自氫；
r3和r4獨立地為甲基；
r5和r6獨立地為氫；
r7、r8、r9和r10中，r7與r8、r8與r9或r9與r10之間相互連接成含氧或氮的5-6元雜環(如含2個氧原子的五元環)，且該雜環任選地被c1-c6烷基取代(如不被取代或被甲基取代)；其餘未成環基團選自氫；和
j選自rso2nh-、-so2nh2或-so2nhr，其中r選自任選取代的c3-c6環烷基。
本發明的式a化合物包括式i或ii的大環狀多環化合物:
或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽或它們的混合物；式i和式ii中各基團的定義同式a中的定義。
根據本發明的第二方面，提供式v的多環化合物:
其中，
r7、r8,r9和r10各自獨立地為氫、滷素、羥基、氰基、硝基、三氟甲烷基、c1-c20烷基、c1-c20烷氧基、c1-c20烷硫基、c1-c20烷氧基-羰基、氨基羰基、c1-c20烷基一氨基羰基、羰基氨基、c1-c20烷基羰基氨基、c2-c20雜環基氧基羰基、c6-c20芳基、c6-c20芳氧基、c6-c20芳氧基羰基或c2-c20雜環基；其中，r7與r8和/或r8與r9或r8與r10之間可以相互連接成烷基取代的5-6元環狀結構；
本發明的第三方面，提供一種製備本發明所述的化合物v的方法，該方法包括:通過下列反應合成雜環化合物v:
採用原料sm-2和原料sm-2a通過縮合反應製得化合物va-f；其中，r7、r8、r9和r10的定義同權利要求1所述；
所述的製備化合物v的縮合反應是在惰性氣體保護下，在有機溶劑中進行，原料sm-2a的用量為sm-2摩爾量的1-2倍；反應溫度為50-100℃；
本發明中，最佳的，式v為如下任一結構：
本發明的第四方面，提供一種製備本發明的式a(式i)的大環狀多環化合物的方法，包括以下五個步驟:
1)在惰性氣體保護下，原料sm-3在無水有機溶劑中,在三苯基磷和偶氮二羧酸酯(如：偶氮二羧酸二乙酯或者偶氮二羧酸二異丙酯)的作用下與另一試劑v發生mitsunobu反應，生成化合物3-1；sm-3和化合物v及產物3-1中其它各基團(包括x、y、r5、r6、r7、r8、r9)的定義同權利要求1所述；r11的定義同權利要求5所述；
2)在惰性氣體保護下，將步驟1)中得到的化合物3-1脫去保護基r11後再在偶合試劑(如：hatu)的作用下與另一胺基酸衍生物試劑sm-4反應生成化合物3-2；sm-4及3-2中各基團(包括x、y、r1、r2、r5、r6、r7、r8、r9、r10)的定義同權利要求1所述；r11的定義同權利要求5所述；
3)在惰性氣體保護下，將步驟2)得到的化合物3-2脫去保護基r11後再在光氣或三光氣的作用下，與另一試劑sm-5反應形成化合物3-3；試劑sm-5及產物中各基團和參數(包括n、l、l1、x、y、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10)的定義同權利要求1所述；r10的定義同權利要求5所述；
4)在惰性氣體保護下，將步驟3)得到的化合物3-3在鈀催化劑的作用下，反應得到大環狀產物3-4；產物中各基團和參數(包括n、l、l1、x、y、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10)的定義同權利要求1所述；
5)在惰性氣體保護下，將步驟4)得到的化合物3-4經水解酸化後再與sm-6在偶合試劑(如：hatu)的作用下反應生成最終大環狀多環化合物i；sm-6及產物中各基團和參數(包括n、l、l1、x、y、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、j)的定義同權利要求1所述；
在步驟1)中，在惰性氣體保護下，將sm-3原料溶於有機溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃或甲苯)中，在三苯基磷和偶氮二羧酸酯(如：偶氮二羧酸二乙酯或者偶氮二羧酸二異丙酯)的作用下與另一試劑v發生mitsunobu反應，生成化合物3-1；所述反應溫度為0-40℃，所述的三苯基磷用量為原料sm-3摩爾量的1-2倍，所述的偶氮二羧酸酯用量為原料sm-3摩爾量的1-2倍；
在步驟2)中，在惰性氣體保護下將步驟1)得到的化合物3-1在強酸(如鹽酸、硫酸或三氟乙酸)的作用下，在溫度為10-50℃下反應脫去保護基r11(如boc)後生成胺中間體，再在偶合試劑(如：hatu)的作用下，在溫度0-80℃下在有機溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃或n,n-二甲基甲醯胺)中與試劑sm-4反應得到化合物3-2；所述的偶合試劑的用量為化合物3-1摩爾量的1-2.5倍。
在步驟3)中，在惰性氣體保護下將步驟2)得到的化合物3-2在強酸(如鹽酸、硫酸或三氟乙酸)的作用下，在溫度為10-50℃下反應脫去保護基r11後生成胺中間體，再在光氣或三光氣的作用下生成異氰酸酯中間體，繼而在溫度0-40℃下在有機溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃或甲苯)中與另一試劑sm-5反應形成化合物3-3；所述的三光氣的用量為化合物3-2摩爾量的1-2倍。
在步驟4)中，在惰性氣體保護下，將步驟3)得到的化合物3-3溶於無水有機溶劑(如1,4-二氧六環、四氫呋喃或甲苯)中，在鈀催化劑(如醋酸鈀或四三苯基膦鈀)、磷配體(如2-(二叔丁基磷)-1,1』-聯萘)及無機強鹼(如碳酸銫)的作用下，在溫度0-100℃下反應，得到大環狀產物3-4；鈀催化劑的用量為原料sm-1摩爾量的0.2-5％；磷配體的用量為原料sm-1摩爾量的0.3-10％；無機鹼的用量為原料sm-1摩爾量的1-3倍；
在步驟5)中，將步驟4)得到的化合物3-4在無機強鹼(如：氫氧化鋰或氫氧化鈉)的作用下，在溶劑(如水、甲醇、四氫呋喃或1,4-二氧六環)中，於10-60℃進行水解脫去保護基甲氧基後酸化生成羧酸，再在偶合試劑(如：hatu)的作用下，在有機溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃或n,n一二甲基甲醯胺)中，與sm-6通過醯胺化反應得到大環狀多環產物i；所述的偶合試劑的用量為化合物3-4摩爾量的1-2.5倍；醯胺化反應的溫度為0-80℃；
本發明的第五方面，提供一種製備本發明的式a(式ii)的大環狀多環化合物的方法，包括以下六個步驟:
1)在惰性氣體保護下，原料sm-3在無水有機溶劑中,在三苯基磷和偶氮二羧酸酯(如：偶氮二羧酸二乙酯或者偶氮二羧酸二異丙酯)的作用下與另一試劑v發生mitsunobu反應，生成化合物3-1；sm-3和化合物v及產物3-1中其它各基團(包括x、y、r5、r6、r7、r8、r9、r10)的定義同權利要求1所述；r11的定義同權利要求5所述；
2)在惰性氣體保護下，將步驟1)中得到的化合物3-1與乙烯三氟硼酸鉀在鈀催化劑(如pd(dppf)cl2)的作用下，通過suzuki反應得到化合物4-1；產物中各基團(包括x、y、r5、r6、r7、r8、r9、r10)的定義同權利要求1所述；r11的定義同權利要求5所述；
3)在惰性氣體保護下，將步驟2)中得到的化合物4-1脫去保護基r11後再在偶合試劑的作用下與另一胺基酸衍生物試劑sm-4反應生成化合物4-2；產物中各基團(包括x、y、r1、r2、r5、r6、r7、r8、r9、r10)的定義同權利要求1所述；r11的定義同權利要求5所述；
4)在惰性氣體保護下，將步驟3)得到的化合物4-2脫去保護基r11後再與另一試劑sm-7反應形成化合物4-3；試劑sm-7及產物中各基團和參數(包括n、l、l1、x、y、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10)的定義同權利要求1所述；r11的定義同權利要求5所述；
5)在惰性氣體保護下，將步驟4)得到的雙烯化合物4-3在釕催化劑(如:詹氏催化劑或grubbs催化劑等)的作用下，通過烯烴複分解環化反應得到大環狀產物4-4；產物中各基團和參數(包括n、l、l1、x、y、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10)的定義同權利要求1所述；
6)在惰性氣體保護下，將步驟5)得到的化合物4-4經水解酸化後再與sm-6在偶合試劑(如：hatu)的作用下反應生成最終大環狀化合物ii；sm-6及產物中各基團和參數(包括n、l、l1、x、y、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、j)的定義同權利要求1所述；
在步驟1)中，在惰性氣體保護下，將sm-3原料溶於有機溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃或甲苯)中，在三苯基磷和偶氮二羧酸酯(如：偶氮二羧酸二乙酯或者偶氮二羧酸二異丙酯)的作用下與另一試劑v發生mitsunobu反應，生成化合物3-1；所述反應溫度為0-40℃，所述的三苯基磷用量為原料sm-3摩爾量的1-2倍，所述的偶氮二羧酸酯用量為原料sm-3摩爾量的1-2倍；
在步驟2)中，在惰性氣體保護下，將步驟1)中得到的化合物3-1溶於有機溶劑(如乙醇、甲苯或四氫呋喃)中，與乙烯三氟硼酸鉀在鈀催化劑(如pd(dppf)cl2)及鹼(如三乙胺)的作用下，在溫度20-100℃下通過suzuki反應得到化合物4-1；所述的乙烯三氟硼酸鉀用量為原料sm-3摩爾量的1-4倍；所述的鈀催化劑用量為原料sm-3摩爾量的0.03-5％倍；所述的鹼用量為原料sm-3摩爾量的1-4倍。
在步驟3)中，在惰性氣體保護下將步驟2)得到的化合物4-1在強酸(如鹽酸、硫酸或三氟乙酸)的作用下，在溫度為10-50℃下反應脫去保護基r11(如boc)後生成胺中間體，再在偶合試劑(如：hatu)的作用下，在溫度0-80℃下在有機溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃或n,n-二甲基甲醯胺)中與試劑sm-4反應得到化合物4-2；所述的偶合試劑的用量為化合物4-1摩爾量的1-2.5倍。
在步驟4)中，在惰性氣體保護下將步驟3)得到的化合物4-2在強酸(如鹽酸、硫酸或三氟乙酸)的作用下，在溫度為10-50℃下反應脫去保護基r11後生成胺中間體，再在鹼(如三乙胺)的作用下，在有機溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃或甲苯)中，於10-30℃與另一試劑sm-7反應形成雙烯化合物4-3；所述的鹼的用量為化合物4-2摩爾量的1-5倍。
在步驟5)中，在惰性氣體保護下將步驟4)得到的雙烯化合物4-3溶於無水有機溶劑(如二氯甲烷、二氯乙烷或甲苯)中，在釕催化劑(如:詹氏催化劑或grubbs催化劑等)的作用下，在溫度0-100℃下反應，通過烯烴複分解環化反應，得到大環狀產物4-4；所述的釕催化劑用量為雙烯化合物4-3摩爾量的0.2-10％；所述的有機溶劑用量為雙烯化合物4-3重量比的15-40倍；
在步驟6)中，將步驟5)得到的化合物4-4在無機強鹼(如：氫氧化鋰或氫氧化鈉)的作用下，在溶劑(如水、甲醇、四氫呋喃或1,4-二氧六環)中，於10-60℃進行水解脫去保護基甲氧基後酸化生成羧酸，再在偶合試劑(如：hatu)的作用下，在有機溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃或n,n一二甲基甲醯胺)中，與sm-6通過醯胺化反應得到大環狀多環產物ii；所述的偶合試劑的用量為化合物3-4摩爾量的1-2.5倍；醯胺化反應的溫度為0-80℃；
本發明的第六方面，提供一種本發明所述化合物、其立體異構體、互變異構體、酯化或醯胺化的前體藥物、藥學上可接受的鹽、或其混合物的用途，它用於抑制hcv；或用於製備抑制hcv的藥物。
本發明的第七方面，提供一種藥物組合物，包含:一種或多種本發明所述的式a(如式i或ii)化合物、或其立體異構體、互變異構體、酯化或醯胺化的前體藥物、或其藥學上可接受的鹽，和藥學上可接受的賦形劑。
本發明的第八方面，提供一種組合物，包括:一種或多種下述藥物、和一種或多種本發明所述的式a(如式i或ii)化合物、或其立體異構體、互變異構體、酯化或醯胺化的前體藥物、或其藥學上可接受的鹽:(1)免疫調節劑；(2)C型肝炎病毒(hcv)蛋白酶抑制劑；(3)C型肝炎病毒(hcv)聚合酶抑制劑；(4)不屬於(2)-(3)之核苷和核苷衍生物；(5)B型肝炎病毒(hbv)抑制劑；(6)人類免疫缺損病毒(hiv)抑制劑；(7)抗癌藥物；(8)抗炎藥物；或(9)不屬於上述(1)-(8)之其它化合物。
本申請的藥物組合物包括但不限於口服劑型、胃腸外給藥劑型、外用劑型和直腸給藥劑型。在一些實施方式中，所述藥物組合物可以是口服的片劑、膠囊、丸劑、粉劑、緩釋製劑、溶液和懸浮液，用於胃腸外注射的無菌溶液、懸浮液或乳液。在其它實施方式中，所述藥物組合物為適合單次施予精確劑量的單位劑型。在其它實施方式中，所述化合物的量在約0.001mg/kg體重/天-約1000mg/kg體重/天的範圍內。在其它實施方式中，所述化合物的量的範圍為約0.5mg/kg體重/天-約50mg/kg體重/天。在一些實施方式中，所述化合物的量為約0.001g/天-約7g/天。在其它實施方式中，所述化合物的量為約0.002g/天-約6g/天。在其它實施方式中，所述化合物的量為約0.005g/天-約5g/天。在其它實施方式中，所述化合物的量為約0.01g/天-約5g/天。在其它實施方式中，所述化合物的量為約0.02g/天-約5g/天。在其它實施方式中，所述化合物的量為約0.05g/天-約2.5g/天。在其它實施方式中，所述化合物的量為約0.1g/天-約1g/天。在其它實施方式中，低於上述範圍下限的劑量水平可能已經是足夠的。在其它實施方式中，可能需要高於上述範圍上限的劑量水平。在一些實施方式中，以單劑量施用所述化合物，每天一次。在其它實施方式中，以多劑量施用所述化合物，每天不只一次。在一些實施方式中，每天施用兩次所述化合物。在其它實施方式中，每天施用三次所述化合物。在其它實施方式中，每天施用四次所述化合物。在其它實施方式中，每天施用四次以上的所述化合物。在一些實施方式中，所述藥物組合物施用於的個體為哺乳動物。在其它實施方式中，所述哺乳動物是人。在其它實施方式中，所述藥物組合物還包含至少一種治療劑(即製成一種劑型)。在一些實施方式中，所述藥物組合物和至少一種治療劑分別以獨立的劑型組合成組合產品，如套裝藥品(kitofpart)。
其中,所述的免疫調節劑包含幹擾素或幹擾素衍生物。其中所述的幹擾素可為聚乙二醇幹擾素。
所述的hiv抑制劑包含但不限於利託那韋藥物(ritonavir)。
所述的B型肝炎病毒(hbv)抑制劑包含但不限於:拉米夫定、替比夫定、阿德福韋、恩曲他濱、恩替卡韋、替諾福韋或克來夫定。
本發明的第九方面，提供上述任一藥物組合物在製備抑制C型肝炎病毒中的應用。
在不違背本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。
本發明所用試劑和原料均市售可得。
本發明的積極進步效果在於:
1)本發明的大環狀雜環化合物不僅對ns3C型肝炎病毒具有較佳的抑制活性，而且明顯優於其它不同類型己臨床試驗的大環狀化合物的抑制活性；
2)本發明深入研究了不同大環狀雜環化合物的結構與抑制C肝病毒活性的構效關係，並且發現了一些有效抑制C肝病毒的大環狀雜環化合物結構；
3)本發明優化了新型大環狀多環化合物及其不同類型多環小分子中間體的製備方法，較大程度地降低了製備成本，為新型大環狀多環C型肝炎病毒抑制劑藥物的產業化生產提供一條有效實用的新方法。
4)本發明的有些大環狀雜環化合物具有很低的毒副作用或基本無毒，從而有可能進一步成功研發一個高效無毒的抗C型肝炎病毒新藥。
接下來，對本發明涉及的化合物的製備方法做進一步的說明：
本發明不僅設計和合成了用於抑制C型肝炎病毒的新型大環狀多環化合物，還進一步通過對含多環官能團的大環狀化合物抑制C型肝炎病毒活性的研究，深入探究了不同結構的新型含多環官能團的大環狀化合物與抑制C型肝炎病毒活性的關係，進一步研發優化了有效用於治療C型肝炎病毒感染的新型大環狀多環化合物、及其製備方法。
本發明的關健創新點是首先合成出了新型多環化合物va-vi,併合成出通用關鍵中間體7及13，然後合成出了式i-ii大環狀化合物。
本發明合成新型含多環官能團的大環狀化合物過程中的化學試劑和溶劑的英文縮寫注釋全部匯總列在實施例中儀器及原料說明部分。
下列反應路線1中，分別採用原料sm-2或sm-2』和原料sm-2a在有機溶劑(如：甲醇、乙醇、n,n-二甲基甲醯胺等)中進行反應，在加熱條件下(50-100℃)通過縮合反應分別製得化合物va-vf；
反應路線1:中間體va、vb、vc、vd、ve、vf的合成
反應路線2:中間體vg、vh、vi的合成
從上述反應1及2所示的方法得到本發明中關鍵的新型多環化合物va-vf，vg-vi後，為了從不同角度進行結構性能優化創新，本發明設計了下列的合成路線製備了關鍵中間體7(反應路線3)及13(反應路線4)。接著利用共用中間體7或13為原料，合成了一系列最終產品lw100201-lw100224(即i)及lw100225-lw100226(即ii)。具體每一步反應實驗以及詳細條件和產品分析結果分別列於實施例中。
反應路線3：
上述合成反應路線3中，首先將sm-3原料溶於無水有機溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃或甲苯)中，在三苯基磷和偶氮二羧酸酯的作用下，分別與另一試劑va-vf發生mitsunobu反應，生成化合物4；然後用鹽酸脫除boc保護基生成胺中間體,再在偶合試劑hatu的作用下與另一保護的胺基酸衍生物sm-4生成化合物5；5用鹽酸脫除boc保護基生成胺中間體,再在光氣或三光氣的作用下生成異氰酸酯中間體，繼而與新戊二醇反應形成化合物6；6在無水有機溶劑中，在鈀催化劑的作用下，反應得到大環狀關鍵中間體7；產物7在氫氧化鋰的作用下水解生成羧酸8；最後8與另一氨基甲酸酯原料sm-6在偶合試劑hatu的作用下通過醯胺化反應生成最終的大環狀多環化合物lw100201-lw100224(即i)。
以下結構式系列1為本發明通過反應路線2合成的關鍵中間體化合物6a-6f、7a-7f及8a-8f的具體例子，它們具有結構式1如下：
結構式1：
反應路線4：
上述反應路線3中，首先將化合物4(反應路線3中得到)與乙烯三氟硼酸鉀在鈀催化劑(如：pd(dppf)cl2)的作用下，通過suzuki反應得到化合物10；然後用鹽酸脫除boc保護基生成胺中間體,再在偶合試劑hatu的作用下與另一保護的胺基酸衍生物sm-4生成化合物11；11用鹽酸脫除boc保護基生成胺中間體,再在鹼(如三乙胺)的作用下，與醯氯sm-7反應形成化合物12；12在無水有機溶劑(如二氯甲烷、二氯乙烷或甲苯)中，在釕催化劑(如:0.2-10％mol的詹氏催化劑或grubbs催化劑等)的作用下，通過烯烴複分解環化反應(rcm:ringclosingmetathesis,0-100℃)，得到反式環烯烴大環狀產物13；13在氫氧化鋰的作用下水解生成羧酸中間體；最後羧酸中間體與另一氨基甲酸酯原料sm-6在偶合試劑hatu的作用下通過醯胺化反應生成最終的大環狀多環化合物lw100225-lw100226(即ii)。
上述合成反應路線4中二終端含雙烯的中間體化合物12的烯烴環化反應所用的詹氏催化劑(zhancatalyst-1&1b)結構如下列結構式系列2所示:
結構式系列2：
以下結構式系列3為本發明通過反應路線3合成的關鍵中間體化合物12a及13a的具體例子，它們具有結構式如下：
結構式系列3：
在上述反應路線2-3中，所需原料胺基酸衍生物sm-6最佳選自下列結構式系列4所示的結構(sm-6a、sm-6b和sm-6c):
總之，經上述反應路線2和3中的多步反應，合成了各種含不同新型功能團的雜環中間體va-vi和最終大環狀化合物i-ii，表1為本發明合成的新型大環狀最終化合物i-ii的具體例子,它們具有結構式lw100201-lw100224(i)以及lw100225-lw100226(ii)：
表1.新型抗hcv抑制劑
發明詳述
本文所用的章節標題僅用於組織文章的目的，而不應被解釋為對所述主題的限制。本申請中引用的所有文獻或文獻部分包括但不限於專利、專利申請、文章、書籍、操作手冊和論文，均通過引用方式整體併入本文。
化學術語
除非另有定義，否則本文所有科技術語具有的涵義與權利要求主題所屬領域技術人員通常理解的涵義相同。除非另有說明，本文全文引用的所有專利、專利申請、公開材料通過引用方式整體併入本文。如果本文對術語有多個定義，以本章的定義為準。
應理解，上述簡述和下文的詳述為示例性且僅用於解釋，而不對本申請主題作任何限制。在本申請中，除非另有具體說明，否則使用單數時也包括複數。還應注意，除非另有說明，否則所用「或」、「或者」表示「和/或」。此外，所用術語「包括」以及其它形式，例如「包含」、「含」和「含有」並非限制性。
可在參考文獻(包括careyandsundberg"advancedorganicchemistry4thed."vols.a(2000)andb(2001),plenumpress,newyork)中找到對標準化學術語的定義。除非另有說明，否則採用本領域技術範圍內的常規方法，如質譜、nmr、ir和uv/vis光譜法和藥理學方法。除非提出具體定義，否則本文在分析化學、有機合成化學以及藥物和藥物化學的有關描述中採用的術語是本領域已知的。可在化學合成、化學分析、藥物製備、製劑和遞送，以及對患者的治療中使用標準技術。例如，可利用廠商對試劑盒的使用說明，或者按照本領域公知的方式或本申請的說明來實施反應和進行純化。通常可根據本說明書中引用和討論的多個概要性和較具體的文獻中的描述，按照本領域熟知的常規方法實施上述技術和方法。在本說明書中，可由本領域技術人員選擇基團及其取代基以提供穩定的結構部分和化合物。
當通過從左向右書寫的常規化學式描述取代基時，該取代基也同樣包括從右向左書寫結構式時所得到的在化學上等同的取代基。舉例而言，ch2o等同於och2。
除非另有說明，否則所用的通用化學術語，例如但不限於，「烷基」、「胺」、「芳基」等同於其任選取代的形式。例如，本文所用的「烷基」包括任選取代的烷基。
術語「任選/任意」或「任選地/任意地」是指隨後描述的事件或情況可能發生或可能不發生，該描述包括發生所述事件或情況和不發生所述事件或情況。例如，根據下文的定義，「任選取代的烷基」是指「未取代的烷基」(未被取代基取代的烷基)或「取代的烷基」(被取代基取代的烷基)。
本文所用c1-cn包括c1-c2、c1-c3、……c1-cn。舉例而言，所述「c1-c4」基團是指該部分中具有1-4個碳原子，即基團包含1個碳原子，2個碳原子、3個碳原子或4個碳原子。因此，舉例而言「c1-c4烷基」是指在有1-4個碳原子的烷基，即所述烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。本文中的數字範圍，例如「1-10」是指給定範圍中的各個整數，例如「1-10個碳原子」是指該基團可具有1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子、4個碳原子、5個碳原子、6個碳原子、7個碳原子、8個碳原子、9個碳原子或10個碳原子。
本文單獨或組合使用的術語「烷基」是指任選取代的直鏈或任選取代的支鏈的飽和脂肪族烴類。本文的「烷基」優選可具有1-約20個碳原子，例如具有1-約10個碳原子，具有1-約8個碳原子，或1-約6個碳原子，或1-約4個碳原子或1-約3個碳原子。本文的烷基實施例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、2-甲基-l-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-l-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-l-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-l-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基、叔戊基和己基，以及更長的烷基基團，如庚基和辛基等。本文定義的基團，如「烷基」出現數字範圍時，例如「c1-c6烷基」或「c1-6烷基」是指可由1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子、4個碳原子、5個碳原子或6個碳原子構成的烷基，本文的烷基也包含未指定數字範圍的情況。
本文組合使用的「烷基」是指與其他基團連結的烷基，例如烷氧基中的烷基、烷硫基中的烷基、羥基烷基、滷代烷基、氰代烷基、單烷基氨基、二烷基氨基中的「烷基」等。
本文單獨或組合使用的術語「烷氧基」是指烷基醚基(o-烷基)，烷氧基的非限定性實施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基等。
本文單獨或組合使用的術語「烯基」是指任選取代的直鏈或任選取代的支鏈的一價烴基，其具有至少一個c＝c雙鍵。所述烯基具有但不限於2-約18個碳原子，例如，具有2-約10個碳原子，或具有2-約8個碳原子，2-約6個碳原子，2-約4個碳原子。這些基團中的雙鍵可以為順式或反式構象，並應被理解為包含所述兩種異構體。實施例包括但不限於乙烯基(ch＝ch2)、1-丙烯基(ch2ch＝ch2)、異丙烯基(c(ch3)＝ch2)、丁烯基和1,3-丁二烯基等。本文定義的烯基出現數字範圍時，例如「c2-c6烯基」或「c2-6烯基」是指可由2個碳原子、3個碳原子、4個碳原子、5個碳原子或6個碳原子構成的烯基，本文的烯基也涵蓋未指定數字範圍的情況。
本文單獨或組合使用的術語「炔基」是指任選取代的直鏈或支鏈的一價烴基，其具有至少一個c≡c三鍵。所述炔基具有但不限於2-約18個碳原子，例如其具有2-約10個碳原子，或具有2-約8個碳原子，或2-約6個碳原子，或2-約4個碳原子。本文的炔基實施例包括但不限於乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基和1,3-丁二炔基等。本文定義的炔基出現數字範圍時，例如「c2-c6炔基」或「c2-6炔基」是指可由2個碳原子、3個碳原子、4個碳原子、5個碳原子或6個碳原子構成的炔基基團，本文的炔基也涵蓋未指定數字範圍的情況。
本文單獨或組合使用的術語「滷代」或「滷素取代」是指任選被取代的基團(如烷基、烯基和炔基)的其中至少一個氫原子被替換成滷素(如氟、氯、溴、碘或其組合)。在一些實施方式中，使用彼此相同的滷素替換兩個或多個氫(例如二氟甲基、三氟甲基)；在其它實施方式中使用彼此並不完全相同的滷素替換兩個或多個氫(例如1-氯-1-氟-1-碘乙基)。滷代烷基的非限定性實施例為氟甲基和溴乙基。滷代烯基的非限定性實施例為溴乙烯基。滷代炔基的非限定性實施例為氯乙炔基。
本文單獨或組合使用的術語「芳香基/芳基」是指任選取代的芳香烴基，其具有6-約20個，如6-12個或6-10個成環碳原子，其可以是單環芳基、雙環芳基或更多環芳基。雙環芳基或更多環芳基可以是一個單環芳基與其它獨立環，如脂環、雜環、芳環、芳雜環相稠合。單環芳基的非限定性實施例包括6至約12個、6至約10個或6至約8個成環碳原子的單環芳基，例如苯基；雙環芳基例如為萘基；多環芳基例如為菲基、蒽基、薁基。
本文單獨或組合使用的術語「雜環芳基或雜芳基」是指任意取代的雜芳基，其包含約5至約20個，如5至12個或5至10個骨架成環原子，其中至少一個(如1-4個、1-3個、1-2個)成環原子為雜原子，所述雜原子獨立地選自氧、氮、硫、磷、矽、硒和錫中的雜原子，但不限於此。所述基團的環不包含兩個相鄰的o或s原子。雜芳基包括單環雜芳基(具有一個環)、雙環雜芳基(具有兩個環)或多環雜芳基(具有兩個以上的環)。在環中出現兩個或更多雜原子的實施方式中，所述兩個或更多雜原子可彼此相同，或者所述兩個或更多雜原子中的一些或全部彼此不同。雙環雜芳基或更多環雜芳基可以是一個單環雜芳基與其它獨立環，如脂環、雜環、芳環、芳雜環相稠合(可統稱為稠合環雜芳基)。單環雜芳基的非限定性實施例包括5至約12個、5至約10個、5至約7個或6個骨架成環原子的單環雜芳基，例如其非限定性實施例包括吡啶基；稠合環雜芳基包括苯並咪唑基(benzimidazolyl)、喹啉基(quinolinyl)、吖啶基(acridinyl)。雜芳基的其它實施例包括但不限於：吡啶、嘧啶、吡嗪、噠嗪、三嗪、呋喃、噻吩、咪唑、三唑、四唑、噻唑、異噻唑、1,2,4-噻二唑、吡咯、吡唑、噁唑、異噁唑、噁二唑、苯並呋喃、苯並噻吩、苯並噻唑、吲哚、吲唑、喹啉、異喹啉、嘌呤、咔唑、苯並咪唑、吡咯並吡啶、吡咯並嘧啶、吡唑並吡啶、吡唑並嘧啶等。吖啶基、吩嗪基、苯並噁唑基、苯並噻二唑基、苯並噁二唑基、苯並三唑基、異喹啉基、氮茚基(indolizinyl)、異噻唑基(isothiazolyl)、異氮雜茚基(isoindolyl)、噁二唑基(oxadiazolyl)、嘌呤基(purinyl)、酞嗪基(phthalazinyl)、蝶啶基(pteridinyl)、喹唑啉基(quinazolinyl)、喹噁啉基(quinoxalinyl)、三嗪基(triazinyl)和噻二唑基(thiadiazolyl)等，及其氧化物，例如吡啶基-n-氧化物(pyridyl-n-oxide)等。
本文單獨或組合使用的術語「雜環」或「雜環基」是指非芳香雜環，其包括飽和雜環或不飽和雜環(含不飽和鍵)。其中一個或者多個(如1-4個、1-3個、1-2個)成環的原子是雜原子，如氧、氮或硫原子。雜環可以包括單雜環(具有一個環)或雙雜環(具有兩個橋合的環)或多雜環(具有兩個以上橋合的環)；也包括螺環。雜環基可具有3至約20個，如3-約10個、3-約8個、4-8個、4-7個、5-約8個或5-約6個成環原子。雜環基的非限制性實施例包括吖嗪基(azinyl)、氮雜環丁烷基(azetidinyl)、氧雜環丁基(oxetanyl)、硫雜環丁基(thietanyl)、高哌啶基(homopiperidinyl)、oxepanyl、thiepanyl、oxazepinyl、diazepinyl、thiazepinyl、1,2,3,6-四氫吡啶基(1,2,3,6-tetrahydropyridinyl)、2-吡咯啉基(2-pyrrolinyl)、3-吡咯啉基(3-pyrrolinyl)、吲哚啉基(indolinyl)、2h-吡喃基(2h-pyranyl)、4h-吡喃基(4h-pyranyl)、二氧雜環己基(dioxanyl)、1,3-二氧戊環基(1,3-dioxolanyl)、吡唑啉基(pyrazolinyl)、二硫環己基(dithianyl)、二硫環戊基(dithiolanyl)、二氫吡喃基(dihydropyranyl)、二氫噻吩基(dihydrothienyl)、二氫呋喃基(dihydrofuranyl)、吡唑烷基(pyrazolidinyl)、咪唑啉基(imidazolinyl)、咪唑啶基(imidazolidinyl)、3-氮雜雙環[3.1.0]己基(3-azabicyclo[3.1.0]hexyl)、3-氮雜雙環[4.1.0]庚基(3-azabicyclo[4.1.0]heptyl)、3h-吲哚基(3h-indolyl)和喹啉基(quinolizinyl)等。該術語還包括糖類的所有環狀形式，包括但不限於單糖、二糖和寡糖。實施例還包括但不限於，氮丙啶、四氫呋喃、四氫噻吩、吡咯烷、噁唑烷、噻唑烷、咪唑烷、異噁唑烷、異噻唑烷、吡唑烷、嗎啉、硫代嗎啉、哌嗪、哌啶基等。雜環基還包括具有一個或多個芳香環稠合(即有一個共同的鍵)的雜環，例如2,3-二氫苯並呋喃、1,3-苯並二氧戊環、苯並-1,4-二噁烷、苯二甲醯亞胺，萘二甲醯亞胺。具有一個或多個芳香稠合的雜環基可以通過芳香環或非芳香環部分與其它基團相連接。其它基團可通過雜原子或碳原子與雜環結合(即雜環與母體分子連接或進一步取代)。
本文單獨或組合使用的術語環烷基可以是單環環烷基，也可以是雙環環烷基，環之間可以是橋合或螺環。環烷基可以具有3至20個碳原子，例如具有3-約15個成環碳原子或3-約10個成環碳原子或3-6個成環碳原子。實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、金剛烷基等。
烷氧基可表示為「烷基-o-」；環烷氧基可表示為「環烷基-o-」；芳氧基可表示為「芳基-o-」；烷氨基可表示為「烷基-n-」；環烷氨基可表示為「環烷基-n-」；芳氨基可表示為「芳基-n-」，其中的烷基、環烷基和芳基的定義同上。
「滷素」是指氟，氯，溴，碘。首選是氟，氯和溴。氰基是指「-cn」；羥基是指「-oh」；巰基是指「-sh」；氨基是指「-nh2」。
磺醯氨基是指「rso2nh-」和氨基磺醯基是指「-so2nh2」或"-so2nhr"，其中r可以是烷基、烷氧基、環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、芳氧基、烷氨基、環烷氨基、芳氨基、脲基、硫脲基、磷酸酯、或硼酸酯，這些基團的定義同上。可以理解，烷基磺醯氨基是指磺醯氨基表示的結構式中r為烷基的情況，烷氧基磺醯氨基是指磺醯氨基表示的結構式中r為烷氧基的情況，以此類推。
術語「被取代的」意思是在一個特定的原子上一個或更多的氫被指定的基團所替代，如果指定的原子的正常化合價在現有的情況下沒有超出，那麼取代後結果是一個穩定的化合物。
藥學術語
某些藥學術語本文所用的有關術語「受試者」、「患者」或「個體」是指患有疾病、病症或病況等的個體，包括哺乳動物和非哺乳動物。哺乳動物的實施例包括但不限於哺乳動物綱的任何成員：人，非人的靈長類動物(例如黑猩猩和其它猿類和猴)；家畜，例如牛、馬、綿羊、山羊、豬；家養動物，例如兔、狗和貓；實驗室動物，包括嚙齒類動物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等。非人哺乳動物的實施例包括但不限於鳥類和魚類等。在本文提供的一個有關方法和組合物的實施方式中，所述哺乳動物為人。
本文所用的術語「治療」和其它類似的同義詞包括緩解、減輕或改善疾病或病症症狀，預防其它症狀，改善或預防導致症狀的潛在代謝原因，抑制疾病或病症，例如阻止疾病或病症的發展，緩解疾病或病症，使疾病或病症好轉，緩解由疾病或病症導致的症狀，或者中止疾病或病症的症狀，此外，該術語包含預防的目的。該術語還包括獲得治療效果和/或預防效果。所述治療效果是指治癒或改善所治療的潛在疾病。此外，對與潛在疾病相關的一種或多種生理症狀的治癒或改善也是治療效果，例如儘管患者可能仍然受到潛在疾病的影響，但觀察到患者情況改善。就預防效果而言，可向具有患特定疾病風險的患者施用所述組合物，或者即便尚未做出疾病診斷，但向出現該疾病的一個或多個生理症狀的患者施用所述組合物。
本文所使用術語「有效量」、「治療有效量」或「藥學有效量」是指服用後足以在某種程度上緩解所治療的疾病或病症的一個或多個症狀的至少一種藥劑或化合物的量。其結果可以為跡象、症狀或病因的消減和/或緩解，或生物系統的任何其它所需變化。例如，用於治療的「有效量」是在臨床上提供顯著的病症緩解效果所需的包含本文公開化合物的組合物的量。可使用諸如劑量遞增試驗的技術測定適合於任意個體病例中的有效量。
本文所用術語「服用」、「施用」、「給藥」等是指能夠將化合物或組合物遞送到進行生物作用的所需位點的方法。這些方法包括但不限於口服途徑、經十二指腸途徑、胃腸外注射(包括靜脈內、皮下、腹膜內、肌內、動脈內注射或輸注)、外用和經直腸給藥。本領域技術人員熟知可用於本文所述化合物和方法的施用技術，例如在goodmanandgilman,thepharmacologicalbasisoftherapeutics,currented.；pergamon；andremington's,pharmaceuticalsciences(currentedition),mackpublishingco.,easton,pa中討論的那些。在優選的實施方式中，本文討論的化合物和組合物通過口服施用。
本文針對製劑、組合物或成分所用術語「可接受的」是指對接受治療的受試者的一般健康情況沒有長期的有害影響。
本文所用術語「藥學上可接受的」是指不影響本申請化合物的生物活性或性質的物質(如載體或稀釋劑)，並且相對無毒，即該物質可施用於個體而不造成不良的生物反應或以不良方式與組合物中包含的任意組分相互作用。
本文所用術語「載體」是指相對無毒的化學化合物或試劑，其有助於將化合物引入到細胞或組織中。
本文所用術語「藥學上可接受的鹽」是指保留了指定化合物的游離酸和游離鹼的生物效力，並且在生物學或其它方面上沒有不良作用的鹽。本申請化合物還包括藥學上可以接受的鹽。藥學上可接受的鹽是指把母體化合物中的鹼基基團轉換成鹽的形式。藥學上可接受的鹽包括，但不僅限於，鹼基基團例如胺(氨)基的無機或有機酸鹽類。本申請藥學上可接受的鹽可以由母體化合物合成，即母體化合物中的鹼性基團與1-4當量的酸在一個溶劑系統中反應。合適的鹽列舉在remingtong’spharmaceuticalscicences,17thed.,mackpublishingcompany,easton,pa.,1985,p.1418和journalofpharmaceuticalscience,66,2(1977)中。
除特別指示外，本申請中的鹽指用有機酸/無機酸形成的酸式鹽，以及用有機鹼/無機鹼形成的鹼式鹽。另外，當式i化合物的鹼性官能團是吡啶或咪唑(但不限制於吡啶或咪唑)，酸性官能團是羧酸(但不限制於羧酸)時就會形成兩性離子(內鹽)，內鹽也包括在本申請中的鹽內。
本文使用的「立體異構體」是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產生的異構體。式i化合物含有不對稱或手性中心，因此，存在不同的立體異構形式。分子式i的所有立體結構和混合物一樣，包括外消旋混合物，作為目前申請的一部分。非對映體混合物能夠分離成單獨的非對映體，基於它們不同的物理化學性質，採用眾所周知的手段，例如，對映異構體的拆分可通過與適當的光學活性物質(例如手性醇或mosher`s莫氏醯氯)反應轉換為非對映異構體，將其分離並轉化(如水解)為相對應的單一的異構體。式1中的一些化合物可能是阻轉異構體(如取代芳基)也是本申請中的一部分。對映異構體也可利用手性色譜柱分離。式i中的化合物可能存在著不同的互變異構形式，這些形式都包含在本申請範圍內。例如，酮-烯醇和亞胺-烯胺形式的化合物。
本文所述的「抑制hcv(hepatitiscvirus,C型肝炎病毒)」是指直接作用於C肝病毒複製的各個靶點，如ns3/4a蛋白酶、ns5a蛋白酶、ns5b聚合酶等，其包括阻止C肝病毒的複製，抑制相關蛋白的功能，對病毒的殺滅等。
具體實施方式：
本發明所涉及的原料和試劑(包括參照化合物abt-450)除特殊說明外均可市售或訂製加工購買得到。
本發明中之化合物可含有一非芳香族雙鍵及一個或多個不對稱中心。因此，該系列化合物可為消旋和外消旋混合物，單一對映體，互變異構體，順或反式異構體形式。本發明所製備的化合物(通式i-ii)是純度高於98％的手性大環狀多環化合物，產物中天然的胺基酸和非天然的胺基酸光學純度分別通過旋光度和手性色譜柱測定，每個最終產物的結構表徵分別由lc-ms或/和氫譜核磁共振(1hnmr)分析確定。
由於hcv在體外普通肝細胞中自主複製水平極低，且其唯一的可感染動物為黑猩猩，故目前抗C型肝炎病毒藥物的臨床前藥效研究沒有合適的動物試驗模型，有人研究將體外感染hcv的人肝組織移植入免疫缺陷小鼠建立在體小鼠模型，但飼養這種小鼠存在技術難度，模型不穩定，而且缺乏正常的免疫反應，與C型肝炎的發病過程差異太大，故未被用於評價C肝藥效研究的動物模型。1999年之前沒有有效繁殖複製hcv的細胞培養系統，無法弄清hcv的致病機制和病毒生活周期，使得抗病毒藥物的研究進展緩慢。研究者們進行了大量的嘗試，直到1999年才克服困難有了突破性的進展，建立了一個有效的細胞培養模型-複製子(replicon)系統，這個系統的基礎是使用基因工程構建的亞基因組的hcvrna，在轉染的人肝癌細胞系huh-7細胞中可以自主複製。
採用本行業內己經接受的上述有效的細胞培養模型-複製子(replicon)系統，進行了離體實驗，根據實驗結果對藥物進行評價，其中對C型肝炎病毒靶點hcvns3/4a絲氨酸蛋白酶抑制劑主要的離體實驗結果數據包括:
化合物對C肝病毒複製子(replicon)的抑制作用(ec50)。
至今國外臨床前和臨床試驗結果研究表明，這樣的離體試驗結果與相關體內活性試驗結果具有一致性。
本發明所製備的化合物可藉由下列臨床前體外抑制活性測試實驗初步測定篩選其對C型肝炎病毒感染的療效，然後藉由臨床試驗進一步加以確認。其他方法對本領域中具一般技術之人員而言亦是顯而易見的。
本發明化合物、或其立體異構體、互變異構體、酯化或醯胺化的前體藥物、或其藥學上可接受的鹽及其混合物，經實驗測定，均對C型肝炎病毒感染有較好的療效，具有明顯的抑制C型肝炎病毒的效果，化合物對C肝病毒複製子(replicon)的抑制作用(ec50)測試結果列於下表2(tmc432為參比化合物)；其中，活性範圍(ec50)在100-1000nm標示為「a」，活性範圍在100-10nm標示為「b」，活性範圍≤10nm標示為「c」。
表2:部分本發明的化合物抑制C型肝炎病毒的活性測試結果
測試方法：
hcv蛋白酶(hcvns3/4a)抑制活性測試方法:
hcv蛋白酶(hcvns3/4a)的抑制活性是藉由一內部猝滅螢光系統來測定。edans和dabcyl基團被連接於一肽的相反兩端。在蛋白裂解時，dabcyl對edans螢光猝滅被加以測量。亦即採用hcvns3-4a蛋白酶抑制劑高通量篩選模型，受試藥分別設5個濃度稀釋度，同時設陽性對照和陰性對照。在優化的反應體系內，用polarstar螢光檢測儀在ex＝355,em＝520條件下，測定螢光值。計算每個濃度的抑制率，用reed-muench方法計算樣品對蛋白酶的半數抑制濃度(ic50)。
材料：hcv蛋白酶:hcvns3-4a自行製備，-70℃保存。hcv蛋白酶底物(fret-s):ac-asp-glu-asp(edans)-glu-glu-abu-ψ-[coo]-ala-ser-lys-(dabcyl)-nh2購自美國anaspec公司，用dmso配成100μm，分裝後-20℃避光保存。反應緩衝液:30mmnacl，5mmcac12,10mmdtt，50mmtris(ph7.8)。儀器:polarstar螢光檢測儀為德國bmg公司產品。
製備與操作：先用dmso配成10mg/ml後，用緩衝液稀釋成10000、2000、400、80、16ng/ml的受試濃度，加入20μl/孔，總反應體系為200μl，使終濃度為1000、200、40、8、1.6ng/ml。於96孔螢光酶標反應板中分別加入緩衝液140μl、藥液20μl,hcv蛋白酶20μl，最後加入終濃度為o.25μm的fret-s底物20μl後在37℃開始反應，並設蛋白酶和底物反應對照孔以及單獨底物及蛋白酶對照孔，螢光檢測儀測定螢光信號(ex＝355,em＝520)。各樣品孔的螢光值與酶對照螢光值比較計算各濃度樣品的抑制率，採用reed一muench法計算樣品對hcv蛋白酶的半數抑制濃度(ic50)。
C肝病毒複製子(replicon)系統抗病毒實驗:
用新構建的雙報告基因replicon系統完成，感染細胞中病毒複製水平是通過報告基因海腎螢光素酶(renillaluciferase)檢測實現的。報告基因的表達水平與hcv的rna複製水平及病毒蛋白表達水平裡很好的線性關係。8個2倍稀釋的濃度梯度，3個復孔，3次重複，設1到2種陽性藥物對照。最終計算化合物的ec50。
化合物毒性篩選試驗
為了測試本發明的上述化合物的毒性，本發明採用18-22g健康小鼠，均採用單一劑量10000mg/kg，1次灌服給藥，在連續7天內觀察實驗動物所產生的毒性反應來評估受試物對機體的毒性大小，進行急性毒性(acutetoxocitystudy,mtd)考察，結果表明該類化合物的總體毒性很小(ld50>10000),小鼠給藥後存活率為80％-100％,其中有三分之一小鼠灌服劑量10000mg/kg的新化合物後存活率為100％。為此，本發明化合物經實驗測定，不僅對C型肝炎病毒感染有較好的療效，具有明顯的抑制C型肝炎病毒的效果，而且有三分之一活性較高的新化合物總體毒性非常低(小鼠存活率為100％,ld50>15000)，一般認定為無毒。
以下通過實施例說明本發明各類化合物和中間體的合成和效果。
實施例中涉及到的儀器及原料說明如下:
核磁共振氫譜是brukerav-400(400mhz)核磁儀分析得到。化學位移以四甲基矽烷為內標來記錄，以ppm為單位來表示(chc13:δ7.26ppm)。記錄的數據信息如下:化學位移及其裂分和偶合常數(s:單重峰；d:雙重峰；t：三重峰；q：四重峰；br：寬峰；m：多重峰)。
質譜數據除其他需要,都採用菲尼根高級lcq公司(finniganlcqadvantage)的液質聯用儀進行分析，所有反應都在乾燥氬氣保護的無水無氧條件下進行操作。固體金屬有機化合物在氬氣保護乾燥箱中進行儲藏。
四氫呋喃和乙醚是經過蒸餾得到，蒸餾時在其中加入金屬鈉和二苯甲酮。二氯甲烷(dcm)，戊烷和己烷是用氫化鈣來處理。本發明中涉及的特殊原料和中間體由天津長森藥業有限公司等訂製加工提供，其他所有化學試劑從天津化學試劑公司、阿爾得裡奇公司(aldrich)、阿克羅公司(acros)等試劑供應商購買。如合成過程中反應所需的中間體或產物不夠下一步等試驗，則重複多次合成至足夠數量為止。本發明所製備化合物的hcv蛋白酶(hcvns3-4a)抑制活性測試實驗由上海藥明康德新藥開發有限公司完成。
sm-3：n-boc-順式-4-羥基-l-脯氨酸甲酯
sm-4：n-boc-l-叔亮氨酸
alcalase2.4l：枯草桿菌蛋白酶-卡爾斯伯格(subtilisin-carlsberg)水解蛋白酶
boc：叔丁氧基羰基
(boc)2o：二碳酸二叔丁酯
cdi：n,n』-羰基二咪唑
dbu：1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯
hatu：2-(7-偶氮苯並三氮唑)-n,n,n』，n』-四甲基脲六氟磷酸酯
nbs：n-溴代丁二醯亞胺
dmap：4-二甲氨基吡啶
diea：n,n-二異丙基乙胺
diad:偶氮二甲酸二異丙酯
soc12：氯化亞碸
pocl3：三氯氧磷
pd/c：鈀炭
hmpa：六亞甲基四胺
hoac：冰乙酸
hbr：氫溴酸
hcl:鹽酸
tfa：三氟乙酸
tsoh：對甲苯磺酸
naoh：氫氧化納
acn:乙腈
dcm:二氯甲烷
dce：二氯乙烷
dmf：n,n-二甲基甲醯胺
dmso：二甲亞碸
et20：二乙醚
ea：乙酸乙酯
pe：石油醚
thf:四氫呋喃
tbme：甲基叔丁基醚
實施例1
化合物sm-2a的合成
間溴苯甲醛(93g,0.5mol),bnnet3cl(5.72g,25.13mmol)溶於chcl3(125ml)中。在55℃下緩慢滴加50％naoh並保持溫度(65-70℃)，完畢後保持溫度55℃攪拌。3小時後原料基本反應完全。加入930ml水稀釋，攪拌充分後不溶物溶解，分出水相，用50％h2so4調ph至2～3,180mlea萃取，乾燥,旋幹得羥基酸58.3g，收率50.5％。
將上述產品(58.3g,0.266mol)溶於etoh(615ml)中，加入濃h2so4(63.5ml,1.118mol)，在氮氣保護下進行回流反應，2小時後取樣檢測，反應完畢。減壓蒸乾溶劑，加入1.5lea稀釋，依次用飽和na2co3溶液和飽和nacl溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹，柱層析純化得sm-2a17.75g，收率26.1％。
實施例2
化合物va的合成
將苯並[1,3]二氧戊烷(40g,0.327mol)溶於dcm(2.44l)和冰醋酸(2.277l)中，冷卻至15℃，滴加濃hno3(325.2ml)，保持溫度低於40℃，滴加完畢後升至室溫攪拌30分鐘，冷卻至0-5℃，滴加發煙濃hno3(813ml)，滴加完畢後升至常溫反應攪拌過夜。
在反應液中加入9.6l冰水攪拌10分鐘，靜置分層，水相依次用800mldcm和800mlea各萃取1次，合併有機相，依次用640ml水洗2次，640ml飽和nahco3洗2次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋幹得粗品24g，收率34.7％。
將上述粗品溶於meoh(850ml)中，加入sncl2·2h2o(255g，1.13mol)中，油浴加熱回流反應過夜。反應液旋幹溶劑，加入500mlea和200ml水稀釋，用1nnaoh調節ph至13後，用硅藻土過濾，濾餅用200mlea洗滌3次。濾液分層，水相用500mlea萃取3次，水相加nacl至飽和後再用500mlea萃取1次，後合併有機相用飽和nacl洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得鄰苯二胺sm-210g，收率58％。
將上述鄰苯二胺sm-2(8.28g,32.2mmol)，α-羰基酸酯sm-2a(7g,46mmol)溶於無水etoh(100ml)中，氮氣保護下回流反應，6小時後停止反應，放置過周末。反應液過濾，濾餅用etoh洗滌，濾餅烘乾得va6.7g,收率60％。esi-ms[(m+h+)]:m/z344.93,346.93.
實施例3
化合物vb的合成
將鄰苯二酚(22g,0.2mol)溶於824ml乙醚中，冷卻至0℃，滴加發煙硝酸8.8ml，滴加完畢後，恢復至室溫攪拌過夜。將體系倒入250ml冰水中，攪拌20分鐘後分液，水相用150ml乙醚萃取6次，合併有機相，用飽和碳酸鈉中和有機相後，分液，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得38.2g粗品，矽膠柱層析得硝化產物9.6g，收率31.2％.1nmr(cdcl3，400mhz)δ10.65(s,1h),7.68(d,1h),7.28(d,1h),6.93(t,1h),5.82(s,1h).
將上述產物(42.45g,0.273mol)溶於dmf(842ml)中，加入ch2i2(205ml,2.545mol)，cuo(8.7g,0.109mol)和k2co3(159g,1.149mol)。用氬氣置換3次後，反應液加熱升溫至160-170℃，2小時後取樣檢測，反應完畢。反應液濃縮，倒入9l水中，用2.5lea萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水洗後乾燥，旋幹得114g，柱層析純化得關環產物35g，收率75％。
將上述產品(35g，0.206mol)溶於267ml冰醋酸中，攪拌下緩慢滴加發煙hno3(133ml)，滴加完畢，反應液室溫攪拌過夜。反應液加入1.25ldcm稀釋，攪拌下倒入1.25l冰水中，分液，水相用1.25l萃取至無產品，合併有機相，依次用1.5l水洗1次，1.5l飽和nahco3洗1次，飽和nacl洗1次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得雙硝化產物43.95g，收率71.1％。
將上述產品(31.5g，0.147mol)溶於1.1lmeoh中，加入sncl2·h2o(332g,1.47mol)。反應液攪拌下加熱回流過夜。反應液冷卻，濃縮，之後用約4l1nnaoh溶液調ph至10-11，水相過濾，用3lea萃取3次，合併有機相，用3l飽和nacl洗滌1次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得sm-2』11.07g，收率49.9％。
將sm-2』(11g,72mmol)及sm-2a(18.6g,72mmol)溶於無水etoh中，氬氣保護下回流反應，待反應結束後冷卻至室溫，析出大量黃色固體，過濾，濾餅用etoh洗滌，濾餅烘乾得中間體vb25.5g,收率70％。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ12.54(s，1h),8.50(s，1h),8.33-8.31(m，1h),7.74-7.73(m，1h),7.48(t，1h),7.23(d，1h),6.79(d，1h),6.23(s，2h).esi-ms[(m+h+)]:m/z345.11,347.02。
實施例4
化合物vc的合成
將α-酮酸(15.3g,67.2mmol)溶於無水dcm，氬氣置換三次，降溫至0℃，滴加氯化亞碸，滴畢升至室溫攪拌0.5h，待用。將硝基苯胺(6.0g,33.6mmol)溶於無水dcm，加入tea，氬氣置換三次，於0℃滴加前面所得dcm溶液，滴畢，升至室溫攪拌0.5h，加入飽和碳酸氫鈉洗滌，分液，乾燥，旋幹，加ea溶解後過濾，濾液旋幹，柱層析(pe-pe:ea50:1to1:1.5)得黃色固體4g，收率23％。1h-nmr((d6-dmso,400mhz)δ6.33(s,2h),7.10(m,1h),7.58-7.62(m,1h),7.76(d,j＝8.6hz,1h),7.97-8.05(m,2h),8.17(s,1h),11.24(s,1h).ms(esi):m/z447(m+h).
在氮氣保護條件下，依次將上述產物(2.5g,25.0mmol)、鋅粉及氯化銨加入到乙醇的水溶液中，加熱回流1h後，反應完全，反應液減壓濃縮至幹，將所得濃縮物直接過柱純化(pe:ea3:1)，得產物vc1.55g，收率75％。1h-nmr(d6-dmso,400mhz)δ6.24(s，2h),7.03(d，j＝8.24hz，1h),7.43-7.47(m,2h),7.69(d，j＝9.04hz,1h)，8.26(d,j＝7.84hz，1h),8.43(s,1h),12.65(s,-oh,1h).ms(esi):m/z343
實施例5
化合物vd的合成
在250ml的圓底燒瓶中，加入11g(10mmol)鄰苯二酚，100ml丙酮，100ml苯及5mg對苯甲磺酸，燒瓶上接索氏提取器，提取器中放置分子篩以吸收反應產生的水。加熱回流24小時，更換新的分子篩，繼續加熱回流24小時。減壓濃縮反應液，殘留物用石油醚萃取三次，合併石油醚萃取液，用2n氫氧化鈉溶液洗至水相無色，有機相加無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋幹，得一淡黃色液體(3.6g,收率24％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ6.80-6.82(m,4h),1.72(s,6h).
在一配有溫度計和恆壓滴液漏鬥的250ml三口瓶中加入100ml硝酸(70％)和50ml冰醋酸，冰浴中冷卻至10℃，從滴液漏鬥中滴加上述產物24.75g(0.165mol)，控制反應溫度在15-20℃，滴加完畢後，繼續在冰浴中攪拌45min，tlc檢測沒有原料。在攪拌下將反應液慢慢傾倒入500ml的冷水中，得一黃色固體，攪拌10min，用布氏漏鬥抽濾，水洗滌濾餅兩次，抽乾，真空乾燥箱中乾燥(40℃)過夜，得30.12g(93.5％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.87(d,1h),7.60(s,1h),6.79(d,1h),1.75(s,6h)。
在一配有溫度計的250ml三口瓶中加入122ml發煙硝酸(98％)和61ml冰醋酸，冰浴中冷卻至10℃，分批小量加入30g(0.153mol)的單硝化產物(用時80min)，控制反應溫度在15-20℃，加完後，繼續在冰浴中攪拌45min，tlc檢測沒有原料。在攪拌下將反應液慢慢傾倒入550ml的冷水中，得一黃色固體，攪拌10min，用布氏漏鬥抽濾，水洗滌濾餅兩次，抽乾，真空乾燥箱中乾燥(40℃)過夜，得33.72g(98％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.23(s,2h),1.81(s,6h)。
將上述產物(5g，21mmol)溶於乙酸乙酯(100ml),加入pd/c(150mg)，將氫化儀壓力調節至0.1mpa，將反應瓶放入氫化儀相應的位置中，將裝置密封好，用氫氣置換5次，攪拌20h，hplc監測反應完全。用硅藻土過濾，濾液減壓蒸乾得粗品4.6g。矽膠柱純化(pe:ea15:1to5:1)得sm-2」(2.6g，收率69％)。其鹽酸鹽的1hnmr(d2o,ppm)δ6.68(s,2h),1.64(s,6h,2ch3).
將sm-2」(4.4g，24.4mmol)及sm-2a(6.3g，24.4mmol)溶於etoh(185ml)，用氬氣換氣三次，反應液加熱至回流，攪拌1.5h，hplc監測反應完全，停止反應。將反應液放入冰箱2h，有晶體析出，抽濾收集固體，並用冰冷的乙醇洗，得到vd(5.43g，收率59.5％)，1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.59(s,1h),8.44(d,1h),7.60(d,1h),7.38(t,1h),7.26(s,1h),6.72(s,1h),1.79(s,6h,2ch3)；ms(esi):m/z373.28(m+h).
實施例6
化合物ve-vf的合成
將鄰苯二酚(22g,0.2mol)溶於824ml乙醚中，冷卻至0℃，滴加發煙硝酸8.8ml，滴加完畢後，恢復至室溫攪拌過夜。將體系倒入250ml冰水中，攪拌20分鐘後分液，水相用150ml乙醚萃取6次，合併有機相，飽和碳酸鈉中和有機相，乾燥旋幹得38.2g粗品，矽膠柱層析得硝基鄰苯二酚9.6g，收率31.2％.
將硝基鄰苯二酚(0.5g，3.23mmol)和五氧化二磷(0.053g)溶於甲苯(2ml)中，加熱升溫至75℃，攪拌10min後，滴加丙酮(0.275ml)。每30min加入五氧化二磷(0.053g)，總共加4次，2小時加完。加完後繼續反應1小時。反應液降至室溫溫，將溶液傾倒出於naoh(20ml，1mol/l)中，分液，有機相加入無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋幹，得固體0.15g(收率23.8％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.60(d,1h),7.00(d,1h),6.88(t,1h),1.82(s,6h,2ch3)。
在25ml三口瓶中，加入發煙硝酸(1.6ml)，冰浴降溫。將(0.15g，0.77mmol)溶於hoac(0.8ml)中，待溫度降至0℃，滴加配置溶液，保持t≤5℃。滴加完畢後，反應液在冰浴中繼續反應15min，tlc顯示反應完全。將反應液倒入20ml冰水中，攪拌10min後過濾，濾餅用大量清水清洗，得二硝基化合物固體100mg，收率54.2％.1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.69(d,1h),6.88(d,1h),1.82(s,6h,2ch3)。
將二硝基底物(2.3g，9.58mmol)和催化劑pd(0)(0.7g，5.72mmol)溶於etoh(34.1ml)中，將裝置密封好，用氫氣置換5次，室溫攪拌反應過夜。hplc檢測無原料，將溶液旋幹後，加入dcm(20ml)溶解，滴加鹽酸二氧六環溶液至無固體析出，過濾得紅黑色固體，用石油醚衝洗。將固體倒入飽和碳酸氫鈉和dcm溶液中，分液，保留有機相，加入無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得固體鄰苯二胺(0.94g)，收率54.57％。
將縮丙酮鄰苯二胺(1.6g，9.44mmol)和α-羰基酸酯sm-2a(2.18g，7.64mmol)溶於etoh(30ml)中，將裝置密封好，用氬氣置換3次，加熱回流反應16h(外溫90℃)。hplc檢測無原料後，降至室溫，將反應液旋幹，得褐色固體，矽膠柱層析(dcm裝柱，dcm淋洗)分離純化得兩部分淡黃色固體:
a)先出樣品為ve(lw1002-19-107-1)，1.64g，收率49.59％；hplc:98.19％純，(保留時間t＝8.8min，方法：甲醇：水＝30：70).1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.56(s,1h,6』-h),8.37(d,1h,4』-h),7.61(d,1h,2』-h),7.47(d,1h,5-h/7-h),7.37(t,1h,3』-h),6.86(d,1h,6-h/8-h),1.81(s,6h,2ch3).ms(esi):m/z373,375.30(m+h)。
b)後出樣品為vf(lw1002-19-107-2)，1.2g，收率36.29％；hplc：97.87％純，(保留時間t＝8.3min，方法：甲醇:水30:70),1hnmr(cdcl3,400mhz)δ10.76(brs,1h,oh),8.56(s,1h,6』-h),8.37(d,1h,4』-h),7.64(d,1h,2』-h),7.38(t,1h,3』-h),7.01(d,1h,5-h/7-h),6.68(d,1h,6-h/8-h),1.84(s,6h,2ch3).ms(esi):m/z373,375.28(m+h)。
實施例7
化合物4a的合成
將原料sm-3(0.24g,0.96mmol)、化合物va(0.33g,0.96mmol)以及三苯基磷(0.456g,1.7mmol)溶於無水thf(7ml)中，氬氣置換後冷卻至0℃，然後逐滴滴加diad(0.35g,1.7mmol)。恢復至室溫攪拌18h後。濃縮反應液得粗產品，柱層析純化得產品4a(0.52g，收率95％)。esi-ms[(m+h+)]:m/z572.09.
實施例8
化合物5a的合成
將化合物4a(0.52g,0.9mmol)溶於3ml無水dcm，加入3.5ml4nhcl的1,4-二氧六環溶液。室溫攪拌1h，濃縮反應液得胺的鹽酸鹽。將此鹽酸鹽及sm-4(0.23g,1mmol)溶於無水dmf中，然後冷卻到0℃。氬氣保護下，加入diea(0.85ml,4.9mmol)以及hatu(0.45g,1.2mmol)。反應液在室溫攪拌一小時，然後加入ea稀釋，5％檸檬酸水溶液洗，水洗，1m碳酸氫鈉水溶液洗，飽和食鹽水洗4次。有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓蒸乾得粗產品，柱層析純化得產品5a(0.5g),兩步收率81％。hnmr(cdcl3)δ8.18(s,1h),7.91(d,1h),7.55(d,1h),7.39(s,1h),7.33(t,1h),7.28(s,1h),7.16(s,1h),6.17(s,2h,och2o),5.31(m,1h),4.99(t,1h),4.21(m,3h),3.78(s,3h,och3),2.36(m,1h),2.06(m,1h),1.28(s,9h,3ch3),1.08(s,9h,3ch3)ppm.esi-ms[(m+h+)]:m/z685.11.
實施例9
化合物6a的合成
將化合物5a(4.96g,7.2mmol)溶於30ml無水dcm，加入35ml4nhcl的1,4-二氧六環溶液。室溫攪拌1h後濃縮反應液得胺中間體。
將胺中間體溶於126ml無水dcm中，氬氣置換後降溫至0℃，然後依次加入三光氣(3.25g,11mmol)及吡啶(9.4ml)。反應液在0℃攪拌半小時後用ea稀釋，接著用水洗，飽和食鹽水洗兩次。有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓蒸乾得中間體異氰酸酯。
將中間體異氰酸酯溶於188ml無水thf中，依次加入新戊二醇(2.28g，22mmol)和4a分子篩。室溫攪拌半小時後，加入dbu(1.42ml,9.5mmol)，繼續攪拌1h後加入ea稀釋，硅藻土過濾，母液依次用水洗，飽和食鹽水洗。有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓蒸乾得粗產品，柱層析純化得產品6a(2.78g，兩步總產率53％)。esi-ms[(m+h+)]:m/z715.19.
實施例10
化合物7a的合成
將底物6a(2.78g,3.9mmol)、碳酸銫(3.17g,9.7mmol)和無水甲苯(250ml)加入反應器，然後依次加入醋酸鈀(0.22g,0.97mmol)和2-(二叔丁基磷)-1,1』-聯萘(0.49g,1.24mmol)。氬氣置換後加熱至90℃攪拌過夜。待反應液冷卻至室溫後，用硅藻土過濾，ea洗滌濾餅。母液減壓濃縮後得粗產品，柱層析純化後得大環產物7a(1.1g，產率：45％)。esi-ms[(m+h+)]:m/z635.22.
實施例11
化合物8a的合成
將7a(0.3g,0.47mmol)溶於thf/meoh(13ml/6.5ml)中,然後慢慢加入1n氫氧化鋰水溶液(7.2ml)，室溫攪拌2h後減壓濃縮有機溶劑後，用1nhcl調ph至4～5。ea萃取三次，合併有機相，飽和食鹽水洗，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓蒸乾得產品8a(0.25g，收率86％)。esi-ms[(m-h-)]:m/z619.24.
實施例12
化合物lw100202的合成
將8a(46mg,0.074mmol)以及sm-6a(30mg,0.13mmol)溶於無水dmf(3ml)中，然後冷卻到0℃。氬氣保護下，加入diea(0.083ml,0.476mmol)以及hatu(42.4mg,0.11mmol)。反應液在室溫攪拌一小時，然後加入ea稀釋，5％檸檬酸水溶液洗，水洗，1m碳酸氫鈉水溶液洗，半飽和食鹽水洗4次。有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓蒸乾得粗產品，柱層析純化得最終大環產品lw100202(44mg，收率71％)。esi-ms[(m+h+)]:m/z833.67.
實施例13
化合物lw100201的合成
按照上述製備化合物lw100202的實施例12，本實施例用原料8a(0.074mmol)和sm-6b(0.098mmol)反應(反應路線2)，純化後得到48mg最終大環產物lw100201。esi-ms[(m+h+)]:m/z835.68.
實施例14
化合物sm-6c的合成
將底物(2g,6.1mmol)溶於無水二氯甲烷(24ml)，慢慢加入三乙胺(0.85ml)，反應液變粘稠；然後加入boc2o(1.4g,6.1mmol)，反應液在室溫攪拌17小時，ltc顯示反應完全。反應液轉移至分液漏鬥中，依次用水(4ml)，飽和碳酸氫鈉溶液(4ml)，和飽和食鹽水(4ml)洗，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮後得黃色油狀物1.84g，柱層析得純產物1.32g(84.6％)，無色油狀物。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ5.79(m,1h),5.28(d,1h),5.10(dd,1h),4.17(m,2h),2.14(m,1h),1.79(m,1h),1.45(m,10h),1.26(t,3h,ch3).
在100ml的圓底燒瓶中，將底物(0.3g,1mmol)溶於無水乙醚(10ml)，將反應瓶在丙酮-冰浴(-15℃)中冷卻，在劇烈攪拌下，一次性加入重氮甲烷(10mmol)和催化量醋酸鈀(0.1mmol)，敞開瓶口，繼續在-15℃下劇烈攪拌30分鐘。反應液用硅藻土過濾後濃縮，得一棕色油狀物。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ5.13(brs,1h),4.19-4.23(m,2h),1.60-1.65(m,2h),1.46(s,9h),1.28(t,3h),1.07-1.13(m,1h),0.86-0.89(m,1h),0.50-0.58(m,2h),0.28-0.36(m,2h).
將上述產物(1.52g,6.2mmol)溶於60ml無水thf中，加入cdi(1.13g，6.9mmol),用氬氣置換3次，反應液加熱至60℃反應4小時後，冷卻至室溫，加入環丙烷磺醯胺(0.84g，6.9mmol),dbu(1.05g,6.9mmol)，室溫攪拌過夜。反應混合物加入80ml乙酸乙酯稀釋後，依次用30ml10％檸檬酸洗2次，30ml飽和食鹽水洗，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹，矽膠柱層析(pe:ea50:1to1:1),得產物0.43g。收率為20.1％。ms(esi):m/z343.10(m-h).
將0.3g上述產品溶於100ml4n鹽酸1,4二氧六環溶液中，攪拌過夜，tcl監測反應，反應結束後旋幹溶劑，得sm-6c(0.25g)，收率為97％。
實施例15
化合物lw100203的合成
按照上述製備化合物lw100202的實施例12，本實施例用原料8a(0.065mmol)和sm-6c(0.13mmol)反應，純化後得到50mg最終大環產物lw100203。ms(esi):m/z847.2(m+h)
實施例16
化合物8b的合成
按照上述製備化合物4a-8a的實施例6-實施例11，本實施例從原料sm-3(4.8mmol)及vb(4.8mmol)開始按反應路線2經五步反應純化後得到0.3g產物8b。esi-ms[(m-h-)]:m/z619.45.
實施例17
化合物lw100205的合成
按照上述製備化合物lw100202的實施例11，本實施例用原料8b(0.10mmol)和sm-6a(0.10mmol)反應，純化後得到68mg最終產物lw100205。esi-ms[(m+h+)]:m/z833.71.
實施例18
化合物lw100204的合成
按照上述製備化合物lw100202的實施例11，本實施例用原料8b(0.08mmol)和sm-6b(0.08mmol)反應，純化後得到52mg最終產物lw100204。esi-ms[(m+h+)]:m/z835.70.
實施例19
化合物lw100206的合成
在50ml三口瓶中加入底物羧酸(約80mg,0.130mmol)，無水dmf(3ml)，攪拌溶解，加入sm-6c(55mg,0.098mmol),用氬氣置換3次，置於冰水浴中降溫至0-5℃，攪拌10min，約10min內加入diea(0.25ml)，並於冰水浴中攪拌5min，加入hatu(140mg)，反應液升至室溫，攪拌反應1.5小時後hplc，顯示已經反應完全。加人乙酸乙酯(40ml)稀釋後，用半飽和食鹽水洗滌4次，無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋幹得約100-150mg粗品,prep-hplc分離得3mglw100206，ms(esi):m/z847.2(m+h).
實施例20
化合物8c的合成
在氮氣保護條件下，依次將vc(1.55g，8.88mmol)、sm-3(1.66g,17.8mmol)和三苯基膦加入155ml無水thf中，冰水保護條件下加入diad(1.82g,22.2mmol),攪拌反應過夜,tlc檢測反應完全。減壓濃縮至幹，所得濃縮液直接柱層析得到目標產物4c2.0g,收率80％。1h-nmr((d6-dmso,400mhz)δ1.33(s，5h),1.39(s，4h),2.28-2.32(m,1h),2.60-2.65(m,1h)，3.63-3.69(m,4h)，3.72-3.75(m,1h),4.32(t,j＝8hz,1h),4.47-4.76(m,1h),6.27(d,j＝1.2hz，2h),7.37-7.44(m，2h)，7.59-7..67(m,2h)，7.94(d,j＝7.04hz,1h)，8.10(d，j＝1.2hz,1h).ms(esi):m/z594(m+23)
將4c(1.32g,1.81mmol)加入到thf中，再將2ml二氧六環的hcl溶液(9n)加入反應液中，室溫攪拌30分鐘，tlc點板確定無原料後，蒸除溶劑，得到白色固體鹽酸鹽0.92g，溶於無水dmf(3ml)中，加入sm-4(0.42g,1.81mmol)，氬氣置換3次，反應液降溫至0℃，攪拌下依次加入diea(1.17g,9.05mmol)和hatu(0.83g,2.17mmol)，恢復至室溫攪拌過夜。加入ea(40ml)稀釋後，依次用水和飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮，得粗品2g，矽膠柱層析(pe:ea40:1to1:1),得黃色固體5c400mg,兩步收率40％。1h-nmr((cdcl3,400mhz)δ1.08(s,9h),1.33(s,5h)，1.39(s,4h)，2.3-2.32(m,1h)，2.62-2.64(m,1h)，3.63-3.69(m，3h)，4.09-4.12(m，1h)，4.18(d,j＝9.8hz，1h)，4.33(d,j＝11.76hz,1h),4.72(t,j＝9.04hz,1h),4.95-4.98(m,1h),5.19-5.21(m,1h),6.25-6.29(m,2h),7.25-7.34(m,2h),7.55-7.57(d,1h),7.66-7.68(d,1h),7.82-7.84(d,1h),8.11(d,1h).
在25ml單口瓶中，依次加入5c(700mg,1.02mmol)，無水dcm(0.8ml)和鹽酸二氧六環溶液(4n,4ml)，室溫攪拌1h，hplc顯示無原料。反應液減壓濃縮後，用真空油泵繼續抽5min，得5c的鹽酸鹽。溶於無水dcm(10.6ml)，用氬氣置換3次，反應液降溫至0℃，攪拌下加入三光氣，然後逐滴加入吡啶，反應液在0℃攪拌0.5h後，室溫繼續攪拌15min。加入ea(53ml)稀釋後，依次用水(13ml)和飽和氯化鈉洗(13ml*2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹，得中間體異氰酸酯，油泵抽乾。將中間體異氰酸酯溶於無水thf(15ml)，加入新戊二醇和4a分子篩(1.75g)，室溫攪拌0.5小時後，加入dbu，繼續攪拌4小時，hplc顯示無原料。加入ea(53ml)稀釋，經硅藻土過濾，濾液依次用水(11ml)，飽和氯化鈉洗(11ml*4)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得粗品1g，矽膠柱層析(pe:ea40:1to1:1)，得黃色泡沫狀固體6c450mg,收率40％。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ0.96(s,6h),1.08(s,9h),2.33-2.34(m,1h)，2.62-2.64(m,1h)，3.08-3.1(m,2h),3.37-3.43(m,2h),3.74-3.77(m,3h),4.07-4.08(m,1h)，4.09-4.15(m,1h)，4.22-4.25(d,j＝9.4hz,1h),4.72(t,j＝9.04hz,1h),4.32-4.35(m,1h),4.72-4.77(m,1h),5.41-5.43(m,1h),5.98(s,1h),6.27-6.29(m,2h),7.25-7.34(m,2h),7.56-7.58(d,h),7.66-7.7(m,1h),7.83-7.85(d,h),8.13(s，1h).
在50ml單口瓶中，依次加入6c(340mg,0.14mmol)，無水甲苯(15ml)，碳酸銫(114mg,0.35mmol)，通氬氣5min，加入醋酸鈀(8mg,0.0176mmol)，pln(18.8mg,0.046mmol)，氬氣置換3次，反應液用油浴加熱至90℃，反應過夜小時，tlc監測原料消失。矽膠柱層析(pe:ea40:1to2:1)，得黃色泡沫狀固體7c125mg。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ1.08(s,9h),1.26(s,6h),2.05-2.06(m,1h)，2.23-2.25(m,1h),2.51-2.55(m,1h)，2.78-2.80(m,1h),3.34-3.36(m,1h),3.54-3.57(m,1h),3.70-3.72(m，3h)，4.00-4.02(m，1h)，4.09-4.15(m,1h)，4.22-4.25(m,2h),4.49-4.52(m,1h),4.77-4.80(m,1h),5.23-5.26(m,1h)，6.27-6.29(m,2h),7.0-7.06(m，1h)，7.27-7.29(m，1h)，7.35-7.38(m,2h)，7.40-7.42(m，1h)，7.66-7.69(m,1h).
在氮氣保護條件下，依次將化合物7c(20mg,0.0135mmol)加入thf/甲醇1.6ml中，氮氣置換3次，然後滴加1nlioh溶液，rt條件下反應2h，tlc檢測反應完全。反應液濃縮至幹，加入1n鹽酸調節ph1-2,用ea萃取3次，無水硫酸鈉乾燥後過濾濃縮至幹，然後進行下一步反應。
實施例21
化合物lw00208的合成
在25ml三口瓶中，依次加入8c(20mg,0.065mmol)和sm-6b(27.5mg,0.098mmol)到無水dmf(3ml)，反應瓶用氬氣置換3次，冰水浴降溫至0℃，加入hatu(37.3mg,0.098mmol),滴加diea，再用氬氣置換3次，撤冰浴，升至室溫反應1小時，hplc監測至無原料。加入ea(200ml)稀釋後，用半飽和食鹽水洗4次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹，得粗品20mg,矽膠柱層析(pe:ea40:1to2:1),得lw10020810mg。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ1.00-1.04(m,14h),1.11-1.14(m,4h),1.26-1.29(m,6h),1.31-1.43(m,1h),1.91-1.95(m,1h),1.91-1.95(m,1h),2.37-2.39(m,1h),2.90-2.95(m,1h),3.47-3.55(m,1h),3.71(s,1h),3.92-3.96(m,1h),4.06-4.12(m,1h),4.31-4.39(m,2h),5.11(d,j＝9.8hz,1h),5.20(d,j＝16.8hz,1h),5.33-5.36(m,1h),6.26(d,j＝1.56hz,2h),7.00-7.03(m,1h),7.27-7.30(m,1h),7.36-7.40(m,2h),7.55-7.56(m,1h),7.66-7.69(m,1h).ms(esi):m/z831.3(m+h)。
實施例22
化合物lw00207的合成
將雙鍵底物lw100208(20mg,0.139mmol)溶於5ml乙酸乙酯中，加入10％pd/c(4mg)，室溫氫化30分鐘，tlc監測反應完全，反應混合物經硅藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯洗滌三次，合併濾液，旋幹，得粗品，經製備tlc分離純化後得純產物5.5mg黃色固體lw100207。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ1.00-1.04(m,13h),1.11-1.14(m,4h),1.25-1.29(m,10h),1.59-1.64(m,3h),2.36-2.38(m,1h),2.92-2.96(m,2h),3.48-3.53(m,1h),3.71(s,1h),3.94-3.95(m,1h),4.09-4.15(m,2h),4.31-4.37(m,2h),6.26(d,j＝1.56hz,2h),7.00-7.03(m,1h),7.27-7.30(m,1h),7.36-7.40(m,2h),7.42-7.54(m,1h),7.66-7.68(m,1h).ms(esi):m/z833.2(m+h)。
實施例23
化合物lw00209的合成
在25ml三口瓶中，依次加入8c(12mg,0.032mmol)和sm-6c(14mg,0.05mmol)到無水dmf(3ml)，反應瓶用氬氣置換3次，冰水浴降溫至0℃，加入hatu(20mg,0.05mmol),滴加diea，升至室溫20℃反應1小時，hplc監測至反應完全，ea(200ml)稀釋，半飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得粗品20mg，矽膠柱層析(pe:ea40:1to2:1)，得lw1002098mg。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ1.00-1.04(m,12h),1.11-1.13(m,4h),1.19-1.36(m,10h),1.70-1.72(m,1h),2.05-2.06(m,1h),2.35-2.36(m,1h),2.70-2.75(m,1h),2.95-2.98(m,1h),3.45-3.52(m,1h),3.71(s,1h),4.08-4.10(m,2h),4.31-4.40(m,3h),5.28-5.35(m,1h),5.95-5.98(m,1h),6.26(m,2h),6.95-7.03(m,1h),7.27-7.30(m,1h),7.34-7.40(m,2h),7.50-7.54(m,1h),7.56-7.69(m,1h).ms(esi):m/z845.3(m+h)。
實施例24
化合物8d的合成
將vd(5.4g，14.52mmol)、順式-n-boc-l-脯氨酸甲酯(3.92g，15.97mmol)，pph3(7.62g，29.04mmol)溶於無水thf(25ml)，用氬氣置換三次，冷卻至0℃後，逐滴加入diad(5.72ml，29.04mmol)(用5ml的thf稀釋)，恢復至室溫攪拌18h，hplc監測至反應完全，減壓蒸乾反應液後得粗品26.68g，矽膠柱純化(pe:ea20:1to7:1)得4d(9.23g，淡黃色泡沫狀固體)，收率106％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.23(s,1h),8.01(d,1h),7.59(d,1h),7.37(t,1h),7.28(s,1h),7.08(s,1h),5.08(m,1h),4.50(m,1h),3.94(m,2h),3.80(s,3h,ch3),2.63(m,1h),2.41(m,1h),1.86(s,6h,2ch3),1.45(s,9h,3ch3,boc)；ms(esi):m/z602.42(m+h)。
將上述產品4d(9.2g，15.32mmol)溶於無水dcm(12.5ml)，加入4nhcl的1,4-二氧六環溶液(62ml)。反應液室溫攪拌2h，hplc監測反應完全。反應液減壓蒸乾得淡黃色固體。將此產品(8.87g，16.52mmol)、boc-l-叔亮氨酸(3.82g，16.52mmol)溶於dmf(26.6ml)，換氬氣三次，反應液用冰浴降溫至0℃，依次加入diea(14.4ml，82.6mmol)、hatu(7.54g，19.83mmol)。恢復至室溫攪拌16.5h，hplc監測反應完全。反應液中加入355mlea稀釋後，依次加入70ml水洗，70ml飽和食鹽水洗(4次)，無水硫酸鈉乾燥、過濾、旋幹得粗品17.09g。矽膠柱純化(pe:ea15:1to1:1)得5d(9.37g)，收率79.5％.1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.16(s,1h),7.90(d,1h),7.58(d,1h),7.44(s,1h),7.34(t,1h),7.10(s,1h),4.77(t,1h),4.11-4.25(m,3h),3.80(s,3h,ch3),2.65(m,1h),2.39(m,1h),1.86(s,6h,2ch3),1.28(s,9h,3ch3),1.11(s,9h,3ch3)；ms(esi):m/z715.60(m+h)。
將上述產品5d(9.37g，13.13mmol)溶於無水dcm(10.2ml)，加入4nhcl的1,4-二氧六環溶液(50.8ml)，室溫攪拌1h後,停止反應。濃縮反應液得產品6d(9.59g)，收率112.4％。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ9.73(s,0.3h),8.24(s,1h),8.09(d,1h),7.69(d,1h),7.48(t,1h),7.43(s,1h),7.22(s,1h),4.88(m,1h),4.55(t,1h),4.21(d,1h),4.06(d,1h),3.93(sbr,1h),3.70(s,3h,ch3),2.61(m,1h),2.38(m,1h),1.77(d,6h,2ch3),1.05(s,9h,3ch3)；ms(esi):m/z615.52(m+h)。
將6d(5g，7.69mmol)溶於dcm(133ml)，將反應液降溫至0℃後，加入三光氣(3.24g，11.54mmol)。滴加吡啶(9.9ml，123.04mmol)。反應液在0℃下繼續攪拌0.5h後，hplc監測反應完全。在反應液中加入400mlea稀釋後，依次用95ml水洗一次，95ml飽和食鹽水洗兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得中間體異氰酸酯，用油泵抽乾。將中間體異氰酸酯溶於198mlthf中，加入新戊二醇(2.4g，23.07mmol)和4a分子篩(13.2g)，室溫攪拌0.5h後，加入dbu(1.5ml，10mmol)，繼續攪拌1h，hplc監測反應完全。在反應液中加入396mlea稀釋後，依次用79ml水洗一次，79ml飽和食鹽水洗4次，加無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋幹得粗品8.2g，過矽膠柱純化(pe:ea15:1to2:1)得到產品7d(3.8468g)，產率67.3％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.11(s,1h),7.90(d,1h),7.69(s,1h),7.60(d,1h),7.38(m,2h),7.14(s,1h),5.38(d,1h),4.79(t,1h),4.35(m,1h),4.18(m,1h),4.05(m,1h),3.81(s,3h,ch3),3.71(d,1h),3.32(d,1h),3.08(m,2h),2.69(m,1h),2.31(m,1h),1.86(s,6h,2ch3),1.31(s,6h,2ch3),1.07(s,9h,3ch3)；ms(esi):m/z743.64(m+h)。
將7d(500mg，0.67mmol)、碳酸銫(546mg，1.675mmol)、甲苯(42ml)通氬氣15min備用)將經氬氣置換後的上述試劑加入反應瓶，再通氬氣5min後，加入醋酸鈀(38.2mg，0.17mmol)和pdln(85.4mg，0.2144mmol)，氬氣置換3次。加熱至90℃，反應16h，hplc監測反應完全。反應液經硅藻土過濾，ea洗滌濾餅，合併濾液，旋幹，得粗品0.6947g。過矽膠柱純化(pe:ea40:1to4:1)，得大環產物(181.1mg)，收率40.4％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.41-7.49(m,4h),7.09(m,2h),5.29(d,1h),4.51(m,1h),4.31(m,3h),4.14(m,2h),4.05(m,1h),3.75(s,2h),3.71(s,3h,ch3),2.51(m,1h),2.18(m,1h),1.81(s,6h,2ch3),1.32(s,6h,2ch3),1.08(s,9h,3ch3)；ms(esi):m/z663.70(m+h)。
將大環產物(180mg，0.27mmol)溶於thf/meoh(7.4ml/3.7ml)，加入1n氫氧化鋰水溶液(4.1ml),反應液室溫攪拌2h，hplc監測反應完全。反應液旋幹有機相，水相用1nhcl調ph至4～5。ea萃取三次，合併有機相，用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋幹得產品8d(lw1002-42-37-1,158.6mg)，收率90％。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ7.68(s,1h),7.20-7.45(m,3h),7.09(s,1h),6.98(s,1h),4.60(d,1h),4.11-4.30(m,4h),4.02(m,3h),3.71(m,2h),2.31(m,1h),2.18(m,1h),1.76(s,6h,2ch3),1.34(s,6h,2ch3),0.98(d,9h,3ch3)；ms(esi):m/z649.70(m+h)。
實施例25
化合物lw100210的合成
雙鍵底物lw100210(120mg,0.139mmol)溶於10ml乙酸乙酯中，小心加入鈀碳(10％pd/c)(50mg)，用氫氣置換5次後，在氫氣球氫化下，室溫攪拌30分鐘，hplc監測反應完全，停止反應，反應混合物經硅藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯洗滌三次，合併濾液，旋幹，得粗品112.5mg，經製備tlc分離純化後得純產物lw10021123mg，黃色固體。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ10.15(s,1h),9.90(s,1h),7.60(d,1h),7.40(m,3h),7.10(m,1h),7.00(m,1h),5.40(sbr,1h),4.80(d,1h),4.40(m,2h),4.16(m,2h),4.10(m,1h),3.69(m,2h),3.42(m,1h),2.95(m,1h),2.60(m,1h),2.05(m,1h),1.82(m,7h),1.68(m,2h),1.40(m,1h),1.30(s,6h),1.26(m,2h),1.15(s,9h),0.90(m,3h)；ms(esi):m/z863.90(m+h).
實施例26
化合物lw100211的合成
將8d(50mg，0.077mmol),sm-6a(30.8mg，0.1155mmol)溶於dmf(3.1ml)，反應瓶用氬氣置換三次後，在冰浴中降溫至0℃，依次滴加diea(0.085ml，0.4928mmol)，和hatu(44mg，0.1155mmol)，氬氣置換三次，升至室溫，攪拌1.5h，hplc監測反應完全，停止反應。在反應液中加入25mlea稀釋，用半飽和食鹽水洗滌四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，抽濾，濾液旋幹得粗品153.4mg，過矽膠柱純化(pe:ea10:1～8:1～6:15:1)，得到粗產物76.7mg，製備板進一步純化得到純品lw10021149mg，收率73.8％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ10.15(s,1h),9.90(s,1h),7.80(d,1h),7.38(m,3h),7.12(m,1h),6.98(m,1h),5.78(m,1h),5.25(m,1h),5.12(m,1h),4.80(d,1h),4.40(m,2h),4.16(m,2h),4.10(m,1h),3.69(m,2h),3.42(m,1h),2.90(m,1h),2.30(m,1h),2.05(m,1h),1.82(m,7h),1.68(m,1h),1.40(m,1h),1.30(s,6h),1.26(m,2h),1.15(s,9h),0.90(m,2h)；ms(esi):m/z861.91(m+h).
實施例27
化合物lw100212的合成
將8d(50mg，0.077mmol)，sm-6c(32.4mg，0.1155mmol)溶於dmf(3.1ml)，反應瓶用氬氣置換三次後，置於冰浴中降溫至0℃，依次滴加diea(0.085ml，0.4928mmol)，和hatu(44mg，0.1155mmol)，在氬氣保護下，升至室溫，攪拌1.5h，hplc監測反應完全，停止反應。反應液加入25mlea稀釋後，用半飽和食鹽水洗四次，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，濾液旋幹得粗品108.7mg，矽膠柱純化得粗品165mg，製備板進一步純化得到純品lw10021249.7mg，收率73.7％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ10.20(s,1h),9.90(s,1h),7.90(d,1h),7.50(m,4h),7.18(m,1h),4.68(m,1h),4.35(m,2h),4.16(m,3h),4.09(m,1h),3.69(m,2h),3.50(m,1h),3.42(m,1h),3.02(m,1h),2.30(m,2h),2.05(m,1h),1.82(m,7h),1.68(m,1h),1.56(m,1h),1.40(m,1h),1.30(s,6h),1.26(m,2h),1.15(m,10h),0.90(m,2h)；ms(esi):m/z875.99(m+h).
實施例28
化合物8e的合成
將ve(1g,2.7mmol)、三苯基膦(1.4g，5.38mmol)、順式-n-boc-4-羥基-l-脯氨酸甲酯(0.74g，3mmol)溶於thf(46ml)。反應瓶用氬氣置換三次，降溫至0℃，滴加diad(1.1ml,5.38mmol)，溫度基本保持不變。撤去冰水浴，繼續攪拌反應4h後，hplc檢測基本反應完全。旋幹反應液,矽膠柱層析純化(pe:ea30:1to20:1)得4e(1.4g)，收率87.5％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.22(s,1h),7.99(d,1h),7.60(d,1h),7.35(m,2h),7.27(s,1h),4.48(m,1.5h),4.30(m,0.5),3.95(m,1.5h),3.80(s,3h,ch3),3.78(m,0.5h),2.62(m,1h),2.43(m,1h),1.85(s,6h,2ch3),1.46(s,9h,3ch3)；ms(esi)m/z600.49(m+h)。
將4e(1.4g,2.33mmol)溶於12mldcm中，滴加4ml4nhcl-dioxane，室溫攪拌2h，hplc檢測反應完全。旋幹得鹽酸鹽1.35g。將此鹽酸鹽(1.35g，2.6mmol)、boc-l-叔亮氨酸(0.6g，2.6mmol)溶於8mldmf，用氬氣換氣兩次後，反應液降溫至0℃，攪拌下滴加diea(2.3ml，13mmol)(溫度變化不明顯)，然後加入hatu(1.2g，3.12mmol)，再用氬氣換氣兩次，室溫攪拌6h，hplc檢測反應完全。反應液中加入25mlea稀釋後，依次用水洗(8*2ml)，飽和食鹽水洗(8*2ml)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得粗品2.6g。過30倍矽膠柱純化(pe:ea20:1～15:1～12:1),得淡黃色固體純品5e0.65g，收率36％.1nmr(cdcl3,400mhz)δ8.15(s,1h),7.87(d,1h),7.56(d,1h),7.36(m,3h),6.30(sbr,1h),4.73(m,1h),4.18(m,2h),4.02(m,1h),3.79(s,3h,och3),2.61(m,1h),2.35(m,1h),1.86(d,6h,2ch3),1.59(s,9h,3ch3),1.06(s,9h,3ch3)；ms(esi):m/z713.67(m+h)。
將底物5e(1.15g，1.15mmol)溶於dcm，攪拌下滴加6ml4nhcl的1,4-二氧六環溶液。繼續室溫攪拌反應3h，hplc檢測反應完全。旋幹反應液溶劑得鹽酸鹽1.4g，溶於30mldcm，反應液降溫至0℃後，攪拌下加入三光氣(0.71g，2.4mmol)，反應瓶用氬氣換氣兩次，加入吡啶(2.1ml,25.8mmol)。0℃攪拌0.5h，然後升至室溫，繼續攪拌0.5h。hplc檢測反應完全。反應液中加入80mlea稀釋後，依次用15ml水和15ml飽和食鹽水洗兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹後，繼續用油泵抽1h得異氰酸酯中間體,溶於thf，加入新戊二醇(0.5g，4.83mmol)和4a分子篩(2.75g)，反應混合物在室溫下攪拌0.5h，加入dbu(0.31ml,2.1mmol)，繼續攪拌反應1h後，hplc檢測發現反應完全。反應液中加入80mlea稀釋後，依次用15ml飽和食鹽水洗，得粗品2g。矽膠柱純化(pe:ea10:1to2:1)得純品6e0.8g,收率66.7％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.14(s,1h),7.83(d,1h),7.55(d,1h),7.41(m,3h),5.90(s,1h),4.73(m,1h),4.21(m,2h),4.13(m,1h),3.80(m,3h,och3),3.52(s,2h,),3.11(m,2h),2.65(m,1h),2.30(m,2h),1.82(d,6h,2ch3),0.98(s,15h,5ch3)；ms(esi):m/z743.68,745.68(m+h)。
將6e(0.4g，0.54mmol)溶於30ml無水甲苯(用前通氬氣15min)，加入碳酸銫(0.44g，1.35mmol)，反應混合氬氣液通5min後，加入醋酸鈀(30mg，0.135mmol)、pln(70mg，0.173mmol)，再用氬氣換氣三次，反應液加熱到90℃，攪拌過夜。第二天，hplc檢測反應完全。將反應混合液經硅藻土過濾，ea洗滌濾餅，合併濾液旋幹，得粗品0.65g。矽膠柱純化(pe:ea15:1to5:1)得大環化合物7e70mg，收率19.5％，1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.40(m,3h),7.28(m,2h),6.98(m,1h),6.15(s,1h),5.30(m,1h),4.80(d,1h),4.50(m,1h),4.31(m,1h),4.20(m,1h),4.02(m,1h),3.75(m,1h),3.71(s,3h,och3),3.31(d,1h),2.50(m,1h),2.31(m,1h),2.20(m,1h),1.81(m,6h,2ch3),1.25(s,6h,2ch3),1.06(s,9h,3ch3)；ms(esi):m/z663.83(m+h).
將7e(100mg,0.15mmol)溶於thf/meoh(4ml/2ml)，攪拌下加入1nlioh水溶液(2.3ml)，反應液室溫攪拌1.5h，hplc檢測反應完全。旋幹有機相，水相用1nhcl的水溶液調ph至4—5後，用乙酸乙酯萃取三次(15x3ml)，合併有機相，加無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得8e130mg,收率128％.ms(esi)m/z649.69.
實施例29
化合物lw100214的合成
將羧酸8e(70mg，0.11mmol)和磺醯胺sm-6a(44.6mg，0.165mg)溶於5mldmf，用氬氣換氣兩次，反應液降溫至0℃，攪拌下滴加diea(0.12ml,0.72mmol)，然後加入hatu(63mg,0.165mmol)，再換氣兩次，室溫反應1.5h後，送hplc檢測反應完全。
反應液加15mlea稀釋後，用半飽和食鹽水洗(10*4ml)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得140mg。矽膠柱層析(pe:ea15:1to4:1)得lw10021414mg,1hnmr(cdcl3)δ7.35(m,5h,arh),6.98(m,1h),5.67(m,1h),5.35(m,1h),5.19(m,1h),5.10(m,1h),4.31(m,3h),4.01(m,2h),3.67(s,1h)3.43(m,2h),2.88(m,1h),2.60(m,1h),2.00(m,1h),,1.83(s,3h,ch3),1.78(s,3h,ch3),1.62(m,4h),1.11(s,6h,2ch3),1.01(s,9h,3ch3),0.91(m,2h).lcms(esi):m/z861.87(m+h).
實施例30
化合物lw100213的合成
參照實施例22，lw100214(10mg)常溫pd/c氫化，得lw1002137mg.
1hnmr(cdcl3)δ7.35(m,5h,arh),6.98(m,1h),5.67(m,1h),5.35(m,1h),5.19(m,1h),5.10(m,1h),4.31(m,3h),4.01(m,2h),3.67(s,1h)3.43(m,2h),2.88(m,1h),2.60(m,1h),2.00(m,1h),,1.83(s,3h,ch3),1.78(s,3h,ch3),1.62(m,4h),1.11(s,6h,2ch3),1.01(s,9h,3ch3),0.91(m,2h).ms(esi)m/z863.90(m+h).
實施例31
化合物lw100215的合成
將酸8e(35mg，0.054mmol)、磺醯胺sm-6c(23.2mg，0.081mmol)溶於dmf，用氬氣置換兩次，反應液降溫至0℃。攪拌下滴加diea，然後加入hatu，再用氬氣換氣兩次。反應液室溫攪拌1.5h後，送hplc檢測反應完全。反應液加15mlea稀釋後，用半飽和食鹽水洗(5x4ml)，有機相加無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋幹得70mg,柱層析純化(pe:ea10:1to5:1)得lw10021543mg,收率67％,製備色譜分離純化,hplc(220/254nm):96.26％/99.03％；1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.41(m,6h,arh),7.29(m,1h),6.18(s,1h),5.88(s,1h),4.49(d,1h),4.42(m,2h),4.27(m,1h),4.13(m,2h),3.78(m,2h),3.48(m,1h),3.38(m,1h),2.95(m,2h),2.60(m,1h),2.29(m,2h),2.20(m,2h),1.79(s,3h,ch3),1.76(s,3h,ch3),1.69(m,1h),1.25(m,3h),1.16(s,6h,2ch3),1.08(s,9h,3ch3),0.80(m,2h),0.51(m,3h),0.45(m,3h).lcms(esi):m/z875.6.
實施例32
化合物8f的合成
將vf(1.5g，4.03mmol)，n-boc-順式羥脯氨酸甲酯(1.104g，4.5mmol)，pph3(2.13g，8.12mmol)溶於無水thf(70ml)中，將裝置密封好，用氬氣置換3次，反應瓶置於冰浴中降溫至0℃，滴加diad(1.65ml，8.12mmol)。滴加完畢後，撤去冰浴，使其自然恢復至室溫，反應4小時，將反應液旋幹，矽膠柱層析(pe:ea15:1～10:1～5:1)，得黃色螢光固體4f(3.52g)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.20(s,1h),7.93(m,1h),7.58(m,2h),7.32(m,1h),7.16(d,1h),5.02-5.05(m,1.5h),4.48(m,0.5h),3.92-3.95(m,1.5h),3.80(s,3h,ch3),3.73(m,0.5h),2.64(m,1h),2.37(m,1h),1.75(s,6h,2ch3),1.41(s,9h,3ch3)；ms(esi):m/z600.42(m+h)。
將4f(3.47g，5.8mmol)溶於dcm(30ml)中，滴加鹽酸二氧六環溶液(10ml，40mmol)，溶液變成血紅色，幾乎無放熱，並逐漸析出紅色固體。反應3小時後送hplc，檢測反應完全，轉入茄瓶中將反應液旋幹，得黃色鹽酸鹽固體(3.39g)。將此固體物和n-boc-l叔亮氨酸(1.405g，6.24mmol)溶於無水dmf(45ml)中，將裝置密封好，用氬氣置換3次，於冰鹽浴中降溫至0℃，緩慢滴加diea(8.3ml，30.6mmol)。滴畢，加入hatu(2.8g，7.37mmol)，用氬氣置換3次，常溫反應過夜。hplc檢測反應完全，加入ea(200ml)稀釋，有機相依次用水(75ml)和飽和食鹽水(75ml)洗滌後，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋幹，矽膠柱層析(pe:ea20:1to5:1)得淡黃色固體5f(3.3g)，收率74.23％。ms(esi):m/z713.53(m+h)。
將5f(3.3g，4.63mmol)溶於dcm(50ml)中，滴加鹽酸二氧六環溶液(10ml，40mmol)，溶液變成血紅色。反應3小時後送hplc，檢測反應完全，轉入茄瓶中將反應液旋幹，得黃色固體鹽酸鹽3.24g，溶於無水dcm(87.8ml)中，加入三光氣(2.26g，7.61mmol)，塞好塞子，將反應瓶換氬氣3次後，置於冰水浴中降溫至t≤5℃，攪拌下滴加吡啶溶液(6.5ml)，反應液逐漸變成翠綠色，放出大量熱，滴加完畢後在冰浴中繼續攪拌30min，顏色變回橙紅色，然後撤去冰浴在室溫下繼續反應15min。送hplc反應完全。旋幹之後油泵抽乾，溶於無水thf(130.68ml)中，加入4a分子篩(8.72g，碾碎)，新戊二醇(1.58g，15.24mmol)，密封好，將反應瓶換氣3次後，攪拌室溫下滴加dbu(1ml)，無反應現象，攪拌反應過夜。第二天送hplc反應完全，將反應液過濾，旋幹，矽膠柱層析(pe:ea20:1to3:1)得產物6f1.2g.ms(esi):m/z743.67(m+h).
將6f(0.6g，0.74mmol),csco3(0.6g，1.85mmol)溶於處理過的甲苯(45ml)中，反應液繼續通氬氣5分鐘。加入pd(oac)2(42mg，0.185mmol),pln(94mg，0.24mmol)，裝上冷凝管，密封好後，換氬氣3次，攪拌升溫至90℃，反應過夜。第二天送hplc，產物點與原料點保留時間幾乎一樣，將反應液過硅藻土，旋幹，得粗品1.1g,矽膠柱層析(pe:ea20:1to2:1)，將所得溶液旋幹後用油泵抽乾，得淡黃色固體7f185mg，收率34.6％。ms(esi):m/z663.74(m+h).
將7f溶於thf/meoh溶液(7.175ml/3.605ml)中，滴入配好的lioh/h2o溶液(4ml，1n)室溫攪拌反應2h後，tlc、hplc監測反應完全，停止反應。將有機相旋幹，滴入hcl溶液(1n)調整溶液ph至4～5之間，用ea萃取水相三次，合併有機相，飽和食鹽水洗滌3次，有機相中加入無水硫酸鈉乾燥30min，過濾，將有機相旋幹得淡黃色固體8f201mg.ms(esi):m/z649.69。
實施例33
化合物lw100217的合成
將縮羧酸8f(50mg，0.082mmol)和磺醯胺sm-6a(32.68mg，0.1224mmol)溶於dmf溶液(5ml)中，將反應瓶密封好，用氬氣置換3次，將反應瓶置於冰浴中降溫到t≤5℃，攪拌下滴加diea(0.092ml，0.525mmol)，無明顯放熱，加入hatu(46.54mg，0.1224mmol)，密封好反應瓶，再用氬氣置換3次，加熱升溫至90℃，20min後，降至室溫，繼續反應1.5hr。tlc監測至原料反應完全，反應液加入50mlea稀釋，轉至分液漏鬥中，加入飽和食鹽水洗滌3次，分出有機相，加入無水硫酸鈉乾燥，過濾，有機相旋幹得粗品121mg。矽膠柱層析，得純品lw100217淡綠色固體37mg，收率63.3％；1hnmr(cdcl3,400mhz)δ10.20(s,1h),9.90(s,1h),7.70(d,1h),7.60(m,1h),7.50(m,1h),7.28(m,1h),7.20(d,1h),7.01(m,1h),5.78(m,1h),5.25(m,1h),5.12(m,1h),4.80(d,1h),4.40(m,2h),4.16(m,2h),4.00(m,1h),3.79(m,2h),3.52(m,1h),3.35(m,1h),2.90(m,1h),2.35(m,1h),1.82(m,7h),1.68(m,1h),1.40(m,1h),1.30(s,6h),1.26(m,2h),1.15(s,9h),0.90(m,2h)；ms(esi):m/z861.95(m+h).
實施例34
化合物lw100216的合成
將雙鍵底物lw100217(21mg，0.0343mmol)溶於ea溶液(1.5ml)中，加入pd/c(5mg)反應瓶密封好，氫氣置換5次，常溫反應1h，發現有1/3原料剩餘，繼續置換氫氣反應1h，剩餘極少原料，繼續置換氫氣30min，發現出現新的hplc峰，推測反應過度，停止反應，反應液經硅藻土過濾後旋幹。將固體溶於dcm(10ml)中，均勻塗抹在製備板tlc上，用展開劑(dcm:meoh30:1)展開，2h後取出製備板，刮下矽膠，用dcm(15ml)溶解，超聲，過濾，濾液旋幹得淡黃色固體lw1002169mg(收率42.76％)。1hnmr(cdcl3，400mhz)δ10.15(s,1h),9.90(s,1h),7.66(d,1h),7.56(m,1h),7.40(m,1h),7.28(m,1h),7.21(d,1h),7.00(m,1h),6.28(s,1h),5.40(sbr,1h),4.80(d,1h),4.46(m,2h),4.16(m,2h),4.10(m,1h),3.69(m,2h),3.42(m,1h),2.95(m,1h),2.60(m,1h),2.05(m,1h),1.82(m,7h),1.68(m,2h),1.40(m,1h),1.30(s,6h),1.26(m,2h),1.15(s,9h),0.90(m,3h)；ms(esi):m/z863.90(m+h).
實施例35
化合物lw100218的合成
將羧酸8f(30mg，0.049mmol)和磺醯胺sm-6c(20.64mg，0.0735mmol)溶於dmf溶液(3.1ml)中，將反應瓶密封好，用氬氣置換3次，將反應瓶置於冰浴中降溫到t≤5℃，滴加diea(0.055ml，0.317mmol)，無明顯放熱，加入hatu(27.95mg，0.0735mmol)，密封好反應瓶，再用氬氣置換3次，升溫至90℃，20min後，降至室溫，繼續反應1.5h。
取反應液用tlc監測，發現原料已反應完全，加入30mlea稀釋後，將反應液轉移至分液漏鬥中，加入飽和食鹽水洗滌3次，分出有機相，加入無水硫酸鈉乾燥，過濾，有機相旋幹得粗品80mg,矽膠柱純化(pe:ea20:1to2:1)，得純純品lw100218，淡綠色固體32mg，收率93.03％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ10.30(s,1h),9.90(s,1h),7.80(d,1h),7.50(m,4h),7.05(m,1h),5.32(m,1h),4.84(m,1h),4.35(m,2h),4.16-4.09(m,4h),3.71(m,2h),3.50(m,1h),3.32(m,1h),2.98(m,1h),2.30(m,2h),2.05(m,1h),1.82(m,7h),1.68(m,1h),1.56(m,1h),1.40(m,1h),1.30(s,6h),1.26(m,2h),1.15(m,10h),0.90(m,2h)；ms(esi):m/z875.88(m+h).
實施例36
化合物13的合成
將化合物4(0.86g,1.5mmol)、乙烯三氟硼酸鉀(0.61g,4.5mmol)以及三乙胺(0.63ml,4.5mmol)溶於15ml無水乙醇中，然後加入pd(dppf)cl2(44mg,0.06mmol)，氬氣置換後加熱至回流攪拌過夜。待反應液冷卻至室溫後，向混合液中加入10％khso4水溶液淬滅反應，然後用ea萃取水相三次。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥後，減壓蒸乾得粗產品，柱層析純化得產物10(0.62g，產率80％)。esi-ms[(m+h+)]:m/z520.28.
將化合物10(0.62g,1.2mmol)溶於4ml無水dcm，加入4ml4nhcl的1,4-二氧六環溶液。室溫攪拌1h後濃縮反應液得胺中間體。將胺中間體以及sm-4(0.30g,1.3mmol)溶於無水dmf中，然後冷卻到0℃。氬氣保護下，加入diea(0.85ml,4.9mmol)以及hatu(0.49g,1.3mmol)。反應液在室溫攪拌一小時，然後加入ea稀釋，5％檸檬酸水溶液洗，水洗，1m碳酸氫鈉水溶液洗，飽和食鹽水洗4次。有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓蒸乾得粗產品，柱層析純化得產品11(0.64g),兩步收率85％。esi-ms[(m+h+)]:m/z633.41.
將化合物11(0.64g,1.0mmol)溶於4ml無水dcm，加入4ml4nhcl的1,4-二氧六環溶液。室溫攪拌1h後濃縮反應液得胺中間體。將胺中間體溶於10ml無水dcm，冷卻至0℃後，加入三乙胺(0.56ml,4.0mmol)以及原料sm-7(0.3g,2.0mmol)，室溫攪拌半小時後，用ea稀釋反應液，有機相用半飽和食鹽水洗兩次，乾燥，過濾，減壓幹得粗產品，柱層析純化得產品12(0.51g),兩步收率78％。esi-ms[(m+h+)]:m/z645.45.
氬氣保護下向底物12(0.51g,0.79mmol)的無水二氯甲烷(158ml)溶液中加入詹氏1b催化劑(30mg,0.04mmol)，然後將反應液加熱回流過夜。待反應液冷卻到室溫後，減壓濃縮得到粗產品，柱層析純化得到大環產品13(0.42g,產率86％)。esi-ms[(m+h+)]:m/z617.55.
實施例37
化合物lw100225的合成
將底物13(0.42g,0.68mmol)溶於thf/meoh(19ml/9.5ml)中,然後慢慢加入1n氫氧化鋰水溶液(10ml)，室溫攪拌2h後減壓濃縮有機溶劑後，用1nhcl調ph至4～5。ea萃取三次，合併有機相，飽和食鹽水洗，有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓蒸乾得中間體羧酸(0.37g，產率90％)。esi-ms[(m-h-)]:m/z601.11.
將中間體羧酸(89mg,0.15mmol)以及sm-6a(60mg,0.26mmol)溶於無水dmf(6ml)中，然後冷卻到0℃。氬氣保護下，加入diea(0.17ml,0.95mmol)以及hatu(85mg,0.22mmol)。反應液在室溫攪拌一小時，然後加入ea稀釋，5％檸檬酸水溶液洗，水洗，1m碳酸氫鈉水溶液洗，半飽和食鹽水洗4次。有機相用無水硫酸鈉乾燥後，減壓蒸乾得粗產品,柱層析純化得最終大環狀多環產品lw100225(106mg，產率88％)。esi-ms[(m+h+)]:m/z815.64.
實施例38
化合物lw100226的合成
按照上述製備化合物lw100225的實施例45，本實施例用與上例中相同的中間體羧酸(0.15mmol)和sm-6b(0.26mmol)反應，純化後得到105mg最終產物lw100226。esi-ms[(m+h+)]:m/z817.69.