一種測試條及其製備方法和利用該測試條同時檢測藥物中蘆丁和維生素c的方法

2023-10-27 17:37:22

專利名稱：一種測試條及其製備方法和利用該測試條同時檢測藥物中蘆丁和維生素c的方法
技術領域：
本發明涉及藥物測試技術領域，特別是一種可以同時檢測藥物中不同成分含量的測試條；本發明還公開了這種測試條的製備方法，以及利用該測試條同時檢測藥物中蘆丁和維生素C的方法。
背景技術：
蘆丁主要存在於多種植物的莖和葉中，是中草藥中的有效成分，其主要成分為黃酮類化合物。
複方蘆丁片屬於維生素類藥物，其主要成分為蘆丁(Rutin)和抗壞血酸(Ascorbic acid，AA)，臨床上用於高血壓病的輔助治療。蘆丁是一種具有生物活性的類黃酮化合物，在生物體內具有抗氧化的作用，醫學上一般用來維持血管抵抗力、降低其通透性、減少脆性及抗炎、抗病毒等。
目前，蘆丁和維生素C的測定大都採用光譜法和液相色譜法。如公開號為CN1562096A公開的一種中西藥複方製劑及其製備方法中，其製劑中的蘆丁和維生素C就是採用液相色譜法來測定它們的含量的。但高效液相色譜法則存在色譜柱易汙染、價格較高的問題。
紫外光譜法因抗壞血酸的特徵吸收峰243，267nm與蘆丁的特徵吸收峰260nm相近，因而，無法進行同時檢測。有採用加入鋁鹽，使先形成絡合物從而提高檢測靈敏度的方法。但由於樣品中存在其它多種幹擾物質易產生背景吸收，必需採用校正技術才能消除幹擾。
此外，也有文獻報導用熱降解法，酶降解法，直接紫外線照射法，銅離子破壞法等消除幹擾。然而，酶法實驗條件要求嚴格，需在30度保溫30分鐘；熱與紫外線破壞法速率太慢；銅離子法需先行加熱至50℃下才能消除檸檬酸的影響。總之，這些操作煩瑣，不易實際應用推廣。
近來，有報導用毛細管電泳和安培法聯用技術進行測量的報導，但仍需先將抗壞血酸和蘆丁分離之後，在線測定。並且因為使用萬伏高壓電源，高壓迴路中電流遠遠大於檢測信號電流，只要有一小部分分流就會檢測不到信號電流，因此，毛細管電泳安培檢測面臨的主要問題是如何克服高壓迴路中電流對檢測的幹擾，雖可採用接口裝置來降低這種影響，但仍不理想。正因為接口裝置更換毛細管時需重做接口，其製作麻煩，且分析時間延長，並且接口處易產生氣泡使毛細管堵塞。可見，毛細管的製備差異，高壓迴路中的電流產生熱量，都會影響測試，造成實驗的重現性差。另一大問題就是實驗所用的儀器較複雜和且昂貴(自己組裝一套最初級的也要10萬RMB左右，進口則要十幾萬USD)，對測試人員的要求也較高。
近來，還有採用直接電化學法進行測量的報導，雖然直接電化學方法進行蘆丁和抗壞血酸的同時檢測具有設備簡單，檢測周期短，操作容易等優點，因而具有廣闊的應用前景。並且容易小型化，可攜式儀器的開發，成本低廉，產業化方便。其存在的主要問題是蘆丁和抗壞血酸在常規電極上的氧化電位相近。通過對蘆丁和AA的混合溶液在裸金電極上進行的DPV測試也清楚地顯示，蘆丁和AA的氧化峰出現重疊，並且蘆丁先被氧化而產生的半醌很容易被AA再還原，即對AA的氧化有催化作用，從而幹擾蘆丁的測定。另一方面，蘆丁本身也容易在金電極上吸附，使響應電流減小。這些現象都限制了其應用於蘆丁和維生素C的同時測定。

發明內容
本發明所要解決的技術問題一方面是提供一種不經分離，對蘆丁和抗壞血酸共存體系的同時、快速檢測的測試條，該測試條通過電化學測試顯示，抗壞血酸在此修飾電極上的氧化電位較之裸金電極上負移了300mV；同時，蘆丁在修飾電極上的氧化電位無顯著改變，但響應電流有所增大。
本發明所要解決的技術問題另一方面是提供一種上述測試條的製備方法。
本發明再一方面是提供一種利用該測試條同時檢測藥物中蘆丁和維生素C的方法。
本發明解決的技術問題可以通過以下技術方案來實現。
在本發明的第一方面，提供的測試條由一金基體電極及一層採用分子自組裝膜技術修飾在金基體電極上的氨基乙硫醇構成。
上述氨基乙硫醇優選為2-氨基乙硫醇。
在本發明的第二方面，提供的該測試條的製備方法，具有如下步驟a、打磨、拋光並用超純水清洗金基體電極表面；b、清洗過後的金基體電極用水淋洗後置於H2SO4溶液中在-0.2～1.5V的電位範圍內進行循環伏安掃描處理；c、將處理好的金基體電極置於2-氨基乙硫醇水溶液中進行自組裝，自組裝完畢後取出、用水超聲清洗，再用水淋洗後即可。
在本發明的第三方面，提供的利用該測試條同時檢測藥物中蘆丁和維生素C的方法，其採用電化學測量方法，使用三電極體系，其中，金基體電極及其經氨基乙硫醇自組裝膜修飾的金電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑片電極為輔助電極；以pH＝7.0磷酸緩衝溶液為底液，配置的複方蘆丁樣品溶液為測試溶液，記錄相應的差示脈衝伏安圖(DPV)，以此來測定藥物中蘆丁和維生素C的含量。
本發明應用分子自組裝膜(Self-assemble monolayer，SAM)技術將氨基乙硫醇修飾於金基體測試條上，利用氨基乙硫醇在pH中性溶液中的荷正電性，使抗壞血酸的氧化電位在修飾電極上較裸電極上發生明顯的負移，如負移300mV左右，而與此同時，蘆丁的電位幾乎不變，從而使得抗壞血酸的氧化峰電位與蘆丁的氧化電位相分開。但在修飾電極上的氧化電流明顯增大，從而達到利用微分脈衝伏安法(Differential Pulse Voltammetry，DPV)實現直接電化學方法的目的，同時測定藥物中蘆丁和維生素C的含量。
本發明利用微分脈衝伏安法進行蘆丁和抗壞血酸的同時檢測，增加了檢測靈敏度。以微電子平面技術加工的金微盤基體電極為工作電極，鉑電極為對電極兼參比電極的測試條，可實現操作簡便、樣品量少、靈敏度高的檢測；利用本發明的技術，並適當改變硫醇的鹼基長度或荷電性質，分子自組裝膜修飾的測試條能實現其它一些藥物的同時檢測。


圖1為本發明不同掃速下蘆丁在修飾電極上的CV圖，其中插圖為氧化峰電流與掃速的平方根的關係圖；圖2為不同濃度的蘆丁在修飾電極上的DPV圖，其中插圖為氧化峰電流與濃度的關係圖；圖3為本發明Rutin和不同濃度的抗壞血酸在修飾電極DPV圖。
具體實施例方式
下面的具體實施方式
中主要試劑有氨基乙硫醇(Adrich公司)，複方蘆丁片(上海復星朝暉藥業有限公司)。其餘試劑皆為分析純；研究溶液均用超純水(上海美雷公司超純水器)配製。實驗中通氮氣除氧，並維持氮氣氛下進行測試。
一種測試條，包括一金基體電極及一層採用分子自組裝膜技術修飾在金基體電極上的氨基乙硫醇構成。其中金基體電極採用φ為2mm的金圓盤電極，氨基乙硫醇採用2-氨基乙硫醇。
這種測試條的製備方法是將金圓盤電極先在金相砂紙上打磨，再依次用0.3、0.05μm的Al2O3粉拋光。然後，用超純水超聲清洗，取出後用水淋洗後置於0.5mol/L H2SO4溶液中在-0.2～1.5V的電位範圍內進行循環伏安掃描(10V/s的掃速下，約10分鐘左右)。將處理好的電極置於5mmol/L氨基乙硫醇水溶液中進行自組裝，1h後取出、用水超聲清洗5min，再用水淋洗後備用。
利用該測試條同時檢測藥物中蘆丁和維生素C的方法，具體為1、樣品的製備及測試準確稱取複方蘆丁5片，用研缽研成細粉後置於乙醇和pH＝7的磷酸緩衝溶液的混合液(體積1∶1)中，超聲助溶5min，經濾紙過濾，定容於50mL容量瓶中，即得複方蘆丁樣品溶液。
以pH＝7.0的磷酸緩衝溶液為底液，以氨基乙硫醇修飾的金圓盤電極為工作電極，記錄相應的循環伏安圖(CV)(參看圖1)和差示脈衝伏安圖(參看圖2)(DPV，實驗參數掃速4mV/s，脈衝電位50mV，脈衝寬度0.05s，脈衝周期0.2s)。
2、DPV法直接測定蘆丁含量為了提高檢測靈敏度，在選定的測定條件下，用DPV法測定了不同濃度蘆丁的電流響應。當蘆丁的濃度範圍在8～243μmol/L時，峰電流與蘆丁的濃度呈線性關係，回歸方程為Ip(μA)＝0.0225×CRutin(μmol/L)，檢出限為6μmol/L，相關係數r＝0.9923。
圖3是固定蘆丁的濃度，加入不同濃度的AA進行幹擾試驗。結果顯示，在SAM修飾電極上峰電流隨AA濃度的增大而增大，但蘆丁的峰電流無明顯的變化，表明可用此修飾電極進行蘆丁的直接測定。
3、樣品的測定及其回收率試驗吸取3份樣品溶液，每份1mL，以緩衝溶液定容於50mL容量瓶中，依上述實驗條件分別測定。
吸取3份樣品溶液，每份1mL，分別加入5mmol/L蘆丁標準溶液1mL，以緩衝溶液定容於50mL容量瓶中，依上述實驗條件進行回收率試驗。
測試結果示於表1表1蘆丁樣品分析結果(n＝3)

此外，實驗證明，片劑中的輔料糊精，澱粉等也不幹擾測定。
此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附權利要求書所限定的範圍。
權利要求
1.一種測試條，其特徵在於由一金基體電極及一層採用分子自組裝膜技術修飾在金基體電極上的氨基乙硫醇構成。
2.根據權利要求1所述的測試條，其特徵在於所述氨基乙硫醇為2-氨基乙硫醇。
3.根據權利要求1所述的測試條，其特徵在於所述金基體電極為直徑φ2mm的金圓盤電極。
4.一種製備權利要求1所述的測試條的方法，其特徵在於具有如下步驟a、打磨、拋光並用超純水清洗金基體電極表面；b、清洗過後的金基體電極用水淋洗後置於H2SO4溶液中在-0.2～1.5V的電位範圍內進行循環伏安掃描處理；c、將處理好的金基體電極置於氨基乙硫醇水溶液中進行自組裝，自組裝完畢後取出、用水超聲清洗，再用水淋洗後即可。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於採用金相砂紙打磨。
6.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於採用0.3-0.05μm的Al2O3粉拋光。
7.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於所述H2SO4溶液的濃度為0.5mol/L。
8.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於循環伏安掃描的速度為10V/s，時間為10分鐘。
9.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於所述氨基乙硫醇水溶液的濃度為5mmol/L
10.一種利用權利要求1所述的測試條同時檢測藥物中蘆丁和維生素C的方法，其特徵在於採用電化學測量方法，使用三電極體系，其中，金基體電極及其經氨基乙硫醇自組裝膜修飾的金電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑片電極為輔助電極；以pH＝7.0的磷酸緩衝溶液為底液，配置的複方蘆丁樣品溶液為測試溶液，記錄相應的差示脈衝伏安圖，以此來測定藥物中蘆丁和維生素C的含量。
全文摘要
一種測試條及其製備方法和利用該測試條同時檢測藥物中蘆丁和維生素C的方法，其測試條是由一金基體電極及一層修飾在金基體電極上的氨基乙硫醇構成。測試條製備時先打磨、拋光並用超純水清洗金基體電極表面；清洗過後的金基體電極用水淋洗後置於H
文檔編號G01N27/30GK1773272SQ20051011026
公開日2006年5月17日 申請日期2005年11月10日 優先權日2005年11月10日
發明者王榮, 徐青, 吳霞琴 申請人:上海師範大學