迷迭香提取物、包含它們的膳食和藥物組合物及其用途的製作方法

2023-10-07 06:22:09

專利名稱：：迷迭香提取物、包含它們的膳食和藥物組合物及其用途的製作方法迷迭香提取物、包含它們的膳食和藥物組合物及其用途發明簡述本發明涉及用作藥物，特別是用於治療與受損的(例如降低的)神經傳遞相關的病症的迷迭香提取物，以及涉及含有這類迷迭香提取物的膳食和藥物組合物及其用途。
背景技術：
：眾所周知，受損的神經傳遞例如低神經遞質水平與精神疾病相關，如抑鬱和廣泛性焦慮障礙(GAD)，和提高的壓力易感性。能提高腦中的神經遞質水平並從而提高它們的傳遞的化合物可顯示抗抑鬱特性，並顯示對多種其它精神病症的有益作用(Neurotransmitters,DrugsandBrainFunctionR.A.Webster(ed)，JohnWiley&Sons,NewYork,2001,p.187-211,289-452,477-498)。主要的神經遞質是血清素、多巴胺、去甲腎上腺素(noradrenaline)(=去甲腎上腺素(norepinephrine))、乙醯膽鹼、穀氨酸、7-氨基丁酸以及神經肽。與情緒相關病症尤其相關的這些神經遞質包括血清素、去甲腎上腺素和多巴胺。這樣達成增強或延長的神經傳遞通過抑制進入突觸前神經末端的再攝取，來提高突觸間隙中的神經遞質濃度，或通過抑制降解酶(如單胺氧化酶(MAO)-A和-B)來預防神經遞質代謝。。抗抑鬱藥和情緒相關病症三環抗抑鬱化合物(TCA)如丙米嗪(imipramine)、阿米替林(amitriptyline)和氯米帕明(clomipramine)抑制血清素和去甲腎上腺素的再攝取。它們被廣泛認為是屬於可獲得的最有效的抗抑鬱藥，但是它們具有大量缺點，因為它們還與毒蕈鹼乙醯膽鹼-、組胺-和血清素-受體相互作用。這些活性導致的副作用除包括體位性低血壓以外還包括口乾燥、視力模糊、便秘和尿瀦留。最重要的是，過量服用TCA是不安全的，通常顯示急性心臟毒性。另一類抗抑鬱藥是阻斷血清素轉運蛋白(SERT)的所謂的SSRI(選擇性血清素再攝取抑制劑)，包括氟西汀(fluoxetine)、帕羅西汀(paroxetine)、舍曲林(sertraline)、西酞普蘭(citalopram)和氟伏沙明(fluvoxamine)，它們能封閉血清素轉運蛋白(SERT)——高親和性的氯化鈉依賴性神經遞質轉運蛋白，其通過攝取5-羥色胺來終止血清素激活的神經傳遞。。它們己被證明在治療抑鬱和焦慮症時與TCA同樣有效，但是通常能被更好地耐受。這些藥物通常以低劑量開始，並提高至其達到治療水平。常見的副作用是噁心。其它可能的副作用包括降低的食慾、口乾燥、出汗、感染、便秘、震顫、呵欠、嗜睡和性功能障礙。另外，通過抑制MAOs-A和-B更廣泛地預防神經遞質代謝的化合物顯示抗抑鬱的作用。MAOs催化含胺基的神經遞質如血清素、去甲腎上腺素和多巴胺的氧化。另外，神經傳遞的調節劑(modulator)對精神和認知功能顯示多效作用。存在對治療或預防精神疾病和/或病症的化合物的需要，所述化合物不顯示已知抗抑鬱藥的不利副作用。許多患者對下述備選療法感興趣，所述備選療法能夠最小化高劑量藥物相關的副作用，並產生累加的臨床益處。嚴重的抑鬱是一種長期並復發的疾病，其通常很少被診斷出來。另外，許多患者患有溫和或中度嚴重的抑鬱。因此，對下述化合物以及藥物和/或膳食組合物開發的興趣越來越大，所述化合物或組合物可被用於在風險人群中治療精神疾病/病症或預防精神疾病/病症(如抑鬱)的發生，和穩定情緒並達到感情平衡。患者通常遭受由於GAD的複合病變(comorbidity)到抑鬱或孤獨，所述GAD是初級護理(~10%患者)中一種高度盛行的焦慮病症和慢性病(Wittchen，etal2005Eur.Neuropsycho.15:357-376)。患者對他們的初級護理醫師表達多種生理症狀。GAD的特徵是慢性緊張和焦慮的擔憂和緊張(〉6個月)，這是無能為力並且不能控制的，並且伴隨著特徵性的警覺過度症候群(包括坐立不安、肌肉緊張和睡眠問題)。如果不治療的話，GAD進行慢性的、波動的過程，並趨向於隨著年齡變得越來越嚴重。GAD患者遭受亞症候群(subsyndromal)的抑鬱，並作用於所有焦慮症和抑鬱病症的最高的總體直接和間接健康經濟負擔。儘管GAD發病率高，但是很少有患者被診斷、開出藥物處方或接受精神病治療；需要幫助患者識別和監測的簡單診斷工具。即使有特異的診斷，醫師仍需要有效的GAD-症狀療法。SSRI如帕羅西汀對GAD治療是有效的(Stocchietal.2003,J.Clin.Psych.，63(3):250-258)。另外，全身性評估和有安慰劑作對照的RCT(隨機化的臨床試驗)表明一些SSRI(依他普侖(escitalopram)、帕羅西汀和舍曲林)、SNRI(選擇性去甲腎上腺素再攝取抑制劑)文拉法辛(venlafaxine)、一些苯並二氮雜卓類(阿普唑侖(alprazolam)和地西泮(diazepam))、TCA、丙米嗪和5-HT,A部分激動劑、丁螺環酮在急性治療中均是有效的。一般而言，治療的影響通常是中等的，當治療周期停止時症狀復發。因此，使用具有比SSRI更少的副作用並可長時間應用的化合物進行連續長期治療或預防可能比藥物治療更有利。情緒病症和職業壓力(occupationalstress)可導致睡眠障礙、失眠、低睡眠質量和晝夜節律(所謂的生物節律)的整體性失調；這些病症的性質通常是慢性和持久的。另外，由遠距離航班(飛行時差(jet-lag))和輪班工作導致的晝夜節律失調可引起相似的症狀和苦惱(distress)。因此，可能最期望的是用膳食補劑治療，以維持正常的晝夜節律(人或動物所習慣的晝夜節律)和/或減輕和預防與紊亂的晝夜節律相關的症狀，如認知功能和記憶損傷，和精神和生理疲勞。發明詳述迷迭香提取物及其優選的組分根據本發明已發現，迷迭香提取物可用於藥物中，所述藥物用於治療與降低的神經傳遞相關的病症。具體地，該要求由通過以下工藝製造的這些迷迭香提取物滿足，所述工藝包括下述步驟-石if磨乾燥的Ao5maW肌51Oj^">za/^s葉；-用丙酮提取步驟a)的葉，獲得丙酮提取物；-任選地(優選地)過濾所述丙酮提取物；-通過(部分地，優選幾乎全部地)去除丙酮，濃縮所述丙酮提取物；-任選地(優選地進一步)噴霧乾燥由此濃縮的丙酮提取物。由此製造的迷迭香提取物含有以迷迭香提取物總重為基礎>35重量-%的鼠尾草酸，優選地>40重量-%的鼠尾草酸，優選地>50重量-%的鼠尾草酸。由此製造的迷迭香提取物特別適用於本發明的目的。特別適用於本發明目的的迷迭香提取物含有-迷迭香酚，優選地在從0.05到3重量-%的範圍內，更優選地在從O.l到1.0重量-%的範圍內，最優選地在從0.2到0.7重量-%的範圍內，-鼠尾草酚，優選地在從0.5到7.0重量-%的範圍內，更優選地在從1到5.0重量-%的範圍內，最優選地在從2.5到4.0重量-%的範圍內，-鼠尾草酸，優選地在從20到65重量-%的範圍內，更優選地在從25到60重量-%的範圍內，最優選地在從30到55重量-%的範圍內；和-鼠尾草酸12-甲基醚，優選地在從1到20重量-o/c的範圍內，更優選地在從5到15重量-%的範圍內，最優選地在從7到12重量-%的範圍內，上述物質是以迷迭香提取物的總重為基礎，並是使用純物質作為參考，通過HPLC-UV(高效液相色譜-紫外線)在210nm處測量的。"迷迭香酚"表示外消旋混合物以及純(^尺9S，/^5)-迷迭香酚或純迷迭香酚或它們的任何混合物或非對映異構體。(^尺9S,/(k5)迷迭香酚是優選的。"鼠尾草酚"表示外消旋混合物以及純(^尺9S,MoS)-鼠尾草酚或純鼠尾草酚或它們的任何混合物或非對映異構體。(^尺然70fl5)-鼠尾草酚是優選的。"鼠尾草酸"表示外消旋混合物以及純(^尺/化》-鼠尾草酸或純o^s,7化/)-鼠尾草酸或它們的任何混合物或非對映異構體。(^TU化5)-鼠尾草酸是優選的。"鼠尾草酸12-甲基醚"表示外消旋混合物以及純(勿尺/化5>鼠尾草酸12-甲基醚或純(^5",/&"-鼠尾草酸12-甲基醚或它們的任何混合物或非對映異構體。(^凡/(^5)-鼠尾草酸12-甲基醚是優選的。迷迭香提取物及其組分的用途因此，本發明一方面涉及迷迭香提取物，其用作治療與降低的神經傳遞相關病症的藥物。另一方面，本發明涉及迷迭香提取物用於製造組合物(其用於治療與降低的神經傳遞相關的病症)的用途，尤其是用於製造抗抑鬱藥、情緒/生活力改善齊廿、減壓齊廿(stressreliever)、狀況改善齊lj(conditionimprover)、焦慮減輕齊!j(reducerofanxiety)、強迫行為減輕齊(J(reducerofobsessive-compulsivebehaviour)、弛緩齊!j(relaxant)、睡眠改善齊U(sleepimprover)禾口/或失眠緩解劑(insomniaalleviator)的用途。還在另一方面中，本發明涉及膳食組合物以及藥物組合物，所述膳食組合物包含如上定義的迷迭香提取物，所述藥物組合物包含如上定義的迷迭香提取物和常規的藥物載體。另外，本發明涉及在動物(包括人)中治療與降低的神經傳遞相關的病症的方法，所述方法包括對需要其的動物(包括人)施用如上定義的有效劑量的迷迭香提取物。在本發明的上下文中，動物包括人，並包括哺乳動物、魚和鳥。優選的"動物"是人、寵物和伴侶動物和農業動物。寵物和伴侶動物的例子是犬、貓、鳥、水族箱魚(aquariumfish)、荷蘭豬、(jack)兔、野兔和雪貂。農業動物的例子是魚、豬、馬、反芻類(牛、綿羊和山羊)和家禽。在本發明的上下文中，"治療"也包括共同治療以及預防。"預防"可表示第一次發生(一級預防)或復發(二級預防)。術語"降低的神經傳遞"在本申請中根據本領域技術人員公知的含義被使用，並涉及神經傳遞的失調，所述失調可在神經遞質生物合成、加工、儲存、釋放、再攝取和受體結合的水平上發生。降低的神經傳遞在動物(包括人)中可自身表現為行為、感情、情緒和思考過程紊亂，例如表現為多種類型的抑鬱之一。因此，本發明還涉及在動物(包括人)中預防與降低的神經傳遞相關的病症的方法，所述方法包括對有需要的動物(包括人)施用有效量的迷迭香提取物，偏好如上所述。在這一點上，有效量的迷迭香提取物可特別用於維持精神正常，用於維持平衡的認知功能，用於幫助降低情緒波動的風險，用於幫助保持積極的情緒和用於支持認知健康，和用於幫助維持良好的睡眠質量。在本發明的上下文中，術語"病症"還包括疾病。用於治療與降低的神經傳遞相關的病症的藥物包括抗抑鬱藥、情緒/生活力改善劑、減壓劑、狀況改善劑、焦慮減輕劑和強迫行為減輕劑、弛緩劑、睡眠改善劑和/或失眠緩解劑。它們均改善、增強和支持神經傳遞，特別是在中樞神經系統中，並因而減輕精神功能障礙。抗抑鬱藥是用於治療精神-、行為-和感情/情感-、神經-、神經變性-、進食-和壓力-相關病症的藥物/組合物，所述病症如單相抑鬱、雙相抑鬱、急性抑鬱、慢性抑鬱、亞慢性抑鬱、抑鬱症、產後抑鬱、月經前病理性心境惡劣(dysphoria)/症候群(PMS)、更年期抑鬱症候群、攻擊、注意力缺陷病症、社交焦慮症、季節性情感障礙和焦慮(病症)如GAD、纖維肌痛症候群、創傷後應激病症、驚恐性障礙(panicdisorders)和強制性障礙(obsessive-compulsivedisorders)、下肢不寧症候群(restlesslegsyndrome)、神經質、偏頭痛/原發性頭痛和一般性疼痛、嘔吐、食慾過盛、神經性厭食、狂飲-進食障礙、胃腸道病症、身心衰竭症候群(bum-outsyndrome)和易激惹(irritabmty)。抗抑鬱藥也可用於(製造組合物，所述組合物用於)對神經認知損傷進行一級和二級預防和/或治療。另外，它們也有效治療抑鬱症狀或與受幹擾的神經傳遞相關的其它症狀，所述受幹擾的神經傳遞作為慢性疾病(如心血管疾病、中風、癌症、阿爾茨海默病、帕金森氏症及其它)中的複合病變發生。因此，如上定義的迷迭香提取物以及含有它們的膳食/藥物組合物適用於治療動物(包括人)。在本發明的又一實施方案中，迷迭香提取物可用作一般情緒改善劑，以及用於製造用於這類用途的組合物(膳食/藥物組合物)。"情緒改善劑"、"感情健康加強劑"或"生活力改善劑"表示經其治療的人情緒增強，自我尊重提高，和/或負面想法減少。還表示感情平衡，和/或一般(特別是精神)健康和生活力被改善或維持，以及情緒波動的風險(被幫助)降低，和正面情緒(被幫助)保留。如上定義的迷迭香提取物一般也可用作用於動物(包括人)的焦慮減輕劑和/或強迫行為減輕劑；優選地用於人、寵物動物和農業動物。"焦慮減輕劑"表示慢性緊張和焦慮的擔憂和緊張被減少或減輕。警覺過度症候群(Hypervigilancesyndrome)被減少或緩解，其包括不安(restlessness)、肌肉緊張(muscletension)和睡眠問題。社交恐怖症和其它恐怖症被解決。一般而言，社交環境被體驗為較不具有威脅性。所述人感情放鬆，體驗舒適並享受陪伴和與其它人的接觸。"弛緩劑"、"睡眠改善劑"或"失眠緩解劑"表示改善睡眠開始比國內幫助人容易地進入睡眠，以整晚維持不受千擾的睡眠。其還表示歸因於噴氣機症候群(jet-lag)或輪班工作的晝夜節律相關的睡眠紊亂被糾正，與失眠相關的症狀(即認知功能和記憶受損，精神和生理疲勞，多夢)被除去或緩解，總體生活質量和生機能量(vitalenergy)被提高。另外，迷迭香提取物以及包含有效劑量的它們的組合物可用於治療、預防和緩解壓力相關的症狀，用於治療、預防和緩解與超負荷工作、衰竭和/或身心衰竭相關的症狀，用於提高對壓力的抗性或耐性，和/或在正常健康個體中支持和促進放鬆，即這些組合物具有"減壓劑"的作用。本發明的又一實施方案涉及如上定義的迷迭香提取物和含有它們的組合物(膳食/藥物組合物)作為"狀況改善劑"的用途，即作為下述手段的用途，所述手段用於在患病或正常的健康個體中降低應激性和疲勞，降低、預防或緩解生理和精神疲勞，和在更普遍的情況下提高能量，特別是提高腦能量生產。它們還可用於一般認知改善，用於調節飢餓和飽滿感，以及用於調節運動活動。本發明不僅涉及用作藥物、特別是用於治療與降低的神經傳遞相關的病症的、如上定義的迷迭香提取物及其組合物(含有它們的膳食/藥物組合物)，而且也涉及如上文己提到的、用於治療這些病症的方法自身。獸醫用途寵物和農業動物可處於需要增強的或改善的神經傳遞的狀態下，所述增強或改善的神經傳遞可由本發明提供。動物可針對壓力情況顯示不利的行為和/或生理反映；在大量生產環境中詞養或在不利條件下運輸的動物可顯示肉或乳品質或數量的降低；應激的家禽可採取拔掉羽毛(feather-picking)、減少產卵和同種相殘。許多動物在不利的居住或運輸條件下會變得好鬥或顯示刻板-(stereotypic-)、焦慮-和強迫的行為。因此，本發明的另一方面是如上定義的迷迭香提取物作為膳食/藥物組合物的獸醫用途。在本發明的一個優選的實施方案中，如上文定義的迷迭香提取物被施用，用於在農業動物中和大量生產的家畜飼養業、運輸至屠宰場期間預防壓力，和/或用於預防這類環境下所述農業動物的肉品質損失。農業動物優選地是家禽、牛、綿羊、山羊和豬。在本發明的另一個優選的實施方案中，如上文定義的迷迭香提取物被施用給家禽，用於預防拔掉羽毛和同種相殘，所述拔掉羽毛和同種相殘導致例如肉品質和卵生產的損失。本發明的另一方面是在水產養殖中預防和/或緩解壓力的方法，包括對有需要的動物施用如上文定義的迷迭香提取物，其中所述動物是魚或蝦。在本發明的另一個優選的實施方案中，如上文定義的迷迭香提取物被施用給寵物或陪伴動物，用於減輕在壓力條件下顯示的壓力、緊張和進攻性和強迫行為，所述壓力條件如主人的分離、改變或丟失，假日分離期間和所謂的"動物旅館"中的飼養，和動物保護地或保護區中的飼養。本發明的再一方面是在用於皮毛工業的動物(優選地為水貂、狐狸和野兔)中預防/減少與壓力條件相關症狀的方法。本發明優選的劑量和組合物就本發明的目的而言，用於人的迷迭香提取物的合適的每日劑量可以在每天每kg體重0.001mg到每kg體重100mg的範圍內。更優選的是每kg體重從0.01到10mg範圍內的每日劑量，特別優選的是每kg體重從0.05到5.0mg範圍內的每日劑量。術語"膳食組合物"包括任何類型的(強化)食物/飼料和飲料，還包含臨床營養品和膳食補充劑。根據本發明的膳食組合物可還含有保護性水膠體(如膠質、蛋白質、改性澱粉)、粘合劑、成膜劑、包封劑/材料、壁/殼材料、基質化合物、包衣、乳化劑、表面活性劑、增溶劑(油、脂肪、蠟、卵磷脂等等)、吸附劑、載體、填充劑、輔助化合物、分散劑、溼潤劑、加工助劑(溶劑)、流動劑、遮味劑、增重劑、啫喱化劑(jellyfyingagents)、凝膠形成劑、抗氧化劑和抗微生物劑。除了可藥用載體和如上定義的迷迭香提取物以外，根據本發明的藥物組合物還可含有常規的藥物添加劑和佐劑、賦形劑或稀釋劑(包括但不限於水、任何來源的明膠、植物膠、木質素磺酸鹽、滑石、糖、澱粉、阿拉伯膠、植物油、聚亞烷基二醇)、調味劑、防腐劑、穩定劑、乳化劑、緩衝劑、潤滑劑、著色劑、溼潤劑、填充劑等等。載體材料可以是適用於口/腸胃外/可注射施用的有機或無機惰性載體。根據本發明的膳食和藥物組合物可以是適用於對動物體(包括人體)施用的任何蓋侖形式(galenicform)，特別是對經口施用而言常規的任何形式，例如固體形式如食物或飼料(用於食物或飼料的添加劑/補充劑)、食物或飼料預混合物、強化的食物或詞料、片劑、丸劑、顆粒劑、錠劑、膠囊和泡騰配製物如粉末和片劑，或液體形式如溶液、乳液或懸浮液，如例如飲料、糊劑和油懸浮液。糊劑可以被填充進硬殼或軟殼膠囊中，從而膠囊具有例如(魚、豬、家禽、奶牛)明膠、植物蛋白或木質素磺酸鹽的基質。其它應用形式的例子是用於經皮、腸胃外或可注射施用的形式。膳食和藥物組合物可以是受控(延遲)釋放配製物的形式。強化食物的例子是穀物棒和烘焙物如蛋糕和曲奇。飲料包括無醇飲品和含酒精的飲品，以及要添加進飲用水和液體食物中的液體製劑。無醇飲品為例如軟飲、運動飲品、果汁、檸檬水、茶和基於乳的飲品。液體食物為例如湯和乳製品(例如什錦穀物飲品)。在用於人的固體劑量單位製劑中，迷迭香提取物以下述用量適當地存在，所述用量在每劑量單位從O.lmg到1000mg的範圍內，優選地在從1mg到500mg的範圍內。在膳食組合物，特別是用於人的食物和飲料中，迷迭香提取物以下述量適當地存在，所述量以食物或飲料的總重為基礎從0.0001(1mg/kg)到5重量-%(50g/kg)的範圍內，優選地在從0.001(10mg/kg)到1重量-%(10g/kg)的範圍內，更優選地在從O.Ol(100mg/kg)到0.5重量-%(5g/kg)的範圍內。在本發明的一個優選的實施方案中，在食物和飲品中，迷迭香提取物的量在每份從10到30mg的範圍內，即每kg食物或飲品約120mg。就本發明的目的而言，對除人之外的動物，迷迭香提取物的合適的每日劑量可在每天每kg體重從0.001mg到每kg體重1000mg的範圍內。更優選的是在每kg體重從O.lmg到500mg的範圍內的每日劑量，特別優選的是每kg體重從lmg到100mg範圍內的每日劑量。本發明通過以下的實施例進一步闡述。實施例實施例1製備迷迭香提取物將千燥的io^um'"^oi^"'朋fo葉磨碎然後用丙酮提取。過濾由此獲得的丙酮提取物，並通過去除丙酮進行濃縮。然後噴霧乾燥經濃縮的丙酮提取物。由此產生的迷迭香提取物(來自Naturex，Avignon,法國的"Oxy，less"(No.993369))含有0.5重量-%的迷迭香酚，3.3重量-%的鼠尾草酚，36.7重量-%的鼠尾草酸，和9.0重量-%的鼠尾草酸12-甲基醚，這均以迷迭香提取物的總重為基礎，並是用純物質作為參考通過HPLC-UV在210nm處測量的。用於體內效力研究(實施例4和5)的特定劑量迷迭香提取物中含有的各組分含量如下tableseeoriginaldocumentpage14實施例2迷迭香提取物對血清素攝取的抑制從R.Blakely，VanderbiltUniversity,USA獲得穩定表達人血清素再攝取轉運蛋白(hSERT)的人胚腎(HEK-293)細胞。在含10%經透析的胎牛血清(Invitrogen)、青黴素、鏈黴素、L-穀氨醯胺和抗生素G418的Dulbecco，s改良的Eagle's培養基(Bioconcept)中培養常規地細胞，並通過胰蛋白酶消化來對細胞加以傳代。測定當天，通過用溫熱的磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)柔和洗滌，從80%匯合燒瓶中收集細胞。然後通過離心將細胞洗滌一次，並以160nl緩衝液中10,000個細胞的濃度重懸於補充了35帕吉林(pargyline)、2.2mMCaCl2、1mM抗壞血酸和5mMN-2-羥乙基哌嗪-N，-2-甲磺酸(HEPES緩衝液)的Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩衝液(Sigma)中，並以每孔10,000個細胞分裝於圓底聚丙烯96-孔微量滴定板(Coming)中。如下測定進入細胞的血清素攝取以20nM的濃度添加放射性標記的[3印-血清素(GEHealthcare),並在37。C下柔和搖動孵育40分鐘。這段時間結束時，使用TomtecMachIIIM細胞收穫儀，通過濾經Unifilter96GF/B平板(PerkinElmer)去除未摻入的標籤。使用Microscint-40/Topcount(PerkinElmer)，通過液體閃爍計數法定量保留在平板上的被摻入的血清素。如下測定根據實施例1獲得的迷迭香提取物對血清素攝取的影響在添加[3司-血清素之前10分鐘或期間，將其以0.03和100pg/ml的濃度範圍包含在測定中。使用SSRI、氟西汀(0.03111^-1nM)作為參考化合物。迷迭香提取物以劑量依賴性的方式抑制血清素通過轉運蛋白的攝取。表1中顯示針對迷迭香提取物和氟西汀對血清素攝取的抑制所計算的IC50值。表1:迷迭香提取物和氟西汀對血清素攝取進入經轉染的HEK-293細胞的抑制。數據顯示為均值士標準誤差，其中進行了多次測定。物質氚標記的血清素攝取的ICso迷迭香提取物(根據實施例1)6.9±1.4pg/ml(n=2)氟西汀5nM實施例3迷迭香提取物對單胺氧化酶的抑制有機胺對-酪胺或苄胺分別被用作單胺氧化酶A(MAO-A)和B(MAO-B)酶的底物。通過與香草酸的反應定量該反應產生的H202，所述與香草酸的反應由辣根過氧化物酶(HRP)催化。反應於37"C下在聚苯乙烯微量滴定板中進行。將MAO酶(終濃度2U/ml)與適宜的對-酪胺(Sigma，終濃度0.5mM)或苄胺(Sigma，終濃度0.5mM)任一和生色溶液(含香草酸(Fluka)、4-氨醯安替比林(Fluka)和辣根過氧化物酶(Sigma)，終濃度分別為0.25mM、0.125mM和1U/ml)在0.2M磷酸鉀緩衝液pH7.6中混合。孵育40分鐘後，在微量滴定板吸光度讀數器例如SpectmmaxM5(MolecularDevicesCorporation)中於495nm下分析平板。在與底物孵育之前IO分鐘和孵育期間，通過在測定中包含濃度範圍在0.03和100AiM/ml之間的迷迭香提取物，測定它們對單胺氧化酶的影響。為了測定提取物對HRP-催化的反應部分的影響，用H202(MolecularProbes,終濃度50/zM)代替MAO酶。含MAO-A和MAO-B的反應均以濃度依賴的方式被迷迭香提取物抑制，而對照反應未受影響。針對迷迭香提取物對單胺氧化酶活性的抑制所測量的IC5o值對於MAO-A和MAO-B而言分別為0.93±0.13pg/ml和3.0±0.4|ig/ml(在各情況下n=2)。實施例4Porsolt's強制遊泳測試中迷迭香提取物對行為的影響強制遊泳測試(ForcedSwimTest,FST)在1977年被首次報導，用於在大鼠中篩選抗抑鬱藥樣化合物(Porsoltetal1977Nature,266:730-732)，並且之後被改造用於測試小鼠(Porsoltetal1977Arch.Int.Pharmacodynamie，229:327-336)。藉此論證了"行為絕望(Behaviouraldespair)"，當強迫大鼠或小鼠在無處可逃的水桶中遊泳時，它們最初會顯示有力的、以逃避為方向的(escape-oriented)活動，但是最後只進行保持它們頭在水上所必需的這些最小動作。測試顯示對具有針對抑鬱的有效治療活性的一系列藥物是敏感的，所述藥物中的一些先前在現有的行為模型中未顯示效力。將小鼠個別地置於無處可逃的含13.5cm水(22。C)的桶內(高度=24.5cm,直徑-19.5cm)。將小鼠置於水中6分鐘，測量最後4分鐘期間的不移動(immobility)持續時間。每組研究十隻小鼠。在272、409、禾口545mg/kg體重下，測試前24、5和1小時口服施用，來評價迷迭香提取物(溶於玉米油中)，並與載體處理的對照組比較。使用在相同實驗條件下施用的丙米嗪G2mg/kg，口服；溶於蒸餾水中)作為參考物質。通過使用單通道變量分析(ANOVA)和Bonferronipost-hoc檢驗比較所有組來分析數據。表2:口服(-24，-5,-1h)施用後小鼠FST中迷迭香提取物(RE)和丙米嗪的影響。數據顯示為均值士標準差(n=9-10)和相對於對照的％改變，其中NS^不顯著的，"p〈0.01c_tableseeoriginaldocumentpage16結果顯示迷迭香提取物(409和545mg/kg)表現了顯著的抗抑鬱藥樣活性，這與丙米嗪相似。實施例5迷迭香提取物對血清素和去甲腎上腺素腦水平的影響(大鼠中的體內微量滲析)將成年雄性SpragueDawley大鼠麻醉(水合氯醛，400mg/kg腹膜內)，然後在背海馬中植入單個微量滲析探針(BASiMD2200型，2mm膜，30,000道爾頓的分離點)，用牙科粘固粉(dentalc,ement)固定在位置上，並以1ml/分鐘輸注人工腦脊液(aCSF)。在所有實驗中一直將體溫維持於36°C。如下測定細胞外血清素(5-HT)和去甲腎上腺素(NA)水平每15分鐘收集灌注液樣品，並使用高效液相色譜(HPLC)用電化學檢測來測定。HPLC流動相(5-HT分析0.5mMEDTA、0.1M—氯醋酸，pH3.1、0.15g/L辛基硫酸鈉、5%乙腈、0.7%四氫呋喃；NA分析0.5mMEDTA、0.1MNaH2P04，pH3.1、1mM辛基硫酸鈉、6%乙腈)以70jLtl/分鐘被抽吸經過該體系。使用帶有5jLtl注射環的反相1x100mmODS3/xm微孔柱分離單胺，並使用Epsilon電化學檢測器(BASi)檢測，所述檢測器帶有相對於Ag/AgCl參比電極設置為+650mV的玻璃狀碳電極。通過將峰洗脫時間與參考標準比較鑑定透析液峰，並使用線性回歸分析根據峰面積的測量定在開始微量滲析後(-30和-15分鐘)收集的最初兩份灌注液樣品被用於基線測量，而樣品收集持續到最後的化合物施用後90分鐘。將迷迭香提取物懸浮於玉米油中，並在0和90分鐘腹膜內施用(分別為27和81mg/kg)。如下計算各劑量的提取物對血清素和去甲腎上腺素總量的影響在取樣周期中於每次劑量施用後估計曲線下面積(AUC)。使用雙通道ANOVA，隨後使用Bonferronit檢驗(GraphpadPrism)在各個劑量上進行post-hoc比較，將迷迭香提取物的影響與載體對照組比較，所述影響被計算為基礎值的百分比。表3:迷迭香提取物(RE)對累積的5-HT和NA釋放的影響，被測量為施用每個劑量後90分鐘期間的AUC。數據顯示為％基礎值；NS:不顯著tableseeoriginaldocumentpage18在每個劑量後，5-HT水平瞬時提高，但是隨後恢復至與載體相似的值。然而，根據在整個處理時間中的計算，處理不存在顯著影響(F(1，102)=2.689;p>0.05)，並且當計算為每個劑量後的AUC時，處理沒有顯著影響(F(1,15)^1.02;p>0.05)。在較低的劑量後，NA水平無改變，但是較高的劑量後存在小的(約10%)但是持久的NA水平提高。因此，在整個處理時間中計算時(F(1，128)=17.63;p<0.001)，和計算為每個劑量後的AUC時(F(1，20)=6.84;p<0.05)，均存在處理的顯著影響。因此，使用體內微量滲析，根據實施例1的迷迭香提取物證明有提高腦細胞外血清素水平的趨勢，同時誘導細胞外去甲腎上腺素的顯著提高。實施例6製備軟明膠膠囊製備包含以下成分的軟明膠膠囊tableseeoriginaldocumentpage18可對成人每天施用兩粒膠囊持續3個月，用於治療溫和的慢性抑鬱症。實施例7製備軟明膠膠囊製備包含以下成分的軟明膠膠囊成分每粒膠囊用量迷迭香提取物200mg月見草油300mg維生素B6羅mg應當每天服用一粒膠囊持續14天，優選地在月經周期的下半部分服用，用於治療月經前期症候群和月經前焦慮障礙。實施例8製備片劑可製備包含以下成分的片劑-成分每片用量迷迭香提取物100mg西番蓮花(Passionflower)標準化提取物150mg綠茶提取物，例如來自DSMNutritionalProducts,Kaiseraugst,瑞士的TEAVIGO150mg對於一般健康、供能和減輕壓力而言，每天兩次服用一粒藥片，持續個月。實施例9製備即食的調味軟飲成分量[g]迷迭香提取物0.9蔗糖，精細粉末922.7抗壞血酸，精細粉末2.0tableseeoriginaldocumentpage20將所有成分混合併篩過500pm的篩網。將得到的粉末置於適宜的容器中，並在管狀攪拌機中至少混合20分鐘。為了製備飲品，向獲得的125g混合的粉末中添加足量水，製備一升飲料。即飲型軟飲每份(250ml)含有約30mg迷迭香提取物。作為增強劑(strengthener)或對一般健康而言，每天應當引用2份(240ml)。實施例10製備強化的非烘焙的穀物棒tableseeoriginaldocumentpage20tableseeoriginaldocumentpage21將迷迭香提取物與脫脂乳粉預混合，並置於行星式碗狀攪拌機(planetarybowlmixer)中。添加玉米脆和脆麥酥，將整體柔和混合。然後添加乾燥和切開的蘋果。在第一烹調罐中，以上文給定的量混合糖、水和鹽(溶液1)。在第二烹調罐中，以上文給定的量混合葡萄糖漿、轉化糖漿和山梨醇糖漿(溶液2)。烘焙油脂、棕櫚仁油脂、卵磷脂和乳化劑是油脂相。將溶液1加熱至110°C。將溶液2加熱至113°C，然後在冷水浴中冷卻。之後將溶液1和溶液2合併。在水浴中於75'C下熔化油脂相，然後添加至溶液1和2的合併混合物中。向液體的糖-油脂混合物中添加蘋果味香料和擰檬酸。將液體物料添加至乾燥成分中，並在行星式碗狀攪拌機中充分混合。將物料置於大理石板上，並滾至期望的厚度，然後冷卻至室溫，並切件。未烘焙的穀物棒每份(30g)含有約25mg迷迭香提取物。對於一般健康和供能而言，每天應食用l-2隻穀物棒。實施例11用於緩解壓力和使狗恢復生機(revitalising)的含迷迭香提取物的千燥狗飼料以足夠施用給受試者以迷迭香提取物重量為基礎每kg體重50mg每日劑量的量，用迷迭香提取物溶液對狗用商業基礎膳食(例如MeraDog"Brocken",MERA-TiernahrungGmbH，Marienstralk80-84,D-47625Kevelaer-Wetten，德國)加以噴霧。將食物組合物乾燥至含有按重量計約90%的乾物質。對於每天消耗約200g幹飼料的10kg體重的平均狗而言，狗食物含有約2500mg迷迭香提取物/kg食物。對更重的狗而言，相應地製備飼料混合物。實施例12含迷迭香提取物的溼潤貓食物將足夠施用給受試者以幹迷迭香提取物重量為基礎每kg體重100mg每日劑量的量的迷迭香提取物溶液與貓用商業基礎膳食(例如HappyCat"Adult",Tierfeimiahnmg，SiidlicheHauptstrafie38，D-86517Wehringen,德國)混合。對於消耗約400g溼潤食物5kg體重的平均貓而言，貓食物含有1250mg/kg的迷迭香提取物。將食物組合物乾燥至含有按重量計約90%的乾物質。實施例13含迷迭香提取物的狗調劑物以足夠施用給調劑者(treats)以幹迷迭香提取物重量為基礎每g調劑物(treats)5-50mg的量，用迷迭香提取物溶液對商業狗調劑物(例如由MeraTiemahrungGmbH,Marienstrasse80-84，47625Kevdaer-Wetten，德國提供的狗用MeraDog"Biscuit")進行噴霧。將食物組合物乾燥至含有按重量計約90%的乾物質。實施例14含迷迭香提取物的貓調劑物以足夠施用給調劑者以幹迷迭香提取物重量為基礎每g調劑物5-50mg的量，用迷迭香提取物溶液對商業貓調劑物(例如由Whiskas，MasterfoodsGmbH，EitzerStr.215，27283Verden/Aller,德國提供的貓用WhiskasDentabits)進行噴霧。將食物組合物乾燥至含有按重量計約90%的乾物質。2權利要求1.用作藥物的迷迭香葉丙酮提取物，所述藥物用於治療與降低的神經傳遞相關的病症。2.根據權利要求1的丙酮提取物，其通過包含以下步驟的工藝製造a)石開磨乾燥的7cwnfl"-"i^Oj^7c!'"flfe卩十；b)用丙酮提取步驟a)的葉，獲得丙酮提取物；C)任選地過濾所述丙酮提取物；d)通過(部分地，優選幾乎全部地)去除丙酮，濃縮所述丙酮提取物；e)任選地噴霧乾燥由此濃縮的丙酮提取物。3.根據權利要求1的丙酮提取物，其中所述丙酮提取物含有迷迭香酚(優選地在從0.05到3重量-%的範圍內)、鼠尾草酚(優選地在從0.5到7重量-%的範圍內)、鼠尾草酸(優選地在從20到65重量-%的範圍內)和鼠尾草酸12-甲基醚(優選地在從1到20重量-%的範圍內；所有的量以所述丙酮提取物的總重為基礎)，並優選地通過根據權利要求2的工藝製造。4.根據權利要求1到3中任一項的迷迭香提取物，其用作抗抑鬱藥、情緒/生活力改善劑、減壓劑、狀況改善劑、焦慮減輕劑、強迫行為減輕劑、弛緩劑、睡眠改善劑和/或失眠緩解劑。5.根據權利要求1到4中任一項的迷迭香提取物用於製造下述組合物的用途，所述組合物用於治療與降低的神經傳遞相關的病症。6.根據權利要求5的用途，其中所述組合物是抗抑鬱藥、情緒/生活力改善劑、減壓劑、狀況改善劑、焦慮減輕劑、強迫行為減輕劑、弛緩劑、睡眠改善劑和/或失眠緩解劑。7.膳食組合物，其含有權利要求1到4中任一項定義的迷迭香提取物。8.藥物組合物，其含有權利要求1到4中任一項定義的迷迭香提取物和常規藥物載體。9.在動物中治療與降低的神經傳遞相關的病症的方法，所述方法包括對需要其的動物施用有效劑量的權利要求1到4中任一項定義的迷迭香提取物，所述動物包括人。10.根據權利要求9的方法，其中所述動物是人、寵物動物或農業動物。全文摘要本發明涉及用作治療與降低的神經傳遞相關的病症的藥物的迷迭香提取物，以及含有這類迷迭香提取物的膳食和藥物組合物及其用途。文檔編號A61K36/53GK101541337SQ200780043585公開日2009年9月23日申請日期2007年11月22日優先權日2006年11月24日發明者克勞斯·吉爾泊特,安·福勒,安東尼·德賽茲尤,戈德·斯庫勒,瑞吉娜·格拉切克申請人:帝斯曼智慧財產權資產管理有限公司