用於肝癌多模態影像和光熱治療的多功能納米探針及應用的製作方法

2023-09-22 13:00:45 2

用於肝癌多模態影像和光熱治療的多功能納米探針及應用的製作方法
【專利摘要】本發明提供一種Au-ICG脂質體多功能納米探針及其應用。該納米探針由核和外殼構成；所述的核為表面包覆聚多巴胺層並吸附有吲哚箐綠的納米金顆粒，所述的外殼為偶聯有乳糖酸、且螯合有Gd3+離子的DSPE-PEG脂質體膜。本發明Au-ICG脂質體多功能納米探針可用於肝癌的核磁成像（MRI），CT成像，近紅外螢光成像等多種影像模式，患者只需承受一種造影劑給藥，即可達到多種診斷效果；而且由於靈敏度的提高，可以降低造影劑用量，進一步減輕毒副作用。在808nm近紅外光照射下，吸附的ICG分子能有效的將光能轉化為熱能，產生60～70℃的過高熱，進而熱殺傷肝癌細胞；因此該多功能納米探針不僅可作為肝癌診斷的多模態造影劑，還可作為肝癌的光熱治療劑應用。
【專利說明】用於肝癌多模態影像和光熱治療的多功能納米探針及應用(-)【技術領域】
[0001]本發明涉及一種用於肝癌的核磁、CT、和近紅外成像的多模態影像，以及光熱治療的Au-1CG脂質體多功能納米探針及其應用。
(二)【背景技術】
[0002]肝細胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，其發病率呈逐年上升的趨勢。據統計，全球每年新增肝癌患者約60萬，其致死率達到第3位，僅僅稍次於肺癌和胃癌。我國每年新增的肝細胞癌發病人數約佔全球55% ;肝癌防治的核心是早期發現、早期診斷和早期治療。其中早期診斷最為關鍵，即在患者出現臨床症狀前或在癌症發生浸潤前得以確診，從而得到及時治療，達到提高治癒率、降低死亡率的目的。然而由於肝癌發病具有高隱匿性，加上以組織、器官的器質改變為基礎的傳統影像學的局限性，目前還難以準確進行肝癌的早期診斷。分子影像學技術可作為早期診斷方法，它是在臨床症狀還未出現時就檢測到腫瘤的早期生物學特性。
[0003]造影劑廣泛用於非侵入成像，特別是用於腫瘤診斷；目前臨床上廣泛使用的非侵入式成像手段包括:核磁共振成像(MRI)，計算機體層攝影術(CT)，超聲成像，近紅外成像等。提高上述成像技術的靈敏度和特異性，實現在細胞或者分子水平上的診斷成像，是實現肝癌早期診斷的核心和關鍵。目前各類輔助造影增強劑已經被廣泛的應用於臨床，來增加上述成像技術的敏感性和特異性；如:基於Gd3+的金屬絡合物已被成功用於核磁成像(MRI )，但其注射後可能導致組織滲透壓上升、組織水腫等毒副作用。但目前臨床上使用的大部分造影劑，其靈敏度均有待於進一步提高；低靈敏度將導致高劑量注射，增加毒副作用。同時，這些臨床使用的造影劑只局限於一種特定的成像技術，而不能實現多模態，多角度成像；而現代醫學通常 需要綜合不同影像學數據進行疾病的診斷；基於這種情況，患者可能需要多次承受不同的造影劑注射給藥，方可達到最終確診，這將增加患者所承受的造影劑毒副作用，可能導致患者健康的損壞，並會加重患者的經濟負擔。因此，迫切需要開發一種高靈敏度的多模態分子影像造影劑，以提高診斷的靈敏度、特異性，並期望能夠實現多種臨床影像的同時獲取。
(三)
【發明內容】

[0004]本發明目的是提供一種適用於肝癌的核磁成像(MRI)，CT成像，近紅外螢光成像以及靶向光熱治療的Au-1CG脂質體多功能納米探針及其應用。
[0005]本發明採用的技術方案是:
[0006]一種Au-1CG脂質體多功能納米探針，由核和外殼組成；所述的核為表面包覆聚多巴胺(polydopamine, PDA)層並吸附有吲哚箐綠(Indocyanine Green, ICG)的納米金顆粒，所述的外殼為偶聯有乳糖酸(Lactobionic acid, LA)、且螯合有Gd3+離子的DSPE-PEG (聚
乙二醇-二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺)脂質體膜。
[0007]本發明在金納米顆粒表面形成一層聚多巴胺(PDA)，其聚多巴胺表面帶有大量的-NH2根離子在酸性條件下帶正電，而吲哚箐綠(ICG)為一種帶負電的近紅外螢光分子，可通過靜電力的作用吸附在包被有聚多巴胺(PDA)的金納米顆粒表面；從而有效提高ICG的生物分散性，降低因ICG聚集而導致其螢光猝滅及水相不穩定性。上述構建的Au-PDA-1CG納米顆粒可利用808nm近紅外光激發，用於近紅外螢光成像；且々11納米顆粒具有分子量大(高於醫用碘海醇)、X_射線吸收能力強(高於醫用碘海醇)，血液清除緩慢(低於醫用碘海醇)，因此可有效提高CT的空間解析度、降低X-射線輻射劑量以及延長CT顯像時間；在808nm近紅外光照射下，吸附的ICG分子能有效的將光能轉化為熱能，產生60~70°C的過高熱，進而可以用於熱殺傷肝癌細胞。
[0008]為提高Au-PDA-1CG納米顆粒的體內循環時間，降低網狀內皮系統(Reticuloendothelial system)的吞卩遼作用，本發明在Au_PDA_ICG表面包被一層多功能DSPE-PEG (聚乙二醇-二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺)脂質體膜。DSPE-PEG已被FDA認證，可用脂質體藥物製劑等醫藥領域應用，並可有效提高藥物體循環時間。本發明為提高造影劑的肝癌特異性識別，彌補CT成像對軟組織定性診斷困難等問題，利用靶向肝癌細胞表面高
表達的脫唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotein receptor)的配體-半乳糖殘基偶聯
DSPE-PEG，並與螯合Gd3+的DSPE-PEG-D0TA以等比例混合，製成多功能脂質體膜。其膜表面含有大量Gd3+與水分子充分接觸，可提高MRI的靈敏性及T1加權成像功能。因此本發明的脂質體顆粒外殼除了具有對肝癌細胞MRI成像功能，還具有特異靶向肝癌細胞能力。
[0009]因此，本發明構建的Au-1CG-脂質體多功能納米顆粒同時具備對肝癌的核磁、CT和近紅外成像的多模態影像的功能，可提高CT空間對比度，增加MRI的T1加權成像信號強度，並且兼有對肝癌的特異靶向熱療功能。
[0010]優選的，所述Au-1CG脂質體多功能納米探針直徑為5~50nm。
[0011]具體的，所述Au-1CG脂質體多功能納米探針可由如下方法製備得到:(1)將金納米顆粒分散於多巴胺溶液中，調節PH8.5，攪拌4~6h後，7000~8000rpm離心並洗滌1~2次，得到表面包覆聚多巴胺層的金納米顆粒，再吸附吲哚箐綠，得到Au-PDA-1CG納米懸液；所述納米金顆粒可按本領域常規方法進行製備，具體如下:將氯金酸懸液加熱至150°C，沸騰5min後加入檸檬酸三鈉溶液，並伴隨強烈攪拌，並持續加熱20min後，停止加熱，攪拌至室溫，形成金納米顆粒懸液，在12000rpm離心15min後，收集得到金納米顆粒，其直徑約為10 ~16nm ；
[0012](2 )將DSPE-PEG-NH2 (聚乙二醇-二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺)與乳糖酸(Lactobionic acid, LA)進行醯胺偶聯反應，得到DSPE-PEG-LA (二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇-半乳糖殘基);將DSPE-PEG-NH2和D0TA-NHS (1，4，7，10-四乙酸-N-羥基琥珀醯亞胺)進行醯胺偶聯反應，並耦合Gd3+離子，得到DSPE-PEG-Gd3+D°TA (二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇-1，4，7，10-四乙酸釓)；再將製得的DSPE-PEG-Gd3+D°TA、DSPE-PEG-LA和氫化大豆磷脂、膽固醇混合，製得到單層脂質體膜；
[0013]具體過程如下:
[0014] DSPE-PEG-NH2 與 EDC 室溫反應 30min，加入 NHS，後加入 LA，4°C 反應 12h，用 lOOKDa的超濾管離心後，獲得DSPE-PEG-LA ；DSPE-PEG-NH2與D0TA-NHS在DMS0中，室溫反應lh，轉移到4°C反應4~6h，後用100000的超濾管離心後獲得DSPE-PEG-D0TA，之後在DMS0溶液中加入GdCl3粉末，強烈震蕩ia後，後用lOOKDa超濾管離心，獲得DSPE-PEG_Gd3+D°TA ;將DSPE-PEG-Gd3+D°TA、DSPE-PEG-LA和氫化大豆磷脂、膽固醇按一定比例混合，之後利用燒瓶旋轉蒸乾，即可得單層脂質體膜；
[0015](3)以步驟(1)製備的Au-PDA-1CG納米懸液水化步驟(2)所得單層脂質體膜，劇烈攪拌後離心，即得所述Au-1CG脂質體多功能納米探針。
[0016]優選的，步驟(2)中DSPE-PEG-Gd3+D°TA、DSPE-PEG-LA和氫化大豆磷脂、膽固醇的混合摩爾比為:3~7:3~7:60~75:30~50，更為優選的摩爾用量之比為3:3:75:50。
[0017]優選的，步驟(1)得到的表面包覆聚多巴胺層的金納米顆粒懸浮於超純水中，調節pH為5.5~6.5後，加入ICG至ICG濃度為20~30 μ g/mL,避光室溫震蕩2~3h後，靜止2~3h，離心、洗滌I~2次，去除未吸附的ICG分子，所得顆粒懸浮於超純水中製成Au-PDA-1CG納米懸液。
[0018]本發明還涉及所述的Au-1CG脂質體多功能納米探針在製備用於肝癌多模態成像的造影劑中的應用。所述造影劑可同時用於MRI磁共振成像，CT成像或近紅外螢光成像等。
[0019]本發明還涉及所述的Au-1CG脂質體多功能納米探針在製備肝癌靶向熱療的藥物中的應用。
[0020]本發明以多巴胺包裹金納米顆粒並吸附ICG形成的Au-1CG為核心，以獨特的設計方案，在Au-1CG表面包被一層具有生物相容性的多功能脂質體膜，並利用多功能脂質體膜表面的半乳糖殘基靶向肝癌細胞表面的脫唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)，構建得到一種具有多模態成像及靶向光熱治療的Au-1CG脂質體多功能納米探針。優選的Au-1CG脂質體多功能納米探針具有5~50nm的直徑，其等同於存在於人和動物機體中的一些蛋白和生物有機化合物的尺寸，由此便於造影劑在關注區域的輸送和吸收。
[0021]本發明所構建的Au-1CG脂質體多功`能納米探針可以不同的劑量給藥，這取決於成像的肝癌細胞，組織及肝癌患者的臨床狀況。本發明的造影劑和光熱藥物的給藥劑量和濃度，可由臨床醫生例行確定。用藥方案取決於各種因素，例如成像的肝癌細胞，組織或腫瘤是分散還是局部，患者的健康程度，年齡等。通過參照其他造影劑的用藥方案，本領域技術人員能夠確定本發明藥物的最佳有效劑量及濃度。
[0022]本發明的所構建的Au-1CG脂質體多功能納米探針可通過任何已知的遞送方法方式給藥:全身遞送(靜脈注射)，動脈內，腫瘤內，胃腸外，肺腔內，局部、或局部給藥的區域遞送形式。如動脈內注射能夠被用來「局域效果」成像及特定區域靶向區域熱療。
[0023]本發明Au-1CG脂質體多功能納米探針可用於肝癌的核磁成像(MRI)，CT成像，近紅外突光成像(Near-1nfrared (NIR) fluorescence imaging)等多種影像模式，只需承受一種造影劑給藥，即可達到多種診斷效果；而且由於靈敏度的提高，可以降低造影劑用量，進一步減輕毒副作用。在808nm近紅外光照射下，吸附的ICG分子能有效的將光能轉化為熱能，產生60~70°C的過高熱，進而熱殺傷肝癌細胞；因此該多功能納米探針不僅可作為肝癌診斷的多模態造影劑，還可作為肝癌的光熱治療劑應用。
(四)【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1為金納米顆粒及Au-1CG脂質體多功能納米探針的透射電鏡圖像及晶體衍射圖像。A為金納米顆粒的透射電鏡圖像；B為單個金納米顆粒的透射電鏡圖像(5nm標尺)。白色箭頭表不金納米顆粒表面的晶格；C表不Au-1CG脂質體多功能納米探針透射電鏡圖像；D表不Au-1CG脂質體多功能納米探針的晶體衍射圖。
[0025]圖2為Au-PDA-1CG，Au-PDA+ICG, ICG的紫外可見近紅外吸收光譜和螢光發射光
譜。A表示(一)Au-PDA-1CG，(-----)Au_PDA+ICG，(......) ICG的紫外可見近紅外吸收光
譜曲線圖表示(_ -) Au-PDA-1CG, (...Δ...) Au-PDA的螢光發射光譜曲線圖；
[0026]圖3為Au-1CG脂質體多功能納米探針的Tl磁共振加權成像圖和Au-1CG脂質體多功能納米探針的CT成像圖。A表示Au-1CG脂質體多功能納米探針的MRI圖像；B表示Au-1CG脂質體多功能納米探針的CT圖像；
[0027]圖4為Au-1CG脂質體多功能納米探針的光熱轉化曲線。(一)表示水溶液的升溫曲線，(.......)表示Au-1 CG脂質體多功能納米探針的升溫曲線。
[0028]圖5為共聚焦檢測Au-1CG脂質體多功能納米探針及ICG分子的肝癌細胞攝取實驗。A:為空白對照；B:為ICG被肝癌細胞攝取後的共聚焦螢光圖片；C:為Au-1CG脂質體多功能納米探針被肝癌細胞攝取後的共聚焦滅光圖片；。
[0029]圖6為Au-1CG脂質體多功能納米探針對肝癌細胞的光熱殺傷。
[0030]圖7為Au-1CG脂質體多功能納米探針對肝癌細胞的細胞毒性。
(五)【具體實施方式】
[0031]下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述，但本發明的保護範圍並不僅限於此:
[0032]實施例1:
[0033]將Iml濃度為IM的氯金酸懸浮於49ml的Mill1-Q超純水(美國Millipore公司)中，將混勻的50ml氯金酸懸液盛放到100ml體系的潔淨三口燒瓶中，在油浴及回流裝置下，加熱到150°C至剛剛沸騰，待沸騰5min後，向其中快速加入6ml濃度為0.015g/ml的檸檬酸三鈉溶液，並伴隨強烈攪拌，並持續加熱20min後，停止加熱，攪拌至室溫，形成金納米顆粒懸液，其金納米顆粒直徑約為10~16nm,並在12000rpm離心15min後，收集金納米顆粒備用。
[0034]實施例2:
[0035]將上述沉澱懸於新配製的含2mg/ml多巴胺(DA, Sigma公司)的IOmM tris-HCl溶液中，pH調節為8.5，並溫和攪拌約6h，在7000~8000rpm下離心15min及洗滌2次，收集包被後的Au-PDA納米顆粒，懸浮於Mi 11 1-Q超純水中，得到Au-PDA懸液。此時的多巴胺經氧化及光照自聚合形成PDA聚多巴胺層，用於修飾Au納米顆粒表面，並暴露大量氨基於Au納米顆粒表面，易於後期修飾。
[0036]實施例3:
[0037]吸取20 μ I含12.5mg/ml ICG (吲哚箐綠，日本同仁化學研究所(上海))的DMSO溶液，並懸於400 μ I的Mill1-Q超純水中，然後取100 μ I前述溶液，加入到實施例2製備的3ml的Au-PDA懸液中，調節pH為6.5後，避光室溫震蕩2h後，靜止2h，7000~8000rpm離心lOmin，洗滌2次，去除未吸附的ICG分子，所得納米顆粒懸浮於Mill1-Q超純水中，配製成3ml的0.02M的Au-PDA-1CG納米懸液備用，上述Au-PDA-1CG納米懸液已經具備了 CT成像、近紅外螢光成像及光熱轉化功能。
[0038]實施例4:[0039]利用電子天平稱取4.2mg的DSPE_PEG_NH2 (聚乙二醇-二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺,Nanocs公司)白色粉末和4.2mg的D0TA-NHS白色粉末(禮離子螯合劑，Macrocyclic公司)白色粉末，溶解在盛有1ml DMS0 (二甲基亞碸)的1.5ml的離心管中，室溫震蕩反應lh後，轉移到4°C冰箱，震蕩反應5h，後用lOOKDa的超濾管過濾，收集DSPE-PEG-DOTA-NHS，之後向其中加入60mg的GdCl3 (三氯化釓，百靈威試劑公司)白色粉末，強烈震蕩12h後，先2000rpm離心，去除沉澱後，再利用lOOKDa的超濾管過濾，收集DSPE-PEG_Gd3+D°TA並溶於1ml的Mill1-Q超純水備用。
[0040]另稱取4.2mg的DSPE_PEG_NH2粉末和18mg EDC (碳化二亞胺，，Sigma公司)粉末溶於盛有1ml Mill1-Q超純水的1.5ml的離心管中，並在30°C下活化30min，再向其加入9mg的NHS (N-N-羥基琥珀醯亞胺，Sigma公司)粉末以及42mg的乳糖酸(LA，百靈威試劑公司)粉末，在4°C震蕩反應12h，經lOOKDa的超濾管過濾，收集DSPE-PEG-LA，並溶於1ml的Mill1-Q超純水備用。
[0041 ] 將以上獲得的0.5ml的DSPE-PEG-GcTd°ta和0.5ml的DSPE-PEG-LA的超純水溶液盛放到50ml體系的燒瓶中混合併真空乾燥，以DSPE-PEG-Gd3+D°TA@DSPE-PEG-LA:氫化大豆磷脂(HSPC，上海艾韋特醫藥科技有限公司):膽固醇(cholesterol，百靈威試劑公司)摩爾比例3:75:50混合，並向其中加入10ml的氯仿甲醛混合溶液中(氯仿:甲醛=1:3，v/v)，之後利用50ml體系的燒瓶在50~70°C下旋轉蒸乾。上述形成的單層脂質體膜已經具備了MRI成像及靶向肝癌細胞的功能。
[0042]實施例5:
[0043]取10ml的0.02M的Au_PDA_ICG水溶液，在50°C下，水化上述旋轉蒸乾的單層脂質體膜，並強烈攪拌2h，在6000rpm離心15min後，獲得單層膜包被的Au-1CG脂質體多功能納米探針，並配置成0.02M的Au-1CG脂質體多功能納米探針。所述的Au-1CG脂質體多功能納米探針的粒子直徑約15~20nm，並具備了 MR1、CT、近紅外成像，光熱轉化及靶向肝癌細胞的功能。
[0044]使用透射電子顯微鏡(TEM)、紫外一可見分光光度計(UV-Vis-NIR)、MR1-CT成像，光熱轉化曲線，共聚焦顯微鏡，MRI核磁成像儀，micro-CT成像儀等方法表徵上述製備的Au-1CG脂質體多功能納米探針，具體測試結果如下:
[0045](1)透射電子顯微鏡(TEM)
[0046]透射電鏡圖像表示金納米顆粒及Au-1CG脂質體多功能納米探針的形貌、納米尺寸及晶格。參照圖1，A表示在200nm的標尺下，檢測納金納米顆粒的分布及形貌，其說明檸檬酸三鈉法合成的金納米顆粒尺寸均一，形貌一致。B圖表示單個金納米顆粒載5nm標尺下的透射電鏡圖像，其晶格明顯，表明合成的金納米粒子具有較高的結晶度及晶體結構。C為Au-1CG脂質體多功能納米探針的形貌，其外緣的具有較低襯度的膜層，為多巴胺及包被的單層脂質膜。D為Au-1CG脂質體多功能納米探針的晶體衍射圖。其衍射圈清晰，說明Au-1CG脂質體多功能納米探針具有良好的結晶度。
[0047](2)紫外-可見-近紅外分光光度計(UV-Vis-NIR)，螢光分光光度計
[0048]紫外-可見-近紅外吸收光譜和螢光發射光譜，表示Au-PDA-1CG合成的特徵光譜。參照圖2，A (—)Au-PDA-1CG表示Au-PDA吸附ICG離心後的吸收光譜，(——)Au-PDA+ICG表示Au-PDA吸附ICG未離心的吸收光譜，(....)ICG表示ICG分散在超純水溶液中的吸收光譜；其中Au-PDA-1CG在518nm及780nm分別具有Au-PDA的特徵吸收峰及ICG的特徵吸收峰，表明ICG已經成功的吸附於Au-PDA表面。B表示( -) Au-PDA,(..Δ...)Au-PDA-1CG的螢光發射光譜。Au-PDA-1CG在633nm激發下，具有ICG的特徵螢光發射峰，表不ICG已成功吸附於Au-PDA表面。
[0049](3) MRI磁共振成像和micro-CT成像
[0050]MRI磁共振成像和micro-CT圖像,顯示Au-1CG脂質體多功能納米探針具有磁共振成像和CT成像功能，參照圖3，A圖為不同濃度Au-1CG脂質體多功能納米探針Tl磁共振圖像，隨著編號 7 ~1，其濃度分別為 0.0003125，0.000625,0.00125,0.0025，0.005，0.01，
0.02M，其Au-1CG脂質體多功能納米探針的Tl信號強度隨濃度的增加而增強。B圖為不同濃度的Au-1CG脂質體多功能納米探針的CT成像圖，左側為0.000625M，右側為0.00125M，表明Au-1CG脂質體多功能納米探針具有CT成像功能。
[0051](4)熱轉化曲線
[0052]光熱曲線表示Au-1CG脂質體多功能納米探針能夠將光能轉換成熱能。參照圖4,所示在相同的功率2W/cm2180s的雷射照射下，5 μ g/ml Au-1CG脂質體多功能納米探針溶液相對於水，有明顯的升溫性能，並且Au-1CG脂質體多功能納米探針可在較短的時間內由
26.9°C激增到62.5°C，並未出現平臺，說明還可繼續光熱轉化高溫；而水溶液在相同的功率及時間照射下，溫度從26.9°C升溫到31.2°C。因此，表明Au-1CG脂質體多功能納米探針相對於水，高出31.3°C，並遠高於人體正常體溫，因此可以用於肝癌的熱殺傷。
[0053](5)共聚焦成像實驗
[0054]共聚焦成像實驗，表明肝癌細胞可有效攝取Au-1CG脂質體多功能納米探針。參考圖5，圖A為空白對照；圖B表示，5 μ g/ml ICG與肝癌細胞共撫育5個小時後的螢光圖像；圖C表示，5 μ g/ml Au-1CG脂質`體多功能納米探針與肝癌細胞共撫育5個小時後的螢光圖像；表明肝癌細胞可有效攝取Au-1CG脂質體多功能納米探針。
[0055](6)細胞殺傷能力；
[0056]利用不同濃度Au-1CG脂質體多功能納米探針，如0.2,0.4,0.6,0.8 μ g/ml與肝癌細胞撫育，並在808nm近紅外雷射器照射5min後，利用細胞增殖與活性檢測試劑盒(CCK8)(日本同仁化學研究所(上海))檢測。參考圖6，隨著Au-1CG脂質體多功能納米探針的濃度增加，其細胞的存活率明顯下降，說明經808nm近紅外雷射器照射後的Au-1CG脂質體多功能納米探針可有效進行光熱轉化，產生過高熱，對肝癌的進行熱殺傷。
[0057](7)細胞毒性；
[0058]利用不同濃度Au-1CG脂質體多功能納米探針如0.2,0.4,0.6,0.8mM與肝癌細胞撫育24h，利用細胞增殖與活性檢測試劑盒(CCK8)檢測。參考圖7，Au-1CG脂質體多功能納米探針與肝癌細胞撫育24h，並未對細胞造成損傷或凋亡，說明Au-1CG脂質體多功能納米探針不具有細胞毒性，也說明Au-1CG脂質體多功能納米探針的殺傷肝癌細胞主要通過光熱轉化，產生過高熱，進而殺傷肝癌細胞。
【權利要求】
1.一種Au-1CG脂質體多功能納米探針，由核和外殼構成，其特徵在於:所述的核為表面包覆聚多巴胺層並吸附有吲哚箐綠的納米金顆粒，所述的外殼為偶聯有乳糖酸、且螯合有Gd3+離子的DSPE-PEG脂質體膜。
2.如權利要求1所述的Au-1CG脂質體多功能納米探針，其特徵在於所述Au-1CG脂質體多功能納米探針由如下方法製備得到:(1)將金納米顆粒分散於多巴胺溶液中，調節PH8.5，攪拌4~6h後，7000~8000rpm離心並洗滌1~2次，得到表面包覆PDA的金納米顆粒，再吸附ICG，得到Au-PDA-1CG納米懸液；(2)將DSPE-PEG-NH2與乳糖酸進行醯胺偶聯反應，得到DSPE-PEG-LA;將DSPE_PEG_NH2和DOTA-NHS進行醯胺偶聯反應，並耦合Gd3+離子，得到DSPE-PEG-Gd3+D°TA ;將前述得到的DSPE-PEG-Gd3+D°TA、DSPE-PEG-LA和氫化大豆磷脂、膽固醇混合，製得單層脂質體膜；(3)以步驟(1)製備的Au-PDA-1CG納米懸液水化步驟(2)所得單層脂質體膜，劇烈攪拌後離心，即得所述Au-1CG脂質體多功能納米探針。
3.如權利要求1或2所述的Au-1CG脂質體納米探針，其特徵在於所述Au-1CG脂質體多功能納米探針直徑為5~50nm。
4.如權利要求2所述的Au-1CG脂質體納米探針，其特徵在於步驟(1)得到的表面包覆聚多巴胺層的金納米顆粒懸浮於超純水中，調節pH為5.5~6.5後，加入ICG至ICG濃度為20~30 μ g/mL,避光室溫震蕩2~3h後，靜止2~3h，離心、洗滌1~2次，去除未吸附的ICG分子，所得顆粒懸浮於超純水中製成Au-PDA-1CG納米懸液。
5.如權利要求2所述的Au-1CG脂質體納米探針，其特徵在於步驟(2)中DSPE-PEG-Gd3+D0T\ DS PE-PEG-LA和氫化大豆磷脂、膽固醇的混合摩爾比為:3~7:3~7:60 ~75:30 ~50。
6.如權利要求1所述的Au-1CG脂質體納米探針在製備用於肝癌多模態成像的造影劑中的應用。
7.如權利要求6所示的應用，其特徵在於所述造影劑用於MRI磁共振成像，CT成像或近紅外螢光成像。
8.如權利要求1所述的Au-1CG脂質體多功能納米探針在製備肝癌靶向熱療的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K49/12GK103721271SQ201310695697
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月17日 優先權日:2013年12月17日
【發明者】劉景豐, 劉小龍, 黃愛民, 張達 申請人:福州市傳染病醫院