免疫增強化合物的均勻懸液及其用途的製作方法

2023-10-04 21:33:54 5

專利名稱：免疫增強化合物的均勻懸液及其用途的製作方法
免疫增強化合物的均勻懸液及其用途相關申請的交叉引用本申請要求2009年12月15日提交的美國臨時申請號61/286，754的優先權，其通過引用全文納入本文。
背景技術：
近期開發的減毒病原或亞基蛋白疫苗儘管比傳統全病原疫苗在產品安全和生產成本方面提供更大優勢，相較全病原一般免疫原性有限。所以，這些疫苗一般需要有顯著免 疫刺激能力的佐劑以在預防疾病上達到其全部潛能。已經努力確定新免疫調節物用作疫苗和免疫治療的佐劑。特定地，很需要引起人和家畜中對多種抗原的強效細胞介導和體液免疫應答，但沒有傳統佐劑和其他免疫調節物副作用的佐劑。小分子免疫增強劑(「SMIP」)可滿足這種需求，因為小分子平臺提供選擇性操作免疫反應的不同化合物，其為增加治療指數免疫調節劑所必需。Toll樣受體(TLR)是一組模式識別受體，其結合來自細菌、真菌、原生動物和病毒的病原體相關分子模式(PAMP)，並作為抵抗病原體入侵的第一道防線。TLR對誘導參與炎症應答的基因表達很關鍵，且TLR和所述先天免疫系統在抗原特異性獲得性免疫發展中是關鍵步驟。獲得性(體液或細胞介導的)免疫與先天免疫的TLR信號機制有關。先天免疫是保護性免疫細胞應答，其快速起作用以對抗環境損傷，包括但不限於細菌或病毒劑。獲得性免疫是較慢的應答，其涉及原初T淋巴細胞分化和激活成T輔助I (Thl)或T輔助2 (Th2)細胞類型。Thl細胞主要促進細胞免疫，而Th2細胞主要促進體液免疫。在識別病原生物上存在的特異或一組特異分子決定簇中所有TLR似乎作為同二聚體或異二聚體發揮作用，所述病原生物包括細菌細胞表面脂多糖、脂蛋白、細菌鞭毛蛋白、細菌和病毒的DNA和病毒RNA。對TLR激活的細胞應答涉及一種或多種轉錄因子的激活，引起生成和分泌有助於殺傷及清除所述病原入侵的細胞因子和共刺激分子如幹擾素、TNF-、白介素、MIP-I 和 MCP-I。十三種TLR (命名為TLR1-TLR13)在人和小鼠中已經確定，並且其中很多的等同形式在其他哺乳動物種類中也已發現。特定地，TLR7和TLR8的作用是檢測細胞中是否存在「外源」單鏈RNA，作為響應病毒入侵的手段。TLR7和TLR8都是結構上高度保守的蛋白，其識別來自病毒的富含鳥苷或尿苷的單鏈RNA (ssRNA)，所述病毒如人免疫缺陷病毒、水泡性口炎病毒和流感病毒。WO 2009/111337公開結合Toll樣受體(TLR)的一系列化合物，包括TLR7和TLR8。發現化合物用作免疫增強劑，但是包括疏水核心且溶解度低。因此本發明的目標是提供能刺激或調節需要對象中免疫應答的SMIP的均勻懸液。發明概述本方面一般涉及能刺激或調節需要對象中免疫應答的小分子免疫增強劑(SMIP;即式I或式II的化合物)的均勻懸液。均勻懸液可以與多種免疫治療抗原或佐劑聯用。
一個示例性方法是用高壓勻化與表面活性劑和黏性增強劑一起產生包括U m大小顆粒的SMIP穩定均勻懸液。所得懸浮特別適用於共遞送SMIP與明礬和基於水包油乳劑的疫苗。一方面，發明提供均勻懸浮劑，包括(a)式I或式II的苯並萘啶化合物，藥學上可接受鹽，藥學上可接受溶劑合物，N-氧化物衍生物，受保護衍生物，單獨異構體或其異構體混合物；(b)表面活性劑，和(c)懸浮劑，其中懸液在4° C穩定至少約四周。在某些實施方式中，均勻懸液包括約0. 5mg/mL-約50mg/mL苯並萘唳化合物。在某些實施方式中，苯並萘啶化合物是2_(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇；2-(4_甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-5-胺；4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶_2_基)乙基)_3_甲基苯甲酸乙酯；2-(4-( 二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-5-胺；2-(4_甲氧基苯乙基)-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶-5-胺；或2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。 在一個優選實施方式中，均勻懸液包括(a)2_(2，4-二甲基苯乙基)苯並[f] [I, 7]萘啶-5-胺，或其藥學上可接受鹽，藥學上可接受溶劑合物，(b)表面活性劑，和(c)懸浮劑，其中懸液在4° C穩定至少約四周。在另一個優選實施方式中，均勻懸液包括(a)2-(4_甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯並[f] [I, 7]萘啶-5-胺，或其藥學上可接受鹽或藥學上可接受溶劑合物，
(b)表面活性劑，和(c)懸浮劑，其中懸液在4° C穩定至少約四周。在另一個優選實施方式中,均勻懸液包括(a) 2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f][l,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇，或其藥學上可接受鹽或藥學上可接受溶劑合物，(b)表面活性劑，和(c)懸浮劑，其中懸液在4° C穩定至少約四周。示例性表面活性劑包括，例如，吐溫(TWeen)-80。在某些實施方式中，均勻懸液包含約0. 1%-約10%表面活性劑。示例性懸浮劑包括，例如，黏性增強劑如羧甲基纖維素。在某些實施方式中，均勻懸液包含約0. 1%-約10%懸浮劑。在某些實施方式中，均勻懸液的至少約50%懸浮顆粒直徑是約10 ii m或更小。在某些實施方式中，均勻懸液的至少約50%懸浮顆粒直徑是約2 或更小。發明的均勻懸液能用於強化免疫應答並能與抗原、免疫原性組合物或疫苗共遞送以增強誘導免疫應答的效果。佐劑(例如，明礬或水包油佐劑)可以與發明的均勻懸液聯用。本文也提供免疫原性組合物，包括(I)抗原和(2)發明的均勻懸液。在某些實施方式中，免疫原性組合物還包含佐劑。示例性佐劑包括，例如，含鋁佐劑(如氫氧化鋁，羥基氧化鋁或羥基磷酸鋁)，水包油乳劑(如MF59)，脂質體(如外膜囊泡)，寡核苷酸(如包括未甲基化CpG基序的寡核苷酸)。在某些實施方式中，免疫原性組合物包括抗原，其為細菌抗原(如腦膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitides)抗原),病毒抗原(如呼吸道合胞病毒(RSV)或伊波拉病毒(Ebola virus)抗原)。在某些實施方式中，免疫原性組合物包括(I)病毒抗原(如伊波拉病毒抗原)和(2) 2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-5-胺或
2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶_2_基)乙基)-3_甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。
本文還提供使用發明的均勻懸液來增強需要對象中免疫應答的方法和生產本發明均勻懸液的方法。發明也涉及生產均勻懸液的方法，所述均勻懸液包括式I和式II的化合物，表面活性劑和懸浮劑。所述方法包括混合式I和式II的化合物、表面活性劑和懸浮劑，並且在高壓例如15，000-20, OOOpsi勻質化混合物以生產均勻懸液，所述均勻懸液優選有約10 ii m或更小的D50，更優選約2iim或更小，並可選約IOiim或更小的D90。本文也提供使用發明的免疫原性組合物在需要對象中產生免疫應答的方法。發明也涉及本文所述用於治療的均勻懸液，和均勻懸液在生產增強或誘導免疫應答的藥物中的應用。


圖IA顯示單獨或加入不同劑量實施例47懸浮劑到Alum/3MenB製劑後，三個MenB 抗原的電泳概況(用SDS-PAGE)。註解SN=未吸附抗原(代表20%的10 y g劑量)；T=未吸附抗原(代表200%的20 ii g劑量)；P=已吸附抗原修復(代表10%的10 ii g劑量)。圖IB是顯示明礬上抗原吸附百分比的表。圖2顯示實施例47的均勻懸液對腸外致病性大腸桿菌(E. coli) (ExPEC)抗原PK1-3526吸附沒有影響。註解1.海藍色加分子量標記；2. pKl-3526對照2ug (100%)；
3.pKl-3526 對照 lug (50%) ；4. pKl-3526 對照 0. 4ug (20%) ；5.明礬 /pKl_3526SN (20%)；
6.明礬 /pKl-3526+ 實施例 47SN (20%) ；7.明礬 /pKl_3526SN TCA (240%) ；8.明礬 /pKl-3526+ 實施例 47SN TCA (240%) ；9. 10. pKl_3526TCA 對照 2. 4ug (240%) ；11.明礬 /pKl-3526顆粒解吸(50%) ；12.明礬/pKl-3526+實施例47顆粒解吸(50%)。％值表明單獨劑量製劑的比例。圖3A顯示小鼠肌肉內注射4mpk (毫克/千克)標明3MenB/明礬的載劑後實施例47的血清水平(不均勻/DMSO懸液相比均勻懸液)。圖3B顯示小鼠肌肉內注射4mpk標明3MenB/明礬的載劑24小時後實施例47的注射位點肌肉水平(不均勻/DMSO懸液相比均勻懸液)。圖3C顯示小鼠肌肉內注射4mpk標明3MenB/明礬的載劑24小時後實施例47的腹股溝淋巴結水平(不均勻/DMSO懸液相比均勻懸液)。圖4顯示不均勻/DMSO懸液加3MenB/明礬和實施例47的均勻懸液加3MenB/明礬的細胞因子釋放概況相似。相較佐劑R848，接觸均勻懸液或實施例47所配置DMSO後細胞因子釋放最小。圖5A顯示用每小鼠2-100微克範圍的特定劑量實施例47均勻懸液配製的明礬/3MenB的血清殺菌抗體(SBA)效價。圖5B顯示每小鼠2-100微克範圍的特定劑量實施例47均勻懸液配製的MF59/3MenB的SBA效價。圖6顯示實施例47懸液(當用Alum/3MenB疫苗配製時)引起對16株腦膜炎奈瑟球菌組匯集血清的SBA效價的能力(所有株通常用明礬/3MenB製劑有低效價)。圖顯示這16株的覆蓋百分比。截留指考慮到顯示殺菌活性的最低效價。圖7A-7C顯示體內MenB小鼠模型的IgGl/IgG2a比率評價的結果。圖7A顯示GNA2132-GNA1030 的 IgGl，IgG2a, IgG2b 和 IgG3 效價。圖 7B 顯示 GNA2091-GNA1870 的IgGl, IgG2a, IgG2b 和 IgG3 效價。圖 7C 顯示 NadA 的 IgGl, IgG2a, IgG2b 和 IgG3 效價。
圖8顯示使用實施例47不均勻懸液(DMS0中製備)的SBA分析結果。小鼠用MF59/3MenB+以實施例47所示量i. m.免疫兩次。圖基於三個獨立SBA研究並且顯示第二次注射後兩周的平均效價土標準偏差。SBA分析用標準CFU方法和NZ98MenB菌株完成。圖9A概括了顯示實施例47懸液引起對RSV F抗原免疫反應能力的研究結果。讀數代表總抗F抗體(K )和中和抗體(PRNT60)。圖9B顯示另一研究中實施例47懸液增強類型轉換成IgG2a的F特異性抗體以及中和抗體。發明詳述I.概述一方面，本發明涉及小分子免疫增強劑(SMIP)的均勻懸液。所述均勻懸液能用於增強免疫應答。如本文所述，發明人已評價示例性SMIP即2-(2，4-二甲基苯乙基)苯並[f] [1,7] 萘啶-5-胺的均勻懸液功效。這些研究顯示SMIP均勻懸液比非均勻懸液(在DMSO中)更有效增強免疫應答。一個生成均勻懸液的示例性方法是用高壓勻化與表面活性劑和黏性增強劑一起產生包括IOOnm-IO u m大小範圍顆粒的SMIP穩定均勻懸液。所得懸浮特別適用於共遞送SMIP與明礬和基於水包油乳劑的疫苗。均勻懸液有確定的尺寸分布，使劑量更加均勻。另夕卜，所得顆粒尺寸增加給藥後SMIP對免疫細胞的生物可利用性。如用尺寸分布所測量，懸液也能隨著時間而穩定。最終，與同一劑量的非均勻懸液相比，SMIP均勻懸液在更低劑量(例如每劑量10 U g或更少)提供免疫刺激效果。在一個優選實施方式中，均勻懸液包括(a)2_(2，4-二甲基苯乙基)苯並[f] [1，7]萘啶-5-胺，或其藥學上可接受鹽或藥學上可接受溶劑合物，(b)表面活性劑，和(c)懸浮齊U，其中懸浮在4° C穩定至少約四周。在另一個優選實施方式中，均勻懸液包括(a)2-(4_甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶-5-胺，或其藥學上可接受鹽或藥學上可接受溶劑合物，
(b)表面活性劑，和(c)懸浮劑，其中懸液在4° C穩定至少約四周。在另一個優選實施方式中,均勻懸液包括(a) 2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f][l,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇，或其藥學上可接受鹽或藥學上可接受溶劑合物，(b)表面活性劑，和(c)懸浮劑，其中懸液在4° C穩定至少約四周。發明的均勻懸液能用於強化免疫反應並能與抗原，免疫原性組合物或疫苗共遞送以增強誘導免疫反應的效果。本文還提供使用發明的均勻懸液來增強需要對象中免疫反應的方法和生產本發明均勻懸液的方法。2.定義如本文所用，單數形式的「一個」、「一種」和「該」包括複數指代物，除非內容中另
有明確規定。本文所用的術語「約」指某數值的+/_10%。本文所用的術語「烯基」指部分不飽和的具有至少一個碳-碳雙鍵的支鏈或直鏈烴類。繞所述雙鍵的原子方向為順式(Z)或反式(E)構象。烯基可以任選被取代。本文所用的術語"C2-C3烯基"、"C2-C4烯基"、"C2-C5烯基"、"C2-C6烯基"、"C2-C7烯基〃和"C2-C8烯基〃指分別含至少2個，且最多3、4、5、6、7或8個碳原子的烯基基團。除非另有說明，烯基基團通常是C2-C6烯基。如本文所用，烯基基團的非限制性示例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等。本文所用的術語「亞烯基」指衍生自烯基的部分不飽和支鏈或直鏈二價烴基。亞烯基可以任選被取代。本文所用的術語"C2-C3亞烯基〃、"C2-C4亞烯基〃、"C2-C5亞烯基〃、〃c2-c6亞烯基〃、"C2-C7亞烯基〃和"C2-C8亞烯基〃指分別含至少2個，且最多3、4、5、6、7或8個碳原子的亞烯基基團。除非另有說明，亞烯基基團通常是Cl-C6亞烯基。如本文所用，亞烯基基團的非限制性示例包括亞乙烯基、亞丙烯基、亞丁烯基、亞戊烯基、亞己烯基、亞庚烯基、亞辛烯基、亞壬烯基、亞癸烯基等。本文所用的術語「烷基」指飽和的支鏈或直鏈烴。烷基可以任選被取代。本文所用的術語"C1-C3烷基〃、"C1-C4烷基〃、"C1-C5烷基〃、"C1-C6烷基〃、"C1-C7烷基〃和"C1-C8烷基〃指分別含至少I個，且最多3、4、5、6、7或8個碳原子的烷基基團。除非另有說明，烷基基團通常是C1-C6烷基。如本文所用，烷基基團的非限制性示例包括甲基、乙基、正丙基、 異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。本文所用的術語「亞烷基」指衍生自烷基的飽和支鏈或直鏈二價烴基。亞烷基可以任選被取代。本文所用的術語"C1-C3亞烷基〃、"C1-C4亞烷基〃、"C1-C5亞烷基〃、"C1-C6亞烷基'"C1-C7亞烷基〃和"C1-C8亞烷基〃指分別含至少I個，且最多3、4、5、6、7或8個碳原子的亞烷基基團。除非另有說明，亞烷基基團通常是C1-C6亞烷基。如本文所用，亞烷基基團的非限制性示例包括亞甲基、亞乙基、正亞丙基、異亞丙基、正亞丁基、異亞丁基、仲亞丁基、叔亞丁基、正亞戊基、異亞戊基、亞己基等。本文所用的術語「炔基」指部分不飽和的具有至少一個碳-碳三鍵的支鏈或直鏈烴類。炔基可以任選被取代。本文所用的術語"C2-C3炔基〃、"C2-C4炔基〃、"C2-C5炔基"、〃c2-c6炔基〃、"C2-C7炔基〃和"C2-C8炔基〃指分別含至少2個，且最多3、4、5、6、7或8個碳原子的炔基基團。除非另有說明，炔基基團通常是C2-C6炔基。如本文所用，炔基基團的非限制性示例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基等。本文所用的術語「亞炔基」指衍生自炔基的部分不飽和支鏈或直鏈二價烴基。亞炔基可以任選被取代。本文所用的術語"C2-C3亞炔基〃、"C2-C4亞炔基〃、"C2-C5亞炔基〃、"C2-C6亞炔基〃、"C2-C7亞炔基〃和"C2-C8亞炔基〃指分別含至少2個，且最多3、4、5、6、7或8個碳原子的亞炔基基團。除非另有說明，亞炔基基團通常是(2-(6亞炔基。如本文所用，亞炔基基團的非限制性示例包括亞乙炔基、亞丙炔基、亞丁炔基、亞戊炔基、亞己炔基、亞庚炔基、亞辛炔基、亞壬炔基、亞癸炔基等。本文所用的術語「烷氧基」指-ORa基團，其中Ra為本文所定義的烷基。烷氧基可以任選被取代。本文所用的術語"C1-C3烷氧基"、"C1-C4烷氧基"、"C1-C5烷氧基"、"C1-C6烷氧基'"C1-C7烷氧基〃和"C1-C8烷氧基〃指其中烷基部分含至少I個且最多3、4、5、6、7或8個碳原子的烷氧基。如本文所用，烷氧基的非限制性示例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戍氧基、己氧基、庚氧基、羊氧基、壬氧基、癸氧基等。本文所用的術語「芳基」指具有總共5-14個環原子的單環、雙環和三環的環系統，其中所述系統中至少一個環為芳族且其中系統內各環含3-7個環原子。芳基可以任選被取代。如本文所用，芳基的非限制性示例包括苯基、萘基、芴基、茚基、奧基和蒽基等。所用的術語「亞芳基」指衍生自芳基的二價基團。亞芳基可以任選被取代。 本文所用的術語「氰基」指-CN基團。本文所用的術語「環烷基」指飽和或部分不飽和的，單環、稠合雙環或稠合三環或橋接多環的環組裝物。本文所用的術語"C3-C5環烷基〃、"C3-C6環烷基〃、"C3-C7環烷基〃、"C3-C8環烷基、"C3-C9環烷基和"C3-Cltl環烷基所指環烷基中飽和或部分不飽和的，單環、稠合雙環或橋接多環的環組裝物含有至少3個，且最多5、6、7、8、9或10個碳原子。環烷基基團可以任選被取代。如本文所用，環烷基基團的非限制性示例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環戊烯基、環己烯基、十氫萘基、2，3，4，5，6，7-六氫-IH-茚基等。
本文所用的術語「滷素」指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘⑴。本文所用的術語〃滷代」指滷素基團氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)和碘(-I)。本文所用的術語「滷代烷基」或「滷素取代的烷基」指如本文所定義取代有一個或多個滷素基團的烷基，其中所述滷素基團相同或不同。滷代烷基可以任選被取代。如本文所用，此類支鏈或直鏈滷代烷基的非限制性示例包括取代有一個或多個滷素基團的甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基和正丁基，其中所述滷素基團相同或不同，包括但不限於三氟甲基、五氟乙基等。本文所用的術語「滷代烯基」或「滷素取代的烯基」指如本文所定義取代有一個或多個滷素基團的烯基，其中所述滷素基團相同或不同。滷代烯基可以任選被取代。如本文所用，此類支鏈或直鏈滷代烯基的非限制性示例包括取代有一個或多個滷素基團的乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等，其中所述滷素基團相同或不同。如本文所用，術語「滷代炔基」或「滷素取代的炔基」指如本文所定義取代有一個或多個滷素基團的炔基，其中所述滷素基團相同或不同。滷代炔基基團可以任選被取代。如本文所用，此類支鏈或直鏈滷代炔基基團的非限制性示例包括取代有一個或多個滷素基團的乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基等，其中所述滷素基團相同或不同。本文所用的術語「滷代烷氧基」或「滷素取代的烷氧基」指如本文所定義取代有一個或多個滷素基團的烷氧基，其中所述滷素基團相同或不同。滷代烷氧基基團可以任選被取代。如本文所用，此類支鏈或直鏈滷代烷氧基基團的非限制性示例包括取代有一個或多個齒素基團的甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戍氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、壬氧基、癸氧基等，其中所述滷素基團相同或不同。本文所用的術語「雜烷基」指如本文所定義的烷基，其中一個或多個碳原子獨立地被一個或多個氧、硫、氮或其組合置換。本文所用的術語「雜芳基」指具有總共5-14個環原子的單環、雙環和三環的環系統，其中所述系統內至少一個環為芳族，系統內至少一個環含一個或多個選自氮、氧和硫的雜原子，且其中系統內各環含3-7個環原子。雜芳基可含有一個或多個取代基。雜芳基基團可以任選被取代。如本文所用，雜芳基的非限制性示例包括苯並呋喃基、苯並呋咱基(benzofurazanyl)、苯並|1惡唑基、苯並批喃基,苯並噻唑基、苯並噻吩基、苯並氮雜萆基(benzazepinyl)、苯並咪唑基、苯並噻喃基、苯並[1,3]間二氧雜環戍烯基、苯並[b]呋喃基、苯並[b]噻吩基、噌啉基、呋咱基(furazanyl)、呋喃基、呋喃並吡啶基、咪唑基J引哚基、中氮茚基、二氫吲哚-2-酮、吲唑基、異吲哚基、異喹啉基、異Wg唑基、異噻唑基、1，8-萘啶基、囉唑基、曝吲哚基(oxaindolyl)、Ilg 二唑基、吡唑基、吡咯基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基、喹喔啉基、喹啉基、喹唑啉基、4H-喹嗪基、噻唑基、噻二唑基、噻吩基、三嗪基、三唑基和四唑基。本文所用的術語「雜環烷基」指如本文所定義的環烷基，其中一個或多個環碳被選自 _0_、-N=、NR-> -C (0) -、-S-、-S (0)-或-S (0) 2-的部分置換，其中 R 為氫、C1-C4 燒基或氮保護基團，前提是所述基團的環不含兩個相鄰的0或S原子。雜環烷基基團可以任選被取代。如本文所用，雜環烷基的非限制性示例包括嗎啉基、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮、1，4- 二氧雜-8-氮雜-螺[4. 5]癸-8-基、2H-吡咯基、2-吡咯啉基、 3-吡咯啉基、1，3- 二氧戊環基、2-咪唑啉基、咪唑烷基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、1，4- 二嗯烷基、1，4- 二噻烷基、硫代嗎啉基、氮雜環庚烷基、二氮雜:f基(diazepinyl)、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、四氫噻喃基、噻喃基、吖丁啶基、氧雜環丁基、硫雜環丁基(thietanyl )、氧雜環庚燒基(oxepanyl )、硫雜環庚燒基(thiepanyl )、1，2，3，6-四氫吡啶基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二_燒基、1，3-二氧戊環基、二噻烷基、二硫戊環基、二氫吡喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮雜雙環[3. 1.0]己基和3-氮雜雙環[4. I. 0]庚基。本文所用的術語「雜原子」指一個或多個氧、硫、氮、磷或矽。本文所用的術語「羥基」指-OH基團。本文所用的術語「羥烷基」指如本文所定義取代有一個或多個羥基的烷基。如本文所用，支鏈或直鏈UC1-C6-烷基基團的非限制性示例包括取代有一個或多個羥基的甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基和正丁基基團。本文所用的術語「異氰酸基」指-N = C = 0基團。本文所用的術語「異硫氰酸基」指-N = C = S基團。本文所用的術語「巰基」指(烷基)S-基團。本文所用的術語「可任選取代」指所述參考基團可被一個或多個額外基團取代或未被取代，所述額外基團單獨且獨立選自烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、雜芳基、雜環燒基、輕基、燒氧基、疏基、氰1基、齒素、擬基、硫代擬基、異氰1酸基、硫氰1酸基、異硫氰1酸基、硝基、全齒代烷基、全氟代烷基和包括單取代及雙取代氨基基團的氨基，及其受保護的衍生物。任選取代基的非限制性示例包括滷素、-CN、=0、=N-OH, = N-OR、=N-R, OR、-C(O)R、-C (0) OR、-OC (0) R、-OC (0) OR、-C (0) NHR、-C (0) NR2、-OC (0) NHR、-OC (0) NR2、-SR-、-S (0)R、-S (0) 2R、-NHR、-N (R) 2、-NHC (0) R、-NRC (0) R、-NHC (0) OR、-NRC (0) OR、S (0) 2NHR、-S (0) 2N (R)2、-NHS (0) 2NR2、-NRS (0) 2NR2、-NHS (0) 2R、-NRS (0) 2R、C「C8 烷基、C1-C8 烷氧基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、滷素取代的C1-C8烷基、和滷素取代的C1-C8烷氧基，其中各R獨立選自H、滷素、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、芳基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、滷素取代的C1-C8烷基、和滷素取代的C1-C8烷氧基。此類取代基團的位置和數量按各基團熟知的價態限制確定，例如=0是烷基的合適取代基但不適於芳基。本文所用的術語「前藥」指在體內轉化成母體藥物的藥劑。本文所述化合物的前藥的非限制性示例是本文所述化合物作為酯給予，一旦進入細胞，該酯即代謝水解成活性實體一羧酸。前藥的另一示例是連接於酸性基團的短肽，其中所述肽經代謝顯現活性部分。本文所用的術語「溶劑合物」指由溶質(例如，本文所述的式(I)化合物或其鹽)和溶劑形成的可變化學計量的複合物。溶劑的非限制性示例為水、丙酮、甲醇、乙醇和乙酸。「脊椎動物對象」指脊索動物亞門的任何成員，包括但不限於人和其他靈長類動物，包括非人靈長類動物如黑猩猩和其他猿和猴種；家畜如牛、綿羊、豬、山羊和馬；家養哺乳動物如狗和貓；實驗室動物，包括齧齒動物如小鼠、大鼠和豚鼠；包括家養、野生和狩獵鳥類在內的禽類如雞、火雞和其他鶉雞類禽、鴨、鵝等。該術語不表示特定年齡。因此，旨在涵蓋成年和新生個體。本文所用的術語"治療"指以下任意(i)所研究(例如癌症或病原性感染，如在傳統疫苗中)病症(例如，疾病或失調)的預防，(ii)所研究病症相關症狀的減輕或消除， 以及(iii)所研究病症的基本或完全消除。治療可以是有效預防(在所研究病症發生前)或有效治療(在所研究病症發生後)。本發明均勻懸液的術語「有效量」或「藥物有效量」指本文所述足以增強免疫反應的量，例如至少約10%。本發明免疫原性組合物的術語〃有效量〃或〃藥物有效量〃在本文中指足以治療或診斷感興趣病症的所述免疫原性組合物量。所需的確切量將視對象而變化，取決於例如，所述對象的物種、年齡、總體狀況；所治療病症的嚴重程度；感興趣的特定抗原；在免疫應答的情況中，取決於對象的免疫系統合成抗體的能力，和所需的保護程度；以及給予方式，和其他因素。個案中的適當「有效」量可由本領域普通技術人員確定。因此，「治療有效量」通常會落入可通過常規試驗確定的較寬範圍內。「藥學上可接受的」或「藥理學上可接受的」指在生物學或其它方面沒有不良影響的材料，例如，可將該材料給予個體而不引起任何不當的不良生物學作用且不與含所述材料的組合物中任何成分發生不當的有害相互作用。「生理pH」或「生理範圍內的pH」指pH大致在6. 5-8. 0 (含端值)範圍內，更典型在約7. 2-7. 6 (含端值)範圍內。本文所用的術語「可注射組合物」或其變體指適於注射入脊椎動物對象的藥學上可接受的組合物，所述組合物通常無菌、無熱原並具有特定PH和適於注射的等滲值。本文所用的術語〃顆粒〃指直徑為約IOnm或更小-約150 U m的顆粒，例如範圍為 10nm-25nm-50nm-100nm-250nm-500nm-lu m-2. 5u m_5 u m_10 u m_25 u m_50 u m-100u m。因此，本文所用的術語〃顆粒〃包括在本文中定義為顆粒直徑小於IOOOnm的〃納米顆粒"，以及在本文中定義為顆粒直徑在Iym-IOOOiim範圍內的〃微米顆粒"。在一些實施方式中，本文所述聚合顆粒通常可為球形。術語〃多肽〃指胺基酸殘基的聚合物，且不限於產物的最小長度。因此，該定義中包括全長蛋白質、肽、寡肽、二聚體、多聚體等。「含多肽的物質」是某分子，其至少部分為多肽。示例包括多肽，包括糖蛋白、金屬蛋白和脂蛋白在內的蛋白，與載體蛋白偶聯的多糖抗原等。本文所用蛋白包括全長蛋白及其片段。在某些實施方式中，採用天然序列的修飾，例如缺失、添加和取代(通常為保守性)。
本文所用術語的「片段」指生物分子一級結構的某個物理毗連部分。對於蛋白質，片段可由該蛋白胺基酸序列的毗連部分限定，可以為至少3-5個胺基酸、至少6-10個胺基酸、至少11-15個胺基酸、至少16-24個胺基酸、至少25-30個胺基酸和至少30-45個胺基酸。對於多核苷酸，片段可由該多核苷酸的核酸序列的毗連部分限定，可以為至少9-15個核苷酸、至少15-30個核苷酸、至少31-45個核苷酸、至少46-74個核苷酸、至少75-90個核苷酸和至少90-130個核苷酸。在一些實施方式中，生物分子的片段為免疫原性片段。〃多核苷酸〃是核酸聚合物。多核苷酸可包含少至5、6、7或8個核苷酸。此外,〃多核苷酸〃可包含雙鏈和單鏈序列，並指且不限於病毒的cDNA、原核或真核mRNA、病毒的基因組RNA與DNA序列(例如，病毒和逆轉錄病毒的RNA與DNA)、原核或真核生物以及合成的DNA序列。該術語也涵蓋包含任何DNA與RNA的已知鹼基類似物。該術語還包含修飾，例如天然序列的缺失、添加和取代(通常為保守性的)，其中核酸分子編碼抗原性蛋白。這些修 飾可以是有意的，例如通過定點誘變，或者可以是意外的，例如通過產抗原宿主的突變。「含多核苷酸的物質」是某分子，其至少部分為多核苷酸。示例包括RNA載體構建物、DNA載體構建物等。本文所用的術語「糖」包括單糖、寡糖和多糖。「含糖物質」是某分子，其至少部分為糖。示例包括糖抗原、含偶聯於載體肽的糖的抗原等。本文所用的術語"分離"指化學物質如多核苷酸、多肽和抗體等所處環境與天然產生該化學物質的環境不同。分離的化學物質通常基本純化。分離細胞的方法是本領域技術人員熟知的。「純化的」蛋白是從其天然宿主產生(例如，重組或合成)或分離的蛋白質，從而組合物中蛋白質含量顯著高於粗製品中的含量。通常，純化的蛋白質的均一性至少約50%，更優選均一性至少約80%、約85%、約90%、約95%、約97%、約98%、約99%或更高。本文所用的「免疫學應答」或「免疫應答」是對象中發生對免疫原性物質的體液和/或細胞免疫應答。免疫應答包括先天和適應性免疫應答。先天免疫應答是為免疫系統提供一線防禦的快速作用應答。相反，適應性免疫採用選擇和克隆擴增含體細胞重排受體基因的免疫細胞(例如T-和B-細胞受體)來提供特異性和免疫記憶，所述受體基因識別給定病原或疾病(例如腫瘤)的抗原。在其很多效應中，先天免疫應答引起炎性細胞因子的快速突釋並活化抗原呈遞細胞(APC)如巨噬細胞和樹突細胞。為區分病原體和自身組分，先天免疫系統利用多種相對不變的受體檢測病原體的特徵物，這些特徵物稱為病原體相關分子模式或PAMP。已知實驗性疫苗中添加微生物組分導致發生強烈且持續的適應性免疫應答。據報導，這種免疫應答增強的機理涉及模式識別受體(PRR)，其在包括嗜中性粒細胞、巨噬細胞、樹突細胞、自然殺傷細胞、B細胞和一些非免疫細胞如上皮和內皮細胞在內的多種免疫細胞上差異表達。PRR的參與導致這類細胞中一些被活化並分泌細胞因子和趨化因子，以及其他細胞成熟並遷移。這以串聯方式產生炎性環境導致適應性免疫應答的確立。PRR包括非吞噬細胞受體，如Toll樣受體(TLR)和核苷酸結合寡聚結構域(NOD)蛋白，和誘發吞噬作用的受體如清除受體、甘露糖受體和￠-葡聚糖受體。已報導的TLR(與一些已報導配體的示例一起，可在本發明的不同實施方式中用作免疫原性物質)包括如下TLR1(來自分枝桿菌(Mycobacteria)、奈瑟菌(Neisseria)的細菌脂蛋白)，TLR2 (酵母聚糖酵母顆粒、肽聚糖、脂蛋白、糖脂、脂多糖)，TLR3 (病毒雙鏈RNAj IC)，TLR4 (細菌脂多糖、植物產物紫杉醇)，TLR5 (細菌鞭毛)，TLR6 (酵母聚糖顆粒、脂磷壁質酸、支原體的脂肽)，TLR7 (單鏈RNA、咪喹莫特、雷索咪喹莫特(resimiquimod)和其他合成化合物如洛索立賓和溴匹立明)，TLR8 (單鏈RNA、雷索咪喹莫特)和TLR9 (CpG寡核苷酸)等。樹突細胞被視為在啟動初免初始CD4+輔助T (Th)細胞和誘導CD8+T細胞分化成殺傷細胞中最重要的細胞類型。據報導，TLR信號傳遞在確定這些輔助T細胞應答特性中起重要作用，例如TLR信號的特性決定所觀察到ThS答的具體類型(例如，THl與TH2應答)。產生抗體(體液)與細胞免疫的組合作為ThI型應答的部分，而TH2型應答主要是抗體應答。已記載不同TLR配體如CpG DNA(TLR9)和咪唑喹啉(TLR7，TLR8)在體外刺激免疫細胞產生細胞因子。咪唑喹啉是顯示為TLR激動劑的第一種類似藥物的小化合物。進一步的信息參見例如A. Pashine, N. M. Valiante和J. B. Ulmer,Nature Medicine, 11, S63-S68 (2005), K. S. Rosenthal 和 D. H. Zimmerman, Clinical andVaccine Immunology, 13 (8), 821-829 (2006)及其所引文獻。出於本發明的目的，體液免疫應答指由抗體分子介導的免疫應答，而細胞免疫應答是T-淋巴細胞和/或其他白細胞介導的免疫應答。細胞免疫的一個重要方面涉及細胞溶解T細胞(CTL)的抗原特異性應答。CTL特異性針對肽抗原，肽抗原與主要組織相容性複合體(MHC)編碼並在細胞表面表達的蛋白關聯呈遞。CTL幫助誘導並促進胞內微生物的胞內破壞，或感染此類微生物的細胞的裂解。細胞免疫的另一方面涉及輔助T細胞的抗原特異性應答。輔助T細胞協助刺激非特異性效應細胞的功能併集中其活性，所述細胞針對在表面展示MHC分子相關肽抗原的細胞。〃細胞免疫應答〃也指由活化的T細胞和/或包括CD4+和CD8+T細胞衍生細胞在內的其他白細胞產生細胞因子、趨化因子和其他此類分子。因此，引起細胞免疫應答的組合物如免疫原性組合物或疫苗可通過在細胞表面呈遞MHC分子相關抗原而使脊椎動物對象致敏。細胞介導的免疫應答指向在表面呈遞抗原的細胞或其附近。此外，可產生抗原特異性T淋巴細胞用於今後保護免疫宿主。特定抗原或組合物刺激細胞介導免疫應答的能力可通過本領域已知的多種試驗確定，例如通過淋巴增殖(淋巴細胞活化)試驗、CTL細胞毒性細胞試驗，通過測試敏化對象中的抗原特異性T淋巴細胞,或通過測量T細胞響應抗原再刺激的細胞因子生成來確定。這些試驗為本領域熟知。參見例如 Erickson 等,(1993) J. Immunol. 151:4189-4199 ;Doe 等,(1994)Eur.J. Immunol. 24:2369-2376。因此，本文所用的免疫應答可刺激CTL生成和/或輔助T細胞產生或激活。感興趣的抗原還可引發抗體介導的免疫應答。因此，免疫應答可包括例如以下一種或多種效果由例如B細胞生產抗體；和/或特異性針對感興趣組合物或疫苗中一種或多種抗原的抑制T細胞和/或Y ST細胞的激活。例如，這些應答可用以中和感染性和/或介導抗體-補體或抗體依賴性細胞毒性(ADCC)來為經免疫宿主提供保護。這些應答可採用本領域熟知的標準免疫試驗和中和試驗確定。 「抗原」指含能引起免疫學應答的一個或多個表位(線性、構象或兼有)的分子。該術語可與術語「免疫原」互換使用。「表位」是給定物質(例如，抗原性分子或抗原性複合物)中確定其免疫學特異性的部分。表位包含在所述抗原的定義範圍內。通常，表位是天然產生抗原中的多肽或多糖。在人工抗原中，其可為低分子量物質如對氨苯基胂酸衍生物。B細胞表位一般包括至少約5個胺基酸，但可以小到3-4個胺基酸。T細胞表位如CTL表位通常包含至少約7-9個胺基酸，而輔助T細胞表位通常包括至少約12-20個胺基酸。術語「抗原」表示2種亞基抗原，即與該抗原天然關聯的全生物體或細胞，以及殺死、減毒或滅活的細菌、病毒、真菌、寄生蟲或其他微生物或腫瘤細胞分離且單獨的抗原。抗體如抗獨特型抗體，或其片段以及能模擬抗原或抗原決定簇的合成肽模擬表位也涵蓋在本文所用的抗原定義下。類似地，在體內如在基因治療和DNA免疫應用中，表達抗原或抗原決定簇的寡核苷酸或多核苷酸也包含在本文的抗原定義中。因此，出於本發明的目的，抗原可衍生自任何不同的病毒、細菌、寄生蟲、真菌和其他微生物以及任何不同的腫瘤抗原。抗原還包括在體內表達抗原或抗原決定簇的核酸。稍作舉例，抗原可以是來自或衍生自皰疹病毒家族的蛋白質，包括I和2型單純皰疹病毒(HSV)的衍生蛋白如HSV-I和HSV-2糖蛋白gB、gD和gH ;巨細胞病毒(CMV)衍生蛋白包括CMV gB和gH ;肝炎病毒家族包括A型肝炎病毒(HAV)、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒 (HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)、戊型肝炎病毒(HEV)和庚型肝炎病毒(HGV)的衍生蛋白；衍生自HIV的蛋白，包括gpl20、gpl60、gp41、p24gag和p55gag包膜蛋白，所述HIV包括HIV分離物的不同遺傳亞型 HIVmb、HIVSF2、HIVuv、HIVUI、HIVm、HIV-lCM235、HIV-lus4、HIV-2 的成員；猿免疫缺陷病毒(SIV)的衍生蛋白；和衍生自腦膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitides)(A, B，C，Y)、B 型流感嗜血桿菌(Hemophilus influenza) (HIB)、幽門螺桿菌(Helicobacterpylori)的蛋白；人血清白蛋白和卵清蛋白等。與用不同遞送系統給予等量抗原如將抗原作為可溶蛋白給予所引起的免疫應答相比，含本發明所述抗原的免疫原性組合物具有的引發免疫應答的能力更強時，該組合物顯示「增強的免疫原性」。因此，免疫原性或疫苗組合物可因為抗原更具免疫原性或因為在給予抗原的對象中實現免疫應答所需抗原劑量更低或劑量數更少而顯示「增強的免疫原性」。此類增強的免疫原性可通過將所述抗原組合物和抗原對照給予動物並採用本文所述的標準試驗比較兩者的抗體效價和/或細胞介導的免疫加以確定。術語「佐劑」或「免疫學佐劑」指輔助或調節抗原在免疫系統中作用的任何物質。佐劑可增強體液和/或細胞免疫。術語「賦形劑」指可能存在於成品劑型中的任何基本輔助物質。例如，術語「賦形齊IJ」包括載劑、粘合劑、崩解劑、填料(稀釋劑)、懸浮/分散劑等。本文所用的術語"載體構建物"通常指能引導感興趣核酸序列或基因表達的任何組件。〃DNA載體構建物〃指能引導感興趣核酸序列或基因表達的DNA分子。DNA載體構建物的一種具體類型是質粒，其為能在宿主細胞內自主複製的環形附加體DNA分子。通常，質粒是環形雙鏈DNA環，其中可接入額外的DNA片段。pCMV是本領域熟知的一種具體質粒。已知其他基於RNA病毒的DNA質粒構建物。這些DNA載體構建物通常含能在真核細胞中起作用的啟動子，其轉錄產物是RNA載體構建物(例如a病毒RNA載體複製子)的5』 cDNA序列，和3』終止區。載體構建物的其他示例包括RNA載體構建物(例如，a病毒載體構建物)等。如本文所用，"RNA載體構建物"、"RNA載體複製子〃和〃複製子〃指能在體內，通常在靶細胞內指導其自身擴增或自體複製的RNA分子。所述RNA載體構建物直接使用，無需將DNA引入細胞並轉運到可發生轉錄的核中。通過使用RNA載體直接遞送入宿主細胞的胞質，可有效發生異源核酸序列的自主複製和翻譯。術語「均勻」指成分的混合物或摻混物，其結構和組成普遍均一且整個混合物中幾乎沒有變化。在整個混合物的每一個部分，均勻混合物的不同部分基本充分地顯示相同的物理和化學性質。均勻混合物的化學計量學也在整個混合物中基本恆定。術語「懸浮液」涉及液體中分散的顆粒。術語「水性懸浮液」指懸浮在含水的水(連續)相液體中的顆粒。「穩定」均勻懸液是懸浮顆粒的大小不隨時間而實質改變(S卩，改變不超過約10%)的懸浮液。3.免疫增強化合物的均勻懸液一方面，發明是包括下列的均勻懸液(a)式I或式II的苯並萘啶化合物，藥學上可接受鹽，藥學上可接受溶劑合物，N氧化物衍生物，受保護的衍生物，單獨異構體或其異構體混合物；(b)表面活性劑,和(C)懸浮劑。均勻懸液包括水相,可以是水或任何其他合適的水相，例如緩衝水溶液。 均勻懸液優選在4° C穩定至少約2周，至少約4周，至少約2月，至少約3月，至少約4月，至少約5月，至少約6月，至少約7月，至少約8月，至少約9月，至少約10月，至少約11月，至少約I年或更長。均勻懸液優選具有大小分布，其中50%顆粒(D50)小於約10M，小於約9iiM，小於約8 ii M，小於約7 ii M，小於約6 ii M，小於約5 ii M，小於約4 y M，小於約3 y M，小於約2 y M，小於約I U M，或小於約0. 9 ii M。或者或另外，均勻懸液能具有大小分布，其中90 %顆粒(D90 )小於約10 u M,小於約9 ii M，小於約8 ii M，小於約7 ii M，小於約6 y M，小於約5 y M，小於約4 u M,小於約3 u M,或小於約2 u M。均勻懸液能包括任何合適的表面活性劑，例如陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑，兩性離子(兩性)表面活性劑或非離子表面活性劑。示例性陰離子表面活性劑包括例如，全氟辛酸鹽(PF0A或PF0)、全氟辛烷磺酸鹽(PF0S)，烷基硫酸鹽如十二烷基硫酸鈉(SDS)或月桂基硫酸銨，月桂醇聚醚硫酸鈉(也稱月桂基醚硫酸鈉，SLES)，烷基苯磺酸鹽和脂肪酸鹽。示例性陽離子表面活性劑包括例如，烷基三甲基銨鹽如鯨蠟基三甲基溴化銨(CTAB,或十六烷基溴化三甲基銨)，氯化鯨蠟基吡啶(CPC)，聚乙氧基化牛油胺(POEA)，苯扎氯銨(BAC)和苄索氯銨(BZT)。示例性兩性離子(兩性)表面活性劑包括例如，十二烷基甜菜鹼，椰油醯胺丙基甜菜鹼和椰油兩性甘氨酸鹽。示例性非離子型表面活性劑包括例如，烷基聚(氧化乙烯)、烷基苯酚聚(氧化乙烯)、聚(氧化乙烯)和聚(氧化丙烯)的共聚物[商品名為泊洛沙姆(Poloxamer)或泊洛沙胺(Poloxamine)]、烷基聚葡萄糖苷(如辛基葡萄糖苷和癸基麥芽糖苷)、脂肪醇(例如鯨蠟醇和油醇)、椰油醯胺MEA、椰油醯胺DEA，普流羅尼克F68和聚山梨醇酯，如吐溫(Tween)-20 (聚山梨醇酯20)、吐溫-80 (聚山梨醇酯80)，和十二烷基二甲基氧化胺。如果需要，均勻懸液能包括任何組合的兩個或多個表面活性劑。均勻懸液能包括約0. 1%-約10%表面活性劑(v/v或w/v)，約0. 1%_約5%表面活性劑，0. 1%-約4%表面活性劑，0. 1%-約3%表面活性劑，0. 1%-約2%表面活性劑，0. 1%-約1%表面活性劑，0. 1%-約0. 5%表面活性劑，約0. 1%表面活性劑，約0. 2%表面活性劑，約0. 3%表面活性劑，約0. 4%表面活性劑，約0. 5%表面活性劑，約0. 6%表面活性劑，約0. 7%表面活性劑，約0. 8%表面活性劑,約0. 9%表面活性劑,或約1%表面活性劑。本文所述均勻懸液中使用的優選表面活性劑是吐溫-80 (聚山梨醇酯80)。均勻懸液優選包括約 0. 1%-約 5%, 0. 1%-約 4%, 0. 1%-約 3%, 0. 1%-約 2%, 0. 1%-約 1%，0. 1%-約0. 5%,約 0. 1%，約 0. 2%,約 0. 3%,約 0. 4%,約 0. 5%,約 0. 6%,約 0. 7%,約 0. 8%,約 0. 9%,或約1%吐溫80。均勻懸液能包括任何合適懸浮劑，例如增加黏性的懸浮劑。本領域熟知的多種這類試劑包括，例如，纖維素衍生物(羧甲基纖維素，羥丙基纖維素，羥丙基甲基纖維素)，黃原膠，藻酸鈉，角叉菜膠，黃蓍膠，熟化澱粉(如馬鈴薯澱粉)，瓜耳膠，熔凝二氧化矽，香茅醇，香葉醇，二氫mercinol，芳樟醇，橙花醇，羅丁醛，a萜品醇，P -香茅醇，玫瑰醇，香茅油腈，香芹酮，小茴香酮，薄荷醇和異龍腦。如果需要，均勻懸液能包括任何組合的兩個或多個懸浮劑。均勻懸液能包括約0. 1%-約10%懸浮劑(v/v或w/v )，約0. 1%-約5%懸浮劑，0. 1%-約4%懸浮劑，0. 1%-約3%懸浮劑，0. 1%-約2%懸浮劑，0. 1%-約1%懸浮劑，0. 1%-約0. 5%懸浮劑，約0. 1%懸浮劑，約0. 2%懸浮劑，約0. 3%懸浮劑，約0. 4%懸浮劑，約0. 5%懸浮齊[J，約0. 6%懸浮劑，約0. 7%懸浮劑，約0. 8%懸浮劑，約0. 9%懸浮劑，或約1%懸浮劑。本文所述均勻懸液使用的優選懸浮劑是羧甲基纖維素(CMC)。均勻懸液優選包括約 0. 1%-約 5%, 0. 1%-約 4%, 0. 1%-約 3%, 0. 1%-約 2%, 0. 1%-約 1%，0. 1%-約 0. 5%,約 0. 1%， 約0. 2%,約0. 3%,約0. 4%,約0. 5%,約0. 6%,約0. 7%,約0. 8%,約0. 9%,或約1%羧甲基纖維素(CMC)。均勻懸液也包括式I或式II的苯並萘啶化合物，藥學上可接受鹽，藥學上可接受溶劑合物，N氧化物衍生物，受保護的衍生物，單獨異構體或其異構體混合物。均勻懸液也包括苯並萘唳化合物，濃度為約0. lmg/mL-約50mg/ml,約0. lmg/mL-約40mg/ml,約0. Img/ml約 30mg/ml,約 0. lmg/mL-約 20mg/ml,約 0. lmg/mL-約 10mg/ml,約 0. lmg/mL-約 5mg/ml,約 0. 5mg/mL,約 I. Omg/mL,約 I. 5mg/mL,約 2mg/mL,約 2. 5mg/mL,約 3mg/mL,約 3. 5mg/mL,約 4mg/mL,約 4. 5mg/mL,約 5mg/mL,約 5. 5mg/mL,約 6mg/mL,約 6. 5mg/mL,約 7mg/mL,約
7.5mg/mL,約 8mg/mL,約 8. 5mg/mL,約 9mg/mL,約 9. 5mg/mL,約 10mg/mL,約 15mg/mL,或約20mg/mLo在優選實施方式中，均勻懸液包括苯並萘啶化合物，選自2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇；2-(4_甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶-5-胺；2-(2，4_ 二甲基苯乙基)苯並[f][l，7]萘啶-5-胺；4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶-2-基)乙基)_3_甲基苯甲酸乙酯；2-(4-( 二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-5-胺，和2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-5-胺。在另一個優選實施方式中，均勻懸液包括苯並萘啶化合物，選自2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇；2_ (4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-5-胺;2-(2，4_ 二甲基苯乙基)苯並[f] [1,7]萘啶-5-胺；4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶-2-基)乙基)_3_甲基苯甲酸乙酯；2-(4-( 二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶-5-胺，2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶-5-胺，和2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f] [1，7]萘唳-2-基)乙基)-3_甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。在一個特定優選實施方式中，均勻製劑包括2-(2，4_ 二甲基苯乙基)苯並[f]萘啶-5-胺。在另一個特定優選實施方式中，均勻製劑包括2-(2，4_ 二甲基苯乙基)苯並[f][1,7]萘啶-5-胺，2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶_5_胺，或2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶_2_基)乙基)-3_甲基苯氧基)乙氧
基)乙醇。在某些實施方式中，均勻製劑包括(a)式I或式II的苯並萘啶化合物，藥學上可接受鹽，藥學上可接受溶劑合物，N氧化物衍生物，受保護的衍生物，單獨異構體或其異構體混合物；(b ) 0. 1%-約5%吐溫80， 和(c ) 0. 1%-約10%羧甲基纖維素，並且穩定。在這些實施方式的某些示例中，均勻製劑的D50約為1，並且任選D90約為2。均勻製劑優選穩定至少約一個月。例如，一些實施方式中均勻製劑能穩定至少約一個月，至少約兩個月，至少約三個月，至少約四個月，至少約五個月，至少約六個月，至少約七個月，至少約八個月，至少約九個月，至少約十個月，至少約十一個月，或至少約十二個月。苯並萘啶化合物適用於本發明的苯並萘啶化合物包括含有式(I)或式(II)化合物，藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的溶劑合物(如水合物)，N-氧化物衍生物，前藥衍生物，受保護衍生物，個體異構體及其異構體混合物。在本文所提供免疫原性組合物的某些實施方式中，所述苯並萘啶化合物是結構式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽
(RB)o-3
I ,1RA) -3
R人 M
NH2式(I)其中R4 選自 H、滷素、-C(O) OR7、_C(0)R7、-C(O) N (R11R12)、-N (R11R12)、-N(R9)2' -NHN (R9)2、-SR7、-(CH2)nOR' -(CH2)nR' -LR8、-LR10, -OLR8, -OLR10, C1-C6 烷基、C1-C6 雜烷基、C1-C6 滷代烷基、C2-C8烯烴、C2-C8炔烴、C1-C6烷氧基、C1-C6滷代烷氧基、芳基、雜芳基、C3-C8環烷基和C3-C8雜環烷基，其中R4的C1-C6烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6滷代烷基、C2-C8烯烴、C2-C8炔烴、C1-C6烷氧基、C1-C6滷代烷氧基、芳基、雜芳基、C3-C8環烷基和C3-C8雜環烷基各自任選由1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自滷素、-CN、-NO2, -R7、-OR8、-C(O)R8, -OC(O)R8、-C(O) OR8、-N(R9)2' -P(O) (OR8)2, -OP(O) (OR8)2, -P(O) (OR10)2, -OP(O) (OR10)2, -C(O)N (R9)2, -S (0) 2R8、-S (0) R8、-S (0) 2N (R9) 2 和-NR9S (0) 2R8 ；各L獨立地選自鍵、-(0 (CH2) m) t_、C1-C6烷基、C2-C6亞烯基和C2-C6亞炔基，其中L的C1-C6烷基、C2-C6亞烯基和C2-C6亞炔基各自可選取代有1-4個取代基，所述取代基獨立地選自滷素、-R8、-OR8、-N (R9)2' -P (0) (OR8)2, -OP (0) (OR8)2, -P (0) (OR10) 2 和-OP (0) (OR10) 2 ；R7選自H、C1-C6烷基、芳基、雜芳基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6滷代烷基、C2-C8烯烴、C2-C8炔烴、C1-C6烷氧基、C1-C6滷代烷氧基、C3-C8雜環烷基，其中R7的C1-C6烷基、芳基、雜芳基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6滷代烷基、C2-C8烯烴、C2-C8炔烴、C1-C6烷氧基、C1-C6滷代烷氧基、C3-C8雜環烷基各自可任選由1-3個R13基團取代；
各R8獨立地選自H、-CH (Riq) 2、C1-C8烷基、C2-C8烯烴、C2-C8炔烴、C1-C6滷代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6雜烷基、C3-C8環烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C6羥基烷基和C1-C6滷代烷氧基，其中R8的C1-C8烷基、C2-C8烯烴、C2-C8炔烴、C1-C6雜烷基、C1-C6滷代烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C6羥基烷基和C1-C6滷代烷氧基各自可任選由1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自-CN、R11、-0R11、-SR11、-C(O)R11' -OC(O) R11、-C(O)N(R9)2' -C(O)OR11' -NR9C(O)R11' -NR9R10, -NR11R12, -N(R9)2, -OR9、-OR1。、-C(0)NR11R12, -C(O)NRn0H、-S(O)2R'-S(O) Ri-S(O)2NRiiR1^-NR11S(O)2R'-P(O) (OR11)2 和-OP(O) (OR11)2 ；各R9 獨立地選自 H、-C (0) R8、-C (0) OR8、-C (0) R10、-C (0) OR10、-S (0) 2R10、-C1-C6 烷基、C1-C6雜烷基和C3-C6環烷基，或各R9獨立為與所連N —起形成C3-C8雜環烷基的C1-C6烷基，其中所述C3-C8雜環烷基環可任選含有選自N、0和S的額外雜原子，且其中R9的C1-C6烷基、C1-C6雜烷基、C3-C6環烷基或C3-C8雜環烷基可任選由1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自-CN、R11、-0R11、-SR11、-C (0) R11、-OC (0) R11、-C (0) OR11、_NRnR12、-C (0) NR1 1R12、-C (0)NRn0H、-S(O)2R'-S(O) Ri-S(O)2NRiiR1^-NR11S(O)2R'-P(O) (OR11)2 和-OP(O) (OR11)2 ；各Rltl獨立地選自芳基、C3-C8環烷基、C3-C8雜環烷基和雜芳基，其中所述芳基、C3-C8環烷基、c3-c8雜環烷基和雜芳基可任選由1-3個取代基取代，所述取代基選自滷素、_R8、-OR8、-LR9、-LOR9、-N (R9)2' -NR9C (0) R8、-NR9CO2R8' -CO2R8、-C (0) R8 和-C (0) N (R9) 2 ；R11和R12獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6滷代烷基、芳基、雜芳基、C3-C8環烷基和C3-C8雜環烷基，其中R11和R12的C1-C6烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6齒代烷基、芳基、雜芳基、C3-C8環烷基和C3-C8雜環烷基各自可任選由1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自滷素、-CN、R8、-OR8、-C (0) R8、-OC (0) R8、-C (0) OR8、-N(R9)2, -NR8C (0) R8、-NR8C (0)OR8、-C(O)N(R9)2, C3-C8 雜環烷基、-S(O)2R8' -S(O)2N(R9)2' -NR9S(O)2R8' C「C6 滷代烷基和C1-C6滷代烷氧基；或者R11和R12各自獨立為C1-C6烷基，並與所連接的N原子一起形成可任選取代的C3-C8雜環烷基環，該環可任選含有選自N、0和S的額外雜原子；各R13 獨立地選自滷素、-CN、-LR9、-LOR9, -OLR9, -LR10, -LOR10, -OLR10, -LR8、-LOR8、-OLR8、-LSR8、-LSR10, _LC(0)R8、-OLC(O) R8、-LC(O) OR8、_LC(0)R10、-LOC(O) OR8、-LC(O)NR9R11、-LC (0) NR9R8、-LN (R9) 2、-LNR9R8、-LNR9R10、-LC (0) N (R9) 2、- LS (0) 2R8、-LS (0) R8、-LC (0)NR8OH, -LNR9C(O) R8、-LNR9C(O) OR8, -LS(O)2N(R9)2' -OLS(O) 2N (R9)2, -LNR9S(O)2R8, -LC(O)NR9LN (R9)2, -LP (0) (OR8)2, -LOP (0) (OR8)2, -LP (0) (OR10) 2 和-OLP (0) (OR10) 2 ；各Ra 獨立地選自-R8、- R7、-0R7、-0R8、- R10、-OR10、-SR8、-NO2、-CN、-N(R9)2'-NR9C (0)R8、-NR9C (S) R8、-NR9C (O)N(R9)2, -NR9C(S)N(R9)2, -NR9CO2R8、-NR9NR9C (0) R8、-NR9NR9C (0)N(R9)2, -NR9NR9CO2R8, -C (O)C(O) R8, -C (0) CH2C (0) R8、-CO2R8, -(CH2)nCO2R8, -C (O)R8, -C(S)R8、-C (0) N (R9)2, -C ⑶ N (R9)2, -OC (0) N (R9)2, -OC (0) R8、-C (0) N (OR8) R8、-C (NOR8) R8、-S (0) 2R8、-S (0) 3R8、-SO2N (R9) 2、-S (0) R8、-NR9SO2N (R9) 2、-NR9SO2R8、-P (0) (OR8) 2、-OP (0) (OR8) 2、-P (0)(OR10)2, -OP (0) (OR10) 2、-N (OR8) R8、-CH=CHCO2R8、-C (=NH) -N (R9) 2 和-(CH2) nNHC (0) R8 ;或結合環上兩個相鄰Ra取代基形成含最多兩個雜原子作為環成員的5-6元環；各n 獨立地為 0、1、2、3、4、5、6、7 或 8 ；各m獨立地選自1、2、3、4、5和6，以及t 為 1、2、3、4、5、6、7 或 8。
在其他實施方式中，所述苯並萘啶化合物是結構式(II)所示化合物或其藥學上可接受的鹽
權利要求
1.一種均勻懸液，所述懸液包括(a)式I或式II的苯並萘啶化合物，其藥學上可接受鹽，藥學上可接受溶劑合物，N氧化物衍生物，受保護的衍生物，單獨異構體或異構體混合物；(b)表面活性劑，和(c)懸浮劑，其中懸液在4° C至少穩定約四周。
2.如權利要求I所述的均勻懸液，其特徵在於，所述均勻懸液包括約0.1%-約10%表面活性劑。
3.如權利要求I或2所述的均勻懸液，其特徵在於，所述均勻懸液包括約0.1%-約10%懸浮劑。
4.如前述權利要求中任一項所述的均勻懸液，其特徵在於，所述均勻懸液包括約0. 5mg/mL-約50mg/mL苯並萘唳化合物。
5.如前述權利要求中任一項所述的均勻懸浮物，其特徵在於，所述表面活性劑是吐溫80 (聚山梨酯80)。
6.如前述權利要求中任一項所述的均勻懸液，其特徵在於，所述懸浮劑是黏性增強懸浮劑。
7.如權利要求6所述的均勻懸液，其特徵在於，所述黏性增強劑是羧甲基纖維素鈉。
8.如前述權利要求中任一項所述的均勻懸液，其特徵在於，所述至少約50%的懸浮顆粒的直徑是約10 ii m或更小。
9.如前述權利要求中任一項所述的均勻懸液，其特徵在於，所述至少約50%的懸浮顆粒的直徑是約2 ii m或更小。
10.如前述權利要求中任一項所述的均勻懸液，其特徵在於，所述苯並萘啶化合物是2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶-2-基)乙基)_3_甲基苯基)丙-2-醇；2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶-5-胺；4-(2-(5_氨基-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯；2-(4-( 二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-5-胺;2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯並[f] [1,7]萘啶-5-胺；或2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f] [1，7]萘啶_2_基)乙基)_3_甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。
11.一種免疫原性組合物,所述組合物包括抗原和權利要求1-10中任一項所述的均勻懸液。
12.如權利要求11所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述組合物還包含佐劑。
13.如權利要求12所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述佐劑是含鋁佐劑。
14.如權利要求13所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述含鋁佐劑是氫氧化鋁，羥基氧化鋁或羥基磷酸鋁。
15.如權利要求12所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述佐劑是水包油乳液。
16.如權利要求12所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述佐劑是MF59。
17.如權利要求12所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述佐劑是脂質體。
18.如權利要求17所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述脂質體是外膜囊泡。
19.如權利要求12所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述佐劑是寡核苷酸。
20.如權利要求19所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述寡核苷酸包括未甲基化的CpG基序。
21.如權利要求11-21中任一項所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述抗原是細菌抗原。
22.如權利要求21所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述細菌抗原是來自腦膜炎奈瑟球菌的抗原。
23.如權利要求11-21中任一項所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述抗原是病毒抗原。
24.如權利要求23所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述病毒抗原是來自呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原。
25.如權利要求23所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述病毒抗原是來自伊波拉病毒的抗原。
26.—種在對象中引起免疫應答的方法，所述方法包括將權利要求11-25中任一項所述的免疫原性組合物給予所述對象。
27.—種產生權利要求I所述均勻懸液的方法，所述方法包括 (a)將式(I)或式(II)的苯並萘啶化合物、藥學上可接受的鹽、藥學上可接受的溶劑合物、N氧化物衍生物、受保護衍生物、個體異構體或其異構體混合物，與表面活性劑和懸浮劑混合。
(b)在壓力下勻質化步驟(a)的混合物，其中，壓力為約15，OOOpsi-約20，OOOpsi。
28.—種均勻懸液，所述均勻懸液包含 (a)2-(2，4-二甲基苯乙基)苯並[f][l，7]萘啶-5-胺，其藥學上可接受鹽，藥學上可接受溶劑合物，N氧化物衍生物，受保護衍生物，單獨異構體或其異構體混合物，(b)表面活性劑，和(c )懸浮劑，其中懸液在4 ° C穩定至少約四周。
29.如權利要求28所述的均勻懸液，其特徵在於，所述均勻懸液包括約0.1%-約10%表面活性劑。
30.如權利要求28或29所述的均勻懸液，其特徵在於，所述均勻懸液包括約0.1%-約10%懸浮劑。
31.如權利要求28-30中任一項所述的均勻懸液,其特徵在於,所述均勻懸液包括約0. 5mg/mL-約 10mg/mL 2-(2, 4- 二甲基苯乙基)苯並[f] [I, 7]萘啶-5-胺。
32.如權利要求28-31中任一項所述的均勻懸液，其特徵在於，所述表面活性劑是吐溫80。
33.如前述權利要求28-32中任一項所述的均勻懸液，其特徵在於，所述懸浮劑是黏性增強懸浮劑。
34.如權利要求33所述的均勻懸浮物，其特徵在於，所述黏性增強試劑是羧甲基纖維素鈉。
35.如權利要求28-34中任一項所述的均勻懸液，其特徵在於，所述至少約50%懸浮顆粒的直徑是約10 ii m或更小。
36.如權利要求28-35中任一項所述的均勻懸液，其特徵在於，所述至少約50%懸浮顆粒的直徑是約2 ii m或更小。
37.一種免疫原性組合物，所述組合物包括抗原和權利要求28-36中任一項所述的均勻懸液。
38.如權利要求37所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述組合物還包含佐劑。
39.如權利要求38所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述佐劑是含鋁佐劑。
40.如權利要求39所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述含鋁佐劑是氫氧化鋁，羥基氧化鋁或羥基磷酸鋁。
41.如權利要求38所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述佐劑是水包油乳液。
42.如權利要求41所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述佐劑是MF59。
43.如權利要求38所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述佐劑是脂質體。
44.如權利要求43所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述脂質體是外膜囊泡。
45.如權利要求38所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述佐劑是寡核苷酸。
46.如權利要求45所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述寡核苷酸包括未甲基化的CpG基序。
47.如權利要求37-46中任一項所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述抗原是細菌抗原。
48.如權利要求47所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述細菌抗原是來自腦膜炎奈瑟球菌的抗原。
49.如權利要求37-46中任一項所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述抗原是病毒抗原。
50.如權利要求49所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述病毒抗原是來自呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原。
51.如權利要求49所述的免疫原性組合物，其特徵在於，所述病毒抗原是來自伊波拉病毒的抗原。
52.—種在對象中產生免疫應答的方法，所述方法包括將權利要求37-51中任一項所述的免疫原性組合物給予所述對象。
53.—種產生權利要求28所述均勻懸液的方法,所述方法包括 Ca)混合2-(2，4- 二甲基苯乙基)苯並[f] [I, 7]萘啶-5-胺與表面活性劑和懸浮劑。
(b)在約15，OOOpsi-約20，OOOpsi的高壓下勻質化步驟(a)的混合物。
54.—種均勻懸液,所述均勻懸液包含 (a)2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯並[f][l，7]萘啶_5_胺，其藥學上可接受鹽，藥學上可接受溶劑合物，N氧化物衍生物，受保護衍生物，單獨異構體或異構體混合物，(b)表面活性劑，和(c)懸浮劑，其中懸液在4° C穩定至少約四周。
55.一種均勻懸液，所述均勻懸液包含 (a)2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯並[f] [1，7]萘啶_2_基)乙基)_3_甲基苯氧基)乙氧基)乙醇，其藥學上可接受鹽，藥學上可接受溶劑合物，N氧化物衍生物，受保護衍生物，單獨異構體或異構體混合物，(b)表面活性劑，和(c)懸浮劑，其中懸液在4° C穩定至少約四周。
全文摘要
本發明一般涉及能刺激或調節需要對象中免疫反應的小分子免疫增強劑(SMIP)的均勻懸液。所述均勻懸液可以與多種抗原或佐劑聯用於疫苗治療。
文檔編號A61K31/4745GK102762206SQ201080063748
公開日2012年10月31日 申請日期2010年12月15日 優先權日2009年12月15日
發明者D·斯基賓斯基, D·歐哈根, M·辛格, S·簡恩 申請人:諾華有限公司