一種快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒的製作方法

2023-10-22 17:41:32 3

專利名稱：一種快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及生物檢測領域，特別是涉及一種快速檢測泰樂菌素殘留的試劑 盒。
背景技術：
泰樂菌素(Tylosin),亦稱泰農、泰樂黴素，是美國於1959年從弗氏鏈黴菌(Streptomyces fradiae)的培養液中獲得的一種大環內酯類抗生素。我國自己生產的泰樂菌素廣泛地應用於畜牧業的畜禽疾病防治或作為促生長的飼料添加劑。泰樂菌素是一種廣譜抗生素，對支原體有特效，對多種G+菌具有很強的抗菌作用，還對部分G —菌、彎桿菌、螺旋體及球蟲具有抑制作用。但泰樂菌素對水生動物(如魚、蝦)有很強的毒性，且可以通過食物鏈危害人類。人如果食用泰樂菌素殘留濃度很高的禽肉組織，會出現身體不適等中毒現象。目前，常用於泰樂菌素殘留檢測的方法主要有微生物法、儀器分析法和酶聯免疫法。微生物法雖然經濟、操作簡便，但在樣本中有其他微生物抑制劑存在時，其靈敏度和特異性受到限制；高效液相色譜分析法、氣譜、氣質聯機法等單純的儀器分析方法，雖然靈敏度高，但是樣本前處理及測定操作繁瑣，費用高；酶聯免疫檢測法，雖然檢出限較低(O. 15mg/L)，但檢測前、後都需要做必要的儀器清洗及保養工作，檢測時間長，並且要求本領域專業技術人員來操作。免疫膠體金技術(Immunogold labelling techique)是上世紀80年代繼突光素、放射性同位素和酶三大標記技術後發展起來的固相標記免疫測定技術。該技術主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，形成肉眼可見的紅色或粉紅色斑點，因而用於定性或半定量的快速免疫檢測方法中。快速診斷試紙條是20世紀90年代以來在單克隆抗體技術、膠體金免疫層析技術和新型層析材料基礎上發展起來的一項新型體外診斷技術，近年來發展迅速，在生物醫學領域特別是醫學檢驗中得到了廣泛應用。該技術主要是將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在硝酸纖維膜上，膠體金標記試劑吸附在結合墊上，當待測樣品加到試紙條一端的樣品墊上後，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑後相互反應，再移動至固定的抗原或抗體區域時，待測物金標試劑複合物與之發生特異性結合而被截留，膠體金標記聚集在檢測帶上，可通過目測得到直觀的顯色結果。而游離的標記物則越過檢測帶，從而達到與檢測物自動分離的目的。競爭抑制法可用於測定抗原或抗體，以測定抗原為例，其原理為標本中的受檢抗原和固相的包被抗原競爭與標記抗體結合，當標本中的受檢抗原的量大於等於試劑的閾值，則標記抗體則不會與固相的包被抗原結合；若標本中無受檢抗原，則標記抗體直接與固相的包被抗原結合。免疫膠體金層析技術操作簡單、快速、靈敏和特異性好，用於泰樂菌素的快速檢測，此項技術雖然是一種較為成熟的技術，但膠體金試紙條容易受到汙染，不好保存，而現有技術中的試劑盒由於結構及各個部件位置和連接關係的不同，使得在檢測和使用觀察過程中存在足多不便。

實用新型內容為解決上述領域的需求和空白，本實用新型旨在提供一種快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，用於動物組織泰樂菌素殘留的檢測，本發明試劑盒採用競爭抑制法和免疫膠體金技術相結合快速檢測泰樂菌素殘留。一種快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，包括盒體、盒蓋構成的盒封閉體和置於盒體內的膠體金試紙條，所述盒蓋上具有加樣孔、測試項標識和結果觀察孔；其特徵在於所述測試項標識設在所述加樣孔和所述結果觀察孔之間，所述盒封閉體上下表面的一對對角為弧形，所述盒封閉體上還設有透氣孔。所述透氣孔設在所述盒封閉體盒蓋一面。所述透氣孔為多個，呈扇形排列。所述盒體內設有安裝膠體金試紙條的定位槽，所述膠體金試紙條分為以下部分樣品纖維墊、金標纖維墊、纖維素藥膜和吸水墊；當所述膠體金試紙條放置於盒體內的定位槽時，對應於盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊；對應於測試項標識處為金標纖維墊，所述金標纖維墊包被有膠體金標記的泰樂菌素單抗，對應於所述結果觀察孔處為纖維素藥膜，所述纖維素藥膜上設有檢測線T線和對照線C線，分別包被有有泰樂菌素-雞卵清白蛋白和羊抗小鼠IgG多抗。所述盒體設有連接裝置，所述盒蓋和盒體通過連接裝置可拆卸式連接。所述盒蓋上對應於盒體的一面設有多個小孔，所述盒體對應於盒蓋的一面設有與所述盒體一體的凸起，所述凸起與所述盒蓋上的小孔數量大小相適配。所述盒體上設有樣品編號。所述樣品編號設在所述盒封閉體盒蓋一面，並且靠近所述結果觀察孔的一側。技術效果本實用新型的快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，包括盒體、盒蓋構成的盒封閉體和置於盒體內的膠體金試紙條，所述盒蓋上具有加樣孔、測試項標識和結果觀察孔；其特徵在於所述測試項標識設在所述加樣孔和所述結果觀察孔之間，便於觀察和使用，便於識別具體檢測項目，所述盒封閉體上下表面的一對對角為弧形，節省材料空間，並且美觀大方，所述盒封閉體上還設有透氣孔，使得盒體內能夠與外界保持氣流相通，在檢測時，保證反應膜正常發揮毛吸作用，使檢測物能夠完全地快速地定向移動至透氣孔端，避免了阻滯或者不完全泳動等現象，保證了檢測的靈敏性、準確性和高效率。本實用新型優選將透氣孔開在所述盒蓋上。防治檢測液從透氣孔滴漏出來染到操作人員的皮膚上。本實用新型進一步優選透氣孔為多個小孔，呈扇形排列。多個小孔的設計使通氣孔既起到通氣的作用，又不會讓反應膜暴露出來，從而避免汙染到人的皮膚。扇形排列較為美觀。本實用新型所述盒體內設有安裝膠體金試紙條的定位槽，所述膠體金試紙條分為以下部分樣品纖維墊、金標纖維墊、纖維素藥膜和吸水材料墊；當所述膠體金試紙條放置於盒體內的定位槽時，對應於盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊；對應於測試項標識處為金標纖維墊，所述金標纖維墊包被有膠體金標記的泰樂菌素單抗用於識別相應的檢測試劑，對應於所述結果觀察孔處為纖維素藥膜，所述纖維素藥膜上設有檢測線T線和對照線C線，分別包被有有泰樂菌素-雞卵清白蛋白和羊抗小鼠IgG多抗，用於具體特異性反應的顯色。。所述盒封閉體設有連接裝置，所述盒蓋和盒體通過連接裝置可拆卸式連接，一方面方便使用，另一方面盒體和盒蓋可重複使用，節省資源。所述盒蓋上對應於盒體的一面設有多個小孔，所述盒體對應於盒蓋的一面設有與所述盒體一體的凸起，所述凸起與所述盒蓋上的小孔數量大小相適配，加工製作簡單，方便拆卸，不易汙染。所述盒封閉體上還設有樣品編號，便於查找、區分，便於識別產品類別及測試項目。本實用新型優選所述樣品編號設在所述盒封閉體盒蓋一面，並且靠近所述結果觀·察孔的一側，便於使用及觀察。本實用新型既操作簡單、又不需要任何儀器，並且本實用新型操作簡單，使用方便，拿來即用，不需要本領域的專業人員，能夠滿足不同層次人員的需要，容易普及，以符號顯示結果，擺脫了對設備、儀器、人員及貯存和運輸環境的特殊要求，並且具有快速、簡便、靈敏、準確、特異的特點。

圖I本實用新型試劑盒盒蓋示意圖圖2本實用新型試劑盒優選方案盒蓋示意圖圖3本實用新型試劑盒示意圖圖4本實用新型試劑盒優選方案示意圖圖5本實用新型試劑盒盒體示意圖[0031 ] 圖6本實用新型膠體金試紙條示意圖其中I-盒蓋，2-盒體，3-加樣孔，4-測試項標識，5-結果觀察孔，6_盒封閉體，7-樣品編號，8-膠體金試紙條，9-凸起，10-樣品纖維墊，11-金標纖維墊，12-纖維素藥膜，13-吸水材料墊，14-透氣孔。
具體實施方式
提供下述實施例是為了更好地進一步理解本實用新型，並不局限於所述最佳實施方式，不對本實用新型的內容和保護範圍構成限制，任何人在本實用新型的啟示下或是將本實用新型與其他現有技術的特徵進行組合而得出的任何與本實用新型相同或相近似的產品，均落在本實用新型的保護範圍之內。本實用新型操作簡單、使用方便，美觀大方、成本低廉，具有快捷、準確、方便、價廉的特點。說明書附圖中的Tylosin是指泰樂菌素測試標示項。實施例I.本實用新型的快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，包括盒體2、盒蓋I構成的盒封閉體6和置於盒體2內的膠體金試紙條8，所述盒蓋I上具有加樣孔3、測試項標識4和結果觀察孔5 ;其特徵在於所述測試項標識4設在所述加樣孔3和所述結果觀察孔5之間，便於觀察和使用，便於識別具體檢測項目，所述盒封閉體6上下表面的一對對角為弧形，節省材料空間，並且美觀大方，所述盒封閉體6上還設有透氣孔14，使得盒體2內能夠與外界保持氣流相通，在檢測時，保證反應膜正常發揮毛吸作用，使檢測物能夠完全地快速地定向移動至透氣孔端，避免了阻滯或者不完全泳動等現象，保證了檢測的靈敏性、準確性和高效率。本實用新型優選將透氣孔14開在所述盒蓋I上。防治檢測液從透氣孔滴漏出來染到操作人員的皮膚上。本實用新型進一步優選透氣孔14為多個小孔，呈扇形排列。多個小孔的設計使通氣孔既起到通氣的作用，又不會讓反應膜暴露出來，從而避免汙染到人的皮膚。扇形排列較為美觀。本實用新型所述盒體2內設有安裝膠體金試紙條8的定位槽，所述膠體金試紙條8 分為以下部分樣品纖維墊10、金標纖維墊11、纖維素藥膜12和吸水材料墊13 ;當所述膠體金試紙條8放置於盒體2內的定位槽時，對應於盒蓋I加樣孔3處為樣品纖維墊10 ;對應於測試項標識4處為金標纖維墊11，所述金標纖維墊11包被有膠體金標記的泰樂菌素單抗用於識別相應的檢測試劑，對應於所述結果觀察孔5處為纖維素藥膜12，所述纖維素藥膜12上設有檢測線T線和對照線C線，分別包被有有泰樂菌素-雞卵清白蛋白和羊抗小鼠IgG多抗，用於具體特異性反應的顯色。。所述盒封閉體6設有連接裝置，所述盒蓋I和盒體2通過連接裝置可拆卸式連接，一方面方便使用，另一方面盒體2和盒蓋I可重複使用，節省資源。所述盒蓋I上對應於盒體2的一面設有多個小孔,所述盒體2對應於盒蓋I的一面設有與所述盒體2—體的凸起，所述凸起與所述盒蓋I上的小孔數量大小相適配，加工製作簡單，方便拆卸，不易汙染。所述盒封閉體6上還設有樣品編號7，便於查找、區分，便於識別產品類別及測試項目。本實用新型優選所述樣品編號7設在所述盒封閉體6盒蓋I 一面，並且靠近所述結果觀察孔5的一側，便於使用及觀察。實驗例2.本發明試紙條的製備方法試紙條的製備程序如下步驟I.纖維素藥膜的包被I、將羊抗小鼠IgG多抗作為對照線C線，泰樂菌素-雞卵清白蛋白作為檢測線T線，兩個試劑分別按照所需的濃度(範圍1.5-2mg/ml)，用20mM的PBS進行稀釋。2、將配製好的上述試劑，按照C、T線位置分別包被到硝酸纖維素膜上，然後乾燥6小時，溫度為30°C，溼度< 35%，從而製得纖維素藥膜。步驟2.金標纖維層的標記I、取40nm的膠體金溶液，按終濃度8-12 μ 1/ml加入O. 2M K2CO3，加入一定濃度的泰樂菌素單抗，放置室溫反應15-30分鐘，然後按照濃度20 μ Ι/ml加入20%BSA的溶液，用於飽和游離的膠體金。最後lOOOOrpm，離心30分鐘，去除上清液中未結合的蛋白質。用等體積的O. 5m硼酸溶液(含l%Tween、5%蔗糖、1%水解BSA、1%水解酪蛋白、O. 1%PVA)復溶沉澱的膠體金標記原液。2、將上述膠體金標記原液按照10-20%濃度，用O. 5m硼酸溶液進行稀釋，從而配製成標記後的膠體金工作液。然後再將該工作液鋪於30*30cm玻璃纖維墊上,乾燥6小時,溫度為30°C，溼度彡35%，從而製得金標墊。步驟3.試紙條的組裝I、將塑料板平放在操作臺上，貼上雙面膠帶。2、撕掉雙面膠帶襯紙，在距塑料板上端30mm處貼上已包被有泰樂菌素-雞卵清白蛋白和羊抗小鼠IgG多克隆抗體的硝酸纖維素膜。3、將粗纖維吸水紙壓硝酸纖維素膜上端2mm貼上，上端與塑料板上端取齊。 4、將小無紡布壓硝酸纖維素膜下端O. 5mm處貼上。5、將金標墊取齊壓於小無紡布上面。6、將玻璃纖維墊壓於金標墊上約一半，下端距塑料板下端2mm處貼上。7、將大無紡布與金標墊上端取齊，下端與塑料板下端取齊貼上。8、將箭頭膠帶壓硝酸纖維素膜I. 5-2mm貼上。9、將手持端膠帶壓粗纖維吸水紙貼上。本發明一種快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒採用競爭抑制法原理和免疫膠體金技術相結合快速檢測食品中的泰樂菌素殘留。本發明試紙條操作簡單，使用方便，拿來即用，不需要本領域的專業人員，能夠滿足不同層次人員的需要，容易普及，本發明以符號顯示結果，擺脫了對設備、儀器、人員及貯存和運輸環境的特殊要求，用於動物源性食品泰樂菌素殘留的檢測。本發明試劑盒簡便、快捷、靈敏、準確，並且容易保存，使用方便，美觀大方。
權利要求1.一種快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，包括盒體、盒蓋構成的盒封閉體和置於盒體內的膠體金試紙條，所述盒蓋上具有加樣孔、測試項標識和結果觀察孔；其特徵在於所述測試項標識設在所述加樣孔和所述結果觀察孔之間，所述盒封閉體上下表面的一對對角為弧形，所述盒封閉體上還設有透氣孔。
2.根據權利要求I所述的快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，其特徵在於，所述透氣孔設在所述盒封閉體盒蓋一面。
3.根據權利要求2所述的快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，其特徵在於，所述透氣孔為多個，呈扇形排列。
4.根據權利要求3所述的快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，其特徵在於，所述盒體內設有安裝膠體金試紙條的定位槽，所述膠體金試紙條分為以下部分樣品纖維墊、金標纖維墊、纖維素藥膜和吸水墊；當所述膠體金試紙條放置於盒體內的定位槽時，對應於盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊；對應於測試項標識處為金標纖維墊，所述金標纖維墊包被有膠體金標記的泰樂菌素單抗，對應於所述結果觀察孔處為纖維素藥膜，所述纖維素藥膜上設有檢測線T線和對照線C線，分別包被有有泰樂菌素-雞卵清白蛋白和羊抗小鼠IgG多抗。
5.根據權利要求4所述的快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，其特徵在於，所述盒體設有連接裝置，所述盒蓋和盒體通過連接裝置可拆卸式連接。
6.根據權利要求5所述的快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，其特徵在於，所述盒蓋上對應於盒體的一面設有多個小孔，所述盒體對應於盒蓋的一面設有與所述盒體一體的凸起，所述凸起與所述盒蓋上的小孔數量大小相適配。
專利摘要本實用新型一種快速檢測泰樂菌素殘留的試劑盒，屬生物檢測耗材，其特徵在於，所述測試項標識設在所述加樣孔和所述結果觀察孔之間，所述盒封閉體上下表面的一對對角為弧形，所述盒封閉體上還設有透氣孔。本實用新型試紙條採用競爭抑制法原理以及膠體金技術快速檢測泰樂菌素殘留，用於動物源性食品中泰樂菌素殘留的檢測。本實用新型試劑盒簡捷、靈敏、準確，並且容易保存，使用方便，美觀大方。
文檔編號G01N33/53GK202710551SQ20122028776
公開日2013年1月30日 申請日期2012年6月15日 優先權日2012年6月15日
發明者張春山, 張永勝 申請人:北京博歐實德生物技術有限公司