抗動脈粥樣硬化血栓形成的化合物在製備用於治療血管障礙的藥物中的用途的製作方法

2023-10-08 04:50:49

專利名稱：抗動脈粥樣硬化血栓形成的化合物在製備用於治療血管障礙的藥物中的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及血栓烷_前列腺素(TP)受體的特異性拮抗劑在製備用於在先前患有 腦血管意外(CVA)的患者中治療血管障礙，特別是用於在先前患有腦缺血意外(CIA)或短 暫性缺血發作(TIA)的患者中減少腦血管和心血管事件的藥物中的用途。
背景技術：
血栓烷A2 (TXA2)為花生四烯酸的不穩定代謝物，在許多心血管障礙的發病機理中 涉及到它。 TXA2和其它的花生四烯酸代謝物如內過氧化物(PGG2/PGH2) 、 HETE和異構前列腺 素(isoprostanes)是被稱為TP受體(血栓烷-前列腺素_內過氧化物)的共同受體的配 體。它們與TP受體的結合帶來有害的作用血小板活化和凝集、內皮功能異常、血管收縮和 細胞增生。 動脈粥樣硬化是一種慢性炎症疾病，造成炎症反應的有害活性劑為以氧化形式在 內皮下積聚的LDL膽固醇。在動脈粥樣硬化的過程中在幾個水平上涉及炎症l)內皮和單 淋巴細胞募集的活化；2)促炎細胞因子的局部和全身性生成；3)造成纖維帽蛋白質的降解 和斑塊的去穩定化的細胞外基質蛋白酶(金屬蛋白酶)的生成；4)斑塊細胞凋亡的誘導和 促凝血性脂核的形成。 所形成的動脈粥樣硬化斑在局部炎症和氧化應激的剌激下可破裂，引起血小板在 表面的凝聚，從而導致阻塞。斑塊上血栓形成的出現被稱為"動脈粥樣硬化血栓形成"。
破裂主要(但不僅僅)涉及擁有大的脂核(佔斑塊總體積的40%以上)和富含巨 噬細胞而平滑肌細胞含量很少的纖維帽的斑塊。它是由於纖維帽經受的血液動力學應激和 控制它對抗破裂的內固性之間存在不平衡的結果。 在近來的對於動脈粥樣硬化的治療策略中，針對斑塊中的炎症似乎是重要的。動
脈粥樣硬化斑的穩定化需要降低它的炎症組分以有利於它的纖維組分。 近來，以預防與心血管和神經血管系統中血栓烷^的大量生成有關的現象為目
的，進行了大量的研究。在這些拮抗劑中，那些在專利說明書EP648741中描述的拮抗劑已
被證實是TP受體的強大的和選擇性的拮抗劑，其通過口服途徑施用是有活性的，並擁有長
的作用時間。 更具體地，以外消旋形式或以旋光純異構體形式以及其可藥用鹽形式存在的式 (I)的3-{6-[(4-氯苯基磺醯基)氨基]_2-甲基-5，6，7，8-四氫萘-1-基}丙酸
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(I) 是一種特異性的TP受體拮抗劑，已發現其具有強大的抗動脈粥樣硬化血栓形成 作用。 式(I)化合物通過阻滯由血栓烷A2和其它的TP受體配體誘導的血小板聚集起作 用，而不管它們的來源如何(血小板或血小板外)。它還通過抑制由血栓烷4誘導的血管 收縮和通過對抗血管壁的內皮功能異常、增生和炎症而進一步起作用。 式(I)化合物相應地具有抗血小板凝集、抗血栓形成、抗炎、抗增生和抗血管收縮 的性質。 它在動脈粥樣硬化症中的有益作用可能是由於抑制單核細胞/巨噬細胞浸潤進 入斑塊的結果，這可能是通過抑制血管粘著分子的表達而實現的。由於這些炎症細胞影響 著斑塊的穩定性，在長的時間段內降低單核細胞募集入血管壁可穩定斑塊。除此之外，該化 合物的抗血栓形成作用還可降低血管炎症以及通過血小板粘附於內皮而控制的內皮活化， 並可降低血小板、內皮、平滑肌細胞和單核細胞之間的促凝血和促氧化相互作用，該相互作 用在本質上是炎症性的。 在歐洲專利說明書EP 0 648 741中，已經描述了 3-{6-[(4_氯苯基磺醯基)氨 基]-2-甲基-5， 6， 7， 8-四氫萘-1-基}丙酸，它的鹽和它的旋光異構體、其製備和其在治 療學上的用途。

發明內容
本申請人現已令人驚奇地發現，以光學活性異構體形式和鹽形式存在的式(I)化
合物，優選構型(R)和鈉鹽形式，具有有價值的性質，使得它可用於在患有先前的腦血管意 外的患者中治療血管障礙，特別是在患有先前的CIA或TIA的患者中降低腦血管和心血管 事件的發生。 令人驚奇地，優選以鈉鹽形式存在的(R)構型的式(I)化合物的作用與其它的抗 血小板凝集劑有所不同的確，在低劑量時，阿司匹林並不具有直接的抗動脈粥樣硬化或抗 動脈粥樣硬化的作用。它並不抑制新血管內膜的形成和炎症細胞在血管壁的聚積。對於氯 吡格雷來說，也沒有提出其在人類中的血管作用。作為氯吡格雷的靶的P2Y12受體在內皮 細胞中並不存在。 我們已經令人驚奇地證實了式(I)化合物在動物模型(鈉負載的SHR-SP大鼠) 中的次級保護性質。令人驚奇地，這些性質似乎與化合物的引起氧化應激降低作用有關。 在許多出版物中已經證實了在腦病理學中氧化應激的重要性(Margaill I， Plotkine M， Le麗et D， Free Radical Biology &Medicine， 2005， 39， 429-443 ;Crack PJ， Taylor肌 Free Radical Biology&Medicine， 2005， 38， 1433-1444)。在腦血管病理學中式(I)化合物 對氧化應激的作用的發現提示它在如本發明所述的研究中的可能用途。
SHR-SP大鼠代表著原發性高血壓的比較明確的實驗模型。這些大鼠形成了嚴重 的自發性高血壓，這迅速地導致了腦損傷的形成。它們對富鹽飲食高度敏感，富鹽飲食可導 致惡性腎硬化的產生(Griffin KA， ChurchillPC， Picken， Webb RC， Kurtz TW， Bidani AK， Am. J. Hypertens. ，2001,14(4 Pt 1) :311-20)，導致動脈壓和氧化應激的升高(Park JB， Touyz RM， Chen X， Schiffrin EL， Am. J. Hypertens. ， 2002， 15 (lPtl) :78-84 ;Ma皿ingRD， Meng S， Tien N， Acta Physiol. Scand. ， 2003， 179 :243—250)並加重了血管損傷和心臟肥 大(Kyselovic J，Morel N， Wibo M，Godfraind T， J. Hypertens. ，1998，16(10) :1515-22)。 此外，SHR-SP大鼠是可自發產生複雜性腦血管障礙的唯一動物模型(Volpe M， Russo R， Veccione C， Savoia C， Piras 0， Gigante B， Lindpaintner K， Rubattu S， J. Hypertens.， 1998,16 :S31-S35 ;Guerrini U， Sironi L， Tremoli E， Cimino M， Polio B， Calvio AM， Paoletti R，Asdente M， Stroke, 2002， 33 (3) :825-30)。通過ESR(電子自旋共振)光譜進 行的SHR-SP大鼠腦分析表明與血壓正常的WKY大鼠相比氧化應激的水平升高了 (Miyazaki H，Shoji H，Lee MC，Redox R印.，2002， 260-2657)。有人提出氧化應激的升高可能導致血腦 屏障的石皮壞(Kim_Mitsuyama S，Yamamoto E，Tanaka T，Zhan Y， Izumi Y， Izumiya Y， Ioroi T，Wanibuchi H， Iwao H， Stroke, 2005， 36 :1077-1082)，其是由過氧化作用和DNA及蛋白質 損傷導致的細胞脂質膜的損傷引起的。這些腦的障礙經常與導致動物死亡的腦血管意外發 生之前的臨床行為體徵(昏睡或挑釁、驚厥、肢體癱瘓)有關。 在急性腦意外的預防中，鈉負載的SHR-SP大鼠模型似乎是評價式(I)化合物的一 個良好的靶。的確，選擇10至15周之間的治療期提供了腦發作的復發事件的極好的模型。 在10周之前，大鼠已經經歷了非致命的腦發作(例如昏睡、驚厥)，作為結果，我們可以分析 是否式(I)化合物可預防或延緩繼發的腦意外的發生。 在這一方面，該大鼠模型類似於人的情況，更具體地，類似於在本專利申請說明書
中描述的研究的情況，在該情況中，患者已經有了第一次腦意外，且研究涉及用式(I)的化
合物進行治療以預防有生命危險的第二次事件(腦或心血管)的作用。 相應地，本發明涉及以光學活性異構體形式並優選以鹽形式存在的式(I)化合物
在製備用於在患有先前的腦血管意外的患者中治療血管障礙，特別是在患有先前的CIA或
TIA的患者中降低腦血管和心血管事件的發生的藥物組合物中的用途。 在式(I)化合物的加成鹽中，可以提到但不僅限於與可藥用鹼的加成鹽，例如鈉
鹽、鉀鹽、叔丁胺鹽、二乙胺鹽等。 優選地，使用的鹽是鈉鹽。 在根據本發明的組合物中，式(I)化合物優選具有絕對構型(R)。 將以適用於口服、腸胃外、經皮、鼻腔、直腸和經舌的途徑施用的形式提供藥物組
合物，特別是可注射的製劑、片劑、舌下片、glossettes、明膠膠囊、膠囊、錠劑、栓劑、乳膏、
軟膏、皮膚凝膠等形式。 根據本發明的藥物組合物包含一種或多種選自稀釋劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑、 吸收劑、著色劑、甜味劑等的賦形劑或載體。 使用的劑量不根據患者的性別、年齡或體重、障礙的性質或任何相關的治療而變 化。 使用式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽進行研究。
在根據本發明的組合物中，對於式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽而言，活性成分 的量為5至100mg。優選地，式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽的日劑量為30mg每天。


圖1顯示了與載體相比，用式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽進行處理對動物存 活率的影響。 圖2顯示了與載體相比，用式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽進行處理對動物心 髒肥大的影響。 圖3顯示了與載體相比，用式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽進行處理對動物氧 化應激的影響。 圖4顯示了與載體相比，用式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽進行處理對動物急 性炎症的影響。
具體實施方式

臨床前資料 式(I)化合物(R)異構體的鈉鹽的抗血栓形成作用在頸動脈血栓形成的多種模型 中得到證實，體內血管電解作用(狗)、機械損傷(豚鼠)和電剌激(大鼠)，在體外(ex Vivo):通過玻璃毛細管的頸動脈-頸動脈動脈旁路式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽以 劑量依賴的方式延長了阻塞時間。
在實驗模型中探索性研究了式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽的抗增生、抗動脈 粥樣硬化和抗炎作用它顯著地降低了動脈粥樣硬化損傷的表面積，血管壁的厚度和內膜 /中膜比值而沒有降低血清膽固醇的水平。它也抑制了巨噬細胞浸潤進入血管壁和粘著分 子特別是標誌物如內皮素、ICAM和VCAM的表達。
動物模型鈉負載的SHR-SP大鼠
材料和方法
動物的監察 將在它們的飲用水中含有1 % NaCl的10周齡雄性SHR-SP大鼠(Charles River) 隨機分成兩組，並用含有式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽(30mg/kg/天)的飼料或不含 該化合物的飼料進行處理。 在第一個研究中，通過計算在開始治療後每天的動物存活百分數確定每組的存 活。 在第二個研究中，將10至15周齡之間的大鼠監察5周，然後處死以定量氧化應激 的尿標誌物(8-OH-dG)和反映急性炎症的血漿標誌物(T-激肽原(thiostain)，在大鼠中其 是CRP的等同物)並確定心臟肥大。
生理學參數 在監察的最後24小時，將動物置於單個的代謝籠中並在無菌試管(200 的2mM EDTA)中收集尿液。測量尿液並通過ELISA測定(Oxis， Bioxytech)定量8-羥基-2'-脫 氧鳥苷(8-0H-dG)的生成。 通過腹膜注射戊巴比妥鈉(50mg/kg， Ceva laboratories)將大鼠麻醉。從頸動脈取血樣(將樣品置於5000IU/ml的肝素中)以通過ELISA測定(LifeDiagnostics)測量 T-激肽原的生成。將心臟切除，擦乾並稱重，通過將每隻動物的心臟乾重與體重相除實現測
量的標準化，通過這一方法確定心臟的肥大。
統計 將結果以均值±S. E. M.報告。如果Student's t檢驗的P < 0. 05則認為差別是 顯著的。動物的存活在Kaplan-Meier圖上表示，在log-rank檢驗後P < 0. 05則認為是顯 著的。 題 1)動物的存活百分數(圖1) 計算兩組大鼠的動物存活百分數。對於載體組，一半的大鼠在開始監察後57天死 亡，而在用式(I)的化合物的(R)異構體的鈉鹽進行處理的組，一半的大鼠在處理的99天 後死亡。 該結果表明式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽可預防動物瀕臨死亡並因而提高了 存活百分數。 2)心臟肥大(圖2) 在載體組的大鼠中心臟的質量有很大的增加，這一點可從該器官的大小的增加或 肥大中得到反映。當將這些動物用式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽進行處理時，心臟的 肥大較不顯著。 該結果表明式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽可減慢心臟肥大的速度。 [OO57] 3)氧化應激(圖3) 載體組的大鼠呈現出氧化應激，其可通過尿標誌物如8-0H-dG而確定。與載體組 的動物相比，接受式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽組的動物在24小時內出現在尿中的 8-0H-dG的總量得到降低。 這一結果表明式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽可以降低氧化應激的水平。
4)急性炎症(圖4) T-激肽原是在炎症急性階段產生的蛋白質。該蛋白質在載體組大鼠的血漿中顯著 增加。當用式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽處理動物時，血漿中T-激肽原的量較低。
該結果表明式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽可減慢急性炎症的確立。
臨床資料 還在缺血性CVA的高危患者中評價了式(I)化合物的(R)異構體的鈉鹽的體外 (ex vivo)抗血栓形成活性，在給藥IO天后式(I)化合物優於阿司匹林的優越性在灌注室 模型的主要參數中得到證實(血栓的總表面積和密集表面積，％粘著)。在本研究中，式 (I)化合物的(R)異構體的鈉鹽對於被測定的炎症標誌物(sVCAM、 sPAI-l、 sP-選擇蛋白、 凝血調節蛋白)也有作用。 給具有高的心血管風險和異常充血試驗且正用阿司匹林治療的動脈粥樣硬化患 者單次或慢性施用式(I)的化合物的外周血管運動反應研究證實了式(I)化合物在通過激 發的充血試驗(橈動脈的生理剌激)評價的內皮依賴性血管舒張中優於安慰劑。該優越性 無論何種劑量，無論是單次施用或重複施用(15天)均可觀察到，該血管舒張作用是在施用 藥物後約2小時評價的。
: (R)異構體形式的式(I)化合物、優選鈉鹽形式，具有抗血小板凝集、抗血栓形成、 抗炎、抗增生和抗血管收縮的性質，因此可作為抗動脈粥樣硬化血栓形成劑在動脈粥樣硬 化血栓形成疾病中、特別是在具有先前的腦缺血意外的患者中用於心血管意外的次級預 防。
權利要求
包含旋光異構體或其可藥用鹽形式的式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺醯基)氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氫萘-1-基}丙酸用於製備在患有先前的腦血管意外的患者中治療血管障礙的藥物的藥物組合物
2. 根據權利要求1的藥物組合物，其特徵在於式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺醯基)氨 基]-2-甲基-5，6，7，8-四氫萘-1-基}丙酸以構型(R)的旋光異構體形式存在。
3. 根據權利要求1或2的藥物組合物，其特徵在於構型(R)的式(I)的3-{6-[(4-氯 苯基磺醯基)氨基]_2-甲基-5， 6， 7， 8-四氫萘-1-基}丙酸以鈉鹽形式存在。
4. 根據權利要求1至3中任何一項的藥物組合物，其特徵在於式(I)化合物的(R)異 構體的鈉鹽的量為5至100mg。
5. 根據權利要求1至4中任何一項的藥物組合物，其特徵在於式(I)化合物的(R)異 構體的鈉鹽的量為30mg每天。
全文摘要
抗動脈粥樣硬化血栓形成的化合物在製備用於治療血管障礙的藥物中的用途。本發明涉及TP受體的特異性拮抗劑在製備用於在先前患有腦血管意外的患者中治療血管障礙，特別是用於在先前患有腦缺血意外(CIA)或短暫性缺血發作(TIA)的患者中減少腦血管和心血管事件的藥物中的用途。
文檔編號A61P9/10GK101693025SQ20091020503
公開日2010年4月14日 申請日期2007年4月6日 優先權日2006年4月7日
發明者A·呂潘, A·德科爾杜, G·拉維埃勒, L·勒龍, M-D·弗拉塔奇, T·韋伯朗 申請人:瑟維爾實驗室;