含環孢菌素a或fk506或雷怕黴素和黃嘌呤衍生物的組合製劑的製作方法

2023-10-07 23:49:34

專利名稱：：含環孢菌素a或fk506或雷怕黴素和黃嘌呤衍生物的組合製劑的製作方法環孢菌素A(CysA)是一種從真菌提取的環十一肽(CAS登記號59865-13-3；US3,737,433)。1972年就知道了環孢菌素A的免疫抑制作用，然而又花費了大約10年的時間才找到其在治療移植物急性排斥反應上的用途(BorelJ.f.，環孢菌素A，DaleM，ForemanJ.C.，FanT.P.D(編者)免疫學教科書(第三版)，Blackwell科學出版社，牛津大學，1994年，320-329頁)。由於其突出的性質，環孢菌素A如今在免疫抑制中不再能被忽略，儘管在使用它時有時伴隨著一些嚴重的副作用。環孢菌素A的免疫抑制作用選擇性很強，並且集中在T-細胞-依賴性機制上。環孢菌素A抑制T-淋巴細胞的增殖，對T-淋巴細胞的增殖刺激(例如，由抗原和促分裂原產生的)作出反應，該反應伴隨著細胞複製和細胞分化，但也釋放淋巴因子(例如，IL-2，IL-3，和IL-4之類的各種白細胞介素以及γ幹擾素)，以這種方式開始細胞免疫反應。然而在治療可達到的環孢菌素A濃度下，T細胞不依賴性B細胞依賴性機制(例如，經某些抗體的體液免疫反應)不能被抑制。在撤走或洗去所述物質之後，由環孢菌素A產生的免疫抑制是完全可逆的(ThomsonA.W.(編者)，環孢菌素，作用方式和臨床應用，KluwerAcad.出版社，Dordrecht1989)，這說明了這樣一種事實，即這裡我們所論及的反應不是一般的淋巴毒性的反應，相反T-輔助細胞釋放IL-2最初表現出被抑制，這產生次級免疫反應的阻斷。在這種情況下，IL-2基因的表達代表了T-輔助細胞對免疫刺激的生物化學反應，在「信號鏈」過程中，其從細胞膜進入細胞核。雖然單個生物化學鏈元和它們的序列還沒有被詳盡地闡明，但是胞質「核因子」(NF-AT＝激活的T細胞的核因子)的活化和轉移可以被假定為一個引起核內IL-2基因轉錄的一個重要步驟。環孢菌素A抑制由Ca2+/鈣調蛋白/鈣調磷酸酶系統控制的這一NF-AT的激活作用，環孢菌素A在細胞內與稱為「親環蛋白」的蛋白質一起構成複合物(HandschumacherR.E等，科學226(1984)544-546)，結果是，儘管出現免疫刺激，卻無IL-2形成，然而這對細胞免疫反應另外的過程是至關重要的(特別是細胞毒性T細胞形成)。這種免疫抑制作用顯示出環孢菌素A不僅適合於同種異型移植，而且也適合於不同表現形式的自身免疫疾病。事實上，已進行無數的各種嘗試，從風溼性關節炎到牛皮癬到少年糖尿病(SchindlerR(編者)，自身免疫疾病中的環孢菌素，SpringerVerlagBerlin1985；ThomsonA.W等，Br.Med.J.302(1991)，4-5)。雖然有各種成功的結果，但是，環孢菌素A自身卻不能成為用於這些疾病的可供選擇的藥物，其原因是這種物質表現出的毒性。首先是其顯著的腎毒性，在某些情況下是不可逆轉的，本文將要論及，其它一些現象如高血壓、噁心、腹瀉、發抖、耳鳴或齒齦腫大(PalestineA.R等，AM.J.Med.77(1984)，652-656)表現為嚴重發作的併發症，即使由血清水平的系統檢查，這些通常也是不可避免的。同時需要另外考慮-如與任何有效免疫抑制一起產生的最初表現出抑制-機會感染(DawsonT.t等，J.Rheumatol.19(1992)，97)，這樣，通過認真的效益-風險評價，不得不放棄其它在許多情況下有助的環孢菌素A藥物療法。人們以含水提取物的形式使用黃嘌呤已有數百年，茶或咖啡的興奮和利尿性質是廣泛已知的。大約70年以前，茶鹼以純物質被引入到治療肺部疾病(如氣喘)的藥物中，之後的50年是己酮可可鹼(POF)，其被用於外周和腦循環疾病的治療上(Ward等，藥物34(1987)，50-97)。後一黃嘌呤衍生物由於廣泛缺乏對中樞和心臟的作用而與己酮可可鹼明顯不同，後來人們深入研究了其作用機制，在此過程中也檢測到它對免疫系統的作用。這樣，例如，在八十年代初已經發現，POF在鼠模型中顯著地延長心臟和腎移植的成活率，儘管當時這些發現被歸功結於改善的循環現象(KostakisA.J等，IRCS8(1980)，15；KostakisA.J等，IRCS醫學科學10(1982)，77-78)。僅到後來才認識到，POF以及黃嘌呤族的其它代表物與免疫上重要的細胞因子產生相互作用。不僅對腫瘤壞死因子(TNF)(它在許多十分不同的疾病中起中心作用，並且其形成在轉錄水平上被POF抑制(StrieterR.M等，生物化學生物物理研究通訊155(1988)，1230-1236))是如此，而且對其它細胞因子如IL-2或INF(RieneckKt等，免疫學通訊，37(1993)，131-138；Thanhauser等，免疫學80(1993)，151-156；Tilg.H.等，移植56(1993)，196-201)也是如此。因為除此之外還已知POF的抗增殖作用(Singer.J.W.等，骨髓移植10(1992)，19-25)，所以現在將一些免疫調節性質歸結於POF(這曾經引起其具有的用途的廣泛的推測(ZabelP.等，免疫傳染疾病3(1993)，175-180))也就不令人吃驚了。至於黃嘌呤的作用機制，cAMP系統可能對此起重要作用。cAMP(環3』，5』-腺苷一磷酸)是「第二信使」，並且能夠控制細胞的活性狀態細胞內的cAMP水平越高，活化的細胞越少。cAMP水平的高低一般受到兩種不同的機制的影響，在組成中經腺苷酸環化酶(AC)增加形成，或者經磷酸二酯酶(PDE)的抑制降解。POF系列的黃嘌呤傾向於這兩種可能性，即直接經PDE的抑制作用和間接地經前列腺素釋放的刺激作用，這本身也刺激腺苷酸環化酶。實際上，細胞內cAMP水平的增加，是由於黃嘌呤作用(及其所有後果)不被限定在T-淋巴細胞上，然而，這一現象在其它具有免疫能力的細胞中發現，所述細胞如單核細胞或粒細胞，前者導致TNF合成抑制(StrieterR.M.等，生物化學.生物物理研究通訊155(1988)1230-1236)，後者卻抑制「代謝突發」(＝用於防禦細菌侵染的粒細胞溶解酶的無氧基形成和釋放，(HammerschmidtD.E.等，實驗臨床醫學雜誌(J.Lab.Clin.Med.)112(1988)，254-263))，這兩個反應-在血管內誘導的-能夠導致微循環中的大量混亂。這種機制在黃嘌呤族的各種代表物中顯著不同(SemmlerJ.等，免疫學，78(1993)，520-525)，它確實導致細胞因子系統中非常有選擇性的幹涉(例如，IL-1幾乎不受任何影響(TannenbaumC.S.等，免疫學雜誌，142(1989)，1274-1280；EndresS.等，免疫學，72(1991)，56-60)，由此減少黃嘌呤對普通的生物化學主要成份作用的血管的和免疫的模式(SchonhartingM.M.，KarkB.，WernerH.(編者)，老年人心臟-和循環過程疾病，Steinkopff-VerlagDarmstadt，1990PP3-13頁)。然而除了其直接和間接增加cAMP水平總的潛力之外，黃嘌呤必定存在另外的作用點，以允許它們通過不同的、目前仍未知的機制幹擾信號傳導途徑。這可以從這樣一種事實推論出，即在經細胞因子IL-2(它代表通過IL-2受體之免疫反應的cAMP非依賴性刺激作用(SmithK.A.；科學240(1988)，1169-1175))的T-細胞的刺激下，黃嘌呤(而不是環孢菌素A)是這種活化作用的有力下調者。一個代表性的例子將在表3中給出。就POF球面循環-促進作用及其良好的耐受性而言，黃嘌呤與其它藥物(例如抗凝結劑、細胞抑制劑、抑病毒劑、抗菌素或抗真菌劑)形成的共同藥劑(comedication)的各種實例已經是已知的。此外，POF與地塞米松體外的以及與OKT3的藥代動力學相互作用已有報導(HanJ.t等，J.Exp.Med.172(1990)，391-394；WeinbergJ.B.等，血液79(1992)，3337-3343；ZabelP等，移植醫學3(1991)，62-65；AlegreM.L.等，移植52(1991)，674-679)，至於與環孢菌素A的組合，當在免疫問題中採用黃嘌呤時可以得到與免疫抑制劑如環孢菌素A組成的共同藥劑，專利申請EP0493682和EP0490181中已闡述了這種一般的可能性。雖然在這兩個專利中都把免疫抑制性質歸結於黃嘌呤，但是從中沒有產生和其它免疫抑制劑組合的效果。此外，已報導POF與環孢菌素A的積極相互作用，但僅涉及用環孢菌素A藥劑引起的耐受性問題(BrunnerL.J等，腎衰竭11(1989)，97-104；BerkenboomG等，心血管藥理學雜誌(J.Cardiovasc.Pharmacol.)18(1991)，761-768；RossiS.J.等，藥物安全9(1993)，104-131；WO93/17684)，這大概可以通過細胞因子和內皮肽的形成的抑制(Carrier.M.等，Ann.Thorac.Surg.55(1993)，490-492；BennettW.M.等，移植54(1992)，1118-1120)或增加腎前列腺素合成(BrunnerL.J.等，腎衰竭(RenalFail.)11(1989)，97-104；BennettW.M.等，移植54(1992)，1118-1120；BiancoJ.等，血液78(1991)，1205-1211)來理解。即使當在與移植有關的疾病如GvH(移植物-對-宿主)反應中使用POF時，其中用環孢菌素A治療是標準藥物療法的一部分，唯一提出的問題也是環孢菌素A毒性的降低(BiancoJ.等，血液78(1991)，1205-1211；VogelsangG.B.，Curr.Opin.Oncol.5(1993)，276-281)，儘管這種POF的作用不是毫無疑問的(AttatlM.等，血液82(1993)，732-736；vanderJagtR.H.C.等，骨髓移植，13(1994)，203-207)。FK506(Tacrolimus)是一種大環內酯類物質，就分子的作用模式和臨床功效二者而言，其與環孢菌素A十分相似(LiuJ.，當代免疫學(Immunol.Today)14(1993)，290-295；SchreiberS.t.等，當代免疫學(Immunol.Today)13(1992)，136-142)；然而，各自的作用已可以通過劑量(與環孢菌素A相比以係數20至100降低)看出(PetersD.H.等，藥物46(1993)，746-794)。就雷怕黴素(RPM)來說也是如此，RPM和FK506一樣也是大環內酯類物質，胞內結合到與FK506相同的親免素上，儘管接下來的生物化學反應有某種程度的不同(MorrisR.E.，移植回顧，6(1992)，39-87)。不同評價方法的各種模型可以用來檢驗免疫抑制作用。例如，建立不同的體內移植模型，呈現不同的免疫原性，其取決於所採用供體和受體物種並取決於所移植器官的性質。同時，有或沒有藥物幹涉的體內移植器官存活時間長短的比較可以用作免疫反應抑制作用的一種定量測定法。活體外，同樣也存在有不同價值的各類體外模型。最著名的是淋巴細胞活化試驗，在該試驗中，活化作用由淋巴細胞的增殖測定。因此，增殖的抑制總是意味著所使用的實驗條件下的免疫抑制。對淋巴細胞活化作用存在不同的刺激方法-不同物種的淋巴細胞(MLR＝混合淋巴細胞反應)包含HLA-DR型(＝同種異體的)不同抗原的淋巴細胞的共培養物非特異性地互相活化。-CD3試驗通過外源添加抗位於淋巴細胞膜上的CD3標記分子的抗體(OKT3)和共刺激信號，特異性地活化T-淋巴細胞。這一活化經Ca2+/鈣調蛋白/鈣調磷酸酶系統進行，可被環孢菌素A抑制。-CD28試驗通過外源添加抗位於淋巴細胞膜上的CD28標記分子的抗體和共刺激信號，特異性地活化T-淋巴細胞。這一活化是Ca2+非依賴性的，因此不能被環孢菌素A抑制。-IL-2R試驗經外源添加和位於淋巴細胞膜上的IL-2受體(IL-2R)結合的細胞因子IL-2，來特異性地活化淋巴細胞。這一活化作用是Ca2+/cAMP非依賴性的，並且不能被環孢菌素A抑制。現在已經發現，免疫抑制化合物諸如環孢菌素A或FK506或RPM與黃嘌呤衍生物的共同藥劑導致免疫抑制作用超加和性增加。這一點可以從表2清楚地看出，其中與1號化合物(＝黃嘌呤衍生物)組合的每一免疫抑制物與各自的單一物質的作用比較，就MLR測定中的增殖抑制而言，表現出超加和性作用。在小鼠心臟同種異體移殖模型體內條件下，這種協同作用可以確實地得到證實，用治療級劑量以下的1號化合物和環孢菌素A兩者處理接受移植的動物，導致移植器官存活時間的明顯延長(表4)。由於沒有發現對各自藥物水平的幹擾，因此這種作用不能由改變的藥代動力學來解釋，相反，它明顯地是增加藥效的問題。有趣的是，發現黃嘌呤類以與環孢菌素A、FK506或RPM相比不同的機制發揮它們的作用。而在所有體外試驗中使用的1號化合物都是活性的，不管免疫反應的刺激作用是否依賴於cAMP和或Ca2+的特異性胞內水平，環孢菌素A僅僅在MLR和CD3測定中發揮其作用，在CD28或IL-2R試驗中則不發揮作用(表3)。對FK506也是如此，而已知RPM在IL-2R測定中是有效的，但與其它免疫抑制劑相反，在涉及IL-2自身的產生時則是無效的(MorrisR.E.，回顧6(1992)，39-87)，這些數據表明，在黃嘌呤與環孢菌素A或FK506或RPM的任一組合中，所形成的超加和性免疫抑制作用不僅可以定量地增加，而且也可以定性地改變。顯示在特殊的實驗條件下移植物無限期存活-即使是在組合治療停止之後，這可以由免疫耐受性的誘導來解釋(表5)-的體內數據支持這種解釋。單個成分的作用譜由此被這種類型的組合定量和定性地拓寬了。再者，通過減少劑量而不降低功效並增加與之相關的安全性的方法使得治療一些免疫疾病變得可能，所述疾病作為難耐受的、不相容性現象的結果，迄今不能採用免疫抑制療法。同時，所述療法的成本可被適當地降低。因此本發明涉及一種的組合製劑，該製劑包含1)環孢菌素A或FK506或雷怕黴素，2)至少一種式I的黃嘌呤，其中R2是(C1-C4)-烷基；R1或R3基團之一是式II的基團-(CH2)n-A-CH3(II)其中的Aa)是共價單鍵，其中n是整數0，1，2，3，4，5，6或7，b)是基團此時n是整數1，2，3，4，5或6，或者c)是基團此時n整數1，2，3，4，5或6；R4是a)氫原子，或b)(C1-C3)-烷基；R1或R3中的另一基團是a)氫原子，b)(C1-C7)-烷基，c)(C4-C8)-環烷基-烷基，或d)具有1至6個碳原子的烷基，其碳鏈被氧原子間隔，和3)藥物賦形劑，該組合製劑同時、分別或連續用於器官移植中，排除孢環菌素A和3，7-二甲基-1-(5-氧己基)黃嘌呤用於治療骨髓移植的情況。這樣一些式I的黃嘌呤是優選的，即其中R2是(C1-C4)-烷基；R1或R3基團之一是式II的基團，其中A是a)基團或b)基團此時n是這裡是整數3、4、5或6；R4具有以上所述的意義；R1或R3中的另一基團是(C1-C7)-烷基或(C4-C8)-環烷基-烷基。這樣一些式I的黃嘌呤是尤其優選的，即其中R1和R3基團具有以上所述的意義；R2是(C1-C2)-烷基；R4是氫原子或(C1-C2)-烷基。這樣一些式I的黃嘌呤是特別優選的，即其中R2是(C1-C2)-烷基；R1是式II的基團，其中A是a)基團或b)基團此時n是整數3、4、5或6；R4是a)氫原子，或b)(C1-C2)-烷基；R3是(C1-C7)-烷基或(C4-C8)-環烷基-烷基。這樣一些式I的黃嘌呤是更加優選的，其中R2是(C1-C2)-烷基；R1是式II的基團，其中A是a)基團O或b)基團此時n是整數3，4，5或6；R4是a)氫原子或b)(C1-C2)-烷基；R3是(C2-C5)-烷基或(C4-C6)-環烷基-烷基。以下化合物以例舉的方式與環孢菌素A或FK506或雷怕黴素一起用於根據本發明的組合製劑中1，3-二甲基黃嘌呤、3，7-二甲基黃嘌呤、1，3，7-三甲基黃嘌呤、1-己基-3，7-二甲基黃嘌呤、3，7-二甲基-1-(5-氧己基)黃嘌呤、1-(5-羥基己基)-3，7-二甲基黃嘌呤、1，3-二甲基-7-(5-氧己基)-黃嘌呤、7-(5-羥基己基)1，3-二甲基-黃嘌呤、1，3-二正丁基-7-(2-氧丙基)黃嘌呤、1，3-二正丁基-7-(3-氧丁基)-黃嘌呤、3-甲基-1-(5-氧己基)-7-丙基黃嘌呤、1-(5-羥基己基)-3-甲基-7-丙基-黃嘌呤、1-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤、7-乙氧基甲基-1-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基黃嘌呤、1-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基-7-丁基黃嘌呤、1-(5-羥基-5-甲基己基)-3，7-二甲基黃嘌呤、1-(6-羥基-6-甲基庚基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤、3-乙基-1-(5-羥基-5-甲基己基)-7-丙基黃嘌呤、3-乙基-1-(6-羥基-6-甲基庚基)-7-丙基黃嘌呤、7-丁基-3-乙基-1-(6-羥基-6-甲基庚基)-黃嘌呤或7-環丙基甲基-1-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基黃嘌呤。「(C4-C8)-環烷基-烷基」一詞被理解為烷基殘基，其被(C3-C6)-環烷基取代並且其中的碳原子總數為從4至8。這些殘基的例子是環丙基甲基，環丙基戊基，環己甲基或環己戊基。「(C4-C6)-環烷基-烷基」一詞被理解為烷基殘基，其由(C3-C5)環烷基取代並且其中的碳原子總數為從4至6。「器官」一詞被理解為哺乳動物、特別的人的所有器官或器官中的一部分(甚至是若干器官)，例如腎、心臟、皮膚、肝臟、肌肉、角膜、骨、骨髓、肺臟、胰臟、腸或者胃。在器官移植中，會發生器官接收者對移植器官的排斥反應或移植器官對接收者的排斥反應(宿主-對-移植物的反應或移植物-對-宿主的反應)。排斥反應意指接收者身體或移植器官的所有反應，其最終導致被移植器官中的細胞或組織死亡，或對所移植的器官和接收者的機能性能力和生存能力產生有害影響。具體地說，其意指急性和慢性排斥反應。「超加和性作用」被理解為意指大於各單個組分作用的總和的作用。黃嘌呤衍生物由已知的方法來製備(美國專利3,737,433；美國專利4,108,995；美國專利4,833,146)。本發明也涉及式I新的三取代黃嘌呤衍生物，其中R3代表丁基，並且其中a)R1代表5-羥基-5-甲基己基，R2代表甲基，或b)R1代表6-羥基-6-甲基庚基，R2代表乙基。本發明的另一實施方案涉及這樣一些式I新的黃嘌呤化合物，其中R2是(C1-C4)-烷基，並且基團R1或R3之一是式II的基團-(CH2)n-A-CH3(II)其中Aa)是共價單鍵，其中n是整數0，1，2，3，4，5，6或7，b)是基團此時n是整數1，2，3，4，5或6，或c)是基團此時n是整數1，2，3，4，5或6；R4是氫原子或是(C1-C3)-烷基；R1或R3中的另一基團是(C4-C8)-環烷基-烷基。本發明還涉及這樣一些式I的化合物，其中R2是(C1-C4)-烷基；R1或R3基團之一是式II的基團，其中的A是a)基團或b)基團此時n是整數3，4，5或6；R4具有以上所述的意義；R1或R3中的另一基團是(C4-C8)-環烷基-烷基。本發明尤其涉及這樣一些式I的化合物，其中R2是(C1-C2)-烷基；R1是式II的基團，其中的A是a)基團或b)基團此時n是整數3，4，5或6；R4是a)氫原子或b)(C1-C2)-烷基；和R3是(C4-C8)-環烷基-烷基。本發明也涉及這樣一些式I的化合物，其中R2是(C1-C2)-烷基；R1是式II的基團，其中的A是a)基團或b)基團此時n是整數3，4，5或6；R4是a)氫原子或b)(C1-C2)-烷基；和R3是(C4-C6)-環烷基-烷基。本發明尤其涉及新化合7-環丙基甲基-1-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基黃嘌呤。本發明還涉及同時、分別或連續用於治療(自身)免疫疾病的組合製劑，該組合製劑包含1)環孢菌素A或FK506或雷怕黴素，2)至少一種式I的黃嘌呤，和3)藥物賦形劑。所說的疾病特別包括全身性紅斑狼瘡、風溼性關節炎、牛皮癬、天皰瘡、皮炎、肌炎、多發性硬化症、腎綜合病症、腎小球炎、潰瘍性結腸炎或少年糖尿病。本發明還涉及環孢菌素A或FK506或RPM和至少一種式I的黃嘌呤在生產用於抑制下列一些病毒的複製和治療一些癌症之藥物方面的用途，所述病毒如小RNA病毒、披膜病毒、布尼亞病毒、正粘病毒、副粘病毒、彈狀病毒、逆轉錄病毒、沙粒病毒、肝炎B病毒、肝炎C病毒、肝炎D病毒、腺病毒、痘苗病毒、乳頭瘤病毒、皰疹病毒、水痘-帶皰疹病毒或人類免疫缺乏病毒(HIV)，所述癌症如肺癌、白血病、卵巢癌、肉瘤、卡波西肉瘤、腦(脊)膜瘤、結腸癌、淋巴節腫瘤、多形性惡性膠質瘤、前列腺癌或皮膚癌。本發明還涉及環孢菌素A或FK508或雷怕黴素和至少一種式I的黃嘌呤在生產用於治療器官移植後的患者或治療(自身)免疫疾病的藥物方面的用途。本發明還涉及這樣的組合製劑，其包含產生超加合性免疫抑制作用的量的1)環孢菌素A或FK506或雷怕黴素，和2)至少一種式I的黃嘌呤。環孢菌素A(組分1)對式I的化合物的重量比一般從1∶1到1∶50，優選從1∶2到1∶25，特別優選地從1∶5到1∶20。FK506或RPM(組分1)對組分2的重量比一般從1∶50到1∶2500，優選從1∶100到1∶1250，特別優選地從1∶250到1∶1000。按照發明的組合製劑可以以藥物形式的劑量單位存在，所述藥物形式如膠囊(包括微膠囊)，片劑(包括包衣片和藥丸)或栓劑，採用膠囊時，就可能使膠囊材料起到賦形劑的作用，所包含的物質可以是如粉劑、凝膠、乳狀液，彌散液或溶液。然而，製備含兩種活性化合物組分1)和2)的口服(經口的)製劑是特別有利並且簡單的，所述製劑包含計算量的活性化合物以及任何所需的藥物賦形劑。適當的製劑(栓劑)也可以用於直腸療法。經眼、非腸道(腹膜內、血管內、皮下或肌肉內)或口頭施用包含按照本發明之組合物的溶液也是可能的。片劑、藥丸或者顆粒可以按常規方法如擠壓、浸漬或流化床方法或全包衣法製備，並且包含賦形劑以及其它的常用輔劑，如明膠、瓊脂糖、澱粉如土豆、玉米或者小麥澱粉、纖維素如乙基纖維素、矽石、各種食糖如乳糖、鹼式碳酸鎂和/或磷酸鈣。包衣溶液通常包含食糖和/或澱粉糖漿，通常另外還包含明膠、阿拉伯樹膠、聚乙烯吡咯烷酮、合成纖維素亞硫酸酯、表面活性物質、增塑劑、色素和按照現有技術的類似的添加劑。為了製備藥物形式，可以使用任何常用的流動調節劑、潤滑劑或配伍劑(glidant)如硬脂酸鎂，和釋放劑。所述製劑優選地具有包衣/核心片劑或多層片劑形式，式I的黃嘌呤位於包衣中或位於核心或位於多層中，而環孢菌素A或FK506或RPM位於核心或位於包衣中或位於另一層中。所述活性化合物組分也可以以貯存物的形式存在，或吸附在貯存材料(如，基於纖維素或聚苯乙烯樹脂的那些，如羥乙基纖維素)上，或包含在貯存材料中。合適的黃嘌呤組分也是市售的藥物製劑，它隨時間推移而釋放，如僅在腸道中，活性化合物的緩釋也可以通過提供與常規的腸溶衣相關的層或隔室來獲得。所採用的劑量當然取決於各種因素，如被治療的生物體(例如人或動物，年齡，體重，總的健康狀況)、症狀的嚴重程度、治療的疾病，可能的併發症、(如果存在的話)用其它藥物進行的伴隨治療的性質或治療的頻率，所述劑量是一般一天施用幾次，最優選的是一天施用1至3次。單獨的活性化合物的數量必須在以下給定的範圍內，例如，在被治療的生物體可耐受的和有效的劑量範圍內。由此，採用按照本發明的組合物的合適的治療法包括，施用如1、2或3至8種單個劑量的按照本發明的下列組合製劑1)25毫克至100毫克、優選地是10至20毫克環孢菌素A，和2)100至1200毫克、優選400至600毫克式I的黃嘌呤，該用量自然取決於單個劑量的數量和被治療的疾病，單個劑量包含同時給藥的若干劑量單位也是可能的。口服劑量一般最多5至10毫克/公斤/天環孢菌素A(組分1)，而不能超過100ng/ml至對200ng/ml的血清水平，至多20毫克/公斤/天式I的化合物，特別是在口服或直腸給藥的情況下如此。在靜脈注射或腹膜內給藥的情況下，這些活性化合物日劑量的上限要減少40％至50％。如果用FK506或RPM代替環孢菌素A，則劑量要明顯低些。在口服的情況下，一般是0.02至0.2mg/kg/天，優選是0.035至0.1mg/kg/天，更優選是0.04至0.08mg/kg/天，這時FK506或RPM用作組分1。按照本發明的組合製劑也可以包含組合包(pack)或組合物，其中的成分被並排放置一起，因此能夠同時、分別或順序地施用到一個和相同的人或動物體上。實施例1混合的人淋巴細胞反應(MLR)測定人外周血單核細胞(PBMC)是經菲可帕克(Pharmacia，Uppsala)密度梯度離心法從健康志願者獲得的，將其在Hank溶液(HBSS)中洗滌，再懸浮在培養基(RPMI-1640+10％牛胎血清+1％種青黴素/鏈黴素，Biochrom，柏林)中，給出每毫升1×106個細胞的細胞計數。把100微升所述PBMC與100微升放射處理過的PBMC在微滴板的孔中混合。被測試物(不論單獨的或是在組合物中的)也加入到PBMC中。於37℃在包含5％CO2的潮溼氛圍中培養微滴板五天。然後將1μCi的3H-胸苷加入到這些細胞中，在以上所述的條件下培養8小時。接著將細胞收集到玻璃纖維濾膜上，用β計數器測定其摻入的放射性活度。表1顯示在MLR測定中、在可比較的條件下(全部100μM)，不同黃嘌呤衍生物對淋巴細胞增殖的作用。抑制作用以相對於未抑制的對照(其相應於0％)樣的百分比給出。表2顯示在MLR測定中，當1號化合物分別與環孢菌素A、FK506或RPM組合時，對淋巴細胞增殖的超加和性作用。抑制作用以相對於未抑制的對照(其相應於0％)的百分比給出。表1表2*在所述條件下，單獨的1號化合物(10μM)抑制淋巴細胞增殖小於5％。實施例2CD3和CD28測定A)T-淋巴細胞的分離從PBMC純化T-淋巴細胞。將Lympho-KWIK-T(OneLambda公司，洛杉磯，加利福尼亞，美國)，一種抗單核細胞和抗B細胞和補體的單克隆抗體混合物，以及單克隆抗NK和抗單核細胞抗體與Leu11b(抗CD-IgM)和Leu7(抗-CD57，IgM)的混合物一起用於純化上。純化涉及以下方法步驟-用密度梯度從外周血中分離PMBC。-經冷凝集除去單核細胞。-於37℃將所獲得的30×106個細胞與0.8mlLympho-KWIK-T一起培養1小時。-洗滌細胞三次，然後在4℃與單克隆抗-NK和抗-單核細胞抗體混合物一起培養30分鐘。-再洗滌細胞一次，並於37℃再與0.8mlLympho-KWIK-T一起培養1小時。-洗滌細胞三次，重懸於培養基中。該細胞製劑含有多於97％的T-淋巴細胞(D3+)。其由流式細胞計量術測定。B)試驗方法在平底微滴板中的200μl培養基(RPMI1640；Gibco，LifeTechnologiesGmbH，德國，與10％牛胎血清，青黴素和鏈黴素混合)中培養5×104T-淋巴細胞，所述微滴板包含單克隆OKT3或抗-CD28抗體(在各種情況下，所述單克隆抗體各1微克/毫升)和佛波醇肉豆蔻酸醋酸鹽(PMA；SigmaChemie，瑞士；5ng/ml)。在每種情況下的相同的4批於37℃下5％CO2氛圍中培養。將待試物質以最終給定的濃度加入到這些細胞中。64小時後，每種情況下將1μCi的3H-胸苷加入進細胞中。8小時後，把細胞收集到玻璃纖維濾膜上，用與實施例1相同的方法測定其摻入的放射性活度。由被測物質引起的T-淋巴細胞增殖的抑制百分比是基於以無被測物質的對照樣作為無免疫刺激的基底值獲得的。結果參見表3(實施例3下面)。實施例3IL-2R測定洗滌鼠淋巴細胞系CTLL-2(ATCC，Rockville/美國)，重懸於培養基中，給出每毫升8×104個細胞的細胞計數。將相當於4×103個細胞的50微升該溶液與30微升小鼠重組IL-2(最終濃度是0.35ng/ml)和20微升不同濃度的待試物質或載體在微滴板的孔中混合。於37℃在CO2培養箱中培養48小時後，加入10微升WST-1試劑(BoehringerMannheim)，在37℃進一步培養4小時後，在450nm對630nm(BehringEL-31分光光度計)測定樣品的光密度。線粒體氫化酶引起的四唑鹽WST-1的裂解與能生存的細胞數量相關聯，因而也與增殖的程度相關聯。數據以％抑制給出，其是基於無抑制的對照樣作為無IL-2刺激的基底值獲得的。表3總結了環孢菌素A和1號化合物在所有採用的體外測試系統中各自的作用。各自的數據是按照實施例1(MLR測定)、實施例2(CD3和CD28測定)和實施例3(IL-2測定)得到的。實施例4移植模型將WAKH大鼠(體重150-200克)的心臟異位移植進雄性PVG大鼠(體重200-250克)的腹膜腔中。移植是在麻醉下進行的。每日進行移植心臟的觸診功能控制，排斥被定義為心跳停止。每天經胃管施用單獨的或組合的被試物質一次。另外，藉助滲透微管(其允許連續地靜脈內施用日劑量24小時以上)胃腸外施用黃嘌呤衍生物。表4在同種異型大鼠模式中(WAKH(供體)→(PVG(受體))異位心臟移植的存活時間；所有藥物用管飼法每日口頭施用一次。*動物死亡，為除血目的穿刺其原心臟後，移植的心臟仍然跳動。表5在同種異型老鼠模型中(WAKH(供體)→(PVG(受體))異位心臟移植的存活時間；黃嘌呤衍生物由滲透微型泵胃腸外施用。*在泵中有妨礙/終止給藥的凝塊；P.O.為口服；i.v.為胃腸外實施例57-丁基-3-乙基-1-(6羥基-6-甲基庚基)-黃嘌呤(11號化合物)4.7克7-丁基-3-乙基黃嘌呤、2.8克碳酸鉀和4.4克的1-溴-6-羥基-6-甲基庚烷在100毫升二甲基甲醯胺中於120℃攪拌7小時，經趁熱吸濾混合物，使濾液在減壓下濃縮，將殘留物吸收進三氯甲烷中，首先用2N氫氧化鈉洗滌，然後用水洗清，直到溶液呈中性，並用硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾除去溶劑，由此獲得實質上定量產生的油狀粗產物，它可容易地經矽膠柱(用三氯甲烷/甲醇(10∶1)混合物為流動相)純化，接著從添加有石油醚的二異丙基醚中最終重結晶。C19H32N4O3(分子量＝364.5)；熔點75-77℃用與實施例5類似的方法獲得下面的化合物實施例61-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基-7-丁基黃嘌呤(8號化合物)用7-丁基-3-甲基黃嘌呤和1-氯-5-羥基-5甲基己烷為起始原料製備標題化合物。C17H28N4O3(分子量＝336.4)；由NMR質譜分析鑑別油狀產品和確定其特徵。實施例77-環丙基甲基-1-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基黃嘌呤(12號化合物)用7-環丙基甲基-3-甲基黃嘌呤和1-氯-5-羥基-5-甲基己烷為起始原料製備標題化合物。C17H26N4O3(分子量＝334.4)；熔點92-94℃。權利要求1.一種組合製劑，該製劑包含1)環孢菌素A或FK506或雷怕黴素，2)至少一種式I的黃嘌呤，其中R2是(C1-C4)-烷基；R1或R3基團之一是式II的基團-(CH2)n-A-CH3(II)其中的Aa)是共價單鍵，此時n是整數0，1，2，3，4，5，6或7，b)是基團此時n是整數1，2，3，4，5或6，或者c)是基團此時n是整數1，2，3，4，5或6；R4是a)氫原子或b)(C1-C3)-烷基；R1或R3中的另一基團是a)氫原子，b)(C1-C7)-烷基，c)(C4-C8)-環烷基-烷基，或d)具有1至6個碳原子的烷基，其碳鏈被氧原子間隔，和3)藥物賦形劑，該組合製劑同時、分別或連續用於器官移植中，排除孢環菌素A和3，7-二甲基-1-(5-氧己基)黃嘌呤用於治療骨髓移植的情況。2.如權利要求1所要求的組合製劑，其中所包含的黃嘌呤是這樣一些式I的黃嘌呤，其中R2是(C1-C4)-烷基；R1或R3基團之一是式II的基團，其中A是a)基團或b)基團此時n是這裡是整數3、4、5或6；R4是權利要求1中所限定的；R1或R3中另一基團是(C1-C7)-烷基或(C4-C8)-環烷基-烷基。3.如權利要求1或2所要求的組合製劑，其中所包含的黃嘌呤是這樣一些式I的黃嘌呤，其中R1和R3基團是權利要求2中所限定的；R2是(C1-C2)-烷基；R4是氫原子或(C1-C2)-烷基。4.如權利要求1-3中一個或多個所要求的組合製劑，其中所包含的黃嘌呤是這樣一些式I的黃嘌呤，其中R2是(C1-C2)-烷基；R1是式II的基團，其中A是a)基團或b)基團此時n是整數3、4、5或6；R4是a)氫原子或b)(C1-C2)-烷基；R3是(C1-C7)-烷基或(C4-C8)-環烷基-烷基。5.如權利要求1-4中一個或多個所要求的組合製劑，其中所包含的黃嘌呤是這樣一些式I的黃嘌呤，其中R2是(C1-C2)-烷基；R1是式II的基團，其中A是a)基團或b)基團此時n是整數3，4，5或6；R4是a)氫原子或b)(C1-C2)-烷基；R3是(C2-C5)-烷基或(C4-C6)-環烷基-烷基。6.如權利要求1-5中一個或多個所要求的組合製劑，其中所包含的黃嘌呤是下列化合物之一1-己基-3，7-二-甲基黃嘌呤、1-(5-羥基己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤、1-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤、7-丁基-1-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基黃嘌呤、1-(5-羥基-5-甲基己基)-3，7-二甲基黃嘌呤、1-(6-羥基-6-甲基庚基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤、3-乙基-1-(5-羥基-5-甲基己基)-7-丙基黃嘌呤、3-乙基-1-(6-羥基-6-甲基庚基)-7-丙基黃嘌呤、7-丁基-3-乙基-1-(6-羥基-6-甲基庚基)黃嘌呤或7-環丙基甲基-1-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基黃嘌呤。7.如權利要求1至6中一個或多個所要求的組合製劑，該製劑包含產生超加合性免疫抑制作用量的1)環孢菌素A或FK506或雷怕黴素，和2)至少一種式I的黃嘌呤。8.如權利要求1至7中一個或多個所要求的組合製劑的應用，用於生產用作器官移植後的免疫抑制治療或(自身)免疫疾病免疫抑制治療的藥物。9.如權利要求8所要求的組合製劑的應用，用於生產用於治療下列疾病的藥物全身性紅斑狼瘡、風溼性關節炎、牛皮癬、天皰瘡、皮炎、肌炎、多發性硬化、腎綜合病症、腎小球炎、潰瘍性結腸炎或少年糖尿病。10.如權利要求1至7中一個或多個所要求的組合製劑的應用，用於生產抑制病毒複製的藥物，所述病毒例如為小RNA病毒、披膜病毒、布尼亞病毒、正粘病毒、副粘病毒、彈狀病毒、逆轉錄病毒、沙粒病毒、肝炎B病毒、肝炎C病毒、肝炎D病毒、腺病毒、痘苗病毒、乳頭瘤病毒、皰疹病毒、水痘-帶皰疹病毒或人類免疫缺乏病毒(HIV)。11.如權利要求1至7中一個或多個所要求的組合製劑的應用，用於生產治療癌症的藥物，所述癌症例如肺癌、白血病、卵巢癌、肉瘤、卡波西肉瘤、腦(脊)膜瘤、結腸癌、淋巴節癌、多形性惡性膠質瘤、前列腺癌及皮膚癌。12.一種製備如權利要求1至7中一個或多個所要求的組合製劑的方法，包括以常規方式處理1)環孢菌素A或FK506或雷怕黴素，2)如權利要求1所要求的式I的黃嘌呤，和3)藥物賦形劑，以給出藥學上的給藥形式。13.如權利要求1所要求的式I的化合物，其中R2是(C1-C4)-烷基，並且基團R1或R3之一是式II的基團-(CH2)n-A-CH3(II)其中Aa)是共價單鍵，其中n是整數0，1，2，3，4，5，6或7，b)是基團此時n是整數1，2，3，4，5或6，或c)是基團此時n是整數1，2，3，4，5或6；R4是氫原子或是(C1-C3)-烷基；R1或R3中的另一基團是(C4-C8)-環烷基-烷基。14.如權利要求13所要求的式I的化合物，其中R2是(C1-C4)-烷基；R1或R3基團之一是式II的基團，其中的A是a)基團或b)基團R4此時n是整數3，4，5或6；R4具有以上所述的意義；R1或R3中另一基團是(C4-C8)-環烷基-烷基。15.如權利要求13和14所要求的式I化合物，其中R2是(C1-C2)-烷基；R1是式II的基團，其中的A是a)基團或b)基團此時n是整數3，4，5或6；R4是a)氫原子或b)(C1-C2)-烷基；和R3是(C4-C8)-環烷基-烷基。16.如權利要求13-15中一個或多個所要求的式I化合物，其中R2是(C1-C2)-烷基；R1是式II的基團，其中的A是a)基團或b)基團此時n是整數3，4，5或6；R4是a)氫原子或b)(C1-C2)-烷基；和R3是(C4-C6)-環烷基-烷基。17.7-環丙基甲基-1-(5-羥基-5-甲基己基)-3-甲基黃嘌呤。18.如權利1所要求的式I化合物，其中R3代表丁基，並且其中a)R1代表5-羥基-5-甲基己基，R2代表甲基，或者b)R1代表6-羥基-6-甲基庚基，R2代表乙基。全文摘要本發明提供了一種組合製劑，該製劑包含環孢菌素A和黃嘌呤衍生物或者FK506和黃嘌呤衍生物或者雷怕黴素和黃嘌呤衍生物，該製劑適用於器官移植、癌症、病毒病或自身免疫疾病，例如全身性紅斑狼瘡、風溼性關節炎、牛皮癬、天皰瘡、皮炎、肌炎、多發性硬化、腎綜合病症(特別是腎小球炎)、潰瘍性結腸炎或少年糖尿病。文檔編號A61K38/12GK1162919SQ95195562公開日1997年10月22日申請日期1995年8月7日優先權日1994年8月25日發明者M·肖恩哈廷,U·格伯特,M·韋爾申請人:赫徹斯特股份公司,卡託利克勒芬大學