單純皰疹病毒聯合亞單位疫苗及其使用方法

2023-05-17 21:24:06 2

專利名稱：單純皰疹病毒聯合亞單位疫苗及其使用方法
技術領域：
本發明提供疫苗，所述疫苗包含兩種或多種重組單純皰疹病毒(HSV)蛋白 質，所述蛋白質選自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；並提供對對象進行抗HSV 免疫接種以阻止其免疫逃避的方法和用於治療、阻止、抑制、壓制HSV感染 或其症狀或表現和/或降低其發生率的方法，所述方法包括施用本發明的疫苗。
背景技術：
l型單純皰疹病毒(HSV-l)和2型單純皰疹病毒(HSV-2)是常見的人類病原 體，引起多種臨床疾病，包括口腔面部感染、生殖器皰疹、眼部感染、皰疹 性腦炎和新生兒皰疹。HSV-1與非生殖器感染更加相關，且最常見的是在兒 童期通過非性接觸獲得的。不過，在過去十年間，其已經成為生殖器皰疹的 重要病因。HSV-2是絕大多數生殖器皰疹的病因。估計其在美國每年造成 500,000人感染。儘管有多種治療HSV疾病的抗病毒劑，但生殖器HSV-2感 染仍舊是一個長期的問題，在美國，14-49歲個體中的血清陽性率為大約17%, 而在南美洲和非洲的部分地區，血清陽性率更高。
現在迫切需要預防HSV-1和HSV-2原發性(初次)感染和預防HSV-1和 HSV-2復發的方法。
單純皰疹病毒還是人免疫缺陷病毒(HIV)感染的主要風險因素。HSV-2血 清陽性個體感染HIV的風險增加2倍。初次HSV-2感染之後的得病率最高， 此時HSV-2的再活化最為頻繁。以降低HSV感染為目的的治療和疫苗策略可 預防HIV的傳播、獲得以及疾病進展。

發明內容
本發明提供疫苗，其包含兩種或多種重組單純皰疹病毒(HSV)蛋白質，所 述蛋白質選自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；和用於對對象進行抗HSV免疫 接種和治療、阻止、抑制、壓制HSV感染或其症狀或表現或降低其發生率的 方法，所述方法包括施用本發明的疫苗。在一個實施方式中，所述疫苗額外地包含佐劑。
在一個實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組HSVgD蛋白或 其片段；(b)重組HSV gC蛋白或其片段；(c)重組HSV gE蛋白或其片段；
和(d)佐劑。
在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組HSVgD蛋白或 其片段；(b)重組HSVgC蛋白或其片段；和(c)佐劑。
在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組HSVgD蛋白或 其片段；(b)重組HSVgE蛋白或其片段；禾H (c)佐劑。
在一個實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組HSVgC蛋白或 其片段；(b)重組HSVgE蛋白或其片段；和(c)佐劑。
在一個實施方式中，每一所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白。在另一 實施方式中，每一所述重組HSV蛋白是重組HSV-2蛋白。在另一實施方式中， 所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白和重組HSV-2蛋白的混合物。
在另一實施方式中，本發明提供一種在對象中誘導抗HSV免疫應答的方 法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，本發明提供一種治療、壓制、抑制對象的HSV感染 或降低HSV感染的發生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫 苗的步驟。在一個實施方式中，所述HSV感染是HSV-1感染。在一個實施方 式中，所述HSV感染是HSV-2感染。在一個實施方式中，所述HSV感染是 原發性HSV感染。在一個實施方式中，所述HSV感染是原發性HSV感染之 後的潮紅(flare)、復發(recurrence)或HSV唇皰疹(HSV labialis)。在一個實施方 式中，所述HSV感染是HSV腦炎。在一個實施方式中，所述HSV感染是 HSV新生兒感染。在一個實施方式中，所述對象感染了HIV。


圖1:玫瑰花結形成試驗(Rosetting assay)檢測阻斷C3b結合HSV-1感染 的細胞上的gC的抗體。(A)上方測定C3b結合gC-l的玫瑰花結形成試驗的 示意圖。HSV-1感染的Vero細胞在細胞表面表達gC，並結合C3b包被的綿 羊紅細胞，從而在感染的Vero細胞周圍形成玫瑰花結。下方阻斷玫瑰花結 形成的抗體的示意圖。存在抗gC抗體時，C3b包被的紅細胞不能結合gC， 因此無玫瑰花結形成。(B)使用來自假免疫或gC-l免疫的小鼠的血清阻斷C3b包被的紅細胞形成玫瑰花結(+/-標準誤)。
圖2:對以側腹部感染致死量的WT病毒進行攻擊的gC-l免疫的小鼠進
行疾病評分。小鼠被假免疫或以0.1、 1或10嗎的gC-l進行免疫。攻擊後3 至7天對免疫的小鼠的接種部位和帶狀皰疹樣部位(zosteriform sites)的疾病嚴 重程度進行評分。
圖3:對免疫後再以側腹部感染致死量的WT病毒進行攻擊的小鼠進行疾 病評分。小鼠被假免疫或以gD-l單獨免疫或以gD-l和gC-l免疫。攻擊後3 至14天對小鼠的接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病嚴重程度進行評分。
圖4:免疫後再以致死量的WT病毒進行攻擊的小鼠的存活率。小鼠被假 免疫或以gD-l單獨免疫或以gD-l和gC-l免疫。監測攻擊後3-15天的存活 率。
圖5:自DRG回收病毒。小鼠被假免疫或以gD-l單獨免疫或以gD-l和 gC-l免疫。然後以致死量的HSV-1對各組進行攻擊。收集後根神經節(DRG) 並測定感染性病毒。
圖6:抗gC-l IgG不中和HSV-l。通過3次肌肉注射(IM) 5昭的gC-l 與CpG (50 pg/小鼠)和鋁鹽(25 蛋白)的混合物免疫小鼠。第三次免疫後2 周獲取血清，在蛋白G柱上自小鼠血清純化IgG並測試中和抗體活性。作為 對照，使用抗gDl單克隆抗體DLll、抗gC-l單克隆抗體lC8 (其結合gC-l 上的與C3b相互作用並阻斷C3b與HSV-1感染的細胞形成玫瑰花結的結構 域)、和非免疫鼠IgG進行中和。將大約80PFU的HSV-1NS株與獲取自免疫 的小鼠的抗gC-l IgG或與DLll、 1C8或非免疫鼠IgG溫育1小時，37°C。 通過在Vera細胞上進行噬斑分析而確定病毒效價。
圖7:側腹部感染5xl05 HSV-1之前24小時，對補體完好的小鼠(C57B1/6) 或C3敲除小鼠(C3K0)用抗gC-l IgG (200 pg/小鼠)、1C8 (200嗎/小鼠)、或非 免疫鼠IgG (200 pg/小鼠)進行被動免疫。評價小鼠接種和帶狀皰疹樣部位的疾 病，評價進行ll天。
圖8: (A)免疫印跡分析HSV-2野生型和gC2-nul1感染的細胞的提取物 中的gC2表達。以兔抗gC2抗體R81或作為上樣對照的兔抗VP5對膜進行探 測。(B至E)用正常人血清(NHS)中和HSV-1(NS)和HSV-2(G、 333、和2.12) 野生型和gC-null株。病毒與PBS (對照)或作為補體來源的指定濃度的NHS 溫育1小時，37°C。結果表示為PFU/ml (對照的％)並如下計算(加NHS的PFU/加PBS的PFU) X 100。對於毒株G，結果代表4次獨立實驗的平均效價 ±標準差，對於毒株333、 2.12和NS，結果代表3次實驗的平均效價士標準 差。比較野生型和gC-null病毒的曲線下面積(AUC):毒株G為P〈 0.0001， 毒株333為P〈0.002，毒株2.12為P<0.001， NS毒株為P〈0.05。
圖9: (A)NHS、耗竭Clq的NHS(Clq耗竭)、和以Clq重建的耗竭Clq 的血清(Clq耗竭+0^)的總溶血補體活性。EA(包被IgM的綿羊紅細胞)與 血清溫育並確定溶解的EA的百分數。(B)通過經典補體途徑中和gC l-null 和gC2-null病毒。以Clq耗竭的或Clq重建的20n/。 NHS進行中和實驗。所 示結果代表三次獨立實驗的平均效價±標準差。比較熱滅活的NHS與NHS 或Clq-恢復血清之間的NS-gClnull和G-gC2nu11， P<0.02。與此不同，比較 熱滅活的NHS與耗竭Clq的血清之間的NS-gClnull和G-gC2nulI， P < 0.23 和0.86，沒有顯著性。
圖10:在無針對HSV的特異性抗體的情況下，用來自4個供者的NHS 中和HSV-1和HSV-2 gC-null病毒。在與PBS、熱滅活的NHS (無活性NHS)、 或20% NHS溫育的病毒上進行中和實驗。4份血清樣品標記為1到4。所示 結果代表三次獨立實驗的平均效價±標準差。對於全部4份血清，比較PBS 與NHS之間的NS-gClnull均P < 0.001 ，而對於G-gC2nu11病毒，P範圍在0.006 至<0.001。與此不同，PBS與熱滅活的NHS相比沒有顯著區別。
圖11:對HSV-1和HSV-2 gC-null病毒的中和依賴於C3活化。在使用 PBS、20% NHS、或以無活性Compstatin (NHS +線性)或活性Compstatin (NHS + 4W9A)處理的NHS處理的病毒上進行中和實驗。對於NS-gClnull和 G-gC2nu11，結果均代表三次獨立實驗的平均效價±標準差。對於這兩種病毒， PBS與NHS之間(P〈0.01)和PBS與以無活性Compstatin處理的NHS之間(P <0.05)均有顯著區別。不過，在PBS與以活性Compstatin處理的NHS之間沒 有檢測到顯著的區別。
圖12: (A) NHS、耗竭C5的NHS (C5耗竭)和C5-恢復血清(C5耗竭+ C5) 的總溶血補體活性。(B) gCl-null和gC2-nul1病毒的中和需要C5。病毒與PBS、 20% NHS、 20%耗竭C5的NHS (C5耗竭)、或C5-恢復血清(C5耗竭+ C5) 溫育。結果表示為4次獨立實驗(NS-gClnull)和2次獨立實驗(G-gC2null)的平 均效價±標準差。對於這兩種病毒，NHS和C5-恢復的NHS與PBS相比， 均P < 0.005。 PBS與耗竭C5的NHS之間沒有檢測到顯著區別。(C) NHS、耗竭C6的NHS (C6耗竭)、和C6-恢復血清(C6耗竭+ C6)的總溶血補體活性。 (D)對gCl-null或gC2-null病毒的中和不依賴於C6。在以PBS、 20%NHS、 耗竭C6的NHS (C6耗竭)、和C6-恢復血清(C6耗竭+ C6)處理的病毒上進 行中和測定。結果代表三次獨立實驗(NS-gCl null)和7次實驗(G-gC2null)的平 均效價±標準差。對於這兩種病毒，PBS與NHS、耗竭C6的血清和C6重 建的血清相比，均P〈0.01。
圖13: (A) NHS和耗竭IgM的NHS (IgM耗竭)的總溶血補體活性。使用 抗體包被的綿羊紅細胞進行溶血試驗來證明耗竭IgM的血清中的完全的經典 補體途徑。(B)中和HSV-1和HSV-2 gC-null病毒需要天然IgM抗體。gC-null 病毒與20n/。NHS、熱滅活的NHS(無活性NHS)、 20%耗竭IgM的NHS (IgM 耗竭)、和IgM-恢復血清(IgM耗竭+IgM)溫育。所示結果代表4次獨立實驗 的平均效價±標準差。P<0.05，比較IgM耗竭的血清與IgM重建的血清的 NS-gClnull禾Q G-gC2null。與此不同，比較PBS與耗竭IgM的血清之間的 NS-gClnull和G-gC2null沒有顯著區別，P分別為0.83和0.31 。(C至F)ELISA 檢測天然IgM抗體與gC2-rmll病毒的結合。將來自4個供者的熱滅活的20% NHS系列稀釋並加至微孔板的以G-gC2mill包被的空或對照孔中。實驗進行 了兩次，結果相似。給出了實驗l的結果。
圖14:鼠側腹部模型的NS-gE264疾病。以5 x 105 PFU的NS-gE264或 拯救(rescue)NS-gE264感染小鼠，並在感染後3-7天對帶狀皰疹樣疾病進行評 分。(A)無被動轉移IgG: NS-gE264引起與拯救病毒相當的疾病。(B)被動 轉移人抗HSVIgG: NS-gE264疾病評分顯著低於拯救株(P<.001)。 (C)被動 轉移人非免疫IgG: NS-gE264與拯救株之間沒有顯著區別。N-每組5隻小鼠， 例外是，對無IgG的NS-gE264， N=10。
圖15:感染後3和4天DRG的病毒效價。Balb/C在側腹部接種105 PFU 的NS (WT)或5 x 105 PFU的NS-gCSs aaC3。分別測定來自各小鼠的DRG的 效價。結果代表每組3隻小鼠的平均值±SE。線代表檢測下限(2PFU)。
圖16: (A)在補體完好的小鼠中，2.12-gCnull的毒力低於2.12。 HSV-2 毒株2.12和2.12-gCnull以5 x 105 PFU刮擦接種於補體完好的C57B1/6小鼠 的側腹部(n-lO)，感染後3-7天對疾病進行評分。2.12-gCnull在接種部位(左 側)和帶狀皰疹樣部位(右側)引起明顯更少的疾病(P < .001)。 (B)在C3KO小 鼠中，2.12-gCnull的毒力與2.12 —樣。在C3KO小鼠中進行了相同的實驗(n=4)。在2.12-gCnull和2.12中沒有檢測到差異。誤差線代表SD。
圖17:在小鼠血清中測定到的針對誘導免疫原的抗體。結果代表以bac-gE 片段免疫的5隻小鼠或3隻假免疫小鼠的平均值±標準誤。
圖18:結合gE並阻斷生物素標記的非免疫人IgG結合於FcYR的鼠抗體 和兔抗體。(A)感染的細胞與來自免疫的小鼠(n = 5/組)或假免疫對照(n = 3) 的血清溫育。通過流式細胞術評價血清(1:10稀釋)與感染細胞上的gE的結合。 (B)將血清(未稀釋)加至感染的細胞以阻斷10昭生物素標記的非免疫人IgG 的結合。短棒表示各組的中位值。
圖19:對gD/gC免疫接種的抗gD抗體應答。單獨用gD (前三個條形)或 一起用gC與gD(置於同一注射器中)(後兩個條形)免疫小鼠3次。結果顯示， 同時施用gC和gD減弱了對50ng gD的抗體應答。
圖20: (A)如圖19所示免疫小鼠，且對接受50nggD和10嗎gC的小鼠 用50 ng gD進行加強。對gD的抗體應答增強(最後一個條形)。(B)抗血清抑 制C3b包被的紅細胞形成玫瑰花結的能力。
圖21: (A)對gC與佐劑CpG和鋁鹽的混合物進行免疫的ELISA抗體應 答。(B)抗血清抑制C3b包被的紅細胞形成玫瑰花結的能力。
圖22: gC-2免疫的小鼠在側腹部暴露於HSV-2後的存活率。Balb/C小 鼠以0.5、 1、 2、或5嗎的gC-2與CpG(50iag/小鼠)禾口鋁鹽(25^ig/嗎蛋白)的 混合物腓腸肌注射免疫或以CpG和鋁鹽但無gC-2假免疫，注射3次，間隔為 兩周。第三次免疫後14天，用4xl05 PFU的HSV-2毒株2.12在剔毛並化學 脫毛的側腹部刮擦接種對小鼠進行攻擊。記錄0-14天的存活率。
圖23: gC-2免疫的小鼠側腹部暴露於HSV-2之後在接種部位和帶狀皰疹 樣部位的疾病嚴重程度。如圖22所示進行實驗。以4xl05PFU的HSV-2毒株 2.12刮擦接種攻擊之後，在3-14天對動物接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病 嚴重程度進行評分(N = 5隻小鼠/組)。
圖24: gC-2免疫的小鼠陰道暴露於HSV-2之後的存活率。Balb/C小鼠 以腓腸肌注射CpG (50嗎/小鼠)和鋁鹽(25昭/嗎蛋白)進行假免疫或注射1、2、 或5 ^g的gC-2與CpG和鋁鹽的混合物進行免疫，間隔為兩周。除了一組以 5嗎劑量免疫2次[標記為5嗎(2x)]而另一組5隻小鼠免疫3次[標記為5嗎(3x)] 之外，各組5隻小鼠均免疫3次。第三次免疫後9天或5嗎(2x)免疫之後23 天，給小鼠腹腔內注射(IP) Depo Provem (2 mg/小鼠)以同步化發情周期。5天後，通過陰道內施用2x105 PFU的HSV-2毒株2.12對小鼠進行攻擊。觀察 動物從0-14天的死亡率。
圖25: gC-2免疫的小鼠陰道暴露於HSV-2之後的平均疾病評分。如圖 24所示進行實驗。2xlSpFU的HSV-2毒株2.12陰道內攻擊之後，對動物在 3-14天的疾病嚴重程度進行評分。
圖26: gC-2免疫的小鼠陰道暴露於HSV-2之後的陰道HSV-2病毒效價。 如圖24所示進行實驗。攻擊後l-ll天每日獲取陰道拭子，並確定病毒效價。
圖27: gD-2免疫的小鼠側腹部暴露於HSV-2之後的存活率。Balb/C小 鼠被假免疫或以10、 25、 50、或100 ng的gD-2與CpG (50 pg/小鼠)和鋁鹽(25 pg/嗎蛋白)的混合物腓腸肌IM免疫3次。通過側腹部接種4xl05 PFU/10ml 的HSV-2毒株2.12攻擊小鼠。
圖28: gD-2免疫的小鼠側腹部暴露於HSV-2之後的平均疾病評分。如圖 27所示進行實驗。側腹部接種4x105 PFU/10ml的HSV-2毒株2.12之後，在 3-14天對動物接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病嚴重程度進行評分。
圖29: gD-2免疫的小鼠陰道暴露於HSV-2之後的存活率。Balb/C小鼠 以50、 100、或250 ng (3x)的gD-2 IM免疫3次(3x)或以250 ng的gD-2 IM免 疫2次(2x)。 gD-2與CpG (50嗎/小鼠)和鋁鹽(25嗎 g蛋白)混合，然後如圖 24就gC-2所描述的那樣接種。如圖24就gC-2免疫所描述的那樣用Depo Provera⑧處理小鼠並以2xl05 PFU的HSV-2毒株2.12進行攻擊，並評價存活 率和疾病嚴重程度。
圖30: gD-2免疫的小鼠陰道暴露於HSV-2之後的平均疾病評分。如圖 29所示進行實驗。以2xlSpFU的HSV-2毒株2.12進行陰道內攻擊之後，在 3-14天對動物的疾病嚴重程度評分。
圖31: gD-2免疫的小鼠陰道暴露於HSV-2之後的陰道HSV-2病毒效價。 如圖29所示進行實驗。攻擊後l-ll天每日獲取陰道拭子，各組3隻小鼠。
圖32; (A)維持111￥/1 ￥-1+/2-共感染的對象的補體水平。測定CD4T-細胞計數 500/pl的HIV陽性對象的血清總溶血補 體活性(CHs)以及來自未感染HIV的對照的血清總溶血補體活性(CH5。)。所示 結果代表平均值+/-標準誤(SE)。 (B)僅抗體或抗體與補體中和HSV-1 WT和 gC/gE突變體病毒。WT或gC/gE突變體病毒與PBS、以EDTA處理以滅活補 體的1%血清(標記為Ab)、或含有活性補體的1%血清(標記為Ab&C)溫育1小時，37°C。
圖33: gC/gE突變體病毒在病毒體表面表達的HSV-1糖蛋白的濃度類似 於WT病毒或較其略高。通過免疫印跡和光密度分析法評價純化的gC/gE突 變體和WT病毒的VP5、 gB、 gC、 gD、 gE、 gH/gL、和gl表達，以比較相對 的糖蛋白濃度。
圖34: HSV-1FcyR在抗體中和中的作用。(A)用於解釋gC/gE突變體病 毒更易被抗體單獨中和的可能的模型。在WT病毒模型左側，gE結合IgG的 Fc結構域，防止F(ab')2與抗原(在此顯示的是gD)結合。在WT病毒模型的右 側，顯示了抗體雙極橋連(bipolar bridging),其中Fab結構域結合gD，而同一 IgG分子的Fc結構域結合gE。如果抗體的結合如所示的那樣出現於WT病毒 模型的左側而非右側，則HSV-1 FqR (由gE/gl組成)可防止某些F(ab')2結構 域與它們的靶抗原相互作用。在gC/gE突變體病毒的模型中，AgE不能結合 IgG Fc結構域，使得F(ab')2結構域結合抗原(顯示為gD)並中和病毒。(B)無 功能病毒FqR無法解釋為何gC/gE突變體病毒更易被抗體中和。病毒與來自 HIV陰性供者的集合人IgG溫育並確定中和的量。
圖35: gC和gE免疫逃避結構域遮蔽關鍵的中和表位。(A)WT和gC/gE 突變體病毒與針對gB, 、 gC、 gD、 gH/gL、或gl。所示結果代表以每一單獨 的抗體進行2-3次測定的中和(Log^) +/-SE。 (B) WT和gC/gE突變體病毒與針 對每一單獨的糖蛋白的兔血清溫育。所示結果代表對每一抗體進行2-3測定的 中和+/-SE。
圖36:抗糖蛋白免疫球蛋白結合HSV-1 WT和gC/gE突變體病毒。(A)比 較抗gD與gC/gE突變體和WT病毒的結合。(B)比較抗gB與gC/gE突變體 和WT病毒的結合。(C)比較抗gH/gL與gC/gE突變體和WT病毒的結合。 圖A-C代表三次獨立實驗的平均值。誤差線代表標準差。(D)雞抗gD免疫球 蛋白的結合。圖D進行一次。
圖37:表位遮掩模型。左側，gC阻斷gD上的表位，防止中和IgG抗體 結合於WT病毒。右側，突變體病毒上的gC不能阻斷gD的表位，使得中和 抗體能夠結合。gE的表位遮蔽在圖中沒有顯示；我們的發現支持類似的gE 模型。
發明詳述本發明提供疫苗，其包含兩種或多種重組單純皰疹病毒(HSV)蛋白質，所 述蛋白質選自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；和用於對對象進行抗HSV免疫 接種和治療、阻止、抑制、壓制HSV感染或其症狀或表現或降低其發生率的 方法，所述方法包括施用本發明的疫苗。在一個實施方式中，所述疫苗額外 地包含佐劑。
在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含重組單純皰疹病毒(HSV) gD 蛋白和選自HSV gC蛋白和HSV gE蛋白中的至少一種的重組蛋白。在一個實 施方式中，所述疫苗額外地包含佐劑。
在一個實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組單純皰疹病毒-1 (HSV-l)gD蛋白或其片段；(b)重組HSV-lgC蛋白或其片段；禾口 (c)佐劑。 在另一實施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV-lgC抗體，所述抗 體阻斷相應於所述重組HSV-1 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一 實施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結構域。在另一實施方式中， 以gC和gD、或其片段聯合免疫限制了 HSV-1在後續攻擊過程中逃避宿主免 疫應答的能力。在另一實施方式中，以gC或其片段免疫限制了 HSV-1在後 續攻擊過程中逃避宿主抗gD免疫應答的能力。在另一實施方式中，所提及的 宿主免疫應答包括由所述疫苗誘導的抗gD抗體。
在另一實施方式中，"HSV蛋白"指的是HSV-l或HSV-2蛋白。在另一實 施方式中，"HSV蛋白"指的是HSV-1蛋白。在另一實施方式中，"HSV蛋白" 指的是HSV-2蛋白。在另一實施方式中，該術語指的是HSV-1 gD蛋白。在 另一實施方式中，該術語指的是HSV-1 gD蛋白的片段。在另一實施方式中， 該術語指的是HSV-1 gC蛋白。在另一實施方式中，該術語指的是HSV-1 gC 蛋白的片段。在另一實施方式中，該術語指的是HSV-lgE蛋白。在另一實施 方式中，該術語指的是HSV-lgE蛋白的片段。在另一實施方式中，該術語指 的是HSV-2gD蛋白。在另一實施方式中，該術語指的是HSV-2gD蛋白的片 段。在另一實施方式中，該術語指的是HSV-2gC蛋白。在另一實施方式中， 該術語指的是HSV-2 gC蛋白的片段。在另一實施方式中，該術語指的是 HSV-2gE蛋白。在另一實施方式中，該術語指的是HSV-2 gE蛋白的片段。 在一個實施方式中，在此所提及的片段是免疫原性片段。在一個實施方式中， "免疫原性片段"指的是寡肽、多肽或蛋白質的一部分，其具有免疫原性且當施 用於對象後弓I發保護性免疫應答。在一個實施方式中，"免疫原性"或"具有免疫原性的"在此指的是當蛋白 質、肽、核酸、抗原或生物體被施用於動物時所述蛋白質、肽、核酸、抗原 或生物體在所述動物內引發免疫應答的固有能力。因此，在一個實施方式中， "增強免疫原性"指的是提高當蛋白質、肽、核酸、抗原或生物體被施用於動物 時所述蛋白質、肽、核酸、抗原或生物體在所述動物內引發免疫應答的固有 能力。在一個實施方式中，可通過如下方面衡量蛋白質、肽、核酸、抗原或 生物體引發免疫應答的能力的提高更大量的針對蛋白質、肽、核酸、抗原 或生物體的抗體、更具多樣性的針對抗原或生物體的抗體、更大量的特異於 蛋白質、肽、核酸、抗原或生物體的T細胞、針對蛋白質、肽、核酸、抗原 或生物體的更強的細胞毒T細胞應答或輔助T細胞應答，等等。
在一個實施方式中，在此所使用的"功能性"一詞在本發明中的含義是指蛋 白質、肽、核酸、片段或其變體展現出生物學活性或功能的固有能力。在一 個實施方式中，所述生物學功能是其與相互作用配偶體例如膜相關受體結合 的結合特性，而在另一實施方式中，是其三聚化特性。對於本發明的功能性 片段和功能性變體，這些生物學功能實際上可以改變，例如在其特異性或選 擇性方面發生改變，但保留基本的生物學功能。
從相關技術領域可獲知眾多用於測定蛋白質、多肽或分子的生物學活性 的方法，例如蛋白質測定法，其使用標記的底物，通過層析法進行底物分析
例如HPLC或薄層色譜、分光光度法等等。(見，例如，Maniatis et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.)。
在一個實施方式中，在此所使用的術語"片段"指的是與全長蛋白質或多肽 相比較短的或包含較少胺基酸的蛋白質或多肽。在另一實施方式中，片段指 的是與全長核酸相比較短的或包含較少核苷酸的核酸。在另一實施方式中， 所述片段是N-末端片段。在另一實施方式中，所述片段是C-末端片段。在一 個實施方式中，所述片段是所述蛋白質、肽或核酸的內部序列節段。在另一 實施方式中，所述片段是所述蛋白質、肽或核酸的免疫原性內部序列節段。 在另一實施方式中，所述片段是所述蛋白質、肽或核酸的功能性內部序列節 段。在另一實施方式中，所述片段是N-末端免疫原性片段。在一個實施方式 中，所述片段是C-末端免疫原性片段。在另一實施方式中，所述片段是N-末 端功能性片段。在另一實施方式中，所述片段是C-末端功能性片段。因此，在一個實施方式中，本發明所述的蛋白質(例如gC-l、 gC-2、 gE-l、 gE-2、 gD-l、 gD-2等等)的"免疫原性片段"指的是所述蛋白質的部分，在一個 實施方式中，其具有免疫原性，而在另一實施方式中，當施用於對象後其引 發保護性免疫應答。
在一個實施方式中，本發明的組合物和方法中所提及的任何HSV，在一 個實施方式中，指的是HSV-1，而在另一實施方式中，指的是HSV-2，而在 另一實施方式中，指的是HSV-l和HSV-2兩者，而在另一實施方式中，指的 是HSV-1或HSV-2。
在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組單純皰疹病毒-2 (HSV-2)gD蛋白或其片段；(b)重組HSV-2gC蛋白或其片段；和(c)佐齊ij。 在另一實施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV-2gC抗體，所述抗 體阻斷相應於重組HSV-2 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一實施 方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結構域。在另一實施方式中，以gC 和gD、或其片段聯合免疫限制了 HSV-2在後續攻擊過程中逃避宿主免疫應答 的能力。在另一實施方式中，以gC或其片段免疫，限制了HSV-2在後續攻 擊過程中逃避宿主抗gD免疫應答的能力。在另一實施方式中，所提及的宿主 免疫應答包括由所述疫苗誘導的抗gD抗體。
本發明所提供的gC-l亞單位疫苗可保護抵抗HSV-l感染(圖2)。此外， 在一個實施方式中，聯合gC-l/gD-l疫苗賦予了比含有僅gD-l (圖3)或僅gC-l 的疫苗更優越的保護並減輕或預防後根神經節感染(圖5)。此外，gC-2亞單 位疫苗可保護抵抗HSV-2感染(圖22-26)，且聯合gC-2/gD-2疫苗賦予比含 有僅gD-2或僅gC-2的疫苗更優越的保護。
在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-lgD蛋白 或其片段；(b)重組HSV-lgE蛋白或其片段；和(c)佐劑。在另一實施方式 中，給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV-lgE抗體，所述抗體阻斷相應於重 組HSV-1 gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一實施方式中，所述gE 片段包括gE的免疫逃避結構域。在另一實施方式中，以gE和gD、或其片段 聯合免疫限制了 HSV-1在後續攻擊過程中逃避宿主免疫應答的能力。在另一 實施方式中，以gE或其片段免疫，限制了 HSV-1在後續攻擊過程中逃避宿 主抗gD免疫應答的能力。在另一實施方式中，所提及的宿主免疫應答包括由 所述疫苗誘導的抗gD抗體。在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-2gD蛋白 或其片段；(b)重組HSV-2 gE蛋白或其片段；和(c)佐劑。在另一實施方式 中，給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV-2 gE抗體，所述抗體阻斷相應於重 組HSV-2 gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一實施方式中，所述gE 片段包括gE的免疫逃避結構域。在另一實施方式中，以gE和gD、或其片段 聯合免疫限制了 HSV-2在後續攻擊過程中逃避宿主免疫應答的能力。在另一 實施方式中，以gE或其片段免疫，限制了 HSV-2在後續攻擊過程中逃避宿 主抗gD免疫應答的能力。在另一實施方式中，所提及的宿主免疫應答包括由 所述疫苗誘導的抗gD抗體。
本發明所提供的gE-l亞單位疫苗可保護抵抗HSV-1感染。此外，聯合 gE-l/gD-l疫苗賦予了比含有僅gD-l或僅gE-l的疫苗更優越的保護。此外， gE-2亞單位疫苗可保護抵抗HSV-2感染，而聯合gE-2/gD-2疫苗賦予了比含 有僅gD-2或僅gE-2的疫苗更優越的保護。
在另一實施方式中，gC和gE —起的免疫增效效應強於任一單獨的效應。 在另一實施方式中，gC和gE的免疫增效效應表現出協同性。
在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組單純皰疹病毒-1 (HSV-l)gC蛋白或其片段；(b)重組HSV-lgE蛋白或其片段；和(c)佐劑。 在另一實施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV-lgC抗體，所述抗 體阻斷相應於所述重組HSV-1 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一 實施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結構域。在另一實施方式中， 以gC和gE、或其片段聯合免疫限制了 HSV-1在後續攻擊過程中逃避宿主免 疫應答的能力。在另一實施方式中，以gC或其片段免疫，限制了HSV-1在 後續攻擊過程中逃避宿主抗gE免疫應答的能力。在另一實施方式中，以gE 或其片段免疫，限制了 HSV-1在後續攻擊過程中逃避宿主抗gC免疫應答的 能力。在另一實施方式中，所提及的宿主免疫應答包括由所述疫苗誘導的抗 gC抗體。在另一實施方式中，所提及的宿主免疫應答包括由所述疫苗誘導的 抗gE抗體。
在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組單純皰疹病毒-2 (HSV-2)gC蛋白或其片段；(b)重組HSV-2gE蛋白或其片段；和(c)佐劑。 在另一實施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV-2gC抗體，所述抗 體阻斷相應於重組HSV-2 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一實施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結構域。在另一實施方式中，以gC
和gE、或其片段聯合免疫限制了 HSV-2在後續攻擊過程中逃避宿主免疫應答 的能力。在另一實施方式中，以gC或其片段免疫，限制了HSV-2在後續攻 擊過程中逃避宿主抗gE免疫應答的能力。在另一實施方式中，以gE或其片 段免疫，限制了 HSV-2在後續攻擊過程中逃避宿主抗gC免疫應答的能力。 在另一實施方式中，所提及的宿主免疫應答包括由所述疫苗誘導的抗gC抗 體。在另一實施方式中，所提及的宿主免疫應答包括由所述疫苗誘導的抗gE 抗體。
在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-lgD蛋白 或其片段；(b)重組HSV-lgC蛋白或其片段；(c)重組HSV-lgE蛋白或其片 段；和(d)佐劑。在另一實施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV-1 gC抗體，所述抗體阻斷相應於所述重組HSV-1 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃 避功能。在另一實施方式中，施用所述疫苗引發抗HSV-lgE抗體，所述抗體 阻斷相應於重組HSV-1 gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一實施方 式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結構域。在另一實施方式中，所述gE 片段包括gE的免疫逃避結構域。在另一實施方式中，以gC、 gD和gE、或其 片段聯合免疫限制了 HSV-1在後續攻擊過程中逃避宿主免疫應答的能力。在 另一實施方式中，以gC和gE、或其片段免疫，限制了 HSV-1在後續攻擊過 程中逃避宿主抗gD免疫應答的能力。在另一實施方式中，宿主免疫應答包含 由所述疫苗誘導的抗gD抗體。在另一實施方式中，gC和gE、或其片段一起 的免疫增效效應強於任一單獨的效應。在另一實施方式中，gC和gE的免疫 增效效應表現為協同性。
在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-2gD蛋白 或其片段；(b)重組HSV-2gC蛋白或其片段；(c)重組HSV-2 gE蛋白或其片 段；和(d)佐劑。在另一實施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV-2 gC抗體，所述抗體阻斷相應於重組HSV-2 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功 能。在另一實施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV-2gE抗體，所 述抗體阻斷相應於重組HSV-2 gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一 實施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結構域。在另一實施方式中， 所述gE片段包括gE的免疫逃避結構域。在另一實施方式中，以gC、 gD和 gE、或其片段聯合免疫限制了 HSV-2在後續攻擊過程中逃避宿主免疫應答的能力。在另一實施方式中，以gC和gE、或其片段免疫，限制了HSV-2在後 續攻擊過程中逃避宿主抗gD免疫應答的能力。在另一實施方式中，宿主免疫 應答包含由所述疫苗誘導的抗gD抗體。在另一實施方式中，gC和gE、或其 片段一起的免疫增效效應強於任一單獨的效應。在另一實施方式中，gC和gE、
或其片段的免疫增效效應展現出協同性。
在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-lgD蛋白 或其片段；(b)重組HSV-lgC蛋白或其片段；或(c)重組HSV-lgE蛋白或其 片段。在另一實施方式中，本發明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-2gD蛋 白或其片段；(b)重組HSV-2gC蛋白或其片段；或(c)重組HSV-2gE蛋白或 其片段。在一個實施方式中，所述疫苗還包含佐劑。
在另一實施方式中，本發明的疫苗包括重組HSV-lgD蛋白。在另一實施 方式中，所述疫苗包含HSV-lgD蛋白的片段。在另一實施方式中，所述疫苗 包含HSV-2gD蛋白。在另一實施方式中，所述疫苗包含HSV-2gD蛋白的片 段。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gD蛋白片段是免疫 原性片段。在另一實施方式中，gD免疫保護性抗原不需要是整個蛋白。在另 一實施方式中，保護性免疫應答通常包括抗體應答。在另一實施方式中，gD 的突變體、序列保守性變體、和功能保守性變體可用於本發明的方法和組合 物，條件是所有此類變體保留了所需的免疫保護效應。
在另一實施方式中，免疫原性片段可包含來自任何HSV毒株的免疫保護 性gD抗原。在另一實施方式中，免疫原性片段可包含HSV的序列變體，如 被感染個體中的那些變體。
在一個實施方式中，免疫原性多肽也具有抗原性。"抗原性"指的是，在另 一實施方式中，能夠與免疫系統的抗原識別分子，如免疫球蛋白(抗體)或T細 胞抗原受體，特異性相互作用的肽。在另一實施方式中，抗原性肽含有表位， 其長度為至少大約8個胺基酸(AA)。在另一實施方式中，該術語所指的肽具 有至少大約9個AA。在另一實施方式中，該術語所指的肽具有至少大約10 個AA。在另一實施方式中，該術語所指的肽具有至少大約ll個AA。在另一 實施方式中，該術語所指的肽具有至少大約12個AA。在另一實施方式中， 該術語所指的肽具有至少大約15個AA。在另一實施方式中，該術語所指的 肽具有至少大約20個AA。在另一實施方式中，該術語所指的肽具有至少大約25個AA。在另一實施方式中，該術語所指的肽具有至少大約30個AA。 在另一實施方式中，該術語所指的肽具有至少大約40個AA。在另一實施方 式中，該術語所指的肽具有至少大約50個AA。在另一實施方式中，該術語 所指的肽具有至少大約70個AA。在另一實施方式中，該術語所指的肽具有 至少大約100個AA。在另一實施方式中，該術語所指的肽具有至少大約150 個AA。在另一實施方式中，該術語所指的肽具有至少大約200個AA。在另 一實施方式中，該術語所指的肽具有至少大約250個AA。在另一實施方式中， 該術語所指的肽具有至少大約300個AA。在某些實施方式中，所述肽的上限 為20、 25、 30、 40、 50、 70、 100、 150、 200、 250或300個AA。多肽的抗 原性部分在此也稱為表位，在一個實施方式中，其可以是對抗體或T細胞受 體識別具有免疫顯性的部分，或其可以是用於產生針對該分子的抗體的部分， 可通過將所述抗原性部分綴合於載體多肽進行免疫而產生所述抗體。具有抗 原性的分子其本身不一定具有免疫原性，具有免疫原性是指能夠在無載體的 情況下引發免疫應答。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物的所述gD蛋白片段是gD-l 片段。在另一實施方式中，所述gD-l片段由gD-l胞外結構域(ectodomain)組 成。在另一實施方式中，所述gD-l片段包含gD-l胞外結構域。在另一實施 方式中，所述gD-l片段由gD-l胞外結構域的片段組成。在另一實施方式中， 所述gD-l片段包含gD-l胞外結構域的片段。在另一實施方式中，所述gD-l 片段是本領域已知的任何其他gD-l片段。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gD-l蛋白具有以下 序列
MGGAAARLGAVILFVVIVGLHGVRGKYALADASLKLADPNRFRRKDLPVLD QLTDPPGVRRVYHIQAGLPDPFQPPSLPITVYYAVLERACRSVLLNAPSEAPQIVRGA SEDVRKGPYNLTIAWFRMGGNCAIPITVMEYTECSYNKSLGACPIRTQPRWNYYDSF SAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRAKGSCKYALPLRIPP SACLSPQAYQQGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVAVYSLKIAGWHGPKAPYTSTLLPPE LSETPNATQPELAPEAPEDSALLEDPVGTVAPQIPP匿HIPSI(2DAATPYHPPATPNN MGLIAGAVGGSLLAALVICGIVYWMRRRTQKAPKRIRLPHIREDDQPSSHQPLFY
(SEQIDNo:l)。在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gD-l是 SEQ ID No:l的同源物。在另一實施方式中，所述gD-l蛋白是SEQ ID No:l的異構體。在另一實施方式中，所述gD-l蛋白是SEQIDNo:l的變體。在另 一實施方式中，所述gD-l蛋白是SEQIDNo:l的片段。在另一實施方式中， 所述gD-l蛋白是SEQIDNo:l的異構體的片段。在另一實施方式中，所述gD-l 蛋白是SEQIDNo:l的變體的片段。
在另一實施方式中，編碼本發明的方法和組合物中所用的gD-l的核酸序 列在GenBank條目中給出，登錄號如下NC—001806、X14112、E03111、E03023、 E02509、 E00402、 E00401、 E00395、 AF487902、 AF487901、 AF293614、 L09242、 J02217、 L09244、 L09245、和L09243。在另一實施方式中，所述gD-l蛋白 由具有上述GenBank條目之一所示序列的核苷酸分子編碼。在另一實施方式 中，所述gD-1蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的同源物。 在另一實施方式中，所述gD-l蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的 蛋白質的異構體。在另一實施方式中，所述gD-l蛋白是上述GenBank條目之 一所示序列編碼的蛋白質的變體。在另一實施方式中，所述gD-l蛋白是上述 GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的片段。在另一實施方式中，所述 gD-l蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的異構體的片段。 在另一實施方式中，所述gD-l蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的 蛋白質的變體的片段。
在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第26-306位胺基酸(AA)組成。 在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第36-296位AA組成。在另一實施 方式中，所述片段由大約第46-286位AA組成。在另一實施方式中，所述片 段由大約第56-276位AA組成。在另一實施方式中，所述片段由大約第66-266 位AA組成。在另一實施方式中，所述片段由大約第76-256位AA組成。在 另一實施方式中，所述片段由大約第86-246位AA組成。在另一實施方式中， 所述片段由大約第96-236位AA組成。在另一實施方式中，所述片段由大約 第106-226位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第116-216 位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第126-206位AA組 成。在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第136-196位AA組成。在另 一實施方式中，所述gD-l片段由大約第26-286位AA組成。在另一實施方式 中，所述gD-l片段由大約第26-266位AA組成。在另一實施方式中，所述 gD-l片段由大約第26-246位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-l片段 由大約第26-206位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第26-166位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第26-126位 AA組成。在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第26-106位AA組成。 在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第46-306位AA組成。在另一實施 方式中，所述gD-l片段由大約第66-306位AA組成。在另一實施方式中，所 述gD-l片段由大約第86-306位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-l片 段由大約第106-306位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約 第126-306位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第146-306 位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第166-306位AA組 成。在另一實施方式中，所述gD-l片段由大約第186-306位AA組成。在另 一實施方式中，所述gD-l片段由大約第206-306位AA組成。在替代性實施 方式中，所述gD-l片段包含或基本上由任何所述胺基酸殘基組成。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中使用HSV-1 gD AA序列。 在另一實施方式中，使用HSV-lgD蛋白或肽。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物的所述gD蛋白片段是gD-2 片段。在另一實施方式中，所述gD-2片段由gD-2胞外結構域組成。在另一 實施方式中，所述gD-2片段包含gD-2胞外結構域。在另一實施方式中，所 述gD-2片段由gD-2胞外結構域的片段組成。在另一實施方式中，所述gD-2 片段包含gD-2胞外結構域的片段。在另一實施方式中，所述gD-2片段本領 域已知的任何其他gD-2片段。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gD-2具有以下序列
MGRLTSGVGTAALLVVAVGLRVVCAKYALADPSLKMADPNRFRGKNLPVL DQLTDPPGVKRVYHIQPSLEDPFQPPSIPITVYYAVLERACRSVLLHAPSEAPQIVRGA SDEARKHTYNLTIAWYRMGDNCAIPITVMEYTECPYNKSLGVCPIRTQPRWSYYDSF SAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRARASCKYALPLRIPP AACLTSKAY(5QGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVALYSLKIAGWHGPKPPYTSTLLPPEL SDTTNAT(3PELVPEDPEDSALLEDPAGTVSSQIPPNWHIPSIQDVAPHHAPAAPSNPG LIIGALAGSTLAVLVIGGIAFWVRRRAQMAPKRLRLPHIRDDDAPPSHGPLFY
(SEQIDNo:2)。在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gD-2是 SEQIDNo:2的同源物。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQIDNo:2的異構 體。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:2的變體。在另一實施方式 中，所述蛋白是SEQIDNo:2的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQIDNo:2的異構體的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQIDNo:2的變體 的片段。
在另一實施方式中，編碼本發明的方法和組合物中所用的gD-2的核酸序 列在GenBank中給出，登錄號如下NC—001798、 E00205、 Z86099、 AY779754、 AY779753、 AY779752、 AY779751、 AY779750、 AY517492、 AY155225、和 K01408。在另一實施方式中，所述gD-2蛋白由具有上述GenBank條目之一 所示序列的核苷酸分子編碼。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank 條目之一所示序列編碼的蛋白質的同源物。在另一實施方式中，所述蛋白是 上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的異構體。在另一實施方式中， 所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的變體。在另一實 施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的片段。 在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白 質的異構體的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一 所示序列編碼的蛋白質的變體的片段。
在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第26-306位AA組成。在另一 實施方式中，所述gD-2片段由大約第36-296位AA組成。在另一實施方式中， 所述片段由大約第46-286位AA組成。在另一實施方式中，所述片段由大約 第56-276位AA組成。在另一實施方式中，所述片段由大約第66-266位AA 組成。在另一實施方式中，所述片段由大約第76-256位AA組成。在另一實 施方式中，所述片段由大約第86-246位AA組成。在另一實施方式中，所述 片段由大約第96-236位AA組成。在另一實施方式中，所述片段由大約第 106-226位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第116-216 位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第126-206位AA組 成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第136-196位AA組成。在另 一實施方式中，所述gD-2片段由大約第26-286位AA組成。在另一實施方式 中，所述gD-2片段由大約第26-266位AA組成。在另一實施方式中，所述 gD-2片段由大約第26-246位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片段 由大約第26-206位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第 26-166位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第26-126位 AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第26-106位AA組成。 在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第46-306位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第66-306位AA組成。在另一實施方式中，所 述gD-2片段由大約第86-306位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片 段由大約第106-306位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約 第126-306位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第146-306 位AA組成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第166-306位AA組 成。在另一實施方式中，所述gD-2片段由大約第186-306位AA組成。在另 一實施方式中，所述gD-2片段由大約第206-306位AA組成。在替代性實施 方式中，所述gD-2片段包含或基本上由任何所述胺基酸殘基組成。
在另一實施方式中，所述重組gD蛋白或其片段引發的抗體抑制gD與細 胞受體的結合。在另一實施方式中，所述受體是皰疹病毒進入介導物A (HveA/HVEM)。在另一實施方式中，所述受體是柄蛋白-1 (HveC)。在另一實 施方式中，所述受體是柄蛋白-2 (HveB)。在另一實施方式中，所述受體是修 飾型的硫酸乙醯肝素。在另一實施方式中，所述受體是硫酸乙醯肝素蛋白聚 糖。在另一實施方式中，所述受體是本領域已知的任何其他gD受體。
在另一實施方式中，所述重組gD蛋白或其片段包括AA 26-57。在另一 實施方式中，因納入這些殘基而引發的抗體抑制與HVEM的結合。在另一實 施方式中，所述gD蛋白或片段包括Y63。在另一實施方式中，所述gD蛋白 或片段包括R159。在另一實施方式中，所述gD蛋白或片段包括D240。在另 一實施方式中，所述gD蛋白或片段包括P246。在另一實施方式中，所述重 組gD蛋白或片段包括選自Y63、 R159、 D240、和P246的殘基。在另一實施 方式中，因納入這些殘基之一而引發的抗體抑制與柄蛋白-1的結合。
上述對gDAA殘基的命名法包括信號序列的殘基。因此，成熟蛋白質的 第一個殘基稱為第"26"位。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中使用HSV-2gDAA序列。 在另一實施方式中，使用HSV-2gD蛋白或肽。
每一重組gD-l和gD-2蛋白或其片段代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，本發明的疫苗包括重組HSV-lgC蛋白。在另一實施 方式中，所述疫苗包含HSV-lgC蛋白的片段。在另一實施方式中，所述疫苗 包含HSV-2gD蛋白。在另一實施方式中，所述疫苗包含HSV-2gD蛋白的片段。在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gC-l具有以下序列
MAPGRVGLAVVLWGLLWLGAGVAGGSETASTGPT訂AGAVTNASEAPTSGS PGSAASPEVTPTSTPNPNNVTQNKTTPTEPASPPTTPKPTSTPKSPPTSTPDPKPKNNT TPAKSGRPTKPPGPVWCDRRDPLARYGSRVQIRCRFRNSTRMEFRLQIWRYSMGPSP PIAPAPDLEEVLTNUAPPGGLLVYDSAPNLTDPHVLWAEGAGPGADPPLYSVTGPLP TQRLIIGEVTPATQGMYYLAWGRMDSPHEYGTWVRVRMFRPPSLTLQPHAVMEGQ PFKATCTAAAYYPRNPVEFDWFEDDRQVFNPGQIDTQTHEHPDGFTTVSTVTSEAV GGGVPPRTFTCQMTWHRDSVTFSRRNATGLALVLPRPTITMEFGVRHVVCTAGCVP EGVTFAWFLGDDPSPAAKSAVTA(5ESCDHPGLATVRSTLPISYDYSEYICRLTGYPA GIPVLEHHGSHQPPPRDPTERQV正A正WVGIGIGVLAAGVLVVTAIVYVVRTS(2SRQ RHRR
(SEQIDNo:3)。在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gC-l是 SEQIDNo:3的同源物。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQIDNo:3的異構 體。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:3的變體。在另一實施方式 中，所述蛋白是SEQIDNo:3的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQID No:3的異構體的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:3的變體 的片段。
在另一實施方式中，編碼本發明的方法和組合物中所用的gC-l的核酸序 列在GenBank中給出，登錄號如下NCJ301806、X14112、AJ421509、AJ421508、 AJ421507、 AJ421506、 AJ421505、 AJ421504、 AJ421503、 AJ421502、 AJ421501、 AJ421500、 AJ421499、 AJ421498、 AJ421497、 AJ421496、 AJ421495、 AJ421494、 AJ421493 、 AJ421492 、 AJ421491 、 AJ4214卯、AJ421489、 AJ421488 、和AJ421487。 在另一實施方式中，所述gC-l蛋白由具有上述GenBank條目之一所示序列的 核苷酸分子編碼。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所 示序列編碼的蛋白質的同源物。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank 條目之一所示序列編碼的蛋白質的異構體。在另一實施方式中，所述蛋白是 上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的變體。在另一實施方式中， 所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的片段。在另一實 施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的異構 體的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列 編碼的蛋白質的變體的片段。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gC-2蛋白具有以下序列
MALGRVGLAVGLWGLLWVGWVVLANASPGRTrrVGPRGNASNAAPSASP RNASAPRTTPTPPQPRKATKSKASTAKPAPPPKTGPPKTSSEPVRCNRHDPLARYGSR VQIRCRFPNSTRTEFRLQIWRYATATDAEIGTAPSLEEVMVNVSAPPGGQLVYDSAP NRTDPHVIWAEGAGPGASPRLYSVVGPLGR(3RLI正ELTLET(2GMYYWVWGRTDRP SAYGTWVRVRVFRPPSLTIHPHAVLEGQPFKATCTAATYYPGNRAEFVWFEDGRRV FDPAQIHTQTQENPDGFSTVSTVTSAAVGGQGPPRTFTCQLTWHRDSVSFSRRNASG TASVLPRPTITMEFTGDHAVCTAGCVPEGVTFAWFLGDDSSPAEKVAVASQTSCGRP GTATERSTLPVSYEQTEYICRLAGYPDGIPVLEHHGSHQPPPRDPTERQVIRAVEGAGI GVAVLVAVVLAGTAWYLTHASSVRYRRLR
(SEQ ID NO:4)。在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gC-2 蛋白是SEQIDNo:4的同源物。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQIDNo:4 的異構體。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:4的變體。在另一實 施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:4的片段。在另一實施方式中，所述蛋白 是SEQ ID No:4的異構體的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ IDNo:4 的變體的片段。
在另一實施方式中，編碼本發明的方法和組合物中所用的gC-2蛋白的核 酸序列在GenBank中給出，登錄號如下NC_001798、 Z86099、 M 10053、 AJ297389、 AF021341、 U12179、 U12177、 U12176和U12178。在另一實施方 式中，所述gC-2蛋白由具有上述GenBank條目之一所示序列的核苷酸分子編 碼。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的 蛋白質的同源物。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所 示序列編碼的蛋白質的異構體。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank 條目之一所示序列編碼的蛋白質的變體。在另一實施方式中，所述蛋白是上 述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的片段。在另一實施方式中，所 述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的異構體的片段。在 另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質 的變體的片段。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gC蛋白片段是免疫 原性片段。在另一實施方式中，gC免疫保護性抗原不需要是整個蛋白。在另 一實施方式中，保護性免疫應答通常包括抗體應答。在另一實施方式中，gC 的突變體、序列保守性變體、和功能保守性變體可用於本發明的方法和組合物，條件是所有此類變體保留了所需的免疫保護效應。
在另一實施方式中，免疫原性片段可包含來自任何HSV毒株的免疫保護
性gC抗原。在另一實施方式中，免疫原性片段可包含HSV的序列變體，如 被感染個體中的那些變體。
在另一實施方式中，所述gC蛋白片段包含gC免疫逃避結構域。在另一 實施方式中，所述gC蛋白片段包含gC免疫逃避結構域的一部分。在另一實 施方式中，所述gC蛋白片段是gC免疫逃避結構域。在另一實施方式中，所 述gC蛋白片段是gC免疫逃避結構域的一部分。在另一實施方式中，使用 HSV-lgCAA序列。在另一實施方式中，使用HSV-lgC蛋白或肽。
在另一實施方式中，所述gC蛋白片段是C3b結合結構域。在另一實施方 式中，所述gC蛋白片段是C3b結合結構域的一部分。在另一實施方式中，"C3b 結合結構域"指的是介導gC與宿主C3b分子結合的結構域。在另一實施方式 中，該術語指的是介導gC與宿主C3b分子相互作用的結構域。
在另一實施方式中，(例如在gC-l的情況中)，所述gC結構域大致由AA 26-457組成。在另一實施方式中，所述結構域大致由AA 46-457組成。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA 66-457。在另一實施方式中，所述範圍大 致為AA 86-457。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 106-457。在另一 實施方式中，所述範圍大致為AA 126-457。在另一實施方式中，所述範圍大 致為AA 146-457。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 166-457。在另一 實施方式中，所述範圍大致為AA 186-457。在另一實施方式中，所述範圍大 致為AA206-457。在另一實施方式中，所述結構域大致由AA226-457組成。 在另一實施方式中，所述結構域大致由AA 246-457組成。在另一實施方式中， 所述範圍大致為AA 26-447。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 26-437。 在另一實施方式中，所述範圍大致為AA26-427。在另一實施方式中，所述範 圍大致為AA 26-417。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 26-407。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA26-387。在另一實施方式中，所述範圍大 致為AA26-367。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA26-347。在另一實 施方式中，所述範圍大致為AA 26-327。在另一實施方式中，所述範圍大致為 AA 26-307。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 26-287。在另一實施方 式中，所述範圍大致為AA 26-267。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 26-247。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 36-447。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 46-437。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 56-427。 在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 66-417。在另一實施方式中，所述範 圍大致為AA 76-407。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 86-397。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA 96-387。在另一實施方式中，所述範圍大 致為AA 106-377。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 116-367。在另一 實施方式中，所述範圍大致為AA 126-357。在另一實施方式中，所述範圍大 致為AA 136-347。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 147-337。在另一 實施方式中，所述結構域大致由AA 124-366組成。在另一實施方式中，所述 結構域大致由AA 124-137組成。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 223-246。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 276-292。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 339-366。在替代性實施方式中，所述gC結構域包 含或基本上由任何所述胺基酸殘基組成。
在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 124-246。在另一實施方式中， 所述範圍大致為AA 124-292。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 223-292。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 223-366。在另一實施方式 中，所述gC結構域選自AA 124-137、 223-246、 276-292和339-366。在另一 實施方式中，所述結構域選自AA 124-137和223-246。在另一實施方式中， 所述結構域選自AA 124-137和276-292。在另一實施方式中，所述結構域選 自AA 124-137和339-366。在另一實施方式中，所述結構域選自AA 223-246 和276-292。在另一實施方式中，所述結構域選自AA 223-246和339-366。在 另一實施方式中，所述結構域選自AA 276-292和339-366。在另一實施方式 中，所述結構域選自AA 124-137、 223-246和276-292。在另一實施方式中， 所述結構域選自AA 124-137、 223-246和339-366。在另一實施方式中，所述 gC結構域選自AA 124-137、 276-292和339-366。在另一實施方式中，所述 gC結構域選自AA 223-246、 276-292和339-366。在另一實施方式中，所述範 圍大致為AA 164-366。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 204-366。在 另一實施方式中，所述範圍大致為AA 244-366。在另一實施方式中，所述範 圍大致為AA 124-326。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 124-286。在 另一實施方式中，所述範圍大致為AA 124-246。在另一實施方式中，所述範 圍大致為AA 204-326。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 244-326。在 另一實施方式中，所述範圍大致為AA 204-286。在替代性實施方式中，所述範圍包含或基本上由任何所述胺基酸殘基組成。
在另一實施方式中，所述gC-l蛋白以抗原性標籤修飾。在另一實施方式 中，上述gC-l片段之一以抗原性標籤修飾。在另一實施方式中，所述標籤是
組氨酸("His")標籤。在另一實施方式中，所述His標籤由5個組氨酸殘基組成。 在另一實施方式中，所述His標籤由6個組氨酸殘基組成。在另一實施方式中， 所述His標籤由另一數量的組氨酸殘基組成。在另一實施方式中，本發明的方 法和組合物中所用的gC-l片段是以His標籤修飾的AA 26-457。
在另一實施方式中，(例如對於gC-2)，所述gC結構域大致由AA 27-426 組成。在另一實施方式中，所述結構域大致由AA 47-426組成。在另一實施 方式中，所述範圍大致為AA 67-426。在另一實施方式中，所述範圍大致為 AA 87-426。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 107-426。在另一實施方 式中，所述範圍大致為AA 127-426。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 147-426。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 167-426。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 187-426。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 207-426。在另一實施方式中，所述結構域大致由AA227-426組成。在另一實 施方式中，所述結構域大致由AA 247-426組成。在另一實施方式中，所述範 圍大致為AA27-406。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA27-386。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA 27-366。在另一實施方式中，所述範圍大 致為AA27-346。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 27-326。在另一實 施方式中，所述範圍大致為AA 27-306。在另一實施方式中，所述範圍大致為 AA 27-286。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 27-266。在另一實施方 式中，所述範圍大致為AA 27-246。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 37-416。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 47-406。在另一實施方式中， 所述範圍大致為AA 57-396。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 67-386。 在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 77-376。在另一實施方式中，所述範 圍大致為AA 87-366。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 97-356。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA 107-346。在另一實施方式中，所述範圍 大致為AA 117-326。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 127-316。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA 137-306。在另一實施方式中，所述範圍 大致為AA 147-296。在替代性實施方式中，所述gC結構域包含或基本上由 任何所述胺基酸殘基組成。在另一實施方式中，所述結構域大致由AA 102-107組成。在另一實施方 式中，所述結構域大致由AA222-279組成。在另一實施方式中，所述結構域 大致由AA 307-379組成。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 94-355。 在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 102-279。在另一實施方式中，所述 範圍大致為AA 102-379。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA222-379。 在另一實施方式中，所述gC結構域選自AA 102-107、 222-279和307-379。 在另一實施方式中，所述結構域選自AA 102-107和222-279。在另一實施方 式中，所述結構域選自AA 102-107和307-379。在另一實施方式中，所述結 構域選自AA 222-279和307-379。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 122-379。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 142-379。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 162-379。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 182-379。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA202-379。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 222-379。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 242-379。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 102-359。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 102-339。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 102-319。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 102-299。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 102-279。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 102-259。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 102-239。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 112-369。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 122-359。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 132-349。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 142-339。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 152-329。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 162-319。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 172-309。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 182-299。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 192-289。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 202-279。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 232-279。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 242-279。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 252-279。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 262-279。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA222-269。在另一實施方式 中，所述範圍大致為AA 222-259。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 222-249。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA222-239。在另一實施方式 中，所述結構域大致由AA 227-274組成。在另一實施方式中，所述結構域大致由AA 232-269組成。在另一實施方式中，所述結構域大致由AA 237-264 組成。在另一實施方式中，所述結構域大致由AA 242-259組成。在另一實施 方式中，所述結構域大致由AA 307-379組成。在另一實施方式中，所述範圍 大致為AA317-379。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA327-379。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA 337-379。在另一實施方式中，所述範圍 大致為AA347-379。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 357-379。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA 307-369。在另一實施方式中，所述範圍 大致為AA307-359。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA307-349。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA 307-339。在另一實施方式中，所述範圍 大致為AA307-329。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA312-374。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA 317-369。在另一實施方式中，所述範圍 大致為AA322-364。在另一實施方式中，所述範圍大致為AA 327-359。在另 一實施方式中，所述範圍大致為AA 332-354。在另一實施方式中，所述範圍 大致為AA 337-349。在替代性實施方式中，所述gC結構域包含或基本上由 任何所述胺基酸殘基組成。
在另一實施方式中，所述gC-2蛋白以抗原性標籤修飾。在另一實施方式 中，上述gC-2片段之一以抗原性標籤修飾。在另一實施方式中，所述標籤是 組氨酸("His")標籤。在另一實施方式中，所述His標籤由5個組氨酸殘基組成。 在另一實施方式中，所述His標籤由6個組氨酸殘基組成。在另一實施方式中， 所述His標籤由另一數量的組氨酸殘基組成。在另一實施方式中，本發明的方 法和組合物中所用的gC-2片段是以His標籤修飾的AA 27-426。
在另一實施方式中，所述gC結構域是本領域已知的介導gC結合宿主C3b 分子或介導與宿主C3b分子的相互作用的任何其他gC結構域。
在另一實施方式中，所述gC蛋白片段是備解素幹擾結構域。在另一實施 方式中，所述gC蛋白片段是備解素幹擾結構域的一部分。在另一實施方式中， "備解素-幹擾結構域"指的是阻斷或抑制宿主C3b分子與宿主備解素分子結合 的結構域。在另一實施方式中，該術語指的是阻斷或抑制宿主C3b分子與宿 主備解素分子相互作用的結構域。在另一實施方式中，(例如對於gC-l)，所 述gC結構域大致由AA 33-133組成。在另一實施方式中，所述gC結構域大 致由AA 33-73組成。在另一實施方式中，所述gC結構域大致由AA 33-83組 成。在另一實施方式中，所述gC結構域大致由AA 33-93組成。在另一實施方式中，所述gC結構域大致由AA 33-103組成。在另一實施方式中，所述 gC結構域大致由AA 33-113組成。在另一實施方式中，所述gC結構域大致 由AA 33-123組成。在另一實施方式中，所述gC結構域大致由AA43-133組 成。在另一實施方式中，所述gC結構域大致由AA 53-133組成。在另一實施 方式中，所述gC結構域大致由AA 63-133組成。在另一實施方式中，所述 gC結構域大致由AA 73-133組成。在另一實施方式中，所述gC結構域大致 由AA 83-133組成。在另一實施方式中，所述gC結構域大致由AA 93-133組 成。在另一實施方式中，所述gC結構域大致由AA 103-133組成。在另一實 施方式中，所述gC結構域大致由AA 43-93組成。在替代性實施方式中，所 述gC結構域包含或基本上由任何所述胺基酸殘基組成。
在另一實施方式中，所述gC結構域是本領域已知的幹擾宿主C3b分子與 宿主備解素分子結合的任何其他gC結構域。
在另一實施方式中，所述gC蛋白片段是C5幹擾結構域。在另一實施方 式中，所述gC蛋白片段是C5幹擾結構域的一部分。在另一實施方式中，"C5 幹擾結構域"指的是幹擾宿主C3b分子結合宿主C5分子的結構域。在另一實 施方式中，該術語指的是幹擾宿主C3b分子與宿主C5分子相互作用的結構域。 在另一實施方式中，(例如對於gC-l)，所述gC結構域大致由AA 33-133組成。 在另一實施方式中，所述gC結構域是本領域已知的幹擾或抑制宿主C3b分子 結合或與宿主C5分子相互作用的任何其他gC結構域。
每一重組gC-l或gC-2蛋白或其片段代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，本發明的疫苗包含重組HSV-lgE蛋白。在另一實施 方式中，所述疫苗包含HSV-lgE蛋白的片段。在另一實施方式中，所述疫苗 包含HSV-2gE蛋白。在另一實施方式中，所述疫苗包含HSV-2gE蛋白的片段。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gE-l蛋白具有以下 序列MDRGAVVGFLLGVCVVSCLAGTPKTSWRRVSVGEDVSLLPAPGPTGRGPTQ KLLWAVEPLDGCGPLHPSWVSLMPPKQVPETVVDAACMRAPVPLAMAYAPPAPSA
PAPVPTPPPTPADYDEDDNDEGEGEDESLAGTPASGTPRLPPSPAPPRSWPSAPEVSH
VRGVTVRMETPEAILFSPGEAFSTNVSIHAIAHDDQTYTMDVVWLRFDVPTSCAEM
RIYESCLYHP(2LPECLSPADAPCAASTWTSRLAVRSYAGCSRTNPPPRCSAEAHMEP
(SEQIDNo:5)。在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gE-l蛋 白是SEQ ID No:5的同源物。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:5 的異構體。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:5的變體。在另一實 施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:5的片段。在另一實施方式中，所述蛋白 是SEQ ID No:5的異構體的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:5 的變體的片段。
在另一實施方式中，編碼本發明的方法和組合物中所用的gE-l蛋白的核 酸序列在GenBank中給出，登錄號如下NC—001806、 X14112、 DQ889502、 X02138和AJ626469-AJ626498之一。在另一實施方式中，所述gE-l蛋白由 具有上述GenBank條目之一所示序列的核苷酸分子編碼。在另一實施方式中， 所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的同源物。在另一 實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的異 構體。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼 的蛋白質的變體。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所 示序列編碼的蛋白質的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank 條目之一所示序列編碼的蛋白質的異構體的片段。在另一實施方式中，所述 蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的變體的片段。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gE-2蛋白具有以下 序列MARGAGLVFFVGVWVVSCLAAAPRTSWKRVTSGEDVVLLPAPAERTRAHK LLWAAEPLDACGPLRPSWVALWPPRRVLETVVDAACMRAPEPLAIAYSPPFPAGDE
PVPTPTPDDYDEEDDAGVTNARRSAFPPQPPPRRPPVAPPTHPRVIPEVSHVRGVTVH METLEAILFAPGETFGTNVSIHAIAHDDGPYAMDVVWMRFDVPSSCADMRIYEACL
WRAVKSRASATGPTYIRVADSELYADWSSDSEGERDGSLWQDPPERPDSPSTNGSG FEILSPTAPSVYPHSEGRKSRRPLTTFGSGSPGRRHSQASYPSVLW
(SEQIDNO:6)。在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gE-2蛋 白是SEQ ID No:6的同源物。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:6 的異構體。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:6的變體。在另一實 施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:6的片段。在另一實施方式中，所述蛋白 是SEQ ID No:6的異構體的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:6 的變體的片段。
在另一實施方式中，編碼本發明的方法和組合物中所用的gE-2蛋白的核 酸序列在GenBank中給出，登錄號如下NC—001798、Z86099、D00026、X04798 和M 14886。在另一實施方式中，所述gE-2蛋白由具有上述GenBank條目之 一所示序列的核苷酸分子編碼。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank 條目之一所示序列編碼的蛋白質的同源物。在另一實施方式中，所述蛋白是 上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的異構體。在另一實施方式中， 所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的變體。在另一實 施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質的片段。 在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白 質的異構體的片段。在另一實施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一 所示序列編碼的蛋白質的變體的片段。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gE片段包含gE蛋 白的IgGFc結合結構域。在另一實施方式中，所述gE片段包含AA24-224。 在另一實施方式中，所述gE片段包含AA 24-224的一部分。在另一實施方式 中，所述部分足以引發阻斷gE蛋白的IgG Fc結合結構域造成的免疫逃避的 抗體。在另一實施方式中，所述gE片段包含gE IgG Fc結合結構域的一部分。 在另一實施方式中，(例如對於gE-l)，所述gE結構域由大約第24-409位AA 組成。在另一實施方式中，所述結構域由大約24-224組成。在替代性實施方 式中，所述gE結構域包含或基本上由任何上述胺基酸殘基範圍組成。
在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 34-399。在另一實施方式中，所 述範圍是大約AA 54-379。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 74-359。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 94-339。在另一實施方式中，所述範 圍是大約AA 114-319。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 134-299。在 另一實施方式中，所述範圍是大約AA 154-279。在另一實施方式中，所述範 圍是大約AA 54-409。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 84-409。在另 一實施方式中，所述範圍是大約AA 114-409。在另一實施方式中，所述範圍 是大約AA 144-409。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 174-409。在另 一實施方式中，所述範圍是大約AA 204-409。在另一實施方式中，所述範圍 是大約AA 234-409。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 24-389。在另 一實施方式中，所述範圍是大約AA 24-369。在另一實施方式中，所述範圍是 大約AA24-349。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA24-329。在另一實 施方式中，所述範圍是大約AA 24-309。在另一實施方式中，所述範圍是大約 AA 24-289。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 24-269。在另一實施方 式中，所述範圍是大約AA24-249。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 24-229。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 24-209。在另一實施方式中， 所述範圍是大約AA 24-189。在替代性實施方式中，所述gE結構域包含或基 本上由任何上述胺基酸殘基範圍組成。
在另一實施方式中，所述範圍是大約223-396。在另一實施方式中，所述 範圍是大約AA 230-390。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 235-380。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 245-380。在另一實施方式中，所述 範圍是大約AA 255-380。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 265-380。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 275-380。在另一實施方式中，所述 範圍是大約AA 285-380。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 295-380。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 305-380。在另一實施方式中，所述 範圍是大約AA 235-370。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 235-370。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 235-360。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 235-350。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 235-340。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 235-330。在另一實施方式中，所述 範圍是大約AA 235-320。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 235-310。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 235-300。在另一實施方式中，所述 範圍是大約AA 322-359。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 327-359。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 332-359。在另一實施方式中，所述 範圍是大約AA 337-359。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 322-354。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 322-349。在另一實施方式中，所述 範圍是大約AA 322-344。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 327-354。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 332-349。在另一實施方式中，所述 gE結構域包括AA380。在替代性實施方式中，所述gE結構域包含或基本上 由任何上述胺基酸殘基範圍組成。
在另一實施方式中，所述gE蛋白以抗原性標籤修飾。在另一實施方式中， 上述gE片段之一以抗原性標籤修飾。在另一實施方式中，所述標籤是組氨酸 ("His")標籤。在另一實施方式中，所述His標籤由5-6個組氨酸殘基組成。在 另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gE片段大致是AA 24-409， 其C末端為6His標籤。
在另一實施方式中，(例如對於gE-2)，所述gE結構域大致由AA218-391 組成。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA223-386。在另一實施方式中， 所述範圍是大約AA 228-280。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 230-375。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 228-373。在另一實施方式 中，所述範圍是大約AA 238-373。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 248-373。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 258-373。在另一實施方式 中，所述範圍是大約AA 268-373。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 278-373。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 288-373。在另一實施方式 中，所述範圍是大約AA 298-373。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 308-373。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 228-363。在另一實施方式 中，所述範圍是大約AA 228-353。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 228-343。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 228-333。在另一實施方式 中，所述範圍是大約AA 228-323。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 228-313。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 228-303。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 238-363。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 248-353。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 258-343。在另一實施方式 中，所述gE範圍是大約AA 315-352。在另一實施方式中，所述範圍是大約 AA 320-352。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 325-352。在另一實施 方式中，所述範圍是大約AA 330-352。在另一實施方式中，所述範圍是大約 AA 335-352。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 315-347。在另一實施 方式中，所述範圍是大約AA 315-342。在另一實施方式中，所述範圍是大約 AA 315-337。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 315-332。在另一實施 方式中，所述範圍是大約AA 320-347。在另一實施方式中，所述範圍是大約 AA 325-347。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 320-342。在另一實施 方式中，所述範圍是大約AA 325-342。在另一實施方式中，所述gE結構域包 括AA 373。在替代性實施方式中，所述gE結構域包含或基本上由任何上述 胺基酸殘基範圍組成。
在另一實施方式中，所述gE結構域是本領域已知的介導結合IgG Fc的 任何其他gE結構域。
在另一實施方式中，所述gE蛋白包含參與細胞間播散的gE結構域。在 另一實施方式中，所述gE結構域大致由AA 256-291組成。在另一實施方式 中，所述gE結構域大致由AA 348-380組成。在另一實施方式中，所述gE結 構域包括AA 380。在另一實施方式中，所述gE結構域是本領域己知的參與 細胞間播散的任何其他gE結構域。在另一實施方式中，已知所述gE結構域 促進細胞間播散。在另一實施方式中，已知所述gE結構域是細胞間播散所需 的。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的gE片段是免疫原性 片段。在另一實施方式中，"免疫原性片段"指的是gE的一部分，其具有免疫 原性且當施用於對象後引發保護性免疫應答。在另一實施方式中，gE免疫保 護性抗原不需要是整個蛋白。在另一實施方式中，保護性免疫應答通常包括 抗體應答。在另一實施方式中，gE的突變體、序列保守性變體、和功能保守 性變體可用於本發明的方法和組合物，條件是所有此類變體保留了所需的免 疫保護效應。
在另一實施方式中，免疫原性片段可包含來自任何HSV毒株的免疫保護 性gE抗原。在另一實施方式中，免疫原性片段可包含HSV的序列變體，如被感染個體中的那些變體。
在另一實施方式中，所述gE片段包含免疫逃避結構域。在另一實施方式 中，所述gE片段包含免疫逃避結構域的一部分。在另一實施方式中，所述gE 片段是免疫逃避結構域。在另一實施方式中，所述gE片段是免疫逃避結構域
的一部分。在另一實施方式中，使用HSV-lgEAA序列。在另一實施方式中， 使用HSV-lgE蛋白或肽。
在另一實施方式中，(例如對於gE-l)，所述gE蛋白片段由大約組成AA 21-419。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 31-419。在另一實施方式中， 所述範圍是大約AA 41-419。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 61-419。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 81-419。在另一實施方式中，所述範 圍是大約AA 101-419。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 121-419。在 另一實施方式中，所述範圍是大約AA 141-419。在另一實施方式中，所述範 圍是大約AA 161-419。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 181-419。在 另一實施方式中，所述範圍是大約AA 201-419。在另一實施方式中，所述範 圍是大約AA 221-419。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 241-419。在 另一實施方式中，所述範圍是大約AA 261-419。在另一實施方式中，所述範 圍是大約AA 21-399。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 21-379。在另 一實施方式中，所述範圍是大約AA 21-359。在另一實施方式中，所述範圍是 大約AA21-339。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA21-319。在另一實 施方式中，所述範圍是大約AA 21-299。在另一實施方式中，所述範圍是大約 AA 21-279。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 21-259。在另一實施方 式中，所述範圍是大約AA21-239。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 21-219。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 21-199。在另一實施方式中， 所述範圍是大約AA 21-179。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 21-159。 在另一實施方式中，所述範圍是大約AA21-139。在另一實施方式中，所述範 圍是大約AA 31-409。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 41-399。在另 一實施方式中，所述範圍是大約AA 51-389。在另一實施方式中，所述範圍是 大約AA 61-379。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 71-369。在另一實 施方式中，所述範圍是大約AA 81-359。在另一實施方式中，所述範圍是大約 AA 91-349。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 101-339。在另一實施方 式中，所述範圍是大約AA 111-329。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA121-319。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 131-309。在另一實施方式 中，所述範圍是大約AA 141-299。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 151-279。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 161-269。在另一實施方式 中，所述範圍是大約AA 171-259。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 181-249。在另一實施方式中，所述範圍是大約AA 191-239。在替代性實施方 式中，所述gE蛋白片段包含或基本上由任何所述胺基酸殘基組成。
在另一實施方式中，(例如對於gE-2)，所述gE蛋白片段由大約AA 21-416 組成。在另一實施方式中，所述範圍是前述段落中所提及的任何範圍。
每一重組gE-l或gE-2蛋白或其片段代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，"免疫逃避結構域"指的是結構域幹擾或降低抗HSV 抗體(例如抗gD抗體)的體內抗HSV效力。在另一實施方式中，所述結構域幹 擾或降低抗HSV免疫應答的體內抗HSV效力。在另一實施方式中，所述結 構域在後續感染過程中降低HSV蛋白(例如gD)的免疫原性。在另一實施方式 中，所述結構域在後續攻擊過程中降低HSV蛋白的免疫原性。在另一實施方 式中，所述結構域在後續攻擊過程中降低HSV的免疫原性。在另一實施方式 中，所述結構域在正在發生的HSV感染中降低HSV蛋白的免疫原性。在另 一實施方式中，所述結構域在正在發生的HSV感染中降低HSV的免疫原性。
本發明還提供HSV蛋白或多肽或其片段的類似物。類似物與天然存在的 蛋白或肽的不同之處在於保守性胺基酸序列取代或不影響序列的修飾或兩 者。
例如，可進行保守性胺基酸改變，所述改變雖然改變了蛋白或肽的初級 序列，但不改變其功能。保守性胺基酸取代典型地包括以下各組中的取代(a) 甘氨酸、丙氨酸；(b)纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸；(C)天冬氨酸、穀氨酸； (d)天冬醯胺、穀氨醯胺；(e)絲氨酸、蘇氨酸；(f)賴氨酸、精氨酸；(g)苯
丙氨酸、酪氨酸。
修飾(通常不改變初級序列)包括多肽的體內或體外的化學衍生化例如，乙 醯化或羧化。還包括糖基化修飾，例如，通過在多肽的合成和加工或進一步
的加工步驟中改變多肽的糖基化模式而形成的修飾；例如，通過將多肽暴露 於影響糖基化的酶，例如，哺乳動物糖基化酶或去糖基化酶。還包括具有磷 酸化胺基酸殘基的序列，例如，磷酸酪氨酸、磷酸絲氨酸、或磷酸蘇氨酸。還包括採用普通分子生物學技術修飾的多肽，以便提高其對蛋白降解的 抗性或優化其溶解性或使之更適合於作為治療劑。此類多肽的類似物包括那
些含有不同於天然存在的L-胺基酸的殘基的多肽，例如，D-胺基酸或非天然 存在的合成胺基酸。本發明的肽不限於本文所列的具體示例性方法的產物。
在一個實施方式中，本發明的疫苗包含佐劑，而在另一實施方式中，所 述疫苗包含佐劑。在另一實施方式中，"佐劑"指的是這樣的化合物，當其被施 用於個體或在體外測試時，其在施用抗原的所述個體或測試系統中增強對所 述抗原的免疫應答。在另一實施方式中，免疫佐劑增強針對如下抗原的免疫 應答，所述抗原當單獨施用時具有弱免疫原性，即所述抗原不誘導或誘導弱 抗體效價或細胞介導的免疫應答。在另一實施方式中，所述佐劑升高對抗原 的抗體效價。在另一實施方式中，所述佐劑降低在個體中有效產生免疫應答 的抗原的量。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物中所用的佐劑是含CpG的核 苷酸序列。在另一實施方式中，所述佐劑是含CpG的寡核苷酸。在另一實施 方式中，所述佐劑是含CpG的寡脫氧核苷酸(CpGODN)。在另一實施方式中， 所述佐劑是ODN 1826，在一個實施方式中，其獲自Coley Pharmaceutical Group o
在另一實施方式中，"含CpG的核苷酸"、"含CpG的寡核苷酸"、"CpG 寡核苷酸"和類似術語指的是長度為8-50個核苷酸的核苷酸分子，其含有非甲 基化的CpG部分。在另一實施方式中，其意欲包括所述術語在本領域己知的 任何其他定義。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物的含CpG的寡核苷酸是修飾 的寡核苷酸。在另一實施方式中，"修飾的寡核苷酸"指的是其中至少兩個其核 苷酸通過合成的核苷間連鍵(即，5'端的一個核苷酸和3'端的另一個核苷酸之 間的不同於磷酸二酯鍵的連鍵)共價相連的寡核苷酸。在另一實施方式中，將 通常不與核酸相關聯的化學基團共價附著於所述寡核苷酸。在另一實施方式 中，所述合成的核苷間連鍵是硫代磷酸酯鍵。在另一實施方式中，所述合成 的核苷間連鍵是膦酸垸基酯鍵。在另一實施方式中，所述合成的核苷間連鍵 是二硫代磷酸酯鍵。在另一實施方式中，所述合成的核苷間連鍵是磷酸酯鍵。 在另一實施方式中，所述合成的核苷間連鍵是垸基硫代磷酸酯鍵。在另一實 施方式中，所述合成的核苷間連鍵是氨基磷酸酯鍵。在另一實施方式中，所述合成的核苷間連鍵是氨基甲酸酯鍵。在另一實施方式中，所述合成的核苷 間連鍵是碳酸酯鍵。在另一實施方式中，所述合成的核苷間連鍵是磷酸三酯
鍵。在另一實施方式中，所述合成的核苷間連鍵是乙醯亞胺酯連鍵(acetamidate linkage)。在另一實施方式中，所述合成的核苷間連鍵是甲基羧酸酯鍵。在另 一實施方式中，所述合成的核苷間連鍵是肽鍵.
在另一實施方式中，術語"修飾的寡核苷酸"指的是具有共價修飾的鹼基和 /或糖的寡核苷酸。在另一實施方式中，修飾的寡核苷酸包括具有在3'位置共 價附著於除羥基以外的其他低分子量有機基團而在5'位置共價附著於除磷酸 基團以外的其他低分子量有機基團的主鏈糖的寡核苷酸。在另一實施方式中， 修飾的寡核苷酸包括2'-0-烷基化核糖基。在另一實施方式中，修飾的寡核苷 酸包括非核糖的糖，例如阿拉伯糖。在另一實施方式中，修飾的寡核苷酸包 括鼠TLR9多肽連同藥用可接受載體。
在另一實施方式中，所述含CpG的寡核苷酸是雙鏈的。在另一實施方式 中，所述含CpG的寡核苷酸是單鏈的。在另一實施方式中，"核酸"和"寡核苷 酸"指的是多個核苷酸，S卩，包含連接於磷酸基團和可替換的有機鹼基的糖(例 如核糖或脫氧核糖)的分子，所述有機鹼基是取代的嘧啶(例如胞嘧啶(C),胸腺 嘧啶(T)或尿嘧啶(U))或取代的嘌呤(例如腺嘌呤(A)或鳥嘌呤(G))或修飾的鹼 基。在另一實施方式中，所述術語指的是寡核糖核苷酸以及寡脫氧核糖核苷 酸。在另一實施方式中，所述術語包括多核苷(即，多核苷酸去掉磷酸)和其他 任何含有機鹼基的聚合物。在另一實施方式中，所述術語涵蓋本文所述的具 有共價修飾的鹼基和/或糖的核酸或寡核苷酸。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物的含CpG的寡核苷酸包含取 代的嘌呤和嘧啶。在另一實施方式中，所述寡核苷酸包含標準的嘌呤和嘧啶 例如胞嘧啶以及鹼基類似物，例如C-5丙炔取代的鹼基。WagnerR Wet al， Nat Biotechnol 14:840-844 (1996)。在另一實施方式中，嘌呤和噴啶包括但不限於 腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、5-甲基胞嘧啶、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、次黃嘌呤、和其他天然存在的和非天然存在的核鹼 基、取代的和非取代的芳香族部分。在另一實施方式中，含CpG的寡核苷酸 連接於鹼基或核苷酸的聚合物。在另一實施方式中，"連接"指的是通過任何物 理化學方式彼此結合的兩個實體。
在另一實施方式中，所述CpG核苷酸分子是7909，在一個實施方式中，其是5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT。在另一實施方式中，所述CpG 核苷酸分子是2216 ，在一個實施方式中，其是5' GGGGGACGATCGTCGGGGGG。在另一實施方式中，所述CpG核苷酸分子 是8916。在另一實施方式中，所述CpG核苷酸分子是1826。在另一實施方式 中，所述CpG核苷酸分子是2007。在另一實施方式中，所述CpG核苷酸分 子是10104。在另一實施方式中，所述CpG核苷酸分子是2395。在另一實施 方式中，所述CpG核苷酸分子是2336。在另一實施方式中，所述CpG核苷 酸分子是2137。在另一實施方式中，所述CpG核苷酸分子是2138。在另一實 施方式中，所述CpG核苷酸分子是2243。在一個實施方式中，上文提及的 CpG核苷酸分子獲自Coley Pharmaceutical Group。在另一實施方式中，所述 含CpG的核苷酸分子的序列是CTAGACGTTAGCGT (SEQ ID NO:7)。在另一 實施方式中，所述含CpG的核苷酸分子的序列是TCAACGTT (SEQ ID No:8)。 在另一實施方式中，所述序列是TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (SEQ ID No:9)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另一實施方式中，所述序列是TCG TCG TTT CGT CGT TTT GTC GTT (SEQ ID No:lO)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另 一實施方式中，所述序列是TCG TCG TTG TCG TTT TGT CGT T (SEQ ID No:ll)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另一實施方式中，所述序列是TCGTCG TTT TCG GCG CGC GCC G (SEQ ID No:12)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另一 實施方式中，所述序列是TGC TGC TTT TGT GCT TTT GTG CTT (SEQ ID No:13)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另一實施方式中，所述序列是TCCATG AGC TTC CTG AGC TT (SEQ ID No:14)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另一實 施方式中，所述序列是G*G*G GAC GAC GTC GTG G*G*G* G*G*G (SEQ ID No:15)(在本序列和下面的序列中，*指的是硫代磷酸酯鍵；其他為磷酸二酯 鍵)。在另一實施方式中，所述序列是G*G*G GGA GCA TGC TGG *G*G*G *G*G(SEQIDNo:16)。在另一實施方式中，所述含CpG的核苷酸分子的序列 是本領域已知的任何其他含CpG的序列。在另一實施方式中，所述CpG核苷 酸分子是本領域已知的任何其他含CpG的核苷酸分子。
在另一實施方式中，CpG寡核苷酸的劑量是10微克(微克)。在另一實施 方式中，所述劑量是15微克。在另一實施方式中，所述劑量是20微克。在 另一實施方式中，所述劑量是30微克。在另一實施方式中，所述劑量是50 微克。在另一實施方式中，所述劑量是70微克。在另一實施方式中，所述劑量是100微克。在另一實施方式中，所述劑量是150微克。在另一實施方式 中，所述劑量是200微克。在另一實施方式中，所述劑量是300微克。在另 一實施方式中，所述劑量是500微克。在另一實施方式中，所述劑量是700 微克。在另一實施方式中，所述劑量是lmg。在另一實施方式中，所述劑量 是1.2mg。在另一實施方式中，所述劑量是1.5 mg。在另一實施方式中，所 述劑量是2mg。在另一實施方式中，所述劑量是3mg。在另一實施方式中， 所述劑量是5mg。在另一實施方式中，所述劑量是大於5mg。
在另一實施方式中，所述CpG寡核苷酸的劑量是10-100微克。在另一實 施方式中，所述劑量是10-30微克。在另一實施方式中，所述劑量是20-100 微克。在另一實施方式中，所述劑量是30-100微克。在另一實施方式中，所 述劑量是50-100微克。在另一實施方式中，所述劑量是100-200微克。在另 一實施方式中，所述劑量是100-250微克。在另一實施方式中，所述劑量是 50-250微克。在另一實施方式中，所述劑量是150-300微克。在另一實施方 式中，所述劑量是200-400微克。在另一實施方式中，所述劑量是250-500微 克。在另一實施方式中，所述劑量是300-600微克。在另一實施方式中，所述 劑量是500-1000微克。在另一實施方式中，所述劑量是700-1500微克。在另 一實施方式中，所述劑量是0.25-2 mg。在另一實施方式中，所述劑量是0.5-2 mg。在另一實施方式中，所述劑量是l-2mg。在另一實施方式中，所述劑量 是1.5-2 mg。在另一實施方式中，所述劑量是2-3 mg。在另一實施方式中， 所述劑量是3-5mg。在另一實施方式中，所述劑量是5-8mg。
CpG寡核苷酸的使用方法是本領域熟知的並可參見，例如，Sur S et al. (Long term prevention of allergic lung inflammation in a mouse model of asthma by CpG oligodeoxynucleotides. J Immunol. 1999 May 15; 162(10):6284-93); Verthelyi D. (Adjuvant properties of CpG oligonucleotides in primates. Methods Mol Med. 2006; 127: 139-58);禾口 Yasuda K et al. (Role of immunostimulatory DNA and TLR9 in gene therapy. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 2006; 23(2):89-l 10)。每一方法代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，"核酸"或"核苷酸"指的是一串至少兩個鹼基-糖-磷酸 的組合。在另一實施方式中，所述術語包括DNA和RNA。在一個實施方式 中，"核苷酸"指的是核酸聚合物的單體單元。在一個實施方式中，RNA的形 式為tRNA (轉移RNA)、 snRNA (小核RNA)、 rRNA (核糖體RNA)、 mRNA (信使RNA)、反義RNA、小抑制性RNA (siRNA)、微RNA (miRNA)和核酶。siRNA 和miRNA的用途已經公開(Caudy AA et al.， Genes & Devel 16: 2491-96和其中 引用的文獻)。在其他實施方式中，DNA的形式可以是質粒DNA、病毒DNA、 線性DNA、或染色體DNA或這些組的衍生物。此外，這些形式的DNA和 RNA可以是單鏈、雙鏈、三鏈或四鏈的。在另一實施方式中，所述術語還包 括人工核酸，其含有其他類型的主鏈，但鹼基相同。在一個實施方式中，所 述人工核酸是PNA(肽核酸)。PNA含有肽主鏈和核苷酸鹼基，且在一個實施 方式中，其能夠結合DNA和RNA分子。在另一實施方式中，所述核苷酸被 環氧丙烷修飾。在另一實施方式中，所述核苷酸通過以硫代磷酸酯鍵置換一 或多個磷酸二酯鍵而修飾。在另一實施方式中，所述人工核酸含有任何其他 本領域已知的天然核酸磷酸主鏈的變體。硫代磷酸酯核酸和PNA的用途是本 領域已知的並可參見，例如，Neilsen PE, Curr Opin Struct Biol 9:353-57;和 Raz NK et al. Biochem Biophys Res Commun, 297: 1075-84。核酸的製備和用途 是本領域已知的並可參見，例如，Molecular Cloning, (2001)， Sambrook and Russell, eds禾卩Methods in Enzymology: Methods for molecular cloning in eukaryotic cells (2003) Purchio and G. C. Fareed。每一核酸衍生物代表了本發明 的一個單獨的實施方式。
每一類型的修飾的寡核苷酸代表了本發明的一個單獨的實施方式。 製備具有修飾主鏈的核酸的方法是本領域已知的並可參見例如 Hutcherson等的美國專利No. 5,723,335和5,663,153以及相關的PCT出版物 WO95/26204。每一方法代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，所述佐劑是鋁鹽佐劑。在另一實施方式中，所述鋁 鹽佐劑鋁鹽沉澱疫苗。在另一實施方式中，所述鋁鹽佐劑鋁鹽吸附疫苗。鋁 鹽佐劑是本領域已知的並可參見，例如，Harlow, E.和D. Lane (1988; Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory)禾口 Nicklas, W. (1992; Aluminum salts. Research in Immunology 143:489-493)。在另一實施方式中，所 述鋁鹽是水合氧化鋁。在另一實施方式中，所述鋁鹽是水化氧化鋁。在另一 實施方式中，所述鋁鹽是三水合氧化鋁(ATH)。在另一實施方式中，所述鋁 鹽是鋁的水合物。在另一實施方式中，所述鋁鹽是鋁的三水合物。在另一實 施方式中，所述鋁鹽是鋁膠。在另一實施方式中，所述鋁鹽是Superfos。在另 一實施方式中，所述鋁鹽是Amphogel。在另一實施方式中，所述鋁鹽是氫氧化鋁(m)。在另一實施方式中，所述鋁鹽是無定形氧化鋁。在另一實施方式中，
所述鋁鹽是三水合氧化鋁。在另一實施方式中，所述鋁鹽是氫氧化鋁。在另 一實施方式中，所述鋁鹽是任何其他本領域己知的鋁鹽。
在另一實施方式中，使用商品化的A1(0H)3 (例如鋁膠或Superfos，來自 Denmark/Accurate Chemical and Scientific Co., Westbury， NY)以50-200 g蛋白
/mg氫氧化鋁的比率來吸附蛋白質。在另一實施方式中，蛋白質的吸附取決於 所述蛋白質的pi (等電點pH)和基質的pH。具有較低pi的蛋白質對帶正電荷 的鋁離子的吸附強於具有較高pi的蛋白質。在另一實施方式中，鋁鹽建立起 緩慢釋放達2—3周以上的Ag庫、巨噬細胞非特異性活化和補體活化。
在另一實施方式中，所述鋁鹽的劑量是10微克。在另一實施方式中，所 述劑量是15微克。在另一實施方式中，所述劑量是20微克。在另一實施方 式中，所述劑量是25微克。在另一實施方式中，所述劑量是30微克。在另 一實施方式中，所述劑量是50微克。在另一實施方式中，所述劑量是70微 克。在另一實施方式中，所述劑量是100微克。在另一實施方式中，所述劑 量是150微克。在另一實施方式中，所述劑量是200微克。在另一實施方式 中，所述劑量是300微克。在另一實施方式中，所述劑量是500微克。在另 一實施方式中，所述劑量是700微克。在另一實施方式中，所述劑量是lmg。 在另一實施方式中，所述劑量是1.2mg。在另一實施方式中，所述劑量是1.5 mg。在另一實施方式中，所述劑量是2mg。在另一實施方式中，所述劑量是 3mg。在另一實施方式中，所述劑量是5mg。在另一實施方式中，所述劑量 是大於5mg。在一個實施方式中，上述鋁鹽的劑量以每微克重組蛋白計。
在另一實施方式中，所述鋁鹽的劑量是10-100微克。在另一實施方式中， 所述劑量是20-100微克。在另一實施方式中，所述劑量是30-100微克。在另 一實施方式中，所述劑量是50-100微克。在另一實施方式中，所述劑量是 100-200微克。在另一實施方式中，所述劑量是150-300微克。在另一實施方 式中，所述劑量是200-400微克。在另一實施方式中，所述劑量是300-600微 克。在另一實施方式中，所述劑量是500-1000微克。在另一實施方式中，所 述劑量是700-1500微克。在另一實施方式中，所述劑量是l-2mg。在另一實 施方式中，所述劑量是1.5-2 mg。在另一實施方式中，所述劑量是2-3 mg。 在另一實施方式中，所述劑量是3-5mg。在另一實施方式中，所述劑量是5-8 mg。在一個實施方式中，上述鋁鹽的劑量以每微克重組蛋白計。在另一實施方式中，所述佐劑是Montanide ISA佐劑。在另一實施方式 中，所述佐劑是補體成分C3d的三聚體。在另一實施方式中，所述三聚體共 價連接於蛋白質免疫原。在另一實施方式中，所述佐劑是MF59。在另一實施 方式中，所述佐劑是粒細胞/巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)蛋白。在另一實 施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括GM-CSF蛋白。在另一實施 方式中，所述佐劑是編碼GM-CSF的核苷酸分子。在另一實施方式中，所述 佐劑是混合物，所述混合物包括編碼GM-CSF的核苷酸分子。在另一實施方 式中，所述佐劑是皂角苷QS21。在另一實施方式中，所述佐劑是混合物，所 述混合物包括皂角苷QS21。在另一實施方式中，所述佐劑是單磷醯脂質A (MPL)。在另一實施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括MPL。在 另一實施方式中，所述佐劑是SBAS2。在另一實施方式中，所述佐劑是混合 物，所述混合物包括SBAS2。在另一實施方式中，所述佐劑是非甲基化的含 CpG的寡核苷酸。在另一實施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括 非甲基化的含CpG的寡核苷酸。在另一實施方式中，所述佐劑是免疫刺激細 胞因子。在另一實施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括免疫刺激 細胞因子。在另一實施方式中，所述佐劑是編碼免疫刺激細胞因子的核苷酸 分子。在另一實施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括編碼免疫刺 激細胞因子的核苷酸分子。在另一實施方式中，所述佐劑是混合物，所述混 合物包括quill glycoside在另一實施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合 物包括細菌有絲分裂原。在另一實施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合 物包括細菌毒素。在另一實施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括 本領域己知的任何其他佐劑。在另一實施方式中，所述佐劑是2種上述佐劑 的混合物。在另一實施方式中，所述佐劑是3種上述佐劑的混合物。在另一 實施方式中，所述佐劑是3種以上上述佐劑的混合物。在另一實施方式中， 所述佐劑是MPL與500昭鋁鹽的混合物。
在另一實施方式中，通過本發明的疫苗所引發的抗gC或抗gE抗體阻斷 免疫逃避使得能夠降低引發有效抗gD免疫應答所需的佐劑劑量。在另一實施 方式中，本發明的疫苗引發有效抗HSV免疫應答所需的佐劑的劑量較低。在 另一實施方式中，當使用佐劑時引發有效抗HSV免疫應答所需的疫苗的劑量 較低。
在另一實施方式中，所述佐劑是載體多肽。在另一實施方式中，"載體多肽"指的是可綴合或結合於本發明的HSV蛋白以增強所述多肽的免疫原性的 蛋白質或其免疫原性片段。載體蛋白的實例包括但絕不限於鑰孔血藍蛋白
(KLH)、白蛋白、霍亂毒素、不耐熱腸毒素(LT)等等。在另一實施方式中， 所述兩個組分被製備為嵌合構建體，以表達融合多肽。在另一實施方式中， 採用化學交聯將HSV蛋白連接於載體多肽。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物的疫苗包含重組HSV-1蛋白。 在另一實施方式中，所述疫苗包含重組HSV-2蛋白。在另一實施方式中，所 述疫苗包含HSV-1和HSV-2蛋白兩者。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物的含有重組HSV-l-蛋白的疫 苗還包含重組HSV-2蛋白。在另一實施方式中，所述重組HSV-2蛋白是gD2 蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述重組HSV-2蛋白是gC2蛋白或其片 段。在另一實施方式中，所述重組HSV-2蛋白是gE2蛋白或其片段。在另一 實施方式中，所述含有重組HSV-l-蛋白的疫苗還包含gD2蛋白和gC2蛋白或 其片段。在另一實施方式中，所述疫苗還包含gD2蛋白和gE2蛋白或其片段。 在另一實施方式中，所述疫苗還包含gE2蛋白和gC2蛋白或其片段。在另一 實施方式中，所述疫苗還包含gD2蛋白、gE2蛋白和gC2蛋白或其片段。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物的含有重組HSV-2-蛋白的疫 苗還包含重組HSV-1蛋白。在另一實施方式中，所述重組HSV-1蛋白是gDl 蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述重組HSV-l蛋白是gCl蛋白或其片 段。在另一實施方式中，所述重組HSV-l蛋白是gEl蛋白或其片段。在另一 實施方式中，所述含有重組HSV-2-蛋白的疫苗還包含gDl蛋白和gCl蛋白或 其片段。在另一實施方式中，所述疫苗還包含gDl蛋白和gEl蛋白或其片段。 在另一實施方式中，所述疫苗還包含gEl蛋白和gCl蛋白或其片段。在另一 實施方式中，所述疫苗還包含gDl蛋白、gEl蛋白和gCl蛋白或其片段。
在另一實施方式中，本發明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強免疫 接種的步驟，其中所述加強免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-1 gD蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實施方式中，所述加強免疫接種同時含有HSV-1 gD蛋白和HSV-2 gD蛋白。 在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-1 gC蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-lgE蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含(a)重組HSV-l gC蛋白或其片段或(b)重組HSV-l gE蛋白或其片段，這 兩者均存在於初始免疫接種中。
在另一實施方式中，本發明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強免疫 接種的步驟，其中所述加強免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-1 gE蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實施方式中，所述加強免疫接種同時含有HSV-1 gE蛋白和HSV-2 gE蛋白。 在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-1 gC蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-lgD蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種 不包含(a)重組HSV-1 gC蛋白或其片段或(b)重組HSV-1 gD蛋白或其片段，這 兩者均存在於初始免疫接種中。
在另一實施方式中，本發明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強免疫 接種的步驟，其中所述加強免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-1 gC蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實施方式中，所述加強免疫接種同時含有HSV-1 gC蛋白和HSV-2 gC蛋白。 在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-1 gD蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-lgE蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種 不包含(a)重組HSV-1 gD蛋白或其片段或(b)重組HSV-1 gE蛋白或其片段，這 兩者均存在於初始免疫接種中。
在另一實施方式中，本發明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強免疫 接種的步驟，其中所述加強免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-2 gD蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實施方式中，所述加強免疫接種同時含有HSV-1 gD蛋白和HSV-2 gD蛋白。 在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-2 gC蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-2gE蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種 不包含(a)重組HSV-2 gC蛋白或其片段或(b)重組HSV-2 gE蛋白或其片段，這 兩者均存在於初始免疫接種中。
在另一實施方式中，本發明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強免疫 接種的步驟，其中所述加強免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-2gE蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實施方式中，所述加強免疫接種同時含有HSV-1 gE蛋白和HSV-2 gE蛋白。 在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-2 gC蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-2 gD蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種 不包含(a)重組HSV-2 gC蛋白或其片段或(b)重組HSV-2 gD蛋白或其片段，這 兩者均存在於初始免疫接種中。
在另一實施方式中，本發明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強免疫 接種的步驟，其中所述加強免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-2 gC蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實施方式中，所述加強免疫接種同時含有HSV-1 gC蛋白和HSV-2 gC蛋白。 在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-2 gD蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-2 gE蛋白或其片段。在另一實施方式中，所述加強免疫接種 不包含(a)重組HSV-2 gD蛋白或其片段或(b)重組HSV-2 gE蛋白或其片段，這 兩者均存在於初始免疫接種中。
在一個實施方式中，上述任一加強免疫接種在初始免疫接種之後施用， 所述初始免疫接種包含一或多個HSV-1蛋白或其免疫原性片段。在另一實施 方式中，上述任一加強免疫接種在初始免疫接種之後施用，所述初始免疫接 種包含一或多個HSV-2蛋白或其免疫原性片段。
在另一實施方式中，本發明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強免疫 接種的步驟，其中所述加強免疫接種基本上由重組HSV-1 gD蛋白或其免疫原 性片段組成。在另一實施方式中，所述加強免疫接種由重組HSV-1 gD蛋白或 其免疫原性片段和佐劑組成。在一個實施方式中，所述HSVgD蛋白或其免 疫原性片段是HSV-1 gD蛋白，而在另一實施方式中，其是HSV-2 gD蛋白，而 在另一實施方式中，其是HSV-1和HSV-2 gD蛋白兩者。在另一實施方式中， 所述加強免疫接種基本上由重組HSVgE蛋白或其免疫原性片段組成。在另一 實施方式中，所述加強免疫接種由重組HSV gE蛋白或其免疫原性片段和佐劑 組成。在一個實施方式中，所述HSV gE蛋白或其免疫原性片段是HSV-1 gE 蛋白，而在另一實施方式中，其是HSV-2 gE蛋白，而在另一實施方式中，其 是HSV-1和HSV-2 gE蛋白兩者。在另一實施方式中，所述加強免疫接種基本上由重組HSV gC蛋白或其免疫原性片段組成。在另一實施方式中，所述 加強免疫接種由重組HSV gC蛋白或其免疫原性片段和佐劑組成。在一個實 施方式中，所述HSVgC蛋白或其免疫原性片段是HSV-l gC蛋白，而在另一 實施方式中，其是HSV-2 gC蛋白，而在另一實施方式中，其是HSV-1和HSV-2 gC蛋白兩者。
在另一實施方式中，所述加強免疫接種在單次初始免疫接種之後進行。 在另一實施方式中，"初始免疫接種"指的是包含以下(a)與(b)的混合物的免疫 接種(a)gD蛋白，(b)gC蛋白、gE蛋白、或其混合物。在另一實施方式中， 初始免疫接種指的是包含選自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白的兩種或多種重組 HSV蛋白的免疫接種。在另一實施方式中，該術語指的是最初施用的疫苗。 在另一實施方式中，在加強免疫接種之前施用2次初始免疫接種。在另一實 施方式中，在加強免疫接種之前施用3次初始免疫接種。在另一實施方式中， 在加強免疫接種之前施用4次初始免疫接種。
在另一實施方式中，在初始免疫接種之後施用單次加強免疫接種。在另 一實施方式中，在初始免疫接種之後施用2次加強免疫接種。在另一實施方 式中，在初始免疫接種之後施用3次加強免疫接種。
在一個實施方式中，在單一注射器中將gD和gE施用至同一部位，而在 另一實施方式中，在分開的注射器中將gD和gE施用至分開的部位，或在另 一實施方式中，gD和gE被同時施用至單一部位並繼以加強劑量的gD，而沒 有gE。
在一個實施方式中，在單一注射器中將gD和gC施用至同一部位，而在 另一實施方式中，在分開的注射器中將gD和gC施用至分開的部位，或在另 一實施方式中，gD和gC被同時施用至單一部位並繼以加強劑量的gD，而沒 有gC。
在一個實施方式中，在單一注射器中將gE和gC施用至同一部位，而在 另一實施方式中，在分開的注射器中將gE和gC施用至分開的部位，或在另 一實施方式中，gE和gC被同時施用至單一部位並繼以加強劑量的gE，而沒 有gC，或者在另一實施方式中，繼以加強劑量的gC，而沒有gE。
在一個實施方式中，在單一注射器中將gD、 gC、和gE施用至同一部位， 而在另一實施方式中，在分開的注射器中將gD、 gC、和gE施用至分開的部 位，或在另一實施方式中，gD、 gC、和gE被同時施用至單一部位並繼以加在另一實施方式中，免疫接種或加強免疫接種中使用的重組HSV gD-l 的劑量是，例如對於人類對象，20微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是10微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實施 方式中，所述劑量是25微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是22微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是16微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是15微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是 13微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是11微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5微 克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是3微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是1.5微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是l 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量小於1微克/接種。
在另一實施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實施方式 中，所述劑量小於0.02微克/kg。
在另一實施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-50微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是3-50微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-50微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是8-50微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是10-50微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-50微克/接 種。
每一劑量的gD-l代表了本發明的一個單獨的實施方式。 在另一實施方式中，免疫接種或加強免疫接種中使用的重組HSV gD-2 劑量是10納克/接種，在一個實施方式中，其是用於人類對象的劑量。在另一 實施方式中，所述劑量是25納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50 納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100納克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是150納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200納克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是250納克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是300納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是400納克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是500納克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是750納克/接種。
在另一實施方式中，所述劑量是20微克/接種。在另一實施方式中，所述 劑量是10微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是25微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是22 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是16微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是15微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是13微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實施 方式中，所述劑量是ll微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5微 克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是3微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是1.5微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是l 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量小於l微克/接種。
在另一實施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實
施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實施方式 中，所述劑量小於0.02微克/kg。
在另一實施方式中，所述劑量是500納克/kg。在另一實施方式中，所述 劑量是1 .25微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是2.5微克/kg。在另一實 施方式中，所述劑量是5微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是10微克/kg。 在另一實施方式中，所述劑量是12.5微克/kg。
在另一實施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-50微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是3-50微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-50微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是8-50微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是10-50微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-50微克/接 種。
每一劑量的gD-2代表了本發明的一個單獨的實施方式。 在另一實施方式中，免疫接種或加強免疫接種中使用的重組HSVgC-l劑 量是，例如對於人類對象，20微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是IO微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實施方式
中，所述劑量是25微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是22微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是16微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是15微克/接種。在另一實施 方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是13微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是ll微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是8 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是3 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是1.5微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是l微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量小於1微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是100微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是500微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是400微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是220微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是250微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是180微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是160微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是150微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是140微克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是130微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是120微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是110微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是90微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是80微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是70微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是60微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是50微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是40微克/接種。
在另一實施方式中，所述劑量是O.l微克/kg體重(每次接種)。在另一實 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實施方式 中，所述劑量小於0.02微克/kg。
在另一實施方式中，所述劑量是10-100納克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是50-250納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10-250納克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是100-500納克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是200-300納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是1-2微 克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-3微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是2-4微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是4-8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是5-10微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是10-20微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是20-30微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是40-60微克/接種。在另一實施方式中，所述 劑量是20-100微克展種。在另一實施方式中，所述劑量是30-100微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是50-100微克/接種。在另一實施方式中，所述 劑量是80-100微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-200微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是30-200微克/接種。在另一實施方式中，所述 劑量是50-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80-200微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是100-200微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是20-300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30-300微克/接 種。在另一實施方式中，所述劑量是50-300微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是80-300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100-300微克 /接種。在另一實施方式中，所述劑量是200-300微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是20-500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30-500 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-500微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是80-500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100-500 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200-500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300-500微克/接種。
每一劑量的gC-l代表了本發明的一個單獨的實施方式。 在另一實施方式中，免疫接種或加強免疫接種中使用的重組HSV gC-2劑 量是，例如對於人類對象，20微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是0.5 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是7.5微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是10微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是25微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是22微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實施 方式中，所述劑量是16微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是15微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是13微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是11微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是 10微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是7微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是5微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是3微克展種。在另一實施方式中，所述劑量是2微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是1.5微克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是l微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量小於1微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是400 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是220微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是250微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是200微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是180微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是160微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是150微克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是140微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是130微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是120微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是110 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是90微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是70微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是60微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是40微克/接種。
在另一實施方式中，所述劑量是O.l微克/kg體重(每次接種)。在另一實
施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實施方式 中，所述劑量小於0.02微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是250微克/kg。 在另一實施方式中，所述劑量是25微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 50微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是100微克/kg。在另一實施方式中， 所述劑量是200微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是300微克/kg。在另 一實施方式中，所述劑量是500微克/kg。
在另一實施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-100微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-100微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-100 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80-100微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是20-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30-200 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-200微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是80-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100-200 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-300微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-300 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80-300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100-300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200-300 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-500微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-500 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80-500微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是100-500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200-500 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300-500微克/接種。 每一劑量的gC-2代表了本發明的一個單獨的實施方式。 在另一實施方式中，免疫接種或加強免疫接種中使用的重組HSVgE-l劑 量是，例如對於人類對象，20微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是IO 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是25微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是22微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是16微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是15微克/接種。在另一實施 方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是13微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是ll微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是8 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是3 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2微克傻種。在另一實施方式中， 所述劑量是1.5微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是l微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量小於1微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是400微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是220 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是250微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是180微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是160微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是150微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是140微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是130微克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是120微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是UO微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是90 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是70微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是60微克準種。 在另一實施方式中，所述劑量是50微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是40微克/接種。
在另一實施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。
在另一實施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實施方式中，所述 劑量是0.06微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在另一 實施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.03 微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實施方式中， 所述劑量小於0.02微克/kg。
在另一實施方式中，所述劑量是0.5-2微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是0.5-10微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2.5-7.5微克/接 種。在另一實施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-100微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-100微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-100 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80-100微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是20-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30-200 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-200微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是80-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-300微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-300 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80-300微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是100-300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200-300 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-500微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-500 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80-500微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是100-500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200-500 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300-500微克/接種。 每一劑量的gE-l代表了本發明的一個單獨的實施方式。 在另一實施方式中，免疫接種或加強免疫接種中使用的重組HSV gE-2劑 量是，例如對於人類對象，20微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是IO 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是25微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是22微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是16微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是15微克/接種。在另一實施 方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是13微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是ll微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是8 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是6微克準種。在另一實施方式中，所述劑量是5微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是3 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是l，5微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是l微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量小於1微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是400微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是220 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是250微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是180微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是160微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是150微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是140微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是130微克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是120微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是110微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是100微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是90 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是70微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是60微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是50微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是40微克/接種。
在另一實施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實施方式 中，所述劑量小於0.02微克/kg。
在另一實施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-100微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-100微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-100 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80-100微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是20-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30-200 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-200微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是80-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-300微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-300 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80-300微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是100-300微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200-300 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-500微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-500 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80-500微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是100-500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200-500 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300-500微克/接種。 每一劑量的gE-2代表了本發明的一個單獨的實施方式。 在另一實施方式中，所述加強免疫接種包含佐劑。在另一實施方式中， 所述佐劑包含a CpG寡核苷酸。在另一實施方式中，所述佐劑包含鋁鹽。在 另一實施方式中，所述佐劑包含CpG寡核苷酸和鋁鹽兩者。在另一實施方式 中，所述佐劑包含任何其他上述佐劑。在另一實施方式中，所述佐劑包含上 述佐劑的任意組合。
在另一實施方式中，本發明的免疫接種或加強免疫接種中的CpG寡核苷 酸的劑量是10微克(微克)。在另一實施方式中，所述劑量是15微克。在另一 實施方式中，所述劑量是20微克。在另一實施方式中，所述劑量是30微克。 在另一實施方式中，所述劑量是50微克。在另一實施方式中，所述劑量是70 微克。在另一實施方式中，所述劑量是100微克。在另一實施方式中，所述 劑量是150微克。在另一實施方式中，所述劑量是200微克。在另一實施方 式中，所述劑量是300微克。在另一實施方式中，所述劑量是500微克。在 另一實施方式中，所述劑量是700微克。在另一實施方式中，所述劑量是lmg。 在另一實施方式中，所述劑量是1.2mg。在另一實施方式中，所述劑量是1.5 mg。在另一實施方式中，所述劑量是2mg。在另一實施方式中，所述劑量是 3mg。在另一實施方式中，所述劑量是5mg。在另一實施方式中，所述劑量 是大於5 mg。
在另一實施方式中，所述CpG寡核苷酸的劑量是10-100微克。在另一實 施方式中，所述劑量是20-100微克。在另一實施方式中，所述劑量是30-100 微克。在另一實施方式中，所述劑量是50-100微克。在另一實施方式中，所 述劑量是100-200微克。在另一實施方式中，所述劑量是150-300微克。在另一實施方式中，所述劑量是200-400微克。在另一實施方式中，所述劑量是 300-600微克。在另一實施方式中，所述劑量是500-1000微克。在另一實施 方式中，所述劑量是700-1500微克。在另一實施方式中，所述劑量是l-2mg。 在另一實施方式中，所述劑量是1.5-2 mg。在另一實施方式中，所述劑量是 2-3 mg。在另一實施方式中，所述劑量是3-5 mg。在另一實施方式中，所述 劑量是5-8 mg。
在另一實施方式中，加強免疫接種中的鋁鹽的劑量是10微克。在另一實 施方式中，所述劑量是15微克。在另一實施方式中，所述劑量是20微克。 在另一實施方式中，所述劑量是30微克。在另一實施方式中，所述劑量是50 微克。在另一實施方式中，所述劑量是70微克。在另一實施方式中，所述劑 量是100微克。在另一實施方式中，所述劑量是150微克。在另一實施方式 中，所述劑量是200微克。在另一實施方式中，所述劑量是300微克。在另 一實施方式中，所述劑量是500微克。在另一實施方式中，所述劑量是700 微克。在另一實施方式中，所述劑量是l mg。在另一實施方式中，所述劑量 是1.2mg。在另一實施方式中，所述劑量是1.5mg。在另一實施方式中，所 述劑量是2mg。在另一實施方式中，所述劑量是3mg。在另一實施方式中， 所述劑量是5mg。在另一實施方式中，所述劑量是大於5mg。
在另一實施方式中，所述鋁鹽的劑量是10-100微克。在另一實施方式中， 所述劑量是20-100微克。在另一實施方式中，所述劑量是30-100微克。在另 一實施方式中，所述劑量是50-100微克。在另一實施方式中，所述劑量是 100-200微克。在另一實施方式中，所述劑量是150-300微克。在另一實施方 式中，所述劑量是200-400微克。在另一實施方式中，所述劑量是300-600微 克。在另一實施方式中，所述劑量是500-1000微克。在另一實施方式中，所 述劑量是700-1500微克。在另一實施方式中，所述劑量是l-2mg。在另一實 施方式中，所述劑量是1.5-2 mg。在另一實施方式中，所述劑量是2-3 mg。 在另一實施方式中，所述劑量是3-5mg。在另一實施方式中，所述劑量是5-8 mg。
在另一實施方式中，所述鋁鹽的劑量是10微克/微克重組蛋白。在另一實 施方式中，所述劑量是15微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量 是20微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/微克重組 蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是50微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是70微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是
100微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是150微克/微克重組 蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是200微克/微克重組蛋白。在另一實施 方式中，所述劑量是300微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量 是500微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是700微克/微克重 組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是lmg。在另一實施方式中，所述劑 量是1.2mg。在另一實施方式中，所述劑量是1.5 mg。在另一實施方式中， 所述劑量是2mg。在另一實施方式中，所述劑量是3mg。在另一實施方式中， 所述劑量是5mg。在另一實施方式中，所述劑量是大於5mg。
在另一實施方式中，所述鋁鹽的劑量是10-100微克/微克重組蛋白。在另 一實施方式中，所述劑量是20-100微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中， 所述劑量是30-100微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是50-100 微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是100-200微克/微克重組 蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是150-300微克/微克重組蛋白。在另一 實施方式中，所述劑量是200-400微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中， 所述劑量是300-600微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是 500-1000微克/微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是700-1500微克 /微克重組蛋白。在另一實施方式中，所述劑量是l-2mg。在另一實施方式中， 所述劑量是1.5-2 mg。在另一實施方式中，所述劑量是2-3 mg。在另一實施 方式中，所述劑量是3-5mg。在另一實施方式中，所述劑量是5-8mg。
在另一實施方式中，本發明的疫苗引發的抗體抑制gD與細胞受體的結 合。在另一實施方式中，所述受體是皰疹病毒進入介導物A(HveA/HVEM)。 在另一實施方式中，所述受體是柄蛋白-1 (HveC)。在另一實施方式中，所述 受體是柄蛋白-2 (HveB)。在另一實施方式中，所述受體是修飾型的硫酸乙醯 肝素。在另一實施方式中，所述受體是硫酸乙醯肝素蛋白聚糖。在另一實施 方式中，所述受體是本領域已知的任何其他gD受體。
在另一實施方式中，在所述疫苗中納入本發明的gC蛋白、gE蛋白、和/ 或佐劑增加由所述疫苗引發的抗gD抗體的功效。在另一實施方式中，納入本 發明的gC蛋白、gE蛋白、和/或佐劑升高引發抑制gD與細胞受體結合的抗 體的所需的重組gD的劑量(圖19)。在另一實施方式中，當與gC蛋白(圖20A) 或gE蛋白分開施用一劑gD時，本發明的gC蛋白、gE蛋白、和/或佐劑降低引發抑制gD與細胞受體結合的抗體所需的重組gD的劑量。
在另一實施方式中，在所述疫苗中納入本發明的gC蛋白、gE蛋白、和/
或佐劑增強先天性免疫應答的作用。在另一實施方式中，所述先天性免疫應 答是抗體介導的免疫應答。在另一實施方式中，所述先天性免疫應答是非抗
體介導的免疫應答。在另一實施方式中，所述先天性免疫應答是NK(天然殺 傷)細胞應答。在另一實施方式中，所述先天性免疫應答本領域已知的任何其 他先天性免疫應答。
在一個實施方式中，在所述疫苗中納入gC-l蛋白、和/或佐劑有助於抵抗 疾病和死亡，而在另一實施方式中，在所述疫苗中納入gC-2蛋白有助於抵抗 疾病和死亡(例如，圖22-26)。在一個實施方式中，接種和帶狀皰疹樣部位疾 病評分降低的最大降幅是使用5微克的劑量而得到的。在另一實施方式中， 所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評分的降幅是使用2微克的劑量而得到的。 在一個實施方式中，所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評分的降幅是使用1微 克的劑量而得到的。在另一實施方式中，所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評 分的降幅是使用0.5微克的劑量而得到的。在一個實施方式中，所述用於人類 的疫苗中的gC-2的劑量是如現有技術所知的那樣根據小鼠實驗數據估計的。
在一個實施方式中，在所述疫苗中納入gD-l蛋白、和/或佐劑有助於抵抗 疾病和死亡，而在另一實施方式中，在所述疫苗中納入gD-2蛋白有助於抵抗 疾病和死亡(例如，圖27-31)。在一個實施方式中，接種和帶狀皰疹樣部位疾 病評分降低的最大降幅是使用250 ng的劑量而得到的。在一個實施方式中， 所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評分的降幅是使用100 ng的劑量而得到的。 在另一實施方式中，所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評分的降幅是使用50ng 的劑量而得到的。在一個實施方式中，所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評分 的降幅是使用25ng的劑量而得到的。在另一實施方式中，所述接種和帶狀皰 疹樣部位疾病評分的降幅是使用10ng的劑量而得到的。在一個實施方式中， 所述用於人類的疫苗中的gD-2的劑量是如現有技術所知的那樣根據小鼠實驗 數據估計的。
在另一實施方式中，本發明的疫苗還包含另一種參與細胞結合和/或細胞 進入的HSV糖蛋白。在另一實施方式中，所述糖蛋白是gH。在另一實施方 式中，所述糖蛋白是gL。在另一實施方式中，所述糖蛋白是gB。
在另一實施方式中，本發明的疫苗還包含額外的HSV糖蛋白。在另一實施方式中，所述糖蛋白是gM。在另一實施方式中，所述糖蛋白是gN。在另
一實施方式中，所述糖蛋白是gK。在另一實施方式中，所述糖蛋白是gG。
在另一實施方式中，所述糖蛋白是gl。在另一實施方式中，所述糖蛋白是gj。
在一個實施方式中，本發明的疫苗和組合物包含單一的重組HSV糖蛋白， 在一個實施方式中，其是gC、 gE、或gD，以及任選地，佐劑。在一個實施 方式中，所述HSV糖蛋白是HSV-1糖蛋白，而在另一實施方式中，所述HSV 糖蛋白是HSV-2糖蛋白。在另一實施方式中，本發明提供重組疫苗載體，其 編碼重組HSV糖蛋白。
在另一實施方式中，在所述疫苗中納入本發明的gC蛋白、gE蛋白、和/ 或佐劑增加針對上述糖蛋白之一的疫苗引發的抗體的功效。在另一實施方式 中，當一劑所述糖蛋白之一與其他糖蛋白分開施用時(圖20A)，本發明的gC 蛋白、gE蛋白、和/或佐劑降低引發抑制所述糖蛋白結合於其細胞受體的抗體 所需的上述糖蛋白之一的劑量(圖19)。
在另一實施方式中，本發明的疫苗是重組核苷酸疫苗。在另一實施方式 中，所述疫苗是重組DNA疫苗。在另一實施方式中，所述DNA疫苗編碼HSV gC蛋白和HSV gD蛋白。在另一實施方式中，所述DNA疫苗編碼HSV gE 蛋白和HSV gD蛋白。在另一實施方式中，所述DNA疫苗編碼HSV gE蛋白、 HSVgC蛋白、和HSVgD蛋白。在另一實施方式中，所述重組蛋白是HSV-2 蛋白。在另一實施方式中，所述重組蛋白是HSV-1蛋白。在另一實施方式中， 所述蛋白包含HSV-1和HSV-2蛋白兩者。
在另一實施方式中，本發明的疫苗包含加載了本發明的HSV抗原的樹突 細胞(DC)。在另一實施方式中，所述DC已經被暴露於本發明的HSV抗原。 在另一實施方式中，所述DC加載了編碼本發明的HSV抗原的核苷酸。在另 一實施方式中，所述DC已經被活化。
在另一實施方式中，本發明提供免疫原性組合物包含本發明的重組HSV 蛋白的組合。在另一實施方式中，本發明提供免疫原性組合物，其包含編碼 本發明的重組HSV蛋白的核苷酸分子。在另一實施方式中，所述免疫原性組 合物還包含佐劑。
在另一實施方式中，本發明提供重組疫苗載體，其編碼本發明的重組HSV 蛋白。在另一實施方式中，本發明提供重組疫苗載體，其包含本發明的重組 HSV蛋白在另一實施方式中，本發明提供重組疫苗載體，其包含本發明的核苷酸 分子。在另一實施方式中，所述表達載體是質粒。在另一實施方式中，本發 明提供用於將本發明的核苷酸分子引入細胞的方法。構建和使用重組載體的
方法是本領域已知的並可參見，例如，Sambrook et al. (2001， Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)禾口 Brent et al. (2003, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York)。
在另一實施方式中，所述載體是細菌載體。在其他實施方式中，所述載體選 自沙門菌屬、志賀菌屬、BCG、單核增生李斯特氏菌(￡. mom qytoge"a)和格 氏鏈球菌OS. goWom'0。在另一實施方式中，所述重組HSV蛋白由重組細菌載 體輸送，所述載體被改良以逃避吞噬溶酶體融合併在細胞的細胞質中存活。 在另一實施方式中，所述載體是病毒載體。在其他實施方式中，所述載體選 自牛痘病毒、鳥痘病毒、腺病毒、AAV、牛痘病毒NYVAC、改良的牛痘Ankara 株(MVA)、西門利克森林病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、皰疹病毒和反轉錄病 毒。在另一實施方式中，所述載體是裸DNA載體。在另一實施方式中，所述 載體本領域己知的任何其他載體。
在另一實施方式中，本發明的核苷酸可操縱地於在載體所引入的細胞中 驅動所編碼的肽表達的啟動子/調節序列。可用於驅動基因組成型表達的啟動 子/調節序列是本領域熟知的，包括但不限於，例如，巨細胞病毒立即早期啟 動子/增強子序列、SV40早期啟動子和勞斯肉瘤病毒啟動子。在另一實施方式 中，通過將編碼肽的核酸置於誘導型或組織特異性啟動子/調節序列控制下可 實現本發明的編碼肽的核酸的誘導型和組織特異性表達。可用於此目的的組 織特異性或誘導型啟動子/調節序列的實例包括但不限於MMTV LTR誘導型 啟動子和SV40晚期增強子/啟動子。在另一實施方式中，使用應答於誘導劑 而被誘導的啟動子，所述誘導劑例如例如為金屬、糖皮質激素等等。因此， 可以理解，本發明包括使用能夠驅動與之可操縱地連接的所需蛋白質的表達 的任何啟動子/調節序列，無論是已知的還是未知的。
在另一實施方式中，本發明提供包含本發明的載體的細胞。用於產生包 含載體和/或外來核酸的細胞的方法是本領域熟知的。見例如，Sambrook et al. (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)禾口 Ausubel et al. (1997， Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York)。在其他實施方式中，上述任何方法的所述疫苗均具有本發明的疫苗和組 合物的任何特徵。每一特徵代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，本發明提供抑制對象的原發性HSV感染的方法，所 述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發 明提供治療對象的HSV感染的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的
疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發明提供降低對象的HSV感染發生率的
方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式
中，本發明提供抑制對象的原發性HSV感染之後的潮紅的方法，所述方法包 括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在一個實施方式中，"潮紅"或"復發"指的是在潛伏的神經元HSV感染之 後皮膚組織再次感染。在另一實施方式中，所述術語指的是潛伏期過後HSV 再活化。在另一實施方式中，所述術語指的是無症狀潛伏期之後的症狀性HSV 病變。
在另一實施方式中，本發明提供抑制HSV播散的方法。在一個實施方式 中，從DRG到皮膚的播散被抑制。在一個實施方式中，細胞間HSV播散被 抑制。在一個實施方式中，順行播散被抑制。在一個實施方式中，逆行播散 被抑制。在一個實施方式中，"DRG"指的是神經元細胞體，而在另一實施方 式中，其含有神經纖維的神經元細胞體。在另一實施方式中，該術語指的是 本領域所使用的"DRG"的任何其他定義。在另一實施方式中，抑制HSV播散 至神經組織。
在另一實施方式中，本發明提供抑制對象的原發性HSV感染之後的復發 的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方 式中，本發明提供預防對象的原發性HSV感染之後的復發的方法，所述方法
包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，本發明提供抑制對象的原發性HSV感染之後的HSV 唇皰疹的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，本發明提供預防HSV感染復發的方法，所述方法包 括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發明提供減 輕HSV感染復發的嚴重程度的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的 疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發明提供降低HSV感染復發的頻率的方 法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在一個實施方式中，本發明給感染HIV的對象提供任一上述方法。
在另一實施方式中，本發明提供治療對象的HSV腦炎的方法，所述方法
包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發明提供
降低對象的HSV腦炎的發生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明 的疫苗的步驟。在一個實施方式中，"HSV腦炎"指的是由單純皰疹病毒-1(HSV) 引起的腦炎。在另一實施方式中，該術語指的是HSV相關性腦炎。在另一實 施方式中，該術語指的是本領域已知的任何其他類型的HSV介導的腦炎。
在另一實施方式中，本發明提供治療或減輕對象的HSV新生兒感染的方 法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
應該理解，在此提到HSV時，在一個實施方式中，其指的是HSV-1，而 在另一實施方式中，指的是HSV-2，而在另一實施方式中，指的是HSV-1和 HSV-2。
在另一實施方式中，"HSv-r指的是單純皰疹病毒-i。在另一實施方式中，
該術語指的是KOS毒株。在另一實施方式中，該術語指的是F毒株。在另一 實施方式中，該術語指的是NS毒株。在另一實施方式中，該術語指的是CL101 毒株。在另一實施方式中，該術語指的是"17"毒株。在另一實施方式中，該術 語指的是"17+syn"毒株。在另一實施方式中，該術語指的是MacIntyre毒株。 在另一實施方式中，該術語指的是MP毒株。在另一實施方式中，該術語指 的是HF毒株。在另一實施方式中，該術語指的是本領域已知的任何其他 HSV-1毒株。
在另一實施方式中，"HSV-2"指的是單純皰疹病毒-2。在另一實施方式中， 該術語指的是HSV-2 333毒株。在另一實施方式中，該術語指的是2.12毒株。 在另一實施方式中，該術語指的是HG52毒株。在另一實施方式中，該術語 指的是MS毒株。在另一實施方式中，該術語指的是G毒株。在另一實施方 式中，該術語指的是186毒株。在另一實施方式中，該術語指的是本領域已 知的任何其他HSV-2毒株。
在另 一實施方式中，本發明提供給對象進行抗HSV感染免疫接種的方法， 所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中，本 發明提供壓制對象的HSV感染的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明 的疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發明提供阻止對象的HSV感染的方法， 所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發明提供阻止對象的原發性HSV感染的方法，所述方法包括給所述對象施用
本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發明提供阻止對象的神經元HSV
播散的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，所述術語"阻止HSV感染"和"阻止原發性HSV感染" 指的是將感染性病毒的效價降低90%。在另一實施方式中，所述效價被降低 50%。在另一實施方式中，所述效價被降低55%。在另一實施方式中，所述 效價被降低60%。在另一實施方式中，所述效價被降低65%。在另一實施方 式中，所述效價被降低70%。在另一實施方式中，所述效價被降低75%。在 另一實施方式中，所述效價被降低80%。在另一實施方式中，所述效價被降 低85%。在另一實施方式中，所述效價被降低92%。在另一實施方式中，所 述效價被降低95%。在另一實施方式中，所述效價被降低96%。在另一實施 方式中，所述效價被降低97%。在另一實施方式中，所述效價被降低98%。 在另一實施方式中，所述效價被降低99%。在另一實施方式中，所述效價被 降低超過99%。
在另一實施方式中，所述術語指的是將病毒複製的程度降低90%。在另 一實施方式中，複製被降低50%。在另一實施方式中，複製被降低55%。在 另一實施方式中，複製被降低60%。在另一實施方式中，複製被降低65%。 在另一實施方式中，複製被降低70%。在另一實施方式中，複製被降低75%。 在另一實施方式中，複製被降低80%。在另一實施方式中，複製被降低85%。 在另一實施方式中，複製被降低92%。在另一實施方式中，複製被降低95%。 在另一實施方式中，複製被降低96%。在另一實施方式中，複製被降低97%。 在另一實施方式中，複製被降低98%。在另一實施方式中，複製被降低99%。 在另一實施方式中，複製被降低超過99%。
確定HSV複製和HSV感染程度的方法是本領域熟知的，並可參見例如， Lambiase A et al. (Topical treatment with nerve growth factor in an animal model of herpetic keratitis. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2007 May 4)、 Ramaswamy M et al. (Interactions and management issues in HSV and HIV coinfection. Expert Rev Anti Infect Ther. 2007 Apr; 5(2):23 l誦43)禾卩Jiang C et al. (Mutations that decrease DNA binding of the processivity factor of the herpes simplex virus DNA polymerase reduce viral yield, alter the kinetics of viral DNA replication, and decrease the fidelity of DNA replication. J Virol. 2007 Apr;81(7):3495-502)。每一方法代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，本發明提供降低對象的HSV介導的皰疹性眼病的發 生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實 施方式中，本發明提供治療對象的HSV-1角膜感染或皰疹角膜炎的方法，所 述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發 明提供降低對象的HSV-1角膜感染或皰疹角膜炎的發生率的方法，所述方法 包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
用於確定皰疹性眼病、角膜感染、皰疹角膜炎的存在和程度的方法是本 領域熟知的，並可參見例如，Labetoulle M et al. (Neuronal propagation of HSVl from the oral mucosa to the eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2000 Aug; 41(9):2600-6)禾口 Majumdar S et al (Dipeptide monoester ganciclovir prodrugs for treating HSV-1-induced corneal epithelial and stromal keratitis: in vitro and in vivo evaluations. J Ocul Pharmacol Ther. 2005 Dec; 21(6):463-74)。每一方法代 表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，本發明提供用於治療、壓制或抑制HSV生殖道感染 的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方 式中，本發明提供用於治療、壓制或抑制復發性HSV感染的任何表現的方法， 所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，本發明提供降低對象的HSV介導的生殖道潰瘍疾病 的發生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另 一實施方式中，本發明提供阻止對象發生潛伏HSV感染的方法，所述方法包 括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，本發明提供降低對象的HSV介導的腦炎的發生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，本發明的方法所治療或預防的皰疹介導的腦炎是局 灶皰疹性腦炎。在另一實施方式中，所述皰疹介導的腦炎是新生兒皰疹性腦 炎。在另一實施方式中，所述皰疹介導的腦炎是本領域己知的任何其他類型 的皰疹介導的腦炎。
在另一實施方式中，本發明提供治療對象的HSV介導的腦炎相關性或繼 發性疾病、疾患或症狀或降低其發生率的方法，所述方法包括給所述對象施 用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，本發明提供治療對象的單純皰疹病毒(HSV) 感染、降低其發病、改善其症狀、改善其繼發症狀、降低其發生率、延長到 其復發的潛伏期的方法，包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
根據本發明的任一方法，在一個實施方式中，所述對象是人。在另一實 施方式中，所述對象是鼠，在一個實施方式中，其是小鼠，而在另一實施方 式中，其是大鼠。在另一實施方式中，所述對象是犬、貓、牛、羊或豬。在 另一實施方式中，所述對象是哺乳動物。在另一實施方式中，所述對象是任 何易於被HSV感染的生物體。
在另一實施方式中，本發明提供保護對象免於人類對象形成帶狀皰疹樣 病灶或類似爆發的方法。在另一實施方式中，本發明提供抑制人類對象形成 HSV帶狀皰疹樣病灶或類似爆發的方法。
在一個實施方式中，"帶狀皰疹樣"指的是HSV感染、尤其是再活化感染 過程中的皮膚病灶特徵，在一個實施方式中，其起初為皮疹，然後在節皮區 (dermatome)附近分布，通常以條狀或帶狀形式出現。在一個實施方式中，所 述皮疹演變為小水皰或充滿漿液的小的大水皰。在一個實施方式中，小鼠因 接觸HSV之後形成帶狀皰疹樣病灶。在另一實施方式中，人因接觸HSV之 後形成帶狀皰疹樣病灶。在一個實施方式中，"帶狀皰疹樣播散"指的是HSV 感染從神經節播散至節皮區內的繼發肌膚部位。在另一實施方式中，該術語 指的是在與最初感染部位相同的節皮區內播散。在另一實施方式中，該術語 指的是本領域己知的"帶狀皰疹樣播散"的任何其他定義。在另一實施方式中， "爆發"指的是疾病症狀或疾病的播散或流行的突然增加，且在一個實施方式 中，指的是帶狀皰疹樣病灶突然增加，而在另一實施方式中，"爆發"指的是帶 狀皰疹樣病灶突然出現皮疹。
在一個實施方式中，本發明提供阻止對象形成節皮區病變或類似情況的 方法。在一個實施方式中，因接觸HSV之後形成節皮區病灶。在另一實施方 式中，當神經節中潛伏的病毒再次活化時最常出現節皮區病灶，而在一個實 施方式中，沿神經向下播散，在一個實施方式中，引起反覆感染。
應該理解，本發明的方法可用於治療、抑制、壓制因對象暴露於HSV之 後的HSV感染或與這種感染相關的原發或繼發症狀。在另一實施方式中，所 述對象在免疫接種之前已經被HSV感染。在另一實施方式中，所述對象是處 於發生HSV感染的風險中。在另一實施方式中，無論免疫接種時對象是否已經感染HSV，通過本發明的方法進行免疫接種均可有效治療、抑制、壓制HSV
感染或與這種感染相關的原發或繼發症狀。
在一個實施方式中，"治療"指的是治療或預防或防止措施，其目的是預防 或減輕所針對的上述疾病狀態或疾患。因此，在一個實施方式中，治療可包 括直接影響或治癒、壓制、抑制、預防所述疾病、疾患、病變、或減輕其嚴 重程度、延緩其發作、減輕其相關症狀、或其組合，等等。因此，在一個實 施方式中，"治療"指的是延緩進展、加速緩解、誘導緩解、促進緩解、加快恢 復、增強各種治療劑的效力或降低對各種治療劑的抗藥性、或其組合，等等。 在一個實施方式中，"預防"指的是延緩症狀出現、預防疾病復發、降低復發數 量或頻率、延長症狀發作期之間的潛伏期、或其組合，等等。在一個實施方 式中，"壓制"或"抑制"指的是減輕症狀嚴重程度、減輕急性發作的嚴重程度、 減少症狀的數量、降低疾病相關症狀的發生率、減少潛伏症狀、改善症狀、 減少繼發症狀、減少繼發感染、延長患者生存、或其組合，等等。
在一個實施方式中，症狀是原發性的，而在另一實施方式中，症狀是繼 發性的。在一個實施方式中，"原發"指的是直接由對象感染病毒所致的症狀， 在一個實施方式中，"繼發"指的是原發因素引起的或導致的症狀。在一個實施
方式中，用於本發明的所述組合和毒株治療HSV感染相關性原發或繼發症狀 或繼發的併發症。
在另一實施方式中，"症狀"可以是HSV感染的任何表現，包括大水皰、
潰瘍、或女性的尿道、宮頸、大腿、禾n/或肛門處的病變以及男性的陰莖、尿
道、陰囊、大腿和肛門處的病變、炎症、腫脹、發熱、流感樣症狀、口腔疼 痛、咽喉疼痛、咽炎、疼痛、舌頭、口唇的大水皰、潰瘍、唇皰疹(cold sores)、 頸部疼痛、淋巴結腫大、發紅、出血、搔癢、排尿困難、頭痛、肌痛、或其組合。
在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是發熱。在另一實施方式 中，所述疾病、疾患、或症狀是頭痛。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、 或症狀是頸強直。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是癲癇發作。 在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是部分癱瘓。在另一實施方式 中，所述疾病、疾患、或症狀是木僵。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、 或症狀是昏迷。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是本領域已知 的任何其他皰疹介導的腦炎相關性或繼發性疾病、疾患或症狀。確定皰疹介導的腦炎的存在和嚴重程度的方法是本領域熟知的，並可參
見例如，Bonkowsky JL et al. (Herpes simplex virus central nervous system relapse during treatment of infantile spasms with corticotropin. Pediatrics. 2006 May; 1 17(5》el045-8)禾口 Khan OA, et al. (Herpes encephalitis presenting as mild aphasia: case report. BMC Fam Pract. 2006 Mar 24; 7:22)。每一方法代表了本發明的一個 單獨的實施方式。
在另一實施方式中，本發明提供治療與對象的HSV感染有關的疾病、疾 患或症狀或降低其發生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫 苗的步驟。
在另一實施方式中，所述繼發於HSV感染的疾病、疾患、或症狀是口腔 病變。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是生殖道病變。在另一 實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是口腔潰瘍。在另一實施方式中，所 述疾病、疾患、或症狀是生殖道潰瘍。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、 或症狀是發熱。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是頭痛。在另 一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是肌痛。在另一實施方式中，所述 疾病、疾患、或症狀是腹股溝區淋巴結腫大。在另一實施方式中，所述疾病、 疾患、或症狀是排尿疼痛。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是 陰道排出物。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是發水皰。在另 一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是流感樣不適。在另一實施方式中， 所述疾病、疾患、或症狀是角膜炎。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、 或症狀是皰疹性甲溝炎。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是貝 爾麻痺。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是皰疹性多形紅斑。 在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是腰背部症狀(例如麻木、臀部 或肛周區域發麻、尿瀦留、便秘和陽痿)。在另一實施方式中，所述疾病、疾 患、或症狀是局部皰疹性溼疹。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症 狀是播散性皰疹性溼疹。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是外 傷性皰疹。在另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是皰疹性須瘡。在 另一實施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是食道症狀(例如吞咽困難或燒心、 吞咽時喉部壓榨性疼痛、體重下降、吞咽時上胸部或胸骨後疼痛)。在另一實 施方式中，所述疾病、疾患、或症狀是本領域己知的任何其他疾病、疾患或 症狀。每一疾病、疾患和症狀代表了本發明的一個單獨的實施方式。因此，在一個實施方式中，本發明的組合物和方法本身治療、壓制、抑 制感染、或降低其發生率，而在另一實施方式中，本發明的組合物和方法治 療、壓制、抑制感染的原發症狀、或降低其發生率，而在另一實施方式中， 本發明的組合物和方法治療、壓制、抑制感染的繼發症狀、或降低其發生率。 應該理解，本發明的組合物和方法可影響所述感染、感染引起的原發症狀和 感染相關性繼發症狀的任何組合。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物治療或改善的HSV感染是生 殖器HSV感染。在另一實施方式中，所述HSV感染是口腔HSV感染。在另 一實施方式中，所述HSV感染是眼HSV感染。在另一實施方式中，所述HSV 感染是皮膚HSV感染。
在另一實施方式中，本發明提供降低對象的播散性HSV感染的發生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，本發明提供降低對象後代的新生兒HSV感染的發生 率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，本發明提供降低HSV感染從對象傳播給其後代的方 法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在另一實施方式中，所述後代是嬰兒。在另一實施方式中，所述被降低 或抑制的傳播是分娩過程中的傳播。在另一實施方式中，降低或抑制哺乳過 程中的傳播。在另一實施方式中，所述被降低或抑制的傳播是本領域已知的 任何其他類型的母嬰傳播。
在另一實施方式中，本發明提供降低對象後代的新生兒HSV感染的嚴重 程度的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。
在一個實施方式中，本發明提供一種在感染HIV的對象中治療、壓制、 抑制HSV感染或降低HSV感染的發生率的方法，所述方法包括給所述對象 施用疫苗的步驟，所述疫苗包含(a)重組HSV gC蛋白或其片段；(b)重組 HSVgE蛋白或其片段；和(c)佐劑。在另一實施方式中，本發明提供一種在 感染HIV的對象中治療、壓制、抑制HSV感染或降低HSV感染的發生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用疫苗的步驟，所述疫苗包含(a)重組 HSVgC蛋白或其片段，其中所述片段包含其C3b結合結構域、其備解素幹擾 結構域、其C5幹擾結構域、或所述C3b結合結構域、備解素幹擾結構域、或 C5幹擾結構域的片段；(b)重組HSV gE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段;和(c)佐劑。
在另一實施方式中，本發明提供治療感染了 HIV的對象的HSV感染的方 法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中， 本發明提供壓制感染了 HIV的對象的HSV感染的方法，所述方法包括給所述 對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發明提供抑制感染了 HIV的對象的HSV感染的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗 的步驟。在另一實施方式中，本發明提供降低感染了fflV的對象的HSV感染 的發生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另 一實施方式中，本發明提供預防HIV感染的方法，所述方法包括給所述對象 施用本發明的HSV疫苗的步驟。在一個實施方式中，HSV感染增加HIV感 染的風險，而保護對象免於HSV感染降低HIV感染的風險。因此，在一個實 施方式中，本發明提供降低HIV感染風險的方法，所述方法包括給所述對象 施用本發明的疫苗的步驟。
在一個實施方式中，本發明的方法所使用的疫苗引發針對HSV的免疫應 答。在另一實施方式中，本發明的方法所使用的疫苗引發針對HSV-1的免疫 應答。在另一實施方式中，本發明的方法所使用的疫苗引發針對HSV-2的免 疫應答。在另一實施方式中，所述疫苗包含重組gD和gC蛋白。在另一實施 方式中，所述疫苗包含重組gE和gD蛋白。在另一實施方式中，所述疫苗包 含重組gC和gE蛋白。在另一實施方式中，所述疫苗包含重組gE、 gD和gC 蛋白。在另一實施方式中，所述疫苗包含重組gE、 gD或gC蛋白。在另一實 施方式中，所述重組蛋白是HSV-1蛋白。在另一實施方式中，所述重組蛋白 是HSV-2蛋白。在另一實施方式中，所述蛋白保護HSV-1和HSV-2蛋白兩 者。
應該理解，在一個實施方式中，根據本文所述的任一實施方式的對象可 以是感染HSV的對象，或在另一實施方式中，其易於感染HSV。在一個實施 方式中，對象可以是感染至少一種其他病原體的對象，或在另一實施方式中， 其易於感染至少一種其他病原體。在一個實施方式中，對象可以是免疫受損 的對象。在一個實施方式中，所述對象感染了 HSV，而在另一實施方式中， 所述對象具有感染HSV的風險，在一個實施方式中，其是新生兒對象，在另 一實施方式中，是免疫受損的對象，在另一實施方式中，是老年對象，而在 另一實施方式中，是免疫受損的新生兒或免疫受損的老年對象。在另一實施方式中，本發明的組合物或疫苗及其相關用途可壓制、抑制、 預防或治療對象的HIV感染。在一個實施方式中，本發明的組合物或疫苗及 其相關用途可治療HIV感染的繼發併發症，在一個實施方式中，所述併發症 是機會性感染、腫瘤、神經系統異常、或進行性免疫損害。在另一實施方式
中，所述方法包括治療獲得性免疫缺陷症候群(AIDS)。在另一實施方式中， 所述方法包括治療CD4+ T淋巴細胞數量下降。
在另一實施方式中，本發明提供減少HIV-1傳播至後代的方法，所述方 法包括給對象施用本發明的疫苗的步驟。本領域已知，HSV-2感染增加HIV-1 病毒在生殖道分泌物中的脫落(Nagot N et al., Reduction of HIV-1 RNA levels with therapy to suppress herpes simplex virus. N Engl J Med. 2007 Feb 22; 356(8):790-9)。因此，本發明的抑制HSV-2感染的方法也有效減少HIV-1傳 播至後代。在另一實施方式中，所述突變體HSV毒株是HSV-1毒株。在另一 實施方式中，所述突變體HSV毒株是HSV-2毒株。
在另一實施方式中，本發明提供減少HIV-1傳播給性伴侶的方法，所述 方法包括給對象施用本發明的疫苗的步驟。本領域已知，HSV-2感染增加 HIV-1病毒在生殖道分泌物中的脫落。因此，本發明的抑制HSV-2感染的方 法也有效減少HIV-1傳播給性伴侶。在另一實施方式中，所述突變體HSV毒 株是HSV-1毒株。在另一實施方式中，所述突變體HSV毒株是HSV-2毒株。
在另一實施方式中，本發明提供降低對HIV-1的易感性的方法，所述方 法包括給對象施用本發明的疫苗的步驟。本領域已知，HSV-2感染增加HIV-1 複製(Ouedraogo A et al， Impact of suppressive herpes therapy on genital HTV-1 RNA among women taking antiretroviral therapy: a randomized controlled trial. AIDS. 2006 Nov 28;20(18):2305-13)。因此，本發明的抑制HSV-2感染的方法 也有效降低對HIV-1的易感性。在另一實施方式中，所述突變體HSV毒株是 HSV-1毒株。在另一實施方式中，所述突變體HSV毒株是HSV-2毒株。
因此，在一個實施方式中，本發明提供抑制感染HIV的對象的原發性HSV 感染的方法，包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中， 本發明提供治療感染HIV的對象的HSV感染或降低其發生率的方法，包括給 所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在另一實施方式中，本發明提供抑制感 染HIV的對象的原發性HSV感染之後的潮紅、復發或HSV唇皰疹的方法， 所述方法包括給所述對象施用本發明的疫苗的步驟。在一個實施方式中，施用本發明的疫苗引發抗HSV免疫應答。
應該理解，在一個實施方式中，根據本文所述的任一實施方式的對象可
以是感染Hiv的對象，或在另一實施方式中，其易於感染mv。在另一實施
方式中，根據本文所述的任一實施方式的對象是HIV陽性對象。在一個實施
方式中，本發明的組合物或疫苗及其相關用途可壓制、抑制、預防或治療感
染HIV的對象的HSV感染。在一個實施方式中，所述感染HIV的對象的CD4 T-細胞計數可低於200/^1，在另一實施方式中，所述感染HIV的對象的CD4 T-細胞計數可在200-5004d之間，或在另一實施方式中，所述感染HIV的對象 的CD4T-細胞計數高於500/^11。在一個實施方式中，感染HIV的對象具有高 溶血性血清補體(CH50)水平，而在另一實施方式中，感染HIV的對象具有低 CH50水平。
在一個實施方式中，感染fflV的對象可通過特徵性的症狀和/或病理學被 鑑定，且在另一實施方式中，本發明的疫苗和方法可緩解與HIV感染相關的 一或多種症狀和/或病理學。在一個實施方式中，與HIV感染或病理學(例如， 疾病)有關的或其導致的症狀非限制性的實例包括發熱、乏力、頭痛、咽痛、 淋巴結腫大、體重下降、皮疹、布、疣、鵝口瘡、帶狀皰疹、慢性或急性盆 腔炎性疾病(PID)、咳嗽和氣短、癲癇發作和協調性差、吞咽困難或疼痛、神 經心理學症狀例如意識模糊和健忘、嚴重和持續腹瀉、發熱、視力下降、惡 心、腹部絞痛、和嘔吐、昏迷、乾咳、挫傷、出血、麻木或癱瘓、肌無力、 機會性疾病、神經損害、腦病、痴呆和死亡。在另一實施方式中，所述對象 還可易於發生各種癌症，特別是那些由病毒引起的癌症，例如Kaposi肉瘤和 宮頸癌或淋巴瘤。
在另一實施方式中，與HIV感染或病理學有關的或由其導致的病理學的 非限制性的實例包括機會性感染(例如細菌、病毒、真菌和寄生蟲感染)，例如 支氣管、氣管、肺或食道的煙麴黴菌病、念珠菌病、白色念珠菌病、宮頸癌、 球孢菌病、隱球菌病、新型隱球菌病、隱孢子蟲病、桿菌性血管瘤病、巨細 胞病毒(CMV)、巨細胞病毒視網膜炎、皰疹病毒、肝炎病毒、乳頭瘤病毒、 組織胞漿菌病、等孢子球蟲病、Kaposi肉瘤、Burkitt淋巴瘤、免疫母細胞淋 巴瘤、鳥分枝桿菌病、結核分枝桿菌病、卡氏肺囊蟲肺炎、進行性多病灶腦 白質病(PML)、沙門氏菌病、弓形蟲病、消耗症候群和淋巴樣間質性肺炎/肺 淋巴結型。HIV感染或病理學的其他症狀和病理學(例如，疾病)是本領域己知的，且本發明提供了對它們的治療。
在另一實施方式中，本發明的疫苗引發抗gC中和抗體。在另一實施方 式中，所述抗體能夠抑制玫瑰花結形成。在另一實施方式中，所述抗體抑制 玫瑰花結形成。
在另一實施方式中，本發明的疫苗引發的免疫應答相對於僅含有gD的疫
苗是增強的。在另一實施方式中，使用本發明的佐劑能夠增強抗gD免疫應答。 在另一實施方式中，通過將gD與誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC 免疫原相組合能夠增強抗gD免疫應答。在另一實施方式中，通過將gD與本 發明的佐劑和誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合 可進一步增強抗gD免疫應答。
在一個實施方式中，gC遮蔽了中和抗體所針對的病毒糖蛋白上的表位。 在另一實施方式中，gE遮蔽了中和抗體所針對的病毒糖蛋白上的表位。
在另一實施方式中，使用本發明的佐劑能夠增強抗HSV免疫應答。在另 一實施方式中，通過將gD與誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫 原相組合能夠增強抗HSV免疫應答。在另一實施方式中，通過將gD與本發 明的佐劑和誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合能 夠進一步增強抗HSV免疫應答。
在另一實施方式中，通過將gD與誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的 gE免疫原相組合能夠增強抗gD免疫應答。在另一實施方式中，通過將gD與 本發明的佐劑和誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原這兩者相組 合能夠進一步增強抗gD免疫應答。
在另一實施方式中，通過將gD與誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的 gE免疫原相組合能夠增強抗HSV免疫應答。在另一實施方式中，通過將gD 與本發明的佐劑和誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原這兩者相 組合能夠進一步增強抗HSV免疫應答。
在另一實施方式中，通過將gD與誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的 gE免疫原以及誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合 能夠進一步增強抗gD免疫應答。在另一實施方式中，通過將gD與(a)本發明 的佐劑、(b)誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原以及(c)誘導阻斷 gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原相組合能夠進一步增強抗gD免疫應 答。在另一實施方式中，通過將gD與誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的 gE免疫原以及誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合 能夠進一步增強抗HSV免疫應答。在另一實施方式中，通過將gD與(a)本發 明的佐劑、(b)誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原以及(c)誘導阻 斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原相組合能夠進一步增強抗HSV免疫 應答。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物的中所用的重組HSV gD蛋 白的劑量是20微克/接種。在一個實施方式中，"蛋白質"指的是重組HSV糖 蛋白，或在另一實施方式中，指的是它的片段。在另一實施方式中，所述劑 量是10微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是25微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是22微 克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是16微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是15微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是 13微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是11微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5微 克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是3微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是1.5微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是l 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量小於l微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是10納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是25納克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是50納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是100納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是150納克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是200納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是250 納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300納克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是400納克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是500納克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是750納克/接種。
在另一實施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實施方式 中，所述劑量是低於0.02微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是500納克 /kg。在另一實施方式中，所述劑量是1.25微克/kg。在另一實施方式中，所述 劑量是2.5微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是5微克/kg。在另一實施 方式中，所述劑量是10微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是12.5微克/kg。 在另一實施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-50微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是3-50微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-50微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是8-50微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是10-50微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是20-50微克/接 種。
在另一實施方式中，所述劑量是0.01-0.02微克/kg體重(每次注射)。在另 一實施方式中，所述劑量是0.02-0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量 是0.02-0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.03-0.06微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04-0.08微克/kg。在另一實施方式中，所述劑 量是0.05-0.1微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05-0.15微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.1-0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量 是0.2-0.3微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.3-0.4微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.4-0.6微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.5-0.8微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.8-1微克/kg。
在另一實施方式中，通過從動物研究推定出人的數據而確定用於人類免 疫接種的gD蛋白的劑量。在另一實施方式中，通過使用在人與小鼠的對比研 究中發現的有效的蛋白比率而確定gD蛋白的劑量。在另一實施方式中，所述 比率是1:400 (本申請實施例中所用的gD-l蛋白與人類免疫接種所採用的 gD-2之間的比率)。在另一實施方式中，所述比率是1:100。在另一實施方式 中，所述比率是1:150。在另一實施方式中，所述比率是1:300。在另一實施 方式中，所述比率是1:500。在另一實施方式中，所述比率是1:600。在另一 實施方式中，所述比率是1:700。在另一實施方式中，所述比率是1:800。在 另一實施方式中，所述比率是1:900。在另一實施方式中，所述比率是1:1000。 在另一實施方式中，所述比率是1:1200。在另一實施方式中，所述比率是 1:1500。在另一實施方式中，所述比率是1:2000。在另一實施方式中，所述比 率是1:3000。在另一實施方式中，所述比率是1:4000。在另一實施方式中， 經驗性確定用於人類免疫接種的gD蛋白的劑量。在另一實施方式中，所述比 率是1:5000。
在另一實施方式中，總重組gD蛋白(gD-l蛋白和gD-2蛋白)的劑量是上 述量之一。在另一實施方式中，採用本發明的佐劑能夠獲得較低的gD的有效 劑量。在另一實施方式中，通過將gD與誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體 的gC免疫原相組合，能夠獲得較低的gD的有效劑量。在另一實施方式中， 通過將gD與本發明的佐劑和誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫 原這兩者相組合，能夠獲得更為較低的gD的有效劑量。
在另一實施方式中，通過將gD與誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的 gE免疫原相組合，能夠獲得較低的gD的有效劑量(例如，在人類每劑需要IO 微克，而非20微克)。在另一實施方式中，需要15微克，而非20微克。在另 一實施方式中，需要12微克，而非20微克。在另一實施方式中，需要8微 克，而非20微克。在另一實施方式中，需要7微克，而非6微克。在另一實 施方式中，需要5微克，而非20微克。在另一實施方式中，需要3微克，而 非20微克。在另一實施方式中，所述需要量的降低是在此所述的任何量。
在另一實施方式中，通過將gD與本發明的佐劑和誘導阻斷gE的免疫逃 避功能的抗體的gE免疫原這兩者相組合能夠獲得較低的gD的有效劑量。在另一實施方式中，通過將gD與誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的
gE免疫原和誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合能 夠獲得較低的gD的有效劑量。在另一實施方式中，通過將gD與(a)本發明的 佐劑、(b)誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原和(c)誘導阻斷gC 的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合能夠獲得更為較低的gD的 有效劑量。
在另一實施方式中，在本發明的初始免疫接種中使用上述gD劑量之一。 在另一實施方式中，上述gD劑量可指的是gD-l、 gD-2、或其組合的劑量。 每一可能性和每一劑量的gD代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物的中所用的重組HSV gC蛋 白的劑量20微克/接種。在一個實施方式中，"蛋白質"指的是重組HSV糖蛋 白，或在另一實施方式中，指的是它的片段。在另一實施方式中，所述劑量 是25微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實施 方式中，所述劑量是40微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是60微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是70微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是90微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是 100微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是110微克/接種。在另一實施 方式中，所述劑量是100微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是120微 克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是130微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是140微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是150微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是160微克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是170微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是180微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是220 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是250微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是270微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是350微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是400微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是450微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是10微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是25微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是22微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實施方式中，
所述劑量是16微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是15微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是 13微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實施方 式中，所述劑量是11微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5微 克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是3微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是1.5微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是l 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是0.5微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量小於1微克/接種。
在另一實施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實施方式 中，所述劑量小於0.02微克/kg。
在另一實施方式中，所述劑量是30-60微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是40-80微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-100微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-150微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是100-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200-300微 克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300-400微克/蛋白/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是1-2微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-3 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是4-8微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實施方式中，所
述劑量是5-15微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10-20微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實施方式中，所述 劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實施方式中，所述劑量是40-60微克/接 種。
在另一實施方式中，所述劑量是0.01-0.02微克/kg體重(每次注射)。在另 一實施方式中，所述劑量是0.02-0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量 是0.02-0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.03-0.06微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04-0.08微克/kg。在另一實施方式中，所述劑 量是0.05-0.1微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05-0.15微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.1-0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量 是0.2-0.3微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.3-0.4微克/kg。在另一 實施方式中，所述劑量是0.4-0.6微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.5-0.8微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.8-1微克/kg。
在另一實施方式中，通過從動物研究推定出人的數據而確定用於人類免 疫接種的gC蛋白的劑量。在另一實施方式中，通過使用在人與小鼠的對比研 究中發現的有效的蛋白比率而確定用於人類的所述劑量。在另一實施方式中， 所述比率是1:400。在另一實施方式中，所述比率是1:100。在另一實施方式 中，所述比率是1:150。在另一實施方式中，所述比率是1:300。在另一實施 方式中，所述比率是1:500。在另一實施方式中，所述比率是1:600。在另一 實施方式中，所述比率是1:700。在另一實施方式中，所述比率是1:800。在 另一實施方式中，所述比率是1:900。在另一實施方式中，所述比率是1:1000。 在另一實施方式中，所述比率是1:1200。在另一實施方式中，所述比率是 1:1500。在另一實施方式中，所述比率是1:2000。在另一實施方式中，所述比 率是1:3000。在另一實施方式中，所述比率是1:4000。在另一實施方式中， 經驗性確定用於人類免疫接種的gC蛋白的劑量。在另一實施方式中，所述比 率是1:5000。
在另一實施方式中，總重組gC蛋白(gC-l蛋白和gC-2蛋白)的劑量是上 述量之一。在另一實施方式中，釆用本發明的佐劑能夠獲得較低的總重組gC 蛋白的有效劑量。
在另一實施方式中，使用本發明的佐劑能夠獲得較低的gC的有效劑量。在另一實施方式中，通過將gC與誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE 免疫原相組合，能夠獲得較低的gC的有效劑量。在另一實施方式中，通過將
gC與本發明的佐劑和誘導阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原這兩者 相組合，能夠獲得更為較低的gC的有效劑量。
在另一實施方式中，在本發明的初始免疫接種中使用上述gC劑量之一。 在另一實施方式中，上述gC劑量可指的是gC-l、 gC-2、或其組合的劑量。 每一可能性和每一劑量的gC代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物的中所用的重組HSVgE蛋白 的劑量20微克/接種。在一個實施方式中，"蛋白質"指的是重組HSV糖蛋白， 或在另一實施方式中，指的是它的片段。在另一實施方式中，所述劑量是25 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是40微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是60微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是70微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是80微克/接種。在另一實施 方式中，所述劑量是90微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是100微克 /接種。在另一實施方式中，所述劑量是110微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是100微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是120微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是130微克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是140微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是150微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是160微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是170 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是180微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是220微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是250微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是270微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是350微克/接種。在另一實施方式中，所述劑 量是400微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是450微克/接種。在另一 實施方式中，所述劑量是500微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是IO 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是25微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是22微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量 是16微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是15微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是13微克/
接種。在另一實施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是ll微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是io微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是8 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是5微克/接種。在另 一實施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是3 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是1.5微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是l微克/接種。在 另一實施方式中，所述劑量小於1微克/接種。
在另一實施方式中，所述劑量是O.l微克/kg體重(每次接種)。在另一實 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實施方式 中，所述劑量小於0.02微克/kg。
在另一實施方式中，所述劑量是30-60微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是40-80微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-100微克/ 接種。在另一實施方式中，所述劑量是50-150微克/接種。在另一實施方式中， 所述劑量是100-200微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是200-300微 克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是300-400微克/蛋白/接種。在另一實 施方式中，所述劑量是1-2微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-3 微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在另一實施方式 中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是4-8微克/接 種。在另一實施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實施方式中，所 述劑量是5-15微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是10-20微克/接種。 在另一實施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實施方式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實施方式中，所述劑量是40-60微克/接 種。
在另一實施方式中，所述劑量是0.01-0.02微克/kg體重(每次注射)。在另 一實施方式中，所述劑量是0.02-0.03微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量 是0.02-0.04微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.03-0.06微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.04-0.08微克/kg。在另一實施方式中，所述劑 量是0.05-0.1微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.05-0.15微克/kg。在 另一實施方式中，所述劑量是0.1-0.2微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量 是0.2-0.3微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.3-0.4微克/kg。在另一 實施方式中，所述劑量是0.4-0.6微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是 0.5-0.8微克/kg。在另一實施方式中，所述劑量是0.8-1微克/kg。
在另一實施方式中，通過從動物研究推定出人的數據而確定用於人類免 疫接種的gE蛋白的劑量。在另一實施方式中，通過使用在人與小鼠的對比研 究中發現的有效的蛋白比率而確定用於人類的所述劑量。在另一實施方式中， 所述比率是1:400。在另一實施方式中，所述比率是1:100。在另一實施方式 中，所述比率是1:150。在另一實施方式中，所述比率是1:300。在另一實施 方式中，所述比率是1:500。在另一實施方式中，所述比率是1:600。在另一 實施方式中，所述比率是1:700。在另一實施方式中，所述比率是1:800。在 另一實施方式中，所述比率是1:900。在另一實施方式中，所述比率是1:1000。 在另一實施方式中，所述比率是1:1200。在另一實施方式中，所述比率是 1:1500。在另一實施方式中，所述比率是1:2000。在另一實施方式中，所述比 率是1:3000。在另一實施方式中，所述比率是1:4000。在另一實施方式中， 經驗性確定用於人類免疫接種的gE蛋白的劑量。在另一實施方式中，所述比 率是1:5000。
在另一實施方式中，總重組gE蛋白(gE-l蛋白和gE-2蛋白)的劑量是上 述量之一。在另一實施方式中，採用本發明的佐劑能夠獲得較低的總重組gE 蛋白的有效劑量。
在另一實施方式中，使用本發明的佐劑能夠獲得較低的gE的有效劑量。 在另一實施方式中，通過將gE與誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC 免疫原相組合，能夠獲得較低的gE的有效劑量。在另一實施方式中，通過將 gE與本發明的佐劑和誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合，能夠獲得更為較低的gE的有效劑量。
在另一實施方式中，在本發明的初始免疫接種中使用上述gE劑量之一。
在另一實施方式中，上述gE劑量可指的是gE-l、 gE-2、或其組合的劑量。每 一可能性和每一劑量的gE代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，重組gE蛋白的劑量是上述量之一。在另一實施方式 中，使用本發明的佐劑能夠獲得較低的gE的有效劑量。在另一實施方式中， 通過將gE與誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原相組合，能夠 獲得較低的gE的有效劑量。在另一實施方式中，通過將gE與本發明的佐劑 和誘導阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合，能夠獲得 更為較低的gE的有效劑量。每一可能性和每一劑量的gE代表了本發明的一 個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，糖蛋白的"有效劑量"指的是引發在後續攻擊過程中明 顯阻斷HSV病毒的免疫逃避功能的抗體所需的劑量。在另一實施方式中，該 術語指的是引發在後續攻擊過程中有效阻斷HSV病毒的免疫逃避功能的抗體 所需的劑量。在另一實施方式中，該術語指的是引發在後續攻擊過程中明顯 降低HSV病毒的感染性的抗體所需的劑量。
每一重組糖蛋白的每一劑量及其各種組合代表了本發明的一個單獨的實 施方式。
用於(例如在人類對象中)測定免疫原的劑量的方法是本領域熟知的，且包 括，例如，劑量升級試驗。每一方法代表了本發明的一個單獨的實施方式。
在另一實施方式中，將本文所證實的策略用於另一種病毒和/或另一種病 原體。在另一實施方式中，使用聯合亞單位疫苗，其既含有在感染中起作用 的第一蛋白質，也含有一種(多於一種)具有免疫逃避功能的第二蛋白質，由此， 所述疫苗引發的針對所述第二蛋白質的抗體阻斷免疫逃避功能。
在另一實施方式中，本發明提供用於改進現有的HSV-1疫苗的方法，所 述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gC-l的免疫逃避特性的重組gC-l蛋 白與佐劑的組合；和(2)加入重組gD蛋白，並將所得疫苗與僅含有佐劑和 gD蛋白的疫苗進行比較。
在另一實施方式中，本發明提供用於改進現有的HSV-1疫苗的方法，所 述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gE-l的免疫逃避特性的重組gE-l蛋 白與佐劑的組合；禾口 (2)加入重組gD蛋白，並將所得疫苗與僅含有佐劑和gD蛋白的疫苗進行比較。
在另一實施方式中，本發明提供用於改進現有的HSV-1疫苗的方法，所
述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gC-l和gE-l的免疫逃避特性的重組
gC-l蛋白、重組gE-l蛋白和佐劑的組合；和(2)加入重組gD蛋白，並將所 得疫苗與僅含有佐劑和gD蛋白的疫苗進行比較。
在另一實施方式中，本發明提供用於改進現有的HSV-2疫苗的方法，所 述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gC-2的免疫逃避特性的重組gC-2蛋 白與佐劑的組合；和(2)加入重組gD蛋白，並將所得疫苗與僅含有佐劑和 gD蛋白的疫苗進行比較。
在另一實施方式中，本發明提供用於改進現有的HSV-2疫苗的方法，所 述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gE-2的免疫逃避特性的重組gE-2蛋 白與佐劑的組合；禾Q (2)加入重組gD蛋白，並將所得疫苗與僅含有佐劑和 gD蛋白的疫苗進行比較。
在另一實施方式中，本發明提供用於改進現有的HSV-2疫苗的方法，所 述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gC-2和gE-2的免疫逃避特性的重組 gC-2蛋白、重組gE-2蛋白和佐劑的組合；和(2)加入重組gD蛋白，並將所 得疫苗與僅含有佐劑和gD蛋白的疫苗進行比較。
在一些實施方式中，任何本發明的HSV疫苗和用於本發明的方法的HSV 疫苗將包含本文所述的任何形式或實施方式中的本發明的HSV蛋白或HSV 蛋白的組合。在一些實施方式中，任何所述HSV疫苗和用於所述方法的HSV 疫苗將由本文所述的任何形式或實施方式中的本發明的HSV蛋白或HSV蛋 白的組合組成。在一些實施方式中，本發明的HSV疫苗將基本上由本文所述 的任何形式或實施方式中的本發明的HSV蛋白或HSV蛋白的組合組成。在 一些實施方式中，術語"包含"指的是包括其他重組HSV蛋白以及包括本領域 已知的其他蛋白質。在一些實施方式中，術語"基本上由...組成"指的是具有特 定HSV蛋白或其片段的疫苗。不過，還可包括不直接參與HSV蛋白的使用 的其他肽。在一些實施方式中，術語"由...組成"指的是具有本文所述的任何形 式或實施方式中的本發明的具體HSV蛋白或片段或HSV蛋白或片段的組合 的疫苗。
在另一實施方式中，本發明提供用於治療HSV-1或其症狀或表現的組合 物，所述組合物包含本發明的疫苗。在另一實施方式中，本發明提供用於治療HSV-2或其症狀或表現的組合
物，所述組合物包含本發明的疫苗。
在本發明的方法的另一實施方式中，本發明的疫苗僅施用一次。在另一
實施方式中，所述疫苗施用2次。在另一實施方式中，所述疫苗施用3次。 在另一實施方式中，所述疫苗施用4次。在另一實施方式中，所述疫苗施用 至少4次。在另一實施方式中，所述疫苗施用4次以上。在另一實施方式中， 所述疫苗被施用於分開的部位，其中將gD與gC或gE分開。在另一實施方 式中，所述疫苗以1周的間隔施用。在另一實施方式中，所述疫苗以2周的 間隔施用。在另一實施方式中，所述疫苗以3周的間隔施用。在另一實施方 式中，所述疫苗以4周的間隔施用。在另一實施方式中，所述疫苗以1個月 的間隔施用。
應該理解，本發明的組合物/疫苗和方法同樣可用於非HSV皰疹病毒，在 一個實施方式中，所述非HSV皰疹病毒包含gD、 gE、或gC蛋白，在一個實 施方式中，它們與HSV-l的gD、 gE、或gC蛋白，或在另一實施方式中，與 HSV-2的gD、 gE、或gC蛋白具有70。/。的同源性，在另一實施方式中，具有 80°/。的同源性，在另一實施方式中，具有85%的同源性，在另一實施方式中， 具有90%的同源性，在另一實施方式中，具有95%的同源性，在另一實施方 式中，具有98%的同源性，而在另一實施方式中，具有100%的同源性。在一 個實施方式中，此類疫苗可用於壓制、抑制、預防、或治療癌症，或在另一 實施方式中，可用於壓制、抑制、預防、或治療腫瘤。在一個實施方式中， 非HSV皰疹病毒包括水痘帶狀皰疹病毒(VZV)、 Epstein-Barr病毒(EBV)、 EBNA、巨細胞病毒(CMV)、和人皰疹病毒-6(HHV-6)。
在另一實施方式中，本發明的重組蛋白與本文前面給出的序列(無論是直 接給出還是引用GenBank登錄號)具有同源性。所述術語"同源性"、"同源"等， 當其涉及任何蛋白或肽時，在一個實施方式中其指的是，在將序列對齊並在 必要時引入缺口以達到最大百分比同源性後，且不將保守性取代視為序列相 同性的一部分的情況下，候選序列上與相應的天然多肽的殘基相同的AA殘 基的百分比。用於比對的方法和算法是本領域已知的。
在另一實施方式中，採用本領域熟知的方法通過用於序列比對的計算機 算法確定同源性。例如，核酸序列同源性的計算機算法分析包括使用已有的 任何軟體包，例如，BLAST、 DOMAIN、 BEAUTY (BLAST Enhanced AlignmentUtility)、 GENPEPT和TREMBL軟體包。
在另一實施方式中，"同源性"指的是與選自SEQIDNo:l-6的序列的相同 性大於70%。在另一實施方式中，"同源性"指的是與選自SEQIDNo:l-6的序 列的相同性大於72%。在另一實施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6 之一的相同性大於75%。在另一實施方式中，"同源性"指的是與選自SEQID No:l-6的序列的相同性大於78%。在另一實施方式中，"同源性"指的是與SEQ IDNo:l-6之一的相同性大於80%。在另一實施方式中，"同源性"指的是與SEQ IDNo:l-6之一的相同性大於82。/。。在另一實施方式中，"同源性"指的是與選 自SEQ ID No:l-6的序列的相同性大於83%。在另一實施方式中，"同源性" 指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同性大於85n/。。在另一實施方式中，"同源 性"指的是與SEQ ID No:l-6之一的相同性大於87%。在另一實施方式中，" 同源性"指的是與選自SEQ ID No:l-6的序列的相同性大於88%。在另一實施 方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同性大於900/。。在另一實 施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同性大於92%。在另一 實施方式中，"同源性"指的是與選自SEQ ID No:l-6的序列的相同性大於93%。 在另一實施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同性大於95。/。。 在另一實施方式中，"同源性"指的是與選自SEQIDNo:l-6的序列的相同性大 於96%。在另一實施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同性 大於97%。在另一實施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同 性大於98%。在另一實施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相 同性大於99%。在另一實施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的 相同性為100%。
在另一實施方式中，通過確定候選序列的雜交而確定同源性，其中的方 法在現有技術中已經公開(見例如，"Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., and Higgins S. J., Eds。 (1985); Sambrook et al., 2001， Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, N. Y.; 禾卩Ausubel et al., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N. Y)。在其他實施方式中，在對於編碼天然caspase肽的DNA的 互補體而言是中等至嚴格性條件下進行雜交方法。雜交條件為，例如，在以 下溶液中溫育過夜，42°C，所述溶液包含10-20%甲醯胺、5XSSC(150mM NaCl, 15mM枸櫞酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH 7.6)、 5X登哈特溶液、10%硫酸葡聚糖、和20pg/ml變性的剪切的鮭精DNA。
在另一實施方式中，蛋白質和/或肽與本文所述的任何AA序列的同源性 可通過本領域熟知的方法確定，這些方法包括免疫印跡分析，或通過計算機 算法分析AA序列，採用任何已有軟體包以及成熟的方法。這些軟體包中的 一些包括FASTA、 BLAST、 MPsrch或Scanps軟體包，且在另一實施方式中， 例如，使用Smith和Waterman的算法、和/或global/local或BLOCKS算法。 每一種用於確定同源性的方法代表了本發明的 一個單獨的實施方式。
在一個實施方式中，"變體"指的是如下所述的胺基酸或核酸序列(或在其 他實施方式中，指的是生物體或組織)，所述序列不同於群體中的大多數，但 仍與共同模式具有足夠的相似性，且因此被認為是該群體中的一個，例如剪 接變體。在一個實施方式中，所述變體可以是序列保守性變體，而在另一實 施方式中，所述變體可以是功能保守性變體。在一個實施方式中，變體可包 含1個胺基酸的添加、缺失或取代。在一個實施方式中，變體可包含2個氨 基酸的添加、缺失、取代或它們的組合。在一個實施方式中，變體可包含3 個胺基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一個實施方式中，變體可包 含4個胺基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一個實施方式中，變體 可包含5個胺基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一個實施方式中， 變體可包含7個胺基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一個實施方式 中，變體可包含10個胺基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一個實施 方式中，變體可包含2-15個胺基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一 個實施方式中，變體可包含3-20個胺基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。 在一個實施方式中，變體可包含4-25個胺基酸的添加、缺失或取代或它們的 組合。
在一個實施方式中，"異構體"指的是分子(例如，蛋白質)的這樣一種形式， 其與同一蛋白質的另一種異構體僅有微小的差異。在一個實施方式中，異構 體可由不同但相關的基因產生，或在另一實施方式中，可由同一基因通過替 代性剪接而產生。在另一實施方式中，異構體由單核苷酸多態性產生。
在另一實施方式中，本發明的方法和組合物使用嵌合分子，其包含重組 HSV蛋白與標籤多肽的融合體，所述標籤多肽提供被抗標籤抗體選擇性結合 的表位。在其他實施方式中，表位標籤被置於該蛋白質的氨基末端或羧基末 端，或置於其內部的位置處。在另一實施方式中，使用抗所述標籤多肽的抗體來檢測此類表位標記形式的重組HSV蛋白的存在。在另一實施方式中，納
入表位標籤使得重組HSV蛋白能夠通過親和純化被容易地純化，其中使用抗
標籤抗體或結合表位標籤的其他類型的親和基質。本領域已知多種標籤多肽
及其相應的抗體。實例包括多組氨酸(poly-his)或多組氨酸甘氨酸(poly-his-gly) 標籤；流感HA標籤多肽及其抗體12CA5 (Field et al, Mol. Cell. Biol.， 8: 2159-2165 (1988)); c-myc標籤及其8F9、 3C7、 6E10、 G4、 B7和9E10抗體 (Evan et al， Molecular and Cellular Biology, 5: 3610-3616 (1985));和單純皰疹病 毒糖蛋白D (gD)標籤及其抗體(Paborsky et al, Protein Engineering, 3(6): 547-553 (1990))。其他標籤多肽包括Flag-肽(Hopp et al, BioTechnology， 6: 1204-1210 (1988》;KT3表位肽(Martin et al, Science, 255: 192-194 (1992));微 管蛋白表位肽(Skinner et al， J. Biol. Chem.， 266:15163-15166 (1991));和T7基 因10蛋白肽標籤(Lutz-Freyermuth et al， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87: 6393-6397 (1990))。在另一實施方式中，所述嵌合分子包含重組HSV蛋白與 免疫球蛋白或免疫球蛋白的特定部分的融合體。構建融合蛋白的方法是本領 域熟知的，並可參見例如，LaRochelle et al, J. Cell Biol" 139(2): 357-66 (1995); Heidaran et al, FASEB J" 9(1): 140-5 (1995); Ashkenazi et al， Int. Rev. Immunol" 10(2-3): 219-27 (1993)和Cheon et al， PNAS USA， 91(3): 989-93 (1994)。
在另一實施方式中，本發明提供試劑盒，其包含用於實施本發明的方法 的疫苗。在另一實施方式中，本發明提供試劑盒，其包含本發明的疫苗。
在另一實施方式中，"施用"指的是通過注射或其他方式將本發明的組合物 直接引入對象。在另一實施方式中，"施用"指的是使對象免疫系統的細胞與疫 苗或重組HSV蛋白或它們的混合物相接觸。
藥物組合物和施用方法
在另一實施方式中，本發明的方法包括施用重組HSV蛋白和藥用可接受 載體。在另一實施方式中，可通過任何本領域已知的方法將含有疫苗的藥物 組合物施用於對象，例如通過胃腸外、經黏膜、經皮、肌肉內、靜脈內、皮 內、鼻內、皮下、腹腔內、腦室內、顱內、或陰道內。在另一實施方式中， 通過表皮注射而施用本發明的疫苗，在另一實施方式中，通過肌肉注射，在 另一實施方式中，通過皮下注射，而在另一實施方式中，通過呼吸道內黏膜 注射。在本發明的方法和組合物的另一實施方式中，口服施用所述藥物組合物， 且因此所述藥物組合物被配製為適合於口服施用的形式，即，固體或液體制 劑。合適的固體口服配製品包括片劑、膠囊、丸劑、顆粒劑、藥丸等等。合 適的液體口服配製品包括溶液、懸液、分散劑、乳劑、油劑等等。在本發明 的另一實施方式中，疫苗被配製為膠囊。在另一實施方式中，本發明的組合 物包括硬凝膠化膠囊。
在另一實施方式中，通過靜脈、動脈、或肌肉內注射液體製劑而施用所 述藥物組合物。合適的液體配製品包括溶液、懸液、分散劑、乳劑、油劑等 等。在另一實施方式中，所述藥物組合物通過靜脈施用且因此被配製為適合 於靜脈施用的形式。在另一實施方式中，所述藥物組合物通過動脈內施用且 因此被配製為適合於動脈內施用的形式。在另一實施方式中，所述藥物組合 物通過肌肉內施用且因此被配製為適合於肌肉內施用的形式。
在另一實施方式中，所述藥物組合物局部施用於肌體表面且因此被配製 為適合於局部施用的形式。合適的局部配製品包括凝膠、軟膏、乳膏劑、洗 劑、滴劑等等。
在另一實施方式中，所述藥物組合物作為栓劑施用，例如直腸栓劑或尿 道栓劑。在另一實施方式中，所述藥物組合物通過皮下植入藥丸而施用。在 另一實施方式中，所述藥丸在一段時間內提供抗原劑的控制釋放。
在另一實施方式中，所述疫苗被置於囊泡例如脂質體內輸送。
在其他實施方式中，本發明的方法中使用的載體或稀釋劑包括，但不限 於，樹膠、澱粉(例如玉米澱粉、預膠化澱粉)、糖(例如乳糖、甘露醇、蔗糖、 葡萄糖)、纖維素材料(例如微晶纖維素)、丙烯酸酯(例如聚甲基丙烯酸酯)、碳 酸鈣、氧化鎂、滑石粉、或其混合物。
在其他實施方式中，用於液體配製品的藥用可接受載體是水性或非水性 溶液、懸液、乳劑或油劑。非水性溶劑的實例是丙二醇、聚乙二醇、和注射 用有機酯例如油酸乙酯。水性載體包括水、醇/水溶液、乳劑或懸液，包括鹽 和緩衝介質。油劑的實例是那些動物、植物或合成來源的油，例如，花生油、 大豆油、橄欖油、葵花子油、魚肝油、其他海魚油、或來自乳或卵的脂質。
在另一實施方式中，胃腸外載體(用於皮下、靜脈、動脈內、或肌肉注射) 包括氯化鈉溶液、林格葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸鹽林格和非揮發性油。 靜脈載體包括體液和營養補充液、電解質補充液例如那些基於林格葡萄糖的溶液等等。實例為無菌液體，例如水和油，添加或未添加表面活性劑和其他 可藥用佐劑。通常，水、鹽、水性葡萄糖和相關的糖溶液、以及醇例如丙二 醇或聚乙二醇是優選的液體載體，特別適合於注射用溶液。油劑的實例為那 些來自動物、植物或合成來源的油，例如，花生油、大豆油、橄欖油、葵花 子油、魚肝油、其他海魚油、或來自乳或卵的脂質。
在其他實施方式中，所述組合物還包括粘合劑(例如阿拉伯膠、玉米澱粉、 明膠、卡波姆、乙基纖維素、瓜爾膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、 聚維酮)、崩解劑(例如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、海藻酸、二氧化矽、交聯羧甲 纖維素鈉、交聚維酮、瓜爾膠、澱粉羥乙酸鈉)、各種pH和離子強度的緩衝
液(例如Tris-HCl、乙酸、磷酸)、用於防止吸附於表面的添加劑例如白蛋白或 明膠、去垢劑(例如吐溫20、吐溫80、普流尼克F68、膽汁酸鹽類)、蛋白酶 抑制劑、表面活性劑(例如十二烷基硫酸鈉)、滲透促進劑、增溶劑(例如甘油、 聚乙二醇)、抗氧化劑(例如抗壞血酸、偏亞硫酸氫鈉、丁羥茴醚)、穩定劑(例 如羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素)、增粘劑(例如卡波姆、膠體二氧化矽、 乙基纖維素、瓜爾膠)、甜味劑(例如阿司帕坦、檸檬酸)、防腐劑(例如硫柳汞、 苯甲醇、對羥苯甲酸類)、潤滑劑(例如硬脂酸、硬脂酸鎂、聚乙二醇、十二垸 基硫酸鈉)、助流劑(例如膠體二氧化矽)、成形劑(例如酞酸二乙酯、擰檬酸三 乙酯)、乳化劑(例如卡波姆、羥丙基纖維素、十二烷基硫酸鈉)、高分子包衣(例 如泊洛沙姆或poloxamines)、包衣和膜形成劑(例如乙基纖維素、丙烯酸鹽類、 聚甲基丙烯酸酯)和/或佐劑。每一上述賦形藥代表了本發明的一個單獨的實施 方式。
在另一實施方式中，本發明的藥物組合物是控釋組合物，即，該組合物 中的抗原在施用後的一段時間內釋放。控釋或緩釋組合物置於親脂長效劑(例 如脂肪酸、石蠟、油)中的配製品。在另一實施方式中，所述組合物是即時釋 放組合物，即，該組合物中的所有抗原在施用後立即釋放。
在另一實施方式中，所述藥物組合物置於控釋系統內輸送。在另一實施 方式中，採用靜脈輸注、植入型滲透泵、透皮貼劑、脂質體或其他施用方式 施用所述藥劑。在另一實施方式中，使用泵(參見，Langer，見上；Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al， Surgery 88:507 (1980); Saudeketal， N.Engl. J. Med. 321:574(1989)。在另一實施方式中，使用高分子 材料；例如置於微球或置於植入物內。在另一實施方式中，組合物還包括將活性物質摻入聚合化合物的顆粒制 劑內部或上面，例如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝膠類等等，或摻入至脂質體、 微乳劑、微膠粒、單層或多層囊泡、血影、或球粒體上面。此類組合物將影 響物理狀態、溶解性、穩定性、體內釋放速度、和體內清除速度。
本發明還包括聚合物(例如泊洛沙姆或poloxamines)包衣的顆粒組合物， 且化合物偶聯於針對組織特異性受體、配體或抗原的抗體，或偶聯於組織特 異性受體的配體。
本發明還包括通過與水溶性聚合物例如聚乙二醇、聚乙二醇和聚丙二醇 的共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯垸酮或聚脯氨 酸共價附著而修飾的化合物。已知與相應的非修飾的化合物相比，所述修飾 的化合物在靜脈注射後展現出顯著更長的血液半衰期(Abuchowski et al, 1981; Newmarketal, 1982;和Katre et al, 1987)。在另一實施方式中，此類修飾還包 括增加所述化合物在水溶液內的溶解性，消除凝集，增強化合物的物理和化 學穩定性，並極大地降低化合物的免疫原性和反應性。在另一實施方式中， 通過更低頻率地施用此類聚合物-化合物加合物或相對於未修飾化合物而言施 用較低的劑量，即可實現所需的體內生物學活性。
含有活性成分的藥物組合物的製備是本領域熟知的，例如通過混合、粒 化、或壓片處理。在另一實施方式中，將活性成分在組合物中配製為中性的 可藥用鹽的形式。可藥用鹽包括酸加成鹽(與多肽或抗體分子的游離氨基形 成)，其可以是與無機酸形成的，例如鹽酸或磷酸，或者是與有機酸形成的， 例如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等等。所述鹽也可以是游離羧基與無機鹼 和有機鹼形成的，無機鹼例如氫氧化鈉、鉀、銨、鈣或鐵，而有機鹼例如異 丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因、等等。
每一上述添加劑、賦形劑、配製品和施用方法代表了本發明的一個單獨 的實施方式。
應該理解，本發明還涵蓋組合物，如本文所述的疫苗那樣，其包含一或 多種重組單純皰疹病毒(HSV)蛋白質，所述蛋白質選自gD蛋白、gC蛋白和 gE蛋白。
實驗詳情部分實施例1: HSV-1 gC-l亞單位疫苗可保護抵抗HSV-1感染
材料和方法(實施例1-2)
玫魄乾結抑刮武獫
用WT HSV-1以感染複數(MOI)為2感染Vero細胞20小時。向感染的細 胞加入IgG， l小時，室溫。加入C3b包被的綿羊紅細胞，l小時，37°C，光 學顯微鏡觀察玫瑰花結。計算形成C3b包被的紅細胞的玫瑰花結的細胞百分 數，如下(結合了4個或更多個紅細胞的細胞數/計數的細胞總數)x100。/。。 C3b包被的玫瑰花結被抑制表明存在阻斷C3b結合於gC-l的抗體。
氛側屣部棋型
5-7周齡的BALB/c或C57B1/6雌性小鼠(Charles River, Wilmington, MA) 或C3敲除小鼠被麻醉，將小鼠側腹部剔毛並化學脫毛。16-20小時後，通過 加入10 pl含有5 X 104或5 X 105 PFU的純化的HSV-1 WT病毒並用30號針 頭的斜面刮擦皮膚而感染小鼠。對接種部位的疾病進行評分紅斑或腫脹但 無小水皰為0.5分，而每一單個的小水皰評為1分，最高每日總評分為5。如 果病灶融合，則基於病變的大小最高評為5分。帶狀皰疹樣疾病的評分與此 類似，不同之處在於最高每日評分為10，因為在更大的受累皮膚面積上能夠 計數到更多的病灶。對於以HSV-2進行的一些實驗(圖16A和16B)，評分系 統進行了改進，以便區分開疾病譜的嚴重端的動物，因為HSV-2導致的側腹 部疾病比HSV-1更加嚴重。在接種部位，評分分為0-3，其中O代表無疾病， l代表發紅或孤立的病變，2代表潰瘍，而3代表具有組織壞死的區域。在帶 狀皰疹樣部位，評分分為0-4，其中O代表無疾病，l代表孤立的病變，2代 表融合的病變，3代表潰瘍，而4代表具有組織壞死的區域。
疚結
疫苗含有重組HSV-1 bac-gD-l(306t) (AA 26-306，具有C-末端6 His標籤) 和HSV-1 bac-gC-l片段(AA 26-457，以5 His標籤修飾)。
結果
gC-l亞單位疫苗的最佳劑量:本實驗通過測定抑制C3b結合於gC-l， 確定了產生能夠阻斷免疫逃避的抗gC抗體的gC-l免疫的劑量。小鼠被假免 疫或用O.l、 1、或10嗎的gC-l免疫，並採用玫瑰花結形成試驗測試所得血 清阻斷C3b結合的能力(圖1，左側)。以10嗎的gC-l免疫的小鼠產生的抗gC抗體阻斷了 85%玫瑰花結形成(圖1，右側)。然後以致死量的HSV-1攻擊 小鼠，並在攻擊後3至7天對接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病進行評分(圖 2A和B)。 gC-l免疫每一顯著改變接種部位的疾病，但與假免疫小鼠相比帶 狀皰疹樣疾病減少(P < .001)。
攻擊後14天對假免疫和gC-l免疫的小鼠的存活率進行評分。lO嗎gC-l 組40%存活，而更低劑量組無存活。因此，以10 pg gC-l免疫可產生保護小 鼠免於帶狀皰疹樣疾病和死亡的抗體。
實施例2:聯合gC-l/gD-l疫苗賦予比僅含gD-l或gC-l的疫苗更優越的保護 gD-l亞單位疫苗的最佳劑量:使用小鼠側腹部模型來確定部分保護小鼠 免於疾病的gD-l劑量，以模擬部分保護性gD-l亞單位疫苗。基於這些研究， 選擇50 ng的gD-l劑量；該劑量在接種部位提供輕微的保護，並提供針對帶 狀皰疹樣疾病的中等的保護(結果見圖3)。
gD-l和gC-l聯合亞單位疫苗:小鼠被假免疫或僅以gD-l(50ng)免疫或 以gD-l (50 ng)和gC-l (10 pg)兩者免疫，並以致死量的HSV-1攻擊(圖3)。在 施用gD-l/gC-l聯合疫苗的小鼠中，接種部位的疾病嚴重程度顯著降低(P < 0.02)，而帶狀皰疹樣部位疾病被完全預防，與僅gD-l或僅gC-l (圖2A和2B) 免疫相比，該結果具有顯著差異(P O.OOl)。此外，聯合疫苗組小鼠的存活率 為100% (圖4)。
因此，與含有僅gD-l或僅gC-l的疫苗相比，聯合gC-l/gD-l疫苗賦予更 優越的保護。
實施例3:聯合gC-l/gD-l疫苗預防後根神經節感染 材料和方法
感染後5天收集DRG。小鼠被安樂死，並在放大解剖顯微鏡下鑑定支配 接種處皮膚的神經節。取出神經節並在DMEM中勻漿，通過噬斑分析滴定神 經節內的病毒。
結果
HSV-1在後根神經節(DRG)內的神經元細胞體內潛伏。為測試以gD-l和 gC-l免疫是否預防DRG感染，致死量的HSV-1攻擊後5天(峰效價時間)收集DRG。以gD-l和gC-l免疫的小鼠無感染性病毒，而在假免疫或gD-l免疫的 小鼠中回收到病毒(圖5)。
因此，與僅以gD-l或gC-l免疫相比，聯合gC-l/gD-l疫苗更好地保護小 鼠免於疾病、死亡和DRG感染。
實施例4:以gD-l和gC-l免疫的小鼠中抗gC-l IgG介導的保護依賴於C3b 材料和方法 側服卻棋型
進行實驗證實抗gC-l IgG對小鼠的保護是通過阻斷gC-l與C3b之間的 相互作用而產生的。通過3次肌注混合了 CpG (# 1826， Coley Pharmaceuticals Group) (50 pg/小鼠)禾口鋁鹽(25 pg/jig蛋白)(Accurate Chemicals and Scientific Corp)的5嗎的gC-l對小鼠進行免疫。第三次免疫後2周獲取血清，免疫印 跡顯示血清與gC-l蛋白相互作用(結果未顯示)，並阻斷HSV-1感染的細胞上 形成C3b玫瑰花結(見圖1)。在蛋白G柱(Hi-TrapTM, Amersham Biosciences, Uppsala， Sweden)上從小鼠血清純化IgG，並測試其中和抗體活性。抗gDl單 克隆抗體DL11 (Eisenberg, RJ et al. J. Virol 53: 634-644， 1985)、抗gC-l單克隆 抗體1C8 (其結合gC-l上的與C3b相互作用並阻斷C3b與HSV-1感染的細胞 形成玫瑰花結的結構域)(Judson KA et al. J Virol 77: 12639-45， 2003)、和非免 疫鼠IgG用作對照。將大約80PFU的HSV-1 NS株與獲取自免疫的小鼠的抗 gC-lIgG、或與DLll、 1C8或非免疫鼠IgG溫育1小時，37°C。然後通過在 Vero細胞上的噬斑分析測定病毒效價。
為了測試抗gC-l IgG保護小鼠的能力，以抗gC-l IgG對補體完好的小鼠 (C57Bl/6)或C3敲除小鼠(C3KO)進行被動免疫，200 pg/小鼠，24小時後以5 x 105 HSV-1進行側腹部感染。評價小鼠的接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病， 進行11天。對照包括被動轉移1C8 (200嗎/小鼠)或非免疫鼠IgG (200 pg/小 鼠)。用於接種部位的疾病的評分系統為0是無疾病，以及根據接種部位病 變的大小評為1-5分。用於帶狀皰疹樣部位的疾病的評分系統為0是無疾病， 每一處病變評為l分，直至最高10分。在實驗終點前死亡的動物被賦予研究 過程中最後一次評價的分值。
結果DL11即便在0.1 pg/ml仍能高效中和HSV-1 ，而抗gC-l IgG在100 ng/ml (濃度高出3個logK))未能中和HSV-1 (圖6)。抗gC-l單克隆抗體1C8和非免 疫鼠IgG也未能中和HSV-l。小鼠抗gC-l IgG未能中和HSV-l，說明該抗體 所提供的保護作用不能歸於其中和活性。
圖7顯示了以抗gCl IgG或單克隆抗gC-l 1C8對補體完好的C57B1/6小 鼠或C3敲除(C3KO)小鼠進行被動免疫的保護作用。以抗gCl IgG或單克隆 抗gC-l 1C8進行被動免疫對接種部位疾病幾乎沒有影響(與非免疫IgG無統計 學差異)；不過，抗gClIgG或單克隆抗gC-l lC8極大減輕了C57Bl/6小鼠帶 狀皰疹樣部位的疾病(抗gC-l或1C8與非免疫IgG相比，P < .001)。與此不同， 抗gC-l IgG或1C8對C3KO小鼠幾乎沒有影響(比較抗gC-l或1C8與非免疫 IgG的接種部位或帶狀皰疹樣部位，沒有統計學差異)。
從這些實驗我們得出結論，抗gC-lIgG並不中和HSV-l，在補體完好的 小鼠中所檢測到的保護作用依賴於補體。這些結果支持圖l-5所給出的結果， 即，在gD-l免疫中加入gC-l，通過預防gC介導的免疫逃避提高了疫苗的功 效。
實施例5:來自多種毒株的gC2保護HSV-2免於受到正常人血清的補體介導 的中和作用
材料和方法(實施例5-11)
細胞和病嗇
非洲綠猴腎細胞(Vero)生長在DMEM培養基中，補充了 10%熱滅活的胎 牛血清，10 mM HEPES (pH 7.3), 2 mM L-穀氨醯胺，20 |ig/ml慶大黴素和1 (ig/ml兩性黴素B (Life Technologies, Rockville, MD)。通過以感染複數0.005 感染Vero細胞製備純化病毒集合物。收集感染後48小時的無細胞病毒上清 液，並在5%至70%蔗糖梯度上離心。
HSV-1 gC缺失突變體NS-gCnull衍生自NS株，稱為NS-gClnull。 gCl 蛋白編碼區被替換為置於HSV-1感染細胞蛋白6 (ICP6)早期啟動子控制下的 卩-半乳糖苷酶表達盒(Friedman et al., 1996. J. Virol. 70:4253-4260; Goldstein and Weller， 1988. J. Virol. 62:2970-2977)。野生型HSV-2毒株包括HSV-2(G)、 HSV-2(333)、和HSV-2.12，後者是分離自一 18歲女性的生殖道病變的低傳代 HSV-2分離物。HSV-2 gC缺失突變體衍生自HSV-2毒株G和毒株333，並分別稱為G-gC2null和333-gC2A。 G-gC2nu11病毒含有P-半乳糖苷酶基因，其取 代了gC2，而333-gC2A病毒在gC2中含有130-鹼基對的缺失，相應於0.613 至0.626圖距單位，這導致無gC2蛋白表達。通過以HSV-2.12 DNA和表達 ICP6::lacZ表達盒的側翼序列載體共轉染Vero細胞而從HSV-2.12構建 gC2-nul1毒株，其中ICP6::lacZ表達盒的側翼為gC2序列5，端的848 bp和gC2 序列3'端的738 bp，該表達盒取代了gC2蛋白編碼區的絕大部分，從起始位 點前的-lbp開始並延伸至終止位點前的16bp。產生了重組病毒，並通過藍斑 篩選分離到2.12-gC2nu11，且在使用前進行三次噬斑純化。 補體武刮
補體來源是獲取自4名健康成年志願者的HSV-l-非免疫人血清和HSV-2-非免疫人血清(稱為正常人血清[NHS])。血液在室溫凝固20分鐘並在4。C過夜， 然後分離血清，分裝，-80。C冷凍。通過在Children's Hospital of Philadelphia 的Clinical Virology Laboratory進行HSV酶聯免疫吸附測定(ELISA)以及本文 所述的病毒中和測定，確認了不存在HSV-l-特異性IgG抗體和HSV-2-特異性 IgG抗體。經Hospital of the University of Pennsylvania的Clinical Immunology Laboratory測定，來自各供者的血清具有正常的免疫球蛋白濃度。對於供者1， IgA為131 mg/dl (正常值為50至500 mg/dl); IgG為984 mg/dl (正常值為650 至2,000 mg/dl);和IgM為55 mg/dl (正常值為40至270 mg/dl)。對於供者2， IgA為147 mg/dl; IgG為1023 mg/dl;和IgM為205 mg/dl。對於供者3， IgA 為170 mg/dl; IgG為905 mg/dl;和IgM237mg/dl。對於供者4， IgA為253 mg/dl; IgG為1,140 mg/dl;和IgM為155 mg/dl。
當指出時，NHS被加熱至56。C達30分鐘以滅活補體。為了鑑定負責不 當中和的補體途徑，用lOmMEDTA處理NHS以滅活經典途徑、甘露聚糖結 合型植物凝集素途徑(mannan-binding lectin pathway)和替代途徑；8 mM EGTA 和2 mM MgS+處理以滅活經典途徑和甘露聚糖結合型植物凝集素途徑；以及 用100 mM D-甘露糖處理以幹擾甘露聚糖結合型植物凝集素途徑的活化。為 了幹擾C3活化，用濃度為40pM的小合成肽Compstatin(4W9A; Hook，etal. 2006. J. Virol. 80:4038-4046; Sahu， et al. 1996, J. Immunol. 157:884-891; Kase, et al. 1999, Immunology 97:385-392; Klepeis, et al. 2003, J. Am. Chem. Soc. 125:8422-8423)處理NHS，而40 [iM線性Compstatin用作無活性對照。
耗竭NHS中的IgM和補體成分通過加入30 mM EDTA並將血清通過抗人IgM柱(Sigma， St. Louis， MO) 而耗竭NHS中的IgM。IgM純化重複2次以耗竭90至95%的IgM。用含1 mM EDTA的磷酸緩衝鹽(PBS)透析血清以降低EDTA濃度，在用於中和實驗之前 補充1 mM Mg2+和2 mM Ca2+。
為了耗竭NHS的補體成分Clq、 C5、和C6，將針對Clq、 C5、或C6制 備的綿羊或山羊抗血清的IgG級份以10 mg/ml的IgG終濃度偶聯於溴化氰 -Sepharose (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway， NJ)，製備免疫吸附齊U柱。 濃縮分離的蛋白級份，並用含O.l mM EDTA的PBS透析血清以降低EDTA 濃度，並去除疊氮化鈉。用透析緩衝液恢復血清的原始體積，使用前補充1 mM Mg"和2 mM Ca2+。以550 pg/ml IgM、 100 jig/ml Clq、 75 pg/ml C5、或60 jig/ml C6 (Sigma， St. Louis, MO)重建補體耗竭的NHS以恢復生理學濃度。
純化的IgM
用抗IgM柱(Sigma, St. Louis, MO)自NHS純化IgM。集合含蛋白級份， 用PBS在4°C透析，使用50-kDa截斷值的膜超速離心進行濃縮，分裝後存放 於-80。C。
中和測走
純化的病毒與NHS或與熱滅活或EDTA滅活的血清或作為對照的PBS 溫育l小時，37°C。通過在Vero細胞上進行噬斑分析測定病毒效價。 測走經典補體逄徑逸血活性
通過將系列成倍稀釋的血清與抗體致敏的綿羊紅細胞(EA) (Sigma, St. Louis, MO)在96-孔微滴定板內37°C溫育45分鐘而測定NHS或補體成分耗竭 的血清的總溶血補體活性(CH5c)。 120 x g離心3分鐘去除完好的EA，上清液 轉移至新的96-孔板，通過分光光度法在405 nm測定溶解EA的百分比。
ELISA測定IgM與G-gC2null病毒的結合
將Dulbecco's PBS (pH 7.1)中的蔗糖梯度純化的G-gC2null病毒以2 x 106 PFU/孔加至96-孑LHigh Binding Costar微滴定板(Corning Incorporated, Corning: NY)，溫育2小時，室溫，以5。/。(wt/voI)去脂乳4。C過夜封閉。將PBS/0.05% 吐溫20系列成倍稀釋的熱滅活的NHS添加至病毒包被的孔或以PBS-吐溫中 的去脂乳包被的對照孔中，溫育1小時，37°C。使用過氧化物酶綴合的山羊 F(ab')2 IgG抗人IgM n-鏈(Sigma, St. Louis, MO)，以405 nm的光密度檢測結合 的IgM。終點效價為產生大於O.l、且至少是對照孔光密度的2倍的光密度的血清稀釋度。
免度印逸分析
對感染的細胞提取物進行4至15n/。十二垸基硫酸鈉(SDS)-聚丙烯醯氨凝 膠電泳(PAGE)，轉移至Immobilon-P轉移膜(Millipore Corp., Bedford, MA)， 與兔抗gC2抗體R81和兔抗VP5抗體反應。
統計學分析
使用曲線下面積(AUC)比較病毒中和百分數。使用Student氏t檢驗 (Microsoft Excel軟體)確定P值。概率(P) <0.05被認為結果具有顯著性。
結果
在包括毒株G、 333、和2.12在內的多種HSV-2毒株中檢查gC2所賦予 的保護作用。免疫印跡證實gC2表達於野生型感染的細胞而不是gC2-nul1感 染的細胞(圖8A)。將各種病毒與漸增濃度的作為補體來源的NHS溫育1小 時，37。C，進行中和測定。與PBS的病毒作為對照。與gC2-mill病毒相比， 所有三種野生型HSV-2病毒均對補體介導的中和作用具有更高的抗性(圖8B 至D)。用HSV-1野生型和gCl-皿ll病毒得到了類似的結果(圖8E)。儘管在 NHS濃度為20。/。時，幾乎沒有產生或沒有產生HSV-2野生型病毒的中和，但 333-gCA、 2.12-gC2null和G-gC2null的效價卻分別降低大約25%、 75%和85% (圖8B至D)。 gC2-rml1病毒對補體中和的升高的易感性在所評價的補體濃度 範圍內都存在。通常，與gC2-mi11病毒相比，對野生型病毒的中和要達到類 似的水平則需要4倍或更高濃度的NHS。這些結果說明gC2保護病毒免於補 體介導的中和作用。
實施例6: gC-null病毒的中和涉及Clq
為了確定Clq，即經典補體途徑的第一成分，是否是中和HSV-1或HSV-2 gC-null病毒所必需的，自NHS中耗竭Clq，這導致總溶血補體活性降低，而 以Clq重建後總溶血補體活性可恢復(圖9A)。儘管95%的Clq已經被耗竭， 但這種耗竭Clq的血清仍顯示出殘餘的活性，說明相對小量的Clq濃度即足 以起始經典補體級聯並溶解抗體包被的紅細胞。進行中和實驗以比較20% NHS、 Clq耗竭的NHS、以及Clq重建的Clq耗竭的NHS。作為對照，將病 毒與已經被熱滅活的20% NHS溫育。耗竭Clq的血清沒有中和NS-gClnull或G-gC2null，而以Clq重建的血清恢復了中和作用(圖9B)。因此，gC-皿ll 病毒的中和涉及Clq並通過活化經典補體途徑而發生。
實施例7:來自多個供者的NHS中和gC-null病毒
使用4名HSV-1和HSV-2血清陰性的人類供者測定NS-gClnull和 G-gC2nu11的補體中和，以確定對象中的NHS中和是否不同。所有樣品在20% NHS均中和了 gC-null病毒，而熱滅活的NHS未能中和；因此，所有樣品顯 示出補體介導的gC-null病毒中和作用(圖10)。
實施例8: gC-null病毒的中和涉及C3活化
C3是所有3種補體途徑的成分。高濃度的C3存在於NHS，這使得很難 將其耗竭；因此，使用Compstatin抑制C3活化，並確定C3是否是中和gC-null 病毒所必需的。Compstatin (4W9A)是小合成肽，其在低濃度即可通過結合C3 而幹擾補體，防止其活化。在經過20。/。NHS或以活性(4W9A)或無活性(線性) Compstatin處理的20% NHS處理之後，進行實驗以檢査中和情況。以未經處 理的病毒作為對照。經NHS或以無活性Compstatin處理的NHS處理後， NS-gClnull和G-gC2null病毒被中和(圖11)。以活性Compstatin處理的NHS 沒有降低病毒效價，說明gC-nuU病毒的中和涉及C3活化。
實施例9: G-gC2nul病毒的中和涉及C5
下一步確定G-gC2rmll中和是否涉及C5-依賴性的抗體-非依賴性補體中 和作用。自NHS耗竭C5降低了總溶血活性，而在C5重建後總溶血活性恢復 (圖12A)。 NS-gClnull和G-gC2null與20% NHS、耗竭C5的血清、和C5重 建的血清溫育。耗竭C5的血清沒有中和病毒，而NHS和重建的血清中和了 病毒(圖12B)。因此，G-gC2null中和涉及C5。
進一步的研究顯示，G-gClnull和G-gC2null病毒的中和不需要活化替代 補體途徑、甘露聚糖結合型植物凝集素補體途徑、或C6(C6結果見圖12C和 12D)。
實施例10:天然IgM抗體殘餘中和gC-null病毒
當Clq結合於病毒體表面上的IgM或兩個IgG分子時可活化經典補體途徑。當Clq直接結合於病毒膜蛋白時也會活化，在人巨細胞病毒和人T細胞 親淋巴病毒中有過這樣的報導。研究了天然IgM抗體在介導補體中和中的作 用。從NHS中耗竭IgM，這並不導致總溶血補體活性降低，說明經典補體途 徑成分沒有隨IgM —起被耗竭(圖13A)。在經過20% NHS、耗竭IgM的20% NHS、和IgM-恢復的NHS處理之後，進行實驗以比較中和情況。耗竭IgM 的血清沒有中和NS-gClnull或G-gC2null，而NHS或IgM-重建的NHS中和 了這些病毒(圖13B)。因此，IgM和補體均殘餘中和gC-null病毒。
實施例ll: IgM抗體結合G-gC2null病毒
採用ELISA測定熱滅活的NHS中的IgM與G-gC2null的結合。從20% NHS開始系列成倍稀釋的血清與G-gC2null或對照孔溫育。檢測到來自4個 供者中的每一個的NHS中的IgM均結合G-gC2null (圖13C-F)。 4個供者的終 點效價有所不同(供者l， 1:20;供者2和3， 1:320;供者4， 1:80)，這與血 清中的IgM濃度有關(供者1， 55 mg/dl;供者2， 205 mg/dl;供者3， 237 mg/dl; 供者4， 155mg/dl)。因此，IgM結合G-gC2null病毒。
實施例12:鑑定參與Fc受體活性的gE結構域
FcyR (IgG Fc受體)活性和病毒播散是gE的兩個功能，這兩個功能是由重 疊但不同的結構域行使的。HSV-1 gE介導病毒在上皮細胞之間播散並在神經 元內轉移。為了表徵HSVFc丫R在復發性感染中的作用，使用了一種突變體病 毒，其FcyR活性具有缺陷，但播散功能是完好的；即，在gE胺基酸264之 後插入了 4個AA (ALEG)的HSV-1 gE突變體病毒(NS-gE264)。
鼠側腹部模型中的NS-gE264突變體:鼠側腹部模型測量病毒播散而不考 虛FcyR功能，因為鼠IgG Fc不結合HSV-1 FcyR。因此，HSV-1 FqR表型對 病毒在小鼠中的毒力沒有影響。以來自人或兔的IgG被動免疫小鼠，由此對 鼠側腹部模型加以改進，以便用於評價FcyR功能，這是因為人和兔的IgG的 Fc結構域結合HSV-1 FcyR。在沒有被動免疫的情況下，帶狀皰疹樣疾病可用 作病毒播散表型的指標。因此，如果NS-gE264引起類似於WT病毒的帶狀皰 疹樣疾病，則播散表型是完好的。NS-gE264沒有FcYR，這可由感染NS-gE264 的細胞周圍沒有IgG包被的紅細胞形成玫瑰花結這一點證明。在小鼠側腹部 模型中評價NS-gE264的播散表型。小鼠在側腹部接種5 x 105 PFU的NS-gE264或拯救NS-gE264，後者恢復 了 WTgE基因。在感染後(pi)3-7天對動物的帶狀皰疹樣疾病評分，每一病變 給予1分，直至每天最高10分。NS-gE264展現出完好的播散表型，因為帶 狀皰疹樣疾病評分與突變體和拯救株類似(圖14A)。為了評價FqR活性，以 人免疫(抗HSV) IgG (能夠通過F(ab')2結構域結合於HSV抗原，並通過Fc結 構域結合於HSV-l FcYR，其阻斷IgG Fc活性)或以作為對照的非免疫人IgG (僅能夠通過Fc結構域結合於FcyR)對小鼠進行被動免疫。16小時後感染小鼠， 並在感染後3-7天評價帶狀皰疹樣疾病。用人抗HSV IgG被動免疫的感染 NS-gE264的小鼠出現的疾病少於用人抗HSV IgG被動免疫的感染拯救 NS-gE264的小鼠出現的疾病(圖14B)。因此，HSV抗體對FcyR突變體比對 拯救株更加有效。非免疫人IgG對任一病毒均無作用(圖14C)。
因此，NS-gE264具有完好的播散表型，但FcyR表型受損，且因缺乏FcyR 導致病毒易於被HSV抗體清除。
實施例13: gC-l造成體內的毒力
在鼠側腹部模型中，病毒從接種部位播散至DRG內的神經元，複製並播 散至鄰近的神經元，然後回到皮膚產生帶狀(帶狀皰疹樣)分布病灶。在補體完 好的小鼠中，具有C3b結合缺陷的HSV-l突變體毒株(NS-gCAC3; A275-367) 引起的側腹部接種部位和帶狀皰疹樣部位的病變比WT病毒輕，而在C3KO 小鼠中，接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病均與WT病毒相當。
為了確定原發性(急性)感染過程中gC在病毒感染DRG中所起的作用， 通過在側腹部刮擦接種5 x 105 PFU的WT病毒(NS)或NS-gCAC3而感染 Balb/C小鼠，其中NS-gCAC3是HSV-l突變體病毒，其缺乏gC-l (AA 275-367) 且不結合C3b。感染後第3和4天，小鼠被安樂死，收集DRG並滴定組織的 感染性病毒(圖15)。到第4天，從DRG回收到3個1og,。值的WT病毒，但 沒有檢測到gC突變體病毒。將NS-gCAC3的接種效價升高至3xl06 PFU並在 第5天與以5 x 105 PFU接種的NS相比。以較大的量接種時，在DRG中檢測 到了 NS-gCAC3;但其效價仍比NS低1000倍，說明gC至少提供了增大三個 數量級的保護作用，使得病毒能夠感染DRG。
因此，在所使用的條件下，補體解釋了DRG感染的減少，而gC介導的 免疫逃避解釋了 gC-l促成毒力。實施例14: gC-2促成HSV-2在體內的毒力
為了確定HSV-2 gC在體內保護病毒免遭補體攻擊中的作用，補體完好的 C57B1/6或C3KO小鼠通過側腹部刮擦接種5 x 105 PFU WT HSV-2毒株2.12 或gC-2 null突變體2.12-gCnu11，然後在感染後3-7天對接種和帶狀皰疹樣部 位疾病評分。改進評分系統以區分疾病譜嚴重端的動物，因為HSV-2引起的 側腹部疾病比HSV-1更加嚴重。在接種部位，評分範圍是0-3，其中0代表 無疾病，1代表發紅或孤立的病變，2代表潰瘍，而3代表具有組織壞死的區 域。在帶狀皰疹樣部位，評分範圍為0-4，其中0代表無疾病，l代表孤立的 病變，2代表融合的病變，3代表潰瘍，而4代表具有組織壞死的區域。在補 體完好的小鼠中，2.12-gCnull的疾病評分與2.12相比顯著降低(圖16A)，但 在C3KO小鼠中則與WT病毒相當(圖16B)。
因此，HSV-2gC在體內介導了免疫逃避，包括逃避補體。
實施例15:以gE-l免疫誘導的抗體結合gE並阻斷gE免疫逃避結構域 材料和方法 細胞培養物和病毒抹
COS-l生長在DMEM培養基中，37°C， 5%(^02的溼化培養箱，培養基 補充了 10%熱滅活的胎牛血清，20ng/ml慶大黴素和20mMHEPES(pH7.3)。 以HSV-1野生型毒株，即NS，感染細胞。使用非洲綠猴腎(Vero)細胞製備病
毒集合物。
枸走bac-gE24-224、 bac-gE225-398和bac-gE24-409為素 採用ThermalAce DNA聚合酶(Invitrogen Corp., Carlsbad, CA)從 pCMV3-gE中PCR擴增gE AA 24-224、 225-398和24-409，構建杆狀病毒 bac-gE24-224、 bac-gE225-398和bac-gE24-409。將6組氨酸-標籤摻入終止密 碼子前方的3'引物中。分別在5'和3'引物上引入BamHl和Pstl序列，並使用 快速DNA連接試劑盒(Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)將BamHl-Pstl片段 克隆入pVT-Bac。這一亞克隆策略將gE24-224、 gE225-398和gE24-409序列 置於蜜蜂毒素信號序列的立即3'處，並處於杆狀病毒多角體蛋白 (baculopolyhedrin)啟動子的控制下。以pVT-Bac構建體和Baculogold DNA (PharMingen, San Diego, CA)共轉染Sf9昆蟲細胞(Gibco BRL， Grand Island,NY)，產生bac-gE24-224、 bac-gE225-398和bac-gE24-409病毒。 gE24-224、 gE225-398和gE24-409的純化和墨走
杆狀病毒首先在Sf9昆蟲細胞中生長傳代3次，然後生長在H5昆蟲細胞 (Gibco BRL)中以便在第4代獲得更高產量的蛋白表達。通過免疫印跡測定來 自被感染的H5細胞的150 ml上清液中的蛋白表達，並用於純化蛋白。使上 清液通過鎳柱(QIAGEN Inc., Valencia, CA)，並以50-250 mM咪唑洗脫。使用 Ultrafree-15⑧離心過濾裝置(Millipore Corp., Bedford, MA)濃縮洗脫的片段，並 在4-15% SDS-PAGE上進行鑑定，使用GelCode Blue Stain Reagent (Pierce)。 純化蛋白的樣品在4-15% SDS-PAGE上電泳，轉移至硝酸纖維素膜，使用小 鼠抗His標籤單克隆抗體(MAb) 1BA10 (該抗體識別gE序列的AA 103-120) 或針對gE AA 1-409的兔多克隆抗體R575進行探測。
以gE片段逸行免度
給5隻8-9周齡雌性Balb/C小鼠(Charles River Laboratories, Wilmington, MA)腹腔內注射10嗎純化的gE24-224、 gE225-398或gE24-409進行免疫， 給3隻小鼠注射PBS作為對照。初始免疫使用完全弗氏佐劑，而加強注射使 用不完全弗氏佐劑，間隔10至14天。第3-5次免疫後2周收集血清。以純化 的gE24-224、gE225畫398或gE24畫409 (COCALICO Biologicals， Inc., Reamsto猶， PA)免疫2隻兔子，第4-6次免疫後收集血清。
ELISA拾測抗體
以Dulbecco磷酸緩衝鹽(DuPBS) (pH 7.1)將純化的gE24-224、 gE225-398 和gE24-409片段稀釋至2 pg/ml，使用200 ng包被Covalink NH 96孔-微滴 定板(Nalge Nunc International, Naperville, IL)。包被的板在4°C溫育過夜並以 DuPBS中的5% (w/v)去脂乳在37°C封閉2小時。IgG在DuPBS和0.1% BSA 中稀釋至2 jig/100 W。在DuPBS和0.01% BSA中製備1:1000稀釋的過氧化 物酶(HRPO)-綴合的、親和純化的驢抗兔IgG(H+L)或綿羊抗小鼠IgG(H+L) (Amersham Life Science, Piscataway， NJ)。通過加入緩衝液中的1 mg/ml ABTS (Roche, Mannheim, Germany)在室溫反應10分鐘，使用ELISA讀板器(Dynatech, Chantilly， VA)測定405 nm處的光密度(OD)。
d式細應術測走
確定抗體是否阻斷IgG Fc結合於HSV-1感染的細胞的測定法包括兩個部 分；首先測定抗體是否結合於HSV-1感染的細胞，然後確定該結合的抗體是否阻斷生物素標記的非免疫人IgG結合於HSV-1 FcYR。對於抗體結合，以 M.O.I為2的野生型病毒感染COS-1細胞16小時，使用細胞消化液(Life Technologies Inc.， Rockville， MD)分散細胞，並以0.05 U神經氨酸酶(Sigma Chemical Co., St. Louis，MO)處理，後者增強IgG Fc的結合。使用抗小鼠或兔 IgG或抗兔IgG F(ab')2片段的異硫氰酸螢光素(FITC)綴合的F(ab')2片段測定 IgG抗體與HSV-1感染的細胞表面的結合。以1%多聚甲醛固定細胞並以 FACScan流式細胞術(Becton-Dickinson， San Jose， CA)分析。以平均螢光強度 (MFI)反映抗體的結合。對於測定阻斷IgG結合的測定方法，將神經氨酸酶處 理的HSV-1感染的細胞與IgG或F(ab')2片段溫育，然後加入10嗎的生物素 標記的非免疫人IgG，後者可通過使用抗生蛋白鏈菌素-及-藻紅蛋白(PE) (Sigma)來檢測。如下計算阻斷百分數:((無阻斷抗體的MFI-有阻斷抗體的MFI) /無阻斷抗體的MFI)x100。
結果
在杆狀病毒內產生gE片段。為了確定gE免疫是否能夠誘導通過F(ab')2 結構域結合於gE的抗體，製備了 3個gE片段，gE24-224、 gE225-398和 gE24-409，它們幾乎跨越了整個gE胞外結構域。gE225-398片段跨越IgG Fc 結構域的大部分或者或許是全部IgG Fc結構域。gE24-409含有每一較小片段 中所包括的序列。
感染杆狀病毒的細胞的上清液產生6-8 mg/L的片段gE24-224、gE225-398 和gE24-409,它們經鎳柱純化，濃縮至1 mg/ml。經GelCode Blue⑧在 SDS-PAGE上染色證實，純度> 95%。gE24-224和gE24-409片段與抗His MAb、 抗gE MAb 1BA10和兔多克隆抗體R575反應。片段gE225-398與抗His MAb、 兔多克隆抗體R575反應，且如所預期的那樣，不與MAblBA10反應，後者 識別103和120之間的AA序列。
以杆狀病毒gE免疫小鼠。為了確定所引發的抗體是否阻斷IgG Fc結合 於HSV-1 FcyR，以gE24-224、 gE225-398、 gE24-409免疫小鼠，或小鼠被假 免疫，作為對照。以gE24-224和gE225-398第5次免疫之後或以gE24-409 第3次免疫之後收集小鼠血清，通過ELISA測定針對相應免疫原的抗體效價。 免疫的小鼠產生了與免疫用抗原反應的抗體，假免疫的小鼠則沒有。針對 gE24-409片段的抗體水平最高(圖17)。使用小鼠抗體阻斷HSV-1 FcyR。感染後16小時進行流式細胞術測定以 評價抗體是否結合感染HSV-1的細胞上表達的gE。來自用gE24-224和 gE24-409免疫的小鼠的抗體結合於gE (圖18A),而來自用gE225-398免疫的 小鼠的抗體展現出較低水平的結合。不同於人類或兔的IgG，鼠IgGFc不結 合HSV-lFcyR;因此，小鼠抗體的結合只能是通過IgG F(ab')2結構域介導的。 因此，感染細胞上表達的gE結合由gE24-224和gE24-409引發的抗體的F(ab')2 結構域，且與gE225-398相比，結合程度較低。在所採用的統條件下，要麼 是表達於感染細胞上的gE225-398表位的構象不同於杆狀病毒片段內的gE 構象，要麼是該表位在感染的細胞上是隱藏的。
測試來自免疫的小鼠的未稀釋血清阻斷生物素標記的非免疫人IgG與 HSV-1 FqR結合的能力。由gE24-224和gE24-409引發的抗體阻斷了 HSV畫1 FcyR (阻斷中位值分別為76%和80%)，而針對gE2M-398的抗體顯示出幾乎 沒有阻斷(阻斷中位值為17%)(圖18B)。因此，針對gE24J24和gE24409的 抗體通過它們的F(ab')2結構域結合gE，並阻斷IgG Fc與HSV-1 FqR的結合。
實施例16:確定HSV-1 gD和gC的有效免疫劑量和方案 材料和方法
Balb/C小鼠腹腔接種3劑gD (10納克/劑)加或不加gC (10微克(嗎)/劑)或 3劑gD (50納克/劑)加或不加gC (10 pg/劑)，以14天的間隔注射。首次接種 使用弗氏完全佐劑，後兩次接種使用弗氏不完全佐劑。假接種的小鼠(OgD或 0 gC)僅接受佐劑。三次接種後取血清，通過ELISA分析抗gD和抗gC抗體 應答。如實施例所述進行玫瑰花結抑制試驗。
結果
接種50 ng的gD但不接種gC產生了強抗gD抗體應答，當10嗎的gC 與gD—起施用時，應答降低(圖19)。為了增強抗gD應答，給小鼠接種第4 劑50nggD，無gC。兩周後收集血清，分析針對gD和gC的抗體應答。第4 劑gD顯著增強了抗gD抗體應答(圖20A，最右側條形圖)。此外，第4劑之 後誘導的gC抗體能夠阻斷C3b結合，因為相對於假免疫組而言，對玫瑰花結 形成的抑制達到85-90% (圖20B)，進一步證實了該疫苗方案的效果。
因此，以重組gC +第二HSV抗原進行接種，繼以單獨接種第二抗原，是一種誘導抗HSV抗體應答的有效方法。或者，gC蛋白與所述第二抗原可
施用於分開的部位或在分開的時間施用。
實施例17:使用CpG+鋁鹽作為gD + gC的佐劑 材料和實驗方法
給小鼠接種3次(間隔14天)，每次接種2嗎的gC (濃度比前面使用弗氏 佐劑的情況低5倍)，每次接種50嗎的CpG (ODN no. 1826)，以及鋁鹽 (Alhydragel (氫氧化鋁凝膠佐齊U) Accurate Chemical and Scientific Corp., Westbury NY, 115卯)(每昭接種蛋白質使用該鋁鹽25嗎，最終的量為50嗎 鋁鹽)。第2和3次接種後收集血清。
結果
測試gC+鋁鹽+CpG寡核苷酸疫苗引發抗gC抗體的能力。經測定，疫苗 在第2和3次接種後均引發強抗體應答(圖21A)。此外，抗血清顯示出能夠有 效阻斷C3b結合部位形成玫瑰花結(圖21B)。
因此，重組HSV蛋白與鋁鹽+CpG寡核苷酸疫苗相組合的免疫接種是引 發抗gC抗體的有效方式。此外，與使用其他佐劑相比，重組HSV蛋白與鋁 鹽+ CpG寡核苷酸聯合使得能夠以較低的抗原劑量實現有效的免疫接種。
實施例18:聯合gC-2/gD-2疫苗比僅含有gD-2的疫苗產生更優越的保護 材料和方法
如實施例2-3就gC-l/gD-l疫苗所述的那樣，給小鼠施用含有gC-2和gD-2 (例如，具有C-末端6 His標籤的gC-2的AA 27-426和具有C-末端6 His標籤 的gD-2的AA 26-306)的聯合疫苗。如實施例14所述評價毒力。給陰道內感 染5xl05HSV-2毒株2.12的小鼠施用250 ng的gD-2和5昭的gC-2。對小鼠 的存活率和陰道病變進行評分。攻擊後1-11天進行陰道拭子以檢查病毒效價， 並在攻擊後第5天評價免疫是否減少了神經節的HSV-2感染。
結果
比較聯合gC-2/gD-2疫苗和僅含有gD-2或僅含有gC-2的疫苗賦予抗 HSV-2保護作用的能力。聯合疫苗產生的保護作用優於gD-2或gC-2疫苗。實施例19:聯合gC-l/gD-l疫苗預防感染HSV-1的對象的復發性感染
在小鼠側腹部模型中評價聯合gC-l/gD-l疫苗(例如實施例2-3所述的疫 苗)預防復發性HSV-1感染(例如通過潮紅的出現而評價)的能力。感染後，以 gC-l/gD-l疫苗或僅含有gC-l或僅含有gD-l的疫苗對小鼠進行多達5次免疫， 或對小鼠進行假免疫，然後監測復發性感染。認為聯合gC-l/gD-l疫苗產生的 保護作用優於gC-l或gD-l疫苗。
實施例20:聯合gC-2/gD-2疫苗預防感染HSV-2的對象的復發性感染
評價聯合gC-2/gD-2疫苗(例如實施例2-3所述的疫苗)預防復發性HSV-2 感染(例如通過潮紅的出現而評價)的能力。感染後，以gC-2/gD-2疫苗或僅含 有gC-2或僅含有gD-2的疫苗對小鼠進行多達5次免疫，或對小鼠進行假免 疫，然後監測復發性感染。認為聯合gC-2/gD-2疫苗產生的保護作用優於gC-2 或gD-2疫苗。
實施例21: gE-l/gD-l疫苗具有免疫原性並具有抗HSV-1感染的保護性 材料和方法
如實施例2-3禾tl 13就gC-l/gD-l疫苗所述的那樣，給小鼠施用聯合 gE-l/gD-l疫苗(例如，具有C-末端6 His標籤的gE-l的AA 24-409和具有C-末端6 His標籤的gD-l的AA 26-306)，並評價其免疫原性。
結果
比較聯合gE-l/gD-l疫苗與僅含有gE-l或僅含有gD-l的疫苗的免疫原 性。聯合疫苗的免疫原性優於gE-l或gD-l疫苗。隨後，比較疫苗賦予抗HSV-l 的保護作用的能力。認為聯合疫苗產生的保護作用優於gE-l或gD-l疫苗。
隨後，比較聯合gE-l/gD-l/gC-1疫苗與gE-l/gD-l和gD-l/gC-1疫苗的免 疫原性。認為gE-l/gD-l/gC-1聯合疫苗的免疫原性優於gE-l/gD-l和gD-l/gC-1 疫苗。隨後，比較疫苗賦予抗HSV-1的保護作用的能力。認為gE-l/gD-l/gC-1 聯合疫苗產生的保護作用優於gE-l/gD-l和gD-l/gC-1疫苗。
實施例22: gE-2/gD-2亞單位疫苗具有抗HSV-2感染的保護作用比較聯合gE-2/gD-2疫苗(例如，具有C-末端6 His標籤的gE-2的AA 24-409和具有C-末端6 His標籤的gD-2的AA 26-306)與僅含有gE-2或僅含 有gD-2的疫苗的免疫原性。認為聯合疫苗的免疫原性優於gE-2或gD-2疫苗。 隨後，比較疫苗賦予抗HSV-2的保護作用的能力。認為聯合疫苗產生的保護 作用優於gE-2或gD-2疫苗。
隨後，比較聯合gE-2/gD-2/gC-2疫苗與gE-2/gD-2和gD-2/gC-2疫苗的免 疫原性。認為gE-2/gD-2/gC-2聯合疫苗的免疫原性優於gE-2/gD-2和gD-2/gC-2 疫苗。隨後，比較疫苗賦予抗HSV-2的保護作用的能力。認為gE-2/gD-2/gC-2 聯合疫苗產生的保護作用優於gE-2/gD-2和gD-2/gC-2疫苗。
實施例23: HSV-2 gC-2亞單位疫苗在鼠側腹部和陰道HSV-2模型中具有抗 HSV-2感染的保護作用 柏:I腹部棋型
以0,5、 1 、 2、或5昭的gC-2與CpG (50 ^g/小鼠)和鋁鹽(25嗎/嗎蛋白) 通過腓腸肌肌注(IM)免疫Balb/C小鼠，或以CpG (50嗎/小鼠)和鋁鹽(25嗎/嗎) 但無gC-2進行假免疫，IM進行3次，間隔為兩周。第3次免疫後14天，通 過在剔毛並化學脫毛的側腹部刮擦接種4xl05 PFU的HSV-2毒株2.12攻擊小 鼠。記錄0-14天的存活率，並在3-14天對動物接種部位和帶狀皰疹樣部位的 疾病嚴重程度進行評分(N^5隻小鼠/組)。用於接種部位和帶狀皰疹樣部位的 疾病的評分系統與抗gC-l被動轉移試驗中所述一樣。
卩月道棋型
Balb/C小鼠在腓腸肌肌注CpG (# 1826, Coley Pharmaceuticals Group) (50 嗎/小鼠)和鋁鹽(25嗎/嗎蛋白)(Accurate Chemicals)進行假免疫，或以1、 2、 或5 pg的gC-2與CpG和鋁鹽免疫，間隔為兩周。各組的5隻動物均免疫3 次， 一組例外，其中以5嗎的劑量免疫2次[標記為5嗎(2x)，以區別於標記 為5 )ig(3x)的一組]。第3次免疫後第9天或5嗎(2x)免疫後第23天，給小鼠 IP注射Depo Provera (Pfizer提供的150 mg注射用長效醋酸甲羥孕酮的水性 懸液；2mg/小鼠)以便同步化發情周期。5天後，以2xl05 PFU的HSV-2毒株 2.12陰道內攻擊小鼠。
觀察動物在攻擊後0-14天的死亡率，以及攻擊後3-14天的疾病評分。在 用於陰道病變的評分系統中，下列各項每項1分發紅或腫脹、排出物、陰道和肛周區域脫毛、和壞死。每日最高的評分為4分。在實驗終點前死亡的 動物被賦予研究過程中最後一次評價的分值。從l-ll天每日進行陰道拭子檢
査。將拭子置於1 ml DMEM中，通過在Vero細胞上進行噬斑分析測定病毒 效價。
結果
對於側腹部接種，各個gC-2免疫劑量與假免疫小鼠相比均保護小鼠抵抗 死亡。不過，僅在5嗎劑量組(所測試的最大劑量)觀察到100%的存活率(圖 22)。
圖23說明，與假免疫小鼠相比，經0.5嗎、1嗎、2 [ig和5嗎的gC-2 免疫的小鼠在攻擊後3-14天接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病評分降低，其 中5嗎劑量組帶狀皰疹樣部位的疾病評分降低最多(比較劑量組與假免疫小鼠 接種部位和帶狀皰疹樣部位的曲線下面積，P<.01)。
對於陰道內接種，假免疫小鼠全部死亡，而以gC-2 5路(3x)免疫提供了 最佳的抗死亡保護作用。所有以gC-2 5嗎(2x)免疫的小鼠均死亡，不過，與 假免疫小鼠相比，死亡的時間倍延遲。與假免疫小鼠相比，以1或2昭免疫 3次的小鼠存活時間略長，死亡較少，但保護作用沒有gC-2 5(ig(3x)組那麼好 (圖24)。
圖25給出了以2xl05 PFU的HSV-2毒株2.12陰道內攻擊的假免疫小鼠 或gC-2免疫的小鼠的疾病評分。假免疫組的所有小鼠在第8天時均己經死亡; 因此，將末次評價的評分用於第9-14天。以l昭或2嗎gC-2免疫幾乎沒有提 供對抗陰道疾病的保護作用，而以gC-2 5嗎(3x)免疫提供了明顯的保護作用， P<.01。
攻擊後1-11天每日獲取陰道拭子(圖26)。所示結果為每組3隻小鼠的平 均效價。以gC-2免疫使得攻擊後第1天的陰道效價降低了 1-2個logu)，但在 隨後的天數中則幾乎沒有作用。
實施例24: HSV-2 gD-2亞單位疫苗在鼠側腹部和陰道HSV-2模型中具有抗 HSV-2感染的保護作用
材料和方法
側屣部模型Balb/C小鼠被假免疫或如前面就gC-2所述的那樣通過3次腓腸肌IM進 行免疫，不同之處在於gD-2的劑量為10、 25、 50、或100ng，並與CpG(50 1ig/小鼠)和鋁鹽(25昭4ig蛋白)聯合。以4x 105 PFU/10ml的HSV-2毒株2.12 攻擊小鼠。每組接種5隻小鼠。
陰道棋型
以50、 100、或250 ng的gD畫2 IM 3次(3x)或以250 ng的gD-2 IM 2次(2x) 免疫Balb/C小鼠。gD-2與CpG (50 )ig/小鼠)和鋁鹽(25 pg/嗎蛋白)聯合，然後 接種2xl05 PFU的HSV-2毒株2.12。以Depo Provera⑧處理小鼠，並如前面就 gC-2免疫所述那樣進行攻擊，評價存活率和疾病嚴重程度。每一組包括5隻 動物。攻擊後l-ll天每日獲取陰道拭子，每組3隻小鼠。
結果
對於側腹部接種，在以100nggD-2免疫的小鼠中觀察到最高的存活率， 然後是以50 ng免疫的小鼠(圖27)。
以10 ng和25 ng劑量的gD-2免疫對接種部位或帶狀皰疹樣部位疾病提 供了輕微的保護；但50 ng和100 ng劑量組的疾病評分顯著降低(假免疾組與 50 ng劑量組在接種部位和帶狀皰疹樣部位相比P < .01，假免疫組與100 ng 劑量組在接種部位和帶狀皰疹樣部位相比P < .001)(圖28)。
對於陰道內接種，假免疫組小鼠在第9天後無一存活(圖29)。以50ng、 100 ng和250 ng的gD-2免疫2次的組提供了一些保護作用；而250 ng 3x提 供了完全的抗死亡保護作用。
僅以gD-2 250 ng 3x免疫的小鼠得到了顯著的抗陰道疾病保護作用(假免 疫與gD-2 250 ng 3x的曲線下面積相比P < 0.001)(圖30)。
以gD-2 250 ng 3x免疫使得攻擊後1-7天的陰道病毒效價降低了 1 log10 (P< 0.001，與假免疫小鼠相比)，而其他劑量與假免疫小鼠相比作用較小(p值 無顯著差異)(圖31)。
本實驗揭示了能夠保護小鼠免於HSV-2介導的死亡以及在HSV-2的側腹 部和陰道模型中保護小鼠免於接種部位和帶狀皰疹樣部位疾病的gC-2 (5 pg) 和gD-2 (250ng)免疫劑量。
實施例25:測試人抗gC-2抗體阻斷C3b結合於gC-2的能力採用ELISA方法確定gC-2疫苗(例如實施例2-3所描述的那些)引發的人 抗體是否阻斷C3b結合於gC-2。以400 ng純化的C3b包被96-孔板過夜，4°C。 將Bac-gC2(426t)蛋白(gC-2 AA 27-426) (300 ng)與來自用bac-gC2(426t)免疫的 人的IgG溫育1小時，4°C。將IgG-gC-2混合物加至C3b包被的3個復孔中， 使用兔抗gC-2 IgG檢測結合的gC-2。
實施例26: CpG寡核苷酸使得較小劑量的重組HSV糖蛋白成為可能
測試CpG ODN是否能夠使得較小劑量的HSV糖蛋白成為可能。給小鼠 施用10嗎的gC-l (例如按照前面實施例所述)，並與2嗎gC-l 、 10嗎gC-l + ODN 1826、和2嗎gC-l + ODN 1826比較它們誘導產生阻斷gC-l的免疫逃 避的抗體的能力。預期CpG ODN降低抑制免疫逃避所需的HSV gC的劑量。
實施例27:在感染fflV的對象中由HSV糖蛋白gC-和gE-介導的免疫逃避 材料和方法 清分窩
從University of Pennsylvania Genter for AIDS Research的Clinical Core Laboratory取得來自不同HIV疾病階段(CD4計數500~1) 的HIV對象的血清。HerpeSelectTM 1和2 ELISA IgG (Focus Technologies, Cypress, CA)是一種基於gG的測定法，可檢測類型特異性IgG抗體，通過該 測定法檢測血清中針對HSV-1和HSV-2的抗體。對象中75%為男性；56% 為非洲裔美國人，35%為高加索人，7%為西班牙人，2%為其他；平均年齡41 歲。HIV感染患病風險因素包括51%為男性同性戀性行為者，5%為靜脈吸 毒者，41%為異性戀，3%未知。HIV血清陰性血清取自參與GlaxoSmithKline HSV-2 gD2疫苗臨床試驗的健康志願者。入選對象為在接受gD2疫苗或僅佐 劑(安慰劑組)之前對HIV、 HSV-1和HSV-2血清陰性。
IgG純化
使用HiTrapTM蛋白G柱根據生產商的說明(Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden)從血清中純化患者的IgG。集合含有蛋白質的級份，用PBS 透析，4°C，濃縮、分裝並存放於-20。C。兔IgG純化自免疫前(pre-immune) 兔血清或純化自接種了純化的杆狀病毒蛋白gB、 gD、或gH/gL的兔。
經典樸體速徑逸血活性(CHW)測定測定HIV對象(CD4 T-細胞計數 500 1)和未感 染HIV的對照的血清總溶血補體活性(CH50)。將系列稀釋的血清與抗體致敏 的綿羊紅細胞在96-孔微滴定板中溫育1小時，37。C。將板120Xg離心3分 鍾，上清液轉移至新的板中，以分光光度法在405nm測定溶血程度。
抗體和補體中和測定
將大約10"筮斑形成單位(PFU)的純化的病毒與IgG、 HSVH/2-血清、以 EDTA處理以便滅活補體的HSV 1+/2-血清、或PBS溫育1小時，37°C。通 過在Vero細胞上進行噬斑分析來確定殘留的病毒效價。根據當病毒與PBS和 EDTA處理的血清(僅抗體)、或PBS和無EDTA的血清(抗體和補體)溫育時的 效價差來計算抗體單獨介導的或抗體和補體介導的中和作用。
結果
在入選Center for AIDS Research Clinical Core資料庫的前133個對象中測 試血清中針對HSV-1和HSV-2的抗體，從這些對象可獲得血清和CD4 T-細 胞計數以便鑑定出共感染1^丫-1(1^￥1+/2-)的111￥對象。總體而言，39%的 CD4 T國細胞計數〉500/^1， 28% 200-500/|xl， 33% < 200/pl。 69%為HSV-1血 清陽性(41% HSV 1+/2+和28% HSV 1+/2-),而64%為HSV-2血清陽性(41% HSV 1+/2+和23% HSV 1-/2+)。 8%的對象為HSV-1和HSV-2兩者血清陰性。 選擇HSV 1+/2-對象的血清進行進一步的研究。
測定了沒有感染HIV的HSV 1+/2-對象或具有不同HIV疾病階段的 HIV/HSV-1共感染的對象的總溶血性血清補體(CH50)水平(圖32A)。即便是病 情嚴重的HIV/HSV-1共感染的對象也保持了血清總溶血性補體水平。
隨後，使用經EDTA處理以滅活補體的1%血清來測定抗體介導的中和作 用。在所有HIV疾病階段，包括CD4T細胞〈200/pl的對象，抗體中和了 WT 病毒和gC/gE突變體病毒(圖32B，灰色條形)。
使用1%血清和活性補體(無EDTA處理)比較了抗體和補體在中和WT病 毒和gC/gE突變體病毒方面的作用。在HIV陰性對照和所有CD4 T-細胞計數 水平的HIV感染對象中，對gC/gE突變體病毒的中和作用均高於WT病毒(圖 32B，黑色條形)。這些結果是出乎預料的，因為先前的研究報導了 gC和gE 通過抑制補體活化而抑制病毒的中和(Lubinski et al.， Seminars in Cell & Developmental Biology 9:329-37; Nagashunmugam et al., J Virol 72:5351-9)。因此，進行了進一步的研究以評價gC和gE通過何種其他機制介導免疫逃避。
實施例28:病毒糖蛋白上的HSV gC和gE表位通過阻斷抗體接近參與病毒進 入的糖蛋白而之增強免疫逃避效應
材料和方法
細胞和病秦
非洲綠猴腎細胞(Vero)生長在DMEM培養基中，其中補充了 10%熱滅活 的胎牛血清，2 mM L-穀氨醯胺，10 mM HEPES (pH 7.3), 20 |ig/ml慶大黴素和1 嗎/ml兩性黴素B (Life Technologies, Rockville, MD)。以2-5的感染複數感染 Vero細胞製備純化的病毒集合物。收集感染後24小時的無細胞病毒上清液離 心至5°/。-70%蔗糖梯度上。分離含病毒級份並以含Ca2+和Mg2+的Dulbecco 磷酸緩衝鹽(PBS)透析，分裝、存放於-70。C。
WT毒株HSV-1NS是低傳代臨床分離物，得自一名被感染的兒童。先前 已經描述了來自該NS毒株的突變體病毒NS-gCAC3、 NS-gE339和雙突變體 NS-gCAC3,gE339。 gC突變體病毒NS-gCAC3缺失了胺基酸275至367，導致 不能結合C3b。 gE突變體病毒NS-gE339在gE胺基酸339處具有4個胺基酸 插入，導致不能結合IgGFc。 gC/gE雙突變體病毒NS-gCAC3，gE339在一個病 毒中含有gC和gE的兩種突變。
抗體和補體中和測走
大約IOS噬斑形成單位(PFU)的純化的病毒與集合人IgG (Michigan State Health Laboratories)溫育或使用針對純化的杆狀病毒蛋白gB、 gC、 gD、 gH/gL、 或gl的兔抗體。使用杆狀病毒表達的gl胺基酸24-264 (HMF，未發表)作為抗 原在兔中產生抗gl抗體。
免度印速和光密灰測走法分析
大約2 X 106 PFU的純化的病毒進行4-15% SDS-PAGE，轉移至 Immobilon-P轉移膜(Millipore Corp., Bedford, MA)，並使用針對gB、 gC、 gD、 gE、 gH/gL、 gl和VP5的多克隆兔抗體進行檢測。使用過氧化物酶綴合的山 羊抗兔IgG和增強化學發光法(Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ)顯色初級 抗體。使用ScanMaker i900 (Microtek Lab Inc., Carson, CA)進行光密度測定法 分析來比較蛋白質水平。
病奪EL1SA大約106 PFU的純化的WT或NS-gCAC3，gE339病毒稀釋於50jil PBS， 加至Costar⑧高結合性96-孔板中，4。C溫育過夜。作為對照， 一些孔與50|Lil 無病毒的PBS溫育。以含5%乳和0.05%吐溫20的PBS室溫封閉孔2小時。 製備封閉緩衝液中的抗gB、 gD、 gH/gL的純化兔IgG或免疫前兔IgG系列稀 釋物，並以逐漸降低的濃度(從2ug至0.015ug，溶於50(^1的封閉緩衝液)添加。 將抗體在室溫溫育1小時，以含0.05%吐溫20的PBS洗滌3次，與1:1,000 稀釋於封閉緩衝液中的過氧化物酶綴合的驢抗兔IgG (Amersham Bioscience) 溫育30分鐘。板用含0.05。/。吐溫20的PBS洗漆兩次並用PBS洗滌一次，然 後加入ABTS底物(Roche)， 25分鐘後在405nm讀板。在一些實驗中，將來自 雞的抗gD血清用於病毒ELISA。用杆狀病毒-gD構建體免疫雞並加強4次， 獲得的血清作為IgY抗體的來源。通過在gD包被的板上進行ELISA，測定到 該血清對gD具有高抗體效價。
結果
在純化的WT病毒和gC/gE突變體病毒的免疫印跡上進行光密度分析以 評價糖蛋白的相對濃度，這些糖蛋白包括病毒進入所必需的gB、 gD、 gH/gL。 將HSV-1殼體蛋白VP5納入分析，以確保加入到膠上的WT病毒和gC/gE突 變體病毒顆粒具有可比性。檢測到WT病毒和gC/gE突變體病毒上表達的 HSV-1糖蛋白的相對濃度存在一些差異(圖33);不過，gC/gE突變體上的gB、 gD和gH/gL的濃度略高於WT病毒，這提示更高的中和活性不是由突變體病 毒上較低濃度的靶糖蛋白引起的。
圖34A示意了 HSV-1 FqR可幹擾抗體中和的可能的機制。通過結合IgG 的Fc結構域，WT病毒上的HSV-1 FqR可防止F(ab')2結構域與其靶抗原相 互作用(WT模型的左側)。與此不同，gC/gE病毒中的gE突變消除了Fc丫R活 性，這可促進F(ab')2結構域與抗體靶的相互作用，導致更高的中和作用。
為了評價這種可能性，從HIV陰性人類供者集合IgG，並用於比較FcyR 活性具有缺陷的gE突變體病毒(NS-gE339)和具有完好的FqR但在gC中具有 突變的突變體病毒(NS-gCAC3)的中和作用。病毒與PBS或100嗎集合人IgG (作為HSV抗體的來源)溫育。抗體同等有效地中和FcYR完好的病毒和FqR 缺陷型病毒，而且對gC/gE雙突變體病毒(NS-gCAC3,gE339)甚至具有更高的 活性(圖34B)。由於gC/gE雙突變體病毒比任一其從中衍生而來的單突變體病毒被更快地中和，我們認為gC和gE的突變均促成gC/gE突變體病毒中和抗
體具有更高的易感性。
我們隨後評價了 gC和gE突變是否將其他病毒糖蛋白上以前被遮蔽的表 位暴露於中和抗體，這可能是由病毒體包膜上的糖蛋白構象改變所導致的。 進行實驗以比較在與選擇性地與gB、 gC、 gD、 gH/gL、或gl相互作用的兔抗 體溫育後，WT病毒和gC/gE突變體病毒的中和情況。如所預料的那樣，針對 gB、 gD、 gH/gL的抗體中和了病毒，因為這些糖蛋白是病毒進入所必需的； 不過，這些病毒之間的差異並不顯著。針對gC和gl的抗體不是進入所必需 的，它們未能中和任一病毒。
由於圖32B和34B中所使用的人血清含有針對多種糖蛋白的抗體，我們 使用針對gB、 gD和gH/gL的抗體的組合來進行中和實驗(圖35B)。當組合使 用時，檢測到對gC/gE突變體的中和作用比對WT病毒更強，這提示gC和 gE中的突變暴露了多種糖蛋白上的中和表位。無論是否將gH/gL抗體納入中 和反應，WT病毒和gC/gE突變體病毒之間的差異均相當，說明被封閉的表位 主要位於gB和gD上。
使用WT病毒和gC/gE突變體病毒進行病毒ELISA以進一步評價gC/gE 突變體病毒上的突變是否暴露了 gB、 gD和gH/gL上的表位。與WT病毒相 比，gC/gE突變體病毒結合更高濃度的gD(圖36A)、 gB (圖36B)和gH/gL (圖 24C)抗體。使用雞抗gD抗體進行額外的實驗。雞產生的IgY抗體不具有結合 Fc受體的結構域。這些抗體被用於評價病毒FcYR在ELISA實驗中的潛在影 響。將雞抗gD抗體加至WT病毒或gC/gE突變體病毒後，檢測到對gC/gE 突變體的結合強於WT病毒(圖36D)。這些結果說明抗體結合的差異的產生不 依賴於Fc與病毒FcYR的結合，因此支持這樣一種假設，即gC和gE阻斷病 毒糖蛋白上對於進入所必需的表位，特別是gB和gD上的表位。
gC和gE中的突變使得抗體能夠接近病毒糖蛋白，包括gB、gD和gH/gL， 這提示WT病毒上的gC和gE遮蔽了病毒糖蛋白上表位，使得中和抗體不能 接近(見模型圖37)。
HIV對象在HIV感染過程中保持高水平的中和抗體和補體。因此，通過 亞單位疫苗阻斷gC和gE上的免疫逃避結構域可允許內源性抗體和補體更有 效地抵抗HIV患者中的HSV。
權利要求
1.一種疫苗，其包含a.重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段；b.重組HSV gC蛋白或其片段，其中所述片段包含所述蛋白的C3b結合結構域、備解素幹擾結構域、C5幹擾結構域、或所述C3b結合結構域、備解素幹擾結構域或C5幹擾結構域的片段；c.重組HSV gE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段；和d.佐劑。
2. 權利要求l的疫苗，其中所述佐劑包含含CpG的核苷酸分子、鋁鹽佐 劑、或其組合。
3. 權利要求l的疫苗，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段的 量為2-10微克/劑。
4. 權利要求l的疫苗，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段的 量為10-250納克/劑。
5. 權利要求l的疫苗，其中所述重組HSVgC蛋白或其片段的量為0.5-100微克/劑。
6. 權利要求l的疫苗，其中所述重組HSVgE蛋白或其片段的量為2-100 微克/劑。
7. 權利要求l的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白。
8. 權利要求7的疫苗，還包含重組HSV-2蛋白，所述HSV-2蛋白選自 gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
9. 權利要求l的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-2蛋白。
10. 權利要求9的疫苗，還包含重組HSV-1蛋白，所述HSV-1蛋白選自 gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
11. 一種在對象中誘導抗HSV免疫應答的方法，所述方法包括給所述對 象施用權利要求1的疫苗的步驟。
12. 權利要求11的方法，還包括給所述對象施用加強免疫接種的步驟， 其中所述加強免疫接種(a)包括所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段； (b)不包括重組HSVgC蛋白或其片段；和(c)不包括所述重組HSVgE蛋白或其片段。
13. 權利要求12的方法，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 在所述加強免疫接種中的量是2-10微克/劑。
14. 一種治療、壓制、抑制對象的HSV感染或降低HSV感染的發生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用權利要求1的疫苗的步驟。
15. 權利要求14的方法，其中所述HSV感染是HSV-1感染。
16. 權利要求14的方法，其中所述HSV感染是HSV-2感染。
17. 權利要求14的方法，其中所述HSV感染是原發性HSV感染。
18. 權利要求14的方法，其中所述HSV感染是原發性HSV感染之後的 潮紅、復發或HSV唇皰疹。
19. 權利要求14的方法，其中所述HSV感染是HSV腦炎。
20. 權利要求14的方法，其中所述HSV感染是HSV新生兒感染。
21. 權利要求14的方法，其中所述對象感染了HIV。
22. —種疫苗，其包含a. 重組HSVgD蛋白或其免疫原性片段；b. 重組HSVgC蛋白或其片段，其中所述片段包含所述蛋白的C3b結合 結構域、備解素幹擾結構域、C5幹擾結構域、或所述C3b結合結構域、備解 素幹擾結構域、或C5幹擾結構域的片段；禾口c. 佐劑；其中給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV gC抗體，所述抗體阻斷相應 於所述重組HSV gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。
23. 權利要求22的疫苗，其中所述佐劑包含含CpG的核苷酸分子、鋁鹽 佐劑、或其組合。
24. 權利要求22的疫苗，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 的量為2-10微克/劑。
25. 權利要求22的疫苗，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 的量為10-250納克/劑。
26. 權利要求22的疫苗，其中所述重組HSV gC蛋白或其片段的量為 0.5-100微克/劑。
27. 權利要求22的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白。
28. 權利要求27的疫苗，還包含重組HSV-2蛋白，所述HSV-2蛋白選自gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
29. 權利要求22的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-2蛋白。
30. 權利要求29的疫苗，還包含重組HSV-1蛋白，所述HSV-1蛋白選 自gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
31. —種在對象中誘導抗HSV免疫應答的方法，所述方法包括給所述對 象施用權利要求22的疫苗的步驟。
32. 權利要求31的方法，還包括給所述對象施用加強免疫接種的步驟， 其中所述加強免疫接種(a)包括所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段； 和(b)不包括重組HSVgC蛋白或其片段。
33. 權利要求32的方法，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 在所述加強免疫接種中的量是2-10微克/劑。
34. —種治療、壓制、抑制對象的HSV感染或降低HSV感染的發生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用權利要求22的疫苗的步驟。
35. 權利要求34的方法，其中所述HSV感染是HSV-1感染。
36. 權利要求34的方法，其中所述HSV感染是HSV-2感染。
37. 權利要求34的方法，其中所述HSV感染是原發性HSV感染。
38. 權利要求34的方法，其中所述HSV感染是原發性HSV感染之後的 潮紅、復發或HSV唇皰疹。
39. 權利要求34的方法，其中所述HSV感染是HSV腦炎。
40. 權利要求34的方法，其中所述HSV感染是HSV新生兒感染。
41. 權利要求34的方法，其中所述對象感染了 HIV。
42. —種疫苗，其包含a. 重組HSVgD蛋白或其免疫原性片段；b. 重組HSVgE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段;和c. 佐劑，其中給人類對象施用所述疫苗引發抗HSV gE抗體，所述抗體阻斷相應於 所述重組HSV gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。
43. 權利要求42的疫苗，其中所述佐劑包含含CpG的核苷酸分子、鋁鹽 佐劑、或其組合。
44. 權利要求42的疫苗，其中所述重組HSVgD蛋白或其片段的量為2-10微克/劑。
45. 權利要求42的疫苗，其中所述重組HSV gD蛋白或其片段的量為 10-250納克/劑。
46. 權利要求42的疫苗，其中所述重組HSV gE蛋白或其片段的量為 2-100微克/劑。
47. 權利要求42的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白。
48. 權利要求47的疫苗，還包含重組HSV-2蛋白，所述HSV-2蛋白選 自gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
49. 權利要求42的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-2蛋白。
50. 權利要求49的疫苗，還包含重組HSV-1蛋白，所述HSV-1蛋白選 自gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
51. —種在對象中誘導抗HSV免疫應答的方法，所述方法包括給所述對 象施用權利要求42的疫苗的步驟。
52. 權利要求51的方法，還包括給所述對象施用加強免疫接種的步驟， 其中所述加強免疫接種(a)包括所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段； (b)不包括所述重組HSVgE蛋白或其片段。
53. 權利要求52的方法，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 在所述加強免疫接種中的量是2-10微克/劑。
54. —種治療、壓制、抑制對象的HSV感染或降低HSV感染的發生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用權利要求42的疫苗的步驟。
55. 權利要求54的方法，其中所述HSV感染是HSV-1感染。
56. 權利要求54的方法，其中所述HSV感染是HSV-2感染。
57. 權利要求54的方法，其中所述HSV感染是原發性HSV感染。
58. 權利要求54的方法，其中所述HSV感染是原發性HSV感染之後的 潮紅、復發或HSV唇皰疹。
59. 權利要求54的方法，其中所述HSV感染是HSV腦炎。
60. 權利要求54的方法，其中所述HSV感染是HSV新生兒感染。
61. 權利要求54的方法，其中所述對象感染了HIV。
62. —種疫苗，其包含a.重組HSVgC蛋白或其片段，其中所述片段包含所述蛋白的C3b結合 結構域、備解素幹擾結構域、C5幹擾結構域、或所述C3b結合結構域、備解素幹擾結構域或C5幹擾結構域的片段；b. 重組HSVgE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段；和c. 佐劑。
63. 權利要求62的疫苗，其中所述佐劑包含含CpG的核苷酸分子、鋁鹽 佐劑、或其組合。
64. 權利要求62的疫苗，其中所述重組HSV gC蛋白或其片段的量為 0.5-100微克/劑。
65. 權利要求62的疫苗，其中所述重組HSV gE蛋白或其片段的量為 2-100微克/劑。
66. 權利要求62的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白。
67. 權利要求66的疫苗，還包含重組HSV-2蛋白，所述HSV-2蛋白選 自gD2蛋白、gC2蛋白、禾口gE2蛋白。
68. 權利要求62的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-2蛋白。
69. 權利要求64的疫苗，還包含重組HSV-1蛋白，所述HSV-1蛋白選 自gD2蛋白、gC2蛋白、禾BgE2蛋白。
70. —種在對象中誘導抗HSV免疫應答的方法，所述方法包括給所述對 象施用權利要求62的疫苗的步驟。
71. 權利要求70的方法，還包括給所述對象施用加強免疫接種的步驟， 其中所述加強免疫接種(a)包括所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段； (b)不包括所述重組HSV gE蛋白或其片段。
72. 權利要求71的方法，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 在所述加強免疫接種中的量是2-10微克/劑。
73. —種治療、壓制、抑制對象的HSV感染或降低HSV感染的發生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用權利要求62的疫苗的步驟。
74. 權利要求73的方法，其中所述HSV感染是HSV-1感染。
75. 權利要求73的方法，其中所述HSV感染是HSV-2感染。
76. 權利要求73的方法，其中所述HSV感染是原發性HSV感染。
77. 權利要求73的方法，其中所述HSV感染是原發性HSV感染之後的 潮紅、復發或HSV唇皰疹。
78. 權利要求73的方法，其中所述HSV感染是HSV腦炎。
79. 權利要求73的方法，其中所述HSV感染是HSV新生兒感染。
80. 權利要求73的方法，其中所述對象感染了HIV。
81. —種在感染HIV的對象中治療、壓制、抑制HSV感染或降低HSV 感染的發生率的方法，所述方法包括給所述對象施用疫苗的步驟，所述疫苗 包含a. 重組HSVgC蛋白或其片段，其中所述片段包含所述蛋白的C3b結合 結構域、備解素幹擾結構域、C5幹擾結構域、或所述C3b結合結構域、備解 素幹擾結構域或C5幹擾結構域的片段；b. 重組HSVgE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段；和c. 佐劑。
82. 權利要求79的方法，其中所述降低HSV感染的發生率包括預防HSV 感染復發。
83. 權利要求79的方法，其中所述壓制HSV感染包括減輕HSV感染復 發的嚴重程度。
84. 權利要求79的方法，其中所述降低HSV感染的發生率包括降低HSV 感染復發的頻率。
全文摘要
本發明提供疫苗，所述疫苗包含兩種或多種重組單純皰疹病毒(HSV)蛋白質，所述蛋白質選自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；並提供對對象進行抗HSV免疫接種的方法和用於治療、阻止、抑制、壓制HSV感染或其症狀或表現或降低其發生率的方法，所述方法包括施用本發明的疫苗。
文檔編號A61K39/245GK101616688SQ200780051860
公開日2009年12月30日 申請日期2007年12月27日 優先權日2006年12月28日
發明者H·弗裡德曼, J·盧賓斯基, S·阿瓦斯蒂 申請人:賓夕法尼亞大學理事會