精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物及其製備方法

2023-10-04 20:48:34 12

專利名稱：精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物及其製備方法
技術領域：
本發明涉及精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物，以及精製和製備方該聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物的方法。特別的，本發明涉及八單元聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物，該共聚物含有限制量的低分子量低聚物雜質，在動物消化道中具有降低的吸附性能；以及本發明涉及在製備時限制低分子量低聚物雜質的含量精製和製備聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物背景技術改善餵養動物如菜牛、家禽和豬等的飼料的生產效率和生長性能是動物飼料行業一直的目標。為了實現該目標，餵養動物的農場主們在動物飼料中加入了營養輔劑和低含量的抗生素。餵食少量的抗生素如四環素、青黴素、磺胺甲嘧啶發現能夠極大的增加菜牛、豬和家禽的生長性能。這是因為動物消化效率取決於其消化道內自然生成的微生物。這些微生物中的一些能夠改善消化，而另一些會有相反的效果。在豬、家禽和牛的飼料中加入低含量的抗生素可以抑制動物消化道中微生物的副作用。抗生素幫助腸道吸收更多的營養和水，從而幫助動物更好的利用食物生長。在動物飼料中加入抗生素也降低了動物之間的傳染病傳播。因此，作為人類消費的大部分菜牛、豬和家禽在其日常進食中都含有抗生素。
儘管在動物飼料中使用抗生素有助於提高生長性能和飼養效率，但是大範圍的使用抗生素會促使耐抗生素的病原體出現。此外，動物飼料中使用抗生素也會造成外界環境中的細菌暴露於抗生素。這種內部的和外部的細菌經常暴露於抗生素，容易導致動物體內的細菌有不易控制的風險。動物的土壤和水環境也會受到動物廢料中殘留抗生素的汙染。如果耐藥的細菌在動物或享用動物的人類中引起傳染病，這種傳染病通過常規的抗生素就不能治療。而且，嚴重的傳染病將使得尋找適合治療疾病的抗生素的時間大大減少。另外，通過肉類進入人體的耐抗生素的細菌引起的疾病經常需要同時用抗生素進行治療。當人類用抗生素治療有害細菌引起的傳染病時，人體內許多有益和正常的細菌也被抑制了。這種正常細菌的抑制將允許耐抗生素的細菌快速繁殖，從而引起比正在治療的傳染病更加嚴重的傳染病。肉中耐抗生素的病原體繁殖和人類不加選擇的使用抗生素治療疾病所產生的耐抗生素的個體引起的病原體繁殖正在使現在的抗生素失去作用。
因此，食品和藥物管理局獸醫中心聯合美國農業部疾病控制中心(NARMS)於1996年建立了國家耐抗菌劑監測系統，從而監控人類和動物腸內細菌對幾種抗生素的易受性。NARMS的項目在2001年和2002年擴展為包括測試銷售的肉類和動物飼料的成分。在一項研究中，疾病預防控制中心的研究人員從喬治亞州、馬裡蘭州、明尼蘇達州和俄勒崗州的四個州中選取了26個超市的407個雞肉的樣品。研究人員發現237個雞肉樣品受到了乳酸腸球菌的汙染，該乳酸腸球菌對抗生素的組合具有耐受性。在另一項研究中，來自美國食品和藥物管理局的調查人員發現在美國華盛頓三個超市購買的200個火雞、雞肉、牛肉和豬肉樣品被沙門氏菌汙染。此外，84％的這些細菌至少對一種抗生素具有耐受性，53％的細菌至少對三種抗生素具有耐受性。美國每年將近有140萬例沙門氏菌感染牛肉、豬肉、家禽、蛋類和奶類食品的案子。這在年齡較大的人和免疫功能失常的人群中風險最高。因此FDA在考慮禁止使用某些抗生素。現在世界上有很多禁止非治療性抗生素使用的法規，從而防止對人類健康的威脅。相應的，動物飼料行業發展提高產量和生長性能的非抗生素化合物飼料很有必要。
已經發現一些聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物在餵食動物或人類時具有生物活性。已經發現某些聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物能夠抑制微生物如細菌、酵母菌和病毒的生長。這些商業上可以得到的共聚物的生物活性在美國專利5114708和5234683中有詳細公開，餵食後對動物的免疫和生長都有作用。這些化合物由親水聚氧乙烯(POE)和憎水聚氧丙烯(POP)塊組成。一般商業上可得到的八單元共聚物有8個片段或塊-POP和POE各四個。這些共聚物的通式如下(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2商業上可得到的八單元共聚物的平均總分子量約為1500-40000道爾頓。「a」為聚氧乙烯(C2H4O)a塊的重量百分比，範圍約為化合物總分子量的10％-40％，分子量約為176-1100道爾頓。「b」為聚氧丙烯塊的重量百分比，範圍約為化合物總分子量的60％-90％，分子量約為232-9900道爾頓。由於這些化合物沒有顯示出抗生素或激素的活性，而且它們在餵食動物或給動物注射時確實具有提高生長性能和免疫刺激的性能。
確信的是，合成八單元共聚化合物能夠在胃腸內(GI)提高目標動物的生長性能。不受下述理論限制，也可以確信的是，由於八單元共聚化合物具有憎水和親水的部位，它們可以作為表面活性劑，以及調整腸胃通道中和壁上排列的上皮細胞中的濃度的分配係數。通過調整這種相互作用，單元共聚物可以增加吸收性能差的營養成分的吸收，以及限制粘附和隨後低含量腸內病原體的移殖。
由於確信合成八單元共聚化合物的生物作用發生在GI管道內，這些共聚物的全方位吸收既不必要也不需要。吸收到循環中後在體內分布共聚物，在目標動物中能夠產生不需要的負面效應。而且，目標動物體內分散的化合物提高了動物的健康安全，這是因為任何動物組織吸收的殘留物的量最終將被人類消費。正由於此，通過GI管道降低吸收的合成八單元共聚化合物和接著餵食動物的消化將是需要的。
這些合成的聚合物的分子鏈分布通常很寬，可以用平均分子量進行描述。商業上可得到的聚氧丙烯/聚氧乙烯八單元共聚物的平均分子量約為1500-40000道爾頓。由於它們相對高的平均分子量，通常認為這些促進生長的聚合物在動物口服時不會被大量吸收。
不過，由於商業上可得到的八單元共聚物通常含有大量的分子量小於4000道爾頓的聚合物鏈，有一個驚人的發現，即商業上可得到的八單元共聚物的小的生物活性位可以在動物體內吸收，從而使人類使用該動物時遇到麻煩。因此，本技術需要一種能夠在促進生長的同時具有降低的可吸收組分的商業上可得到的八單元共聚物，從而降低動物口服時吸收的風險。相應的，本技術也需要簡單和便宜的方法選擇性的除去八單元共聚物中存在的可吸收組分，同時仍然保持共聚物的促生長效果。

發明內容
本發明包括聚氧丙烯/聚氧乙烯八單元共聚物新的製備方法，商業製備的共聚物具有生長促進和免疫提高的活性，但是現有技術製備的共聚物具有很多副作用。和現有技術製備相比，由於構成本發明的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物分子量分別窄，低分子量的物質較少，因此該共聚物的生物活性範圍更好控制。而且，由於本發明的共聚物在動物消化組織中很少吸收，因此本發明的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物極大的降低了人類食用動物時對人類健康造成的風險。
本發明包括下式所述的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該共聚物的平均分子量約為4000-10000道爾頓；「a」代表的是POE佔化合物總重的5％-20％，「b」代表的是POP佔化合物總重的80％-95％。優選共聚物優選含有少於4wt％的低分子量組分，其分子量小於4000道爾頓。
聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物的一第二實施例具有下述通式(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的分子量約為4000-10000道爾頓；「a」代表的是POE佔化合物總重的5％-20％，「b」代表的是POP佔化合物總重的80％-95％，少於50wt％的組合物通過動物胃腸通道吸收。
和現有技術相比，本發明也涉及製備聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物的方法，該組合物具有窄的分子量分布和較少的低分子量物質。製備精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物組合物的第一種方法包括溶劑萃取技術，其中聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物具有下述化學式(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該共聚物組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓；「a」代表的是POE佔組合物總重的5％-20％，「b」代表的是POP佔組合物總重的80％-95％；超過4wt％的組成共聚物組合物的分子量小於4000道爾頓。共聚物組合物和水、低沸點無毒溶劑混合。然後混合物進行分離，從而至少形成兩層，其中至少一層含有精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物的分子量小於4000道爾頓，比例小於4wt％。然後萃取出精製的組合物。
在第二種方法中，精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物首先通過提供下式所述的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物進行製備(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓；「a」代表的是POE佔組合物總重的5％-20％，「b」代表的是POP佔組合物總重的80％-95％；超過4wt％的共聚物組合物的分子量小於4000道爾頓。共聚物組合物和低沸點無毒溶劑混合。然後分離得到的混合物，從而至少形成兩層，其中至少一層含有精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物的分子量小於4000道爾頓，比例小於4wt％。然後萃取出精製的組合物以供使用。
在第三種方法中，精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物首先通過提供下式所述的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物進行製備(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓；「a」代表的是POE佔組合物總重的5％-20％，「b」代表的是POP佔組合物總重的80％-95％；超過4wt％的共聚物組合物的分子量小於4000道爾頓。在組合物中加入一些高壓二氧化碳，然後在該壓力下進行攪拌。分離得到的混合物，從而至少形成兩相，其中第一相中含有該組合物，第二相中含有精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物的分子量小於4000道爾頓，比例小於4wt％。然後萃取第一相，從而留下精製的共聚物組合物。
在第四種方法中，精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物首先通過分別混合鹼性催化劑和低分子量氮化合物進行重新合成，其中低分子量氮化合物是水溶性的。然後混合物在真空中加熱。降低溫度後，在混合物中加入一些乙撐氧，接著加入一些氧化丙烯。接下來的步驟包括分別加入一些矽酸鎂、硅藻土和水除去催化劑。然後冷卻混合物，用壓力濾器過濾，得到具有下式所述的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓；「a」代表的是POE佔組合物總重的5％-20％，「b」代表的是POP佔組合物總重的80％-95％；超過4wt％組合物的分子量小於4000道爾頓。


圖1是商業上得到的POP/POE共聚物的凝膠滲透色譜圖；圖2是實例3的萃取順序流程圖；圖3是實例4的萃取順序流程圖；圖4是實例4己烷層的凝膠滲透色譜圖；圖5是實例4水層的凝膠滲透色譜圖；圖6是實例5己烷上層的凝膠滲透色譜圖；圖7是實例5己烷底層的凝膠滲透色譜圖；圖8是實例5庚烷上層的凝膠滲透色譜圖；圖9是實例5庚烷底層的凝膠滲透色譜圖；圖10是實例5戊烷上層的凝膠滲透色譜圖；以及圖11是實例5戊烷底層的凝膠滲透色譜圖。
具體實施例方式
如下述實例5-7所示，申請人發現八單元共聚物分子的相對尺寸是決定其吸收可能性的重要因素。八單元共聚物較低分子量的組分在胃腸通道中更容易吸收。這些低分子量組分的分子量為小於4000、小於3500、小於3000、小於2500、小於2000、小於1750、小於1500、小於1250和小於1000道爾頓。
因此，本發明直接精製八單元共聚物，降低可能被動物組織吸收的低分子量組分。本發明的八單元共聚物可以通過除去商業上可得到的八單元共聚物中存在的不合需要的分子得到，或者通過八單元共聚物與較少的可吸收的組分(和商業上可得到的八單元共聚物中出現的組分相比)一起重新合成得到。
本發明優選組分包括表面活性的共聚物。該表面活性共聚物可以是下式所述的乙撐氧-氧化丙烯濃縮物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，優選為6000-9000道爾頓，特別優選為7000-8000道爾頓。「a」代表的是POE佔化合物總重的5％-20％，優選為7-17％，特別優選為9-15％；「b」代表的是POP佔化合物總重的80％-95％，優選為83-92％，特別優選為85-91％。優選的共聚物優選含有少於4wt％的低聚物雜質，更加優選為小於2％，特別優選為小於1％，雜質的分子量小於4000道爾頓，優選小於3000道爾頓，特別優選小於2000道爾頓。在共聚物另一優選的實施例中，小於50wt％的組分被動物的胃腸通道吸收，優選為小於40％，特別優選為小於30％，更加優選為小於20％，最有效為小於10％。
根據本發明的方法，本發明精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物能夠用溶解萃取技術進行製備，其中低分子量的低聚物基本從商業上購得的八單元共聚物除去，如BASF公司生產的CRL-8761。如圖1所示的凝膠滲透色譜圖，商業級別的CRL-8761中分子量寬範圍分布的峰出現在9000-9500道爾頓。圖1也顯示了在主峰旁邊的一些低分子量的次峰。該峰表明在CRL-8761樣品中含有低分子量的分子。低分子量分子的分子量範圍約為1250-1350道爾頓。確信的是，現有技術飼料中含有的這些低分子量的低聚物更容易被目標動物的組織吸收。使用本發明的方法，大部分這些低分子量的物質從聚合物中除去，從而在組合物中主要留下高分子量的物質，這些高分子量的物質直接通過目標動物的腸胃系統，很難進入到動物的消化組織。
本發明的第一種方法包括用溶劑萃取技術製備聚氧丙烯/聚乙烯八單元共聚物，然後在溶劑混合物中加入水。可以使用一種或多種溶劑。優選的溶劑是無毒低沸點的，包括但不限於高壓或液體二氧化碳、丙酮、包括甲醇和乙醇的醇類，以及包括丙烷、丁烷、戊烷、己烷的烴類溶劑，庚烷和己烷的混合是最有效的。在本發明的應用中，共聚物/溶劑/水的混合物至少分離成三層上層溶劑層，中層水層和底層水層。根據本發明，上層溶劑層通常含有少量的共聚物主要為低分子量的物質。中間和底層的水層中的共聚物的低分子量物質含量很少。含有低分子量物質的溶劑層和含有精製共聚物的水層都可以進行幾次清洗和萃取，從而進一步從原材料中除去低分子量物質。
在第二種方法中，共聚物不和水混合，但是至少和一種溶劑直接混合。然後分離混合物，從而得到至少兩層，其中低分子量物質的共聚物在上層溶劑層中，然後精製的共聚物從底層中萃取出來。如有需要，底層可以清洗和萃取幾次，從而進一步從原材料中除去低分子量物質。
在第三種方法中，用高壓二氧化碳或液體二氧化碳的溶劑清洗用於精製商業可得到的八單元共聚物樣品。在該方法中，共聚物裝入設有攪拌器的高壓不鏽鋼容器中。共聚物可以單獨使用，或和吸附性物質如硅藻土一起使用。當在反應器中攪拌時，壓縮的液體CO2經過一段時間後泵入反應器。然後共聚物中溶解或萃取出的組分通過降低CO2壓力發生相分離，進而從溶劑中分離出來。低分子量物質佔有相當大比例的分離的共聚物分離並除去。回收的CO2輸送到溶劑循環中。然後，在反應器中CO2的壓力持續增加的情況下繼續萃取。然後低分子量物質佔有相當大比例的分離的共聚物再次分離並除去。萃取再次在相同的條件下進行，然後低分子量物質佔有相當大比例的其它共聚物分離並除去。萃取完成後，從容器中除去低分子量組分小於4％的基本純的共聚物。本領域技術人員理解，高壓或液體CO2也可以和助熔劑入甲醇混合，這種混合的溶劑溶於上述的萃取方法中。
在第四種方法中，通過在低分子量水溶性氮化合物如乙二胺中加入鹼性催化劑如氫氧化鉀或氫氧化銫對聚氧丙烯/聚氧乙烯重新進行合成。混合物在真空下加熱，然後冷卻。接下來的步驟包括順序加入乙撐氧、氧化丙烯，然後加入矽酸鎂、硅藻土和水。然後冷卻全部的混合物，並用壓力濾器進行過濾，由此得到本發明的精製八單元共聚物。如果需要從精製八單元共聚物進一步除去低分子量物質，上述公開的溶劑萃取技術也可以用於共聚物最終產品的合成方法。
可以理解的是，本發明下述實施例中的分子量優選用凝膠分離色譜(GPC)測試。GPC單元用公知分子量、並與所測試混合物性能相近的聚合物進行校對。在本發明中，聚氧乙烯(100％，PEO)標準用於校對GPC單元，分子量用PEO標準計算，該標準和聚乙二醇(100％，PEG)一樣。根據本發明，分子量用下述設備進行測試HPLC設備、沃特斯510泵、717Plus自動取樣器、HR3沃特斯Styragel柱和沃特斯410RI探測器，流動相THF每分鐘為1.0ml，溫度為35℃。樣品的製備準備含有0.2wt％共聚物的THF溶液，然後注入到GPC系統中。高分子量的主峰和低分子量的峰用PEG標準進行計算。本領域的技術人員可以理解，如果用絕對方法如光散射或MDLDI質譜進行測試，用PEO或PEG標準計算的分子量和實際的分子量會有一些差異。本領域的技術人員也可以理解，為了提高精度，從測試一段時間的幾批共聚物中獲得數據很重要。最後，可以理解的是，相同測試條件下分子量的變化將會發生變化，這種變化在分析測試時會根據生產的批次和時間而發生。
本發明進一步通過下述實例進行說明，這些實例僅是對本發明進行解釋，而不是對本發明的範圍進行限制。相反，任何對本發明實施例進行的顯而易見的修改或等同替換，都是本發明的保護範圍。
實例1BASF公司銷售的品牌為CRL-8761的八單元共聚物的化學性能通過首先在鋼鼓貨櫃(steel drum shipping container)中混和共聚物進行測定。這通過在開煉機上以30rpm的速度水平滾動鼓兩個小時實現。然後虹吸一小部分的同質共聚物，並輸送到玻璃瓶中。從瓶中取出兩個樣品，樣品用下述高性能液體色譜(HPLC)設備進行測試沃特斯510、717Plus自動取樣器、500A和1000A的Styragel柱和410RI探測器。流動相THF每分鐘為1.0ml。每種樣品分別注射兩次，每個樣品在接下來的一天重複注射。兩個樣品的高分子量的主峰和低分子量的峰用PEG標準進行計算。兩個樣品的主峰的平均峰分子量為9283道爾頓。兩個樣品的低分子量的平均峰分子量為1323道爾頓。因此，低分子量物質佔商業上得到的CRL-8761化合物的重量百分比為5.13％。
在圖1所示的CRL-8761的典型凝膠分散色譜圖中，主峰的保留時間約為6.5-7.5分鐘之間，更加小的次峰的保留時間約為8.5-9.5分鐘之間。此外，還有一些低聚物的保留時間為10-10.5分鐘之間，不過，在圖1中很難分辨。主峰對應保留時間的平均分子量約為9000道爾頓，次峰約為1500道爾頓。
實例2用上述商業上可得到的CRL-8761進行研究，對共聚物中低分子量組分和高分子量組分的相對滲透性或吸水性。在該研究中，細胞培養試驗用Caco2細胞系進行，該細胞系常用於研究被動藥物吸收。具體來說，Caco2細胞系用於鑑別CRL-8761是如何和以多大速率穿過腸內上皮細胞。經過一個起始平衡周期後，每個孔板中6-7×104的Caco2細胞系播種在聚酯膜細胞培養插入物上，即聚碳酯膜(Costar Transwell-Clear)3470的孔的尺寸為0.4um，生長面積為0.33cm2。插入物的內腔和外腔分別用0.4ml和0.5ml的細胞培養基(Vitacell Minimum Essential Medium alpha-SigmaCorporation-M0894-3H172)和10％的胎牛血清及1％的抗生素溶液填充。然後將附有插入物的孔板在37℃、95％空氣和5％二氧化碳的氛圍中培養。橫跨上皮細胞的電阻(TEER)定期進行測試，進而用MILLICELL-ERS監視單層生長。約21天後，將孔板用於滲透性研究。
實例3用攪拌器將CRL-8761直接溶於細胞培養基，濃度約為10wt％。在將CRL-8761浸漬的培養基加入到上述孔板的細胞層之前進行TEER測試。CRL-8761浸漬的培養基放置在內腔裡面，一些純淨的細胞培養基加入到外腔中。然後培育細胞。經過預設的時間間隔後，收集內嵌和外腔的樣品，放置單獨的試管中，然後真空乾燥。
實例4製備GPC分析樣品，在含有乾燥的內腔和外腔樣品的試管中加入0.3ml-1.0ml的THF。然後將試管在室溫下至少旋轉1分鐘。然後混合物通過Gelman Acrodi sc 0.2微米的尼龍過濾器進行過濾。每150ul的樣品用自動取樣器注射到GPC中。GPC分析的結果如表1所示。
表1內腔和外腔樣品的GPC分子量特性

實例5在第二項研究中，在三個點上不是使用相同的插入物，每個時間點上使用插入物的全部成分。例如，在第8小時，除去插入物內側的全部成分，將其乾燥後提供一個GPC分析的樣品。其它的插入物在第24小時和48小時進行，樣品分別從這些時間點採取。注射150ul的樣品，並用GPC分析。測定對應於主要分子量組分的峰和對應低分子量組分的峰，比較採取的不同樣品。GPC分析結果如表2所示。
表2全部插入物樣品的GPC分子量特性


如上所示，樣品外腔中的低分子量組分對應的次峰的曲線面積總是高於內腔中的低分子量組分對應的次峰的曲線面積。幾乎所有外腔樣品的GPC曲線只有低分子量組分的峰，這表明和主要的高分子量組分相比，低分子量組分更多的穿過Caco2細胞層。
實例6和實例5的條件一樣。第三序列的樣品用GPC分析。結果如表3所示。
表3全部插入物樣品的GPC分子量特性


如上所述，實例5中的趨勢也在實例6中出現。樣品外腔中的低分子量組分泊洛沙姆(poloxamer)對應的次峰的曲線面積總是高於內腔中的低分子量組分對應的次峰的曲線面積。幾乎所有外腔樣品的GPC曲線只有低分子量組分的峰，這表明和主要的高分子量組分相比，低分子量組分更多的穿過Caco2細胞層。
實例7實例5和6中觀察到的不規則數據可以解釋為生物試驗誤差，為了鑑別某些保留有大量高分子量組分的內腔中可能的因素，進行了試驗。在該試驗中，發現一些插入物在滲透性研究中在單層上形成了孔，從而表明單層在取樣間隔時可能不是活的。因此，為了研究但測的成活性和完整性，進行了TEER測試。對不含CRL-8761共聚物培養基的對照插入物的TEER值進行了測試。樣品插入物的TEER值在CRL-8761共聚物/培養基混合物(試驗期間)或培養基(除去樣品插入物中的物質，如8小時時的樣品插入物的24小時時的TEER值)中進行了測試。TEER測試如下表4所示。
表4TEER測試結果


該項研究的結果表明TEER值沒有和對照樣品一樣發生變化。此外，在24小時和48小時的研究後，從研究後8小時的插入物中除去CRL-8761共聚物/培養基混合物對TEER值沒有影響。因此，在正常的細胞生長條件下，將細胞和共聚物一起放置超過8小時後，TEER測試表明細胞單層的完整性受到影響。因而，在解釋滲透性結果時，應該考慮8-小時的樣品。這是因為標準滲透性研究進行了8小時。
實例8和實例5相同條件下，用GPC分析了第四序列的樣品，以證實前述實例觀察到的趨勢。結果如下表5所示。
表5全部插入物樣品的GPC分子量特性


如上所述，前述實例觀察到的滲透性趨勢在本實例中進行了重現，特別時8小時時的樣品。和內腔樣品相比，對應CRL-8761中低分子量組分的次峰和外腔樣品中非常一致。這證實和高分子量組分相比，低分子量組分穿過Caco2細胞層。
實例9為了精製上述討論的共聚物，在約5克的己烷中加入1克商業級的CRL-8761，混和形成清液。然後在共聚物/己烷的混合物中加入1克的蒸餾水，充分混和。得到的新的混合物離心分離40分鐘，得到三層上層的清液，渾濁的中間層和底層。對上層(385-52-1)和中間層(385-52-2)進行取樣、乾燥，並用GPC進行分析。結果如表6所示。
表6CRL-8761用己烷清洗後的GPC分子量特性

分析結果表明CRL-8761水溶液的萃取液集中了己烷層中的低分子量組分，而精製的共聚物留在了水層。
實例107.2克的CRL-8761和7.6克的水、22.0克的己烷進行混和。混合物進行離心，得到四層上層己烷層的清液、中間的清液層、中間的渾濁層和粘稠的白色底層。對底部的三層進行取樣、乾燥，並檢測每層的固體含量。
上層的己烷再次用2.4克的水進行萃取，然後進行離心，得到兩層。將上層和底層進行取樣、乾燥，並檢測每層的固體含量。
第二次萃取清洗得到的上層己烷層再次用2克的水進行萃取、離心。再次得到兩層，對每層進行取樣、乾燥，並檢測每層的固體含量。這個萃取序列的流程圖如圖2所示。己烷萃取的結果如表7所示。
表7第一階段己烷萃取液的CRL-8761的分配

*由於操作誤差和試驗誤差，這些組分中的固體含量百分比不等於100％實例117.3305克的CRL-8761溶於22.1克的己烷中，形成一清液。然後在己烷溶液中加入7.0克的水進行充分混和。混合物進行離心，得到三層層上層己烷層的清液、中間的清液層和粘稠的白色底層。對底部的二層進行取樣、乾燥，並檢測每層的固體含量。
上層的己烷再次用2.0克的水進行萃取，然後進行離心，得到兩層。將底層進行取樣、乾燥，並檢測每層的固體含量。
前次清洗得到的上層己烷層再次用2.3克的水進行萃取、離心。再次得到兩層，對每層進行取樣、乾燥，並檢測每層的固體含量。這個萃取序列的流程圖如圖3所示。己烷萃取的結果如表8所示。典型己烷層(含有大量的CRL-8761雜質)和水層(精製的CRL-8761)的色譜圖如圖4和圖5所示。
表8第一階段己烷萃取液的CRL-8761的分配

*由於操作誤差和試驗誤差，這些組分中的固體含量百分比不等於100％實例12用於精製CRL-8761樣品的簡易溶劑清洗使用了三種不同烴類溶劑。在第一次清洗中，1克的CRL-8761放在5ml的試管中，然後和2克的己烷進行混和。在第二次清洗中，1克的CRL-8761放在5ml的試管中，然後和2克的庚烷進行混和。在第三次清洗中，1克的CRL-8761放在5ml的試管中，然後和2克的戊烷進行混和。蝸旋混和後，離心共聚物/混合物。在每個試管中都得到了兩層。對每層進行取樣、乾燥，並用GPC進行分析。每次清洗的兩個CRL-8761樣品也進行了對照分析。得到的結果如表9所示。
表9簡易溶劑清洗的結果

如圖6所示，上層的己烷層含有10％的CRL-8761，並顯示一個分子量為7082道爾頓的峰，其中含有43％的層含有低分子量組分。如圖7所示，底層有個分子量為7572道爾頓的峰，並且僅含有5wt％的低分子量組分。如圖8所示，上層的庚烷層含有6％的CRL-8761。樣品的分子量峰為6831道爾頓，含有63％的低分子量組分。如圖9所示，底層顯示的分子量峰為7347道爾頓，含有5.7％的低分子量組分。如圖10所示，上層的戊烷層含有10％的CRL-8761。樣品的分子量峰為6797道爾頓，含有50％的低分子量組分。底層顯示的分子量峰為7326道爾頓，含有6.2％的低分子量組分，如圖11所示。
為了進一步降低每個樣品中低分子量組分的含量，萃取從底層己烷、庚烷和戊烷層得到的精製的共聚物，並再次分別用己烷、庚烷和戊烷進行清洗。分離後，乾燥樣品，用GPC分析以確定樣品中的低分子量組分是否降低到低於4％，優選為3％，特別有效為2％。精製的共聚物重複進行萃取和清洗，直至每個樣品中的低分子量組分含量到達理想值。
實例13在本實例中，使用液化丙烷氣的溶劑清洗用於精製CRL-8761樣品。約200克的CRL-8761裝入到設有攪拌器的1L高壓不鏽鋼容器中。在攪拌反應物中的物質時，壓縮的丙烷泵入到反應器中。丙烷流體和萃取容器的溫度保持在35℃。開始時，丙烷的壓力保持在1000psia，約100Kg的SCF CO2泵送12小時。溶解/萃取組分通過將丙烷壓力降至約400psia產生相分離從溶劑蒸汽中分離出來。回收的丙烷反饋到溶劑循環流程中。裝入到反應器中約2.2％的CRL-8761通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質中含有約75％低分子量組分。接下來在1000psia下進行萃取，溶劑壓力升至1500psia，萃取持續10多個小時，100Kg的SCF CO2流體用15小時泵送至反應器。約5.5％的CRL-8761進料通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質含有約60％的低分子量組分。萃取完成後，萃取容器卸壓，剩在容器中精製的CRL-8761用GPC分析。該CRL-8761含有約1.6％的低分子量組分。精製CRL-8761的產率約為82wt％。
實例14在本實例中，使用高壓二氧化碳流體的溶劑清洗用於精製CRL-8761樣品。約200克的CRL-8761裝入到設有攪拌器的1L高壓不鏽鋼容器中。在攪拌反應物中的物質時，壓縮的CO2泵入到反應器中。CO2流體和萃取容器的溫度保持在35℃。開始時，CO2的壓力保持在2500psia，約100Kg的SCF CO2泵送15小時。溶解/萃取組分通過將CO2壓力降至約800psia產生相分離從溶劑蒸汽中分離出來。回收的CO2反饋到溶劑循環流程中。裝入到反應器中約2.4％的CRL-8761通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質中含有約85％低分子量組分。接下來在2500psia下進行萃取，溶劑壓力升至3500psia，萃取持續15多個小時，100Kg的CO2流體用15小時泵送至反應器。約4.5％的CRL-8761進料通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質含有約25％的低分子量組分。萃取完成後，萃取容器卸壓，剩在容器中精製的CRL-8761用GPC分析。該CRL-8761含有約2.4％的低分子量組分。精製CRL-8761的產率約為78wt％。
實例15在另一實例中，用高壓二氧化碳流體作為萃取溶劑，約150克的CRL-8761和120克的Hydromatrix硅藻土(Varian，Inc.，PaloAlto，California)混和，然後裝入到500ml的萃取容器中。容器連接到設有溶劑回收裝置的高壓萃取系統中。約100Kg的壓縮CO2流體用15小時泵送到反應器中。CO2萃取流體和萃取容器的溫度保持在35℃。開始時，CO2的壓力保持在2500psia。溶解/萃取組分通過將CO2壓力降至約800psia產生相分離從溶劑蒸汽中分離出來。回收的CO2反饋到溶劑循環流程中。裝入到反應器中約2.1％的CRL-8761通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質中含有約88％低分子量組分。接下來在2500psia下進行萃取，溶劑壓力升至3500psia，100Kg的CO2流體用15小時泵送至反應器時，萃取持續15多個小時。約4.1％的初始進料通過萃取的方法除去。通過GPC測試，萃取物質含有約62％的低分子量組分。通過額外向容器中泵入100Kg的CO2，萃取進一步在4500psia下持續15個小時。反應器中約12％的初始進料通過該方法除去。通過GPC測試，萃取物質含有約34％的低分子量組分。萃取完成後，萃取容器卸壓，Hydromatrix/CRL-8761混合物用約1升的乙醇清洗。精製的CRL-8761通過蒸發乙醇從乙醇溶液中分離。精製的CRL-8761用GPC分析。該CRL-8761含有約2.9％的低分子量組分。精製CRL-8761的產率約為71wt％。
實例16在本實例中，約200克的CRL-8761裝入到設有攪拌器的1L高壓不鏽鋼容器中。在攪拌反應物中的物質時，壓縮的流體CO2泵入到反應器中。CO2流體和萃取容器的溫度保持在35℃。和5-10wt％的甲醇混和的壓縮CO2用作萃取溶劑。開始時，CO2的壓力保持在2500psia，約60Kg的壓縮CO2/甲醇萃取流體混合物泵送10小時。甲醇通過分離泵泵送，在進入萃取容器前和壓縮CO2混和。調整甲醇的流率，從而在CO2/甲醇萃取流體混合物中生成約5wt％的甲醇。溶解/萃取組分通過將CO2壓力降至約800psia產生相分離從溶劑蒸汽中分離出來。回收的CO2反饋到溶劑循環流程中。裝入到反應器中約4％的CRL-8761通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質中含有約76％的低分子量組分。接下來在2500psia下進行萃取，溶劑壓力保持在3500psia，萃取持續10多個小時，萃取流體中甲醇的濃度為7％；其中，60Kg的CO2/甲醇流體泵送至反應器。約7wt％充入的CRL-8761在這種條件下通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質含有約45％的低分子量組分。通過額外向容器中泵入含有9wt％的60Kg的甲醇，萃取進一步持續10個小時。反應器中約13％的CRL-8761在該條件下除去。通過GPC測試，萃取物質含有約24％的低分子量組分。
萃取完成後，萃取容器卸壓。蒸發混合物中的甲醇，分離精製的CRL-8761並用GPC分析。該CRL-8761含有約2.2％的低分子量組分。精製CRL-8761的產率約為68wt％。
實例17精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯八單元共聚物通過在設於PARR反應器中的玻璃管中混和約25克的Quadrol(BASF Corporation，MountOlive，New Jersey)(末端用4mol乙撐氧封閉的乙二胺)和1.25克的氫氧化鉀重新進行合成。混合物在真空、125℃下加熱約3小時，然後反應器溫度降至約90-100℃，用24小時慢慢加入105克的乙撐氧。完成乙撐氧的加入後，用計量泵加入約600克的氧化丙烯。反應器內部的壓力保持在20-30psia之間。反應完成後，約12.5克的Magnesol(Dallas Group，White Hall，New Jersey)、3.5克的Celite(World Minerals，Inc.，Santa Barbara，California)和0.6克的水在6小時內分三個不同的批次加入到反應產物中。最終的產品冷卻到40-50℃，並用壓力過濾器過濾。最終產品產量約為600克，估計含有約15wt％的乙撐氧。最終產品的峰分子量約7100道爾頓，低分子量組分的重量百分比約為1.23％。
實例18在本發明重新合成精製組合物的另一實例中，25克的Quadrol和3.75克的氫氧化銫一水化物在設於PARR反應器中的玻璃管中混和混合物在真空、125℃下加熱約6小時，然後反應器溫度降至約90-100℃，用24小時慢慢加入105克的乙撐氧。完成乙撐氧的加入後，用計量泵加入約600克的氧化丙烯。反應器內部的壓力保持在20-30psia之間。反應完成後，約25克的Magnesol、7克的Celite和1克的水在6小時內分三個不同的批次加入到反應產物中。最終的產品冷卻到40-50℃，並用壓力過濾器過濾。最終產品產量約為600克，估計含有約15wt％的乙撐氧。最終產品的峰分子量約7500道爾頓，產品中低分子量組分的重量百分比約為1.13％。
實例19在商業飼料場中進行研究，該研究利用平均初始體重為361kg的438隻混種一歲家牛。牛作為一個單組。通過體重(BW)分成兩組，並分別放在兩個欄裡飼養。在每個欄裡，牛接受(1)飼料中含有足夠量本發明精製共聚物，從而具有抑制微生物生長和/或導致生長性能的改善；或(2)飼料中含有推薦劑量的常見抗生素和/或生長促進劑。每個欄裡的牛分別用不同的飼料未央；其中每個欄裡的第一個牛式隨機分配的。研究的第一天分別對牛的體重進行了單獨的稱重。研究開始後，在125天(兩個大欄)或141天(兩個較小的欄)進行了屠宰。取出內臟後立即收集熱胴體重量(HCW)。用下述方程式對單個動物的平均每日收益(ADG)進行計算ADG＝((HCW/0.635)-初始體重)/天飼料。在這個方程式中，0.635表示的是所有研究動物的平均屠宰率。20個可食組織樣品從兩組牛中分別隨意選取，並測試存在的本發明共聚物或抗生素和/或生長促進劑。測試結果顯示，和用含有常規抗生素和/或生長促進劑相比，餵食本發明共聚物的牛具有相對好的生長性能和食物效率，並且少於50％的共聚物在測試的可食組織樣品中發現。
權利要求
1.一種精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯八單元共聚物組合物，該組合物具有下式(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該共聚物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，「a」代表的是聚氧乙烯佔組合物總重的5％-20％，「b」代表的是聚氧丙烯佔化合物總重的80％-95％；以及共聚物含有少於4wt％的低分子量組分，該低分子量組分的分子量小於4000道爾頓。
2.根據權利要求1所述的組合物，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
3.根據權利要求1所述的組合物，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
4.根據權利要求1所述的組合物，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的7-17％。
5.根據權利要求4所述的組合物，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的83-93％。
6.根據權利要求1所述的組合物，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的9-15％。
7.根據權利要求6所述的組合物，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的85-91％。
8.根據權利要求1所述的組合物，其中少於2wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
9.根據權利要求1所述的組合物，其中少於1wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
10.根據權利要求1所述的組合物，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於3000道爾頓。
11.根據權利要求1所述的組合物，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於2000道爾頓。
12.根據權利要求8所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
13.根據權利要求8所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
14.根據權利要求9所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
15.根據權利要求9所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
16.一種製備精製聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物的方法，該方法包括如下步驟提供一種具有下述化學式的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，「a」代表的是聚氧乙烯佔化合物總重的5％-20％，「b」代表的是聚氧丙烯佔化合物總重的80％-95％；超過4wt％的組合物的共聚物分子量小於4000道爾頓；混合組合物、水和低沸點無毒溶劑；分離混合物，從而至少形成兩層，其中至少一層含有精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物中少於4％的共聚物的分子量小於4000道爾頓；以及萃取出精製的組合物。
17.根據權利要求16所述的方法，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
18.根據權利要求16所述的方法，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
19.根據權利要求16所述的方法，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的7-17％。
20.根據權利要求19所述的方法，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的83-93％。
21.根據權利要求16所述的方法，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的9-15％。
22.根據權利要求21所述的方法，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的85-91％。
23.根據權利要求16所述的方法，其中少於2wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
24.根據權利要求16所述的方法，其中少於1wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
25.根據權利要求16所述的方法，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於3000道爾頓。
26.根據權利要求16所述的方法，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於2000道爾頓。
27.根據權利要求23所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
28.根據權利要求23所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
29.根據權利要求24所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
30.根據權利要求24所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
31.根據權利要求16所述的方法，其中溶劑選自高壓或液體二氧化碳、丙酮、醇類、烴類溶劑及其混合物。
32.根據權利要求31所述的方法，其中烴類溶劑選自甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、戊烷、己烷、庚烷及其混合物。
33.一種製備精製聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物的方法，該方法包括如下步驟提供一種具有下述化學式的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，「a」代表的是聚氧乙烯佔化合物總重的5％-20％，「b」代表的是聚氧丙烯佔化合物總重的80％-95％；超過4wt％的組合物的共聚物分子量小於4000道爾頓；混合組合物和低沸點無毒溶劑；分離混合物，從而至少形成兩層，其中至少一層含有精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物中少於4％的共聚物的分子量小於4000道爾頓；以及萃取出精製的組合物。
34.根據權利要求33所述的方法，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
35.根據權利要求33所述的方法，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
36.根據權利要求33所述的方法，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的7-17％。
37.根據權利要求36所述的方法，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的83-93％。
38.根據權利要求33所述的方法，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的9-15％。
39.根據權利要求38所述的方法，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的85-91％。
40.根據權利要求33所述的方法，其中少於2wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
41.根據權利要求33所述的方法，其中少於1wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
42.根據權利要求33所述的方法，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於3000道爾頓。
43.根據權利要求33所述的方法，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於2000道爾頓。
44.根據權利要求40所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
45.根據權利要求40所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
46.根據權利要求41所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
47.根據權利要求41所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
48.根據權利要求33所述的方法，其中溶劑選自高壓或液體二氧化碳、丙酮、醇類、烴類溶劑及其混合物。
49.根據權利要求48所述的方法，其中烴類溶劑選自甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、戊烷、己烷、庚烷及其混合物。
50.一種製備精製聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物的方法，該方法包括如下步驟提供一種具有下述化學式的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，「a」代表的是聚氧乙烯佔化合物總重的5％-20％，「b」代表的是聚氧丙烯佔化合物總重的80％-95％；超過4wt％的組合物的共聚物分子量小於4000道爾頓；向所述組合物中加入一定量的高壓二氧化碳；在壓力下攪拌該混合物；分離該混合物，從而至少形成兩相，其中第一相中含有該組合物，第二相中含有精製的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物中分子量小於4000道爾頓的共聚物的比例小於4wt％；以及萃取所述的第一相。
51.根據權利要求50所述的方法，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
52.根據權利要求50所述的方法，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
53.根據權利要求50所述的方法，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的7-17％。
54.根據權利要求53所述的方法，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的83-93％。
55.根據權利要求50所述的方法，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的9-15％。
56.根據權利要求56所述的方法，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的85-91％。
57.根據權利要求50所述的方法，其中少於2wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
58.根據權利要求50所述的方法，其中少於1wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
59.根據權利要求50所述的方法，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於3000道爾頓。
60.根據權利要求50所述的方法，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於2000道爾頓。
61.根據權利要求57所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
62.根據權利要求57所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
63.根據權利要求58所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
64.根據權利要求58所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
65.根據權利要求50所述的方法，其中溶劑選自高壓或液體二氧化碳、丙酮、醇類、烴類溶劑及其混合物。
66.根據權利要求65所述的方法，其中烴類溶劑選自甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、戊烷、己烷、庚烷及其混合物。
67.根據權利要求50所述的方法，其中該方法進一步包括將共聚物和一定量的硅藻土混和的步驟。
68.一種製備精製聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物的方法，該方法包括如下步驟分別混合鹼性催化劑和低分子量氮化合物；加入一定量的乙撐氧；加入一定量的氧化丙烯；分別加入一定量的吸收物質吸收催化劑、硅藻土和水；加熱混合物；以及用壓力濾器過濾，得到具有下述化學式的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，「a」代表的是聚氧乙烯佔化合物總重的5％-20％，「b」代表的是聚氧丙烯佔化合物總重的80％-95％；超過4wt％的組合物的共聚物分子量小於4000道爾頓。
69.根據權利要求68所述的方法，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
70.根據權利要求68所述的方法，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
71.根據權利要求68所述的方法，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的7-17％。
72.根據權利要求35所述的方法，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的83-92％。
73.根據權利要求68所述的方法，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的9-15％。
74.根據權利要求37所述的方法，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的85-91％。
75.根據權利要求68所述的方法，其中少於2wt％的精製組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
76.根據權利要求68所述的方法，其中少於1wt％的精製組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
77.根據權利要求68所述的方法，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於3000道爾頓。
78.根據權利要求68所述的方法，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於2000道爾頓。
79.根據權利要求75所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
80.根據權利要求75所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
81.根據權利要求76所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
82.根據權利要求76所述的方法，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
83.根據權利要求68所述的方法，其中的氮化合物為烷氧基胺。
84.根據權利要求83所述的方法，其中的烷氧基胺為乙二胺。
85.一種餵食動物的精製聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物的組合物，該組合物如下式所述(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，「a」代表的是聚氧乙烯佔化合物總重的5％-20％，「b」代表的是聚氧丙烯佔化合物總重的80％-95％；少於50wt％的組合物被動物的腸胃通道吸收。
86.根據權利要求85所述的組合物，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
87.根據權利要求85所述的組合物，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
88.根據權利要求85所述的組合物，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的7-17％。
89.根據權利要求88所述的組合物，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的83-93％。
90.根據權利要求85所述的組合物，其中聚氧乙烯部分約佔組合物重量的9-15％。
91.根據權利要求90所述的組合物，其中聚氧丙烯部分約佔組合物重量的85-91％。
92.根據權利要求85所述的組合物，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
93.根據權利要求85所述的組合物，其中少於2wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
94.根據權利要求85所述的組合物，其中少於1wt％的組合物中的共聚物的分子量小於4000道爾頓。
95.根據權利要求85所述的組合物，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於3000道爾頓。
96.根據權利要求1所述的組合物，其中少於4wt％的組合物中的共聚物的分子量小於2000道爾頓。
97.根據權利要求93所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
98.根據權利要求93所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
99.根據權利要求94所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小於3000道爾頓。
100.根據權利要求94所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小於2000道爾頓。
101.根據權利要求85所述的組合物，其中少於40wt％的組合物被動物的腸胃通道吸收。
102.根據權利要求85所述的組合物，其中少於30wt％的組合物被動物的腸胃通道吸收。
103.根據權利要求85所述的組合物，其中少於20wt％的組合物被動物的腸胃通道吸收。
104.根據權利要求85所述的組合物，其中少於10wt％的組合物被動物的腸胃通道吸收。
全文摘要
本發明包括聚氧丙烯/聚氧乙烯八單元共聚物的新型製備方法，該共聚物保留了商業製備所具有的生長促進性和免疫活性，同時避免了一些現有技術無法避免的副作用。和現有技術相比，本發明中的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物具有更少的低分子量組分，共聚物的生物活性好於預期。而且，本發明的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物由於不易被消化器官吸收，大大降低了人類使用動物所帶來的健康風險。本發明也提供了聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物的製備方法。
文檔編號C08G59/14GK1929850SQ200480032798
公開日2007年3月14日 申請日期2004年9月3日 優先權日2003年9月5日
發明者R·馬丁·伊曼紐爾, 馬拉爾薩米·巴拉蘇布若門尼 申請人:艾維動物健康公司, 馬拉爾薩米·巴拉蘇布若門尼