吡啶酮類蛋白激酶抑制劑的製作方法
2023-10-18 01:57:19 2
本發明涉及調節蛋白激酶活性、且用於治療或預防與蛋白激酶相關疾病的化合物。具體而言，本發明涉及一種吡啶酮類蛋白激酶抑制劑，屬於調節間變性淋巴瘤激酶(ALK)活性的化合物，並提供了該類化合物的製備方法，及該類化合物用於治療或預防與ALK相關的疾病的製藥用途。
背景技術：
：惡性腫瘤是一種嚴重威脅人類健康的常見病和多發病，其特點是細胞或變異細胞異常增殖。腫瘤細胞的增殖、凋亡、轉移等與細胞內外的一系列信號傳導通路中某個環節出現異常密切相關。在這些信號傳導途徑中，一類重要的分子就是蛋白激酶，蛋白激酶的異常與腫瘤的發生、發展及預後轉歸密切相關，也是導致一系列其它與炎症或增殖反應有關的人類疾病的主要原因；開發靶向蛋白激酶的藥物是治療相關疾病的主要手段，已有很多藥物獲批上市，這類藥物具有靶點清晰、療效明確、安全性高的特點，因此越來越受到臨床醫療實踐的認可和支持。間變性淋巴瘤激酶(ALK)是蛋白激酶家族的重要成員，現有研究表明ALK的過度表達、突變和融合蛋白與多種腫瘤直接相關，包括但不限於成神經細胞瘤、間變性大細胞淋巴瘤(ALCL)、非小細胞肺癌(NSCLC)和炎性肌纖維母細胞瘤(IMT)等等。針對ALK融合基因的第一代藥物克唑替尼(Crizotinib)及第二代藥物色瑞替尼(Ceritinib)已分別於2011年和2014年上市，用於ALK陽性肺癌患者的治療獲得顯著的無進展生存和客觀有效率，證實了該靶點明確 的臨床價值。儘管藥效顯著，由於腫瘤異質性特點及腫瘤細胞對環境壓力的適應，有越來越多的研究報導表明，腫瘤耐藥、疾病繼續發展幾乎依舊是此類患者必然的命運；此外，現有藥物的嚴重不良反應，如消化道不良反應發生率過高、肝臟毒性及QT間期延長等問題，也限制了該類藥物的應用。有鑑於此，繼續研製具有良好ALK抑制活性及安全性的新化合物並將其開發上市以應對上述問題具有重要的社會效益和價值。技術實現要素：本發明目的在於提供一種結構新穎的吡啶酮類蛋白激酶抑制劑，通過對吡啶酮基團上的取代修飾，合成並篩選出一系列具有抗腫瘤活性(對EML4-ALK陽性及次級突變具有抑制作用)的化合物。為實現上述發明目的，本發明採取了以下技術方案：一種吡啶酮類蛋白激酶抑制劑，為具有如下結構通式的化合物及其藥學上可接受的鹽：R1選自氫、R0、R2、R3、R4、R11各自獨立地選自氫、滷素、C1-6烷基、滷代C1-6烷基、C1-6烷氧基、滷代C1-6烷氧基、C1-6環烷基、滷代C1-6環烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氰基或氨基；R5選自氫、滷素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、滷代C1-6烷氧基、-NR2COR6、-NR2CONR2R6、-NR2SO2R6、-COR6、-CONR2R6、-SO2R6、-SO2NR2R6、-POR8R9、R6選自氫、滷素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、羥基、芳基中的一種或幾種，或為R7選自氫、滷素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、羥基、芳基、選自N、O雜 原子的3-12元雜環基中的一種或幾種，或為R8、R9各自獨立地選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、羥基、芳基中的一種或幾種；R10選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、醯胺基、羥基、芳基、選自N、O雜原子的3-12元雜環基中的一種或幾種；且m，n，p各自獨立地選自0～10中的任一整數值。優選的，芳基為苯基、萘基、蒽基中的一種或幾種；所述的N、O雜原子的3-12元雜環基為吡啶基、哌啶基、嘧啶基、呋喃基、嗎啉基中的一種或幾種。優選的，滷素為氟、氯、溴、碘中的一種或幾種。更優選的，如前所述的結構通式中，R1選自R0、R2、R3、R4、R11各自獨立地選自氫、滷素、C1-6烷基、滷代C1-6烷基、C1-6烷氧基、滷代C1-6烷氧基、C1-6環烷基、滷代C1-6環烷基、氰基或氨基；R5選自氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、滷代C1-6烷氧基、SO2R6、POR8R9、R6選自氫、C1-6烷基、C1-6烷基羥基或R7選自氫、C1-6烷氧基、滷代C1-6烷氧基、選自N、O雜原子的3-6元雜環或R8、R9各自獨立地選自氫或C1-6烷基；R10選自氫、C1-6烷基、C1-6烷基醯胺基、C1-6烷基羥基或選自N、O雜原子的3-6元雜環；且m，n，p各自獨立地選自0、1、2、3、4、5、6中的任一數值。一種吡啶酮類蛋白激酶抑制劑，選自編號為REX-1～REX-23的如下特徵化合物：REX-1：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-2：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-亞甲基哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-3：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-5-甲基-1-(4-亞 甲基哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-4：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-5-甲基-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-5：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-6-甲基-1-(4-亞甲基哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-6：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-6-甲基-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-7：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-5-氟-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-8：5-氯-4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-9：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)-5-三氟甲基吡啶-2(1氫)-酮；REX-10：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)-5-三氟氧甲基吡啶-2(1氫)-酮；REX-11：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-5-異丙氧基-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-12：2-(4-(4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-2-1(2H)吡啶酮基)-1-哌啶)乙醯胺；REX-13：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(1-(2-羥乙基)-4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-14：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-(1-乙基哌啶基))吡啶-2(1氫)-酮；REX15：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-(1-2H-四氫吡喃基)哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-16：4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-2氫-吡喃基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-17：4-((4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺-5-三氟甲基)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-18：4-((5-氯-4-((2-(磷酸二甲基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-19：4-((5-氯-4-((2-(N,N二甲基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-20：4-((5-氯-4-((2-(N-異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-21：4-((5-氯-4-((2-(羥乙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-22：4-((5-氯-4-((2-(1-(乙氧基甲基)環丙基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮；REX-23：4-((5-氯-4-((2-甲氧基苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮。前述編號為REX-1～REX-23的化合物，結構式見下：本發明還提供了一種製備如前所述化合物的方法，總反應路線如下：基於上述總反應路線，包括如下合成方案：(1)合成方案1：化合物1-3的合成步驟1：將R1-OH(即化合物1-1)和三乙胺溶解於有機溶劑，緩慢滴加甲基磺醯氯；常溫反應N小時後，加萃取劑，萃取、乾燥、減壓、旋幹，得到化合物1-2。步驟2：將4-氨基-2-羥基吡啶類化合物溶解於有機溶劑，緩慢加入化合物1-2，加熱反應N小時後，加萃取劑，萃取、乾燥、減壓、旋幹，得到化合物1-3。合成方案1中，有機溶劑選自二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、甲醇、二氧六環中的一種或幾種，優選二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺或其混合；萃取劑選自二氯甲烷、純水、乙酸乙酯中的一種或幾種，優選二氯甲烷、純水或其混合；合成方案1中，常溫反應的溫度為20～30℃，優選25℃；加熱反應的溫度為70～90℃，優選80℃，反應時間N為3～10小時。(2)合成方案2：化合物2-4的合成步驟1：將2-氟-硝基苯和R5-H溶解於有機溶劑，緩慢加入碳酸鉀，加熱反應N小時後，加萃取劑，萃取、乾燥、減壓、旋幹，得到化合物2-2。步驟2：將化合物2-2溶解於有機溶劑，加催化劑，氮氣置換、通氫氣，加熱反應N小時後，減壓過濾去除多餘的催化劑，減壓、旋幹，得到化合物2-3。步驟3：將化合物2-3溶解於有機溶劑，緩慢加入氫化鈉和2,4,5-三氯嘧啶，氮氣置換、加熱反應N小時後，加少量冰水破壞多餘氫化鈉，加萃取劑，萃取、乾燥、減壓、旋幹，得到化合物2-4。合成方案2中，有機溶劑選自二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、甲醇、二氧六環中的一種或幾種，優選N,N-二甲基甲醯胺、甲醇或其混合；萃取劑選自二氯甲烷、純水、乙酸乙酯中的一種或幾種，優選乙酸乙酯、純水或其混合；催化劑選自鈀炭、醋酸鈀、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽中的一種或幾種，優選10％的鈀炭。合成方案2中，加熱反應的溫度為60～120℃，優選60℃、100℃或120℃；反應時間N為12～16小時，優選12小時、14小時或16小時。(3)合成方案3：目標化合物的合成步驟1：將合成方案1製得的化合物1-3、合成方案2製得的化合物2-4溶解於有機溶劑，繼續加入碳酸銫和催化劑，氮氣置換、微波加熱反應N小時後，減壓過濾去除多餘的催化劑，過柱層析，得到目標化合物。合成方案3中，有機溶劑選自二氯甲烷、N,N-二甲基甲醯胺、甲醇、二氧六環中的一種或幾種，優選二氧六環；催化劑選自鈀炭、醋酸鈀、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽中的一種或幾種，優選醋酸鈀和4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽的混合。合成方案3中，反應時間N為0.5～1小時，優選0.5小時。在如前所述的合成方案1、合成方案2、合成方案3中，R1選自氫、R0、R2、R3、R4、R11各自獨立地選自氫、滷素、C1-6烷基、滷代C1-6烷基、C1-6烷氧基、滷代C1-6烷氧基、C1-6環烷基、滷代C1-6環烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氰基或氨基；R5選自氫、滷素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、滷代C1-6烷氧基、-NR2COR6、-NR2CONR2R6、-NR2SO2R6、-COR6、-CONR2R6、-SO2R6、-SO2NR2R6、-POR8R9、R6選自氫、滷素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、羥基、芳基中的一種或幾種，或為R7選自氫、滷素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、羥基、芳基、選自N、O雜原子的3-12元雜環基中的一種或幾種，或為R8、R9各自獨立地選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、羥基、芳基中的一種或幾種；R10選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、醯胺基、羥基、芳基、選自N、O雜原子的3-12元雜環基中的一種或幾種；且m，n，p各自獨立地選自0～10中的任一整數值。本發明所述的「化合物」，包括所有立體異構體、幾何異構體、互變異構體和同位素。本發明所述的「化合物」，可以是不對稱的，例如，具有一個或多個立體異構體。除非另有說明，所有立體異構體都包括，如對映異構體和非對映異構體。本發明中含有不對稱碳原子的化合物，可以光學活性純的形式或外消旋形式被分離出來。光學活性純的形式可以從外消旋混合物拆分，或通過使用手性原料或手性試劑合成。本發明所述的「化合物」，還包括互變異構體形式。互變異構體形式來源於一個單鍵與相鄰的雙鍵交換並一起伴隨一個質子的遷移。本發明還包括所有同位素的原子，無論是在中間體或最後的化合物。同位素的原子包括具有相同的原子數、但不同質量數的。例如，氫的同位素包括氘和氚。含有前述通式結構的化合物，本文中所用的術語具有如下含義：術語「滷素」，指氟、氯、溴或碘，優選氟、氯或溴。術語「氰基」，指-CN。術語「羥基」，指-OH。術語「羰基」，指-CO。術語「羧基」，指-COOH。術語「烷基」，指由碳原子和氫原子組成的直鏈或支鏈的飽和烴基團，如C1-20烷基，優選為C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基(包括正丙基和異丙基)、丁基(包括正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基)、戊基(包括正戊基、異戊基、新戊基)、正己基、2-甲基己基等。所述烷基可以是非取代的、或是被一個或多個取代基所取代，取代基包括但不限於烷基、烷氧基、氰基、羥基、羰基、羧基、芳基、雜芳基、氨基、滷素、磺醯基、亞磺醯基、磷醯基。術語「氨基」，指-NH2、-NH(烷基)和-N(烷基)2，烷基的含義如前所述。-NH(烷基)的結構形式為具體例子包括但不限於-NHCH3、-NHCH(CH3)2、-NHC2H5等；-N(烷基)2的結構形式為具體例子包括但不限於-N(CH3)2、-N(CH3)C2H5等。術語「芳基」，指具有完全共軛的π電子體系的全碳單環或稠合環，通常具有6-14個碳原子，優選具有6-12個碳原子，最優選具有6個碳原子。芳基可以是非取代的、或被一個或多個取代基所取代，取代基包括但不限於烷基、烷氧基、氰基、羥基、羰基、羧基、芳基、芳烷基、氨基、滷素、磺醯基、亞磺醯 基、磷醯基。非取代的芳基的實例包括但不限於苯基、萘基和蒽基。術語「雜環基」，指具有3-12個(整數)環原子的單環或稠合環，其中有1、2或3個環原子選自N、O中的一個或多個，其餘環原子為C，且具有完全共軛的π-電子體系。雜環基可以是非取代的、或被一個或多個取代基所取代，取代基包括但不限於烷基、烷氧基、氰基、羥基、羰基、羧基、芳基、芳烷基、氨基、滷素、磺醯基、亞磺醯基、磷醯基。非取代的雜芳基的實例包括但不限於吡咯基、吲哚基、吡咯烷基、咪唑基、吡唑基、四唑基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、哌啶基、嘧啶基、吡嗪基、哌嗪基、呋喃基、嗎啉基。本發明還提供了一種藥物組合物，包含如前所述的化合物或其藥學上可接受的鹽作為活性成份，以及一種或多種藥學上可接受的載體。本發明所述的「藥物組合物」，指一種或多種本發明的化合物或其鹽與在本領域中通常接受的用於將生物活性化合物輸送至有機體(例如人)的載體的製劑。藥物組合物的目的是有利於對有機體給藥輸送。術語「藥學上可接受的載體」，指與活性成份共同給藥的、且有利於活性成份給藥的物質，包括但不限於國家食品藥品監督管理局許可的可接受的用於人或動物(例如家畜)的任何助流劑、增甜劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、矯味增強劑、表面活性劑、潤溼劑、分散劑、崩解劑、助懸劑、穩定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑。例如包括但不限於碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖和各類澱粉、纖維素衍生物、明膠、植物油和聚乙二醇。本發明所述的藥物組合物，可配製成固態、半固態、液態或氣態製劑，如片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、膏劑、乳劑、懸浮劑、溶液劑、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠劑、微球及氣溶膠等等。本發明所述的藥物組合物，可以採用本領域熟知的方法製造，如常規的混 合法、溶解法、制粒法、製糖衣藥丸法、磨細法、乳化法、冷凍乾燥法等。本發明所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或其藥物組合物的給藥途徑，包括但不限於口服、直腸、透黏膜、經腸給藥，或者局部、經皮、吸入、腸胃外、舌下、陰道內、鼻內、眼內、腹膜內、肌內、皮下、靜脈內給藥。優選的給藥途徑是口服給藥。對於口服給藥，可以通過將活性化合物與本領域熟知的藥學上可接受的載體混合，來配製該藥物組合物。這些載體能使本發明的化合物被配製成片劑、丸劑、錠劑、糖衣劑、膠囊劑、液體、凝膠劑、漿劑、懸浮劑等，以用於對患者的口服給藥。例如，用於口服給藥的藥物組合物，可採用如下方式獲得片劑：將活性成分與一種或多種固體載體合併，如果需要將所得混合物制粒，並且如果需要加入少量的賦形劑加工成混合物或顆粒，以形成片劑或片芯。片芯可與任選適合腸溶的包衣材料結合，加工成更有利於有機體(例如人)吸收的包衣製劑形式。本發明還提供了一種如前所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療或預防與蛋白激酶相關的疾病的藥物中的用途。一種如前所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療或預防與間變性淋巴瘤激酶(ALK激酶)相關的疾病的藥物中的用途。優選的，前述與ALK激酶相關的疾病選自細胞增殖性疾病，優選腫瘤。優選的，前述細胞增殖性疾病包括非小細胞肺癌、間變性大細胞淋巴瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、鼻咽癌、乳腺癌、結直腸癌、瀰漫大B細胞淋巴瘤、肝癌、胃癌、食道癌、胰腺癌、卵巢癌、全身組織細胞增生症和神經母細胞瘤。本發明中，發明人對合成得到的一系列的吡啶酮類蛋白激酶抑制劑化合物，進行ALK激酶及ALK相關突變位點的活性抑制實驗，發現部分化合物對ALK 激酶、及ALK的突變位點L1196M都具有顯著的活性抑制；此外，還進行了肺癌細胞株的細胞增殖實驗，發現部分化合物抑制效果顯著。與現有技術相比，本發明提供的吡啶酮類蛋白激酶抑制劑，基於靶標的合理藥物設計，通過對吡啶酮基團上的取代修飾，獲得了一系列結構新穎的化合物；並優化篩選出一系列具有抗腫瘤活性(尤其是對EML4-ALK陽性及次級突變具有抑制作用)的化合物。因此，可用於開發成新一代的蛋白激酶抑制劑，對於靶向治療或預防由ALK介導的疾病具有極大的臨床應用價值，市場潛力可觀。具體實施方式以下是本發明的具體實施例，對本發明的技術方案做進一步的描述，但是本發明的保護範圍並不限於這些實施例。凡是不背離本發明構思的改變或等同替代均包括在本發明的保護範圍之內。本發明提供的目標化合物製備方法中，液相色譜採用WatersSymmetryC18色譜柱。薄層色譜採用GF254(0.25毫米)。核磁共振色譜(NMR)使用Bruker-400核磁共振儀測定；液質連用(LC/MS)使用WatersZQ質譜檢測器(柱子：WatersSymmetryC18，毫米，5微米，35℃)，採用ESI(+)離子模式。此外，凡涉及易氧化或易水解的原料的所有操作都在氮氣保護下進行。除非另有說明，本發明使用的原料都是市售原料、無需進一步純化可以直接使用。實施例14-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮【編號為REX-1】的製備合成路線如下：合成方案1：中間體4-(4-氨基-2-氧代吡啶-1(2氫)基)哌啶基-1-羧酸叔丁酯(即化合物1-4)的合成步驟1：中間體N-叔丁氧羰基-4-羥基哌啶(即化合物1-2)的製備將原料4-羥基哌啶(即化合物1-1，10g,99.07mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中，二碳酸二叔丁酯(21.7g,99.1mmol)加入到反應液，室溫攪拌2～4小時。反應結束後加入甲基叔丁基醚(200mL)和0.5N的鹽酸(200mL)提取。有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物1-2(15.0g)，收率：75.3％。MSm/z[ESI]：202.1[M+1]。步驟2：中間體4-甲烷磺醯氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯(即化合物1-3)的製備將化合物1-2(15.0g,74.6mmol)和三乙胺(21mL,153mmol)溶解在二氯甲烷(200mL)中，5℃以下緩慢滴加甲基磺醯氯(6.0ml,74.6mmol)，保持溫度在5～15℃反應30分鐘。反應結束後回溫到室溫，加入400mL水稀釋，用二氯甲烷提取。有機相用碳酸氫鈉洗滌二次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物1-3(13.0g)，收率：62.0％。MSm/z[ESI]：280.1[M+1]。步驟3：中間體4-(4-氨基-2-氧代吡啶-1(2氫)基)哌啶基-1-羧酸叔丁酯(即化合物1-4)的製備在冰水浴條件下，將4-氨基-2-羥基吡啶(5.1g,46.6mmol)溶解在DMF(80 mL)中，氫化鈉(2.0g,51.3mmol)緩慢加入到反應體系中0℃攪拌15分鐘。再將化合物1-3(13.0g,46.6mmol)加入到反應體系中，加熱到45℃攪拌過夜。冷卻後傾入500mL水中，乙酸乙酯提取，乾燥濃縮後矽膠柱色譜分離，得到化合物1-4(6.0g)，收率：43.9％。MSm/z[ESI]：294.4[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝7.324-7.305(d，J＝7.6Hz，1H)，5.963(s，2H)，5.694-5.669(m，1H),5.246-5.240(d，J＝2.4Hz，1H),4.726(s，1H)，4.099-4.058(m，2H),2.519-2.501(m，2H),1.623-1.590(m，4H)，1.419-1.388(s，9H)。合成方案2：中間體2,5-二氯-N-[2-[(1-甲基乙基)磺醯]苯基]-4-氨基嘧啶(即化合物2-5)的合成步驟1：中間體2-(異丙硫醚基)硝基苯(即化合物2-2)的製備將原料2-氟硝基苯(即化合物2-1，10g,70mmol)、異丙硫醇(5.4g,70mmol)和碳酸鉀(25g,177mmol)加到乾燥的DMF(100mL)中，氮氣置換，100～110℃攪拌過夜。反應混合物冷卻至室溫,加入水(200mL)，用乙酸乙酯提取。有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物2-2(10g)，收率：72％。MSm/z[ESI]：198.2[M+1]。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝8.133-8.100(dd，J1＝1.2Hz，J2＝8.0Hz1H)，7.579-7.485(m，2H)，7.286-7.245(m，1H)，3.640-3.547(m，1H)，1.412-1.396(d，J1＝6.4Hz6H)。步驟2：中間體1-(異丙基磺醯基)-2-硝基苯(即化合物2-3)的製備在0℃、攪拌條件下，化合物2-2(13g,65.97mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中，分批加入m-CPBA(25.67g,149.42mmol)，加畢，在0℃下反應16小時。加入飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，乾燥濃縮後矽膠柱色譜分離，得到化合物2-3(10.66g)，收率：70％。MSm/z[ESI]：230.2[M+1]。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝8.115-8.071(m，1H)，8.042-8.003(m，1H)，7.974-7.932(m，1H)，3.825-3.757(m， 1H)，1.285-1.268(d，J＝6.8Hz6H)。步驟3：中間體2-(異丙基磺醯基)苯胺(即化合物2-4)的製備將化合物2-3(20g,87.3mmol)和10％鈀炭(2.0g)加到乾燥的甲醇(250mL)中，氫氣置換，60℃反應2小時。冷卻後硅藻土過濾分離，無水硫酸鈉乾燥濃縮，得到化合物2-4(17.3g)，收率：95％。MSm/z[ESI]：200.2[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝7.457-7.434(m，1H)，7.373-7.300(m，1H)，6.888-6.868(d，J＝8.0Hz，1H)，6.708-6.689(d，J＝7.6Hz，1H)，6.088(m，2H)，3.370-3.304(m，1H)，1.176-1.159(d，J＝6.8Hz6H)。步驟4：中間體2,5-二氯-N-[2-[(1-甲基乙基)磺醯]苯基]-4-氨基嘧啶(即化合物2-5)的製備在冰水浴條件下，將化合物2-4(30g,150mmol)溶解在DMF(300mL)中，氫化鈉(7.23g,300mmol)緩慢加入到反應體系中0℃攪拌15分鐘。2,4,5-三氯嘧啶(33.1g,180mmol)滴加到反應體系中，反應室溫攪拌過夜。冷卻後傾入500mL水中，乙酸乙酯提取，乾燥濃縮後矽膠柱色譜分離，得到化合物2-5(17.3g)，收率：32％。MSm/z[ESI]：370.2[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝9.822(s，1H)，7.343-7.323(d，J＝8.0Hz,1H)，7.911-7.839(m，2H)，3.585-3.484(m，1H)，1.176-1.159(d，J＝6.8Hz，6H)。合成方案3：目標化合物4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮(即REX-1)的合成步驟1：中間體4-(4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-2-氧代吡啶-1(2氫)-基)哌啶-1-羥酸叔丁酯(即化合物3-1)的製備將化合物1-4(0.7g,2.6mmol)、化合物2-5(0.91g,2.38mmol)、碳酸銫(2.34g,7.17mmol)、催化劑4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(0.3g,0.5 mmol)和醋酸鈀(54mg,0.24mmol)，溶解於二氧六環(15mL)並加入封管中，用氮氣置換空氣後，在95℃下反應18小時。旋幹溶劑，加入乙酸乙酯和水，萃取，有機相干燥，矽膠柱色譜純化，得到化合物3-1(0.7g)，收率：52％。MSm/z[ESI]：603.1[M+1]。步驟2：目標化合物4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮(即REX-1)的製備在攪拌條件下，將化合物3-1(0.5g，8.3mmol)加入二氯甲烷(10mL)中，滴加三氟乙酸(5mL)，室溫下攪拌過夜。先用5％碳酸氫鈉水溶液調至pH≥10，再用乙酸乙酯萃取，乾燥，旋幹得到目標化合物REX-1，收率：36％。MSm/z[ESI]：504.1[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝9.741(s，1H)，8.575-8.555(d，J＝8Hz，1H)，8.392(s，1H)，7.875-7.806(m，2H)，7.507-7.391(m，2H)，6.940-6.936(d，J＝1.6Hz，1H)，6.493-6.469(m，1H)，4.667(m，1H)，3.572-3.441(m，1H)，3.059-3.028(m，2H)，2.599-2.583(m，2H)，1.648-1.601(m，4H)，1.231-1.116(m，6H)。實施例24-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-1-(4-亞甲基哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮【編號為REX-2】的製備合成路線如下：如本實施例提供的合成路線所述，在合成方案1「化合物1-4的合成」中，將實施例1中的原料4-羥基哌啶(即化合物1-1)替換為4-羥甲基哌啶，其餘合成方法同實施例1的合成方案1，即得化合物1-4，收率：43.0％。MSm/z[ESI]：308.4[M+1]。在合成方案2「化合物2-5的合成」中，原料2-氟硝基苯(即化合物2-1)、其餘合成方法均同實施例1的合成方案2，即得化合物2-5，收率：33％。MSm/z[ESI]：370.2[M+1]。在合成方案3「目標化合物REX-2的合成」中，將本實施例製得的化合物1-4和化合物2-5，按照實施例1的合成方案3製備，即得目標化合物REX-2，收率：36％。MSm/z[ESI]：518.1[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝9.689(s，1H)，8.540-8.364(m，2H)，7.868-7.779(m，2H)，7.412(m，2H)，6.916(m，1H)，6.423(m，1H)，4.667(m，1H)，3.644-3.635(m，3H)，2.910(m，2H)，2.355(m，2H)，1.800(m，1H)，1.435(m，2H)，1.170-1.163(m，8H)。實施例34-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-5-甲基-1-(4-亞甲基哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮【編號為REX-3】的製備合成路線如下：如本實施例提供的合成路線所述，在合成方案1「化合物1-4的合成」中， 將實施例1中的原料4-羥基哌啶(即化合物1-1)替換為4-羥甲基哌啶，實施例1中步驟3的4-氨基-2-羥基吡啶替換為4-氨基-5-甲基-2-羥基吡啶，其餘合成方法同實施例1的合成方案1，即得化合物1-4，收率：38.0％。MSm/z[ESI]：322.4[M+1]。在合成方案2「化合物2-5的合成」中，原料2-氟硝基苯(即化合物2-1)、其餘合成方法均同實施例1的合成方案2，即得化合物2-5，收率：34％。MSm/z[ESI]：370.2[M+1]。在合成方案3「目標化合物REX-3的合成」中，將本實施例製得的化合物1-4和化合物2-5，按照實施例1的合成方案3製備，即得目標化合物REX-3，收率：26％。MSm/z[ESI]：532.1[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝8.646-8.625(d，J＝8.4Hz，1H)，8.625(s，1H)，8.371(s,1H)，7.845-7.824(d，J＝8.4Hz，1H)，7.733(m,1H),7.373(m，2H)，6.961(s，1H),3.351-3.663(d，J＝7.2Hz，2H)，3.535(m，3H)，2.976-2.943(d，J＝13.2Hz，2H)，2.433(m，3H)，2.039(s，3H)，1.836(m，1H)，1.447(m，2H)，1.181(m，6H)。實施例44-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-5-甲基-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮【編號為REX-4】的製備合成路線如下：如本實施例提供的合成路線所述，在合成方案1「化合物1-4的合成」中，將實施例1中步驟3的4-氨基-2-羥基吡啶替換為4-氨基-5-甲基-2-羥基吡啶，其餘合成方法同實施例1的合成方案1，即得化合物1-4，收率：35.0％。MSm/z[ESI]：307.4[M+1]。在合成方案2「化合物2-5的合成」中，原料2-氟硝基苯(即化合物2-1)、其餘合成方法均同實施例1的合成方案2，即得化合物2-5，收率：31％。MSm/z[ESI]：370.2[M+1]。在合成方案3「目標化合物REX-4的合成」中，將本實施例製得的化合物1-4和化合物2-5，按照實施例1的合成方案3製備，即得目標化合物REX-4，收率：30％。MSm/z[ESI]：516.1[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝8.662-8.641(d，J＝8.4Hz，1H)，8.447(s，1H)，8.386(s，1H)，7.851-7.831(d，J＝8.0Hz，1H)，7.754(m，1H)，7.433(s，1H)，7.391(m，1H)，6.974(s，1H)，4.709(m，1H)，4.041(m，1H)，3.503(m，3H)，3.076(m，2H)，2.607(m，2H)，2.078(s，3H)，1.992(m，2H)，1.712(m，4H)，1.184(m，6H)。實施例54-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-6-甲基-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮【編號為REX-5】的製備合成路線如下：如本實施例提供的合成路線所述，在合成方案1「化合物1-4的合成」中，將實施例1中的原料4-羥基哌啶(即化合物1-1)替換為4-羥甲基哌啶，實施例1中步驟3的4-氨基-2-羥基吡啶替換為4-氨基-6-甲基-2-羥基吡啶，其餘合成方法同實施例1的合成方案1，即得化合物1-4，收率：45.0％。MSm/z[ESI]：321.4[M+1]。在合成方案2「化合物2-5的合成」中，原料2-氟硝基苯(即化合物2-1)、其餘合成方法均同實施例1的合成方案2，即得化合物2-5，收率：38％。MSm/z[ESI]：370.2[M+1]。在合成方案3「目標化合物REX-5的合成」中，將本實施例製得的化合物1-4和化合物2-5，按照實施例1的合成方案3製備，即得目標化合物REX-5，收率：26％。MSm/z[ESI]：531.1[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝8.650-8.629(d，J＝8.4Hz，1H)，8.620(s，1H)，8.370(s，1H)，7.835-7.814(d，J＝8.4Hz，1H)，7.722(m，1H)，7.352(m，2H)，6.955(s，1H)，3.351-3.663(d，J＝7.2Hz，2H)，3.535(m，3H)，2.976-2.944(d，J＝13.1Hz，2H)，2.430(m，3H)，2.239(s，3H)，1.836(m，1H)，1.447(m，2H)，1.181(m，6H)。實施例64-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-6-甲基-1-(4-哌啶基)吡啶-2(1氫)-酮【編號為REX-6】的製備合成路線如下：如本實施例提供的合成路線所述，在合成方案1「化合物1-4的合成」中，將實施例1中步驟3中的4-氨基-2-羥基吡啶替換為4-氨基-6-甲基-2-羥基吡啶，其餘合成方法同實施例1的合成方案1，即得化合物1-4，收率：36.0％。MSm/z[ESI]：308.4[M+1]。在合成方案2「化合物2-5的合成」中，原料2-氟硝基苯(即化合物2-1)、其餘合成方法均同實施例1的合成方案2，即得化合物2-5，收率：38％。MSm/z[ESI]：370.2[M+1]。在合成方案3「目標化合物REX-6的合成」中，將本實施例製得的化合物1-4和化合物2-5，按照實施例1的合成方案3製備，即得目標化合物REX-6，收率：33％。MSm/z[ESI]：518.1[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝8.660-8.639(d，J＝8.4Hz，1H)，8.445(s，1H)，8.376(s，1H)，7.861-7.841(d，J＝8.0Hz，1H)，7.750(m，1H)，7.436(s，1H)，7.390(m，1H),6.975(s，1H)，4.708(m，1H)，4.041(m，1H)，3.503(m，3H)，3.073(m，2H)，2.607(m，2H)，2.070(s，3H)，1.997(m，2H)，1.711(m，4H)，1.180(m，6H)。實施例72-(4-(4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-2-1(2H)吡啶酮基)-1-哌啶)乙醯胺【編號為REX-12】的製備合成路線如下：合成方案1：中間體2-(4-(4-氨基-2-氧代吡啶-1(2氫)基)哌啶基)乙醯胺(即化合物1-3)的合成步驟1：中間體4-甲烷磺醯氧基哌啶-1-乙醯胺(即化合物1-2)的製備將原料N-乙醯胺-4-羥基哌啶(即化合物1-1，10.0g,63.2mmol)和三乙胺(17.5mL,127mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中，5℃以下緩慢滴加甲基磺醯氯(5.1ml,63.2mmol)，保持溫度在5～15℃反應30分鐘。反應結束後回溫到室溫，加入200mL水稀釋，用二氯甲烷提取。有機相用碳酸氫鈉洗滌二次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物1-2(8.0g)，收率：53.5％。MSm/z[ESI]：237.3[M+1]。步驟2：中間體2-(4-(4-氨基-2-氧代吡啶-1(2氫)基)哌啶基)乙醯胺(即化合物1-3)的製備在冰水浴條件下，將4-氨基-2-羥基吡啶(3.0g,27.9mmol)溶解在DMF(50mL)中，氫化鈉(1.2g,30.8mmol)緩慢加入到反應體系中0℃攪拌15分鐘。再將化合物1-2(6.6g,28.0mmol)加入到反應體系中，加熱到45℃攪拌過夜。冷卻後傾入400mL水中，乙酸乙酯提取，乾燥濃縮後矽膠柱色譜分離，得到化合物1-3(3.6g)，收率：51.6％。MSm/z[ESI]：294.4[M+1]。合成方案2：中間體2,5-二氯-N-[2-[(1-甲基乙基)磺醯]苯基]-4-氨基嘧啶(即化合物2-5)的合成步驟1：中間體2-(異丙硫醚基)硝基苯(即化合物2-2)的製備將原料2-氟硝基苯(即化合物2-1，10g,70mmol)、異丙硫醇(5.4g,70mmol)和碳酸鉀(25g,177mmol)加到乾燥的DMF(100mL)中，氮氣置換，100～110℃攪拌過夜。反應混合物冷卻至室溫,加入水(200mL)，用乙酸乙酯提取。有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物2-2(10g)，收率：72％。MSm/z[ESI]：198.2[M+1]。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝8.133-8.100(dd，J1＝1.2Hz，J2＝8.0Hz1H)，7.579-7.485(m，2H)，7.286-7.245(m，1H)，3.640-3.547(m，1H)，1.412-1.396(d，J1＝6.4Hz6H)。步驟2：中間體1-(異丙基磺醯基)-2-硝基苯(即化合物2-3)的製備在0℃、攪拌條件下，化合物2-2(13g,65.97mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中，分批加入m-CPBA(25.67g,149.42mmol)，加畢，在0℃下反應16小時。加入飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，乾燥濃縮後矽膠柱色譜分離，得到化合物2-3(10.66g)，收率：70％。MSm/z[ESI]：230.2[M+1]。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝8.115-8.071(m，1H)，8.042-8.003(m，1H)，7.974-7.932(m，1H),3.825-3.757(m，1H)，1.285-1.268(d，J＝6.8Hz6H)。步驟3：中間體2-(異丙基磺醯基)苯胺(即化合物2-4)的製備將化合物2-3(20g,87.3mmol)和10％鈀炭(2.0g)加到乾燥的甲醇(250mL)中，氫氣置換，60℃反應2小時。冷卻後硅藻土過濾分離，無水硫酸鈉乾燥濃縮，得到化合物2-4(17.3g)，收率：95％。MSm/z[ESI]：200.2[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝7.457-7.434(m，1H)，7.373-7.300(m，1H)，6.888-6.868(d，J＝8.0Hz，1H)，6.708-6.689(d，J＝7.6Hz，1H)，6.088(m，2H)，3.370-3.304(m，1H)，1.176-1.159(d，J＝6.8Hz6H)。步驟4：中間體2,5-二氯-N-[2-[(1-甲基乙基)磺醯]苯基]-4-氨基嘧啶(即化 合物2-5)的製備在冰水浴條件下，將化合物2-4(30g,150mmol)溶解在DMF(300mL)中，氫化鈉(7.23g,300mmol)緩慢加入到反應體系中0℃攪拌15分鐘。2,4,5-三氯嘧啶(33.1g,180mmol)滴加到反應體系中，反應室溫攪拌過夜。冷卻後傾入500mL水中，乙酸乙酯提取，乾燥濃縮後矽膠柱色譜分離，得到化合物2-5(17.3g)，收率：32％。MSm/z[ESI]：370.2[M+1]。1H-NMR(400MHz，DMSO6)：δ＝9.822(s，1H)，7.343-7.323(d，J＝8.0Hz，1H)，7.911-7.839(m，2H)，3.585-3.484(m，1H)，1.176-1.159(d，J＝6.8Hz，6H)。合成方案3：目標化合物2-(4-(4-((5-氯-4-((2-(異丙基磺醯基)苯基)胺)嘧啶-2-胺基)-2-1(2H)吡啶酮基)-1-哌啶)乙醯胺(即REX-12)的合成步驟1：將化合物1-3(0.9g,3.6mmol)、化合物2-5(1.4g,3.6mmol)、碳酸銫(3.5g,10.7mmol)、催化劑4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(0.45g,0.75mmol)和醋酸鈀(81mg,0.36mmol)，溶解於二氧六環(20mL)並加入封管中，用氮氣置換空氣後，在95℃下反應18小時。旋幹溶劑，加入乙酸乙酯和水，萃取，有機相干燥，矽膠柱色譜純化，得到目標化合物REX-12(0.75g)，收率：37％。MSm/z[ESI]：561.1[M+1]。實施例8ALK激酶抑制活性及相關突變位點結合率的測定擇選本發明實施例1～4製得的化合物REX-1～REX-4，採用(FRET)方法來測定前述化合物對ALK激酶抑制活性，該抑制活性採用IC50這一指標來表示，IC50即ALK激酶的活性被抑制50％時的化合物的濃度。同時採用EuKinaseBingingAssay(TR-FRET)測定了本發明的化合物對ALK相關突變位點如ALKL1196M的結合率測定，也採用IC50這一 指標來表示。LanthaScreenEu激酶結合實驗通過添加Eu標記抗體或者抗標籤抗體檢測AlexaFluor偶聯物或激酶「示蹤劑」結合。示蹤劑和抗體與激酶的結合導致高度的FRET，反之使用激酶抑制因子代替示蹤劑會造成FRET丟失。本發明利用Lifetechnology公司的kinaseassay平臺進行測定，測定結果見表一。結果表明，本發明提供的化合物有較好的ALK抑制活性，並且對ALK的突變位點(如ALKL1196M)也有較好的結合活性。表一實施例化合物的ALK抑制活性及ALKL1196M結合率測定ALKIC50(nM)ALKF1196MIC50(nM)REX-1<50<50REX-2<50<50REX-3<50<50REX-4<50<50實施例9細胞增殖實驗待測化合物：本發明實施例1～2製得的化合物REX-1、REX-2。細胞株：肺癌細胞株NCI-H2228，購自南京科佰生物科技有限公司。方法：將細胞株NCI-H2228置於20％FBS(胎牛血清)(Gibco)+1640+1％雙抗進行培養。然後取生長狀態良好的NCI-H2228細胞，5000個/孔分別接種於96孔細胞板，置於37℃、含5％CO2的培養箱中孵育24h使細胞貼壁完全。棄去舊培養液，每孔依次加入100μL含0.3、1、3、10、30、100、300、1000、3000和10000nmol/L待測化合物的培養液，溶劑對照組每孔加入100μL含0.1％DMSO的培養液，每組3復孔，72h後棄去舊的培養液，避光條件下每孔加入100μL含0.5mg·mL-1MTT的培養液，置於細胞培養箱中繼續孵育4h，棄去上清，每孔加入100μLDMSO，振蕩，用酶標儀在490nm波長下測定各孔吸光度 值。根據各化合物不同濃度對各細胞生長的抑制率，用graphad6.0計算各化合物在各細胞上的IC50值。計算公式為：結果：見表2。表二實施例化合物對肺癌細胞株的細胞增殖IC50值IC50(μM)NCI-H2228REX-1<1REX-2<10當前第1頁1 2 3